JPH07278015A - ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 - Google Patents
ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤Info
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- JPH07278015A JPH07278015A JP6073246A JP7324694A JPH07278015A JP H07278015 A JPH07278015 A JP H07278015A JP 6073246 A JP6073246 A JP 6073246A JP 7324694 A JP7324694 A JP 7324694A JP H07278015 A JPH07278015 A JP H07278015A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- huti
- pharmaceutical preparation
- trypsin inhibitor
- liquid pharmaceutical
- liquid preparation
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 保存時の安定性に優れ、注射剤として適した
浸透圧を有するヒト尿性トリプシンインヒビター含有液
状製剤の提供。 【構成】 糖アルコールを含有することを特徴とするヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 【効果】 ヒト尿性トリプシンインヒビターの長期保存
時安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有す
る液状製剤を調製することができる。糖アルコールは、
ヒト尿性トリプシンインヒビターの凝集又は重合による
高分子体及び分解による低分子体の生成を抑制し、保存
時安定性を改善する効果が高い。
浸透圧を有するヒト尿性トリプシンインヒビター含有液
状製剤の提供。 【構成】 糖アルコールを含有することを特徴とするヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 【効果】 ヒト尿性トリプシンインヒビターの長期保存
時安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有す
る液状製剤を調製することができる。糖アルコールは、
ヒト尿性トリプシンインヒビターの凝集又は重合による
高分子体及び分解による低分子体の生成を抑制し、保存
時安定性を改善する効果が高い。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒト尿性トリプシンイ
ンヒビター含有液状製剤に関する。
ンヒビター含有液状製剤に関する。
【0002】
【従来の技術】ヒト尿性トリプシンインヒビター(ヒト
尿由来トリプシンインヒビター、以下HUTIという)
は、Prokschらによりヒト尿より初めてinta
ctな形で分離・精製された(J.Lab.Clin.
Med.,79,491,(1972))。同分子はシ
アル酸及び中性ヘキソースを数十%含む、分子量約67
Kd(ゲル濾過分析)、等電点2〜3の糖タンパク質で
ある(J.Lab.Clin.Med.,79,49
1,(1972)、日泌尿会誌、74,1627,(1
983),Proteinase Inhibitor
s,12,389,(1986),Biochim.B
iophys.Res.Commun.,109,12
47,(1982))。
尿由来トリプシンインヒビター、以下HUTIという)
は、Prokschらによりヒト尿より初めてinta
ctな形で分離・精製された(J.Lab.Clin.
Med.,79,491,(1972))。同分子はシ
アル酸及び中性ヘキソースを数十%含む、分子量約67
Kd(ゲル濾過分析)、等電点2〜3の糖タンパク質で
ある(J.Lab.Clin.Med.,79,49
1,(1972)、日泌尿会誌、74,1627,(1
983),Proteinase Inhibitor
s,12,389,(1986),Biochim.B
iophys.Res.Commun.,109,12
47,(1982))。
【0003】このHUTIは、膵酵素のトリプシン及び
キモトリプシンを特に強く阻害するが、AT−III (ア
ンチトロンビン−III )やFOY(メシル酸ガベキサー
ト)と異なり凝固・線溶系の酵素を全く或いは弱くしか
阻害しない(日薬理会誌、81,235,(198
3))。また、ライソゾーム膜の安定化効果をもつこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有するといわれている(麻酔、3
3,137,(1984))。
キモトリプシンを特に強く阻害するが、AT−III (ア
ンチトロンビン−III )やFOY(メシル酸ガベキサー
ト)と異なり凝固・線溶系の酵素を全く或いは弱くしか
阻害しない(日薬理会誌、81,235,(198
3))。また、ライソゾーム膜の安定化効果をもつこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有するといわれている(麻酔、3
3,137,(1984))。
【0004】以上の活性・作用を有することから、HU
TIは急性膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、
HUTI製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンド
トキシンショック時に対処する重篤な副作用のみられな
い製剤として使用されている。
TIは急性膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、
HUTI製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンド
トキシンショック時に対処する重篤な副作用のみられな
い製剤として使用されている。
【0005】現在HUTIは凍結乾燥製剤として市販さ
れ、使用時に注射用水に溶解して注射投与されている。
液状製剤は、凍結乾燥製剤に比べ使用時に溶解する必要
がなく簡便に投与できるという利点を有するが、一方で
溶液状態ではHUTIの活性が低下し保存中の安定性が
悪いという問題がある。また液状製剤をそのまま注射剤
として投与する場合、液状製剤の浸透圧は体液(血清)
と等張であることが望ましい。
れ、使用時に注射用水に溶解して注射投与されている。
液状製剤は、凍結乾燥製剤に比べ使用時に溶解する必要
がなく簡便に投与できるという利点を有するが、一方で
溶液状態ではHUTIの活性が低下し保存中の安定性が
悪いという問題がある。また液状製剤をそのまま注射剤
として投与する場合、液状製剤の浸透圧は体液(血清)
と等張であることが望ましい。
【0006】先に本発明者らは、HUTI含有液状製剤
の保存安定性を改善する目的で、低イオン強度、かつp
H7以下であることを特徴とするHUTI含有液状製剤
を提案している(特開平6−25011号公報)。
の保存安定性を改善する目的で、低イオン強度、かつp
H7以下であることを特徴とするHUTI含有液状製剤
を提案している(特開平6−25011号公報)。
【0007】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、保存
時の安定性に優れ、注射剤として適した浸透圧を有する
HUTI含有液状製剤を提供することにある。
時の安定性に優れ、注射剤として適した浸透圧を有する
HUTI含有液状製剤を提供することにある。
【0008】
【課題を解決するための手段】本発明者らはHUTIの
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れ、等張化された注射剤と
して最適な液状製剤を見出して本発明を完成した。
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れ、等張化された注射剤と
して最適な液状製剤を見出して本発明を完成した。
【0009】本発明は糖アルコールを含有することを特
徴とするHUTI含有液状製剤に関する。 (1)HUTI 本発明で使用されるHUTIは、尿由来、細胞培養由
来、遺伝子工学由来のいずれにも限定されない。また、
医薬品として適用可能な程度まで精製されておればよ
い。また本発明で使用されるHUTIは、遺伝子工学等
の手法によりアミノ酸配列の一部を欠失、置換、付加し
たものをも含む。HUTIの精製法としては陰イオン交
換体処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト
グラフィー、無機吸着剤処理、塩析、等電点沈澱法、キ
トサン処理、不溶性トリプシン処理等が知られている。
また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体処理、加熱処
理等を組み合わせてもよい(特開昭51−51579
号、同51−118810号、同56−99427号、
特開平5−9200号の各公報)。こうして得られるH
UTIは分子量6万〜7万程度(好ましくは6700
0)、等電点は2〜3程度、比活性は2000〜350
0単位/mg蛋白程度である。HUTI 1単位はトリ
プシン2μgに作用してトリプシン1μgの酵素活性を
阻害するHUTIの量である。
徴とするHUTI含有液状製剤に関する。 (1)HUTI 本発明で使用されるHUTIは、尿由来、細胞培養由
来、遺伝子工学由来のいずれにも限定されない。また、
医薬品として適用可能な程度まで精製されておればよ
い。また本発明で使用されるHUTIは、遺伝子工学等
の手法によりアミノ酸配列の一部を欠失、置換、付加し
たものをも含む。HUTIの精製法としては陰イオン交
換体処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト
グラフィー、無機吸着剤処理、塩析、等電点沈澱法、キ
トサン処理、不溶性トリプシン処理等が知られている。
また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体処理、加熱処
理等を組み合わせてもよい(特開昭51−51579
号、同51−118810号、同56−99427号、
特開平5−9200号の各公報)。こうして得られるH
UTIは分子量6万〜7万程度(好ましくは6700
0)、等電点は2〜3程度、比活性は2000〜350
0単位/mg蛋白程度である。HUTI 1単位はトリ
プシン2μgに作用してトリプシン1μgの酵素活性を
阻害するHUTIの量である。
【0010】(2)液状製剤 本発明の液状製剤は、HUTI及び糖アルコールを含有
することを特徴とする。本発明の液状製剤におけるHU
TIの濃度は、1,000〜100,000単位/ml
程度が例示される。本発明において糖アルコールは、ア
ルドース又はケトースなどを還元して得られるポリヒド
ロキシアルカンを意味し、例えばマンニトール、ソルビ
トール、キシリトール、グリセロールなどが例示され
る。好ましくはマンニトールである。本発明の液状製剤
における糖アルコールの濃度は、5〜100mg/ml
が例示されるが、好ましくは25〜75mg/ml、よ
り好ましくは40〜60mg/mlである。糖アルコー
ルを40〜60mg/mlの範囲で配合することによ
り、注射剤として適した浸透圧を有し、且つ長期間の保
存中もHUTI活性を保持し、重合体及び低分子分解物
を生成しにくい安定な液状製剤が得られる。
することを特徴とする。本発明の液状製剤におけるHU
TIの濃度は、1,000〜100,000単位/ml
程度が例示される。本発明において糖アルコールは、ア
ルドース又はケトースなどを還元して得られるポリヒド
ロキシアルカンを意味し、例えばマンニトール、ソルビ
トール、キシリトール、グリセロールなどが例示され
る。好ましくはマンニトールである。本発明の液状製剤
における糖アルコールの濃度は、5〜100mg/ml
が例示されるが、好ましくは25〜75mg/ml、よ
り好ましくは40〜60mg/mlである。糖アルコー
ルを40〜60mg/mlの範囲で配合することによ
り、注射剤として適した浸透圧を有し、且つ長期間の保
存中もHUTI活性を保持し、重合体及び低分子分解物
を生成しにくい安定な液状製剤が得られる。
【0011】本発明の液状製剤は、低イオン強度である
ことが好ましい。低イオン強度とは、具体的にはpH調
整等のために添加される電解質の濃度が0.1M(モル
/リットル)以下であることを意味する。好ましくは
0.01M以下である。本発明の液状製剤のpHは3〜
7が例示されるが、好ましくは3〜6程度である。ただ
し、酸性蛋白質分解酵素が共存する場合は、pH4〜6
程度、共存しない場合はpH3〜6程度が好都合であ
る。pH調整剤としては、リン酸緩衝液、、水酸化ナト
リウム、塩酸などが挙げられるが、HUTIの調製過程
で上記条件が満足されているならば、特に添加しなくと
もよい。なお、本発明において酸性蛋白質分解酵素とは
以下の性質を有するものを指す。 (i) 酸性(pH2〜4付近)でHUTIを分解する。 (ii)アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチン又はアミノペプチダーゼの阻害剤であるベスタ
チンによって阻害される。 (iii)100℃、3分間又はpH2〜4程度での60
℃、30分間の加温処理により不活化される。
ことが好ましい。低イオン強度とは、具体的にはpH調
整等のために添加される電解質の濃度が0.1M(モル
/リットル)以下であることを意味する。好ましくは
0.01M以下である。本発明の液状製剤のpHは3〜
7が例示されるが、好ましくは3〜6程度である。ただ
し、酸性蛋白質分解酵素が共存する場合は、pH4〜6
程度、共存しない場合はpH3〜6程度が好都合であ
る。pH調整剤としては、リン酸緩衝液、、水酸化ナト
リウム、塩酸などが挙げられるが、HUTIの調製過程
で上記条件が満足されているならば、特に添加しなくと
もよい。なお、本発明において酸性蛋白質分解酵素とは
以下の性質を有するものを指す。 (i) 酸性(pH2〜4付近)でHUTIを分解する。 (ii)アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチン又はアミノペプチダーゼの阻害剤であるベスタ
チンによって阻害される。 (iii)100℃、3分間又はpH2〜4程度での60
℃、30分間の加温処理により不活化される。
【0012】また、酸性蛋白質分解酵素が共存しないよ
うなHUTIの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性pH(例えば、pH5〜7程度)で60〜10
0℃に加温後に、pHを下げて(例えば、pH2〜5程
度)、1〜30分程度加温処理することにより、当該酵
素を不活化する方法等を用いることができる。
うなHUTIの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性pH(例えば、pH5〜7程度)で60〜10
0℃に加温後に、pHを下げて(例えば、pH2〜5程
度)、1〜30分程度加温処理することにより、当該酵
素を不活化する方法等を用いることができる。
【0013】本発明の液状製剤には本発明の目的に反し
ない限り、公知の添加剤、例えば等張化剤(グリセリ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール
等)、防腐殺菌剤(塩化ベンザルコニウム、パラオキシ
安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロル
メタキセノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコ
ール、ソルビン酸又はその塩、チメロサール、クロロブ
タノール等)、キレート剤(エデト酸ナトリウム、クエ
ン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウム等)、粘稠剤
(ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナト
リウム等)等を適宜、通常使用される添加量で配合する
ことができる。
ない限り、公知の添加剤、例えば等張化剤(グリセリ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール
等)、防腐殺菌剤(塩化ベンザルコニウム、パラオキシ
安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロル
メタキセノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコ
ール、ソルビン酸又はその塩、チメロサール、クロロブ
タノール等)、キレート剤(エデト酸ナトリウム、クエ
ン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウム等)、粘稠剤
(ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナト
リウム等)等を適宜、通常使用される添加量で配合する
ことができる。
【0014】本発明の液状製剤は、HUTI含有溶液に
糖アルコール及び必要に応じて添加剤を添加後、通常の
方法により、除菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施し
て、液状製剤として提供できる。本製剤は注射剤、点眼
剤、点鼻剤等として、患者に投与することができる。
糖アルコール及び必要に応じて添加剤を添加後、通常の
方法により、除菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施し
て、液状製剤として提供できる。本製剤は注射剤、点眼
剤、点鼻剤等として、患者に投与することができる。
【0015】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために実施例及
び参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なんら
限定されるものではない。
び参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なんら
限定されるものではない。
【0016】実施例1 参考例の方法で得たHUTI原液に注射用水を添加して
27,300単位/mlに調製後、D−マンニトール
(52g/リットル)を添加、溶解し、pH5.7に調
整した。除菌濾過後、バイアル瓶に1mlずつ分注し液
状製剤を得た。
27,300単位/mlに調製後、D−マンニトール
(52g/リットル)を添加、溶解し、pH5.7に調
整した。除菌濾過後、バイアル瓶に1mlずつ分注し液
状製剤を得た。
【0017】実施例2 参考例の方法で得たHUTI原液に注射用水を添加して
27,300単位/mlに調製後、ソルビトール(50
g/リットル)を添加、溶解し、pH5.3に調整し
た。除菌濾過後、バイアル瓶に1mlずつ分注し液状製
剤を得た。
27,300単位/mlに調製後、ソルビトール(50
g/リットル)を添加、溶解し、pH5.3に調整し
た。除菌濾過後、バイアル瓶に1mlずつ分注し液状製
剤を得た。
【0018】実験例1 終濃度がHUTI 21,700単位/ml及び糖アル
コール50mg/mlとなるようにHUTI及び糖アル
コールを精製水に溶解し、0.1N塩酸でpH5.4に
調整した。この溶液を0.22μmフィルターで除菌濾
過した。得られた製剤を60℃でインキュベーター中に
保存した。HUTIの凝集又は重合による高分子体及び
分解による低分子体の生成割合を高速液体クロマトグラ
フィー(HPLC)ゲル濾過分析により測定した。HP
LCゲル濾過分析はSystem Gold(ベックマ
ン社)を用いて以下の条件で行った。 カラム :G3,000SWSL(φ7.5×300c
m、東ソー社) 溶出液 :0.3M塩化ナトリウム含有0.1M酢酸ナ
トリウム緩衝液(pH6.5) 流速 :1.0ml/分 結果を表1に示す。糖アルコールの添加により高分子体
及び低分子体の生成が抑制された。
コール50mg/mlとなるようにHUTI及び糖アル
コールを精製水に溶解し、0.1N塩酸でpH5.4に
調整した。この溶液を0.22μmフィルターで除菌濾
過した。得られた製剤を60℃でインキュベーター中に
保存した。HUTIの凝集又は重合による高分子体及び
分解による低分子体の生成割合を高速液体クロマトグラ
フィー(HPLC)ゲル濾過分析により測定した。HP
LCゲル濾過分析はSystem Gold(ベックマ
ン社)を用いて以下の条件で行った。 カラム :G3,000SWSL(φ7.5×300c
m、東ソー社) 溶出液 :0.3M塩化ナトリウム含有0.1M酢酸ナ
トリウム緩衝液(pH6.5) 流速 :1.0ml/分 結果を表1に示す。糖アルコールの添加により高分子体
及び低分子体の生成が抑制された。
【0019】
【表1】
【0020】実験例2 糖アルコールの安定化効果をマルトース、シュクロース
のような二糖類と比較した。終濃度がHUTI 22,
800単位/ml及び添加剤50mg/mlとなるよう
にHUTI及び添加剤(ソルビトール、マルトース又は
シュクロース)を精製水に溶解し、0.1N塩酸でpH
5.3に調整した。この溶液を0.22μmフィルター
で除菌濾過した。得られた製剤を50℃でインキュベー
ター中に保存した。実験例1と同様にして、HUTIの
高分子体及び低分子体の生成割合を測定した。結果を表
2に示す。糖アルコールは、マルトース、シュクロース
のような二糖類と比べて、安定化定効果が高い。
のような二糖類と比較した。終濃度がHUTI 22,
800単位/ml及び添加剤50mg/mlとなるよう
にHUTI及び添加剤(ソルビトール、マルトース又は
シュクロース)を精製水に溶解し、0.1N塩酸でpH
5.3に調整した。この溶液を0.22μmフィルター
で除菌濾過した。得られた製剤を50℃でインキュベー
ター中に保存した。実験例1と同様にして、HUTIの
高分子体及び低分子体の生成割合を測定した。結果を表
2に示す。糖アルコールは、マルトース、シュクロース
のような二糖類と比べて、安定化定効果が高い。
【0021】
【表2】
【0022】実験例3 下記組成のHUTI製剤(pH5.7)を調製した。こ
の製剤を無色バイアルに入れて密封し、保存安定性試験
を行った(保存条件25℃、75%相対湿度、保存期間
14カ月)。試験製剤は3点作成し、それぞれ製剤番号
1、2及び3とした。 HUTI製剤の組成(1バイアル中) HUTI 25,000単位 D−マンニトール 50mg 塩酸 適量 注射用水 適量 全量 1ml (1)性状 いずれの製剤も14カ月間にわたり外観に変化は認めら
れず、無色澄明の溶液であった。 (2)純度試験 HUTIの高分子体と低分子体 HUTIの凝集又は重合による高分子体と分解による低
分子体の含有率を実験例1と同様の方法により測定し
た。試験開始時の高分子体と低分子体の合計含有率はい
ずれの製剤も0%であり、製剤番号1、2及び3の14
カ月保存後の高分子体と低分子体の合計含有率は、それ
ぞれ0.9%、1.2%及び1.1%であった。 他の蛋白質 ポリアクリルアミドゲル電気泳動により他の蛋白質を含
有するか否かを試験した。14カ月保存後、いずれの製
剤においてもHUTI以外のバンドは認められなかっ
た。 (3)トリプシン阻害活性 トリプシン阻害活性をN−α−ベンゾイル−L−アルギ
ニン−p−ニトロアリニドを基質として吸光度測定法に
より測定した。結果を表3に示す。
の製剤を無色バイアルに入れて密封し、保存安定性試験
を行った(保存条件25℃、75%相対湿度、保存期間
14カ月)。試験製剤は3点作成し、それぞれ製剤番号
1、2及び3とした。 HUTI製剤の組成(1バイアル中) HUTI 25,000単位 D−マンニトール 50mg 塩酸 適量 注射用水 適量 全量 1ml (1)性状 いずれの製剤も14カ月間にわたり外観に変化は認めら
れず、無色澄明の溶液であった。 (2)純度試験 HUTIの高分子体と低分子体 HUTIの凝集又は重合による高分子体と分解による低
分子体の含有率を実験例1と同様の方法により測定し
た。試験開始時の高分子体と低分子体の合計含有率はい
ずれの製剤も0%であり、製剤番号1、2及び3の14
カ月保存後の高分子体と低分子体の合計含有率は、それ
ぞれ0.9%、1.2%及び1.1%であった。 他の蛋白質 ポリアクリルアミドゲル電気泳動により他の蛋白質を含
有するか否かを試験した。14カ月保存後、いずれの製
剤においてもHUTI以外のバンドは認められなかっ
た。 (3)トリプシン阻害活性 トリプシン阻害活性をN−α−ベンゾイル−L−アルギ
ニン−p−ニトロアリニドを基質として吸光度測定法に
より測定した。結果を表3に示す。
【0023】
【表3】
【0024】本発明の製剤は、25℃、14カ月間保存
においても安定であることが確認された。
においても安定であることが確認された。
【0025】参考例 人尿を特開昭62−93238号公報に記載の方法に準
じて調製したものを本実施例に使用されるHUTIの出
発原料とした。出発原料420mlをpH6.4に調整
後、0.1Mリン酸緩衝液(pH6.4)で平衡化した
QAE−アガロースゲル(商品名Q−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社)にアプライした。その
後、0.5M塩化ナトリウム加0.1Mリン酸緩衝液
(pH6.4)で溶出しHUTI画分を回収した。
じて調製したものを本実施例に使用されるHUTIの出
発原料とした。出発原料420mlをpH6.4に調整
後、0.1Mリン酸緩衝液(pH6.4)で平衡化した
QAE−アガロースゲル(商品名Q−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社)にアプライした。その
後、0.5M塩化ナトリウム加0.1Mリン酸緩衝液
(pH6.4)で溶出しHUTI画分を回収した。
【0026】溶出画分800mlをpH8に調整後、
0.5M塩化ナトリウム加0.1Mリン酸緩衝液(pH
8)で平衡化したCu2+キレートアガロースゲル(商品
名キレートセファロース ファストフロー、ファルマシ
ア社)にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸着画
分260mlに酢酸緩衝液(pH5)を加えて、最終濃
度50mMに調整し、60℃、10時間加熱処理した。
さらに2M硫酸アンモニウムを添加して濃度0.8Mに
調整後、0.8M硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル(商品名フェニル セファロース4
B、ファルマシア社)にアプライし、非吸着画分を回収
した。
0.5M塩化ナトリウム加0.1Mリン酸緩衝液(pH
8)で平衡化したCu2+キレートアガロースゲル(商品
名キレートセファロース ファストフロー、ファルマシ
ア社)にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸着画
分260mlに酢酸緩衝液(pH5)を加えて、最終濃
度50mMに調整し、60℃、10時間加熱処理した。
さらに2M硫酸アンモニウムを添加して濃度0.8Mに
調整後、0.8M硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル(商品名フェニル セファロース4
B、ファルマシア社)にアプライし、非吸着画分を回収
した。
【0027】非吸着画分610mlにEDTAを1mM
となるように添加後に限外濾過膜(商品名UFメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量1万以下の画分をカット)
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分を60℃で1
0時間加熱処理後、pHを3に下げてさらに30分間加
熱し、0.15M塩化ナトリウム加50mM酢酸緩衝液
(pH6.2)で平衡化したポリアクリルアミドゲル
(商品名セファクリルS−200HP、ファルマシア
社)にアプライし、同緩衝液で溶出しHUTI画分を回
収した。最後に精製水で透析した。
となるように添加後に限外濾過膜(商品名UFメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量1万以下の画分をカット)
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分を60℃で1
0時間加熱処理後、pHを3に下げてさらに30分間加
熱し、0.15M塩化ナトリウム加50mM酢酸緩衝液
(pH6.2)で平衡化したポリアクリルアミドゲル
(商品名セファクリルS−200HP、ファルマシア
社)にアプライし、同緩衝液で溶出しHUTI画分を回
収した。最後に精製水で透析した。
【0028】
【発明の効果】本発明によれば、HUTIの長期保存時
安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有する
液状製剤を調製することができる。本発明で使用する糖
アルコールは、HUTIの凝集又は重合による高分子体
及び分解による低分子体の生成を抑制し、HUTIの保
存時安定性を改善する効果が高い。本発明の液状製剤
は、使用時に溶解する必要がなくそのままで簡便に投与
することができる。
安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有する
液状製剤を調製することができる。本発明で使用する糖
アルコールは、HUTIの凝集又は重合による高分子体
及び分解による低分子体の生成を抑制し、HUTIの保
存時安定性を改善する効果が高い。本発明の液状製剤
は、使用時に溶解する必要がなくそのままで簡便に投与
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 A61K 9/08 U V 47/10 J // C07K 14/81 8318−4H
Claims (6)
- 【請求項1】 糖アルコールを含有することを特徴とす
るヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 - 【請求項2】 糖アルコールの濃度が5〜100mg/
mlである請求項1記載の液状製剤。 - 【請求項3】 糖アルコールの濃度が25〜75mg/
mlである請求項1記載の液状製剤。 - 【請求項4】 糖アルコールがマンニトールである請求
項1〜3のいずれか1項に記載の液状製剤。 - 【請求項5】 糖アルコールがソルビトールである請求
項1〜3のいずれか1項に記載の液状製剤。 - 【請求項6】 低イオン強度であることを特徴とする請
求項1〜5のいずれか1項に記載の液状製剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP6073246A JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP6073246A JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH07278015A true JPH07278015A (ja) | 1995-10-24 |
JP2660484B2 JP2660484B2 (ja) | 1997-10-08 |
Family
ID=13512642
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP6073246A Expired - Lifetime JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2660484B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001091782A1 (fr) * | 2000-05-29 | 2001-12-06 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparations de gouttes nasales contenant de la pralmoreline |
CN110527679A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-03 | 宁波林叶生物科技有限公司 | 一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0625011A (ja) * | 1992-07-08 | 1994-02-01 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
JPH06135852A (ja) * | 1992-10-23 | 1994-05-17 | Takada Seiyaku Kk | ウリナスタチン注射液 |
-
1994
- 1994-04-12 JP JP6073246A patent/JP2660484B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0625011A (ja) * | 1992-07-08 | 1994-02-01 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
JPH06135852A (ja) * | 1992-10-23 | 1994-05-17 | Takada Seiyaku Kk | ウリナスタチン注射液 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001091782A1 (fr) * | 2000-05-29 | 2001-12-06 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparations de gouttes nasales contenant de la pralmoreline |
US7008927B2 (en) | 2000-05-29 | 2006-03-07 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Pralmorelin-containing nasal drop preparations |
CN110527679A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-03 | 宁波林叶生物科技有限公司 | 一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2660484B2 (ja) | 1997-10-08 |
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