JPH11266898A - 塩素イオン測定用試薬組成物 - Google Patents
塩素イオン測定用試薬組成物Info
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- JPH11266898A JPH11266898A JP7767798A JP7767798A JPH11266898A JP H11266898 A JPH11266898 A JP H11266898A JP 7767798 A JP7767798 A JP 7767798A JP 7767798 A JP7767798 A JP 7767798A JP H11266898 A JPH11266898 A JP H11266898A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】追随酵素を使用することなく、十分な感度を有
し、かつ、測定精度が高い塩素イオン測定用試薬組成物
を提供する。 【解決手段】（ａ）不活性化型α−アミラーゼ、（ｂ）
キレート剤および（ｃ）基質として、一般式（Ｉ） 【化１】 （式中Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピラノシル基また
は水素原子のいずれかを示し、Ｒ３は２−クロロ−４−
ニトロフェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を示
す。）で表されるマルトオリゴ糖誘導体を含有し、追随
酵素を含有しない塩素イオン測定用試薬組成物。
し、かつ、測定精度が高い塩素イオン測定用試薬組成物
を提供する。 【解決手段】（ａ）不活性化型α−アミラーゼ、（ｂ）
キレート剤および（ｃ）基質として、一般式（Ｉ） 【化１】 （式中Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピラノシル基また
は水素原子のいずれかを示し、Ｒ３は２−クロロ−４−
ニトロフェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を示
す。）で表されるマルトオリゴ糖誘導体を含有し、追随
酵素を含有しない塩素イオン測定用試薬組成物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、α−アミラーゼ活
性を利用する塩素イオン測定用試薬組成物に関する。更
に詳しくは、液体、特に血液または尿中の塩素イオンの
測定用試薬組成物に関するものである。
性を利用する塩素イオン測定用試薬組成物に関する。更
に詳しくは、液体、特に血液または尿中の塩素イオンの
測定用試薬組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血清中の塩素イオン量の測定は、低クロ
ール血症として、低張性脱水症、グルココルチコイド過
剰症、呼吸性アシドーシス等の疾患、高クロール血症と
しては、高張性脱水症、尿細管性アシドーシス、呼吸性
アルカローシス等の疾患の診断に用いられる。
ール血症として、低張性脱水症、グルココルチコイド過
剰症、呼吸性アシドーシス等の疾患、高クロール血症と
しては、高張性脱水症、尿細管性アシドーシス、呼吸性
アルカローシス等の疾患の診断に用いられる。
【０００３】α−アミラーゼ活性を利用した塩素イオン
測定方法としては、非活性型α−アミラーゼ、カルシウ
ム錯体およびα−アミラーゼ測定試薬からなる測定方法
が公知である（特開昭63-126497 号公報) 。この方法で
は、カルシウム錯体を添加することや、一般的にα−ア
ミラーゼ測定試薬中に含まれる、α−グルコシダーゼ、
β−グルコシダーゼ等の追随酵素の影響で、マルトオリ
ゴ糖誘導体が分解されることにより、試薬ブランクの上
昇が著しく大きく、測定値の精度が悪いといった問題点
があった。
測定方法としては、非活性型α−アミラーゼ、カルシウ
ム錯体およびα−アミラーゼ測定試薬からなる測定方法
が公知である（特開昭63-126497 号公報) 。この方法で
は、カルシウム錯体を添加することや、一般的にα−ア
ミラーゼ測定試薬中に含まれる、α−グルコシダーゼ、
β−グルコシダーゼ等の追随酵素の影響で、マルトオリ
ゴ糖誘導体が分解されることにより、試薬ブランクの上
昇が著しく大きく、測定値の精度が悪いといった問題点
があった。
【０００４】一方、この問題点を解決した方法として、
基質として、４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトトリ
オシド、４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトテトラオ
シド等を用いる、追随酵素を用いない測定方法が、知ら
れている（特開平 4-94698号公報) 。しかし、この方法
では十分な感度が得られず、測定値の精度が悪いという
問題が依然として顕在し、実使用に耐えうるものではな
い。
基質として、４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトトリ
オシド、４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトテトラオ
シド等を用いる、追随酵素を用いない測定方法が、知ら
れている（特開平 4-94698号公報) 。しかし、この方法
では十分な感度が得られず、測定値の精度が悪いという
問題が依然として顕在し、実使用に耐えうるものではな
い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な問題を解決するものであり、精密性、定量性、正確性
に優れた塩素イオン測定用組成物を提供することにあ
る。
な問題を解決するものであり、精密性、定量性、正確性
に優れた塩素イオン測定用組成物を提供することにあ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するために鋭意検討したところ、基質として、一
般式（Ｉ）で示されるマルトオリゴ糖誘導体を使用する
ことにより、上記課題を解決し、本発明を完成した。
を達成するために鋭意検討したところ、基質として、一
般式（Ｉ）で示されるマルトオリゴ糖誘導体を使用する
ことにより、上記課題を解決し、本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、（ａ）不活性化型α
−アミラーゼ、（ｂ）キレート剤、および（ｃ）基質と
して、一般式（Ｉ）
−アミラーゼ、（ｂ）キレート剤、および（ｃ）基質と
して、一般式（Ｉ）
【０００８】
【化２】
【０００９】（式中、Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピ
ラノシル基、または水素原子を示し、Ｒ３は２−クロロ
−４−ニトロフェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を
示す。）で表されるマルトオリゴ糖誘導体を含有し、追
随酵素を含有しない塩素イオン測定用試薬組成物であ
る。
ラノシル基、または水素原子を示し、Ｒ３は２−クロロ
−４−ニトロフェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を
示す。）で表されるマルトオリゴ糖誘導体を含有し、追
随酵素を含有しない塩素イオン測定用試薬組成物であ
る。
【００１０】
【発明の実施の態様】本発明の塩素イオン測定用試薬組
成物は、α−アミラーゼの活性化剤である塩素イオンに
より、α−アミラーゼが活性化されることを利用し、分
解された２−クロロ−４−ニトロフェノールを測定する
ことにより、試料中の塩素イオンの量を測定するもので
あり、その一実施様態としては、試料中の塩素イオンに
不活性化型α−アミラーゼ、キレート剤、基質として、
例えば、２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシドを作用さ
せ、遊離する２−クロロ−４−ニトロフェノールを測定
し、試料中の塩素イオン量を知るものである。
成物は、α−アミラーゼの活性化剤である塩素イオンに
より、α−アミラーゼが活性化されることを利用し、分
解された２−クロロ−４−ニトロフェノールを測定する
ことにより、試料中の塩素イオンの量を測定するもので
あり、その一実施様態としては、試料中の塩素イオンに
不活性化型α−アミラーゼ、キレート剤、基質として、
例えば、２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシドを作用さ
せ、遊離する２−クロロ−４−ニトロフェノールを測定
し、試料中の塩素イオン量を知るものである。
【００１１】本発明で使用するα−アミラーゼとは、微
生物、植物、または動物のいずれの起源のものも用いる
ことができるが、好適には動物起源のものであり、たと
えば、ブタ膵由来のα−アミラーゼが例示される。しか
しながら、本発明に用いられるα−アミラーゼは脱塩さ
れて、不活性化型である必要がある。不活性化型α−ア
ミラーゼは、前述のように試料中の塩素イオンを得て、
活性化型α−アミラーゼとなり、α−アミラーゼの基質
と反応する。脱塩方法としては、透析、限外濾過、イオ
ン交換、カラム除去などの方法がある。不活性化型α−
アミラーゼの試薬組成中の濃度は、好ましくは０．５〜
１０００ ＩＵ／ｍｌの範囲で用いられる。
生物、植物、または動物のいずれの起源のものも用いる
ことができるが、好適には動物起源のものであり、たと
えば、ブタ膵由来のα−アミラーゼが例示される。しか
しながら、本発明に用いられるα−アミラーゼは脱塩さ
れて、不活性化型である必要がある。不活性化型α−ア
ミラーゼは、前述のように試料中の塩素イオンを得て、
活性化型α−アミラーゼとなり、α−アミラーゼの基質
と反応する。脱塩方法としては、透析、限外濾過、イオ
ン交換、カラム除去などの方法がある。不活性化型α−
アミラーゼの試薬組成中の濃度は、好ましくは０．５〜
１０００ ＩＵ／ｍｌの範囲で用いられる。
【００１２】本発明のキレート剤とは、エチレンジアミ
ン四酢酸およびその塩、グリコールエーテルジアミン四
酢酸、１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン四
酢酸、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢
酸等があげられる。キレート剤の塩素イオン測定試薬組
成中での役割としては、ブランク反応をおさえる、また
は測定対象外の類似共雑イオンをマスキングする等があ
げられる。その濃度は、０．０１〜１０ｍＭで好適に用
いられる。またこれらのキレート剤は複数組み合わせて
用いても良い。
ン四酢酸およびその塩、グリコールエーテルジアミン四
酢酸、１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン四
酢酸、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢
酸等があげられる。キレート剤の塩素イオン測定試薬組
成中での役割としては、ブランク反応をおさえる、また
は測定対象外の類似共雑イオンをマスキングする等があ
げられる。その濃度は、０．０１〜１０ｍＭで好適に用
いられる。またこれらのキレート剤は複数組み合わせて
用いても良い。
【００１３】本発明の基質は、上記一般式（Ｉ）（式中
Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピラノシル基、または水
素のいずれかを示し、Ｒ３は２−クロロ−４−ニトロフ
ェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を示す。）に示さ
れるものである。その例として、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−α−マルトトリオシド、２−クロロ−４−
ニトロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
α−マルトシド等がある。特に、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−
マルトシドは、非還元末端が修飾されていることから、
内因性α−グルコシダーゼ等による基質分解によって生
じる試薬ブランクの上昇がない、α−アミラーゼの基質
親和性がより高いため、好感度であるといったメリット
があることから好適に用いられる。該基質の試薬組成中
での濃度は、０．１〜５０ｍＭで好適に用いられる。
Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピラノシル基、または水
素のいずれかを示し、Ｒ３は２−クロロ−４−ニトロフ
ェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を示す。）に示さ
れるものである。その例として、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−α−マルトトリオシド、２−クロロ−４−
ニトロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
α−マルトシド等がある。特に、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−α−
マルトシドは、非還元末端が修飾されていることから、
内因性α−グルコシダーゼ等による基質分解によって生
じる試薬ブランクの上昇がない、α−アミラーゼの基質
親和性がより高いため、好感度であるといったメリット
があることから好適に用いられる。該基質の試薬組成中
での濃度は、０．１〜５０ｍＭで好適に用いられる。
【００１４】また、本発明の測定試薬組成物には、試薬
ブランクをおさえ、感度を調節し、定量性、定量域を向
上させ、管理血清等に含まれる試料中のマルトース等の
影響を回避する等の目的のため、必要により、マルトオ
リゴ糖、またはその還元末端グルコースに非発色源基が
結合したマルトオリゴ糖からなる群から選ばれるα−ア
ミラーゼの基質を競合させ、主反応基質に対する見かけ
の親和性を低下させることができる。ここで用いられる
マルトオリゴ糖としては、例えば、マルトース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオー
スなどのグルコース数が２〜７のマルトオリゴ糖があげ
られる。還元末端グルコースに非発色源基が結合したマ
ルトオリゴ糖としては、例えば、２，４−ジクロロフェ
ニル−α−Ｄ−マルトトリオシド、２，４−ジクロロフ
ェニル−（αまたはβ）−Ｄ−マルトペンタオシド、
２，４−ジクロロフェニル−（αまたはβ）−Ｄ−マル
トトリオシドなどがあげられる。これらのマルトオリゴ
糖、またはその還元末端グルコースに非発色源基が結合
したマルトオリゴ糖を用いる濃度としては、試薬組成中
で１〜２５０ｍＭで好適に用いられる。
ブランクをおさえ、感度を調節し、定量性、定量域を向
上させ、管理血清等に含まれる試料中のマルトース等の
影響を回避する等の目的のため、必要により、マルトオ
リゴ糖、またはその還元末端グルコースに非発色源基が
結合したマルトオリゴ糖からなる群から選ばれるα−ア
ミラーゼの基質を競合させ、主反応基質に対する見かけ
の親和性を低下させることができる。ここで用いられる
マルトオリゴ糖としては、例えば、マルトース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオー
スなどのグルコース数が２〜７のマルトオリゴ糖があげ
られる。還元末端グルコースに非発色源基が結合したマ
ルトオリゴ糖としては、例えば、２，４−ジクロロフェ
ニル−α−Ｄ−マルトトリオシド、２，４−ジクロロフ
ェニル−（αまたはβ）−Ｄ−マルトペンタオシド、
２，４−ジクロロフェニル−（αまたはβ）−Ｄ−マル
トトリオシドなどがあげられる。これらのマルトオリゴ
糖、またはその還元末端グルコースに非発色源基が結合
したマルトオリゴ糖を用いる濃度としては、試薬組成中
で１〜２５０ｍＭで好適に用いられる。
【００１５】本発明の試薬組成物の最終ｐＨは、５．５
〜７．５の範囲であり、より一層、α−アミラーゼの糖
分解反応速度そのものを制御し、測定範囲を広げること
が可能となる。一方、α−アミラーゼの安定した至適ｐ
Ｈは、中性付近であることより、本発明の試薬組成物を
ｐＨ６〜８の範囲で調製するのが好ましいと考えられる
が、同時に定量性等の性能を同時に得るには、最終ｐＨ
を調製する試薬をさらに処方し、第一試薬と第二試薬に
分け、それらが混合した状態で、反応至適ｐＨになるよ
うに処方することもできる。
〜７．５の範囲であり、より一層、α−アミラーゼの糖
分解反応速度そのものを制御し、測定範囲を広げること
が可能となる。一方、α−アミラーゼの安定した至適ｐ
Ｈは、中性付近であることより、本発明の試薬組成物を
ｐＨ６〜８の範囲で調製するのが好ましいと考えられる
が、同時に定量性等の性能を同時に得るには、最終ｐＨ
を調製する試薬をさらに処方し、第一試薬と第二試薬に
分け、それらが混合した状態で、反応至適ｐＨになるよ
うに処方することもできる。
【００１６】試薬ｐＨを保持する方法は公知の方法であ
れば、何ら限定されるものではないが、一般的には緩衝
剤が用いられる。用いる緩衝剤としては、例えば、グッ
ド緩衝剤、トリス緩衝剤、リン酸緩衝剤等があげられ
る。緩衝剤は１０〜５００ｍＭの濃度で好適に用いられ
る。
れば、何ら限定されるものではないが、一般的には緩衝
剤が用いられる。用いる緩衝剤としては、例えば、グッ
ド緩衝剤、トリス緩衝剤、リン酸緩衝剤等があげられ
る。緩衝剤は１０〜５００ｍＭの濃度で好適に用いられ
る。
【００１７】これら塩素イオンに対する広範囲の定量性
を得る方法としては、前述した（１）マルトオリゴ糖の
添加、（２）試薬ｐＨの調節などがあるが、これらを単
独あるいは組み合わせて用いることができる。
を得る方法としては、前述した（１）マルトオリゴ糖の
添加、（２）試薬ｐＨの調節などがあるが、これらを単
独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００１８】さらに、本発明の測定用試薬組成物には、
測定する塩素イオンの定量性に影響を及ぼさない範囲
で、必要に応じて、防腐剤、界面活性剤等を使用するこ
ともできる。防腐剤としては、特に限定されないが、α
−アミラーゼの安定性に対する影響の少ない、アジ化ナ
トリウム、または、セフェム系、ペニシリン系、アミノ
グリコシド系、キノロン系等の抗生物質等が好適に用い
られ、これらを単独あるいは組み合わせて使用すること
ができる。界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、
陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤などを単独あ
るいは組み合わせて使用することができる。また、２価
カチオン、例えば、カルシウム、マグネシウム、バリウ
ム、亜鉛等を０．０１〜２００ｍＭの濃度で添加するこ
とができる。また、必要に応じて、感度の向上を目的と
したニトロフェノール類の解離促進剤を使用することが
できる。ニトロフェノール類の解離促進剤としては、例
えば、α−、β−、γ−シクロデキストリン等があげら
れ、０．１〜２０ｍＭの濃度で添加することができる。
測定する塩素イオンの定量性に影響を及ぼさない範囲
で、必要に応じて、防腐剤、界面活性剤等を使用するこ
ともできる。防腐剤としては、特に限定されないが、α
−アミラーゼの安定性に対する影響の少ない、アジ化ナ
トリウム、または、セフェム系、ペニシリン系、アミノ
グリコシド系、キノロン系等の抗生物質等が好適に用い
られ、これらを単独あるいは組み合わせて使用すること
ができる。界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、
陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤などを単独あ
るいは組み合わせて使用することができる。また、２価
カチオン、例えば、カルシウム、マグネシウム、バリウ
ム、亜鉛等を０．０１〜２００ｍＭの濃度で添加するこ
とができる。また、必要に応じて、感度の向上を目的と
したニトロフェノール類の解離促進剤を使用することが
できる。ニトロフェノール類の解離促進剤としては、例
えば、α−、β−、γ−シクロデキストリン等があげら
れ、０．１〜２０ｍＭの濃度で添加することができる。
【００１９】本発明の試薬組成物は、酵素試液、基質試
液の２液に分けてもよい。酵素試液には、不活性型α−
アミラーゼおよびキレート剤を含み、基質試液には、上
記一般式（Ｉ）で示される基質およびキレート剤を含
む、組み合わせが好ましい。
液の２液に分けてもよい。酵素試液には、不活性型α−
アミラーゼおよびキレート剤を含み、基質試液には、上
記一般式（Ｉ）で示される基質およびキレート剤を含
む、組み合わせが好ましい。
【００２０】本発明では、不活性化型α−アミラーゼ
が、前述のように試料中の塩素イオンを得て、活性化型
α−アミラーゼとなり、α−アミラーゼの基質と反応す
ることを利用する。例えば、試料中の塩素イオンに不活
性化型α−アミラーゼ、キレート剤、基質として、２−
クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル−α−マルトシドを作用させることで、塩
素イオン量に依存して活性化されたα−アミラーゼの反
応により、２−クロロ−４−ニトロフェノールを生成す
る。２−クロロ−４−ニトロフェノールが、それ自体４
００ｎｍ付近に吸収があることから、遊離後、４００ｎ
ｍ付近の吸光度の変化を測定し、既知濃度の試料の吸光
度を対照に、試料中のカルシウムの濃度を求める。２−
クロロ−４−ニトロフェノールの測定方法としては、ア
ミラーゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定
時間反応させた後、反応を止めて測定するエンドポイン
ト法のいずれもが使用されうる。
が、前述のように試料中の塩素イオンを得て、活性化型
α−アミラーゼとなり、α−アミラーゼの基質と反応す
ることを利用する。例えば、試料中の塩素イオンに不活
性化型α−アミラーゼ、キレート剤、基質として、２−
クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル−α−マルトシドを作用させることで、塩
素イオン量に依存して活性化されたα−アミラーゼの反
応により、２−クロロ−４−ニトロフェノールを生成す
る。２−クロロ−４−ニトロフェノールが、それ自体４
００ｎｍ付近に吸収があることから、遊離後、４００ｎ
ｍ付近の吸光度の変化を測定し、既知濃度の試料の吸光
度を対照に、試料中のカルシウムの濃度を求める。２−
クロロ−４−ニトロフェノールの測定方法としては、ア
ミラーゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定
時間反応させた後、反応を止めて測定するエンドポイン
ト法のいずれもが使用されうる。
【００２１】従来から公知である基質、４−ニトロフェ
ニル−α−Ｄ−マルトトリオシド、４−ニトロフェニル
−α−Ｄ−マルトテトラオシド等を用いる追随酵素を用
いない測定方法に比べて、本発明では、高感度であるこ
とから、測定精度が向上し、さらにマルトオリゴ糖等に
よる妨害物質に対する影響を回避することが可能である
（比較例１参照）。
ニル−α−Ｄ−マルトトリオシド、４−ニトロフェニル
−α−Ｄ−マルトテトラオシド等を用いる追随酵素を用
いない測定方法に比べて、本発明では、高感度であるこ
とから、測定精度が向上し、さらにマルトオリゴ糖等に
よる妨害物質に対する影響を回避することが可能である
（比較例１参照）。
【００２２】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでな
い。実施例１ 下記の酵素試液および基質試液の両試液のｐＨを５．５
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定用試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに、基質試液９０μｌを加え
て、反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後から３
分間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオ
ン１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を
図１に示す。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでな
い。実施例１ 下記の酵素試液および基質試液の両試液のｐＨを５．５
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定用試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに、基質試液９０μｌを加え
て、反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後から３
分間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオ
ン１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を
図１に示す。
【００２３】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００２４】 （１）酵素試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １０ ＩＵ／ｍｌ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ α−シクロデキストリン １．５ ｍＭ （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ ２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β −Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシド ０．８ ｍＭ
【００２５】実施例２ 下記の酵素試液および基質試液の両試液のｐＨを５．５
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに、基質試液９０μｌを加えて
反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン
１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図
１に示す。
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに、基質試液９０μｌを加えて
反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン
１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図
１に示す。
【００２６】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００２７】 （１）酵素試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １０ ＩＵ／ｍｌ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ α−シクロデキストリン １．５ ｍＭ （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ ２−クロロ−４−ニトロフェニル− α−マルトトリオシド ０．８ ｍＭ
【００２８】比較例１ 下記の酵素試液および基質試液の両試液のｐＨを５．５
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加えて反
応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分間
における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン１
００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図１
に示す。
〜７．５の範囲で変えて、塩素イオン測定試薬を調製
し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料と
した。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分
間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加えて反
応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分間
における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン１
００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図１
に示す。
【００２９】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００３０】 （１）酵素試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １０ ＩＵ／ｍｌ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ α−シクロデキストリン １．５ ｍＭ （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．５〜７．５ １００ ｍＭ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ ４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトトリオシド ０．８ ｍＭ
【００３１】図１から明らかなように、比較例１に比
べ、実施例１、２の相対感度が、顕著に向上しているこ
とがわかる。
べ、実施例１、２の相対感度が、顕著に向上しているこ
とがわかる。
【００３２】実施例３ 下記の酵素試液および基質試液にマルトースを０〜１０
０ｍＭの範囲で濃度を変えて、塩素イオン測定試薬を調
製し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料
とした。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５
分間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加えて
反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン
１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図
２に示す。
０ｍＭの範囲で濃度を変えて、塩素イオン測定試薬を調
製し、精製水、塩化ナトリウム１００ｍＭ標準液を試料
とした。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５
分間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加えて
反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後からの３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、塩素イオン
１００ｍＭの感度（mABS/min) を求めた。その結果を図
２に示す。
【００３３】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００３４】 （１）酵素試液 グッド緩衝液 ｐＨ６．０ １００ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １０ ＩＵ／ｍｌ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ α−シクロデキストリン １．５ ｍＭ マルトース ０〜１００ ｍＭ （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ６．０ １００ ｍＭ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ マルトース ０〜１００ ｍＭ ２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β −Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシド ０．８ ｍＭ
【００３５】図２から明らかなように、マルトースの添
加により、目的に応じて感度を調節できることがわか
る。
加により、目的に応じて感度を調節できることがわか
る。
【００３６】実施例４ 下記の酵素試液および基質試液に、マルトースを０〜１
００ｍＭの範囲で濃度を変えて、塩素イオン測定試薬を
調製し、塩化ナトリウム１００ｍＭ水溶液およびマルト
ース２ｇ／ｄｌの塩化ナトリウム１００ｍＭ水溶液を試
料とした。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、
５分間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加え
て反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後から３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、精製水およ
び塩素イオン１００ｍＭ標準液での２点検量線に基づ
き、試料中の塩素イオン量を求めた。その結果を表１に
示す。
００ｍＭの範囲で濃度を変えて、塩素イオン測定試薬を
調製し、塩化ナトリウム１００ｍＭ水溶液およびマルト
ース２ｇ／ｄｌの塩化ナトリウム１００ｍＭ水溶液を試
料とした。試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、
５分間予備加温した後、さらに基質試液９０μｌを加え
て反応を開始させ、該基質試液添加後、２分後から３分
間における１分あたりの吸光度変化を求め、精製水およ
び塩素イオン１００ｍＭ標準液での２点検量線に基づ
き、試料中の塩素イオン量を求めた。その結果を表１に
示す。
【００３７】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００３８】 （１）酵素試液 グッド緩衝液 ｐＨ６．０ １００ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １０ ＩＵ／ｍｌ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ α−シクロデキストリン １．５ ｍＭ マルトース ０〜１００ ｍＭ （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ６．０ １００ ｍＭ ＥＤＴＡ ２００ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ マルトース ０〜１００ ｍＭ ２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β −Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシド ０．８ ｍＭ
【００３９】
【表１】
【００４０】表１から明らかなように、マルトースの添
加により、試料中の内因性マルトースの影響が軽減、回
避することができることがわかる。
加により、試料中の内因性マルトースの影響が軽減、回
避することができることがわかる。
【００４１】
【発明の効果】本発明の塩素イオン測定用組成物は、追
随酵素が不要であり、また、高感度であることから、精
密性、定量性、正確性に優れた塩素イオンの酵素的測定
用組成物を提供できる。
随酵素が不要であり、また、高感度であることから、精
密性、定量性、正確性に優れた塩素イオンの酵素的測定
用組成物を提供できる。
【図１】 実施例１、２および比較例１の試薬におけ
る、塩素イオン１００ｍＭの感度（mABS/min) を示す図
である。縦軸を実施例１の試薬（ｐＨ６．５）を１００
％としたときの相対感度(%) 、横軸をｐＨ値として示
す。
る、塩素イオン１００ｍＭの感度（mABS/min) を示す図
である。縦軸を実施例１の試薬（ｐＨ６．５）を１００
％としたときの相対感度(%) 、横軸をｐＨ値として示
す。
【図２】 実施例３のマルトース濃度を変えて調製した
試薬における、塩素イオン１００ｍＭの感度（mABS/mi
n) を示す図である。縦軸にマルトース無添加時を１０
０％とした相対感度(%) 、横軸を添加マルトース濃度(g
/L) として示す。
試薬における、塩素イオン１００ｍＭの感度（mABS/mi
n) を示す図である。縦軸にマルトース無添加時を１０
０％とした相対感度(%) 、横軸を添加マルトース濃度(g
/L) として示す。
Claims (6)
- 【請求項１】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
（ｂ）キレート剤および（ｃ）基質として、一般式
（Ｉ） 【化１】 （式中Ｒ１およびＲ２はβ−ガラクトピラノシル基また
は水素原子のいずれかを示し、Ｒ３は２−クロロ−４−
ニトロフェノール基を示し、ｎは０〜２の整数を示
す。）で表されるマルトオリゴ糖誘導体を含有し、追随
酵素を含有しない塩素イオン測定用試薬組成物。 - 【請求項２】 マルトオリゴ糖誘導体が、２−クロロ−
４−ニトロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−α−マルトシドである請求項１記載の塩素イオン測
定用試薬組成物。 - 【請求項３】 マルトオリゴ糖誘導体が、２−クロロ−
４−ニトロフェニル−α−マルトシドである請求項１記
載の塩素イオン測定用試薬組成物。 - 【請求項４】 さらに、マルトオリゴ糖またはその還元
末端グルコースに非発色基が結合したマルトオリゴ糖を
含有する請求項１記載の塩素イオン測定用試薬組成物。 - 【請求項５】 マルトオリゴ糖がマルトース、マルトト
リオシドまたはα−シクロデキストリンである請求項４
記載の塩素イオン測定用試薬試薬組成物。 - 【請求項６】 試薬組成物の最終ｐＨが、５．５〜７．
５に保持されている請求項１〜５記載の塩素イオン測定
用試薬組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7767798A JPH11266898A (ja) | 1998-03-25 | 1998-03-25 | 塩素イオン測定用試薬組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7767798A JPH11266898A (ja) | 1998-03-25 | 1998-03-25 | 塩素イオン測定用試薬組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11266898A true JPH11266898A (ja) | 1999-10-05 |
Family
ID=13640530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7767798A Withdrawn JPH11266898A (ja) | 1998-03-25 | 1998-03-25 | 塩素イオン測定用試薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11266898A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6818415B2 (en) * | 2001-06-22 | 2004-11-16 | Abaxis, Inc. | Sodium activation of amylase |
-
1998
- 1998-03-25 JP JP7767798A patent/JPH11266898A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6818415B2 (en) * | 2001-06-22 | 2004-11-16 | Abaxis, Inc. | Sodium activation of amylase |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050210 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070906 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20071031 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20071129 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |
|
| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20110111 |