SE414410B - Medel for pavisande av neisseria gonorrheae genom dess oxidasaktivitet - Google Patents

Description

.721z927-2, 2 10 25 35 HO hjälpmedel som för läkaren underlättar valet av läkemedelsbehandling.

Behovet av ett enkelt och billigt diagnostiskt system som kan fungera ute på fältet, oberoende av bakteriologiska och mikroskopiska prov står utom tvivel. En av svårigheterna med att ge en snabb och till- förlitlig diagnos av infektioner hos män är att i begynnelseskedet en förvillande likhet med uretrit föreligger.

En uretralflytning hos män kan förekomma till följd av följande övriga orsaker: prostatit, trauma, Escherichia coli, stafylokocker, tuberkulos, balanit, förtärda uretralirriterande ämnen, kantaridin, grönsaker rika på oxalater och annat som kan åstadkomma uretralin- flammation. Pellagra, diabetes och gikt kan i vissa fall vara or- sakande. Trichomonas vaginalís kan i ansenlig mängd finnas i abakteriell uretrit. Entamoeba histolytica såsom orsak till uretralutsöndring på- träffas endast i närvaro av en rekto-uretral eller vesikal fistel.

Bilharzia är en metazoa som framkallar uretrít ganska ofta i endemíska områden. Sådana systemsjukdomar som tyfus, påssjuka, influensa och vattkoppor kan, om de är seprikemiska framkalla urezrit.

'Hos en procentuellt stor andel individer med kroniska uretral- flytningar är, även om de misstänks ha en gonorrêinfektion, det ej möjligt att påvisa Neisseria. Många av dessa behandlas som gonokock- infektioner och det är endast då de fortlever efter ett flertal tera- peutiska behandlingar som den abakteríella naturen kan erkännas.

Efterföljande noggrann undersökning av hela främre och bakre uretra och de övre urinvägarna kan avslöja att tecken på inflammation finns men att strukturella missbildningar ej är pre-dispositionella och vi- dare att etiologíska organismer är fullständigt frånvarande.

Man har uppskattat att 80 procent av ej specifika uretríder är abakteriella. Två former är prevalenta: den akuta typen, liknande akut gonorré, och den subakuta typen eller Welsch' typ. Abakteriella pyuriska tillstånd hos prostata och övre urinvägar har varit kända sedan länge, och ibland är uretriten förknippat med symptom som kan hänföras till de övre urinvägarna. Den akuta abakteriella uretriten tar vanligen sin början en till fem dagar efter förbindelsen. En rik- lig, varig utsöndring sker under det att meatus rödfärgas under sam- tidig dysuri. Inverkan på bakre uretra kan antydas av frekvensen, det trängande behovet och slutligen hematuri. Den kliniska bilden är så lik den som ges av gonorré att det är förbryllande då Neisseria ej kan demonstreras.

Differentialdiagnosen av en uretralflytning bygger på ute- slutande av de uretríder som uppträder i gonorré som ett första steg, 10 15 20 30 40 _fërg beroende på valet av använt reagens. Kompressen som är i 7213927-2 3 1 andra hand på andra bakterier, främmande kroppar, trauma, lokala neoplastiska och specifika inflammatoriska sjukdomar, överkänslighetsreaktioner, uretralsymptom hos systemsjukdomar och angrepp av protozoer, metazoer och svamp.

Föreliggande uppfinning avser därför ett medel för påvisande av Neisseria gonorrhea utan gramfärgning eller odling. Detta medel kännetecknas av en steril provsticka med fibrös topp för uppsamling av ett utsöndringsprov från en patient och ett rör av transparent plast med flexibla sidoväggar och en sluten ände, vari är placerad en torr, absorberande kompress som impregnerats med en p-fenylendiamin, som reagerar med Neisseria gonorrhea under framkallande av en färgförändring, och en lättkrossad ampull inne- hållande ett vattenhaltígt medium som aktiverar p-fenylendiaminen.

Det är lämpligt att p-fenylendiaminen utgöres av p-amino-dimetyl- -anilin-oxalat, N,N-dimetyl~p-fenylendiamin-dihydroklorid, N,X- -dimetyl-p-fenylendiamin-oxalat, N,N-dimetyl-p-fenylendiamin-mono- hydroklorid eller N,N,N',N'-tetrametyl-p-fenylendiamin-dihydro- klorid. En kompress eller bärare av något lämpligt material såsom dakronfibrer, bomullsfibrer eller något annat poröst material im- pregneras eller mättas med ett av dessa reagens under vissa, i det följande beskrivna betingelser och torkas sedan. Den förblir sedan i torrt tillstånd ända tills den aktiveras av det vattenhaltiga mediet.

Kompressen utgör den viktigaste komponenten i det diagnostis- ka systemet, då den innehåller den reaktiva kemikalie som kan identifiera gonokocken. I torrt tillstånd är en kompress som till- verkats enligt detta förfarande stabil och kan lagras länge. Den andra delen av systemet utgöres av vätmedlet som hålles åtskilt från kompressen genom att vara innesluten i en lättkrossad ampull. Då denna ampull krossas frigöras det vätmedel som finns däri, varige- nom reagenset i kompressen aktiveras. Kompressen bringas efter det 'att den sensibiliserats i kontakt med prcvet på toppen av uppsam- lingsstickan, reagerar med närvarande gonokocker och orsakar häri- 'genom att det prov som finns på provstickan antar en karakteristisk det närmaste färglös orsakar ej någon förväxlande reaktion då den ej som att till reagerar kolorimetriskt. Färgförändringen äger rum i det prov uppsamlats på_provstickan. Den reaktionstid som erfordras för ett positivt prov är vanligen av storleksordningen 30 sekunder. 7213927-2 10 15 25 30, '35_ Ä0 B Det vattenhaltiga medium, som finns i ampullen, kan utgöras .av vatten, fysiologisk salin, pH-buffertlösningar eller någon annan lösning eller kombination av lösningar, som ökar eller sen- sibiliserar oxidasreaktionen. En pH-reglering av det vattenhaltiga mediet är lämplig, så att autooxidation av reagenset förhindras i kompressen. Det föredragna pH-intervallet för det vattenhaltiga mediet är 6,5-7,2. För närmare beskrivning av det sätt på vilket testet utföres med hjälp av angivna reagens hänvisas till bifogade ritning, varpå fig l visar en vertikalvy av ett instrument, som är lämpligt vid påvisandet av Neisseria gonorrhea, varvid instru- mentet visas för användning vid ett test i den form det saluförts som ett förpackat system bestående av två huvuddelar; och fig 2 vi- sar en vertikalvy av det instrument som visas i fig 1 efter det att det använts vid ett test. _ På ritningen visas en yp av instrument som kan användas för utförande av föreliggande test, vari 10 utgör ett rör av transpa- rent, flexibel plast, vari placerats en kompress 12 av bomull im- pregnerad eller mättad med reagense: och tcrkad. Knmpressen vílarpå en lättkrossad glasampull lä placerad i rörets slutna ände och en hylsa 16 är placerad över rörets öppna ände. En steril provsticka med en topp 18 och ett plastskaft 20 som skall användas för att ta ett prov av exudatet är förseglad i en separat, steril förpack- ning 22, och röret och förpackningen packas samman i ett kuvert eller någon annan lämplig behållare (visas ej). Även om väggstruk- turen i plaströret är het för att bibehålla flexibel, har det normalt en tillräcklig styv- en väsentligen cylindrisk form och för at möjliggöra en lätt införing av provstickan efter det att ett exu- datprov tagits. Ampullen innehåller ett lämpligt vätmedel, såsom angivits, och är tillräckligt lättkrossad för att lätt kunna gå sönder då sidorna av det flexibla röret pressas inåt mellan tummen och pekfingret, varvid ampullen brister och vätskan däri kan väta ~ det material som impregnerats i kompressen, som normalt föres ned i vätskan och glasskärvorna då provstickan införes i röret. Dä -provstíckan som innehåller provet kommer i kontakt med kompressen börjar reaktionen mellan prov på stickan och reagens i kompressen omedelbart och, om gonokocker finns närvarande, förändrar provet på stickan färg, nêrmalt till purpur, rödorange eller mörkgrå, beroende på det reagens som användes i kompressen, och anger på så sätt ett positivt test. Reaktionstiden för att indikera ett positivt test är vanligen 30 till 120 sekunder. 10 15 20 25 30 35 40 7213927-2 ' 5 Tillverkningen av kompressen och framställningen av ett vattenhaltigt medium kan exempelvis ske enligt följande: l g N,N,N',N'-tetrametyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid sättes till 35 ml dest. vatten, som upphettats till kokning och där- efter fått svalna till rumstemperatur. Lösning åstadkommas genom hastig omröring. Därefter tillsättes 64 ml etanol och omröres.

Bomullsband, med bredden 1,9 cm och längden 50 cm, doppas därefter i den erhållna 1-procentiga lösningen och placeras på en nylon- sikt i horisontalläge och får lufttorka. De torkade handen skäres därefter till 1,U cm långa hitar. Dessa bildar komnresscrna.

En fysiologisk salinlïnning framställes genom att 0,85 g natriumklorid sättes till 99 ml des. vatten och pH ställes på 7,0. Denna lösning utgör vätmedlet. Lättkrossade ampuller innehål- lande 0,5 ml av denna lösning framställes, eftersom det är den mängd som erfordras för att på ett lämpligt sätt väta kompresserna på 1,9 X l,Ä cm. 5Ampullen, med en ungefärlig diameter av 7 mm och en längd av 35 mm placeras på botten av ett flexibelt plaströr med en unge- färlig inre diameter av 8 mm och en längd av 160 mm. En kompress som tillverkats enligt ovan rullas ihop och skjutes ned i röret så att den kommer i kontakt med ampullen. En teleskophylsa med en ungefärlig längd av 65 mm placeras över den öppna änden av plast- röret och täcker systemet.

En steril dakrontopp monterad på ett plastskaft av en ungefär- lig längd av 150 mm packas tillsammans med reagenssystemet denna kombination utgör det diagnostiska instrumentet. Denna prov- och sticka förvaras separat i en speciell, steril förpackning av glassine-papper.

Ovanstående två enheter som utgör en enda förpackning är av- sedda att säljas via norma_a farmaceutíska kanaler till läkare, kliniker och sjukhus och förpackningen är omedelbart tillgänglig för ett test och en snabb diagnos av patientens tillstånd. Då ett diagnostiskt test för gonorré skall utföras öppnas förpackningen och den sterila provstickan kan tas ut ur höljet och ett prov av exudet uppsamlas på toppen av provstickan. hylsan avlägsnas där- efter från plaströret och provstickan införas med toppen först i plaströret. Hylsan sättes därefter på igen. Det flexibla röret pressas därefter samman där ampullen finns, varvid denna krossas och dess innehåll frigöres. Samtidigt skjutes teleskophylsan ned varvid provstickan som innehåller prov tvingas i kontakt med i . 7213927-2 6 10 15 20 25 kompressen. Genom denna verkan tvingas också kompressen ned i vätmedlet varigenom systemet aktiveras. Om provet på provstickan blir purpurfärgat inom två minuter är detta ett positivt test för gonorré. Provstickan kan dras tillbaka från kompressen unge- fär 2,5 cm för att underlätta avläsningen av resultatet, dvs den föregående färgförändringen av provet på provstickan. En an- vändning av detta test ger därför läkaren en snabb och säker diagnostisk metod vid det första steget av differentialdiagnosen.

I För att ytterligare åskådliggöra känsligheten av detta system och dess förmåga att upptäcka gonokocker exakt på den punkt där provet uppsamlats på provstickan, upprepades detta förfarande och en kultur av Neisseria gonorrhea användes som ett representativt exempel på ett exudat enligt föregående exempel. I detta exempel användes provstickan för att samla upp några Få kolnnier från en odJing i en putrískâl. E11 identiskt förfarande utfördes med in- strumentet. En distinkt purpurfärgning av bakterierna på provstic- kan kunde observeras inom en minut. Den nästan färglösa kompressen och den vita bakgrunden av dakrontoppen gör identifikationen av organismerna på provstickan klar och distinkt, precis som med exudatet direkt från en patient.

Den amerikanska patentskriften 5 H50 129 beskriver lättkrossa- de ampuller för fraktande av reagens, men användningen av denna metod är specifikt riktad pä transportering av ett prov till ett laboratorium och användning av denna metod för att bevara livskraf- ten hos bakterier tills de kan odlas, under det att här avses ett diagnostiskt system som ej kräver odling. Det är ett direkt test.

Diagnosen göres då provet uppsamlas.

Claims (4)

7 121392?-2 __W Ü ggtentkrav

1. l._ Medel för pávisande av Neísserín gonorrhcu utan gram- färgning eller odling, k ä n n e t e c k n a t av en steril provstícka med fíbrös topp för uppsamlíng av ett utsöndringsprov frán en patient och ett rör av transparent plast med flexibla sídoväggar och en sluten ände, vari är placerad en torr, absor- berande kompress som impregnerats med en p-fenylendíamin, som reagerar med Neisseria gonorrhea under framkallande av en färg- förändring, och en lättkrossad ampull innehållande ett vatten- haltigt medium som aktiverar p-fenylendiaminen.

2. Medel enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att p-fenylendíaminen utgöres av p-amino-dimetyl-anílin-oxalat, N,N~dimetyl-p~feny1endíamin-díhydroklorid, N,N-dimety1-p-fenylen- diamín-oxalat, N,N-dímetyl-p-fenylendínmín-monohydroklorid eller N,N,N',N'~t0trnmotyl-p-Fcnylendinmín-dihydrokloríd.

3. Medel enligt krav I eller 2, k ä n n e t e c k n a t av att det vattenhaltíga medlet utgöres av vatten, fysiologisk salin eller en vuttenhaltíg huffertlösning med ett pH i området 6,5-7,2.

4. Medel enligt något av krav l-3, k ä n n e t e c k - n a t av att den steríla provstickan med fibrös topp är placerad i en förpackning för sig. ANFÖRDA PUBLIKATIONER: Storbritannien l 245 999 US 3 450 129 (128-2) Andra publikationer: Nature l78(1956), p. 703. Journal of general microbiology 25(l96l), p. 297.