JPH09159671A

JPH09159671A - 微生物由来成分の測定装置及び測定方法

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Publication number: JPH09159671A
Application number: JP23463996A
Authority: JP
Inventors: Haruki Oishi; 晴樹大石; Hiromi Shiraishi; 浩巳白石; Tooru Koshindou; 透小新堂; Shiyougo Wada; 正悟和田; Ryuzo Tsujino; 隆三辻野
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 1995-10-05
Filing date: 1996-08-19
Publication date: 1997-06-20
Anticipated expiration: 2016-08-19
Also published as: JP3666621B2

Abstract

(57)【要約】【目的】広範囲の微生物汚染を、高い信頼性と容易な測
定操作で測定できる微生物由来成分の測定装置及び測定
方法を提供する。【構成】光源として、青色及び／または紫色の光を発す
る発光ダイオ−ドを使用することによって、比濁時間分
析法と合成基質法の両方に適用できるようにした。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、微生物由来成分
の測定装置及び測定方法に係り、詳記すれば、グラム陰
性菌、グラム陽性菌及び真菌等の広範囲の微生物汚染
を、高い信頼性と容易な測定操作で測定可能な微生物由
来成分の測定装置及び測定方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】医薬品の製造・品質管理、医療用具の製
造・品質管理、食品の製造・品質管理、透析液の品質管
理、微生物感染症の診断、半導体製造工程での洗浄水の
不純物汚染管理等の微生物汚染が問題となる分野では、
従来から微生物汚染量を測定し、その混入を防ぐことが
行われている。ここで、微生物汚染量というのは、より
具体的には、試料中の生菌数、或は例えばエンドトキシ
ン、ペプチドグリカン、（１→３）β−Ｄ−グルカン
（以下、β−グルカンという）等の微生物由来成分量の
ことである。尚、微生物汚染量の測定を、微生物由来成
分量に基づいて行えば、生菌数の量を見積ることができ
るだけではなく、死菌を含めた総合的な微生物汚染量を
知ることができる。

【０００３】最近では実験動物の飼育や菌体培養が不要
で操作が簡便である等の理由から、このような微生物由
来成分量の測定法としては、下記の方法が主流となりつ
つある。カブトガニ血球成分を試薬として用いる所謂リムルス
テスト（比濁時間分析法）によるグラム陰性菌由来のエ
ンドトキシンの測定リムルステスト（合成基質法）によるグラム陰性菌由
来のエンドトキシンの測定エンドトキシンを不活化又は除去した試料を使用する
リムルステスト（比濁時間分析法）による真菌由来のβ
−グルカンの測定カブトガニ血球成分から取り出されたβ−グルカンと
反応する成分と、合成基質を含む試薬（合成基質法）に
よる真菌由来のβ−グルカンの測定カイコ体液成分を含む試薬であるＳＬＰ試薬（活性化
時間分析法）によるグラム陽性菌若しくはグラム陰性菌
由来のペプチドグリカンまたは真菌由来のβ−グルカン
の測定

【０００４】尚、上記比濁時間分析法、活性化時間分析
法及び合成基質法は、それぞれ以下の方法のことであ
る。比濁時間分析法または活性化時間分析法：試料と反応試
薬との混合物（被検試料液）に光を照射し、試料と反応
試薬とを混合後所定時間経過後から、被検試料液につい
ての光学的変化〔初期透過光量Ｉｏと所定時間（ｔ）経
過後の透過光量（Ｉｔ）との比。Ｒ＝Ｉｔ／Ｉｏ、透過
光量比Ｒの対数値、透過率の変化、吸光度の変化等〕が
所定の量だけ生ずるのに要する時間（透過光量が一定の
割合変化するまでの時間）を測定し、当該時間を利用し
て目的の測定を行う方法。合成基質法：被検試料液中で活性化される酵素の作用に
より色素を遊離する性質を有する合成基質を使用し、遊
離された色素量から目的の測定を行う方法。

【０００５】上記リムルステストに於ける比濁時間分析
法と合成基質法による測定は、試料となる対象物質の反
応への影響に応じて使い分けられている。従来のリムル
ステスト等では、検出困難であったグラム陽性菌由来の
ペプチドグリカンが、上記のＳＬＰ試薬が開発された
ことによって、検出可能となったので、実験動物や培養
操作が不要な上記微生物汚染の測定法は、一段とその重
要性を増している。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従来の比濁時間分析装
置は、操作が容易であり、これを用いて上記、、
の測定を行えば、複数の試料について、再現性、定量性
に優れた測定を高い信頼性のもとで実施できる利点はあ
ったが、上記や等の合成基質法に基づく測定には使
用できなかった。

【０００７】また、従来のマイクロプレ−トリ−ダ−
は、上記、、等を実施することは可能であった
が、例えば反応開始時点と測定開始時点とを連動でき
ず、被検試料液毎の反応経過時間を厳密に測定できない
ことと、試料容器並びに反応容器である９６穴マイクロ
プレ−トの微生物汚染を完全に除去することが困難であ
るほか、マイクロプレ−トの周辺部と中央部に於ける被
検試料液の温度を均一に制御することが困難であること
等の理由から、得られた測定値は信頼性に欠けるという
問題点を有していた。

【０００８】また、上記の問題点に加えて、マイクロプ
レ−トリ−ダ−では、マイクロプレ−トを静止させたま
まで測定を行うことができないため、上記、等のリ
ムルステストを使用し生ずるゲル化反応を利用して行う
分析法をマイクロプレ−トリ−ダ−を使用して実施した
場合、測定精度が悪化するという問題点もあった。更
に、従来のマイクロプレ−トリ−ダ−は、光源として、
タングステンランプを使用するため、光配分系が必要で
且つマイクロプレ−トを移動させる機構が必要となるた
め、装置が複雑で高価となるという問題点も有してい
た。

【０００９】この請求項１及び１１に記載の発明は、そ
れぞれ微生物由来成分の測定装置及び測定方法であっ
て、比濁時間分析法と合成基質法の両方に適用でき、そ
の結果、グラム陰性菌、グラム陽性菌及び真菌等の広範
囲の微生物汚染を高い信頼性と容易な測定操作で測定で
きる微生物由来成分の測定装置及び測定方法を提供する
ことを目的とする。また、請求項５に記載の発明は、上
記目的に加えて、試料キュベットのキュベット保持手段
への設置時点を自動的に検出できる測定装置を提供する
ことを目的とする。また、請求項６及び７に記載の発明
は、上記請求項１記載の目的に加えて、測定回路の安定
性を向上させ、測定精度を向上させた測定装置を提供す
ることを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記目的に沿う本発明の
請求項１記載の測定装置は、試料と反応試薬とを混合
し、混合後の反応開始による透過光量の変化を測定して
微生物由来成分を測定する装置に於いて、前記試料と反
応試薬との混合物（被検試料液）を収容する試料キュベ
ットを保持する手段と、該試料キュベットに光線を照射
する青色及び／または紫色の光を発する発光ダイオ−ド
と、照射した光線の透過光量を検知する手段と、測定開
始から被検試料の透過光量が所定の割合変化する迄の時
間を検出する手段と、を具備することを特徴とする。

【００１１】また、本発明の請求項１１記載の測定方法
は、試料と反応試薬の混合物(被検試料液)の調製後所定
時間経過後からの透過光量が所定の割合変化するまでの
時間に基づいて微生物由来成分を測定する方法に於い
て、前記被検試料液を試料キュベットに収容して静置状
態に保持し、該被検試料キュベットに発光ダイオ−ドか
ら青色及び／または紫色の光線を照射し、照射した光線
の透過光量を検知し、前記所定時間経過後から被検試料
液の透過光量が所定の割合変化する迄の時間を検出し、
該時間に基づいて目的物を測定することを特徴とする。

【００１２】要するに本発明は、青色及び／または紫色
の光を発する発光ダイオ−ドを使用して、従来の比濁時
間分析装置（トキシノメ−タ−）を改良し、比濁時間分
析法と合成基質法の両方に適用できるようにしたことを
要旨とするものであるが、従来、比濁時間分析法と合成
基質法の両方に適用できる比濁時間分析法用の測定装置
及び測定方法は全く知られていない。本発明者等は、前
記目的を達成するため鋭意研究の結果、従来の発光ダイ
オ−ドを使用する比濁時間分析法では、発色合成基質試
薬として従来使用されてきた波長４０５ｎｍにおけるｐ
−ニトロアニリン（ｐＮＡ）の発色が検知できなかった
が、青色及び／または紫色の光を発する発光ダイオ−ド
を使用することによって、従来のマイクロプレ−トリ−
ダ−による測定と同等以上の定量測定が実施できること
を見いだし、本発明に到達したものである。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明に於いては、光源として、
青色及び／または紫色の光を発する発光ダイオ−ドを使
用することを特徴とするものであるが、従来この発光ダ
イオ−ドを微生物由来成分の測定に使用することは全く
行われていないし、このような発想も全く知られていな
い。青色及び／または紫色の光を発する発光ダイオ−ド
としては、発光の最大ピ−クの半分の高さと発光スペク
トルとの交点の少なくとも一方が４１５〜４８５ｎｍの
範囲内、特に４１５〜４８５ｎｍの範囲内に発光ピ−ク
を有する発光ダイオ−ドが好適に使用される。

【００１４】本発明の測定開始から被検試料の透過光量
が一定の割合変化する迄の時間を検出する手段として
は、具体的には、例えば、試料キュベットの保持手段へ
の設置時点を検出する手段と、該設置時点の検出に連動
してタイマ−を計時開始する手段と、計時開始したタイ
マ−に連動して任意のタイミングで被検試料の透過光量
をサンプリングして記憶する手段とを具備した手段が挙
げられる。

【００１５】また、測定精度を考慮すると、本発明の測
定装置の試料キュベットを保持する手段は、試料キュベ
ットを静置状態に保持し得るものであるのが望ましく、
更に測定効率を考慮すると、複数個の試料キュベットを
保持し得るものであるのが望ましい。照射した光線の透
過光量を検知する手段や前記試料キュベットの保持手段
への設置時点を検出する手段は、試料キュベット毎に設
置し、タイマ−も複数個設置し且つ計時開始する手段
を、試料キュベット設置時点の検出に連動して、これら
複数のタイマ−のうち作動中でないタイマ−の１つを計
時開始させる機構とするのが良い。更に、計時開始した
タイマ−に連動して任意のタイミングで被検試料の透過
光量をサンプリングして記憶する手段や、測定開始から
透過光量が一定の割合変化する迄の時間を検出する手段
も複数個備えても良い。

【００１６】次に、本発明の装置の望ましい実施例を図
面に基づいて説明する。図１は本発明に係る測定装置の
ブロック図であり、試料と反応試薬との混合物（被検試
料液）を収容する複数の被検試料キュベット１と、複数
の青色及び／又は紫色の光を発する発光ダイオ−ド光源
２と、該光源２から各々対応する複数の試料キュベット
１に光線を照射し複数の透過光量を別々に検知する光電
検出器３と、試料キュベット１を静置状態で恒温状態に
保持するインキュベ−タ４と、光電検出器３で検知され
た複数の透過光量を順次切替えて次々に送信するマルチ
プレクサ５と、送信された信号を増幅する増幅回路６
と、増幅回路６で増幅された信号をデジタル値に変換す
るＡ／Ｄ変換器７と、試料キュベット１が試料保持手段
に設置された時点の検出に連動して動作中でないものの
１つがコンピュ−タ８により計時開始され、反応時間の
計時を行う複数のタイマ−１０と、計時開始したタイマ
−に連動し、透過光測定状態となった光学系に対応して
計時（即ち測定）状態を表示する素子９と、前記デジタ
ル化された透過光量を計時開始したタイマ−に連動して
任意のタイミングでサンプリングしメモリ１１に記憶す
ると共に透過光量の変化のデ−タ処理と装置全体の動作
を制御するコンピュ−タ８とから構成された例を示す。

【００１７】試料キュベット１としては、ガラス製の試
験管を使用するのが良く、ガラス製の試験管を使用する
ことにより、乾熱処理によって微生物汚染を完全に除去
できる。青色及び／または紫色の光を発する発光ダイオ
−ド光源２としては、例えば日亜化学工業（株）から市
販の発光ダイオ−ドＮＬＰＢ５００，５１０，５２０，
或はＮＬＰＢ３００，３１０，３２０、豊田合成（株）
から市販のＥ１Ｌ５１、Ｅ１Ｌ５３、Ｅ１Ｌ５５等の発
光素子を使用することができる。

【００１８】上記実施例で使用した発光ダイオ−ド光源
２は、上記ＮＬＰＢ５２０であり、青色及び紫色の光を
発し、４５０ｎｍに発光ピ−クを有し、発光ピ−クの半
分の高さと発光スペクトルとの交点が４１５ｎｍと４８
５ｎｍのダイオ−ドである。上記実施例に於いては、光
源２を複数設けているが、これは必ずしもこのようでな
くとも良く、単一光源から光フアイバ−で各被検試料キ
ュベット１に照射光を導いても良い。光電検出器３とし
ては、透過光量に対応する電気信号が発生するフオトダ
イオ−ド、光電セル等の受光素子を使用することができ
る。光電検出器も光源と同様に、単一の光電検出器に光
フアイバ−で各被検試料キュベット１の透過光を導いて
も良い。

【００１９】試料キュベット１を静置状態で恒温状態に
保持するインキュベ−タ４としては、キュベット１を保
持する手段をアルミブロックで構成し、それに公知の温
度制御回路及び素子を結合することによって形成すると
良い。このように形成することによって、振動のない均
一な温度分布を持つインキュベ−タ４とすることができ
る。本インキュベ−タ４で光源２と光電検出器３とを併
せて恒温状態に保持すれば、測定回路の安定性は更に向
上する。本装置では、測定中、試料キュベット１を静置
状態に保つことができる。これは、リムルステストを利
用した比濁時間分析法を精度良く行うための必須の条件
である。

【００２０】試料キュベット１のキュベット保持手段へ
の設置時点の検出は、キュベット保持手段に各キュベッ
トを検出するマイクロスイッチや、光センサを設置する
ことで実現できるが、光源２と光電検出器３とを使用し
て、試料キュベット設置に伴う急激な透過光量の変化を
検出することにより行うのが良い。このようにすること
によって、余分な検出部品を使用せずに、設置時点を自
動的に検出することもでき、独立した試料キュベット毎
の反応経過時間が厳密に管理でき、しかも操作は、試料
キュベットを保持ホルダ−に挿入するだけでよいので、
極めて容易となる。

【００２１】試料キュベット設置の検出毎に順次計時を
開始する複数タイマ−１０は、公知の順序回路とカウン
タ−で構成できるが、１つの基本タイマ−とコンピュ−
タ８とメモリ１１によるプログラム動作で置き換えるこ
ともできる。現在どの光学系が測定状態になっているか
を表示する素子９には、ＬＥＤが使用でき、その表示状
態から次にどの光学系が測定状態に入るかを知ることが
できる。

【００２２】コンピュ−タ８は、キュベット設置時点を
検出し、タイマ−１０のうちのどれを起動するかを判断
し制御すると共に、計時動作中のタイマ−１０のカウン
トを観測しながら任意のタイミングで被検試料の透過光
量をサンプリングし、メモリ１１にデ−タとして記憶す
る。また、所定時間後、タイマ−の停止をも制御する。
このように試料キュベット１の設置時点の検出に連動し
て厳密な反応時間の管理がなされているため、測定開始
から被検試料の透過光量が一定の割合だけ変化するまで
の時間をコンピュ−タ８とメモリ１１によるプログラム
操作で容易に検出することができる。尚、「透過光量が
一定の割合だけ変化」したことを確認する方法として
は、例えば、透過光量比Ｒの変化、透過光量比Ｒの対数
値の変化、透過率の変化、吸光度の変化等に基づいて確
認する方法等が挙げられる。更に、メモリ１１に記憶さ
れたデ−タを使用して、反応のエンドポイント法による
測定或はレ−ト法による動的な反応測定を厳密に行うこ
ともできる。

【００２３】上記構成を有する本発明の測定装置の機能
を十分発揮せしめるため、上記実施例に於いては、デー
タの表示装置１２（ＬＥＤ、ＣＲＴデイスプレイ、液晶
デイスプレイ等）、デ−タの表示制御スイッチ１３、デ
−タの印字プリンタ−１４、外部コンピュ−タとの通信
装置１５を設けている。表示装置１２にＣＲＴデイスプ
レイや液晶デイスプレイを用いる場合には、測定状態表
示素子９をこれらデイスプレイで置き替えることもでき
る。また、フロッピ−デイスクドライブ等の補助記憶装
置１７を設置することもできる。

【００２４】図２は、具体的に構成された本発明の測定
装置の斜視図を示すもので、１２は、測定した試料のデ
−タを表示する表示装置、１３は複数の表示デ−タを切
り替える制御スイッチ、１６は被検試料キュベットを保
持する温度制御装置付きの試料キュベットホルダ−、９
は現在どの光学系が測定状態となっているかを表示する
素子である。ここでは１例として８本の被検試料キュベ
ットの同時保持を行う例を示した。試料と反応試薬を混
合した試料キュベットのホルダ−１６への設置が検出さ
れると、これに連動し、動作中でないタイマ−の１つが
起動される。このタイマ−の起動に連動して対応する表
示素子９が点灯し、測定終了まで点灯しつづけるので、
その表示素子が消灯する迄放置すれば、測定とデータ処
理が自動的に終了するようになっているので、測定操作
は極めて容易である。尚、図２中、１４はデ−タ印字プ
リンタ−を、１７は補助記憶装置を示す。

【００２５】本発明の方法により微生物由来成分の濃度
を測定するには、反応試薬と被検液とを混合した後、反
応試薬による生成物の量がある一定値となるまでの時間
を、透過光量が一定の割合変化するまでの時間として検
出し、これを使用して常法（例えば、この時間と微生物
由来成分量との関係を表す検量線を利用する方法等）に
より定量する。また、本発明に於ける、透過光量が一定
の割合変化するまでの時間とは、具体的には、例えば透
過光量比Ｒ、Ｒの対数値、透過率、吸光度等の光学的測
定値の変化量が、所定値に到達するまでの時間である。
該所定値としては、目的の測定を実施し得る値であれば
良く特に限定されないが、例えば光学的測定値として透
過光量比Ｒを利用するものであれば、該所定値は、通常
−３〜−２５％、好ましくは−５〜−２０％の範囲から
適宜設定される。また、透過率、吸光度、Ｒの対数値等
を光学的測定値として利用して本発明の測定を行う場合
も、該所定値はＲの場合に準じて適宜設定すれば良い。

【００２６】反応試薬としては、微生物由来成分と特異
的に反応する公知の反応試薬を使用すれば良い。例え
ば、グラム陰性菌の測定には、エンドトキシンと反応す
る公知の反応試薬、ペプチドグリカンと反応する公知の
反応試薬等が使用され、グラム陽性菌には、ペプチドグ
リカンと反応する公知の反応試薬が使用され、真菌には
β−グルカンと反応する公知の反応試薬が使用される。
これら反応試薬に含まれる主成分は、カブトガニ血球や
カイコ等の昆虫の体液中に含まれている。

【００２７】カブトガニ血球成分には、エンドトキシン
と反応する成分とβ−グルカンと反応する成分が含まれ
ているので、目的に応じてこれをそのまま使用したり、
エンドトキシンのみ若しくはβ−グルカンのみと反応す
る成分だけを利用する。カイコ体液成分（ＳＬＰ）に
は、β−グルカンと反応する成分とペプチドグリカンと
反応する成分が含まれているので、同様に目的に応じて
このまま若しくは適宜成分を分離して使用する。比濁時
間分析法に於いては、上記反応試薬を使用するが、合成
基質法に於いては、上記反応試薬に更に発色合成基質を
添加した試薬を使用する。これら反応試薬は、公知の方
法に基づいて自製したものでも、市販品を適宜使用して
調製したものであっても良い。

【００２８】次に、上記本発明の装置を使用して微生物
由来成分濃度を測定する例を示す。実施例１：比濁時間分析法エンドトキシン測定用ガラス試験管に、エンドトキシン
水溶液（０〜１００ＥＵ／ミリリットル）１００マイク
ロリットルとＬＡＬ（カブトガニ血球成分）溶液（リム
ルスＥＳ−II、和光純薬工業（株）製）１００マイクロ
リットルを加えて撹拌混合し、本発明の装置を使用して
透過光量の変化を測定した。図３に、〔Ｉｔ（時間ｔに
於ける試料液からの透過光量）／Ｉｏ（反応の進行によ
り減少を開始する以前の試料液からの透過光量）〕×１
００（％）が９５．０％となるまでに要する時間（ゲル
化時間）とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。図
３より明らかなように、非常に広い範囲で良好な検量関
係が得られた。

【００２９】エンドトキシン測定用ガラス試験管に、エ
ンドトキシン水溶液（０．０５ＥＵ／ミリリットル）１
００マイクロリットルとＬＡＬ（カブトガニ血球成分）
溶液（リムルスＥＳ−Ｊテストワコ−、和光純薬工業
（株）製）１００マイクロリットルを加えて撹拌混合
し、本発明の装置を使用して再現性を測定した。表１
に、エンドトキシン濃度０．０５ＥＵ／ミリリットルの
場合での〔Ｉｔ／Ｉｏ〕×１００（％）が９５．０％と
なるまでに要する時間（ゲル化時間）の再現性を示す。
尚、比較のため、光源として従来の赤色ＬＥＤを使用し
た場合も同様に測定し、結果を表１に併記した。

【００３０】

【表１】

【００３１】表１より明らかなように、本発明の装置で
得られる再現性は、従来の装置と同程度であり、また、
本発明の装置では従来の装置よりもゲル化時間が短くな
り、検出に要する時間を短縮することができる利点が得
られる。

【００３２】実施例２：合成基質法エンドトキシン測定用ガラス試験管に、エンドトキシン
水溶液（０〜１００ＥＵ／ミリリットル）１００マイク
ロリットルと合成基質法試液（トキシカラ−^TMシステム
ＬＳ−２００、生化学工業（株）製）１００マイクロリ
ットルを加えて撹拌混合し、本発明の装置を使用して透
過光量の変化を測定した。図４に、〔Ｉｔ／Ｉｏ〕×１
００（％）が９５．０％となるまでに要する時間（活性
化時間）とエンドトキシン濃度との検量関係を示す。図
４より明らかなように、非常に広い範囲で良好な検量関
係が得られた。

【００３３】実施例３：β−グルカン測定（合成基質
法）エンドトキシン測定用ガラス試験管に、カ−ドラン（β
−グルカン）水溶液（０〜１０００ｐｇ／ミリリット
ル）１００マイクロリットルとビ−ジ−スタ−Ａキット
発色試液（マルハ（株）製）１００マイクロリットルを
加えて撹拌混合し、本発明の装置を使用して透過光量の
変化を測定した。図５に、〔Ｉｔ／Ｉｏ〕×１００
（％）が９０．０％となるまでに要する時間（活性化時
間）とカ−ドラン濃度との検量関係を示す。図５より明
らかなように、非常に広い範囲で良好な検量関係が得ら
れた。

【００３４】実施例４：ＳＬＰ試薬測定エンドトキシン測定用ガラス試験管に、カ−ドラン水溶
液（０〜１０００ｐｇ／ミリリットル）１００マイクロ
リットルとＳＬＰ試液（和光純薬工業（株）製）１００
マイクロリットルを加えて撹拌混合し、本発明の装置を
使用して透過光量の変化を測定した。図６に、〔Ｉｔ／
Ｉｏ〕×１００（％）が９５．０％となるまでに要する
時間（活性化時間）とカ−ドラン濃度との検量関係を示
す。図６より明らかなように、非常に広い範囲で良好な
検量関係が得られた。

【００３５】

【発明の効果】従来、微生物汚染の有無を判別するため
に、微生物由来成分を測定するには、マイクロプレ−ト
リ−ダ−を使用し、不十分な反応時間管理と不均一な反
応温度制御のもとに、器材汚染の危険性など信頼性の低
い状態で実施せざるを得なかった測定が、本発明の請求
項１及び１１に記載の発明によれば、比濁時間分析装置
を改良し、従来の比濁時間分析装置では測定し得なかっ
た合成基質法の測定もできるので、グラム陰性細菌、真
菌、グラム陽性細菌等の微生物汚染の有無を判別するた
めの測定を容易な操作で、信頼性高くしかも効率的に実
施できるというこの種従来の微生物由来成分測定装置及
び方法には全く見られない画期的な効果を奏する。

【００３６】また、請求項５に記載の発明は、上記請求
項１記載の効果に加えて、余分な検出部品を使用せず
に、試料キュベットの設置時点を自動的に検出でき、独
立した試料キュベット毎の反応時間が厳密に管理でき、
しかも操作は容易となる利点が得られる。また、請求項
６及び７に記載の発明は、上記請求項１記載の効果に加
えて、測定回路の安定性が向上し、測定精度が著しく向
上する。

【００３７】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の測定装置のブロック図である。

【図２】本発明の測定装置の斜視図である。

【図３】比濁時間分析法によるゲル化時間とエンドトキ
シン濃度との検量関係図である。

【図４】合成基質法による活性化時間とエンドトキシン
濃度との検量関係図である。

【図５】β−グルカン測定の活性化時間とカ−ドラン
（β−グルカン）濃度との検量関係図である。

【図６】ＳＬＰ試薬を使用した活性化時間とカ−ドラン
濃度との検量関係図である。

【符号の説明】

１試料キュベット２青色及び／又は紫色の光を発す
る発光ダイオ−ド３光電検出器４インキュベ−タ５マルチプレクサ７Ａ／Ｄ変換器８コンピュ−タ９測定状態表示素子１０タイマ− １１メモリ１６試料キュベットホルダ−

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者辻野隆三大阪府大阪市平野区喜連東１−２−28

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】試料と反応試薬とを混合し、混合後の反応
開始による透過光量の変化を測定して微生物由来成分を
測定する装置に於いて、前記試料と反応試薬との混合物（被検試料液）を収容す
る試料キュベットを保持する手段と、該試料キュベット
に光線を照射する青色及び／または紫色の光を発する発
光ダイオ−ドと、照射した光線の透過光量を検知する手
段と、測定開始から被検試料の透過光量が所定の割合変
化する迄の時間を検出する手段と、を具備することを特
徴とする微生物由来成分の測定装置。
【請求項２】前記測定開始から被検試料の透過光量が所
定の割合変化する迄の時間を検出する手段が、前記試料
キュベットの前記保持手段への設置時点を検出する手段
と、該設置時点の検出に連動してタイマ−を計時開始す
る手段と、該計時開始したタイマ−に連動して任意のタ
イミングで被検試料の透過光量をサンプリングして記憶
する手段とを具備する請求項１に記載の測定装置。
【請求項３】前記試料キュベットを保持する手段が、複
数個の試料キュベットを静置状態に保持し得るものであ
る請求項１に記載の測定装置。
【請求項４】前記青色及び／または紫色の光を発する発
光ダイオ−ドが、発光ピ−クの半分の高さと発光スペク
トルとの交点の少なくとも一方は、波長４１５ｎｍ〜４
８５ｎｍの範囲内である請求項１に記載の測定装置。
【請求項５】前記設置時点の検出手段が、前記発光ダイ
オ−ドと前記透過光量検知手段とを使用し、前記試料キ
ュベット設置に伴う透過光量の急激な変化を検出する請
求項２に記載の測定装置。
【請求項６】前記試料キュベットを恒温に保持する手段
を具備する請求項１に記載の測定装置。
【請求項７】前記発光ダイオ−ド及び／または前記透過
光量検知手段の温度を恒温に保持する手段を具備する請
求項１または６に記載の測定装置。
【請求項８】前記反応試薬が、カブトガニ血球成分を含
んでなるものである請求項１に記載の測定装置。
【請求項９】前記反応試薬が、カイコ体液成分を含んで
なるものである請求項１に記載の測定装置。
【請求項１０】前記反応試薬が、カブトガニ血球成分又
はカイコ体液成分と、発色合成基質である請求項１に記
載の測定装置。
【請求項１１】試料と反応試薬の混合物(被検試料液)の
調製後所定時間経過後からの透過光量が所定の割合変化
するまでの時間に基づいて微生物由来成分を測定する方
法に於いて、前記被検試料液を試料キュベットに収容し
て静置状態に保持し、該被検試料キュベットに発光ダイ
オ−ドから青色及び／または紫色の光線を照射し、照射
した光線の透過光量を検知し、前記所定時間経過後から
被検試料液の透過光量が所定の割合変化する迄の時間を
検出し、該時間に基づいて目的物を測定することを特徴
とする微生物由来成分の測定方法。
【請求項１２】前記透過光量の変化が、前記被検試料液
に於いて起こるゲル化反応、メラニン生成反応または色
素遊離反応に対応して生じる請求項１１に記載の測定方
法。