JPH08503370A

JPH08503370A - 酵素反応の強化

Info

Publication number: JPH08503370A
Application number: JP6512667A
Authority: JP
Inventors: シュナイダー，パレ; スパーレコンラド，ラース; エブドルップ，セーレン; イデ，ビルギッテ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1992-12-01
Filing date: 1993-12-01
Publication date: 1996-04-16
Also published as: BR9307574A; US5700769A; EP0672125A1; WO1994012619A1; KR950704480A; FI952646A0; DK144392D0; CA2150564A1; FI952646A

Abstract

(57)【要約】本発明は、酵素の活性化に関する。より特に、本発明は、ペルオキシダーゼ強化剤に関する。本発明は、ペルオキシダーゼ酵素及びペルオキシダーゼ強化剤の存在中過酸化水素の源により基質を酸化する方法にも関する。より特に、本発明は、溶液中の染料の漂白方法、その織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害する方法、リグニン含有増量の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白の方法、パルプ製造からの廃水の処理方法、並びにリグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び/又は修飾の方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】酵素反応の強化技術分野本発明は、酵素の活性化に関する。より特に、本発明は、ペルオキシダーゼ強化剤に関する。本発明は、ペルオキシダーゼ酵素及びペルオキシダーゼ強化剤の存在中過酸化水素の源により基質を酸化する方法にも関する。より特に、本発明は、溶液中の染料の漂白方法、その織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害する方法、リグニン含有増量の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白の方法、パルプ製造からの廃水の処理方法、並びにリグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び／又は修飾の方法に関する。背景技術ペルオキシダーゼ（E.C．1.11.1.7）は、過酸化水素による基質（電子又は水素供与体）の酸化を触媒する酵素である。このような酵素は、微生物、植物及び動物起源から公知であり、例えば、コプリナス・シネレウス（Corinus cinereus ）からのペルオキシダーゼがある（例えば、EP 179,486参照）。それらは、典型的にはヘモタンパク質であり、すなわち、それらは、補欠分子団としてヘムを含む。過酸化水素又は過酸化水素前駆体と一緒のペルオキシダーゼの使用は、紙製造のためのパルプの漂白において、パルプ製造からの廃水の処理において、洗濯洗剤中での改良された漂白のために、洗濯の間の染料転移の阻害のために、並びにリグニン修飾のために、例えば、パーティクルボードの製造において、提案されてきた。 Boehringer Mannheimにより供給される化合物2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）、ABTSは、発色性基質、且つ一般的なペルオキシダーゼ及びフェノール・オキシダーゼ検定剤である。これらの酵素は、それぞれ、過酸化水素及び２酸素（dioxygen）によるABTSの酸化を触媒し、緑っぽい青色を作り出し、この過程は光度計によりモニターされることができる。 ABTSは、ラッカーゼ酵素（ポリフェノール・オキシダーゼ、EC 1.10.3.2）により酸化されるとき安定なラジカル・カチオンを形成することが発見され、そして非フェノール性リグニン・モデル化合物の酸化のための酸化還元仲介物質として作用することか提案されている［Bourbonnais R，Paice M G；FEBS Lett（199 0）267 99-102］。 ABTSの存在中のラッカーゼ酵素によるクラフト・パルプの脱メチル化及び脱リグニン化についての研究は、ラッカーゼによる部分的脱メチル化の程度がABTSの存在中で増加されたことを示した［Bourbonnais R．and Paice M.G;Appl．Micro biol．Biotechnol．（1992）36 823-827］。特定の酸化性基質、例えは、金属イオン及びフェノール化合物、例えば、7-ヒドロキシクマリン（7HCm）、バニリン(VAN）、及びp-ヒドロキシベンゼンスルホネート（pHBS）が、漂白反応を強化することができる加速剤又は強化剤として記載されている（例えば、WO 92/18683、WO 92/18687、及びKato M and Shimizu S ，Plant Cell Physiol．1985 26（7），pp．1291-1301（特に表１参照）、又はS aunders B C，et al. ，Peroxidase,London，1964，p．141 ffを参照こと。）。この加速効果は、短寿命ラジカルの形成又は、その着色物質の漂白又は他の修飾に参加する上記基質の他の酸化状態に帰すると考えられている。発明の要約本発明の目的は、ペルオキシダーゼ酵素の活性を強化するための剤を提供すること、そしてペルオキシダーゼ酵素の活性を強化する方法を提供することである。今般、驚くべきことに、ペルオキシダーゼの活性が、電子受容体として作用することができる安定した酸化生成物を生成することができる化学的化合物の存在中で有意に増加することが発見された。従って、本発明の第一態様において、本発明は、ペルオキシダーゼ酵素の活性を強化するための剤であって、そのペルオキシダーゼ酵素のための基質であり、そして250μMまでの濃度において存在するとき安定した電子受容体を生成することができる剤を提供する。本発明の第二態様においては、本発明は、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素により基質を酸化する方法を提供する。特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害する方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりその洗浄液を処理することを含んで成る方法を提供する。特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤添加物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤を含んで成る洗剤添加物を提供する。さらに特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤組成物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤を含んで成る洗剤組成物を提供する。他の態様においては、本発明は、リグニン含有材料の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白の方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりそのリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る方法を提供する。さらなる態様においては、本発明は、リグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び／又は修飾方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりそのリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る方法を提供する。そしてさらなる態様においては、本発明は、廃水、例えば、化学又は医薬産業からの廃水の処理方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりその廃水を処理することを含んで成る方法を提供する。図面の簡単な説明本発明をさらに添付図面を参照して説明する、ここで：図１は、pH8.5における電子受容体半減期（秒）の関数としての初期DBl漂白（ -ΔmAbs/分）を示す。図２は、pH10.5における電子受容体半減期（秒）の関数としての初期DBl漂白（-ΔmAbs/分）を示す。図３は、コプリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼによるメチル・オレンジの漂白に適用された本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤（ABTS）とpHBSとの比較を示し（１：pHBS、20μM H₂O₂；２：pHBS、200μM H₂O₂ ；３：ABTS、20μM H₂O₂；４：ABTS、200μM H₂O₂）；図４は、本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤（ABTS）の変動濃度の存在中のコプリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼによるメチル・オレンジの加速された漂白を示し（１：０μM ABTS；２：１μM ABTS；３：５ μM ABTS，及び４：10μM ABTS）；図５は、pH 10.5におけるダイレクト・ブルー１（DB1）の漂白の間の初期漂白速度の比較を示し（□ABTS、1nmペルオキシダーゼ；◆VAN、100nMペルオキシダーゼ；■7HCm、100nmペルオキシダーゼ；▲pHBS、100nMペルオキシダーゼ）；そして図６は、pH8.8（及びpH10.5）におけるDBIの漂白の間の初期漂白速度の比較を示す（□ABTS pH8.8；◆VAN pH8.8；■7HCm pH8.8；◇ABTS pH 10.5；及び▲pHB S pH 8.8）。発明の詳細な説明ペルオキシダーゼ強化剤本発明は、酸化性基質を酸化する方法であって、その基質を、ペルオキシダーゼ又は（以下に定義する）過酸化物形成作用性化合物、過酸化水素の源並びに強化剤であってそのペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物によりその強化剤の酸化の（以下に定義する）回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤と、接触させることを含んで成る方法に関する。半減期は、様々な方法により、例えば、実施例１、６、７及び８中に記載されているように、又は本分野において公知の他の方法により測定されることができる。本発明の文脈において、回転数は、ペルオキシダーゼの初期濃度により除したＶ_max（強化剤の最大酵素的酸化速度）として定義される。本発明の文脈において、安定した電子受容体は、強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、１m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ受容体として定義される。より好ましい態様においては、安定した電子受容体は、強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、10m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ受容体である。最も好ましい態様においては、安定した電子受容体は、強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、100m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ受容体である。最も好ましい態様においては、本発明に係る強化剤は、以下の群：2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）、N-メチルフェノチアジン、3,3',5,5'-テトラメチルベンジジンから選ばれる芳香族有機化合物である。本発明に係る方法において使用される酵素は、酵素分類EC 1.11.1.7に含まれるいずれかのペルオキシダーゼ酵素、ペルオキシダーゼ活性を示すそれから誘導されるいずれかの断片、又はそれらの合成的又は半合成的誘導体であることができる（例えば、ポルフィリン環系又はミクロペルオキシダーゼ、例えば、米国特許第4,077,768号、欧州特許出願第537,381号、国際特許出願WO 91/05858及びWO 92/16634参照）。微生物、植物及び動物起源からのこのような酵素が、公知である。好ましくは、本発明に係る方法において使用されるペルオキシダーゼは、植物（例えば、ホースラディッシュ又は大豆ペルオキシダーゼ）又は微生物、例えば、菌又はバクテリアにより生産されることができる。幾つかの好ましい菌は、下門不完全菌類（Deuteromycotina）、ヒホミセス綱（Hyphomycetes ）に属する株、例えば、フザリウム（Fusarium）、フミコーラ（Humicola）、トリコデルマ（Tricoderma）、ミロセシウム（Myrothecium）、ベルティシラム（V erticillum）、アルスロミセス（Arthromyces）、カルダリオミセス（Caldariom yces）、ウロクラディウム（Ulocladium）、エンベリシア（Embellisia）、クラドスポリウム（Cladosporium）又はドレシュレラ（Dreschlera）、特にフザリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）（DSM 2672）、フミコーラ・インソレンス（Humicola insolens）、トリコデルマ・レシイ（trichoderma resii）、ミロセシウム・ベルカナ（Myrothecium verrucana）（IFO 6113）、ベルティシラム・アルボアトラム（Verticillum alboatrum）、ベルティシラム・ダーリー（Verticillum dahlie）、アルスロミセス・ラモサス（Arthromyces ramosus）（FERM P-7754）、カルダリオミセス・フマゴ（Caldariomyces fumago）、ウロクラディウム・チャータラム（Ulocladium chartarum）、エンベリシア・アリ（ Embellisia alli）又はドレシュレラ・ハロデス（Dreshlera halodes）を含む。他の好ましい菌は、下門担子菌類（Basidiomycotina）、担子菌綱（Basidiomy cetes）に属する株、例えば、コプリナス（Coprinus）、ファネロカエテ（Phane rochaete）、コリオラス（Coriolus）又はトラメテス（Trametes）、特にコブリナス・シネレウス・ｆ．ミクロスポラス（Coprinus cinereus f．microsporus）、コプリナス・マクロリザス（Coprinus macrorhizus）、ファネロカエテ・クリソスポリウム（Phanerochaete chrysosporium）（例えば、NA-12）又は（従来ポリポラス（Polyporus）といわれていた）トラメテス（Trametes）、例えば、トラメテス（Trametes versicolor）（例えば、PR4 28-A）を含む。さらに好ましい菌は、下門接合菌類（Zygomycotina）、ミコラセアエ（Mycora ceae）綱に属する株、例えば、Rhizopus（クモノスカビ）又はMucor（ケカビ）、特にムコー・ヒエマリス（Mucor hiemalis）を含む。幾つかの好ましいバクテリアは、Actimomycetales目の株、例えば、ストレプトミセス・スフェロイデス（Streptomyces spheroides）（ATCC 23965）、ストレプトミセス・サーモビオラセウス（Streptomyces thermoviolaceus）（IFO 12 382）又はストレプトヴァーティシラム・ヴァーティシリウムssp．ヴァーティシリウム（Streptoverticillum verticillium ssp．verticillium）を含む。他の好ましいバクテリアは、バチルス・プミラス（Bacillus pumilus）（ATCC 12905）、バチルス・ステアロサーモフィラス（Bacillus stearothermophillus ）、ロードバクター・スフェアロイデス（Rhodobacter sphaeroides）、ロードモナス・パルストリ（Rhodomonas palstri）、ストレプトコッカス・ラクティス（Streptococcus lactis）、シュードモナス・プロチニア（Pseudomonas purr ocinia）（ATCC 15958）又はシュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens ）（NRRL B-11）を含む。さらに好ましいバクテリアは、ミクソコッカス（Myxococcus）に属する株、例えば、ミクソコッカス・ビレッセンス（M．virescens）を含む。有用な特定のペルオキシダーゼの他の潜在的な源は、Saunders B C，前記，41 -43頁中に列記されている。さらに本ペルオキシダーゼは、上記ペルオキシダーゼをエンコードしているDN A配列並びにそのペルオキシダーゼをエンコードしているDNA配列の発現を可能にする機能をエンコードしているDNA配列を担持している組換え体DNAベクターにより形質転換された宿主細胞を、そのペルオキシダーゼの発現を許容する条件下で培養し、そしてその培養物からそのペルオキシダーゼを回収することを含んで成る方法により生産可能であるものである。特に、組換えにより生産されたペルオキシダーゼは、コプリナス（Coprinus）種、特にWO 92/16634に記載されたコプリナス・マクロリザス（C．macrorhizus ）又はコプリナス・シネレウス（C．cinereus）から得られるペルオキシダーゼである。本発明の文脈において、過酸化物形成作用性化合物は、チトクローム、ヘモグロビン又はペルオキシダーゼ酵素から誘導されたペルオキシダーゼ活性断片、並びにそれらの合成的又は半合成的誘導体、例えば、鉄ポルフィン、鉄ポルフィリン、及び鉄フタロシアニン並びにそれらの誘導体を含んで成る。工業的用途ペルオキシダーゼ酵素の存在中過酸化水素源による基質の酸化の本発明に係る方法は、様々な工業的用途が在る。好ましい態様においては、本発明に係る方法は、溶液中での染料の漂白のための用途が在る。他の態様においては、本発明に係る方法は、染料転移阻害のための、例えば、染色された繊維（例えば、WO 92/18687参照）又は洗濯（例えば、WO 91/05839参照）のための用途が在る。従って、特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害する方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりその洗浄液を処理することを含んで成る方法を提供する。その繊維染料は、合成染料、例えば、アゾ染料、又は天然若しくは天然と同一の染料であることができる。第三の態様においては、紙製造のためのパルプの漂白における用途が在る。紙パルプの漂白における過酸化水素又は過酸化水素前駆体と一緒のペルオキシダーゼの使用は、例えば、SE 88/0673及びUS 4,690,895中に記載されている。従って、本発明は、リグニン含有材料の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白のための方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりそのリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る方法を提供する。第四の態様においては、本発明に係る方法は、リグニン修飾、例えば、パーティクルボード製造における用途が在る。木複合材、例えば、繊維ボード及びパーティクルボードの製造のためのバインダーは、ペルオキシダーゼ処理されたリグニンから作られることができる（US 4,432,921参照）。従って、本発明は、リグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び／又は修飾方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりそのリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る方法を提供する。第五の態様においては、本発明は、廃水、例えば、化学又は医薬産業からの、染料製造からの、繊維産業からの、又はパルプ製造からの廃水の処理において用途が在る（例えば、US 4,623,465、又はJP-A 2-31887参照）。より特定の態様においては、本発明は、染料製造からの、繊維産業からの、又はパルプ製造からの廃水の処理方法であって、過酸化水素の源の存在中、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりその廃水を処理することを含んで成る方法を提供する。洗剤組成物本発明に従って、本ペルオキシーダーゼ強化剤は、洗剤組成物の成分として添加されることができる。特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤添加物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤を含んで成る洗剤添加物を提供する。この洗剤添加物は、さらに、洗剤中で慣用に使用される１以上の他の酵素、例えば、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、又はセルラーゼを含んで成ることができる。好ましくは、この洗剤添加物は、粒状物、好ましくは非発塵性粒状物、液体、特に安定化液体、スラリーの形態で、又は保護された形態で、提供される。他の特定の態様においては、本発明は、織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤組成物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤を含んで成る洗剤組成物を提供する。本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤は、ペルオキシダーゼ酵素、過酸化水素の源、及び本発明に係るペルオキシダーゼ強化剤を含んで成る、ペルオキシダーゼ系の一部として、その洗剤中に含まれることができる。このペルオキシダーゼ系は、非発塵性粒状物、液体、特に安定化液体の形態又は保護された形態においてその洗剤組成物中に含まれることができる。非発塵性粒状物は、例えば、US 4,106,991及び4,661,452（両方Novo Industri A/Sへ付与されたもの）中に開示されているように、製造されることができ、そして場合により、本分野において公知の方法によりコートされることができる。液体酵素調製物は、例えば、確立された方法に従って、ポリオール、例えば、プロピレン・グリコール、糖若しくは糖アルコール、乳酸又は硼酸の添加により安定化されることができる。他の酵素安定化剤も本分野においてよく知られている。このペルオキシダーゼ系の保護形態は、EP 238,216中に開示された方法に従って調製されることができる。本発明に係る洗剤組成物は、いずれかの便利な形態で、例えば、粉末、粒状物又は液体として存在することができる。液体洗剤は、水性、典型的には70%までの水及び０-20%の有機溶媒であることができる。この洗剤組成物は、１以上の界面活性剤であってそのそれぞれがアニオン性、非イオン性、カチオン性、両性であることができるものを含んで成る。この洗剤は、普通には、５-30%のアニオン性界面活性剤、例えば、直鎖状アルキルベンゼンスルホネート（LAS）、アルファーオレフィンスルホネート（AOS）、硫酸アルキル（AS）、アルコール・エトキシスルフェート（AES）又は石鹸を含むであろう。それは、３-20%非イオン性界面活性剤、例えば、ノニル・フェノール・エトキシレート又はアルコール・エトキシレートを含むこともできる。この洗剤組成物は、さらに、１以上の他の酵素、例えば、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ又はプロテアーゼを含んで成ることができる。この洗剤は、１-40%の洗剤ビルダー、例えば、ゼオライト、ホスフェート、ホスホネート、クエン酸塩、ニトリロトリ酢酸（NTA）、エチレンジアミンテトラ酢酸（EDTA）又はジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTPA）、アルケニル琥珀酸無水物、又はシリケートを含むことができ、又はそれは、ビルドされない（すなわち、本質的に洗剤ビルダーを含まない）ことができる。それは、他の慣用の洗剤成分、例えば、織物コンディショナー、泡ブースター、抗-腐食剤、土壌懸濁剤、金属イオン封鎖剤、抗-土壌再デポジション剤、酵素のための安定化剤、泡抑制剤、染料、殺バクテリア剤、光学的増白剤又は芳香剤を含むことができる。（水性洗剤溶液中で測定される）pHは、普通には中性又はアルカリ性、例えば、７-11であろう。本発明の範囲内の洗剤組成物の特定の形態は：ａ）ホスフェート・ビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、シリケート、使用における所望のpHに調整するためのアルカリ、及び中性無機塩を含む洗剤粉末として配合された洗剤組成物、ｂ）ゼオライト・ビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル又は等価なポリマー、シリケート、使用における所望のpHに調整するためのアルカリ、及び中性無機塩を含む洗剤粉末として配合された洗剤組成物、ｃ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、有機酸、アルカリを含んで成る水性洗剤液体であって７〜11の間の値に調整された使用におけるpHをもつものとして配合された洗剤組成物、ｄ）本質的に直鎖状アルコキシル化第一アルコール、ホスフェート・ビルダー、アルカリから成る液体非イオン性界面活性剤を含んで成る非水性洗剤液体であって７〜11の間の値に調整された使用におけるpHをもつものとして配合された洗剤組成物、ｅ）アニオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤、ホスフェート・ビルダー、シリケートを含み、並びにほとんど又は実質的に全く中性無機塩を含まない、少なくとも600 g/lのバルク密度をもつ粒状物の形態における洗剤粉末として配合された洗剤組成物、ｆ）アニオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤、ゼオライト・ビルダー、シリケートを含み、並びにほとんど又は実質的に全く中性無機塩を含まない、少なくとも600 g/lのバルク密度をもつ粒状物の形態における洗剤粉末として配合された洗剤組成物、ｇ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル・ポリマー、脂肪酸石鹸、カーボネート、スルフェート、粘度粒子、及びシリケートを含む洗剤粉末として配合された洗剤組成物、ｈ）５-65重量％の界面活性剤、０-50重量％のビルダー及び０-30重量％の電解質を含んで成る液体コンパクト洗剤、ｉ）直鎖状アルキルベンゼンスルホネート、獣脂アルキル・スルフェート、Ｃ_14-15 アルキル・スルフェート、Ｃ_14-15アルコール７回エトキシ化、獣脂アルコール11回エトキシ化、分散剤、シリコーン液、クエン酸３ナトリウム、クエン酸、ゼオライト、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ジエチレントリアミンペンタキス（メチレンホスホン酸）、セルラーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、ナトリウム・シリケート、硫酸ナトリウム、PVP、過硼酸塩及び漂白活性剤を含んで成るコンパクト粒状洗剤、ｊ）Ｃ_11-12アルキルベンゼンスルホネート、硫酸ナトリウム、ゼオライトＡ、ニトリロトリ酢酸ナトリウム、セルラーゼ、PVP、テトラ酢酸エチレンジアミン、硼酸塩及び過硼酸塩を含んで成る粒状洗剤、ｋ）Ｃ_12-14アルケニル琥珀酸、クエン酸、ナトリウムＣ_12-15アルキル・スルフェート、Ｃ_12-15アルコール２回エトキシ化の硫酸ナトリウム塩、Ｃ_12-15アルコール2回エトキシ化、Ｃ_12-15アルコール７回エトキシ化、Ｃ_12-15アルコール５回エトキシ化、ジエチレントリアミンペンタキス（メチレンホスホン酸）、オレイン酸、エタノール、プロパンジオール、プロテアーゼ、セルラーゼ、PVP、石鹸泡抑制剤、水酸化ナトリウム、過硼酸塩及び漂白活性剤を含んで成る液体洗剤、を含む。以下の実施例は、本発明をさらに説明し、そしてそれは、いかなる方法によるかを問わず請求されるものとして本発明の範囲を限定するものと意図されない。実施例１ダイレクト・ブルー１の漂白及び酸化された増加剤の半減期コピリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼ（CiP）をWO 92/16634に従って得て、そして以下の方法によりSDS-PAGE上で単一バンドに精製した：粗ペルオキシダーゼ調製物を25w/w%硫酸アンモニウムにより沈殿させ、そして遠心分離後、その沈殿物を10 mMホスフェートpH 7（バッファーＡ）中に溶解し、そして同一バッファーに対して透析した。このサンプルをバッファーＡにより平衡化したHighLoad Q-Sepharoseカラム（Pharmacia，Sweden）上に適用し、バッファーにより洗浄し、そして同一バッファー中0.5 MまでのNaClの線形グラジエントにより溶出した。ペルオキシダーゼ活性を含む主画分を集め、（10kDの膜カット-オフによる）限外濾過により濃縮してバッファーＡに対して透析した。 CiPの濃度を、109mM ^-1cm^-1のモル吸収を使用してＡ₄₀₄により測定した。化学物質を、Sigma-Aldrich、Janssen Chimica、Kodak、Tokyo Kasai Organic Chemicals、Daiichi Pure Chemicals co．又はBoehringer Mannheimから得た。本発明に従う強化剤の使用するCiPによるダイレクト・ブルー１（DB1）の初期漂白を、標準的な条件下で測定した酸化された強化剤（電子受容体）の半減期と比較した。漂白のための条件は：最終濃度 200 μl 50 mM Britton-Robinson^*バッファーそれぞれpH 8.5と10.5 10 mM 200 μl DBI-3.0吸収単位（610 nm） 0.6（Ａ_610nm） 200 μl 10 nM CiP（pH 8.5）又は 5 nM CiP（pH 10）２又は１nM 200 μl 50μM 強化剤 10μM 200 μl 100μM H₂O₂ 20μM ＊H₃PO₄、CH₃CO₂H、H₃BO₃、全３成分：50 mM であった。試薬を30℃においてサーモスタット・キュベット内で混合し、そして漂白を過酸化水素の添加により開始した。漂白を、DB1の吸収ピークである610nmにおいて分光光度計により検出した。５秒後、漂白を少なくとも１分間続け、そしてその初期漂白速度（吸収曲線の初期勾配から測定される、１分間当たりのミリ-吸収単位における減少、-ΔmAbs/分）を測定した。酸化された強化剤の半減期を8mMの濃度において存在する強化剤のサイクリック・ボルタモグラム（cyclic voltammogram）から測定した。このサイクリック・ボルタモグラムは、作用電極白金ディスク対電極白金ワイヤー参照電極塩化水銀（Ｉ）（Calomel）から成る標準的な３-電極系内で得られる。酸化された強化剤の半減期（t_1/2）をサイクリックボルタモグラムにおけるスキャン速度（υ）、ピーク位置及びスイッチング電位から計算した。ここで、還元ピークのピーク電流は酸化ピークのピーク電流の値の半分をもっていた。 ΔＥは、還元ピークのピーク位置とスイッチング電位との差である。スイッチング電位は、電位において、可逆的ボルタモグラムにおける酸化ピークのピーク位置よりも0.2 V高く固定された。可逆ボルタモグラムは、酸化ピークの位置と還元ピークの位置との間の差が0.059 Vに達するところのスキャン速度において得られる。図１及び２中に示す結果から、酸化された強化剤がより長い半減期をもってより良好な漂白を示すことが分かる。実施例２メチル・オレンジの漂白 2,2'-アジノ-ビス（３-メチルベンゾチアゾリン-６-スルフホネート）（ABTS 、Boehringer Mannheimにより供給されたもの）又はパラ-ヒドロキシベンゼン・スルホネート（pHBS、Sigmaにより供給されたもの）の存在中、WO 92/16634に従って得られた組換えにより生産されたコプリナス・シネレウス（Coprinus ciner eus）ペルオキシダーゼ（rCiP）、及び過酸化水素により触媒されるメチル・オレンジ（Merck）の加速された漂白を図２中に示す。以下の条件を使用した： 10 nM rCiP 25 μM メチル・オレンジ（Methyl Orange） 50 μM ABTS又はパラ-ヒドロキシベンゼン・スルホネート 20 及び200 μM 過酸化水素 50 mM Britton & Robinsonバッファー、pH 8.8 30 ℃サーモスタット。試薬を１cm キュベット内で混合し、そして漂白を過酸化水素の添加により開始した。漂白をこの染料の吸収ピークである465nmにおいて分光光度計により検出した。漂白を10分間のスパンにわたる時間に関して追跡した。実施例２メチル・オレンジの漂白 2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルフホネート）（ABTS 、Boehringer Mannheimにより供給されたもの）又はパラ-ヒドロキシベンゼン・スルホネート（pHBS、Sigmaにより供給されたもの）の存在中、実施例１に従って得られた組換えにより生産されたコプリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼ（rCiP）、及び過酸化水素により触媒されるメチル・オレンジ（Merck）の加速された漂白を図２中に示す。以下の条件を使用した： 10 nM rCiP 25 μM メチル・オレンジ（Methyl Orange） 50 μM ABTS又はパラ-ヒドロキシベンゼン・スルホネート 20 及び200 μM 過酸化水素 50 mM Britton & Robinsonバッファー、pH 8.8 30 ℃サーモスタット。試薬を１cm キュベット内で混合し、そしてその漂白を過酸化水素の添加により開始した。漂白を上記染料の吸収ピークである465nmにおいて分光光度計により検出した。漂白を10分間のスパンにわたる時間に関して続けた。実施例３メチル・オレンジの漂白 2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）（ABTS、B oehringer Mannheimにより供給されたもの）の変化濃度の存在中、実施例１に従って得られた組換えにより生産されたコプリナス・シネレウス（Coprinus ciner eus）ペルオキシダーゼ（CiP）、及び過酸化水素により触媒されるメチル・オレンジ（Merck）の加速された漂白を図３中に示す。以下の条件を使用した： 10 nM rCiP 25 μM メチル・オレンジ（Methyl Orange）０、１、５及び10μM ABTS 200μM 過酸化水素 50 mM Britton & Robinsonバッファー、pH 8.8 30 ℃サーモスタット。この漂白の混合、開始及び検出は実施例２中に記載したものと同じである。実施例４ダイレクト・ブルー１の漂白加速剤としてABTSを使用した、実施例１に従って得られた組換えにより生産されたコプリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼ（ CiP）によるダイレクト・ブルー１（Direct Blue1（DB1））の初期漂白を、これまでに公知の加速剤の中で最良のもの：７-ヒドロキシクマリン（7HCm）、バニリン（VAN）、及びp-ヒドロキシベンゼン・スルホネート（pHBS）と比較した。以下の条件を使用した：１ nM CIP又は100 nM CIP（pH 10.5における）それぞれ、０、10、25、50、又は75μMの加速剤 50 mM Britton & Robinsonバッファー、それぞれ、pH 8.8又は10.5 20μM 過酸化水素。試薬を１cmキュベット内で混合し、そしてその漂白を過酸化水素の添加により開始した。漂白をその染料の吸収ピークである610 nmにおいて分光光度計により検出した。漂白を10分間続け、そして漂白速度（-ΔmAbs/分）を吸収における初期（線形）減少から測定した。 pH 10.5において、加速剤として100 nm CiP及びABTSを使用した漂白は、そのキュベットが分光光度計内に置かれることができる前に漂白が既に完了している程速かった。この理由は、pH 10.5におけるrCiPの投与量がABTSとの組み合わせにおいて使用されるとき１ nMまで減少されたからであり、但し、100 nM rCiP付近の投与量が、吸収における有意な減少を観察するために（これまで公知な）すべての他の加速剤のために必要であった。１分間当たりの初期漂白の結果を加速剤濃度の関数として図４及び５中に例示する。実施例５ABTSによる強化された染料転移阻害洗浄試験を、ペルオキシダーゼに基く染料転移阻害に対するABTSの効果を調査するためにTerg-o-tometer内で行った。比較のために、確立された強化剤pHBSをもテストした。綺麗な白色のトレーサー・テスト片（綿、Testfabrics，Inc.,USAからのStyle #400；漂白されているが、蛍光増白されていないもの）を、アゾ染料Acld Red 1 51（C.I．26900；例えば、Aldrich Chemical Co.から入手可能なもの）により染色されたナイロン・テスト片と一緒に洗浄した。参照テスト片を、同一綿布から切断し、そして染色された織物の非存在中で洗浄した。所定のTerg-o-tometerポット内の染料転移を、上記トレーサー片の間のハンター色差（Hunter color dif ference）：として測定し、ここで、ポット及び上記の参照片、ハンターＬ、ａ、及びｂ値を Datacolor Elrephometer 2000上の非フィルター昼光源により得られた軽減データから評価した。この洗浄試験のための洗剤溶液を、漂白及び光学的増白剤を全く含まない商業的に入手可能な欧州の高pHパワー洗剤4.5 g/lを使用して調製した。使用した水は、１：２の比で脱鉱物水と混合された水道水であり；その混合物は、約1.1 mM Ca²⁺に等しい硬度をもっていた。詳細な実験条件は以下のものであった：洗浄経過時間： 15分間 Terg-o-tometer攪拌： 70回転/分温度： 35℃ pH：ペルオキシダーゼ系の添加に先立ってNaOHにより10.5に調整された繊維負荷：１リッターの洗浄液当たりAcid R ed 151により染色された約６gナイロン及び１g白色綿過酸化物源：すべての場合に、50μMH₂O₂ がペルオキシダーゼと共に存在したペルオキシダーゼ：５nMにおける、実施例１に従って得られた、組換えにより生産されたCoprinus cinereusペルオキシダーゼ。洗浄後、上記テスト片を冷水道水中で十分に濯ぎ、そして暗所において一夜乾燥させ、その後、軽減の測定を行った。上記２つの強化剤の各濃度による処理が以下の結果をもたらした：白色洗浄織物に関するハンターΔＥ１μM ABTS 34.9 ５μM ABTS 32.3 20μM ABTS 23.7 １μM pHBS 34.8 ５μM pHBS 34.5 20μM pHBS 30.8 ハンターΔＥの≧２単位の差異は統計的に有意であった。両方の場合において、１μM強化剤によるペルオキシダーゼ系は、有意な染料転移阻害を提供しなかった（ペルオキシダーゼ系によらない参照はここでは含まれない）。しかしながら、見て分かるように、ABTS系は、既に５μMの強化剤において効果をもち、一方、pHBS系はもたず；そして20μMの強化剤においては、ABTS系は、pHBS系よりもかなり大きな効果をもつ。実施例６ABTSラジカルの安定性実施例１に従って得られた組換えにより生産されたコプリナス・シネレウス（ Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼ（rCiP）によるABTSの酸化により形成されたABTSラジカルの安定性を電子スピン共鳴技術（ESR）により研究した。このE SRシグナルは、曲線下の領域がそのラジカルの濃度に一致した20スキャンの後に計算した。このシグナルを、3260ガウスから3300ガウスまで積分した。このラジカルの安定性を様々なpH値において0.1 M Britton & Robinsonバッファーにおいて測定した。2.27 mM H₂O₂の濃度及び34 PODU/mlの酵素濃度を適用した。ペルオキシダーゼ活性１ペルオキシダーゼ単位（PODU）は、標準的な条件下（すなわち、pH 7.0；温度30℃；反応時間３分間）、１分間当たり１μmolの過酸化水素の変換を触媒する酵素の量として定義される。この活性は、発色団としてABTS（2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート））の基く検定を使用して測定され、作り出される緑っぽい青色を418nmにおいて光度計により測定した。結果を以下の表３中に表す。各濃度において測定された表３中の半減期を、比較のために、２次崩壊を呈する250μMの濃度まで計算された。実施例７バニリンと７-ヒドロキシクマリンの半減期を強化剤のサイクリック・ボルタモグラムから測定した。このサイクリック・ボルタモグラムを、作用電極白金ディスク対電極白金ワイヤー参照電極カロメル（Calomel）から成る３-電極系内で得た。強化剤の濃度は、２mM であった。酸化された強化剤の崩壊反応の次数を、そのスキャン速度（υ）に対する酸化ピーク（Ｅ_po）のピーク位置の依存性から測定した。両方の強化剤について、スキャン速度レンジ0.1-1.0V/s内における（δＥ_po/δlogυ）＝0.019 Vは、その崩壊反応が２次であることを示している。酸化された強化剤の崩壊反応の速度定数を、実験的サイクリック・ボルタモグラムと刺激されたボルタモグラムとの比較から測定した。この剌激に必要なパラメーターは、Analytical Chemistry，Vo１．60，ｐ．1159，1988中に記載されているように、その崩壊反応の反応次数、その強化剤の濃度、その崩壊反応のための速度定数のスキャン速度である。バニリンと７-ヒドロキシクマリンの両方について、10⁸M^-1ｓ^-1のオーダーにおける崩壊反応のための速度定数があった。 250μMの濃度における、半減期は、約40μs まで計算されることができる。実施例８ダイレクト・ブルー１の漂白及び酸化された強化剤の半減期コプリナス・シネレウス（Coprinus cinereus）ペルオキシダーゼ（CiP）を実施例１中に記載したように得た。使用したバッファーは、３成分（H₃PO₄、CH₃CO₂H、H₃BO₃）のすべてに関して0 .02MのBritton Robinsonバッファーであった。この酵素を、10.000 PODU/ml（50 .000 nM）の濃度までミリ-量の水の中に溶解した。保存溶液をDMF/H₂O（1:1）中のテスト強化剤のすべてから調製した。以下の条件を上記漂白効果を検査するために使用した： H₂O₂ 20μM CiP １又は２ nM（pH 9.5又はpH10.5） DB １ 0.025 mg/ml 加速剤 10μM DNF 0.1% B-Rバッファー 0.02M（pH 8.5又は１0.5）温度室温。ペルオキシダーゼ、DB1及び強化剤をキュベット内でバッファーと混合し、分光光度計内に置き、そしてH₂Oをその実験の開始直前に添加した。酵素の濃度は、pH 8.5において1nMであり、そしてpH 10.5において２nMであった。 598nmにおける染料の吸収における変化を５〜305秒の時間の関数として測定した。その加速剤の効果を定量するために、300秒間における漂白（Δabs）を計算する： ΔAbs（%）=（（Abs 300秒-Abs 10秒）/ Abs 10秒）* 100 様々なベンジン誘導体の半減期を、実施例１中に記載したようにpH 8.5及び10 .5におけるDMF/H₂Oバッファー（1/9）中のサイクリック・ボルタメトリ（CV）により測定した。ベジジンの濃度は2mMであり、そして化合物の半減期（t_1/2）は、２つの電子転移を参照する。実施例９強化剤の酸化本発明に係る強化剤のいくつか、10-エチル-４-フェノチアジンカルボン酸（E PC）及び10-フェノチアジンプロピオン酸（PTP）の酸化のための見かけの速度定数を、CiP（PTPについて4nM及びEPCについて3.1nM）、ボレート・バッファー（1 0mM）pH 8.5、H₂O₂（50μM）及び強化剤の変化濃度を使用して30℃において測定した。酸化された強化剤の形成を514nmにおいてモニターした。Ｋ_cat（app.）は、Ｖ_max/［CiP］₀として計算される回転数として定義される。ここで、［CiP］₀は、CIPの初期濃度である。酸化強化剤（電子受容体）の安定性を、高濃度のCiP（107μM）、Britton-Rob insonバッファー（10mM）pH 8.5、H₂O₂（50μM）及び変化濃度の強化剤（20-100 μM）、30℃を使用して測定した。酸化強化剤の非常に速い形成の後、崩壊を514nmにおける吸収により追跡することができた。両方の酸化された強化剤について。以下の定数をもつ２次崩壊が見られた。実施例10H₂O₂、染料及び強化剤の化学量論 H₂O₂及びメチル・オレンジ（MO）の間の化学量論を測定するために、以下の条件を使用した： 10 mM Britton-RobinsonバッファーpH 8.8 （実施例１に従って得られた）10 nM CiP 0-150μM MO 10μM ABTS 220μM H₂O₂ 30℃ 試薬を1cmキュベット内で混合し、そして漂白をH₂O₂の添加により開始した。漂白を５時間までにわたり465 nmにおいて分光光度計により検出した。様々なMO濃度について獲得できる漂白の破壊点を、２：１のH₂O₂：MO化学量論又は４電子の転移を与える110μM MOにおいて得た。上記の系であるが、過剰のH₂O₂（440μM）を使用しては、MO漂白は、150μM M Oまでは線形であり、これは、１：（少なくとも）15のABTS：MOの化学量論を与える。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年２月６日【補正内容】請求の範囲１．酸化性基質を酸化する方法であって、その方法がペルオキシダーゼ活性の測定のための検定法ではなく、その基質を、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物、過酸化水素の源並びに強化剤であってそのペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物によりその強化剤の酸化の回転数（turnover number）の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤と、接触させることを含んで成る方法。２．強化剤が、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物により、250μM までの濃度において存在する安定した電子受容体に酸化されることができる、請求項１に記載の方法。３．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、１m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１又は２のいずれかに記載の方法。４．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、10m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。５．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、100m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。６．強化剤が、以下の群：2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６- スルホネート）、N-メチルフェノチアジン、3,3',5,5'-テトラメチルベンジジンから選ばれる芳香族有機化合物である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。７．強化剤が、方法の開始において又は間において添加される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。８．強化剤の量が、0.01〜500μM、より好ましくは0.1〜250μ M、最も好ましくは１〜100μMのレンジ内にある、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９．過酸化水素の源が、過酸化水素又は過酸化水素前駆体、例えば、ペルカーボネート又は過硼酸塩、又は過酸化水素生成酵素系、例えば、オキシダーゼ及びその基質、あるいはペルオキシカルボン酸又はその塩である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。１０．ペルオキシダーゼ酵素が、大豆ペルオキシダーゼ、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼあるいはコプリナス（Coprinus）、例えば、コプリナス・シネレウス（C.cinereus）又はコプリナス・マクロリザス（C.macrorhizus）から、又はバチルス（Bacillus）、例えば、バチルス・プミラス（B.pumilus）から、又はミクソコッカス（Myxococcus）、例えば、ミクソコッカス・ビレッセンス（ M.virescens）から得られるペルオキシダーゼ酵素である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。１１．溶液中の染料の漂白に適用される、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。１２．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することに適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法であって、その洗浄液を、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物、過酸化水素の源並びに強化剤であってそのペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物によりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤により処理することを含んで成る方法。１３．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤添加物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤を含んで成る洗剤添加物。１４．強化剤が、2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）である、請求項14に記載の洗剤添加物。１５．粒状物、好ましくは非発塵性粒状物、液体、特に安定化液体、スラリーの形態で、又は保護された形態で、提供される、請求項13又は14のいずれかに記載の洗剤添加物。１６．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤組成物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源、並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤を含んで成る洗剤組成物。１７．電子供与体が、2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）である、請求項16に記載の洗剤組成物。１８．１以上の他の酵素、特に、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、及び／又はオキシダーゼ、あるいはその混合物をさらに含んで成る、請求項16又は17のいずれかに記載の洗剤組成物。１９．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る、リグニン含有材料の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白のために適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２０．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成り、リグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び／又は修飾に適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２１．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素により廃水を処理することを含んで成る、廃水、例えば、化学又は医薬産業からの廃水の処理において適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２２．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素により廃水を処理することを含んで成る、染料製造からの、繊維産業からの、又はパルプ製造からの廃水の処理のための請求項21に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者エブドルップ，セーレンデンマーク国，デーコー―2100 コペンハーゲンエー．，エステー．テー．ホー．，ウィレモエスガゼ 89 (72)発明者イデ，ビルギッテデンマーク国，デーコー―3520 ファルム，トルネヘーイ 148

Claims

【特許請求の範囲】１．酸化性基質を酸化する方法であって、その基質を、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物、過酸化水素の源並びに強化剤であってそのペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物によりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤と、接触させることを含んで成る方法。２．強化剤が、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物により、250μM までの濃度において存在する安定した電子受容体に酸化されることができる、請求項１に記載の方法。３．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、1m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１又は２のいずれかに記載の方法。４．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、10m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。５．強化剤が250μMまでの濃度において存在するとき、電子受容体が、100m秒以上の半減期（t_1/2）をもつ、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。６．強化剤が、以下の群：2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６- スルホネート）、N-メチルフェノチアジン、3,3',5,5'-テトラメチルベンジジンから選ばれる芳香族有機化合物である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。７．強化剤が、方法の開始において又は間において添加される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。８．強化剤の量が、0.01〜500 μM、より好ましくは0.1〜250μM、最も好ましくは１〜100μMのレンジ内にある、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９．過酸化水素の源が、過酸化水素又は過酸化水素前駆体、例えば、ペルカーボネート又は過硼酸塩、又は過酸化水素生成酵素系、例えば、オキシダーゼ及びその基質、あるいはペルオキシカルボン酸又はその塩である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。１０．ペルオキシダーゼ酵素が、大豆ペルオキシダーゼ、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼあるいはコプリナス（Coprinus）、例えば、コプリナス・シネレウス（C．cinereus）又はコプリナス・マクロリザス（C．macrorhizus）から、又はバチルス（Bacillus）、例えば、バチルス・ブミラス（B．pumilus）から、又はミクソコッカス（Myxococcus）、例えば、ミクソコッカス・ビレッセンス（M．virescens）から得られるペルオキシダーゼ酵素である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。１１．溶液中の染料の漂白に適用される、請求項１〜10のいずれかに記載の方法。１２．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することに適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法であって、その洗浄液を、ペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物、過酸化水素の源並びに強化剤であってそのペルオキシダーゼ又は過酸化物形成作用性化合物によりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤により処理することを含んで成る方法。１３．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤添加物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤を含んで成る洗剤添加物。１４．強化剤が、2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）である、請求項14に記載の洗剤添加物。１５．粒状物、好ましくは非発塵性粒状物、液体、特に安定化液体、スラリーの形態で、又は保護された形態で、提供される、請求項13又は14のいずれかに記載の洗剤添加物。１６．織物が洗浄液中で一緒に洗浄されるとき、染色された織物から他の織物への繊維染料の転移を阻害することができる洗剤組成物であって、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素の源、並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤を含んで成る洗剤組成物。１７．電子供与体が、2,2'-アジノ-ビス（３-エチルベンゾチアゾリン-６-スルホネート）である、請求項16に記載の洗剤組成物。１８．１以上の他の酵素、特に、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、及び／又はオキシダーゼ、あるいはその混合物をさらに含んで成る、請求項16又は17のいずれかに記載の洗剤組成物。１９．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成る、リグニン含有材料の漂白、特に紙製造のためのパルプの漂白のために適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２０．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素によりリグニン又はリグニン含有材料を処理することを含んで成り、リグニン又はリグニン含有材料の酵素的重合及び／又は修飾に適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２１．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素により廃水を処理することを含んで成る、廃水、例えば、化学又は医薬産業からの廃水の処理において適用される請求項１〜10のいずれかに記載の方法。２２．過酸化水素の源並びに強化剤であってその活性を示すペルオキシダーゼによりその強化剤の酸化の回転数の逆数よりも大きな半減期をもつ電子受容体に酸化されることができる強化剤の存在中、ペルオキシダーゼ酵素により廃水を処理することを含んで成る、染料製造からの、繊維産業からの、又はパルプ製造からの廃水の処理のための請求項21に記載の方法。