JPH09510689A

JPH09510689A - 抗エストロゲンとしてのインドール誘導体

Info

Publication number: JPH09510689A
Application number: JP7517189A
Authority: JP
Inventors: ウルフノリンデル
Original assignee: カロバイオエービー
Priority date: 1993-12-23
Filing date: 1994-12-23
Publication date: 1997-10-28
Also published as: EP0736008A1; AU1316995A; WO1995017383A1; CA2187296A1; GB9326332D0

Abstract

(57)【要約】本発明には、式（Ｉ）のインドール誘導体がを開示されている。〔式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してヒドロキシ、メトキシ又はフッ素、好ましくはヒドロキシを示し、ｎは９から１２までの整数を示し、及びＸはＣＯＮＲ４Ｒ５、ＣＳＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＣＯＲ５、ＮＲ４Ｒ５、ＳＯ₂ＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＳＯ₂Ｒ５、１−Ｒ４−５−テトラゾールからなる群の一部、式中Ｒ４及びＲ５は、独立して水素及び低級アルキルから選択されるか、又はＲ４及びＲ５は共に式−（ＣＨ₂）ｙ−（ｙは４又は５の整数を示す）の架橋を形成する。〕本発明は１又はそれ以上の該インドール誘導体を有する薬学的製剤、及び該誘導体の医薬品としての使用に関することが、記載されている。また、エストロゲン置換療法において及び／又は乳癌というエストロゲン関連の異常もしくは疾病の治療又は予防的処置のための医薬品製造のための該インドール誘導体の使用が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】抗エストロゲンとしてのインドール誘導体本発明は、新規なインドール誘導体、特に、非ステロイド性抗エストロゲンとして有用な新規インドール誘導体に関する。現在では、骨へのエストロゲンの作用は直接的なものであり、骨細胞は生理学的濃度のエストロゲン受容体を含むことが知られている。当初、これらの受容体は正常なヒト骨芽細胞様細胞中にあると説明されていたが〔ビー・エス・コムら、サイエンス、241（1988）81（B．S．Komm et al.，Science 241（1988）81）及びイー・エフ・エリクセンら、サイエンス、241（1988）84（E．F．Eriksen e t al.，Science 241（1988）84〕、ごく最近になって、それらは破骨細胞にも含まれていることが証明された〔エム・ジェイ・ウージアら、ピーエヌエーエス88 （1991）6613（M.J.Ousier et al.，PNAS 88（1991）6613〕。骨に対するエストロゲン作用の細胞メカニズムは不明である。しかしながら、そのとても重要な性質には、再吸収の強さを正常化しまた骨のターンオーバー(turnover)速度を減少させることにより、骨再吸収と拮抗するという、良く裏付けられた能力が含まれる。エストロゲン置換療法（Estrogen Replacement Therapy（ＥＲＴ）)は、骨粗鬆症(osteoporosis)及び骨折の予防に有効であることが一般的に認められている。しかし、最近、確立した骨粗鬆症及び骨折の治療にも有用であることが明らかになった〔シー・ダブリュ・マークスら、ジェイ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ11（1992）1275（C．W．Marx etａl.，J．Bone and Mineral Res11（19 92）1275、及びシー・クリスチャンセンら、クリスチャンセン（編）”ホルモン・リプレイスメント・アンド・イッツ・インパクト・オン・オステオポローシス ”、バイエール・チンドル、ロンドン（1991）853（C．Christiansen et al.，i n Christiansen（ed）”Hormone replacement and its impact on osteoporosis ”,Bailliere Tindall，London（1991）853）〕。ＥＲＴは７０歳まで有効であること、及び閉経後のＥＲＴの終了は本来の閉経期に見られる骨欠乏によく似た加速状態(accelerated phase)を生じるが、４年から６年後には、ＥＲＴを終了した患者とＥＲＴを受けたことのない者との間には殆ど差がないという証拠がある。このように、もし、ＥＲＴを閉経後の骨欠乏及び骨折に対する、頼みの綱的な予防法(mainstay prophylaxis)として使用するのであれば、長期間そしてできる限り無期限にＥＲＴを継続することが必要であろうと考える研究者もいる〔エイチ・ケイ・ゲナントら、アム・ジェイ・オブステット・ジネコール16（1989）1842（H.K．Genant et al.，Am J．Obstet Gynecol 16（1989 ）1842〕。しかしながら、エストロゲン療法の深刻な合併症には、子宮内膜癌、乳癌、及び静脈血栓症とそれに付随する肺動脈塞栓症が含まれる。現在、プロゲスチンとの共同療法により、エストロゲンが誘導する子宮内膜癌が予防されることが明らかになっている。経口製剤で生じる最初の肝臓通過を避けるエストロゲンの経皮的供給によれば、血栓に好都合な状況が回避されるかもしれない。しかしながら、乳癌の増大した危険性を回避する治療上の操作は見つかっておらず、事実、プロゲスチンそれ自体が***に対して発癌性の性質を持っているかもしれないという証拠がある。生涯の骨欠乏を予防するためには継続的なＥＲＴが必要であろうとの蓄積された証拠に照らして、全てのうち最大の障害は、エストロゲンの曝露時間とともに乳癌発生の危険性が増加することを示す最近入手可能な証拠である〔ディー・グラディら、アム・ルターン・メド 117（1992）1016（D．Grady et al.，Am．Lutern．Med．117（1992）1016）〕。ＥＲＴが推奨される北アメリカの患者の５０％以下しか、エストロゲン処方は遂行されておらず、また多くの医師が合併症を危惧して、エストロゲンの処方に不賛成であるという明らかな証拠がある。特に今日、ホルモン依存性乳癌の治療に使用されるエストロゲン受容体アンタゴニスト、又は抗エストロゲンであるタモキシフェン(tamoxifen)〔ジェイ・ボウラーら、ステロイズ 54（1989）71（J．Bowler et al.，Steroids，54（1989 ）71）〕は、市販されている最も安全な抗癌薬のうちの一つである。しかしながら、タモキシフェンは、若干の不利な点を有している。第一に、長期間の治療で、ヒト子宮内膜癌の頻度を増加させることが示されている。第二に、タモキシフェンを多量投与されたラットに非常に高い頻度で肝腫瘍が見つかっていること。第三に、ホルモン依存性乳癌の治療を受けた患者の幾人かはこの治療に対して応答しなかったことである〔エイチ・マスら、キャンサー 4 6（1980）2783(H．Mass et al.， Cancer 46（1980）2783)〕。この失敗の理由は未だ理解されていないが、タモキシフェンの不完全な拮抗作用によるものかもしれない。このことは、タモキシフェンは非特異的すぎて、長期のアジュバンド療法または進行した乳癌の治療のために選択されるエストロゲンアンタゴニストにはならないことを示唆する。エストロゲン様活性のない改良された抗エストロゲンが、薬物としてまたエストロゲンの作用メカニズムを研究するための生化学的ツールとして望まれている。 ”エストロゲン様活性”とは、試験化合物がエストラジオールと類似の細胞応答を生じることを意味し、また”抗エストロゲン様活性”とは、試験化合物がエストラジオールによって引き起こされる活性とは反対の細胞応答に影響を及ぼすことを意味する。多くの化合物、主としてステロイドについて試され、種々の結果がある。例えば、ジェイ・ボウラーら、ステロイズ 54（1989）71（J．Bowler et al.，Stero ids 54（1989）71）及びウェイクリング並びにボウラー、ジェイ・ステロイド・バイオケム 43（1992）173(Wakeling and Bowler，J．Steroid． Biochem．43（1992）173)、ボウラー（Bowler）ら、米国特許第４，６５９，５１６号；欧州特許出願第０１３８５０４号を参照されたい。ジヒドロナフタレン〔スワーレイス及びジョーンズ(Suarez and Jones)、米国特許第４，２３０，８６２号〕及びベンゾチオフェン〔ジョーンズ及びスワーレイス(Jones and Suarez）、米国特許第４，１３３，８１４号；ジョーンズ（Jon es）、欧州特許出願第００６２５０３号〕のような非ステロイド性化合物もまた抗エストロゲン様活性を有することがわかっている。短い（ｎ＝４−８のみ）脂肪族側鎖を有するインドールアミン誘導体の幾つかが、フォン・アーンジェら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー、 33（1990）2635（von Angerer et al.，Ｊ．Med．Chem．33（1990）2635、米国特許第４，９４３，５７２号及び第５，０２３，２５４号及び欧州特許第０３４８３４１号に開示されている。ラブリー（Labrie）及びメランド（Merand）は、幾つかのインドール６’−ヒドロキシ誘導体が抗エストロゲン様活性を有することを述べている（欧州特許出願第０３６７５７６号／国際特許出願ＷＯ９３／１０７４１号）。しかしながら、エストロゲン様活性が前述の望ましくない副作用の原因であると信じられているので、なおまだ、***において、最低限のエストロゲン様活性を欠くかもしくは最低限のエストロゲン様活性を有する抗エストロゲンが緊急に必要とされている。発明の詳細な説明本発明は、次式のインドール誘導体又はその塩、好ましくは生理学的に許容される塩を提供するものである。〔式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してヒドロキシ、メトキシ又はフッ素であり：ｎは、９から１２までの整数であり：及びＸは、ＣＯＮＲ４Ｒ５、ＣＳＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＣＯＲ５、ＮＲ４Ｒ５、ＳＯ₂ＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＳＯ₂Ｒ５もしくは１−Ｒ４−５−テトラゾールであり、式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して水素及び低級アルキル（代表的にはＣ１−Ｃ５）から選択されるものであるか、又はＲ４及びＲ５は共に式− （ＣＨ₂）ｙ−（式中、ｙは４もしくは５である。）の架橋を形成する。〕これらの化合物は、従来技術の化合物と比べて改善された活性を有する。特に好ましい化合物は、請求項３に示されるものである。これらの化合物のうち、化合物ＫＢ−ＥＲ−１が特に好ましい。好ましくは、***において最低限のエストロゲン様活性を欠くかもしくは最低限のエストロゲン様活性を有することに加えて、本発明のインドール誘導体はまた、骨及び／又は肝臓中でエストロゲン様活性を示し、及び／又は子宮内膜中では最低限のエストロゲン様活性を欠くか最低限のエストロゲン様活性を有する。本発明の１又はそれ以上のインドール誘導体は、平均的な労働者の技術に従って、薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤とともに、活性成分として薬学的製剤中に含まれてもよい。本発明のインドール誘導体は、乳癌のようなエストロゲン関連の障害もしくは疾病の治療もしくは予防、またはエストロゲン置換療法のいずれかの処置に用いることができる。そのうえ、本発明のインドール誘導体は、処置が必要な個々の者に対して、治療又は予防上有効な量の該インドール誘導体を投与することからなるエストロゲン関連の障害もしくは疾病の治療又は予防的処置のための、医薬品の製造に用いることができる。該医薬品は、特にエストロゲン置換療法及び／又は乳癌治療に好適に使用される。好ましい活性プロフィールにより、本発明のインドール誘導体は、特に患者の長期間処置に用いるのに適する。これは、現在使用されている抗エストロゲン、タモキシフェンに発生する厄介な事実(evidence)とは対照的である。次に、本発明の化合物の調製及びそれらの従来技術化合物との比較試験について、添付図面１−１６と関連して、単に例として述べる。図面中、図１−１４は、ＺＲＡＦ細胞株、乳癌細胞株、子宮内膜癌細胞株及び肝臓癌細胞株中での本発明化合物の効果を示す。及び、図１５並びに１６は、同じ細胞に対する従来技術の化合物ＺＫ１１９０１０及びタモキシフェンの効果を示す。好ましいインドール誘導体の合成本発明の化合物の全構造は、ＮＭＲ分析および質量分析によって確認された。実施例Ｉ１−（１０−（ジエチルカルバモイル）デカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４ −ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール（ａ）Ｎ−メチルモルホリン（０．２６ｇ、２．６ミリモル）及びイソブチルクロロホルメート（０．３８ｇ、２．８ミリモル）を、１１−ブロモウンデカン酸（０．５３ｇ、２．０ミリモル）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ．）溶液に−１０℃にて加えた。混合物を、ジエチルアミン（０．２ｇ、３ミリモル）を加える前に、 −１０℃で３０分間攪拌した。室温（ＲＴ）で３０分後、混合物を、１ＭのＨＣｌ、次にＮａＨＣＯ₃（ｓａｔ）及びブラインで洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル−酢酸エチル９：１）により精製し、１１−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチルデカニルアミド０．４８ｇ（７５％）を得た。（ｂ）（フォンアンジェラーら、ジャーナルオブメディシナルケミストリー、１９８４、２７、１４３９−１４４７（von Angerer et al，Journal of Medi cinal Chemistry，1984，27，1439-1447）の方法によって調製された）５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール（０．１３ｇ、０．５ミリモル）の乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２ｍｌ．）溶液を、攪拌されている水素化ナトリウム（２５ｍｇ、０．８ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（１ｍｌ．）との混合物に、０℃にて添加した。３０分間の攪拌後、乾燥ＤＭＦ（１ｍｌ．）に溶解した（ａ）で調製したアミド（０．２６ｇ、０．８ミリモル）を、滴下した。得られた混合物を、室温で２時間攪拌し、その後、酢酸エチルと水に分配した。有機層を、分離し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル−酢酸エチル（８：２）により精製し、１−（１０−ジエチルカルバモイル）デカニル）−５−メトキシ− ２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール０．１８ｇ（７１％）を得た。（ｃ）上記ジメトキシ化合物（０．２ｇ、０．４ミリモル）を、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ．）に溶解し、Ｎ₂下で−６５℃まで冷却した。三臭化ホウ素（ＣＨ₂Ｃｌ₂ 中１Ｍ、２ｍｌ．、２ミリモル）を、シリンジを用いて添加し、温度を室温にした。混合物を、一晩攪拌し、その後、ＮａＮＣＯ₃（ｓａｔ）を用いてクエンチした。混合物を、酢酸エチルと水に分配した。有機層を、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル− 酢酸エチル４：１）により精製し、１−（１０−（ジエチルカルバモイル）デカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール０．１７ｇ（９５％）を、半固体として得た。実施例II ５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−１−（１２− ピペリジノドデカニル）インドール（ａ）５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール（２．０ｇ、７．５ミリモル）（実施例１（ｂ）参照）の乾燥ＤＭＦ（１５ｍｌ．）溶液を、攪拌されている水素化ナトリウム（８０％、３８０ｍｇ、１３ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（３ｍｌ．）との混合物に、０℃にて添加した。混合物を、０ ℃で３０分間放置し、その後、１，１２−ジブロモドデカン（３．７ｇ、１１．３ミリモル）の氷冷乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ．）溶液に、ゆっくりと添加した。さらに室温で２時間攪拌した後、反応混合物を、水とＣＨ₂Ｃｌ₂に分配した。有機層を、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル−酢酸エチル９：１）により精製し、１−（１２−ブロモドデカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール１．４ｇを得た。（ｂ）ＤＭＦ（３ｍｌ．）中の上記ブロモ化合物（２００ｍｇ、０．３９ミリモル）に、ピペリジン（０．１３ｇ、１．５６ミリモル）のＤＭＦ（１ｍｌ．）溶液を添加し、混合物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、水と酢酸エチルに分配した。有機層を、分離し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＮＨ₃により飽和した、石油エーテル−酢酸エチル１：１）により精製し、５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３ −メチル−１−（１２−ピペリジノドデカニル）インドール０．１２ｇ（６０％）を得た。（ｃ）上記ジメトキシ化合物（０．１２ｇ、０．２３ミリモル）を、実施例１（ｃ）に記載したように三臭化ホウ素を用いて処理し、５−ヒドロキシ−２−（４ −ヒドロキシフェニル）−３−メチル−１−（１２−ピペリジノドデカニル）インドールを得、これを、カラムクロマトグラフィー（Ａｌ₂Ｏ₃、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ９：１）により精製し、０．１０ｇ（９１％）を得た。実測値（Found ）：Ｃ，７５．６；Ｈ，９．４；Ｎ，５．１；Ｃ₃₂Ｈ₄₈Ｎ₂Ｏ₂−０．９５Ｈ₂ Ｏ。計算値（Requires）：Ｃ，７５．７；Ｈ，９．５；Ｎ．５．５％。実施例III １−（１０−Ｎ−シクロプロピル−プロピオニルアミド）デカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール（ａ）５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール（１．０ｇ）を、実施例II（ａ）に記載したように、１，１０−ジブロモデカンを用いてアルキル化し、１−（１０−ブロモデカニル）−５−メトキシ−２−（４ −メトキシフェニル）−３−メチルインドール１．４ｇ（７８％）を得た。（ｂ）上記ブロモ化合物（１．４ｇ）を、実施例II（ｂ）に記載したように、シクロプロピルアミンと反応させ、１−（１０−（シクロプロピルアミノデカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール１．０ｇ（７８％）を得た。（ｃ）無水プロピオン酸（１３０ｍｇ、１．０ミリモル）を、上記アミン（３００ｍｇ、０．６６ミリモル）及びトリエチルアミン（１００ｍｇ、１．０ミリモル）のＴＨＦ（５ｍｌ．）氷***液に滴下した。混合物を、室温で一晩攪拌し、その後、水と酢酸エチルに分配した。有機層を、まず１ＭのＨＣｌ（ａｑ）で、その後ＮａＨＣＯ₃（ｓａｔ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル−酢酸エチル４：１）により精製し、１−（１０−（Ｎ−シクロプロピル−プロピオニルアミド）デカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール３１０ｍｇ（９２％）を得た。（ｄ）上記ジメトキシ化合物（０．２０ｇ）を、実施例Ｉ（ｃ）に記載したように三臭化ホウ素を用いて処理し、１−（１０−Ｎ−シクロプロピル−プロピオニルアミド）デカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３ −メチルインドール０．１９ｇ（９０％）を得た。実測値：Ｃ，７３．３；Ｈ，８．４；Ｎ，５．１；Ｃ₃₁Ｈ₄₂Ｎ₂Ｏ₃−１．０５Ｈ₂Ｏ。計算値：Ｃ，７３．１；Ｈ，８．７；Ｎ，５．５％。実施例IV ：１−（１０−（Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノデカニル）−５− ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール（ａ）（実施例III（ｂ）に記載したように調製した）１−（１０−（シクロプロピルアミノデカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール（２３０ｍｇ、０．５ミリモル）、Ｋ₂ＣＯ₃（１００ｍｇ、０．７５ミリモル）及びヨウ化プロピオニル（１００ｍｇ、０．６ミリモル）のアセトニトリル（５ｍｌ．）中の混合物を、室温で一晩攪拌し、その後、酢酸エチルと水に分配した。有機層を、乾燥（Ｋ₂ＣＯ₃）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；石油エーテル−酢酸エチル１：１）により精製し、１−（１０−シクロプロピル−ｎ−プロピルアミノデカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール２００ｍｇ（８０％）を得た。（ｂ）上記ジメトキシ化合物（０．２０ｇ）を、実施例Ｉ（ｃ）に記載したように三臭化ホウ素を用いて処理し、１−（１０−（Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−ｎ− プロピルアミノ）デカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドールを得、これを、カラムクロマトグラフィー（Ａｌ₂Ｏ₃ 、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ９：１）により精製し、０．１９ｇ（９８％）を得た。実測値：Ｃ，７１．８；Ｈ，８．６；Ｎ，４．９；Ｃ₃₁Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₂−０．６ＣＨ₂Ｃｌ₂。計算値：Ｃ，７１．９；Ｈ，８．６；Ｎ，５．３％。実施例Ｖ：１−（１０−テトラゾリルデカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール（ａ）シアン化ナトリウム（１５ｍｇ、０．２８ミリモル）の水（１ｍｌ．）溶液を、（実施例Ｉ（ｂ）に記載したように調製した）１−（１０−（ジエチルカルバモイル）デカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３− メチルインドール（０．６５ｇ、０．１４ミリモル）のＤＭＦ（５ｍｌ．）溶液に添加し、得られた混合物を、８５℃で２時間加熱した。混合物を、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮し、粗製の１−（１０−シアノデカニル）−５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール０．６０ｇを得た。（ｂ）上記ニトリル（２３０ｍｇ、０．５ミリモル）を、ＤＭＦ（５ｍｌ．）に溶解した。アジ化ナトリウム（１６３ｍｇ、２．５ミリモル）及び塩化アンモニウム（１３５ｍｇ、２．５ミリモル）を加え、混合物を、４８時間加熱した。混合物を、２ＭのＨＣｌを用いて酸性化し、ＣＨ₂Ｃｌ₂を用いて抽出した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂：ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨＨＯＡｃ９０：１０：１）により精製し、１−（１０−テトラゾリルデカニル（− ５−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−３−メチルインドール１５０ｍｇ（６２％）を得た。（ｃ）上記ジメトキシ化合物（０．２４ｇ、０．５ミリモル）を、実施例１（ｃ）に記載したように三臭化ホウ素を用いて処理し、１−（１０−テトラゾリルデカニル）−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチルインドール０．２２ｇ（９８％）を得た。上記実施例Ｉ〜Ｖにおいて調製した化合物は、下記式により表される：上記の実施例において記載された手順に従い、上記式に包含される下記化合物も調製した。即ち、上記式において、ｎ、Ｒ１、Ｒ２及びＸは、以下の通りである：遺伝子的に設計され及び組織特異的エストロゲン標的細胞における本発明のインドール誘導体及び従来技術品のインビトロでのエストロゲン様／抗エストロゲン様活性の特徴付け上述した本発明の化合物を、完全なアゴニズムを発揮する最も低い用量を要求するものとして公知の抗エストロゲンＺＫ１１９０１０（フォンアンゲレラーら(von Angerer et al)(1940)，supra及び米国特許番号5,023,254;及び4,943, 572及び欧州特許番号0348341に記載の化合物Ｎｏ．６）及びタモキシフェンと比較して、種々の細胞におけるエストロゲン様／活性について、以下に記載のように試験した。１．遺伝子的に設計された細胞におけるインドール化合物の試験エストロゲンレポーター細胞株（ＺＲＡＦ）は、エストロゲン応答要素（ＥＲＥ）及び分泌型のアルカリ性ホスファターゼをコードするレポーター遺伝子に融合されたコアプロモーター配列を含有する組み込まれた人工転写単位を含む、設計されたエストロゲン受容体（ＥＲ）発現ほ乳動物細胞株である。エストロゲン様ホルモンの不存在下においては、該細胞は非常に低いレベルのアルカリ性ホスファターゼレポーター蛋白質のみを発現する。しかしながら、ＺＲＡＦ細胞のエストロゲン、例えば、エストラジオールなどへの露出の結果として、ＥＲは活性化され、ＥＲＥを通して介在するアルカリ性ホスファターゼレポーター遺伝子の転写活性化をもたらす。発現したエストロゲン−依存性アルカリ性ホスファターゼ蛋白質のレベルは、上述したように酵素的な化学発光アッセイによって間接的に測定できる（ニルソンエスら（Ni lsson S．et al）（1993）アドバンシイズインステロイドアナリシス ’ 93、プロシーディングスオブザフィフスシンポジウムオンザアナリシスオブステロイズ（Advances in Steroid Analysis’93，Proceedings of the 5th Symposium on the Ana ペスト、ハンガリー、５７〜６０頁）。ＺＲＡＦ細胞は、アルカリ性ホスファターゼレポーター蛋白質の発現においてアゴニストの存在に厳しい依存性を示すので、該細胞は、アンタゴニスト活性を有する化合物を分析するために、低い用量の対照標準アゴニスト（１ｎＭモックスエストロール（moxestrol）、ニューイングランドヌクレアー（New England N uclear））によって刺激される必要がある。上述のレポーター細胞株を用いて、本発明の合成されたインドール誘導体を、ヒトエストロゲン受容体によって発揮されるアルカリ性ホスファターゼレポーター遺伝子の発現の調節するそれらのエストロゲン様／抗エストロゲン様活性及び有効性について試験した。実験計画第１日：各々の実験の開始前４日間、ＺＲＡＦ細胞を、プラスティックペトリ皿（コスター．ラブデザイン(Costar.LabDesign)、スウェーデン(Sweden)）中、クーンズ（Coon’s）^a)（ｗ／ｏフェノールレッド(phenolred)）＋１０％ＦＣＳ^b)（デキストラン被覆した木炭によってホルモンから二重に除去されている（２×ＤＣＣ））に懸濁し、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で、ホルモンフリーの条件下培養した。第４日：ＺＲＡＦ細胞を、９６穴マイクロタイタープレート（コスター．ラブデザイン、スウェーデン）中ウエルあたり４×１０⁴細胞の密度で播種した。該細胞を、クーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）＋１０％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）中及び加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。第５日：培地をクーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）＋５％血清代用物（serum substi tute）＋／−ホルモン及び試験物質（以下に示す）に交換。その後、該細胞を、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養し続けた。第７日：ホルモンの／試験物質の添加４８時間後、細胞数及び細胞形態を光学顕微鏡で検査した。発現したアルカリ性ホスファターゼの相対的なレベルを、以下のような化学発光アッセイによって決定した：即ち、細胞培養培地の１０μｌアリコートを、白いマイクロタイタープレート中２００μｌのアッセイバッファー（１０ｍＭジエタノールアミン、ｐＨ１０；１ｍＭＭｇＣｌ₂及び０．５ｍＭＡＭＰＰＤ）と混合し、マイクロプレート・フォーマット・ルミノメーター（ルミノスキャンラブシステムズ(Luminoskan Labsystems)、フィンランド( Finland)）に移動させる前、２０分間３７℃でインキュベートした。ルミノスキャン・ルミノメーターの設定は、各ウエルの１秒の記録での積分測定であった。アルカリ性ホスファターゼ活性を光単位（light units）（ＬＵ）で示す。光放出の割合は試料中に存在する酵素の濃度に正比例する。２．エストロゲン依存性ヒト乳癌細胞中におけるインドール化合物の試験ヒト***腫瘍細胞株ＺＲ７５−１（ＡＴＣＣＣＲＬ１５００）は、インビトロでの生育において、非常にエストラジオールＥ₂に依存しており（Ｅ₂に対する最大増殖応答の半分は、約５０ｐＭですでに達しており、１ｎＭの濃度のＥ₂ において最大の応答を得る−Ｅ₂の不存在下では、これら細胞は静止するようになる。）、それゆえ、ヒトエストロゲン受容体を通してそれらの効果を媒介する化合物のアゴニスト／アンタゴニスト活性の評価における道具として選択された。タモキシフェン（Tamoxifen）は、***腫瘍細胞増殖アッセイ細胞において非常に弱いエストロゲン様活性を示す。しかしながら、１ｎＭのＥ₂の存在下、タモキシフェンは濃度依存性抗エストロゲン様活性を示す。Ｅ₂不存在又は存在下でのそれぞれタモキシフェンの部分的なエストロゲン様／抗エストロゲン様プロフィールは、文献（Br．J．Cancer 59（1989）727頁及びCancer Res．48（1988 ）3693頁）から公知である。細胞性ＡＴＰのレベルを、細胞の数をカウントするよりもむしろ細胞の生育の測定として選択した。なぜなら、細胞性ＡＴＰのレベルが、化学発光アッセイによって間接的に測定され、伝統的な細胞計数よりも細胞生育及び細胞数を研究するためのより再現性の高い方法であることが既に示されていたからである（メソッズインエンザイモロジー(Methods in Enzymology)，133(1986)27頁及びメディカルバイオロジー(Medical Biology)，62(1984)338頁）。本発明のインドール誘導体の効果を、ＺＲ７５−１***腫瘍細胞株において、それぞれ１ｎＭエストラジオール（１７β−エストラジオールはシグマ社（Si gma）から購入した）の不存在又は存在下、細胞の生育を刺激又は抑制するそれらの活性をモニターすることによって測定した。実験計画第０日：実験の開始前、ＺＲ７５−１細胞を、プラスティックペトリ皿中、クーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）＋１０％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）中、ホルモンフリーの条件下、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で、４日間培養した。第４日：該細胞をトリプシン処理し（trypsinised）、９６穴マイクロタイタープレート中８×１０³細胞／ウエルの密度で播種した。該細胞を、クーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）＋１０％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）中に播種し、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。第５日：培地をハムズ（Ham's）（ｗ／ｏフェノールレッド）＋５％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）＋／−ホルモン及び試験物質（以下に示す）に交換し、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。１つのコントロールプレートからの細胞性ＡＴＰのプールを１％ＴＣＡで抽出し−２０℃で保存した。第８日：消費した培地を新鮮なハムズ（ｗ／ｏフェノールレッド）＋５％ＦＣＳ（２× ＤＣＣ）＋／−ホルモン及び試験物質（第５日参照）に交換した。第１１日：ホルモンの／試験物質の添加６日後、細胞形態を光学顕微鏡で検査した。その後すべてのマイクロウエル培養物を、室温で３０分間１％ＴＣＡで抽出し、ＡＴＰのレベルを供給者の推奨に従ってアッセイした（ＡＴＰモニタリングキット(A TP monitoring kit)、バイオオービット(BioOrbit)、フィンランド）。３．ヒト肝細胞についてのインドール化合物の試験肝臓はエストロゲン／抗エストロゲンの他の標的器官である。肝臓特異的効果におけるインドール誘導体の特徴付けを効果的にするために、我々は、ヒト肝臓細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬＨＢ８０６５）を使用し、ヒトエストロゲン受容体を発現するよう形質転換した。性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）をコードする遺伝子は、部分又は完全アゴニスト特性を有するエストロゲン受容体結合ホルモン／化合物によって正に調節される。それゆえ、ＳＨＧＢＧ遺伝子の転写調節についてのインドール誘導体の効果を、対照標準アゴニストモックスエストロール（１ｎＭ）の存在又は不存在下使用して、それらのエストロゲン様／抗エストロゲン様活性を評価した。発現され及び分泌されたＳＨＢＧのレベルを、ＳＨＢＧデルフィア(Delfia)アッセイ（ワラックオーワイ（Wallac OY）、フィンランド）を用いて、供給者の推奨に従って免疫学的にモニターした。実験計画第１日：９６穴プレート中ウエルあたり約２０×１０³のＨｅｐＧ２細胞を、２ｍＭＬ−グルタミン及び１％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）を添加したクーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）中に播種し、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。第２日：培地を、２ｍＭＬ−グルタミン及び１％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）＋／−対照標準アゴニスト及び試験物質（以下に示す）を添加したクーンズ（ｗ／ｏフエノールレッド）に交換した。該細胞を、その後加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養し続けた。第５日：ホルモンの／試験物質の添加７２時間後、細胞数及び細胞形態を光学顕微鏡で検査した。その後、各々のウエルの調節された培地のアリコートを、発現したＳＨＢＧのレベルについてＳＨＢＧデルフィアアッセイ（ワラックオーワイ、フィンランド）を用いて、供給者の推奨に従って免疫学的にアッセイした。４．ヒト子宮内膜細胞についてのインドール化合物の試験子宮もエストロゲン様化合物によって誘導される効果の他の標的である。乳癌の治療における強い抗エストロゲンであるタモキシフェンが、子宮内膜細胞において非常に高いエストロゲン様活性を有していることは良く知られている。子宮内膜におけるタモキシフェンの比較的高いアゴニスト効果は、長期間のタモキシフェン治療の間に形成された新しい子宮内膜癌の増大した発病率の１つの理由と信じられている。子宮内膜における高いエストロゲン様活性を有する新規薬剤の開発を避けるために、我々はまた、ヒト子宮内膜細胞におけるアゴニスト／アンタゴニスト効果について、インドール化合物を特徴付けた（イシカワ（Ishikawa ）細胞−トウイトウら（Touitou et al）Mol．Cell．Endocrinol，66 231(1989) 及びそこに引用されている文献）。内因性アルカリ性ホスファターゼ遺伝子を、イシカワ子宮内膜細胞株におけるインドール化合物のアゴニスト／アンタゴニスト効果の特徴付けの標的細胞として使用した。それらのアゴニスト／アンタゴニストプロフィールを、対照標準アゴニストモックスエストロール０．１ｎＭの存在又は不存在下に、インドール化合物への露出の結果として子宮内膜細胞によって発現し分泌されるアルカリ性ホスファターゼのレベルを測定することによって評価する。実験計画第１日：９６穴プレート中ウエルあたり２０×１０³個のイシカワ細胞を、２ｍＭＬ −グルタミン及び１０％ＦＣＳ（２×ＤＣＣ）を添加したクーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）中に播種し、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。第２日：培地を、２ｍＭＬ−グルタミン及び５％血清代用物＋／−対照標準アゴニスト及び試験物質（以下に示す）を添加したクーンズ（ｗ／ｏフェノールレッド）に交換。該細胞を、加湿インキュベータ内で、３７℃、５％ＣＯ₂で培養し続けた。第５日：ホルモンの／試験物質の添加７２時間後、細胞数及び細胞形態を光学顕微鏡で検査した。その後、各々のウエルの調節された培地のアリコートを、ＺＲＡＦ細胞において記載したように（上述）発現したアルカリ性ホスファターゼのレベルについてアッセイした。インドール誘導体のアゴニスト／アンタゴニスト特性を試験するのに使用した全ての細胞株を、また、並行して、比較のためシェーリング（Schering）化合物ＺＫ１１９０１０（シェーリング社から親切にも提供していただいた。）及びタモキシフェン（シグマ）のアゴニスト／アンタゴニストプロフィールを特徴付けるために、使用した。毒性は、供給者の推奨に従って、比色分析ＭＴＳ／ＰＭＳ法（エスディーエス（ＳＤＳ）、スウェーデン）によってモニターした。化学薬品：ａ）クーンズ及びハムズ培地（ｗ／ｏフェノールレッド）は、エスヴィエー（ＳＶＡ）、ウプサラ（Uppsala）、スウェーデンから購入した。ｂ）ＦＣＳ及びＬ−グルタミンはギブコービーアールエル（Gibco-BRL）から購入した。ｃ）バッキンガム（Buckingham）、クレイトン（Clayton）、ボトルス（Botolth ）のMed. Vet．サプライズリミテッド（supplies limited）のＤｒ．アランプレストン（Alan Preston）氏から血清代用物、ＭＫ１８２ＬＲ、Ｕ．Ｋ．。ｄ）アルカリ性ホスファターゼ基質ＡＭＰＰＤ（３−（４−メトキシスピロ（１，２−ジオキセタン−３，２＋−トリシクロ（３．３．１）デカン）−４−イル）フェニルホスフェート二ナトリウム）は、ボールダイアグノスティックス（Boule Diagnostics）、スウェーデンから購入した。９６穴マイクロタイタープレートのウエルに添加したホルモン／試験物質各々の細胞株及び各々の試験操作において、滴定曲線に対する対照標準は、細胞の状態をモニターするために行った。全ての細胞株を用いて、インドール誘導体、シェーリング化合物ＺＫ１１９０１０及びタモキシフェンについて、各細胞株において事前に決定した固定用量の対照標準アゴニスト（１７ｂ−エストラジオール／モックスエストロール）の不存在又は存在下、用量滴定を行った。使用した標準対照アゴニストの濃度範囲は、１０^-6〜１０^-11Ｍであった。実験に使用したインドール誘導体、シェーリング化合物ＺＫ１１９０１０及びタモキシフェンの濃度範囲は、１０^-5〜１０^-10Ｍ（又はさもなくば用量応答曲線中に示される）±０．１／１ｎＭ対照標準アゴニストであった。各々の用量のホルモン／化合物に対する細胞応答は、３つのものからなり、即ち、１用量のホルモン／化合物あたり３つのウエルで行った。溶媒のみの存在下、即ち、添加されるホルモン／化合物の不存在下での選択された細胞応答の数種の測定を、試験操作あたり各プレート上で行った（発現されたマーカーのバックグラウンドレベル）。ホルモン／化合物に対する細胞応答を、対照標準アゴニストによって導き出された応答のパーセントとして、添付の用量応答曲線中に示す。要約：インドール誘導体のアゴニスト／アンタゴニスト機能を特徴付けるために使用した全ての細胞株及び選択した細胞応答は、濃度依存性エストロゲン効果を示した。本発明の全てのインドール誘導体は、ＺＲ７５−１乳癌細胞のエストラジオール−依存性の生育及びイシカワ子宮内膜細胞株中の内因性アルカリ性ホスファターゼ遺伝子のエストラジオール−介在−転写活性化を抑制することができた。シェーリング化合物ＺＫ１１９０１０と比較して、ＫＢＥＲ−２８以外の全てのインドール誘導体が、乳癌細胞株ＺＲ７５−１の有意に低い生育刺激効果を示した、即ち、それらは、非常に低いアゴニスト機能を導き出すか又は全くアゴニスト機能を導き出さなかった。これらの中で、ＫＢＥＲ−１、ＫＢ−ＥＲ −１４、ＫＢＥＲ−１６、ＫＢＥＲ−２２、ＫＢＥＲ−２６及びＫＢＥＲ−２７が、また、シェーリング化合物ＺＫ１１９０１０よりも子宮内膜細胞株においてより有利なアゴニスト／アンタゴニストプロフィールを示した。化合物ＫＢＥＲ−１７、ＫＢＥＲ−１８及びＫＢＥＲ−２１は、ＺＫ１１９０１０と同様な程度のアゴニズムを示したが、ＫＢＥＲ−２８を除く他の全てのインドール誘導体は僅かに高い相対的なアゴニズムのみ示した。シェーリング化合物ＺＫ１１９０１０も含む全てのインドール誘導体は、ＺＲ７５−１乳癌及びイシカワ子宮内膜細胞株において共に、タモキシフェンよりも低いアゴニスト活性を示した。本発明の全てのインドール誘導体は、Ｅ₂の不存在下で非常に弱いエストロゲン様活性を示すＫＢ−ＥＲ−１３、ＫＢ−ＥＲ−１７及びＫＢ−ＥＲ−１８を除いて、抗エストロゲン様活性のみ示した。従って、本発明は、***における最小エストロゲン様活性を欠く又は保持する抗エストロゲンを提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｄ 209/10 9159−4ＣＣ０７Ｄ 209/10

Claims

【特許請求の範囲】１．次式〔式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してヒドロキシ、メトキシ又はフッ素であり：ｎは、９から１２までの整数であり：及びＸは、ＣＯＮＲ４Ｒ５、ＣＳＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＣＯＲ５、ＮＲ４Ｒ５、ＳＯ₂ＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４ＳＯ₂Ｒ５又は１−Ｒ４−５−テトラゾールであり、式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して水素及び低級アルキルから選択されるものか、又はＲ４及びＲ５は共に式−（ＣＨ₂）ｙ−（式中、ｙは４もしくは５である）の架橋を形成する。〕のインドール誘導体またはその塩。２．Ｒ１及び／又はＲ２がヒドロキシである請求項１記載のインドール誘導体。３．Ｒ１及びＲ２が共にヒドロキシであり、かつｎ及びＸが次の組み合わせから選択されるものである、請求項２記載のインドール誘導体。４．***組織中でのエストロゲン様活性を欠乏する請求項１、２又は３記載のインドール誘導体。５．骨細胞及び／又は肝細胞中でエストロゲン様活性を示し、及び／又は子宮内膜細胞中で最低限のエストロゲン様活性を欠くかもしくは最低限のエストロゲン様活性を有する、請求項１乃至４のいずれかに記載のインドール誘導体。６．薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤とともに請求項１乃至５のいずれかに記載のインドール誘導体を活性成分として含む薬学的製剤。７．医薬品に用いられる請求項１乃至５のいずれかに記載のインドール誘導体。８．エストロゲン関連の障害又は疾病の処置のための、請求項１乃至６のいずれかに記載のインドール誘導体又は請求項７に記載の薬学的製剤の使用。９．エストロゲン関連の障害又は疾病が乳癌である、請求項８記載の使用。１０．前記処置がエストロゲン置換療法である請求項８又は９記載の使用。