JPH0670798A - 尿酸測定用試薬組成物 - Google Patents
尿酸測定用試薬組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 体液試料中の尿酸濃度測定方法において使用
するための単一溶液形態にある増大された安定性を有す
る試薬を提供する。 【構成】 特には、本発明の安定化試薬は、ウリカー
ゼ、パーオキシダーゼ、指示薬ならびにグリセロール、
ソルビトールおよびマンニトール等の多価アルコールを
含んでなり、更に、不活性蛋白質およびＥＤＴＡを含ん
でもよい。
するための単一溶液形態にある増大された安定性を有す
る試薬を提供する。 【構成】 特には、本発明の安定化試薬は、ウリカー
ゼ、パーオキシダーゼ、指示薬ならびにグリセロール、
ソルビトールおよびマンニトール等の多価アルコールを
含んでなり、更に、不活性蛋白質およびＥＤＴＡを含ん
でもよい。
Description
【０００１】本発明は、インビトロにおける診断分野に
関し、更に特には体液試料中の尿酸測定のための試薬に
関するものである。このような方法は、典型的にはウリ
カーゼ、パーオキシダーゼおよび指示薬を含む複数試薬
の系を使用する。
関し、更に特には体液試料中の尿酸測定のための試薬に
関するものである。このような方法は、典型的にはウリ
カーゼ、パーオキシダーゼおよび指示薬を含む複数試薬
の系を使用する。
【０００２】尿酸は、ヒトにおけるプリン代謝の主最終
生成物であり、また血漿中の非蛋白質性窒素画分の成分
のひとつである。血清尿酸水準は、痛風および尿酸の合
成または***のいずれかに関する遺伝疾患において特徴
的に上昇する。尿酸過剰血症は、腎機能不全、ケトアシ
ド−シスおよびＬｅｓｃｈ−Ｎｙｈａｎ症候群にも関連
している。白血病、リンパ腫、赤血球増加症、および種
々の散在性新生物等の核蛋白生成および代謝に影響を与
える疾患は、尿酸過剰血症を生じるであろう。従って、
体液中の尿酸濃度を測定するための正確で、経済的かつ
便利な方法は有益である。
生成物であり、また血漿中の非蛋白質性窒素画分の成分
のひとつである。血清尿酸水準は、痛風および尿酸の合
成または***のいずれかに関する遺伝疾患において特徴
的に上昇する。尿酸過剰血症は、腎機能不全、ケトアシ
ド−シスおよびＬｅｓｃｈ−Ｎｙｈａｎ症候群にも関連
している。白血病、リンパ腫、赤血球増加症、および種
々の散在性新生物等の核蛋白生成および代謝に影響を与
える疾患は、尿酸過剰血症を生じるであろう。従って、
体液中の尿酸濃度を測定するための正確で、経済的かつ
便利な方法は有益である。
【０００３】血中の尿酸測定のために種々の方法が使用
されてきた。従前の方法のほとんどは色測定であった。
ＦａｌｉｎおよびＤｅｎｉｓは、ホスホタングステン酸
と尿酸とのアルカリ溶液中における反応により青色素を
形成する方法を記述している〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３：４６
９（１９７２）〕。ホスホタングステン酸還元法は、多
く適用されてきたが、しばしば濁りが問題となった
〔Ｒ．Ｊ．Ｈｅｎｒｙ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎ
ｉｃｓ（１９７９）〕。Ｋａｌｃｋａｒは、尿酸をアラ
ントインに酸化すべくウリカーゼを使用することにより
該方法を改良した。尿酸濃度は、ウリカーゼ処理前後の
吸光度測定によって測定された〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６
７：４２９（１９４７）〕。Ｈａｅｃｋｅｌは、ウリカ
ーゼ反応により形成される過酸化水素を測定するため
の、カタラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼを使
用する酵素−結合方法を記述した。ＮＡＤの還元が、尿
酸濃度の測定に使用された〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １４：３（１９７６）〕。
されてきた。従前の方法のほとんどは色測定であった。
ＦａｌｉｎおよびＤｅｎｉｓは、ホスホタングステン酸
と尿酸とのアルカリ溶液中における反応により青色素を
形成する方法を記述している〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３：４６
９（１９７２）〕。ホスホタングステン酸還元法は、多
く適用されてきたが、しばしば濁りが問題となった
〔Ｒ．Ｊ．Ｈｅｎｒｙ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎ
ｉｃｓ（１９７９）〕。Ｋａｌｃｋａｒは、尿酸をアラ
ントインに酸化すべくウリカーゼを使用することにより
該方法を改良した。尿酸濃度は、ウリカーゼ処理前後の
吸光度測定によって測定された〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６
７：４２９（１９４７）〕。Ｈａｅｃｋｅｌは、ウリカ
ーゼ反応により形成される過酸化水素を測定するため
の、カタラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼを使
用する酵素−結合方法を記述した。ＮＡＤの還元が、尿
酸濃度の測定に使用された〔Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １４：３（１９７６）〕。
【０００４】Ｆｏｓｓａｔｉらは、Ｂａｒｈａｍ−Ｔｒ
ｉｎｄｅｒ反応の修飾においてウリカーゼ反応により形
成される過酸化水素を検出するためにパーオキシダーゼ
を使用した〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
２６：２２７（１９８０）〕。Ｆｏｓｓａｔｉらの方法
においてパーオキシダーゼは、過酸化水素との反応によ
る４−アミノアンチピリンの３，５−ジクロロ−２−ヒ
ドロキシベンゼンスルホネートとの酸化的カップリング
に対して触媒作用をした。ビリルビンによる干渉は、カ
リウムフェロシアニドの添加により最小化された。
ｉｎｄｅｒ反応の修飾においてウリカーゼ反応により形
成される過酸化水素を検出するためにパーオキシダーゼ
を使用した〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
２６：２２７（１９８０）〕。Ｆｏｓｓａｔｉらの方法
においてパーオキシダーゼは、過酸化水素との反応によ
る４−アミノアンチピリンの３，５−ジクロロ−２−ヒ
ドロキシベンゼンスルホネートとの酸化的カップリング
に対して触媒作用をした。ビリルビンによる干渉は、カ
リウムフェロシアニドの添加により最小化された。
【０００５】他の化合物を４−アミノアンチピリンと結
合させて検出のための異なった波長を有する色原体を形
成することもできる。他のフェノール性化合物である３
−ヒドロキシ−２，４，６−トリブロモ安息香酸は、Ｔ
ｒｉｎｄｅｒおよびＷｅｂｓｔｅｒ〔Ａｎｎａｌｓ ｏ
ｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２
１：４３０（１９８４）〕に記載されている。Ｎ−エチ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−
ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）を含むアニリン誘導体類も
合成されている〔Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ３０：２４９２（１９
８２）〕。
合させて検出のための異なった波長を有する色原体を形
成することもできる。他のフェノール性化合物である３
−ヒドロキシ−２，４，６−トリブロモ安息香酸は、Ｔ
ｒｉｎｄｅｒおよびＷｅｂｓｔｅｒ〔Ａｎｎａｌｓ ｏ
ｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２
１：４３０（１９８４）〕に記載されている。Ｎ−エチ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−
ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）を含むアニリン誘導体類も
合成されている〔Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ３０：２４９２（１９
８２）〕。
【０００６】尿酸試薬の保管寿命は、酵素類の安定性に
より制限される。該ウリカーゼ−パーオキシダーゼ試薬
は、パーオキシダーゼについての６．５およびウリカー
ゼについての８．５の最適pHの中間値を必要とする。該
中間的pHは、溶液相における両酵素により低い安定性を
与える。溶液相における試薬の保管寿命を増すためによ
り高い酵素濃度も使用されてきたが、試薬経費がより嵩
む不都合を生じている。不安定化試薬のある種のものを
第２試薬溶液として分離することも保管寿命を長くし得
る。不安定化試薬は、フェノール性指示薬およびフェロ
シアニドを含む。第２の試薬溶液は、方法の便利さを低
下せしめ、また、誤差および無駄の元となり得る。
より制限される。該ウリカーゼ−パーオキシダーゼ試薬
は、パーオキシダーゼについての６．５およびウリカー
ゼについての８．５の最適pHの中間値を必要とする。該
中間的pHは、溶液相における両酵素により低い安定性を
与える。溶液相における試薬の保管寿命を増すためによ
り高い酵素濃度も使用されてきたが、試薬経費がより嵩
む不都合を生じている。不安定化試薬のある種のものを
第２試薬溶液として分離することも保管寿命を長くし得
る。不安定化試薬は、フェノール性指示薬およびフェロ
シアニドを含む。第２の試薬溶液は、方法の便利さを低
下せしめ、また、誤差および無駄の元となり得る。
【０００７】尿酸用１成分試薬の安定性は、異なる市販
調製物において１日から３ケ月まで変化する。Ｆｏｓｓ
ａｔｉら（前出文献）は、１成分試薬のウリカーゼ−パ
ーオキシダーゼ反応に基づく１作業日の安定時間を報告
している。ＭｅｄｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔ
ｅｍ社の尿酸液体安定試薬セットは、特定されていない
保存剤および安定剤を含む２種類の液体試薬を有してな
る。組合された試薬は、２°−８℃にて３ケ月間の報告
どおりの安定性を有している。単一試薬の安定性が低い
という問題は、複数の試薬溶液または凍結乾燥試薬の必
要性を生んでいる。単一の即使用できる試薬は、試薬調
製の時間がなくより迅速であり、再構成および混合にお
ける体積誤差を無くすることによってより正確であり、
更に、合された試薬の期限切れからくる無駄を最少にす
ることによって経済的である。
調製物において１日から３ケ月まで変化する。Ｆｏｓｓ
ａｔｉら（前出文献）は、１成分試薬のウリカーゼ−パ
ーオキシダーゼ反応に基づく１作業日の安定時間を報告
している。ＭｅｄｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔ
ｅｍ社の尿酸液体安定試薬セットは、特定されていない
保存剤および安定剤を含む２種類の液体試薬を有してな
る。組合された試薬は、２°−８℃にて３ケ月間の報告
どおりの安定性を有している。単一試薬の安定性が低い
という問題は、複数の試薬溶液または凍結乾燥試薬の必
要性を生んでいる。単一の即使用できる試薬は、試薬調
製の時間がなくより迅速であり、再構成および混合にお
ける体積誤差を無くすることによってより正確であり、
更に、合された試薬の期限切れからくる無駄を最少にす
ることによって経済的である。
【０００８】試薬安定性の損失は、酵素または指示薬の
分解によっても起こり得る。コレステロール試薬〔米国
特許第４，３７８，４２９号〕およびα−アミラーゼ試
薬〔国際特許公開番号ＷＯ８９／００６００〕の安定化
のためのポリヒドロキシ有機化合物の使用は、Ｍｏｄｒ
ｏｖｉｃｈにより記述されている。開示されたポリヒド
ロキシ化合物は、グリセロール、エチレングリコール、
ソルビトール、およびポリエチレングリコールを含んで
いた。
分解によっても起こり得る。コレステロール試薬〔米国
特許第４，３７８，４２９号〕およびα−アミラーゼ試
薬〔国際特許公開番号ＷＯ８９／００６００〕の安定化
のためのポリヒドロキシ有機化合物の使用は、Ｍｏｄｒ
ｏｖｉｃｈにより記述されている。開示されたポリヒド
ロキシ化合物は、グリセロール、エチレングリコール、
ソルビトール、およびポリエチレングリコールを含んで
いた。
【０００９】Ｅ．ｃｏｌｉジヒドロオロターゼの改善さ
れた安定化が、ナトリウムボロハイドライドにより処理
されたエチレングリコールを使用して例示された〔Ａｎ
ａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３
４、１４４−１５２頁（１９８３）〕。
れた安定化が、ナトリウムボロハイドライドにより処理
されたエチレングリコールを使用して例示された〔Ａｎ
ａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３
４、１４４−１５２頁（１９８３）〕。
【００１０】溶液中のウリカーゼは、しばしばグリセロ
ールと合されて市販されている〔例えばシグマサイエン
ティフィクカタログ番号Ｕ１３７７（５０％グリセロー
ル）〕。しかしながら、得られる尿酸用組合せ試薬にお
いては、グリセロール含有量は安定化剤として有効であ
る程度に充分ではないであろう〔例えばＭｅｔｈｏｄｏ
ｆ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｖｏｌ．
４、１９５１頁（１９７４）；グリセロール含有量は記
載された最終試薬で０．６パーセント未満であった（１
９７４）〕。
ールと合されて市販されている〔例えばシグマサイエン
ティフィクカタログ番号Ｕ１３７７（５０％グリセロー
ル）〕。しかしながら、得られる尿酸用組合せ試薬にお
いては、グリセロール含有量は安定化剤として有効であ
る程度に充分ではないであろう〔例えばＭｅｔｈｏｄｏ
ｆ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｖｏｌ．
４、１９５１頁（１９７４）；グリセロール含有量は記
載された最終試薬で０．６パーセント未満であった（１
９７４）〕。
【００１１】ウリカーゼは、凍結乾燥状態で非イオン性
界面活性剤、血清アルブミンおよび／または塩基性アミ
ノ酸を伴って安定化される〔日本国特許公開番号６０／
２２４，４９９〕。尿酸用ウリカーゼ−パーオキシダー
ゼ試薬は、ＭａｒｙｍｏｎｔおよびＬｏｎｄｏｎによっ
てＥＤＴＡを伴って安定化された〔Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ４２：６３０（１９６４）〕。該試
薬は、pH７．５のトリス緩衝溶液中に、ウリカーゼ、パ
ーオキシダーゼ、Ｏ−ジアニシジンヒドロクロリド、１
mM ＥＤＴＡおよび０．０３％ウシアルブミンを有して
いた。冷蔵された該試薬の安定性は数週間であった。
界面活性剤、血清アルブミンおよび／または塩基性アミ
ノ酸を伴って安定化される〔日本国特許公開番号６０／
２２４，４９９〕。尿酸用ウリカーゼ−パーオキシダー
ゼ試薬は、ＭａｒｙｍｏｎｔおよびＬｏｎｄｏｎによっ
てＥＤＴＡを伴って安定化された〔Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ４２：６３０（１９６４）〕。該試
薬は、pH７．５のトリス緩衝溶液中に、ウリカーゼ、パ
ーオキシダーゼ、Ｏ−ジアニシジンヒドロクロリド、１
mM ＥＤＴＡおよび０．０３％ウシアルブミンを有して
いた。冷蔵された該試薬の安定性は数週間であった。
【００１２】尿酸試薬の安定性は、パーオキシダーゼを
ミクロパーオキシダーゼに置換し、かつpHを８．２に上
昇させることによって向上した〔ヨーロッパ特許出願公
開番号１９５３２０〕。チトクロームＣのプロテアーゼ
分解物由来のペプチドであるミクロパーオキシダーゼ
は、西洋ワサビパーオキシダーゼよりもアルカリ性pHで
より安定である。ウリカーゼもより高いpHの緩衝液の
０．１ＭボレートpH８．２によって安定化される。該試
薬のグリセロール含有量は２．５パーセントである。該
試薬は、４５℃にて４０時間安定である〔Ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：９６９（１９８
５）〕。
ミクロパーオキシダーゼに置換し、かつpHを８．２に上
昇させることによって向上した〔ヨーロッパ特許出願公
開番号１９５３２０〕。チトクロームＣのプロテアーゼ
分解物由来のペプチドであるミクロパーオキシダーゼ
は、西洋ワサビパーオキシダーゼよりもアルカリ性pHで
より安定である。ウリカーゼもより高いpHの緩衝液の
０．１ＭボレートpH８．２によって安定化される。該試
薬のグリセロール含有量は２．５パーセントである。該
試薬は、４５℃にて４０時間安定である〔Ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：９６９（１９８
５）〕。
【００１３】本発明は、体液試料中の尿酸濃度測定のた
めの方法に使用する単一溶液形態で安定性の増大された
試薬を提供するものである。更に特定的には、本発明の
安定化試薬は、ウリカーゼ、パーオキシダーゼ、指示
薬、および安定化剤として少なくとも３個の炭素および
少なくとも３個のヒドロキシル基を有する多価非芳香族
性アルコール、特に好ましくは、グリセロール、ソルビ
トールおよびマンニトール等の多価アルコールを含有す
るものである。本発明の試薬は、場合により更に不活性
蛋白質およびＥＤＴＡを含む。
めの方法に使用する単一溶液形態で安定性の増大された
試薬を提供するものである。更に特定的には、本発明の
安定化試薬は、ウリカーゼ、パーオキシダーゼ、指示
薬、および安定化剤として少なくとも３個の炭素および
少なくとも３個のヒドロキシル基を有する多価非芳香族
性アルコール、特に好ましくは、グリセロール、ソルビ
トールおよびマンニトール等の多価アルコールを含有す
るものである。本発明の試薬は、場合により更に不活性
蛋白質およびＥＤＴＡを含む。
【００１４】ソルビトール、グリセロールおよびマンニ
トール等の少なくとも３個の炭素および３個のヒドロキ
シル基を有する多価非芳香族性化合物がウキカーゼ基材
試薬の保存期間を増大することが見出された。該保存期
間は、ＥＤＴＡおよびウシ−γ−グロブリン等の不活性
蛋白質の添加により更に延長された。該延長された試薬
の温度安定性は、４５℃程度の高温度で１週間保存した
場合の酵素活性を実質的に保持するために充分であっ
た。
トール等の少なくとも３個の炭素および３個のヒドロキ
シル基を有する多価非芳香族性化合物がウキカーゼ基材
試薬の保存期間を増大することが見出された。該保存期
間は、ＥＤＴＡおよびウシ−γ−グロブリン等の不活性
蛋白質の添加により更に延長された。該延長された試薬
の温度安定性は、４５℃程度の高温度で１週間保存した
場合の酵素活性を実質的に保持するために充分であっ
た。
【００１５】上昇した温度においてさえもこのような増
大した安定性を達成するためには、該ヒドロキシル非芳
香族性化合物は高い純度を有していなければならず、か
つ金属イオン、還元性物質および蛋白質変性物質を含む
不安定化不純物を含有してはならないことが見出され
た。グリセロールを含むある種の化合物は、複数回の蒸
留によって純度を改善し得る。不純物を、ナトリウムボ
ロハイドライドによる処理によってヒドロキシル化合物
から除去することもできる。好ましい処理は、アルカリ
性pHにおける室温での数時間の処理である。増大された
試薬安定性は、本発明のポリヒドロキシ非芳香族性化合
物のポロハイドライド処理の結果において見出された。
大した安定性を達成するためには、該ヒドロキシル非芳
香族性化合物は高い純度を有していなければならず、か
つ金属イオン、還元性物質および蛋白質変性物質を含む
不安定化不純物を含有してはならないことが見出され
た。グリセロールを含むある種の化合物は、複数回の蒸
留によって純度を改善し得る。不純物を、ナトリウムボ
ロハイドライドによる処理によってヒドロキシル化合物
から除去することもできる。好ましい処理は、アルカリ
性pHにおける室温での数時間の処理である。増大された
試薬安定性は、本発明のポリヒドロキシ非芳香族性化合
物のポロハイドライド処理の結果において見出された。
【００１６】また、エチレングリコールおよびプロピレ
ングリコール等のヒドロキシル化合物は、試薬の安定性
を充分には増大しないことが見出された。好ましいヒド
ロキシル化合物は、少なくとも３個の炭素原子および少
なくとも３個のヒドロキシル基を有する多価アルコール
である。
ングリコール等のヒドロキシル化合物は、試薬の安定性
を充分には増大しないことが見出された。好ましいヒド
ロキシル化合物は、少なくとも３個の炭素原子および少
なくとも３個のヒドロキシル基を有する多価アルコール
である。
【００１７】好ましいヒドロキシル化合物は、４００−
７００nmに吸収を有さず、低粘性であり、かつ高い溶解
度を有している。体積測定および溶液の混合は、溶液粘
性が低く高い溶解度を有するヒドロキシル化合物を用い
ると、より効率的である。高い溶解度は、特に２°−８
℃での保存中の結晶化および沈殿を防止するためにも重
要である。ソルビトールは、低粘性、高溶解度および低
価格であることから、好ましいヒドロキシル化合物であ
る。
７００nmに吸収を有さず、低粘性であり、かつ高い溶解
度を有している。体積測定および溶液の混合は、溶液粘
性が低く高い溶解度を有するヒドロキシル化合物を用い
ると、より効率的である。高い溶解度は、特に２°−８
℃での保存中の結晶化および沈殿を防止するためにも重
要である。ソルビトールは、低粘性、高溶解度および低
価格であることから、好ましいヒドロキシル化合物であ
る。
【００１８】該ポリオールは、本発明において約１０％
から酵素に対して好ましからぬ阻害を生じることで制限
される最大濃度までの濃度範囲にわたって有用に使用さ
れ得る。好ましい濃度範囲は、２５−５０％（ｗｔ／ｖ
ｏｌ％）である。
から酵素に対して好ましからぬ阻害を生じることで制限
される最大濃度までの濃度範囲にわたって有用に使用さ
れ得る。好ましい濃度範囲は、２５−５０％（ｗｔ／ｖ
ｏｌ％）である。
【００１９】ＥＤＴＡは、指示薬の非特異的酸化の結果
生じ得るブランク吸光度の上昇を防止するために添加し
て有用である。酸化は、酸素および金属イオン等の触媒
の存在によって起こる。好ましいＥＤＴＡ濃度は、０．
０４−２．０mMであるが、少なくとも０．０１mMから酵
素活性を阻害するまでのＥＤＴＡ最大濃度まで、かなり
変化させることもできる。
生じ得るブランク吸光度の上昇を防止するために添加し
て有用である。酸化は、酸素および金属イオン等の触媒
の存在によって起こる。好ましいＥＤＴＡ濃度は、０．
０４−２．０mMであるが、少なくとも０．０１mMから酵
素活性を阻害するまでのＥＤＴＡ最大濃度まで、かなり
変化させることもできる。
【００２０】尿酸の酸化に由来する過酸化水素を検出す
るための指示薬は、該試薬のもう一つの成分である。好
ましい指示薬は溶液において安定であり、かつビリルビ
ン干渉が低いものである。
るための指示薬は、該試薬のもう一つの成分である。好
ましい指示薬は溶液において安定であり、かつビリルビ
ン干渉が低いものである。
【００２１】パーオキシダーゼについての指示薬は、ベ
ンジジン類、ロイコ染料類、４−アミノアンチピリン、
フェノール類、ナフトール類およびアニリン誘導体類を
含む。好ましい指示薬は、４−アミノアンチピリンおよ
びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプ
ロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）である。好まし
い濃度範囲は、４−アミノアンチピリンについては、
０．０５−１０mM、ＴＯＯＳでは０．０５−１０mMであ
る。
ンジジン類、ロイコ染料類、４−アミノアンチピリン、
フェノール類、ナフトール類およびアニリン誘導体類を
含む。好ましい指示薬は、４−アミノアンチピリンおよ
びＮ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプ
ロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）である。好まし
い濃度範囲は、４−アミノアンチピリンについては、
０．０５−１０mM、ＴＯＯＳでは０．０５−１０mMであ
る。
【００２２】ビリルビンの干渉を最少とするためにフェ
ロシアニドを該試薬に添加してもよい。しかしながら、
フェロシアニド等の金属イオンの存在は、指示薬および
酵素を不安定化することもある。本発明のヒドロキシル
安定化剤を有する試薬の安定性は、フェロシアニドの添
加を許容する程に充分高い。フェロシアニドの好ましい
濃度範囲は、１−４００μＭであり、最大濃度は、酵素
活性を阻害する濃度である。
ロシアニドを該試薬に添加してもよい。しかしながら、
フェロシアニド等の金属イオンの存在は、指示薬および
酵素を不安定化することもある。本発明のヒドロキシル
安定化剤を有する試薬の安定性は、フェロシアニドの添
加を許容する程に充分高い。フェロシアニドの好ましい
濃度範囲は、１−４００μＭであり、最大濃度は、酵素
活性を阻害する濃度である。
【００２３】不活性蛋白質を、更に安定性を増すために
添加してもよい。不活性蛋白質は、血清アルブミン類、
グロブリン類および繊維性蛋白質類を含む。好ましい蛋
白質は、ウシ−γ−グロブリンであり、ｗｔ／ｖｏｌに
おける好ましい濃度は、０．０５−０．３％である。よ
り低い濃度が有用であり得る。好ましい不活性蛋白質
は、酵素分解を起こすであろうプロテアーゼ不純物を含
まないものである。
添加してもよい。不活性蛋白質は、血清アルブミン類、
グロブリン類および繊維性蛋白質類を含む。好ましい蛋
白質は、ウシ−γ−グロブリンであり、ｗｔ／ｖｏｌに
おける好ましい濃度は、０．０５−０．３％である。よ
り低い濃度が有用であり得る。好ましい不活性蛋白質
は、酵素分解を起こすであろうプロテアーゼ不純物を含
まないものである。
【００２４】該試薬中の酵素は、高い純度および溶液溶
解度を有していなければならない。微生物性ウリカーゼ
は、動物性ウリカーゼに比べてより低いpH範囲において
より良い安定性と高い活性とを有している。好ましいウ
リカーゼは、低価格および高い安定性故にＢａｃｉｌｌ
ｕｓ ｆａｓｔｉｄｉｏｕｓまたはＣａｎｄｉｄａｕｔ
ｉｌｉｓのものである。該酵素濃度は、保存期間の末に
おいても尿酸との充分に速く、定量的な反応のために充
分でなければならない。Ｂａｃｉｌｌｕｓｆａｓｔｉｄ
ｉｏｓｕｓウリカーゼの好ましい濃度範囲は、１００−
８００Ｕ／ｌである。
解度を有していなければならない。微生物性ウリカーゼ
は、動物性ウリカーゼに比べてより低いpH範囲において
より良い安定性と高い活性とを有している。好ましいウ
リカーゼは、低価格および高い安定性故にＢａｃｉｌｌ
ｕｓ ｆａｓｔｉｄｉｏｕｓまたはＣａｎｄｉｄａｕｔ
ｉｌｉｓのものである。該酵素濃度は、保存期間の末に
おいても尿酸との充分に速く、定量的な反応のために充
分でなければならない。Ｂａｃｉｌｌｕｓｆａｓｔｉｄ
ｉｏｓｕｓウリカーゼの好ましい濃度範囲は、１００−
８００Ｕ／ｌである。
【００２５】高純度かつ低価格のものが商業的に入手可
能であることから西洋ワサビ由来のパーオキシダーゼが
好ましい。酵素濃度は、迅速かつ完全な反応のために充
分高くなければならず、好ましくは、１，０００−１
０，０００Ｕ／ｌである。
能であることから西洋ワサビ由来のパーオキシダーゼが
好ましい。酵素濃度は、迅速かつ完全な反応のために充
分高くなければならず、好ましくは、１，０００−１
０，０００Ｕ／ｌである。
【００２６】６．５−８．５のpH範囲において充分な緩
衝能力を有する任意の緩衝剤を使用することができる。
このpH範囲の緩衝剤は、リン酸塩、トリス、ビス−トリ
スプロパン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−
２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、および３−
〔Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ〕−２
−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）を含
む。低価格および高い安定性のため、好ましい緩衝剤は
リン酸塩である。好ましい濃度範囲は、２５−２００mM
のリン酸塩であり、pH７．５である。
衝能力を有する任意の緩衝剤を使用することができる。
このpH範囲の緩衝剤は、リン酸塩、トリス、ビス−トリ
スプロパン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−
２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、および３−
〔Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ〕−２
−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）を含
む。低価格および高い安定性のため、好ましい緩衝剤は
リン酸塩である。好ましい濃度範囲は、２５−２００mM
のリン酸塩であり、pH７．５である。
【００２７】尿酸濃度の測定は、体液試料の特定体積お
よび試薬の特定体積を用いて行なわれる。吸光度測定
は、試料ブランクを測定するために、混合後、かつ尿酸
の代謝による有意な吸光度変化が起こる前にできるだけ
速に行なわれる。０．５秒後の第１の吸光度測定が適当
である。第２の吸光度測定は、吸光度が定常的になった
後、典型的には２０mg／ｄＬの尿酸濃度において３７℃
にて３．３分間である。典型的には、該試薬は既知の尿
酸濃度を有する水性または血清溶液にて標準化される。
よび試薬の特定体積を用いて行なわれる。吸光度測定
は、試料ブランクを測定するために、混合後、かつ尿酸
の代謝による有意な吸光度変化が起こる前にできるだけ
速に行なわれる。０．５秒後の第１の吸光度測定が適当
である。第２の吸光度測定は、吸光度が定常的になった
後、典型的には２０mg／ｄＬの尿酸濃度において３７℃
にて３．３分間である。典型的には、該試薬は既知の尿
酸濃度を有する水性または血清溶液にて標準化される。
【００２８】ＣＯＢＡＳ ＢＩＯ（登録商標）、ＣＯＢ
ＡＳ ＦＡＲＡTM、またはＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡTM（Ｒ
ｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉ
ｎｃ．）等の自動化装置におけるアッセイのための体積
は、試料が１５μｌ、希釈剤が５０μｌ、および試薬が
２００μｌである。試料および試薬の体積は、反応条
件、分光光度計または他の装置、ならびに他の変化に依
存している。測定条件に対する試料および試薬の体積の
最適化は、当業者の能力の範囲内にある。尿酸濃度は、
最初と最後の吸光度読取値の間の差から決定される。
ＡＳ ＦＡＲＡTM、またはＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡTM（Ｒ
ｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉ
ｎｃ．）等の自動化装置におけるアッセイのための体積
は、試料が１５μｌ、希釈剤が５０μｌ、および試薬が
２００μｌである。試料および試薬の体積は、反応条
件、分光光度計または他の装置、ならびに他の変化に依
存している。測定条件に対する試料および試薬の体積の
最適化は、当業者の能力の範囲内にある。尿酸濃度は、
最初と最後の吸光度読取値の間の差から決定される。
【００２９】以下の例において引用されるように、標準
についての“因子”は、吸光度差によって分割された標
準溶液の尿酸濃度である。感度は因子の逆数である。試
薬を３７℃または４５℃にて保存した後は、感度は減少
し因子は増大する。
についての“因子”は、吸光度差によって分割された標
準溶液の尿酸濃度である。感度は因子の逆数である。試
薬を３７℃または４５℃にて保存した後は、感度は減少
し因子は増大する。
【００３０】例１ 試薬の調製 ３００ｇのＤ−ソルビトールを３００mlの蒸留水に加
え、続いて１．４ｇの水酸化カリウムを加えた。該溶液
に０．９５ｇのナトリウムボロハイドライドを加え、室
温にて一夜攪拌した。２Ｍのリン酸を加えてpHを６．３
まで下げた。ナトリウムボロハイドライドを破砕した
後、水を全体積が９００mlとなるように加え、ついで２
１．４ｇの二塩基性無水リン酸カリウムを加えた。該処
理されたソルビトール溶液に、１．０ｇのメチル４−ヒ
ドロキシベンゾエート（メチルパラベン）、０．２０ｇ
のプロピル４−ヒドロキシベンゾエート（プロピルパラ
ベン）、０．３７ｇのＥＤＴＡ、４５mgのカリウムフェ
ロシアニド、１３４mgの４−アミノアンチピリン、０．
５８ｇのＴＯＯＳ、２．０ｇのウシ−γ−グロブリンを
添加した。pHを７．５±０．１に調節した。次いで、６
５０Ｕのウリカーゼ、および７１００Ｕのパーオキシダ
ーゼを加えた。該溶液の体積を水にて１Ｌまで増した。
０．２２Ｕフィルターを通してろ過した後、０．５ｇの
フォーマスター（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ）ＦＬＤ（Ｈｅｎ
ｋｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を加えた。
え、続いて１．４ｇの水酸化カリウムを加えた。該溶液
に０．９５ｇのナトリウムボロハイドライドを加え、室
温にて一夜攪拌した。２Ｍのリン酸を加えてpHを６．３
まで下げた。ナトリウムボロハイドライドを破砕した
後、水を全体積が９００mlとなるように加え、ついで２
１．４ｇの二塩基性無水リン酸カリウムを加えた。該処
理されたソルビトール溶液に、１．０ｇのメチル４−ヒ
ドロキシベンゾエート（メチルパラベン）、０．２０ｇ
のプロピル４−ヒドロキシベンゾエート（プロピルパラ
ベン）、０．３７ｇのＥＤＴＡ、４５mgのカリウムフェ
ロシアニド、１３４mgの４−アミノアンチピリン、０．
５８ｇのＴＯＯＳ、２．０ｇのウシ−γ−グロブリンを
添加した。pHを７．５±０．１に調節した。次いで、６
５０Ｕのウリカーゼ、および７１００Ｕのパーオキシダ
ーゼを加えた。該溶液の体積を水にて１Ｌまで増した。
０．２２Ｕフィルターを通してろ過した後、０．５ｇの
フォーマスター（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ）ＦＬＤ（Ｈｅｎ
ｋｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を加えた。
【００３１】例２ ＣＯＢＡＳ ＢＩＯ、ＣＯＢＡＳ ＦＡＲＡまたはＣＯ
ＢＡＳ ＭＩＲＡによる尿酸の測定 例１に従って調製した試薬２００ｕｌに、１５ｕｌの試
料および５０ｕｌの水希釈液を加え混合した。５５０nm
における吸光度を、試料、希釈液、および試薬の混合
後、０．５秒および２００秒後に行なった。吸光度差
を、既知尿酸濃度を有する標準溶液による標準化によっ
て尿酸濃度に変換した。
ＢＡＳ ＭＩＲＡによる尿酸の測定 例１に従って調製した試薬２００ｕｌに、１５ｕｌの試
料および５０ｕｌの水希釈液を加え混合した。５５０nm
における吸光度を、試料、希釈液、および試薬の混合
後、０．５秒および２００秒後に行なった。吸光度差
を、既知尿酸濃度を有する標準溶液による標準化によっ
て尿酸濃度に変換した。
【００３２】以下の結果は、尿酸を加えた正常ヒト血清
を用いてＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにより得たものである。
対照尿酸値は、ＲＯＣＨＥ尿酸用試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｃ．）、ウリ
カーゼ−カタラーゼ−アルデヒドデヒドロゲナーゼ法を
用いてＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにより３４０nmにて測定し
たものである。 尿酸濃度（mg／dl）対照方法 例１試薬 ２．５ ２．４ ５．３ ４．８ １０．５ ９．９ １３．１ １２．６ １６．５ １５．８ ２０．６ １９．８ ２５．５ ２４．６
を用いてＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにより得たものである。
対照尿酸値は、ＲＯＣＨＥ尿酸用試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｃ．）、ウリ
カーゼ−カタラーゼ−アルデヒドデヒドロゲナーゼ法を
用いてＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにより３４０nmにて測定し
たものである。 尿酸濃度（mg／dl）対照方法 例１試薬 ２．５ ２．４ ５．３ ４．８ １０．５ ９．９ １３．１ １２．６ １６．５ １５．８ ２０．６ １９．８ ２５．５ ２４．６
【００３３】例３ 試薬安定性およびソルビトール濃度 以下の試薬をソルビトール２０％、３０％、または４０
％をもって調製した。ソルビトールのボロハイドライド
ライド処理を中性pHにて行なった。
％をもって調製した。ソルビトールのボロハイドライド
ライド処理を中性pHにて行なった。
【００３４】２０または３０または４０ｇのＤ−ソルビ
トール ９５mg ナトリウムボロハイドライド １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン ４．３mg カリウムフェロシアニド １２．７mg ４−アミノアンチピリン ５１mg ＴＯＯＳ ５１０Ｕ パーオキシダーゼ ６０Ｕ ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍ リン酸塩緩衝液 pH７．５
トール ９５mg ナトリウムボロハイドライド １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン ４．３mg カリウムフェロシアニド １２．７mg ４−アミノアンチピリン ５１mg ＴＯＯＳ ５１０Ｕ パーオキシダーゼ ６０Ｕ ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍ リン酸塩緩衝液 pH７．５
【００３５】試薬を、４５℃にて１２日間保存した後に
ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにて血清試料を用いて試験した。
因子を標準溶液から決定し、吸光度を尿酸濃度に変換す
るために用いた。高い因子は、尿酸濃度に対する低い感
度に特徴的である。
ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにて血清試料を用いて試験した。
因子を標準溶液から決定し、吸光度を尿酸濃度に変換す
るために用いた。高い因子は、尿酸濃度に対する低い感
度に特徴的である。
【００３６】 ソルビトール ソルビトール ソルビトール 対 照 ２０％ ３０％ ４０％ 尿酸濃度（mg／dl）： ４．５ ３．５ ４．４ ４．５ １２．６ １１．４ １３．０ １２．９ ２０．３ １９．０ ２０．１ ２０．８ ２４．８ ２２．０ ２３．４ ２４．６ 因子： ２７．２ ２３６ ７７．１ ３０．８ 第１のカラムの尿酸濃度および因子は、４℃にて保存さ
れたすべての試薬についての代表値である。ソルビトー
ル濃度はｗｔ／ｖｏｌ％である。
れたすべての試薬についての代表値である。ソルビトー
ル濃度はｗｔ／ｖｏｌ％である。
【００３７】例４ 試薬安定性に対するＥＤＴＡまたはウシ−γ−グロブリ
ンの効果 ＥＤＴＡまたはウシ−γ−グロブリンを含まずに以下の
試薬を調製した。ソルビトールのボロハイドライド処理
は中性pHにて行なった。
ンの効果 ＥＤＴＡまたはウシ−γ−グロブリンを含まずに以下の
試薬を調製した。ソルビトールのボロハイドライド処理
は中性pHにて行なった。
【００３８】２５ｇ Ｄ−ソルビトール ７９mg ナトリウムボロハイドライド １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ４．２mg カリウムフェロシアニド １２．７mg ４−アミノアンチピリン ５５mg ＴＯＯＳ ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン ６５０Ｕ パーオキシダーゼ ６０Ｕ ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍリン酸塩緩衝液pH７．５
【００３９】試薬を、４５℃にて７日間保存した後ＣＯ
ＢＡＳ ＭＩＲＡにて血清試料を用いて試験した。因子
は、標準溶液から決定し、吸光度を尿酸濃度に変換する
ために使用した。
ＢＡＳ ＭＩＲＡにて血清試料を用いて試験した。因子
は、標準溶液から決定し、吸光度を尿酸濃度に変換する
ために使用した。
【００４０】 ＥＤＴＡ ウシ−γ−グロ ＥＤＴＡおよびウシ 対 照 非含有 ブリン非含有 −γグロブリン含有 尿酸濃度（mg／dl）： ４．６ ０．２ ４．０ ４．４ ８．７ ８．５ ８．５ ８．６ １６．５ ２１．６ １６．２ １６．２ ２４．４ ３３．２ ２２．９ ２２．８ 因子： ２８．０ ４８１ ７０．７ ３４．３
【００４１】対照の列の尿酸濃度および因子は、４℃に
て保存したすべての試薬の代表値である。４５℃にて１
週間保存した後の最高感度（最低の因子）は、ＥＤＴＡ
とウシ−γ−グロブリンとの両者を含む試薬であった。
て保存したすべての試薬の代表値である。４５℃にて１
週間保存した後の最高感度（最低の因子）は、ＥＤＴＡ
とウシ−γ−グロブリンとの両者を含む試薬であった。
【００４２】例５ ソルビトールのボロハイドライド処理の効果 試薬安定性の比較を、ソルビトール無し、グリセロール
無し、３０％再蒸留グリセロール、ボロハイドライド処
理無しの３０％ソルビトールおよび高pHでボロハイドラ
イド処理した３０％ソルビトールによって行なった。
無し、３０％再蒸留グリセロール、ボロハイドライド処
理無しの３０％ソルビトールおよび高pHでボロハイドラ
イド処理した３０％ソルビトールによって行なった。
【００４３】０ｇグリセロールまたは３０ｇ再蒸留グリ
セロールまたは３０ｇソルビトール、または高pHにてボ
ロハイドライド処理（９５mg）した３０ｇソルビトー
ル。 １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ４．４mg カリウムフェロシアニド ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン １３．５mg ４−アミノアンチピリン ５８mg ＴＯＯＳ ７１０Ｕ． パーオキシダーゼ ５４Ｕ． ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍ リン酸塩緩衝液pH７．５ １００mg フォーマスターＦＬＤ 試薬を４℃および４５℃にて保存した後に血清試料を用
いて試験した。
セロールまたは３０ｇソルビトール、または高pHにてボ
ロハイドライド処理（９５mg）した３０ｇソルビトー
ル。 １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ４．４mg カリウムフェロシアニド ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン １３．５mg ４−アミノアンチピリン ５８mg ＴＯＯＳ ７１０Ｕ． パーオキシダーゼ ５４Ｕ． ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍ リン酸塩緩衝液pH７．５ １００mg フォーマスターＦＬＤ 試薬を４℃および４５℃にて保存した後に血清試料を用
いて試験した。
【００４４】 ０％グリセロール 高pHでボロハイドライド処理 ０％ソルビトール した３０％ソルビトール 対 照 ４５℃にて３日間 ４５℃にて３日間 尿酸濃度（mg／dl） ３．３ ０ ３．２ ９．２ ３．７ ９．０ １４．９ １１．０ １４．６ ２０．５ １８．６ ２０．０ ２６．１ ２６．４ ２５．１ 因子： ２９ ６０６ ３２ 第１列の数値は、４℃における両試薬の代表値である。
【００４５】 １ 週 間 保 存 ４５℃における保存 グリセロール ３０％ ３０％ 無し ソルビトール ソルビトール ソリビトール ３０％ ボロハイドライド 高pHにてボロハ 対 照 無し グリセロール 処理無し イドライド処理 尿酸濃度（mg／dl）： ３．３ ０ ０．６ ０ ２．６ ９．２ ０ ７．７ ６．５ ９．１ １５．１ ０．５ １６．３ １４．７ １５．４ ２０．６ １３．７ ２４．６ ２２．５ ２１．６ ２６．１ ２７．４ ３２．６ ３０．５ ２７．４ 因子： ２９ ２０７７ ２６３ ４５４ ９１ 第１列の数値は、４℃におけるすべての試薬についての
代表値である。
代表値である。
【００４６】例６ ボレート（ホウ酸塩）およびソルビトールによる試薬の
安定性 試薬の安定性を、ソルビトール無し、およびボレート無
し、ソルビトール無しおよびボレート、３０％ソルビト
ールおよびボレート、および高pHにてボロハイドライド
処理した３０％ソルビトールによって行なった。
安定性 試薬の安定性を、ソルビトール無し、およびボレート無
し、ソルビトール無しおよびボレート、３０％ソルビト
ールおよびボレート、および高pHにてボロハイドライド
処理した３０％ソルビトールによって行なった。
【００４７】０mgまたは２３８mgナトリウムボレート １００mg メチルパラベン ２０mg プロピルパラベン ４．４mg カリウムフェロシアニド ３７mg ＥＤＴＡ １００mg ウシ−γ−グロブリン １３．５mg ４−アミノアンチピリン ５８mg ＴＯＯＳ ７１０Ｕ パーオキシダーゼ ４８Ｕ ウリカーゼ １００ml ０．０６３Ｍリン酸塩緩衝液pH７．５ １００mg フォーマスターＦＬＤこれらの試薬を、４
℃および４５℃にて保存した後に、血清試料を用いて試
験した。
℃および４５℃にて保存した後に、血清試料を用いて試
験した。
【００４８】 ３ 日 間 保 存 ４５℃にて保存 ３０％ソルビトール ボレート無し ボレート 高pHにてボロハイド 対 照 ３０％ソルビトール ３０％ソルビトール ライドにより処理 尿酸濃度（mg／dl） ３．２ １．６ ２．４ ３．２ ９．３ ８．３ ９．０ ９．３ １５．０ １５．６ １５．４ １５．２ ２０．５ ２２．３ ２１．５ ２０．５ 因 子 ３０ ２１３ １２１ ３５ 第１列の数値は、４℃におけるすべての試薬の代表値で
ある。ボレート無しかつソルビトール無しの試薬、およ
びボレートを含みソルビトール無しの試薬は、４５℃に
て３日後には完全に損われた。
ある。ボレート無しかつソルビトール無しの試薬、およ
びボレートを含みソルビトール無しの試薬は、４５℃に
て３日後には完全に損われた。
【００４９】 ７ 日 間 保 存 ４℃にて保存 ４５℃にて保存 ３０％ソルビトール ボレート無し ボレート 高pHにてボロハイド 対 照 ３０％ソルビトール ３０％ソルビトール ライドにより処理 尿酸濃度（mg／dl）： ３．６ ２．６ ２．４ ３．３ ９．１ １０．２ １０．３ ９．６ １４．５ １７．４ １８．３ １５．５ １９．８ ２４．７ ２６．０ ２１．４ 因 子 ３０ ３４７ ４４０ １２８
【００５０】第１列の数値は、４℃におけるすべての試
薬の代表値である。最も安定な試薬は、高pHにてボロハ
イドライド処理された３０％ソルビトールを有してい
た。
薬の代表値である。最も安定な試薬は、高pHにてボロハ
イドライド処理された３０％ソルビトールを有してい
た。
フロントページの続き (72)発明者 リチャード アレン カウフマン アメリカ合衆国ニュージャージー州ベレビ ル，ジョラレモン ストリート 744
Claims (8)
- 【請求項１】 有効量のウリカーゼ、パーオキシダー
ゼ、パーオキシド指示薬ならびに試薬の安定化に有効量
の、少なくとも３個の炭素および少なくとも３個のヒド
ロキシル基を有する多価非芳香族性アルコールを含有す
ることを特徴とする体液試料中の尿酸測定用水性試薬組
成物。 - 【請求項２】 前記多価アルコールが、グリセロール、
ソルビトールまたはマンニトールである請求項１に記載
の組成物。 - 【請求項３】 前記多価アルコールが、約１０−約５０
％（ｗｔ／ｖｏｌ）で存在する請求項１に記載の組成
物。 - 【請求項４】 該多価アルコールが、不安定化不純物除
去のために処理される請求項１に記載の組成物。 - 【請求項５】 かかる処理が、該不純物をボロハイドラ
イドと反応させることからなる請求項４に記載の組成
物。 - 【請求項６】 前記組成物を更に安定化させるために有
効な量のＥＤＴＡおよび不活性蛋白質を更に含有する請
求項５に記載の組成物。 - 【請求項７】 該ポリオールが、濃度約２５−約５０％
（ｗｔ／ｖｏｌ）のソルビトールであり、および該不活
性蛋白質が、濃度約０．０５％−０．３％（ｗｔ／ｖｏ
ｌ）のウシγ−グロブリンである請求項６に記載の組成
物。 - 【請求項８】 尿酸測定における該体液試料中のビリル
ビンによる妨害を阻止するために有効な濃度のフェロシ
アニドを更に含有する請求項１または７に記載の組成
物。
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