JPH07278015A - ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 - Google Patents
ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤Info
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- JPH07278015A JPH07278015A JP6073246A JP7324694A JPH07278015A JP H07278015 A JPH07278015 A JP H07278015A JP 6073246 A JP6073246 A JP 6073246A JP 7324694 A JP7324694 A JP 7324694A JP H07278015 A JPH07278015 A JP H07278015A
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- trypsin inhibitor
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 保存時の安定性に優れ、注射剤として適した
浸透圧を有するヒト尿性トリプシンインヒビター含有液
状製剤の提供。 【構成】 糖アルコールを含有することを特徴とするヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 【効果】 ヒト尿性トリプシンインヒビターの長期保存
時安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有す
る液状製剤を調製することができる。糖アルコールは、
ヒト尿性トリプシンインヒビターの凝集又は重合による
高分子体及び分解による低分子体の生成を抑制し、保存
時安定性を改善する効果が高い。
浸透圧を有するヒト尿性トリプシンインヒビター含有液
状製剤の提供。 【構成】 糖アルコールを含有することを特徴とするヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 【効果】 ヒト尿性トリプシンインヒビターの長期保存
時安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有す
る液状製剤を調製することができる。糖アルコールは、
ヒト尿性トリプシンインヒビターの凝集又は重合による
高分子体及び分解による低分子体の生成を抑制し、保存
時安定性を改善する効果が高い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒト尿性トリプシンイ
ンヒビター含有液状製剤に関する。
ンヒビター含有液状製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒト尿性トリプシンインヒビター（ヒト
尿由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩという）
は、Ｐｒｏｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａ
ｃｔな形で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．
Ｍｅｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシ
アル酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７
Ｋｄ（ゲル濾過分析）、等電点２〜３の糖タンパク質で
ある（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９
１，（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１
９８３），Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ，１２，３８９，（１９８６），Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２
４７，（１９８２））。
尿由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩという）
は、Ｐｒｏｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａ
ｃｔな形で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．
Ｍｅｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシ
アル酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７
Ｋｄ（ゲル濾過分析）、等電点２〜３の糖タンパク質で
ある（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９
１，（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１
９８３），Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ，１２，３８９，（１９８６），Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２
４７，（１９８２））。
【０００３】このＨＵＴＩは、膵酵素のトリプシン及び
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III （ア
ンチトロンビン−III ）やＦＯＹ（メシル酸ガベキサー
ト）と異なり凝固・線溶系の酵素を全く或いは弱くしか
阻害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果をもつこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有するといわれている（麻酔、３
３，１３７，（１９８４））。
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III （ア
ンチトロンビン−III ）やＦＯＹ（メシル酸ガベキサー
ト）と異なり凝固・線溶系の酵素を全く或いは弱くしか
阻害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果をもつこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有するといわれている（麻酔、３
３，１３７，（１９８４））。
【０００４】以上の活性・作用を有することから、ＨＵ
ＴＩは急性膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、
ＨＵＴＩ製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンド
トキシンショック時に対処する重篤な副作用のみられな
い製剤として使用されている。
ＴＩは急性膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、
ＨＵＴＩ製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンド
トキシンショック時に対処する重篤な副作用のみられな
い製剤として使用されている。
【０００５】現在ＨＵＴＩは凍結乾燥製剤として市販さ
れ、使用時に注射用水に溶解して注射投与されている。
液状製剤は、凍結乾燥製剤に比べ使用時に溶解する必要
がなく簡便に投与できるという利点を有するが、一方で
溶液状態ではＨＵＴＩの活性が低下し保存中の安定性が
悪いという問題がある。また液状製剤をそのまま注射剤
として投与する場合、液状製剤の浸透圧は体液（血清）
と等張であることが望ましい。
れ、使用時に注射用水に溶解して注射投与されている。
液状製剤は、凍結乾燥製剤に比べ使用時に溶解する必要
がなく簡便に投与できるという利点を有するが、一方で
溶液状態ではＨＵＴＩの活性が低下し保存中の安定性が
悪いという問題がある。また液状製剤をそのまま注射剤
として投与する場合、液状製剤の浸透圧は体液（血清）
と等張であることが望ましい。
【０００６】先に本発明者らは、ＨＵＴＩ含有液状製剤
の保存安定性を改善する目的で、低イオン強度、かつｐ
Ｈ７以下であることを特徴とするＨＵＴＩ含有液状製剤
を提案している（特開平６−２５０１１号公報）。
の保存安定性を改善する目的で、低イオン強度、かつｐ
Ｈ７以下であることを特徴とするＨＵＴＩ含有液状製剤
を提案している（特開平６−２５０１１号公報）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、保存
時の安定性に優れ、注射剤として適した浸透圧を有する
ＨＵＴＩ含有液状製剤を提供することにある。
時の安定性に優れ、注射剤として適した浸透圧を有する
ＨＵＴＩ含有液状製剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らはＨＵＴＩの
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れ、等張化された注射剤と
して最適な液状製剤を見出して本発明を完成した。
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れ、等張化された注射剤と
して最適な液状製剤を見出して本発明を完成した。
【０００９】本発明は糖アルコールを含有することを特
徴とするＨＵＴＩ含有液状製剤に関する。 （１）ＨＵＴＩ 本発明で使用されるＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由
来、遺伝子工学由来のいずれにも限定されない。また、
医薬品として適用可能な程度まで精製されておればよ
い。また本発明で使用されるＨＵＴＩは、遺伝子工学等
の手法によりアミノ酸配列の一部を欠失、置換、付加し
たものをも含む。ＨＵＴＩの精製法としては陰イオン交
換体処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト
グラフィー、無機吸着剤処理、塩析、等電点沈澱法、キ
トサン処理、不溶性トリプシン処理等が知られている。
また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体処理、加熱処
理等を組み合わせてもよい（特開昭５１−５１５７９
号、同５１−１１８８１０号、同５６−９９４２７号、
特開平５−９２００号の各公報）。こうして得られるＨ
ＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７００
０）、等電点は２〜３程度、比活性は２０００〜３５０
０単位／ｍｇ蛋白程度である。ＨＵＴＩ １単位はトリ
プシン２μｇに作用してトリプシン１μｇの酵素活性を
阻害するＨＵＴＩの量である。
徴とするＨＵＴＩ含有液状製剤に関する。 （１）ＨＵＴＩ 本発明で使用されるＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由
来、遺伝子工学由来のいずれにも限定されない。また、
医薬品として適用可能な程度まで精製されておればよ
い。また本発明で使用されるＨＵＴＩは、遺伝子工学等
の手法によりアミノ酸配列の一部を欠失、置換、付加し
たものをも含む。ＨＵＴＩの精製法としては陰イオン交
換体処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト
グラフィー、無機吸着剤処理、塩析、等電点沈澱法、キ
トサン処理、不溶性トリプシン処理等が知られている。
また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体処理、加熱処
理等を組み合わせてもよい（特開昭５１−５１５７９
号、同５１−１１８８１０号、同５６−９９４２７号、
特開平５−９２００号の各公報）。こうして得られるＨ
ＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７００
０）、等電点は２〜３程度、比活性は２０００〜３５０
０単位／ｍｇ蛋白程度である。ＨＵＴＩ １単位はトリ
プシン２μｇに作用してトリプシン１μｇの酵素活性を
阻害するＨＵＴＩの量である。
【００１０】（２）液状製剤 本発明の液状製剤は、ＨＵＴＩ及び糖アルコールを含有
することを特徴とする。本発明の液状製剤におけるＨＵ
ＴＩの濃度は、１，０００〜１００，０００単位／ｍｌ
程度が例示される。本発明において糖アルコールは、ア
ルドース又はケトースなどを還元して得られるポリヒド
ロキシアルカンを意味し、例えばマンニトール、ソルビ
トール、キシリトール、グリセロールなどが例示され
る。好ましくはマンニトールである。本発明の液状製剤
における糖アルコールの濃度は、５〜１００ｍｇ／ｍｌ
が例示されるが、好ましくは２５〜７５ｍｇ／ｍｌ、よ
り好ましくは４０〜６０ｍｇ／ｍｌである。糖アルコー
ルを４０〜６０ｍｇ／ｍｌの範囲で配合することによ
り、注射剤として適した浸透圧を有し、且つ長期間の保
存中もＨＵＴＩ活性を保持し、重合体及び低分子分解物
を生成しにくい安定な液状製剤が得られる。
することを特徴とする。本発明の液状製剤におけるＨＵ
ＴＩの濃度は、１，０００〜１００，０００単位／ｍｌ
程度が例示される。本発明において糖アルコールは、ア
ルドース又はケトースなどを還元して得られるポリヒド
ロキシアルカンを意味し、例えばマンニトール、ソルビ
トール、キシリトール、グリセロールなどが例示され
る。好ましくはマンニトールである。本発明の液状製剤
における糖アルコールの濃度は、５〜１００ｍｇ／ｍｌ
が例示されるが、好ましくは２５〜７５ｍｇ／ｍｌ、よ
り好ましくは４０〜６０ｍｇ／ｍｌである。糖アルコー
ルを４０〜６０ｍｇ／ｍｌの範囲で配合することによ
り、注射剤として適した浸透圧を有し、且つ長期間の保
存中もＨＵＴＩ活性を保持し、重合体及び低分子分解物
を生成しにくい安定な液状製剤が得られる。
【００１１】本発明の液状製剤は、低イオン強度である
ことが好ましい。低イオン強度とは、具体的にはｐＨ調
整等のために添加される電解質の濃度が０．１Ｍ（モル
／リットル）以下であることを意味する。好ましくは
０．０１Ｍ以下である。本発明の液状製剤のｐＨは３〜
７が例示されるが、好ましくは３〜６程度である。ただ
し、酸性蛋白質分解酵素が共存する場合は、ｐＨ４〜６
程度、共存しない場合はｐＨ３〜６程度が好都合であ
る。ｐＨ調整剤としては、リン酸緩衝液、、水酸化ナト
リウム、塩酸などが挙げられるが、ＨＵＴＩの調製過程
で上記条件が満足されているならば、特に添加しなくと
もよい。なお、本発明において酸性蛋白質分解酵素とは
以下の性質を有するものを指す。 （i) 酸性（ｐＨ２〜４付近）でＨＵＴＩを分解する。 （ii）アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチン又はアミノペプチダーゼの阻害剤であるベスタ
チンによって阻害される。 （iii)１００℃、３分間又はｐＨ２〜４程度での６０
℃、３０分間の加温処理により不活化される。
ことが好ましい。低イオン強度とは、具体的にはｐＨ調
整等のために添加される電解質の濃度が０．１Ｍ（モル
／リットル）以下であることを意味する。好ましくは
０．０１Ｍ以下である。本発明の液状製剤のｐＨは３〜
７が例示されるが、好ましくは３〜６程度である。ただ
し、酸性蛋白質分解酵素が共存する場合は、ｐＨ４〜６
程度、共存しない場合はｐＨ３〜６程度が好都合であ
る。ｐＨ調整剤としては、リン酸緩衝液、、水酸化ナト
リウム、塩酸などが挙げられるが、ＨＵＴＩの調製過程
で上記条件が満足されているならば、特に添加しなくと
もよい。なお、本発明において酸性蛋白質分解酵素とは
以下の性質を有するものを指す。 （i) 酸性（ｐＨ２〜４付近）でＨＵＴＩを分解する。 （ii）アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチン又はアミノペプチダーゼの阻害剤であるベスタ
チンによって阻害される。 （iii)１００℃、３分間又はｐＨ２〜４程度での６０
℃、３０分間の加温処理により不活化される。
【００１２】また、酸性蛋白質分解酵素が共存しないよ
うなＨＵＴＩの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５〜７程度）で６０〜１０
０℃に加温後に、ｐＨを下げて（例えば、ｐＨ２〜５程
度）、１〜３０分程度加温処理することにより、当該酵
素を不活化する方法等を用いることができる。
うなＨＵＴＩの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５〜７程度）で６０〜１０
０℃に加温後に、ｐＨを下げて（例えば、ｐＨ２〜５程
度）、１〜３０分程度加温処理することにより、当該酵
素を不活化する方法等を用いることができる。
【００１３】本発明の液状製剤には本発明の目的に反し
ない限り、公知の添加剤、例えば等張化剤（グリセリ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール
等）、防腐殺菌剤（塩化ベンザルコニウム、パラオキシ
安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロル
メタキセノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコ
ール、ソルビン酸又はその塩、チメロサール、クロロブ
タノール等）、キレート剤（エデト酸ナトリウム、クエ
ン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウム等）、粘稠剤
（ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナト
リウム等）等を適宜、通常使用される添加量で配合する
ことができる。
ない限り、公知の添加剤、例えば等張化剤（グリセリ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール
等）、防腐殺菌剤（塩化ベンザルコニウム、パラオキシ
安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロル
メタキセノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコ
ール、ソルビン酸又はその塩、チメロサール、クロロブ
タノール等）、キレート剤（エデト酸ナトリウム、クエ
ン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウム等）、粘稠剤
（ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナト
リウム等）等を適宜、通常使用される添加量で配合する
ことができる。
【００１４】本発明の液状製剤は、ＨＵＴＩ含有溶液に
糖アルコール及び必要に応じて添加剤を添加後、通常の
方法により、除菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施し
て、液状製剤として提供できる。本製剤は注射剤、点眼
剤、点鼻剤等として、患者に投与することができる。
糖アルコール及び必要に応じて添加剤を添加後、通常の
方法により、除菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施し
て、液状製剤として提供できる。本製剤は注射剤、点眼
剤、点鼻剤等として、患者に投与することができる。
【００１５】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために実施例及
び参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なんら
限定されるものではない。
び参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なんら
限定されるものではない。
【００１６】実施例１ 参考例の方法で得たＨＵＴＩ原液に注射用水を添加して
２７，３００単位／ｍｌに調製後、Ｄ−マンニトール
（５２ｇ／リットル）を添加、溶解し、ｐＨ５．７に調
整した。除菌濾過後、バイアル瓶に１ｍｌずつ分注し液
状製剤を得た。
２７，３００単位／ｍｌに調製後、Ｄ−マンニトール
（５２ｇ／リットル）を添加、溶解し、ｐＨ５．７に調
整した。除菌濾過後、バイアル瓶に１ｍｌずつ分注し液
状製剤を得た。
【００１７】実施例２ 参考例の方法で得たＨＵＴＩ原液に注射用水を添加して
２７，３００単位／ｍｌに調製後、ソルビトール（５０
ｇ／リットル）を添加、溶解し、ｐＨ５．３に調整し
た。除菌濾過後、バイアル瓶に１ｍｌずつ分注し液状製
剤を得た。
２７，３００単位／ｍｌに調製後、ソルビトール（５０
ｇ／リットル）を添加、溶解し、ｐＨ５．３に調整し
た。除菌濾過後、バイアル瓶に１ｍｌずつ分注し液状製
剤を得た。
【００１８】実験例１ 終濃度がＨＵＴＩ ２１，７００単位／ｍｌ及び糖アル
コール５０ｍｇ／ｍｌとなるようにＨＵＴＩ及び糖アル
コールを精製水に溶解し、０．１Ｎ塩酸でｐＨ５．４に
調整した。この溶液を０．２２μｍフィルターで除菌濾
過した。得られた製剤を６０℃でインキュベーター中に
保存した。ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体及び
分解による低分子体の生成割合を高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）ゲル濾過分析により測定した。ＨＰ
ＬＣゲル濾過分析はＳｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ（ベックマ
ン社）を用いて以下の条件で行った。 カラム ：Ｇ３，０００ＳＷＳＬ（φ７．５×３００ｃ
ｍ、東ソー社） 溶出液 ：０．３Ｍ塩化ナトリウム含有０．１Ｍ酢酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ６．５） 流速 ：１．０ｍｌ／分 結果を表１に示す。糖アルコールの添加により高分子体
及び低分子体の生成が抑制された。
コール５０ｍｇ／ｍｌとなるようにＨＵＴＩ及び糖アル
コールを精製水に溶解し、０．１Ｎ塩酸でｐＨ５．４に
調整した。この溶液を０．２２μｍフィルターで除菌濾
過した。得られた製剤を６０℃でインキュベーター中に
保存した。ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体及び
分解による低分子体の生成割合を高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）ゲル濾過分析により測定した。ＨＰ
ＬＣゲル濾過分析はＳｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ（ベックマ
ン社）を用いて以下の条件で行った。 カラム ：Ｇ３，０００ＳＷＳＬ（φ７．５×３００ｃ
ｍ、東ソー社） 溶出液 ：０．３Ｍ塩化ナトリウム含有０．１Ｍ酢酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ６．５） 流速 ：１．０ｍｌ／分 結果を表１に示す。糖アルコールの添加により高分子体
及び低分子体の生成が抑制された。
【００１９】
【表１】
【００２０】実験例２ 糖アルコールの安定化効果をマルトース、シュクロース
のような二糖類と比較した。終濃度がＨＵＴＩ ２２，
８００単位／ｍｌ及び添加剤５０ｍｇ／ｍｌとなるよう
にＨＵＴＩ及び添加剤（ソルビトール、マルトース又は
シュクロース）を精製水に溶解し、０．１Ｎ塩酸でｐＨ
５．３に調整した。この溶液を０．２２μｍフィルター
で除菌濾過した。得られた製剤を５０℃でインキュベー
ター中に保存した。実験例１と同様にして、ＨＵＴＩの
高分子体及び低分子体の生成割合を測定した。結果を表
２に示す。糖アルコールは、マルトース、シュクロース
のような二糖類と比べて、安定化定効果が高い。
のような二糖類と比較した。終濃度がＨＵＴＩ ２２，
８００単位／ｍｌ及び添加剤５０ｍｇ／ｍｌとなるよう
にＨＵＴＩ及び添加剤（ソルビトール、マルトース又は
シュクロース）を精製水に溶解し、０．１Ｎ塩酸でｐＨ
５．３に調整した。この溶液を０．２２μｍフィルター
で除菌濾過した。得られた製剤を５０℃でインキュベー
ター中に保存した。実験例１と同様にして、ＨＵＴＩの
高分子体及び低分子体の生成割合を測定した。結果を表
２に示す。糖アルコールは、マルトース、シュクロース
のような二糖類と比べて、安定化定効果が高い。
【００２１】
【表２】
【００２２】実験例３ 下記組成のＨＵＴＩ製剤（ｐＨ５．７）を調製した。こ
の製剤を無色バイアルに入れて密封し、保存安定性試験
を行った（保存条件２５℃、７５％相対湿度、保存期間
１４カ月）。試験製剤は３点作成し、それぞれ製剤番号
１、２及び３とした。 ＨＵＴＩ製剤の組成（１バイアル中） ＨＵＴＩ ２５，０００単位 Ｄ−マンニトール ５０ｍｇ 塩酸 適量 注射用水 適量 全量 １ｍｌ （１）性状 いずれの製剤も１４カ月間にわたり外観に変化は認めら
れず、無色澄明の溶液であった。 （２）純度試験 ＨＵＴＩの高分子体と低分子体 ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体と分解による低
分子体の含有率を実験例１と同様の方法により測定し
た。試験開始時の高分子体と低分子体の合計含有率はい
ずれの製剤も０％であり、製剤番号１、２及び３の１４
カ月保存後の高分子体と低分子体の合計含有率は、それ
ぞれ０．９％、１．２％及び１．１％であった。 他の蛋白質 ポリアクリルアミドゲル電気泳動により他の蛋白質を含
有するか否かを試験した。１４カ月保存後、いずれの製
剤においてもＨＵＴＩ以外のバンドは認められなかっ
た。 （３）トリプシン阻害活性 トリプシン阻害活性をＮ−α−ベンゾイル−Ｌ−アルギ
ニン−ｐ−ニトロアリニドを基質として吸光度測定法に
より測定した。結果を表３に示す。
の製剤を無色バイアルに入れて密封し、保存安定性試験
を行った（保存条件２５℃、７５％相対湿度、保存期間
１４カ月）。試験製剤は３点作成し、それぞれ製剤番号
１、２及び３とした。 ＨＵＴＩ製剤の組成（１バイアル中） ＨＵＴＩ ２５，０００単位 Ｄ−マンニトール ５０ｍｇ 塩酸 適量 注射用水 適量 全量 １ｍｌ （１）性状 いずれの製剤も１４カ月間にわたり外観に変化は認めら
れず、無色澄明の溶液であった。 （２）純度試験 ＨＵＴＩの高分子体と低分子体 ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体と分解による低
分子体の含有率を実験例１と同様の方法により測定し
た。試験開始時の高分子体と低分子体の合計含有率はい
ずれの製剤も０％であり、製剤番号１、２及び３の１４
カ月保存後の高分子体と低分子体の合計含有率は、それ
ぞれ０．９％、１．２％及び１．１％であった。 他の蛋白質 ポリアクリルアミドゲル電気泳動により他の蛋白質を含
有するか否かを試験した。１４カ月保存後、いずれの製
剤においてもＨＵＴＩ以外のバンドは認められなかっ
た。 （３）トリプシン阻害活性 トリプシン阻害活性をＮ−α−ベンゾイル−Ｌ−アルギ
ニン−ｐ−ニトロアリニドを基質として吸光度測定法に
より測定した。結果を表３に示す。
【００２３】
【表３】
【００２４】本発明の製剤は、２５℃、１４カ月間保存
においても安定であることが確認された。
においても安定であることが確認された。
【００２５】参考例 人尿を特開昭６２−９３２３８号公報に記載の方法に準
じて調製したものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出
発原料とした。出発原料４２０ｍｌをｐＨ６．４に調整
後、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化した
ＱＡＥ−アガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社）にアプライした。その
後、０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．４）で溶出しＨＵＴＩ画分を回収した。
じて調製したものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出
発原料とした。出発原料４２０ｍｌをｐＨ６．４に調整
後、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化した
ＱＡＥ−アガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社）にアプライした。その
後、０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．４）で溶出しＨＵＴＩ画分を回収した。
【００２６】溶出画分８００ｍｌをｐＨ８に調整後、
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファストフロー、ファルマシ
ア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸着画
分２６０ｍｌに酢酸緩衝液（ｐＨ５）を加えて、最終濃
度５０ｍＭに調整し、６０℃、１０時間加熱処理した。
さらに２Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに
調整後、０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル（商品名フェニル セファロース４
Ｂ、ファルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収
した。
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファストフロー、ファルマシ
ア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸着画
分２６０ｍｌに酢酸緩衝液（ｐＨ５）を加えて、最終濃
度５０ｍＭに調整し、６０℃、１０時間加熱処理した。
さらに２Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに
調整後、０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル（商品名フェニル セファロース４
Ｂ、ファルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収
した。
【００２７】非吸着画分６１０ｍｌにＥＤＴＡを１ｍＭ
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分を６０℃で１
０時間加熱処理後、ｐＨを３に下げてさらに３０分間加
熱し、０．１５Ｍ塩化ナトリウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．２）で平衡化したポリアクリルアミドゲル
（商品名セファクリルＳ−２００ＨＰ、ファルマシア
社）にアプライし、同緩衝液で溶出しＨＵＴＩ画分を回
収した。最後に精製水で透析した。
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分を６０℃で１
０時間加熱処理後、ｐＨを３に下げてさらに３０分間加
熱し、０．１５Ｍ塩化ナトリウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．２）で平衡化したポリアクリルアミドゲル
（商品名セファクリルＳ−２００ＨＰ、ファルマシア
社）にアプライし、同緩衝液で溶出しＨＵＴＩ画分を回
収した。最後に精製水で透析した。
【００２８】
【発明の効果】本発明によれば、ＨＵＴＩの長期保存時
安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有する
液状製剤を調製することができる。本発明で使用する糖
アルコールは、ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体
及び分解による低分子体の生成を抑制し、ＨＵＴＩの保
存時安定性を改善する効果が高い。本発明の液状製剤
は、使用時に溶解する必要がなくそのままで簡便に投与
することができる。
安定性が改善され、注射剤として適した浸透圧を有する
液状製剤を調製することができる。本発明で使用する糖
アルコールは、ＨＵＴＩの凝集又は重合による高分子体
及び分解による低分子体の生成を抑制し、ＨＵＴＩの保
存時安定性を改善する効果が高い。本発明の液状製剤
は、使用時に溶解する必要がなくそのままで簡便に投与
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 9/08 Ｕ Ｖ 47/10 Ｊ // Ｃ０７Ｋ 14/81 8318−4Ｈ
Claims (6)
- 【請求項１】 糖アルコールを含有することを特徴とす
るヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤。 - 【請求項２】 糖アルコールの濃度が５〜１００ｍｇ／
ｍｌである請求項１記載の液状製剤。 - 【請求項３】 糖アルコールの濃度が２５〜７５ｍｇ／
ｍｌである請求項１記載の液状製剤。 - 【請求項４】 糖アルコールがマンニトールである請求
項１〜３のいずれか１項に記載の液状製剤。 - 【請求項５】 糖アルコールがソルビトールである請求
項１〜３のいずれか１項に記載の液状製剤。 - 【請求項６】 低イオン強度であることを特徴とする請
求項１〜５のいずれか１項に記載の液状製剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6073246A JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6073246A JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07278015A true JPH07278015A (ja) | 1995-10-24 |
| JP2660484B2 JP2660484B2 (ja) | 1997-10-08 |
Family
ID=13512642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6073246A Expired - Lifetime JP2660484B2 (ja) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2660484B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001091782A1 (fr) * | 2000-05-29 | 2001-12-06 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparations de gouttes nasales contenant de la pralmoreline |
| CN110527679A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-03 | 宁波林叶生物科技有限公司 | 一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0625011A (ja) * | 1992-07-08 | 1994-02-01 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
| JPH06135852A (ja) * | 1992-10-23 | 1994-05-17 | Takada Seiyaku Kk | ウリナスタチン注射液 |
-
1994
- 1994-04-12 JP JP6073246A patent/JP2660484B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0625011A (ja) * | 1992-07-08 | 1994-02-01 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
| JPH06135852A (ja) * | 1992-10-23 | 1994-05-17 | Takada Seiyaku Kk | ウリナスタチン注射液 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001091782A1 (fr) * | 2000-05-29 | 2001-12-06 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparations de gouttes nasales contenant de la pralmoreline |
| US7008927B2 (en) | 2000-05-29 | 2006-03-07 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Pralmorelin-containing nasal drop preparations |
| CN110527679A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-03 | 宁波林叶生物科技有限公司 | 一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2660484B2 (ja) | 1997-10-08 |
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