JPH07328011A - 酵素の測定方法および測定装置 - Google Patents
酵素の測定方法および測定装置Info
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- JPH07328011A JPH07328011A JP6145327A JP14532794A JPH07328011A JP H07328011 A JPH07328011 A JP H07328011A JP 6145327 A JP6145327 A JP 6145327A JP 14532794 A JP14532794 A JP 14532794A JP H07328011 A JPH07328011 A JP H07328011A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Abstract
(57)【要約】
【構成】固形物表面に基質溶液を接触させて、該基質溶
液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固形物表
面に存在する酵素の測定方法であって、細径管の先端開
口部を測定対象とする固形物表面に接触させて固形物表
面と細径管の内壁面とで空間部を形成するとともに、該
空間部内に基質溶液を導入して該固形物表面に接触さ
せ、ｐＨ感応部の先端が該空間部内であって、かつ細径
管の先端開口部からの距離が５ｍｍ以下となる位置に配
置されたｐＨ電極を用いて、該空間部内における基質溶
液のｐＨ変化を測定することを特徴とする、固形物表面
に存在する酵素の測定方法、並びに該測定方法に用いる
測定装置。 【効果】本発明の装置を用いた測定方法によれば、測定
対象となる固形物上の特定箇所に存在する酵素を、その
場で直接、測定することが可能である。
液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固形物表
面に存在する酵素の測定方法であって、細径管の先端開
口部を測定対象とする固形物表面に接触させて固形物表
面と細径管の内壁面とで空間部を形成するとともに、該
空間部内に基質溶液を導入して該固形物表面に接触さ
せ、ｐＨ感応部の先端が該空間部内であって、かつ細径
管の先端開口部からの距離が５ｍｍ以下となる位置に配
置されたｐＨ電極を用いて、該空間部内における基質溶
液のｐＨ変化を測定することを特徴とする、固形物表面
に存在する酵素の測定方法、並びに該測定方法に用いる
測定装置。 【効果】本発明の装置を用いた測定方法によれば、測定
対象となる固形物上の特定箇所に存在する酵素を、その
場で直接、測定することが可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は酵素の測定方法および測
定装置に関する。さらに詳しくは、測定対象となる酵素
の酵素化学的活性に基づく基質溶液のｐＨ変化を利用し
て固形物表面上に存在する特定の酵素を測定する方法お
よび該測定方法を実施するのに適した装置に関する。本
発明により提供される測定方法および装置は臨床検査の
ような臨床医学を主な利用分野とするが、その他に、基
礎医学、獣医学、生化学、薬理学等の広い分野への適用
が可能である。
定装置に関する。さらに詳しくは、測定対象となる酵素
の酵素化学的活性に基づく基質溶液のｐＨ変化を利用し
て固形物表面上に存在する特定の酵素を測定する方法お
よび該測定方法を実施するのに適した装置に関する。本
発明により提供される測定方法および装置は臨床検査の
ような臨床医学を主な利用分野とするが、その他に、基
礎医学、獣医学、生化学、薬理学等の広い分野への適用
が可能である。
【０００２】
【従来の技術】近年、Helicobacter pylori(以下これを
「H. pylori 」と略称する）が胃潰瘍および十二指腸潰
瘍の発症に係わる菌として注目されている。 H. pylori
は胃および十二指腸の粘膜上皮に生息しており、菌体膜
上に発現させた多量のウレアーゼあるいは菌体外に分泌
した多量のウレアーゼによって胃や十二指腸内の尿素を
分解し、高濃度のアンモニアを生成させ、自己の生息に
必要な中性環境を作るとともに上皮細胞に障害を与える
ことが報告されている（小橋、臨床消化器内科８、４８
９（１９９３）参照）。従って、胃潰瘍や十二指腸潰瘍
の診断のために H. pyloriの検査が重要になりつつあ
る。
「H. pylori 」と略称する）が胃潰瘍および十二指腸潰
瘍の発症に係わる菌として注目されている。 H. pylori
は胃および十二指腸の粘膜上皮に生息しており、菌体膜
上に発現させた多量のウレアーゼあるいは菌体外に分泌
した多量のウレアーゼによって胃や十二指腸内の尿素を
分解し、高濃度のアンモニアを生成させ、自己の生息に
必要な中性環境を作るとともに上皮細胞に障害を与える
ことが報告されている（小橋、臨床消化器内科８、４８
９（１９９３）参照）。従って、胃潰瘍や十二指腸潰瘍
の診断のために H. pyloriの検査が重要になりつつあ
る。
【０００３】現在、胃および十二指腸（以下これらを
「消化管」と略称する）内の H. pyloriの実用性の高い
検査法としては、（１）培養法、（２）組織染色法、
（３）迅速ウレアーゼテスト、（４）色素による内視鏡
検査、（５）抗体検査、等が知られている（石井、臨床
消化器内科８、５０３（１９９３）参照）。
「消化管」と略称する）内の H. pyloriの実用性の高い
検査法としては、（１）培養法、（２）組織染色法、
（３）迅速ウレアーゼテスト、（４）色素による内視鏡
検査、（５）抗体検査、等が知られている（石井、臨床
消化器内科８、５０３（１９９３）参照）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記（１）〜（５）の
検査法のうち、（１）の培養法は粘膜組織切片を採取
し、 H. pyloriを培養し、分離培養法等によって確認す
る方法であり、最も確実なH. pyloriの検査方法であ
る。しかし粘膜組織切片の採取を必要とするために、患
者の臓器に傷をつけることとなり、また熟練した技術者
と数日の時間を必要とする。（２）の組織染色法も粘膜
組織切片の採取を必要とする検査方法であり、患者の臓
器に傷をつけるうえ、熟練した技術者と１日程度の時間
を要する。（３）の迅速ウレアーゼテストでは採取した
粘膜組織切片を尿素と指示薬（フェノールレッド等）を
含む培地に入れ、 H. pyloriが分泌するウレアーゼによ
る培地のｐＨ変化に伴う指示薬の変化を肉眼で判定する
（山本ら、臨床消化器内科８、５１７（１９９３）参
照）。この方法では数分から数時間で結果が得られ、操
作も簡単であるが、（１）、（２）と同様に粘膜組織切
片の採取を必要とするため、患者の臓器に傷をつけると
いう難点がある。（４）の色素による内視鏡検査は消化
管内にトルイジンブルー、フェノールレッド等の指示薬
を散布し、 H. pyloriの消化管内における分布を可視化
し、内視鏡で観察するという検査方法である（郡ら、臨
床消化器内科８、５２５（１９９３）参照）。この方法
は患者の臓器に傷をつけることなく H. pyloriの消化管
内における分布を観察できる点で優れているが、指示薬
の変色域が限られているために、Ｈ2 ブロッカーの事前
投与等によって消化管内のｐＨをあらかじめ変色域の近
くに調節しておくことが必要であり、調節の仕方によっ
て偽陽性や偽陰性が生じる。（５）の抗体検査は血清中
の抗 H. pylori抗体を酵素免疫測定法で測定する検査方
法である（高木、臨床消化器内科８、５１１（１９９
３）参照）。これは H. pyloriそのものではなく、 H.
pyloriに対する抗体を測定する方法であるので、 H. py
loriに対する過去の既往歴を観ることとなり、現在 H.
pyloriが患者の体内に生息しているか否かを判定するこ
とはできない。
検査法のうち、（１）の培養法は粘膜組織切片を採取
し、 H. pyloriを培養し、分離培養法等によって確認す
る方法であり、最も確実なH. pyloriの検査方法であ
る。しかし粘膜組織切片の採取を必要とするために、患
者の臓器に傷をつけることとなり、また熟練した技術者
と数日の時間を必要とする。（２）の組織染色法も粘膜
組織切片の採取を必要とする検査方法であり、患者の臓
器に傷をつけるうえ、熟練した技術者と１日程度の時間
を要する。（３）の迅速ウレアーゼテストでは採取した
粘膜組織切片を尿素と指示薬（フェノールレッド等）を
含む培地に入れ、 H. pyloriが分泌するウレアーゼによ
る培地のｐＨ変化に伴う指示薬の変化を肉眼で判定する
（山本ら、臨床消化器内科８、５１７（１９９３）参
照）。この方法では数分から数時間で結果が得られ、操
作も簡単であるが、（１）、（２）と同様に粘膜組織切
片の採取を必要とするため、患者の臓器に傷をつけると
いう難点がある。（４）の色素による内視鏡検査は消化
管内にトルイジンブルー、フェノールレッド等の指示薬
を散布し、 H. pyloriの消化管内における分布を可視化
し、内視鏡で観察するという検査方法である（郡ら、臨
床消化器内科８、５２５（１９９３）参照）。この方法
は患者の臓器に傷をつけることなく H. pyloriの消化管
内における分布を観察できる点で優れているが、指示薬
の変色域が限られているために、Ｈ2 ブロッカーの事前
投与等によって消化管内のｐＨをあらかじめ変色域の近
くに調節しておくことが必要であり、調節の仕方によっ
て偽陽性や偽陰性が生じる。（５）の抗体検査は血清中
の抗 H. pylori抗体を酵素免疫測定法で測定する検査方
法である（高木、臨床消化器内科８、５１１（１９９
３）参照）。これは H. pyloriそのものではなく、 H.
pyloriに対する抗体を測定する方法であるので、 H. py
loriに対する過去の既往歴を観ることとなり、現在 H.
pyloriが患者の体内に生息しているか否かを判定するこ
とはできない。
【０００５】以上のように、消化管内の H. pyloriの各
種検査法にはそれぞれ一長一短があり、臨床的な観点か
らは、内視鏡観察時に消化管の特定箇所において検体を
採取することなく H. pyloriをその場で直接検出できる
方法が望まれている。また、上記 H. pyloriに限らず、
生体の各種臓器に生息する微生物とくに細菌類の検査
は、ほとんどの場合検体を採取し、体外で培養し、顕微
鏡を用いて観察を行うという細菌学的検査によって行わ
れているのが現状であり、各種臓器の特定箇所におい
て、かかる微生物を直接検出する方法が望まれている。
さらに、臓器あるいは固形培地の特定箇所における酵素
を直接的に測定することに対する実用上のニーズも大き
い。しかし従来より行われている酵素測定法の大半は、
検体の採取を必要とする測定方法である。本発明は以上
の問題に鑑みてなされたものであって、臓器あるいは固
形培地等の固形物表面の特定箇所に存在する酵素をその
場で直接測定する方法および装置を提供し、ひいては該
固形物表面の特定箇所に存在する微生物等をその場で直
接検出することを可能ならしめることを目的とする。
種検査法にはそれぞれ一長一短があり、臨床的な観点か
らは、内視鏡観察時に消化管の特定箇所において検体を
採取することなく H. pyloriをその場で直接検出できる
方法が望まれている。また、上記 H. pyloriに限らず、
生体の各種臓器に生息する微生物とくに細菌類の検査
は、ほとんどの場合検体を採取し、体外で培養し、顕微
鏡を用いて観察を行うという細菌学的検査によって行わ
れているのが現状であり、各種臓器の特定箇所におい
て、かかる微生物を直接検出する方法が望まれている。
さらに、臓器あるいは固形培地の特定箇所における酵素
を直接的に測定することに対する実用上のニーズも大き
い。しかし従来より行われている酵素測定法の大半は、
検体の採取を必要とする測定方法である。本発明は以上
の問題に鑑みてなされたものであって、臓器あるいは固
形培地等の固形物表面の特定箇所に存在する酵素をその
場で直接測定する方法および装置を提供し、ひいては該
固形物表面の特定箇所に存在する微生物等をその場で直
接検出することを可能ならしめることを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明の要旨は、
固形物表面に基質溶液を接触させて、該基質溶液中の基
質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固形物表面に存在
する酵素の測定方法であって、細径管の先端開口部を測
定対象とする固形物表面に接触させて固形物表面と細径
管の内壁面とで空間部を形成するとともに、該空間部内
に基質溶液を導入して該固形物表面に接触させ、ｐＨ感
応部の先端が該空間部内であって、かつ細径管の先端開
口部からの距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されたｐ
Ｈ電極を用いて、該空間部内における基質溶液のｐＨ変
化を測定することを特徴とする、固形物表面に存在する
酵素の測定方法、および固形物表面に基質溶液を接触さ
せて、該基質溶液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用
した、固形物表面に存在する酵素の測定装置であって、
該測定装置が細径管と、該細径管の内部に収容されたｐ
Ｈ電極と、該細径管の先端開口部まで基質溶液を供給す
る送液手段とを有し、該ｐＨ電極のｐＨ感応部の先端が
該細径管の内部であって、かつ細径管の先端開口部から
の距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されて、該基質溶
液のｐＨ変化を検出可能としたことを特徴とする酵素の
測定装置、に関する。
固形物表面に基質溶液を接触させて、該基質溶液中の基
質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固形物表面に存在
する酵素の測定方法であって、細径管の先端開口部を測
定対象とする固形物表面に接触させて固形物表面と細径
管の内壁面とで空間部を形成するとともに、該空間部内
に基質溶液を導入して該固形物表面に接触させ、ｐＨ感
応部の先端が該空間部内であって、かつ細径管の先端開
口部からの距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されたｐ
Ｈ電極を用いて、該空間部内における基質溶液のｐＨ変
化を測定することを特徴とする、固形物表面に存在する
酵素の測定方法、および固形物表面に基質溶液を接触さ
せて、該基質溶液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用
した、固形物表面に存在する酵素の測定装置であって、
該測定装置が細径管と、該細径管の内部に収容されたｐ
Ｈ電極と、該細径管の先端開口部まで基質溶液を供給す
る送液手段とを有し、該ｐＨ電極のｐＨ感応部の先端が
該細径管の内部であって、かつ細径管の先端開口部から
の距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されて、該基質溶
液のｐＨ変化を検出可能としたことを特徴とする酵素の
測定装置、に関する。
【０００７】本発明でいう固形物とは、胃、十二指腸、
小腸、大腸、直腸、尿道、卵管、気管、歯茎部等の生体
内の各種臓器、固形培地など、一定の表面形状を有する
物体を意味する。また、本発明でいう基質の反応とは、
酵素等による基質の分解、酸化、還元、転移、加水分
解、脱離、異性化、重合等の各種反応を意味する。
小腸、大腸、直腸、尿道、卵管、気管、歯茎部等の生体
内の各種臓器、固形培地など、一定の表面形状を有する
物体を意味する。また、本発明でいう基質の反応とは、
酵素等による基質の分解、酸化、還元、転移、加水分
解、脱離、異性化、重合等の各種反応を意味する。
【０００８】まず、本発明の測定装置について具体例を
用いて図面にて説明する。図１に本発明装置の一例の概
略構成を示す。図１に示されるように本発明の装置は、
細径管１と、ｐＨ電極３と、細径管１内に基質溶液を供
給する送液手段８から構成されている。４はｐＨ電極３
のホルダ、５はリード線部であって、ｐＨ電極３に接続
されたリード線やそのハンダ部は絶縁樹脂で封入されて
いる。９は基質溶液を貯留する液溜め、１０は比較電
極、１１はｐＨ電極の出力電位を読み取る出力電位読み
取り手段である。１３はＣＰＵであり、送液手段８を制
御し、かつ出力電位読み取り手段１１の読み取りデータ
を処理し表示装置１２に表示する機能を有している。
用いて図面にて説明する。図１に本発明装置の一例の概
略構成を示す。図１に示されるように本発明の装置は、
細径管１と、ｐＨ電極３と、細径管１内に基質溶液を供
給する送液手段８から構成されている。４はｐＨ電極３
のホルダ、５はリード線部であって、ｐＨ電極３に接続
されたリード線やそのハンダ部は絶縁樹脂で封入されて
いる。９は基質溶液を貯留する液溜め、１０は比較電
極、１１はｐＨ電極の出力電位を読み取る出力電位読み
取り手段である。１３はＣＰＵであり、送液手段８を制
御し、かつ出力電位読み取り手段１１の読み取りデータ
を処理し表示装置１２に表示する機能を有している。
【０００９】細径管１は先端部が開口して細径管開口部
２を形成しており、他端部にはアダプタ６が接続され、
送液管７を介して液溜め９と連結されている。細径管１
の形状としては、内視鏡チューブ、カテーテル、留置針
など細長い管状の形状を有するものであれば、いずれも
使用できる。なお、細径管１として、複数の管状体を接
続して全体として一つの細長い管状の形状としたものを
使用することもできる。
２を形成しており、他端部にはアダプタ６が接続され、
送液管７を介して液溜め９と連結されている。細径管１
の形状としては、内視鏡チューブ、カテーテル、留置針
など細長い管状の形状を有するものであれば、いずれも
使用できる。なお、細径管１として、複数の管状体を接
続して全体として一つの細長い管状の形状としたものを
使用することもできる。
【００１０】細径管１の素材としては、ポリテトラフル
オロエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリ
エチレン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリメチル
メタクリレート等のプラスチック、金属（ステンレス
鋼、アルミニウム、チタンなど）、セラミックなどが挙
げられるが、生体内の臓器表面の特定箇所における酵素
の測定を目的とする場合には、細径管１をプラスチック
等の可撓性を有する素材で形成することが好ましい。
オロエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリ
エチレン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリメチル
メタクリレート等のプラスチック、金属（ステンレス
鋼、アルミニウム、チタンなど）、セラミックなどが挙
げられるが、生体内の臓器表面の特定箇所における酵素
の測定を目的とする場合には、細径管１をプラスチック
等の可撓性を有する素材で形成することが好ましい。
【００１１】細径管１の内径は通常３ｍｍ以下である。
細径管の内径が３ｍｍを超えると、基質の反応に対する
ｐＨ電極の応答が鈍くなり好ましくない。なお、細径管
１の内径の下限値については特に限定されるものではな
いが、内部に収容されるｐＨ電極の外径により制約を受
ける。実用的な観点から、細径管１の内径は通常０．５
〜３ｍｍの範囲のものが使用される。また、細径管１の
外径は通常０．７〜４ｍｍの範囲である。なお、生体内
の臓器表面の特定箇所における酵素の測定を目的とする
場合には、外径を３．５ｍｍ以下としておくと内視鏡に
挿入することが可能となり、生体内に挿入する際に患者
への負担が小さくなるので好ましい。
細径管の内径が３ｍｍを超えると、基質の反応に対する
ｐＨ電極の応答が鈍くなり好ましくない。なお、細径管
１の内径の下限値については特に限定されるものではな
いが、内部に収容されるｐＨ電極の外径により制約を受
ける。実用的な観点から、細径管１の内径は通常０．５
〜３ｍｍの範囲のものが使用される。また、細径管１の
外径は通常０．７〜４ｍｍの範囲である。なお、生体内
の臓器表面の特定箇所における酵素の測定を目的とする
場合には、外径を３．５ｍｍ以下としておくと内視鏡に
挿入することが可能となり、生体内に挿入する際に患者
への負担が小さくなるので好ましい。
【００１２】細径管１内に収容されるｐＨ電極３として
は従来から最も多用されているいわゆるガラス電極の他
に、ｐＨ感応性電界効果トランジスタ（以下ｐＨ−ＦＥ
Ｔという）、酸化パラジウム／パラジウムワイヤ等の表
面酸化金属線型のｐＨ電極、プロトン受容体を含有する
ｐＨ感応性高分子膜を金属線や炭素線にコートしたコー
テイドワイヤ型のｐＨ電極等、各種の微小ｐＨ電極を用
いることができる。しかしながら、ガラス電極型のｐＨ
電極は細径化すると、誘導ノイズが増大する傾向があ
る。表面酸化金属線型のｐＨ電極は細径化が容易である
が、長期の水中寿命等に難点がある。コーテイドワイヤ
型のｐＨ電極も細径化が容易であるが、ｐＨ変化に対す
る直線応答域が狭い、水中寿命が短いなどの難点があ
る。そのためこれらのｐＨ電極を使用する場合には上記
問題点を予め解消しておく必要がある。
は従来から最も多用されているいわゆるガラス電極の他
に、ｐＨ感応性電界効果トランジスタ（以下ｐＨ−ＦＥ
Ｔという）、酸化パラジウム／パラジウムワイヤ等の表
面酸化金属線型のｐＨ電極、プロトン受容体を含有する
ｐＨ感応性高分子膜を金属線や炭素線にコートしたコー
テイドワイヤ型のｐＨ電極等、各種の微小ｐＨ電極を用
いることができる。しかしながら、ガラス電極型のｐＨ
電極は細径化すると、誘導ノイズが増大する傾向があ
る。表面酸化金属線型のｐＨ電極は細径化が容易である
が、長期の水中寿命等に難点がある。コーテイドワイヤ
型のｐＨ電極も細径化が容易であるが、ｐＨ変化に対す
る直線応答域が狭い、水中寿命が短いなどの難点があ
る。そのためこれらのｐＨ電極を使用する場合には上記
問題点を予め解消しておく必要がある。
【００１３】これに対してｐＨ−ＦＥＴは、（１）細径
化が容易である、（２）細径化したときの誘導ノイズが
少ない、（３）ＩＣ技術で製造するので、電極間の特性
のバラつきが小さくでき、かつｐＨ感応面（ゲート部）
を微小化することができる、（４）ｐＨ変化に対する応
答が極めて速く、かつ応答曲線にヒステリシスが残らな
い、（５）ｐＨ変化に対する直線応答域が広い、（６）
水中の保存寿命が半永久的で、かつｐＨ感度等の特性の
経時変化が少ない、等の優れた特徴を有しているので本
発明装置に用いるｐＨ電極としては好適である。
化が容易である、（２）細径化したときの誘導ノイズが
少ない、（３）ＩＣ技術で製造するので、電極間の特性
のバラつきが小さくでき、かつｐＨ感応面（ゲート部）
を微小化することができる、（４）ｐＨ変化に対する応
答が極めて速く、かつ応答曲線にヒステリシスが残らな
い、（５）ｐＨ変化に対する直線応答域が広い、（６）
水中の保存寿命が半永久的で、かつｐＨ感度等の特性の
経時変化が少ない、等の優れた特徴を有しているので本
発明装置に用いるｐＨ電極としては好適である。
【００１４】ｐＨ−ＦＥＴとしては（１）全周絶縁型
（特公昭５７−４３８６３号公報参照）、（２）接合分
離型（実公昭５８−５２４５号公報参照）、（３）ＳＯ
Ｓ型（特開昭５９−４８６４６号公報参照）等いくつか
のタイプが知られている。本発明においてはこれらのい
ずれのタイプのものを用いてもかまわないが、基本的
に、（１）その先端近傍にｐＨ感応面を有し、（２）該
ｐＨ−ＦＥＴにリード線を接続し、その周囲を樹脂等で
絶縁したリード線部が細径管１内に挿入可能な太さであ
り、（３）素子先端部の長さは１〜１０ｍｍ、好ましく
は１〜３ｍｍであり、（４）素子先端部の上・下面、側
面全ての面が外部溶液との間で電気的に絶縁されている
構造を有する、等の条件を備えているものが好ましい。
本発明においては、これらの条件の全てを満足するもの
として、特に上記の（１）全周絶縁型ｐＨ−ＦＥＴが好
適である。
（特公昭５７−４３８６３号公報参照）、（２）接合分
離型（実公昭５８−５２４５号公報参照）、（３）ＳＯ
Ｓ型（特開昭５９−４８６４６号公報参照）等いくつか
のタイプが知られている。本発明においてはこれらのい
ずれのタイプのものを用いてもかまわないが、基本的
に、（１）その先端近傍にｐＨ感応面を有し、（２）該
ｐＨ−ＦＥＴにリード線を接続し、その周囲を樹脂等で
絶縁したリード線部が細径管１内に挿入可能な太さであ
り、（３）素子先端部の長さは１〜１０ｍｍ、好ましく
は１〜３ｍｍであり、（４）素子先端部の上・下面、側
面全ての面が外部溶液との間で電気的に絶縁されている
構造を有する、等の条件を備えているものが好ましい。
本発明においては、これらの条件の全てを満足するもの
として、特に上記の（１）全周絶縁型ｐＨ−ＦＥＴが好
適である。
【００１５】本発明に用いられるｐＨ−ＦＥＴは、２５
℃において４０〜６０ｍＶ／ｐＨ、さらには５０〜６０
ｍＶ／ｐＨのｐＨ感度を有することが望ましい。またｐ
Ｈ感応膜としては窒化ケイ素、酸化アルミニウム、酸化
タンタル等の水中安定性のすぐれたものを採用すること
が望ましい。特に酸化タンタルは水中での安定性、ｐＨ
応答特性等の点で優れており、酸化タンタルをｐＨ感応
膜とするｐＨ−ＦＥＴは本発明に用いるｐＨ電極として
適している。
℃において４０〜６０ｍＶ／ｐＨ、さらには５０〜６０
ｍＶ／ｐＨのｐＨ感度を有することが望ましい。またｐ
Ｈ感応膜としては窒化ケイ素、酸化アルミニウム、酸化
タンタル等の水中安定性のすぐれたものを採用すること
が望ましい。特に酸化タンタルは水中での安定性、ｐＨ
応答特性等の点で優れており、酸化タンタルをｐＨ感応
膜とするｐＨ−ＦＥＴは本発明に用いるｐＨ電極として
適している。
【００１６】本発明の装置を用いて酵素の測定を行うた
めには、ｐＨ−ＦＥＴはノイズレベルの極めて低い（定
ｐＨ下で通常０．０５ｍＶ以下）ものを用いることが好
ましい。そのためには、相互コンダクタンスが５０マイ
クロジーメンス以上、好ましくは１００マイクロジーメ
ンス以上、より好ましくは２００マイクロジーメンス以
上のものを用いることが望ましい。また、ｐＨ−ＦＥＴ
の素子先端部と外部電極とを室温の生理食塩水中につけ
て、ｐＨ−ＦＥＴのソース電極と外部電極との間に３Ｖ
の電圧をかけた時のもれ電流が３０ｎＡ以下、好ましく
は１０ｎＡ以下であることが望ましい。相互コンダクタ
ンスが５０マイクロジーメンス未満であったり、上記も
れ電流が３０ｎＡを超えたりすると、測定時のノイズが
大きくなる。
めには、ｐＨ−ＦＥＴはノイズレベルの極めて低い（定
ｐＨ下で通常０．０５ｍＶ以下）ものを用いることが好
ましい。そのためには、相互コンダクタンスが５０マイ
クロジーメンス以上、好ましくは１００マイクロジーメ
ンス以上、より好ましくは２００マイクロジーメンス以
上のものを用いることが望ましい。また、ｐＨ−ＦＥＴ
の素子先端部と外部電極とを室温の生理食塩水中につけ
て、ｐＨ−ＦＥＴのソース電極と外部電極との間に３Ｖ
の電圧をかけた時のもれ電流が３０ｎＡ以下、好ましく
は１０ｎＡ以下であることが望ましい。相互コンダクタ
ンスが５０マイクロジーメンス未満であったり、上記も
れ電流が３０ｎＡを超えたりすると、測定時のノイズが
大きくなる。
【００１７】比較電極１０としては、飽和カンコウ電極
や銀−塩化銀電極等の液絡式比較電極、イオン不感応性
膜をゲート膜とする電界効果トランジスタ（特公昭５８
−２５２２１号公報参照）、あるいはイオン不感応性膜
を金属線や炭素線にコートしたコーテイドワイヤ型の比
較電極等を用いることができる。本発明の装置にはいず
れの方式の比較電極を用いてもかまわないが、なかでも
液絡式比較電極が最も信頼性が高く好ましく用いられ
る。比較電極の設置場所としては通常図１に示したよう
に、アダプタ６の内部で、かつｐＨ電極のｐＨ感応面と
液絡している場所に取り付けられるが、ｐＨ電極のｐＨ
感応面と液絡している場所であればいずれに収容しても
よく、例えば、細径管１の内部、送液管７の内部などに
設置することも可能である。
や銀−塩化銀電極等の液絡式比較電極、イオン不感応性
膜をゲート膜とする電界効果トランジスタ（特公昭５８
−２５２２１号公報参照）、あるいはイオン不感応性膜
を金属線や炭素線にコートしたコーテイドワイヤ型の比
較電極等を用いることができる。本発明の装置にはいず
れの方式の比較電極を用いてもかまわないが、なかでも
液絡式比較電極が最も信頼性が高く好ましく用いられ
る。比較電極の設置場所としては通常図１に示したよう
に、アダプタ６の内部で、かつｐＨ電極のｐＨ感応面と
液絡している場所に取り付けられるが、ｐＨ電極のｐＨ
感応面と液絡している場所であればいずれに収容しても
よく、例えば、細径管１の内部、送液管７の内部などに
設置することも可能である。
【００１８】細径管１内に基質溶液を供給する送液手段
８としては、１〜１００ｍｌ／ｈの流速が得られるもの
であればよく、ペリスタポンプ、シリンジポンプ等、従
来より公知のものが特に制限なく使用できる。
８としては、１〜１００ｍｌ／ｈの流速が得られるもの
であればよく、ペリスタポンプ、シリンジポンプ等、従
来より公知のものが特に制限なく使用できる。
【００１９】ホルダ４は、細径管１内に設置されてお
り、ｐＨ電極３を細径管内部の特定の位置に収容し、か
つ固定するものである。ホルダ４とｐＨ電極のリード線
部５、およびホルダ４と細径管１の内壁面とはそれぞれ
接着剤によって接着固定されている。また、ホルダ４は
基質溶液の流路を有するものである。このようなホルダ
４としては、例えば、多孔性のスポンジ、多孔性セラミ
ック、金属粉末の焼結体などの多孔性の構造を有するも
のが使用される。
り、ｐＨ電極３を細径管内部の特定の位置に収容し、か
つ固定するものである。ホルダ４とｐＨ電極のリード線
部５、およびホルダ４と細径管１の内壁面とはそれぞれ
接着剤によって接着固定されている。また、ホルダ４は
基質溶液の流路を有するものである。このようなホルダ
４としては、例えば、多孔性のスポンジ、多孔性セラミ
ック、金属粉末の焼結体などの多孔性の構造を有するも
のが使用される。
【００２０】上記ホルダ４により、ｐＨ電極３は細径管
内部の特定の位置に収容、固定される。ｐＨ電極３の設
置位置は、基質の反応に対するｐＨ電極の応答速度を決
定する重要な因子である。本発明の測定方法および装置
においては、ｐＨ電極３は、ｐＨ感応部の先端が、細径
管１の内部であって、かつ細径管の先端開口部である細
径管開口部２からの距離（図１におけるＬ）が５ｍｍ以
下となる位置に配置されることが必要である。
内部の特定の位置に収容、固定される。ｐＨ電極３の設
置位置は、基質の反応に対するｐＨ電極の応答速度を決
定する重要な因子である。本発明の測定方法および装置
においては、ｐＨ電極３は、ｐＨ感応部の先端が、細径
管１の内部であって、かつ細径管の先端開口部である細
径管開口部２からの距離（図１におけるＬ）が５ｍｍ以
下となる位置に配置されることが必要である。
【００２１】本発明の測定装置においては、細径管開口
部２を測定対象となる固形物表面に接触させて該固形物
表面と細径管内壁面とで空間部を形成し、該空間部内に
おける基質溶液のｐＨ変化をｐＨ電極によって測定す
る。すなわち、本発明の測定装置は、該固形物表面上に
存在する酵素と該空間部内に存在する基質溶液中の基質
が固形物表面にて反応することに伴って生じるｐＨ変化
をｐＨ電極によって捉えるので、ｐＨ電極のｐＨ感応部
と固形物表面の距離は小さいことが好ましく、従ってｐ
Ｈ感応部の先端と細径管開口部２との距離Ｌは短いこと
が好ましい。この距離Ｌが５ｍｍを越えると基質の反応
に対するｐＨ電極の応答速度が遅くなる。またｐＨ感応
部の先端が細径管開口部２から外に露出すると、ｐＨ感
応部が固形物表面に直接接触することとなり該電極の破
損や汚染を招くのみならず、酵素の測定時に形成される
上記空間部の液密性が破られ、基質の反応および該空間
部における基質溶液のｐＨ変化が外部からの影響を受け
るので、酵素を正確に測定することができなくなる。通
常、ｐＨ感応部と細径管開口部との距離Ｌは、０．１〜
５ｍｍであり、０．１〜１．０ｍｍとなることが好まし
い。
部２を測定対象となる固形物表面に接触させて該固形物
表面と細径管内壁面とで空間部を形成し、該空間部内に
おける基質溶液のｐＨ変化をｐＨ電極によって測定す
る。すなわち、本発明の測定装置は、該固形物表面上に
存在する酵素と該空間部内に存在する基質溶液中の基質
が固形物表面にて反応することに伴って生じるｐＨ変化
をｐＨ電極によって捉えるので、ｐＨ電極のｐＨ感応部
と固形物表面の距離は小さいことが好ましく、従ってｐ
Ｈ感応部の先端と細径管開口部２との距離Ｌは短いこと
が好ましい。この距離Ｌが５ｍｍを越えると基質の反応
に対するｐＨ電極の応答速度が遅くなる。またｐＨ感応
部の先端が細径管開口部２から外に露出すると、ｐＨ感
応部が固形物表面に直接接触することとなり該電極の破
損や汚染を招くのみならず、酵素の測定時に形成される
上記空間部の液密性が破られ、基質の反応および該空間
部における基質溶液のｐＨ変化が外部からの影響を受け
るので、酵素を正確に測定することができなくなる。通
常、ｐＨ感応部と細径管開口部との距離Ｌは、０．１〜
５ｍｍであり、０．１〜１．０ｍｍとなることが好まし
い。
【００２２】図２に第２の装置例を示す。この例におい
ては、細径管１は第１の管状体１’と第２の管状体１”
とで構成されており、第１の管状体１’の先端部に第２
の管状体１”がネジ部１４によって取り付けられてい
る。第２の管状体１”には、内部に固定部１５が設けら
れており、該固定部１５はｐＨ電極３に接続されたリー
ド線部５を挟持することによってｐＨ電極３を固定して
いる。なお、必要に応じてリード線部５と固定部１５と
を接着剤により接着固定してもよく、また、リード線部
５と、固定部１５との間にＯリングを介在させてもよ
い。また、第２の管状体１”には、固定部１５に隣接し
て基質溶液流路１６が設けられている。このように第２
の管状体１”はｐＨ電極３のホルダとしての機能を兼ね
備えている。その他の構成については図１に示した装置
と同様であり、同一部分または相当部分に同一の符号を
付してその説明を省略する。なお、図２の上部にはＡ−
Ａ線の断面図を示す。
ては、細径管１は第１の管状体１’と第２の管状体１”
とで構成されており、第１の管状体１’の先端部に第２
の管状体１”がネジ部１４によって取り付けられてい
る。第２の管状体１”には、内部に固定部１５が設けら
れており、該固定部１５はｐＨ電極３に接続されたリー
ド線部５を挟持することによってｐＨ電極３を固定して
いる。なお、必要に応じてリード線部５と固定部１５と
を接着剤により接着固定してもよく、また、リード線部
５と、固定部１５との間にＯリングを介在させてもよ
い。また、第２の管状体１”には、固定部１５に隣接し
て基質溶液流路１６が設けられている。このように第２
の管状体１”はｐＨ電極３のホルダとしての機能を兼ね
備えている。その他の構成については図１に示した装置
と同様であり、同一部分または相当部分に同一の符号を
付してその説明を省略する。なお、図２の上部にはＡ−
Ａ線の断面図を示す。
【００２３】本発明においては、基質溶液と反応して基
質溶液のｐＨを変化させる能力を有する酵素が測定対象
となる。かかる酵素としては、例えば、 H. pyloriが分
泌するウレアーゼなど、生体内の各種臓器あるいは固形
培地等の固形物表面に生息する微生物が分泌する酵素、
該微生物の細胞膜上に発現している酵素、あるいは各種
臓器から分泌される酵素などが挙げられる。なお、微生
物の生体内の酵素であっても、基質溶液と反応して基質
溶液のｐＨを変化させるものであれば、本発明の測定対
象となる。本発明によれば上記のように微生物が分泌す
る酵素、該微生物の細胞膜上に発現している酵素等を測
定することにより固形物表面の特定箇所における当該微
生物の存在の有無を判断することができる。
質溶液のｐＨを変化させる能力を有する酵素が測定対象
となる。かかる酵素としては、例えば、 H. pyloriが分
泌するウレアーゼなど、生体内の各種臓器あるいは固形
培地等の固形物表面に生息する微生物が分泌する酵素、
該微生物の細胞膜上に発現している酵素、あるいは各種
臓器から分泌される酵素などが挙げられる。なお、微生
物の生体内の酵素であっても、基質溶液と反応して基質
溶液のｐＨを変化させるものであれば、本発明の測定対
象となる。本発明によれば上記のように微生物が分泌す
る酵素、該微生物の細胞膜上に発現している酵素等を測
定することにより固形物表面の特定箇所における当該微
生物の存在の有無を判断することができる。
【００２４】細径管１内に供給される基質溶液は、測定
対象となる酵素の作用を受けてｐＨ変化を誘引する基質
を含む溶液が使用され、該酵素に応じたものを使用する
必要がある。かかる酵素と基質の組み合わせとしては、
例えばアルコールデヒドロゲナーゼ／アルコール、グル
コースオキシダーゼ／グルコース、カテコールオキシダ
ーゼ／カテコール、ＮＡＤＨペルオキシダーゼ／ＮＡＤ
Ｈ、トリアシルグリセロール／リパーゼ、アセチルエス
テラーゼ／酢酸エステル、アセチルコリンエステラーゼ
／アセチルコリン、グルコノラクトナーゼ／グルコノラ
クトン、アルカリフォスファターゼ／ｐ−ニトロフェノ
ールリン酸、アリルサルファターゼ／アリルサルフェー
ト、ウレアーゼ／尿素等を挙げることができる。
対象となる酵素の作用を受けてｐＨ変化を誘引する基質
を含む溶液が使用され、該酵素に応じたものを使用する
必要がある。かかる酵素と基質の組み合わせとしては、
例えばアルコールデヒドロゲナーゼ／アルコール、グル
コースオキシダーゼ／グルコース、カテコールオキシダ
ーゼ／カテコール、ＮＡＤＨペルオキシダーゼ／ＮＡＤ
Ｈ、トリアシルグリセロール／リパーゼ、アセチルエス
テラーゼ／酢酸エステル、アセチルコリンエステラーゼ
／アセチルコリン、グルコノラクトナーゼ／グルコノラ
クトン、アルカリフォスファターゼ／ｐ−ニトロフェノ
ールリン酸、アリルサルファターゼ／アリルサルフェー
ト、ウレアーゼ／尿素等を挙げることができる。
【００２５】また、基質溶液としてはｐＨ電極の洗浄溶
液、ｐＨ測定時の基準となるｐＨ標準溶液、さらにはｐ
Ｈ電極と比較電極が図１における如く離れている場合に
はその間の塩橋としての機能も兼ね備えていることが望
ましく、適当なｐＨ緩衝能と電気伝導度を有しているこ
とが好ましい。かかるｐＨ緩衝能および電気伝導度は測
定対象となる酵素および固形物に応じ、実際の測定条件
を考慮したうえで適宜設定すればよい。また本発明の装
置をヒトの体内に挿入して使用する場合には基質溶液も
体内に注入されることになるので、当然のことながら毒
性や安全性の面で問題のないものを使用することが必要
となる。
液、ｐＨ測定時の基準となるｐＨ標準溶液、さらにはｐ
Ｈ電極と比較電極が図１における如く離れている場合に
はその間の塩橋としての機能も兼ね備えていることが望
ましく、適当なｐＨ緩衝能と電気伝導度を有しているこ
とが好ましい。かかるｐＨ緩衝能および電気伝導度は測
定対象となる酵素および固形物に応じ、実際の測定条件
を考慮したうえで適宜設定すればよい。また本発明の装
置をヒトの体内に挿入して使用する場合には基質溶液も
体内に注入されることになるので、当然のことながら毒
性や安全性の面で問題のないものを使用することが必要
となる。
【００２６】次に本発明装置を用いた測定方法について
説明する。本発明の測定方法の基本的な操作は、次のス
テップからなる。 （１）細径管内に基質溶液を導入し、測定前のｐＨ電極
の出力電位を一定に保つ、（２）細径管の先端開口部を
測定対象である固形物表面の特定箇所に接触させて固形
物表面と細径管の内壁面とで空間部を形成すると共に、
該空間部内に基質溶液を導入して該固形物表面に接触さ
せる、（３）基質溶液の導入を停止して、ｐＨ感応部の
先端が該空間部内であって、かつ細径管の先端開口部か
らの距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されたｐＨ電極
を用いて、固形物表面における基質の反応に基づく基質
溶液のｐＨ変化を測定する。
説明する。本発明の測定方法の基本的な操作は、次のス
テップからなる。 （１）細径管内に基質溶液を導入し、測定前のｐＨ電極
の出力電位を一定に保つ、（２）細径管の先端開口部を
測定対象である固形物表面の特定箇所に接触させて固形
物表面と細径管の内壁面とで空間部を形成すると共に、
該空間部内に基質溶液を導入して該固形物表面に接触さ
せる、（３）基質溶液の導入を停止して、ｐＨ感応部の
先端が該空間部内であって、かつ細径管の先端開口部か
らの距離が５ｍｍ以下となる位置に配置されたｐＨ電極
を用いて、固形物表面における基質の反応に基づく基質
溶液のｐＨ変化を測定する。
【００２７】即ち、図１において細径管開口部２が開放
された状態で送液手段８を作動させて基質溶液を液溜め
９より送液管７、アダプタ６を経て、細径管１の内部へ
供給し、細径管内部とｐＨ電極３を洗浄する。かかる状
態においてｐＨ電極３の出力電位を読み取り、これをベ
ースライン電位とする。ついで送液手段８を停止して、
基質溶液の供給を停止するのとほぼ同時に細径管開口部
２を測定対象の固形物に接触させる。かくして固形物表
面と細径管の内壁面とで形成された空間部内には基質溶
液が満たされることとなる。図３にその時の状態の概略
図を示す。かかる状態で基質溶液のｐＨ変化を測定す
る。測定対象の固形物１７の表面上に被検出酵素が存在
すればそれによって該空間部内に存在する基質溶液中の
基質が反応し、該基質溶液のｐＨが変化する。それに伴
うｐＨ電極の出力電位を読み取り、上で求めたベースラ
イン電位との電位差を尺度として、酵素の測定を行う。
この場合、上記電位差の平衡値を利用する方法、上記電
位差の立ち上がり初速度を利用する方法、あるいは決め
られた時間内に得られた上記電位差を利用する方法、さ
らには決められた時間内における電位差の変化速度の最
大値を利用する方法等を選択することが可能である。な
お、あらかじめ検量線を作成しておき、該検量線に基づ
いて定量的測定を行うこともできる。
された状態で送液手段８を作動させて基質溶液を液溜め
９より送液管７、アダプタ６を経て、細径管１の内部へ
供給し、細径管内部とｐＨ電極３を洗浄する。かかる状
態においてｐＨ電極３の出力電位を読み取り、これをベ
ースライン電位とする。ついで送液手段８を停止して、
基質溶液の供給を停止するのとほぼ同時に細径管開口部
２を測定対象の固形物に接触させる。かくして固形物表
面と細径管の内壁面とで形成された空間部内には基質溶
液が満たされることとなる。図３にその時の状態の概略
図を示す。かかる状態で基質溶液のｐＨ変化を測定す
る。測定対象の固形物１７の表面上に被検出酵素が存在
すればそれによって該空間部内に存在する基質溶液中の
基質が反応し、該基質溶液のｐＨが変化する。それに伴
うｐＨ電極の出力電位を読み取り、上で求めたベースラ
イン電位との電位差を尺度として、酵素の測定を行う。
この場合、上記電位差の平衡値を利用する方法、上記電
位差の立ち上がり初速度を利用する方法、あるいは決め
られた時間内に得られた上記電位差を利用する方法、さ
らには決められた時間内における電位差の変化速度の最
大値を利用する方法等を選択することが可能である。な
お、あらかじめ検量線を作成しておき、該検量線に基づ
いて定量的測定を行うこともできる。
【００２８】測定終了後、細径管開口部２を固形物表面
から離して再び送液手段を作動させて基質溶液を液溜め
より細径管内に供給し、細径管内部とｐＨ電極の洗浄お
よびｐＨ電極のベースライン電位の読み取りを行い、次
回以降の測定に備える。
から離して再び送液手段を作動させて基質溶液を液溜め
より細径管内に供給し、細径管内部とｐＨ電極の洗浄お
よびｐＨ電極のベースライン電位の読み取りを行い、次
回以降の測定に備える。
【００２９】かかる測定方法では、検体を採取する必要
がなく、測定対象である固形物表面の特定箇所における
酵素をその場で直接測定することができる。しかも、固
形物の表面に存在する酵素の量に応じて基質溶液のｐＨ
変化が生じ、ｐＨ変化から酵素を定性的もしくは定量的
に測定できるので、検出限界が高く、かつ信頼性の高い
測定結果が得られる。また検出手段としてｐＨ電極を使
用しているので、迅速にかつ簡便に酵素の測定を行うこ
とができる。
がなく、測定対象である固形物表面の特定箇所における
酵素をその場で直接測定することができる。しかも、固
形物の表面に存在する酵素の量に応じて基質溶液のｐＨ
変化が生じ、ｐＨ変化から酵素を定性的もしくは定量的
に測定できるので、検出限界が高く、かつ信頼性の高い
測定結果が得られる。また検出手段としてｐＨ電極を使
用しているので、迅速にかつ簡便に酵素の測定を行うこ
とができる。
【００３０】さらに、本発明の測定方法によれば、測定
箇所を変更しながら上記（１）〜（３）の操作を繰り返
すことによって、固形物表面における複数箇所の酵素を
順次測定することが可能であり、特に臨床現場におい
て、診断時に測定結果を見ながら異なる箇所における測
定を続けて行うことが可能となり、極めて有用である。
箇所を変更しながら上記（１）〜（３）の操作を繰り返
すことによって、固形物表面における複数箇所の酵素を
順次測定することが可能であり、特に臨床現場におい
て、診断時に測定結果を見ながら異なる箇所における測
定を続けて行うことが可能となり、極めて有用である。
【００３１】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例により
なんら限定されるものではない。
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例により
なんら限定されるものではない。
【００３２】実施例 （１）測定装置の製作 図２に示したような装置を製作した。ｐＨ電極３として
は、特公昭５７−４３８６３号公報第７欄第７行〜第９
欄第６行に記載の方法に基づいて製造された全周絶縁型
のｐＨ−ＦＥＴのゲート部に、タンタル酸化物をｐＨ感
応膜として蒸着したものを用いた。このｐＨ−ＦＥＴの
全体の寸法は長さ５．５ｍｍ、幅０．４５ｍｍ、厚み
０．１５ｍｍで、その先端０．８ｍｍの部分にゲート部
（ｐＨ感応面）が設けられている。このｐＨ−ＦＥＴの
先端約１．５ｍｍを露出させ、残りの部分を樹脂で絶縁
した。細径管である第１の管状体１’としては内径１．
０ｍｍ、外径１．５ｍｍ、長さ１６０ｃｍのポリテトラ
フルオロエチレン製チューブを用いた。該細径管（第１
の管状体１’）の先端部にｐＨ−ＦＥＴが収容されるよ
うに図２に示される構造の第２の管状体１”をステンレ
ス鋼で作成した。管状体１”の先端開口部の内径は１．
１ｍｍ、外径は管状体１’と同じ１．５ｍｍである。ま
た管状体１”の全長はネジ部１４を含めて１１ｍｍであ
る。ｐＨ−ＦＥＴの先端と細径管開口部２との距離Ｌが
０．２ｍｍとなるようにｐＨ−ＦＥＴをそのリード線部
５を固定部１５にて挟持することによって固定した。比
較電極としては銀−塩化銀型の液絡式比較電極を用い、
アダプター内に設置した（図示せず）。ポンプ（図示せ
ず）としてはペリスタポンプを用い流速を０．５ｍｌ／
分に設定した。使用したｐＨ−ＦＥＴのｐＨ感度は２５
℃で５８ｍＶ／ｐＨ、相互コンダクタンスは３５０マイ
クロジーメンスであった。なお、以下の測定においては
ｐＨ−ＦＥＴの出力電位として比較電極を基準とするｐ
Ｈ−ＦＥＴのソースの電位（以下これをソース電位と略
称する）を測定した。
は、特公昭５７−４３８６３号公報第７欄第７行〜第９
欄第６行に記載の方法に基づいて製造された全周絶縁型
のｐＨ−ＦＥＴのゲート部に、タンタル酸化物をｐＨ感
応膜として蒸着したものを用いた。このｐＨ−ＦＥＴの
全体の寸法は長さ５．５ｍｍ、幅０．４５ｍｍ、厚み
０．１５ｍｍで、その先端０．８ｍｍの部分にゲート部
（ｐＨ感応面）が設けられている。このｐＨ−ＦＥＴの
先端約１．５ｍｍを露出させ、残りの部分を樹脂で絶縁
した。細径管である第１の管状体１’としては内径１．
０ｍｍ、外径１．５ｍｍ、長さ１６０ｃｍのポリテトラ
フルオロエチレン製チューブを用いた。該細径管（第１
の管状体１’）の先端部にｐＨ−ＦＥＴが収容されるよ
うに図２に示される構造の第２の管状体１”をステンレ
ス鋼で作成した。管状体１”の先端開口部の内径は１．
１ｍｍ、外径は管状体１’と同じ１．５ｍｍである。ま
た管状体１”の全長はネジ部１４を含めて１１ｍｍであ
る。ｐＨ−ＦＥＴの先端と細径管開口部２との距離Ｌが
０．２ｍｍとなるようにｐＨ−ＦＥＴをそのリード線部
５を固定部１５にて挟持することによって固定した。比
較電極としては銀−塩化銀型の液絡式比較電極を用い、
アダプター内に設置した（図示せず）。ポンプ（図示せ
ず）としてはペリスタポンプを用い流速を０．５ｍｌ／
分に設定した。使用したｐＨ−ＦＥＴのｐＨ感度は２５
℃で５８ｍＶ／ｐＨ、相互コンダクタンスは３５０マイ
クロジーメンスであった。なお、以下の測定においては
ｐＨ−ＦＥＴの出力電位として比較電極を基準とするｐ
Ｈ−ＦＥＴのソースの電位（以下これをソース電位と略
称する）を測定した。
【００３３】（２）寒天培地上の H. pylori由来のウレ
アーゼの測定 馬血清（コスモバイオ社製、８０１−５０）を７％含有
するブルセラＨＫ寒天培地（極東製薬工業社製）に H.
pylori ＮＣＴＣ１１６３７（文献：ANTIMICROBIAL AG
ENTS AND CHEMOTHERAPY, Vol.37, P769-774(1993) 参
照）を植え付け、３７℃にて、酸素１０％、炭酸ガス１
０％、窒素８０％からなる混合ガス雰囲気下で３日間培
養を行った。このようにして H. pylori ＮＣＴＣ１１
６３７の培養を行った寒天培地（以下これを「H. pylor
i 培養培地」と略称する）表面のウレアーゼの測定を上
記（１）で組み立てた装置を用いて行った。基質溶液と
して、尿素１５５ｍＭ、塩化アンモニウム１０ｍＭ、食
塩１５４ｍＭを含む溶液（ｐＨ５．５）を使用し、ペリ
スタポンプを駆動して基質溶液を細径管内に３０秒間供
給し、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位が定常になるのを確認
し、これをベースライン電位としてＣＰＵに記憶させ
た。次に細径管開口部を H. pylori培養培地の表面に接
触させ、同時にペリスタポンプを停止し、その直後から
３０秒間にわたり、０．１秒間隔でｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位を読み取り、合計３００個のデータをＣＰＵに記
憶させた。かかるデータからｐＨ−ＦＥＴのソース電位
の最大変化速度を計算した。この後、細径管先端開口部
を H. pylori培養培地表面から離し、次回以降の測定に
備えた。次に、 H. pylori培養培地表面の他の２箇所に
おいて、上記と同様の操作を行い、ｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位の最大変化速度を計算した。また、 H. pyloriの
植え付けを行っていない、馬血清（コスモバイオ社製、
８０１−５０）を７％含有するブルセラＨＫ寒天培地
（極東製薬工業社製）（以下これを「対照培地」と略称
する）表面の３箇所において、上記と同様の操作を行
い、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度を計算し
た。その結果、 H. pylori培養培地表面でのｐＨ−ＦＥ
Ｔのソース電位の最大変化速度は、１．５２ｍＶ／ｓｅ
ｃ、１．６０ｍＶ／ｓｅｃおよび２．５８ｍＶ／ｓｅｃ
であった。これに対し対照培地表面でのｐＨ−ＦＥＴの
ソース電位の最大変化速度は、０．２５ｍＶ／ｓｅｃ、
０．３２ｍＶ／ｓｅｃおよび０．２７ｍＶ／ｓｅｃであ
った。このように、 H. pylori培養培地表面と対照培地
表面とでは、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度
に明瞭な差異が観測され、 H. pylori由来のウレアーゼ
の存在を確認することができた。
アーゼの測定 馬血清（コスモバイオ社製、８０１−５０）を７％含有
するブルセラＨＫ寒天培地（極東製薬工業社製）に H.
pylori ＮＣＴＣ１１６３７（文献：ANTIMICROBIAL AG
ENTS AND CHEMOTHERAPY, Vol.37, P769-774(1993) 参
照）を植え付け、３７℃にて、酸素１０％、炭酸ガス１
０％、窒素８０％からなる混合ガス雰囲気下で３日間培
養を行った。このようにして H. pylori ＮＣＴＣ１１
６３７の培養を行った寒天培地（以下これを「H. pylor
i 培養培地」と略称する）表面のウレアーゼの測定を上
記（１）で組み立てた装置を用いて行った。基質溶液と
して、尿素１５５ｍＭ、塩化アンモニウム１０ｍＭ、食
塩１５４ｍＭを含む溶液（ｐＨ５．５）を使用し、ペリ
スタポンプを駆動して基質溶液を細径管内に３０秒間供
給し、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位が定常になるのを確認
し、これをベースライン電位としてＣＰＵに記憶させ
た。次に細径管開口部を H. pylori培養培地の表面に接
触させ、同時にペリスタポンプを停止し、その直後から
３０秒間にわたり、０．１秒間隔でｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位を読み取り、合計３００個のデータをＣＰＵに記
憶させた。かかるデータからｐＨ−ＦＥＴのソース電位
の最大変化速度を計算した。この後、細径管先端開口部
を H. pylori培養培地表面から離し、次回以降の測定に
備えた。次に、 H. pylori培養培地表面の他の２箇所に
おいて、上記と同様の操作を行い、ｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位の最大変化速度を計算した。また、 H. pyloriの
植え付けを行っていない、馬血清（コスモバイオ社製、
８０１−５０）を７％含有するブルセラＨＫ寒天培地
（極東製薬工業社製）（以下これを「対照培地」と略称
する）表面の３箇所において、上記と同様の操作を行
い、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度を計算し
た。その結果、 H. pylori培養培地表面でのｐＨ−ＦＥ
Ｔのソース電位の最大変化速度は、１．５２ｍＶ／ｓｅ
ｃ、１．６０ｍＶ／ｓｅｃおよび２．５８ｍＶ／ｓｅｃ
であった。これに対し対照培地表面でのｐＨ−ＦＥＴの
ソース電位の最大変化速度は、０．２５ｍＶ／ｓｅｃ、
０．３２ｍＶ／ｓｅｃおよび０．２７ｍＶ／ｓｅｃであ
った。このように、 H. pylori培養培地表面と対照培地
表面とでは、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度
に明瞭な差異が観測され、 H. pylori由来のウレアーゼ
の存在を確認することができた。
【００３４】（３）胃粘膜上のウレアーゼの測定 次に上記の装置を用いてヒトの胃潰瘍患部に生息する
H. pyloriの産生するウレアーゼの測定を行った。まず
前記（１）で製作した装置を内部に備えた内視鏡を患者
の胃内に挿入し、上記（２）で使用したのと同じ基質溶
液を細径管に３０秒間供給してｐＨ−ＦＥＴのソース電
位が定常になるのを確認し、これをベースライン電位と
してＣＰＵに記憶させた。その後細径管開口部を胃体部
の内壁面に接触させると同時に基質溶液の供給を停止し
た。ついで３０秒間、０．１秒間隔でｐＨ−ＦＥＴのソ
ース電位を読み取り、合計３００個のデータをＣＰＵに
記憶させた。この後、細径管先端開口部を胃体部の内壁
面から離し、次回以降の測定に備えた。上記で得られた
ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の値をもとにして、ｐＨ−Ｆ
ＥＴのソース電位の最大変化速度を計算した。また、別
途、上記の操作において細径管先端開口部を接触させた
箇所とほぼ同じ場所の胃粘膜組織片を採取し、 H. pylo
riの培養試験を行った。さらに、幽門部の内壁面におい
て、上記と同様の操作により、ｐＨ−ＦＥＴのソース電
位の値の読み取りを行い、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の
最大変化速度を計算した。また、上記と同様にして、
H. pyloriの培養試験を行った。これら胃体部および幽
門部の内壁面におけるｐＨ−ＦＥＴのソース電位の値の
読み取り、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度の
計算、および H. pyloriの培養試験を全部で６人の胃潰
瘍患者について行った。得られたｐＨ−ＦＥＴのソース
電位の最大変化速度の値と H. pyloriの培養試験の結果
を表１に示した。
H. pyloriの産生するウレアーゼの測定を行った。まず
前記（１）で製作した装置を内部に備えた内視鏡を患者
の胃内に挿入し、上記（２）で使用したのと同じ基質溶
液を細径管に３０秒間供給してｐＨ−ＦＥＴのソース電
位が定常になるのを確認し、これをベースライン電位と
してＣＰＵに記憶させた。その後細径管開口部を胃体部
の内壁面に接触させると同時に基質溶液の供給を停止し
た。ついで３０秒間、０．１秒間隔でｐＨ−ＦＥＴのソ
ース電位を読み取り、合計３００個のデータをＣＰＵに
記憶させた。この後、細径管先端開口部を胃体部の内壁
面から離し、次回以降の測定に備えた。上記で得られた
ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の値をもとにして、ｐＨ−Ｆ
ＥＴのソース電位の最大変化速度を計算した。また、別
途、上記の操作において細径管先端開口部を接触させた
箇所とほぼ同じ場所の胃粘膜組織片を採取し、 H. pylo
riの培養試験を行った。さらに、幽門部の内壁面におい
て、上記と同様の操作により、ｐＨ−ＦＥＴのソース電
位の値の読み取りを行い、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の
最大変化速度を計算した。また、上記と同様にして、
H. pyloriの培養試験を行った。これら胃体部および幽
門部の内壁面におけるｐＨ−ＦＥＴのソース電位の値の
読み取り、ｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度の
計算、および H. pyloriの培養試験を全部で６人の胃潰
瘍患者について行った。得られたｐＨ−ＦＥＴのソース
電位の最大変化速度の値と H. pyloriの培養試験の結果
を表１に示した。
【００３５】
【表１】
【００３６】なお表１においてソース電位の最大変化速
度は、基質溶液のｐＨがアルカリ側に変化する方向をプ
ラスとしている。表１から明らかなように、培養試験で
H. pyloriが認められない患者の胃粘膜におけるソース
電位のアルカリ側への最大変化速度は０．１ｍＶ／ｓｅ
ｃ以下である。これに対して H. pylori陽性の患者では
０．４ｍＶ／ｓｅｃ以上となる。これは、 H. pylori陰
性の胃粘膜上にはウレアーゼが存在しないか、存在して
も微量であるので、基質の分解すなわちｐＨのアルカリ
側への変化がわずかであるのに対して、 H. pylori陽性
の粘膜上には多量のウレアーゼが存在し、それによって
基質溶液のｐＨがアルカリ側に変化することを示してい
る。表１から本発明の装置および方法が、胃粘膜上のウ
レアーゼの存在、したがって H. pyloriの有無、さらに
はその生息の程度を測定するのに有効であることが明ら
かである。なお、 H. pylori陰性の胃粘膜上での最大電
位変化速度がマイナスになるケースが見られるが、これ
は胃粘膜のｐＨが本試験に用いられた基質溶液のｐＨ
（５．５）に比べて低いために、細径管先端内部の基質
溶液のｐＨが若干酸性側に変化したものと考えられる。
度は、基質溶液のｐＨがアルカリ側に変化する方向をプ
ラスとしている。表１から明らかなように、培養試験で
H. pyloriが認められない患者の胃粘膜におけるソース
電位のアルカリ側への最大変化速度は０．１ｍＶ／ｓｅ
ｃ以下である。これに対して H. pylori陽性の患者では
０．４ｍＶ／ｓｅｃ以上となる。これは、 H. pylori陰
性の胃粘膜上にはウレアーゼが存在しないか、存在して
も微量であるので、基質の分解すなわちｐＨのアルカリ
側への変化がわずかであるのに対して、 H. pylori陽性
の粘膜上には多量のウレアーゼが存在し、それによって
基質溶液のｐＨがアルカリ側に変化することを示してい
る。表１から本発明の装置および方法が、胃粘膜上のウ
レアーゼの存在、したがって H. pyloriの有無、さらに
はその生息の程度を測定するのに有効であることが明ら
かである。なお、 H. pylori陰性の胃粘膜上での最大電
位変化速度がマイナスになるケースが見られるが、これ
は胃粘膜のｐＨが本試験に用いられた基質溶液のｐＨ
（５．５）に比べて低いために、細径管先端内部の基質
溶液のｐＨが若干酸性側に変化したものと考えられる。
【００３７】比較例 ｐＨ−ＦＥＴの先端と細径管開口部との距離が６ｍｍと
なるようにｐＨ−ＦＥＴを固定すること以外は、実施例
における（１）と同様にして測定装置を製作し、実施例
における（２）および（３）と同様にして、寒天培地上
の H. pylori由来のウレアーゼの測定および胃粘膜上の
ウレアーゼの測定を行った。その結果、 H. pylori培養
培地表面でのｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度
は、０．２４ｍＶ／ｓｅｃ、０．３６ｍＶ／ｓｅｃおよ
び０．３８ｍＶ／ｓｅｃであった。これに対し対照培地
表面でのｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度は、
０．３０ｍＶ／ｓｅｃ、０．２６ｍＶ／ｓｅｃおよび
０．２７ｍＶ／ｓｅｃであった。このように、 H. pylo
ri培養培地表面と対照培地表面とでｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位の最大変化速度に明瞭な差異が観測されず、 H.
pylori由来のウレアーゼの存在を確認することができな
かった。また、胃粘膜上におけるｐＨ−ＦＥＴのソース
電位の最大変化速度は、 H. pyloriの培養試験が陰性、
陽性いずれの場所でも０．１ｍＶ／ｓｅｃ以下であり、
胃粘膜上のウレアーゼの存在を検出することもできなか
った。
なるようにｐＨ−ＦＥＴを固定すること以外は、実施例
における（１）と同様にして測定装置を製作し、実施例
における（２）および（３）と同様にして、寒天培地上
の H. pylori由来のウレアーゼの測定および胃粘膜上の
ウレアーゼの測定を行った。その結果、 H. pylori培養
培地表面でのｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度
は、０．２４ｍＶ／ｓｅｃ、０．３６ｍＶ／ｓｅｃおよ
び０．３８ｍＶ／ｓｅｃであった。これに対し対照培地
表面でのｐＨ−ＦＥＴのソース電位の最大変化速度は、
０．３０ｍＶ／ｓｅｃ、０．２６ｍＶ／ｓｅｃおよび
０．２７ｍＶ／ｓｅｃであった。このように、 H. pylo
ri培養培地表面と対照培地表面とでｐＨ−ＦＥＴのソー
ス電位の最大変化速度に明瞭な差異が観測されず、 H.
pylori由来のウレアーゼの存在を確認することができな
かった。また、胃粘膜上におけるｐＨ−ＦＥＴのソース
電位の最大変化速度は、 H. pyloriの培養試験が陰性、
陽性いずれの場所でも０．１ｍＶ／ｓｅｃ以下であり、
胃粘膜上のウレアーゼの存在を検出することもできなか
った。
【００３８】
【発明の効果】本発明の装置を用いた測定方法によれ
ば、測定対象となる固形物上の特定箇所における酵素
を、その場で直接、測定することが可能であり、該固形
物表面上に存在する微生物等を容易にかつ簡便に検出す
ることができる。
ば、測定対象となる固形物上の特定箇所における酵素
を、その場で直接、測定することが可能であり、該固形
物表面上に存在する微生物等を容易にかつ簡便に検出す
ることができる。
【図１】本発明の測定装置の一例の概略構成を示す図で
ある。
ある。
【図２】本発明の測定装置の他の一例における細径管先
端部の概略構成（下図）およびＡ−Ａ線断面図（上図）
を示す図である。
端部の概略構成（下図）およびＡ−Ａ線断面図（上図）
を示す図である。
【図３】本発明の測定方法を実施した状態を示す概略図
である。
である。
１ 細径管 １’第１の管状体 １”第２の管状体 ２ 細径管開口部 ３ ｐＨ電極 ４ ホルダ ５ リード線部 ６ アダプタ ７ 送液管 ８ 送液手段 ９ 液溜め １０ 比較電極 １１ 出力電位読み取り手段 １２ 表示装置 １３ ＣＰＵ １４ ネジ部 １５ 固定部 １６ 基質溶液流路 １７ 固形物
【手続補正書】
【提出日】平成６年１１月２２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２４】 細径管１内に供給される基質溶液は、測
定対象となる酵素の作用を受けてｐＨ変化を誘引する基
質を含む溶液が使用され、該酵素に応じたものを使用す
る必要がある。かかる酵素と基質の組み合わせとして
は、例えばアルコールデヒドロゲナーゼ／アルコール、
グルコースオキシダーゼ／グルコース、カテコールオキ
シダーゼ／カテコール、ＮＡＤＨペルオキシダーゼ／Ｎ
ＡＤＨ、リパーゼ／トリアシルグリセロール、アセチル
エステラーゼ／酢酸エステル、アセチルコリンエステラ
ーゼ／アセチルコリン、グルコノラクトナーゼ／グルコ
ノラクトン、アルカリフォスファターゼ／ｐ−ニトロフ
ェノールリン酸、アリルサルファターゼ／アリルサルフ
ェート、ウレアーゼ／尿素等を挙げることができる。
定対象となる酵素の作用を受けてｐＨ変化を誘引する基
質を含む溶液が使用され、該酵素に応じたものを使用す
る必要がある。かかる酵素と基質の組み合わせとして
は、例えばアルコールデヒドロゲナーゼ／アルコール、
グルコースオキシダーゼ／グルコース、カテコールオキ
シダーゼ／カテコール、ＮＡＤＨペルオキシダーゼ／Ｎ
ＡＤＨ、リパーゼ／トリアシルグリセロール、アセチル
エステラーゼ／酢酸エステル、アセチルコリンエステラ
ーゼ／アセチルコリン、グルコノラクトナーゼ／グルコ
ノラクトン、アルカリフォスファターゼ／ｐ−ニトロフ
ェノールリン酸、アリルサルファターゼ／アリルサルフ
ェート、ウレアーゼ／尿素等を挙げることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 27/416 (72)発明者 鶴田 仁志 岡山県倉敷市酒津2045の１ 株式会社クラ レ内 (72)発明者 郡 大裕 福井県吉田郡松岡町下合月23 福井医科大 学内 (72)発明者 加藤 卓次 福井県吉田郡松岡町下合月23 福井医科大 学内 (72)発明者 伊藤 重二 福井県吉田郡松岡町下合月23 福井医科大 学内
Claims (5)
- 【請求項１】 固形物表面に基質溶液を接触させて、該
基質溶液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固
形物表面に存在する酵素の測定方法であって、細径管の
先端開口部を測定対象とする固形物表面に接触させて固
形物表面と細径管の内壁面とで空間部を形成するととも
に、該空間部内に基質溶液を導入して該固形物表面に接
触させ、ｐＨ感応部の先端が該空間部内であって、かつ
細径管の先端開口部からの距離が５ｍｍ以下となる位置
に配置されたｐＨ電極を用いて、該空間部内における基
質溶液のｐＨ変化を測定することを特徴とする、固形物
表面に存在する酵素の測定方法。 - 【請求項２】 固形物表面が胃または十二指腸の内壁面
であり、酵素がウレアーゼであることを特徴とする請求
項１記載の測定方法。 - 【請求項３】 固形物表面に基質溶液を接触させて、該
基質溶液中の基質の反応に伴うｐＨ変化を利用した、固
形物表面に存在する酵素の測定装置であって、該測定装
置が細径管と、該細径管の内部に収容されたｐＨ電極
と、該細径管の先端開口部まで基質溶液を供給する送液
手段とを有し、該ｐＨ電極のｐＨ感応部の先端が該細径
管の内部であって、かつ細径管の先端開口部からの距離
が５ｍｍ以下となる位置に配置されて、該基質溶液のｐ
Ｈ変化を検出可能としたことを特徴とする酵素の測定装
置。 - 【請求項４】 ｐＨ電極がｐＨ感応性電界効果トランジ
スタである請求項３記載の測定装置。 - 【請求項５】 細径管の外径が３．５ｍｍ以下であるこ
とを特徴とする請求項３記載の測定装置。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6145327A JP2691510B2 (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 酵素の測定装置 |
| EP95300583A EP0685199B1 (en) | 1994-06-02 | 1995-01-31 | Method for assay of enzyme and apparatus therefor |
| US08/381,000 US5556760A (en) | 1994-06-02 | 1995-01-31 | Method for assaying urease |
| DE69515554T DE69515554T2 (de) | 1994-06-02 | 1995-01-31 | Testverfahren für Enzyme und Vorrichtung dafür |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6145327A JP2691510B2 (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 酵素の測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07328011A true JPH07328011A (ja) | 1995-12-19 |
| JP2691510B2 JP2691510B2 (ja) | 1997-12-17 |
Family
ID=15382608
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6145327A Expired - Fee Related JP2691510B2 (ja) | 1994-06-02 | 1994-06-02 | 酵素の測定装置 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5556760A (ja) |
| EP (1) | EP0685199B1 (ja) |
| JP (1) | JP2691510B2 (ja) |
| DE (1) | DE69515554T2 (ja) |
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| US7167748B2 (en) | 1996-01-08 | 2007-01-23 | Impulse Dynamics Nv | Electrical muscle controller |
| US9289618B1 (en) | 1996-01-08 | 2016-03-22 | Impulse Dynamics Nv | Electrical muscle controller |
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| JP3612675B2 (ja) * | 1997-06-05 | 2005-01-19 | 日本光電工業株式会社 | ｐＨ変化誘因性物質または生物体の測定装置及び測定方法 |
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