JPH06300761A - 免疫比濁測定試薬及び測定方法 - Google Patents
免疫比濁測定試薬及び測定方法Info
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- JPH06300761A JPH06300761A JP11631993A JP11631993A JPH06300761A JP H06300761 A JPH06300761 A JP H06300761A JP 11631993 A JP11631993 A JP 11631993A JP 11631993 A JP11631993 A JP 11631993A JP H06300761 A JPH06300761 A JP H06300761A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 本発明は、ラテックス等の不溶性担体を用い
ることなく、抗原抗体反応で生ずる不溶性の免疫複合体
を光学的に測定することにより、生体試料中の免疫学的
活性物質を測定する方法に用いる試薬において、非特異
反応を抑制し、測定対象を精度良く、かつ正確に測定す
る免疫比濁測定試薬及び測定方法を提供することを目的
とする。 【効果】 本発明は、試薬中に第４級アンモニウム塩を
含有する免疫比濁測定試薬であるので、測定対象でない
試料中の干渉物質との非特異反応が抑制され、測定対象
の正確な測定が可能となり、正確度、信頼性、精度の向
上した免疫比濁測定試薬の供給が可能となる。
ることなく、抗原抗体反応で生ずる不溶性の免疫複合体
を光学的に測定することにより、生体試料中の免疫学的
活性物質を測定する方法に用いる試薬において、非特異
反応を抑制し、測定対象を精度良く、かつ正確に測定す
る免疫比濁測定試薬及び測定方法を提供することを目的
とする。 【効果】 本発明は、試薬中に第４級アンモニウム塩を
含有する免疫比濁測定試薬であるので、測定対象でない
試料中の干渉物質との非特異反応が抑制され、測定対象
の正確な測定が可能となり、正確度、信頼性、精度の向
上した免疫比濁測定試薬の供給が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗原抗体反応を利用し
た免疫学的活性物質の測定に用いる免疫比濁測定試薬及
び測定方法に関する。より詳しくは不溶性担体を用いな
い免疫比濁測定方法において、目的とする抗原抗体反応
以外の非特異反応を抑制する試薬組成及び方法に関す
る。
た免疫学的活性物質の測定に用いる免疫比濁測定試薬及
び測定方法に関する。より詳しくは不溶性担体を用いな
い免疫比濁測定方法において、目的とする抗原抗体反応
以外の非特異反応を抑制する試薬組成及び方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】抗原抗体反応を利用して、生体試料中の
免疫活性物質を測定する免疫学的測定方法は臨床検査の
分野で広く用いられている。例えば一元免疫拡散法（Ｓ
ＲＩＤ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、免疫比ろう法、赤血
球凝集法（ＨＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡ）、酵素免
疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）等が挙
げられ、それぞれの操作性、感度、精度等から使用目的
により使い分けられている。
免疫活性物質を測定する免疫学的測定方法は臨床検査の
分野で広く用いられている。例えば一元免疫拡散法（Ｓ
ＲＩＤ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、免疫比ろう法、赤血
球凝集法（ＨＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡ）、酵素免
疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）等が挙
げられ、それぞれの操作性、感度、精度等から使用目的
により使い分けられている。
【０００３】その中でも、抗原抗体反応で生ずる不溶性
の免疫複合体を光学的に測定する免疫比濁法（以下ＴＩ
Ａと略す）は、酵素免疫測定法等で必要な洗浄操作（Ｂ
／Ｆ分離工程）が不要で自動化が容易なことから、注目
されつつある分析方法の１つである。又ＴＩＡは免疫成
分を標識する必要が無いので、試薬の調製においても他
の免疫分析法に比べ有利であり、広く用いられている。
の免疫複合体を光学的に測定する免疫比濁法（以下ＴＩ
Ａと略す）は、酵素免疫測定法等で必要な洗浄操作（Ｂ
／Ｆ分離工程）が不要で自動化が容易なことから、注目
されつつある分析方法の１つである。又ＴＩＡは免疫成
分を標識する必要が無いので、試薬の調製においても他
の免疫分析法に比べ有利であり、広く用いられている。
【０００４】例えば血清試料中の免疫グロブリン（Ｉ
ｇ）Ｇ、Ａ、Ｍ、トランスフェリン、補体、アポリポ蛋
白、β−リポ蛋白、Ｌｐ（ａ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲ
Ｐ）、抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）、リウマチ因子
（ＲＦ）、プラスミノーゲン、アルブミン等の測定に利
用されている。
ｇ）Ｇ、Ａ、Ｍ、トランスフェリン、補体、アポリポ蛋
白、β−リポ蛋白、Ｌｐ（ａ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲ
Ｐ）、抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）、リウマチ因子
（ＲＦ）、プラスミノーゲン、アルブミン等の測定に利
用されている。
【０００５】その原理は試料中の抗原／抗体が試薬中の
抗体／抗原と反応する抗原抗体反応の結果、抗原抗体複
合体からなる不溶性の反応生成物（懸濁粒子）が定量的
に生じ、この懸濁粒子が光の透過を妨げること（散乱さ
せること）を利用して光学的に定量する分析法である。
抗体／抗原と反応する抗原抗体反応の結果、抗原抗体複
合体からなる不溶性の反応生成物（懸濁粒子）が定量的
に生じ、この懸濁粒子が光の透過を妨げること（散乱さ
せること）を利用して光学的に定量する分析法である。
【０００６】従って感度や精度、分析所用時間は懸濁粒
子の形成程度に大きく左右される。一般的に抗原溶液と
その抗原に特異的な抗体を混合した場合、１０-3秒オー
ダーで抗原抗体反応が起こる。しかしその後、光学的に
測定可能な大きさの懸濁粒子が形成されるまでには数分
から数時間、或は数日間を要する場合もある。
子の形成程度に大きく左右される。一般的に抗原溶液と
その抗原に特異的な抗体を混合した場合、１０-3秒オー
ダーで抗原抗体反応が起こる。しかしその後、光学的に
測定可能な大きさの懸濁粒子が形成されるまでには数分
から数時間、或は数日間を要する場合もある。
【０００７】そこで、懸濁粒子の形成を促進し、測定の
迅速化、高感度化、高精度化を目的として、その反応を
補助するために種々の添加物を用いる方法が研究されて
いる。例えば、クリニカル ケミストリー(CLINICAL CH
EMISTRY)２０巻、１０７１頁（１９７４年）にはポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ）の使用が、特公昭６０−４
９３８号にはＰＥＧと非イオン性界面活性剤の共存下に
免疫反応を行う方法が記載されている。
迅速化、高感度化、高精度化を目的として、その反応を
補助するために種々の添加物を用いる方法が研究されて
いる。例えば、クリニカル ケミストリー(CLINICAL CH
EMISTRY)２０巻、１０７１頁（１９７４年）にはポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ）の使用が、特公昭６０−４
９３８号にはＰＥＧと非イオン性界面活性剤の共存下に
免疫反応を行う方法が記載されている。
【０００８】特開平２−１０３４６６号には、一般式 Ｒ1Ｏ−［（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）m（ＡＯ）n］−Ｒ2 で表される化合物を用いることが記載されている。
【０００９】更に特開昭６１−２５０６２号には、コン
ドロイチン硫酸、ヘパリン、デキストランなどのポリア
ニオンを用いることが記載されている。
ドロイチン硫酸、ヘパリン、デキストランなどのポリア
ニオンを用いることが記載されている。
【００１０】しかし、これらの公知の添加物の使用では
非特異反応の抑制が完全ではないため、必ずしも満足す
る結果が得られていない。例えば溶液中で抗原と抗体を
反応させ、生じた免疫複合体を比濁法、吸光度法などの
光学的な方法で測定する際に、目的とする抗原と抗体の
反応に起因する凝集生成物以外に、試料中に存在する測
定対象でない他の物質（いわゆる干渉物質）と試薬との
非特異反応で濁りが生ずる。又ＰＥＧ等の添加物自身が
夾雑蛋白などと反応して濁りの原因となることも知られ
ており、このような反応も非特異反応と呼ばれている。
更に生体試料そのものの濁り（特に脂質）も誤差の原因
となっている。
非特異反応の抑制が完全ではないため、必ずしも満足す
る結果が得られていない。例えば溶液中で抗原と抗体を
反応させ、生じた免疫複合体を比濁法、吸光度法などの
光学的な方法で測定する際に、目的とする抗原と抗体の
反応に起因する凝集生成物以外に、試料中に存在する測
定対象でない他の物質（いわゆる干渉物質）と試薬との
非特異反応で濁りが生ずる。又ＰＥＧ等の添加物自身が
夾雑蛋白などと反応して濁りの原因となることも知られ
ており、このような反応も非特異反応と呼ばれている。
更に生体試料そのものの濁り（特に脂質）も誤差の原因
となっている。
【００１１】この対策として、特開昭６４−１５６５６
号では試薬中に界面活性剤を添加することで非特異反応
を抑制している。しかし界面活性剤単独では反応促進剤
として用いられるＰＥＧ等の添加物質の影響を受け易
く、補体の影響やその他の原因不明な濁りについての対
策は不十分である。
号では試薬中に界面活性剤を添加することで非特異反応
を抑制している。しかし界面活性剤単独では反応促進剤
として用いられるＰＥＧ等の添加物質の影響を受け易
く、補体の影響やその他の原因不明な濁りについての対
策は不十分である。
【００１２】このように誤差の原因となる濁りを生じる
非特異反応の抑制、回避は従来の技術では満足な結果は
得られていなかった。
非特異反応の抑制、回避は従来の技術では満足な結果は
得られていなかった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記のような
従来技術の問題点を解消し、非特異反応を抑制し、測定
対象を精度良く、かつ正確に測定する免疫比濁測定試薬
及び測定方法を提供することを目的とする。
従来技術の問題点を解消し、非特異反応を抑制し、測定
対象を精度良く、かつ正確に測定する免疫比濁測定試薬
及び測定方法を提供することを目的とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明は、ラテックス等
の不溶性担体を用いることなく、抗原抗体反応で生ずる
不溶性の免疫複合体を光学的に測定することにより、生
体試料中の免疫学的活性物質を測定する方法に用いる試
薬において、試薬中に第４級アンモニウム塩を含有する
ことを特徴とする免疫比濁測定試薬並びに測定方法であ
る。
の不溶性担体を用いることなく、抗原抗体反応で生ずる
不溶性の免疫複合体を光学的に測定することにより、生
体試料中の免疫学的活性物質を測定する方法に用いる試
薬において、試薬中に第４級アンモニウム塩を含有する
ことを特徴とする免疫比濁測定試薬並びに測定方法であ
る。
【００１５】本発明で用いる第４級アンモニウム塩とし
ては、塩化コリン、臭化コリン、ヨウ化コリン、重酒石
酸コリン、塩化アセチルコリン、塩酸ベタイン等が挙げ
られる。これらの第４級アンモニウム塩は単独で使用し
ても、２種以上の混合物として使用しても構わない。
ては、塩化コリン、臭化コリン、ヨウ化コリン、重酒石
酸コリン、塩化アセチルコリン、塩酸ベタイン等が挙げ
られる。これらの第４級アンモニウム塩は単独で使用し
ても、２種以上の混合物として使用しても構わない。
【００１６】本発明で用いる第４級アンモニウム塩の使
用量は、反応時の最終濃度が０．１〜１０．０％、好ま
しくは０．３〜３．０％となるように添加量を調節す
る。（％は特に規定しない限り重量／容量％をあらわ
す）。
用量は、反応時の最終濃度が０．１〜１０．０％、好ま
しくは０．３〜３．０％となるように添加量を調節す
る。（％は特に規定しない限り重量／容量％をあらわ
す）。
【００１７】本発明で用いる第４級アンモニウム塩の使
用量が、０．１％未満では非特異反応を十分抑制でき
ず、又１０．０％を越えた場合は測定に必要な不溶性の
免疫複合体の生成を阻害するため適当でない。
用量が、０．１％未満では非特異反応を十分抑制でき
ず、又１０．０％を越えた場合は測定に必要な不溶性の
免疫複合体の生成を阻害するため適当でない。
【００１８】本発明において、第４級アンモニウム塩は
反応の場に必要量存在するようにすれば良いので、抗血
清含有試薬や希釈液等の試料処理液に第４級アンモニウ
ム塩を添加しておくこともできる。
反応の場に必要量存在するようにすれば良いので、抗血
清含有試薬や希釈液等の試料処理液に第４級アンモニウ
ム塩を添加しておくこともできる。
【００１９】更に、反応系には、必要に応じて、ポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ）、ポリオキシエチレン−ポ
リオキシプロピレン−ブロック共重合体（以下ブロック
共重合体と略す）、ポリアニオンよりなる群より選ばれ
た１種又は２種以上の慣用の添加剤を加えてもよい。又
これらと非イオン系界面活性剤とを組み合わせて用いて
もよい。
チレングリコール（ＰＥＧ）、ポリオキシエチレン−ポ
リオキシプロピレン−ブロック共重合体（以下ブロック
共重合体と略す）、ポリアニオンよりなる群より選ばれ
た１種又は２種以上の慣用の添加剤を加えてもよい。又
これらと非イオン系界面活性剤とを組み合わせて用いて
もよい。
【００２０】本発明で用いるＰＥＧは市販のＰＥＧが使
用でき、平均分子量が４００〜５０万程度、好ましくは
１５００〜１０万の物が適しており、使用量は反応の場
において濃度が１〜１５％となるように添加量を調節す
る。
用でき、平均分子量が４００〜５０万程度、好ましくは
１５００〜１０万の物が適しており、使用量は反応の場
において濃度が１〜１５％となるように添加量を調節す
る。
【００２１】本発明で用いるブロック共重合体として
は、市販品ではプルロニックＬ３４、プルロニックＬ４
４、プルロニックＦ６８、プルロニックＦ８８、プルロ
ニックＦ１０８（いずれもワイアンドット・ケミカルズ
製、商品名）、プロノン１０５やプロノン２０８（いず
れも日本油脂製、商品名）、エマルゲンＰＰ２５０、エ
マルゲンＰＰ２９０（いずれも花王製、商品名）等があ
げられ、その使用量は反応の場において濃度が１〜１５
％となるように添加量を調節する。
は、市販品ではプルロニックＬ３４、プルロニックＬ４
４、プルロニックＦ６８、プルロニックＦ８８、プルロ
ニックＦ１０８（いずれもワイアンドット・ケミカルズ
製、商品名）、プロノン１０５やプロノン２０８（いず
れも日本油脂製、商品名）、エマルゲンＰＰ２５０、エ
マルゲンＰＰ２９０（いずれも花王製、商品名）等があ
げられ、その使用量は反応の場において濃度が１〜１５
％となるように添加量を調節する。
【００２２】本発明で用いるポリアニオンとしてはデキ
ストラン硫酸、リンタングステン酸、リンモリブデン酸
等があげられ、使用量は反応の場において濃度が０．０
００１〜１．０００％となるように添加量を調節する。
ストラン硫酸、リンタングステン酸、リンモリブデン酸
等があげられ、使用量は反応の場において濃度が０．０
００１〜１．０００％となるように添加量を調節する。
【００２３】これらの慣用の添加剤は単独で用いてもよ
いし、複数を混ぜ合わせて使用してもよい。又、更に、
以下に述べるように非イオン系界面活性剤と組み合わせ
て用いてもよい。
いし、複数を混ぜ合わせて使用してもよい。又、更に、
以下に述べるように非イオン系界面活性剤と組み合わせ
て用いてもよい。
【００２４】本発明で用いる非イオン系界面活性剤とし
ては、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンアルキルエーテル等があり、これらはトリ
トン、ツィーン、ブリッジ等の名称で市販されている。
この中でも水溶性のよい非イオン系界面活性剤が本発明
には適している。使用量は反応の場において濃度が０．
０１〜５．００％となるように添加量を調節し、ＰＥＧ
等の添加剤と組み合わせて使用する。
ては、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンアルキルエーテル等があり、これらはトリ
トン、ツィーン、ブリッジ等の名称で市販されている。
この中でも水溶性のよい非イオン系界面活性剤が本発明
には適している。使用量は反応の場において濃度が０．
０１〜５．００％となるように添加量を調節し、ＰＥＧ
等の添加剤と組み合わせて使用する。
【００２５】本発明の免疫比濁測定試薬において、その
他の成分としは従来公知のものを利用すればよい。例え
ば緩衝剤としてはｐＨが中性付近のリン酸緩衝液やＨＥ
ＰＥＳ等のグッドの緩衝液が利用可能であり、更に必要
に応じて試薬中にアジ化ナトリウムやパラベン等の防腐
剤、安定化剤を添加して構わない。
他の成分としは従来公知のものを利用すればよい。例え
ば緩衝剤としてはｐＨが中性付近のリン酸緩衝液やＨＥ
ＰＥＳ等のグッドの緩衝液が利用可能であり、更に必要
に応じて試薬中にアジ化ナトリウムやパラベン等の防腐
剤、安定化剤を添加して構わない。
【００２６】
【作用】本発明の詳細な作用機序は不明であるが、次の
ように推測される。第４級アンモニウム塩は、水素結合
やイオン結合による分子の会合体の形成を阻害する作用
があることが知られている。又、抗原抗体反応も水素結
合などによる分子会合体形成反応の１種であり、第４級
アンモニウム塩により阻害を受ける。しかし適切な濃度
範囲を選ぶことにより、本発明の第４級アンモニウム塩
は目的とする免疫反応には影響を与えず、非特異反応の
みを特異的に抑制するものと考えられる。
ように推測される。第４級アンモニウム塩は、水素結合
やイオン結合による分子の会合体の形成を阻害する作用
があることが知られている。又、抗原抗体反応も水素結
合などによる分子会合体形成反応の１種であり、第４級
アンモニウム塩により阻害を受ける。しかし適切な濃度
範囲を選ぶことにより、本発明の第４級アンモニウム塩
は目的とする免疫反応には影響を与えず、非特異反応の
みを特異的に抑制するものと考えられる。
【００２７】
【実施例】以下実施例に基づき本発明を詳細に説明する
が、本発明はこの実施例に限定されるものではない。な
お、本実施例で使用した試薬類は、特に規定したもの以
外は、和光純薬（株）、東京化成（株）等より購入した
市販品を使用した。
が、本発明はこの実施例に限定されるものではない。な
お、本実施例で使用した試薬類は、特に規定したもの以
外は、和光純薬（株）、東京化成（株）等より購入した
市販品を使用した。
【００２８】実施例１ 第４級アンモニウム塩の添加による非特異反応の抑制効
果を検討した。以下に示す分析条件により非特異反応に
よる吸光度変化を測定した。
果を検討した。以下に示す分析条件により非特異反応に
よる吸光度変化を測定した。
【００２９】
【化１】
【００３０】検体２０μｌに試薬１を３２０μｌを加
え、３７℃で５分間温置し、温置時間中の波長３４０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した。同様に第４級アンモニウ
ム塩が無添加の場合について測定を行い、両者を比較し
た。又、塩化コリンをヨウ化コリンに替えて同様に実施
した。結果を表１、図１に示す。
え、３７℃で５分間温置し、温置時間中の波長３４０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した。同様に第４級アンモニウ
ム塩が無添加の場合について測定を行い、両者を比較し
た。又、塩化コリンをヨウ化コリンに替えて同様に実施
した。結果を表１、図１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】表１及び図１に示されるように無添加では
非特異反応による吸光度の上昇が認められたが、第４級
アンモニウム塩を添加することにより吸光度の上昇は見
られず、非特異反応は抑制された。
非特異反応による吸光度の上昇が認められたが、第４級
アンモニウム塩を添加することにより吸光度の上昇は見
られず、非特異反応は抑制された。
【００３３】実施例２ 非特異反応の影響を受けないといわれているＳＲＩＤ法
（第一化学薬品（株）製）を対照に用いてアポリポ蛋白
Ｂの測定を行い、第４級アンモニウム塩による非特異反
応の抑制効果を調べた。以下に示す分析条件にて免疫比
濁法によるアポリポ蛋白Ｂの測定を行った。標準にはア
ポリポ蛋白Ｂの濃度既知のヒト血清を用いた。
（第一化学薬品（株）製）を対照に用いてアポリポ蛋白
Ｂの測定を行い、第４級アンモニウム塩による非特異反
応の抑制効果を調べた。以下に示す分析条件にて免疫比
濁法によるアポリポ蛋白Ｂの測定を行った。標準にはア
ポリポ蛋白Ｂの濃度既知のヒト血清を用いた。
【００３４】
【化２】
【００３５】アポリポ蛋白Ｂ含有ヒト血清５μl （検
体）に３２０μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５
分間温置した。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５
分間の主波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長
における吸光度変化量を測定した。測定は日立７１５０
形自動分析機を用いた。抗ヒトアポリポ蛋白Ｂ血清は、
常法によりアポリポ蛋白Ｂをヤギに免疫し得られたもの
を用いた。同時に第４級アンモニウム塩が無添加の場合
について測定を行い、両者を比較した。結果を表２に示
す。
体）に３２０μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５
分間温置した。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５
分間の主波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長
における吸光度変化量を測定した。測定は日立７１５０
形自動分析機を用いた。抗ヒトアポリポ蛋白Ｂ血清は、
常法によりアポリポ蛋白Ｂをヤギに免疫し得られたもの
を用いた。同時に第４級アンモニウム塩が無添加の場合
について測定を行い、両者を比較した。結果を表２に示
す。
【００３６】
【表２】
【００３７】表２に示されるように無添加では非特異反
応により正誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩を添
加したものは非特異反応が抑制されているためＳＲＩＤ
法との差がほとんど認められなかった。
応により正誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩を添
加したものは非特異反応が抑制されているためＳＲＩＤ
法との差がほとんど認められなかった。
【００３８】実施例３ 非特異反応の影響を受けないといわれているＳＲＩＤ法
（第一化学薬品（株）製）を対照に用いてアポリポ蛋白
Ｃ−III の測定を行い、第４級アンモニウム塩による非
特異反応の抑制効果を調べた。以下に示す分析条件にて
免疫比濁法によるアポリポ蛋白Ｃ−III の測定を行っ
た。標準には濃度既知のヒト血清を用いた。
（第一化学薬品（株）製）を対照に用いてアポリポ蛋白
Ｃ−III の測定を行い、第４級アンモニウム塩による非
特異反応の抑制効果を調べた。以下に示す分析条件にて
免疫比濁法によるアポリポ蛋白Ｃ−III の測定を行っ
た。標準には濃度既知のヒト血清を用いた。
【００３９】
【化２】
【００４０】アポリポ蛋白Ｃ−III 含有ヒト血清１０μ
ｌに対し３００μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で
５分間温置した。次いで試薬２を１００μｌ加え、添加
後５分間の主波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２
波長における吸光度変化量を測定した。測定は日立７１
５０形自動分析機を用い、抗ヒトアポリポ蛋白Ｃ−III
血清は、常法によりアポリポ蛋白Ｃ−III をヤギに免疫
し得られたものを用いた。同時に第４級アンモニウム塩
が無添加の場合について測定を行い、両者を比較した。
結果を表３に示す。
ｌに対し３００μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で
５分間温置した。次いで試薬２を１００μｌ加え、添加
後５分間の主波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２
波長における吸光度変化量を測定した。測定は日立７１
５０形自動分析機を用い、抗ヒトアポリポ蛋白Ｃ−III
血清は、常法によりアポリポ蛋白Ｃ−III をヤギに免疫
し得られたものを用いた。同時に第４級アンモニウム塩
が無添加の場合について測定を行い、両者を比較した。
結果を表３に示す。
【００４１】
【表３】
【００４２】表３に示されるように無添加では非特異反
応により正誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩を添
加したものは非特異反応が抑制されているためＳＲＩＤ
法との差がほとんど認められなかった。
応により正誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩を添
加したものは非特異反応が抑制されているためＳＲＩＤ
法との差がほとんど認められなかった。
【００４３】実施例４ 非特異反応の影響を受けないといわれているＳＲＩＤ法
（日水製薬（株）製）を対照に用いてＣＲＰの測定を行
い、第４級アンモニウム塩による非特異反応の抑制効果
を調べた。以下に示す分析条件にて免疫比濁法によるＣ
ＲＰの測定を行った。標準には濃度既知のヒト血清を用
いた。
（日水製薬（株）製）を対照に用いてＣＲＰの測定を行
い、第４級アンモニウム塩による非特異反応の抑制効果
を調べた。以下に示す分析条件にて免疫比濁法によるＣ
ＲＰの測定を行った。標準には濃度既知のヒト血清を用
いた。
【００４４】
【化４】
【００４５】ＣＲＰ含有ヒト血清２０μｌに対し３２０
μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置し
た。次いで試薬２を８０μｌ加え、添加後５分間の主波
長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における吸
光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分析
機を用い、抗ヒトＣＲＰ血清は、常法によりＣＲＰをヤ
ギに免疫し得られたものを用いた。同時に第４級アンモ
ニウム塩が無添加の場合について測定を行い、両者を比
較した。結果を表４に示す。
μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置し
た。次いで試薬２を８０μｌ加え、添加後５分間の主波
長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における吸
光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分析
機を用い、抗ヒトＣＲＰ血清は、常法によりＣＲＰをヤ
ギに免疫し得られたものを用いた。同時に第４級アンモ
ニウム塩が無添加の場合について測定を行い、両者を比
較した。結果を表４に示す。
【００４６】
【表４】
【００４７】表４に示されるように無添加では非特異反
応により正又は負誤差を受けるが、第４級アンモニウム
塩を添加したものは非特異反応が抑制されているためＳ
ＲＩＤ法との差がほとんど認められなかった。
応により正又は負誤差を受けるが、第４級アンモニウム
塩を添加したものは非特異反応が抑制されているためＳ
ＲＩＤ法との差がほとんど認められなかった。
【００４８】次に無添加で負誤差を受けた検体（Ｎｏ．
２４）について吸光度の経時変化を調べた。結果を表５
及び図２に示す。
２４）について吸光度の経時変化を調べた。結果を表５
及び図２に示す。
【００４９】
【表５】
【００５０】表５及び図２に示されるように、５分間の
温置時間中に、抗体が含まれず本来なら血清と反応しな
い試薬１のみで吸光度のかなり大きな上昇が無添加では
認められたが、塩化コリンを添加した試薬１では非特異
反応による吸光度の上昇が認められなかった。同様にヨ
ウ化コリンを添加した試薬１も測定したが、塩化コリン
と同様に非特異反応による吸光度の上昇は認められなか
った。
温置時間中に、抗体が含まれず本来なら血清と反応しな
い試薬１のみで吸光度のかなり大きな上昇が無添加では
認められたが、塩化コリンを添加した試薬１では非特異
反応による吸光度の上昇が認められなかった。同様にヨ
ウ化コリンを添加した試薬１も測定したが、塩化コリン
と同様に非特異反応による吸光度の上昇は認められなか
った。
【００５１】実施例５ 測定精度の高いＬＡＴＥＸ凝集法（栄研化学（株）製）
を対照に用いて抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）価の測
定を行い、第４級アンモニウム塩添加試薬による測定値
との比較を行った。以下に示す分析条件にて免疫比濁法
によるＡＳＯの測定を行った。標準には濃度既知のヒト
血清を用いた。
を対照に用いて抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）価の測
定を行い、第４級アンモニウム塩添加試薬による測定値
との比較を行った。以下に示す分析条件にて免疫比濁法
によるＡＳＯの測定を行った。標準には濃度既知のヒト
血清を用いた。
【００５２】
【化５】
【００５３】ＡＳＯ含有ヒト血清２０μl に対し３２０
μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置し
た。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５分間の主波
長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における吸
光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分析
機を用いた。同時に第４級アンモニウム塩が無添加の場
合について測定を行い、両者を比較した。結果を表６に
示す。
μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置し
た。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５分間の主波
長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における吸
光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分析
機を用いた。同時に第４級アンモニウム塩が無添加の場
合について測定を行い、両者を比較した。結果を表６に
示す。
【００５４】
【表６】
【００５５】表６に示されるように無添加では非特異反
応により正又は負誤差を受けるが、第４級アンモニウム
塩を添加したものは非特異反応が抑制されているためＬ
ＡＴＥＸ法との差はほとんど認められなかった。
応により正又は負誤差を受けるが、第４級アンモニウム
塩を添加したものは非特異反応が抑制されているためＬ
ＡＴＥＸ法との差はほとんど認められなかった。
【００５６】次に、無添加で負誤差を受けた検体（Ｎ
ｏ．２４）について吸光度の経時変化を調べた。結果を
表７及び図３に示す。
ｏ．２４）について吸光度の経時変化を調べた。結果を
表７及び図３に示す。
【００５７】
【表７】
【００５８】表７及び図３に示されるように、ＳＬＯが
含まれず本来なら血清と反応しない試薬１で吸光度の上
昇が認められたが、塩化コリンを添加した試薬１では非
特異反応による吸光度の上昇が認められなかった。同様
にヨウ化コリンを添加した試薬１も測定したが、塩化コ
リンと同様に非特異反応による吸光度の上昇は認められ
なかった。
含まれず本来なら血清と反応しない試薬１で吸光度の上
昇が認められたが、塩化コリンを添加した試薬１では非
特異反応による吸光度の上昇が認められなかった。同様
にヨウ化コリンを添加した試薬１も測定したが、塩化コ
リンと同様に非特異反応による吸光度の上昇は認められ
なかった。
【００５９】実施例６ 測定精度の高いＥＬＩＳＡ法（バイオプール社（米国）
製）を対照に用いてＬｐ（ａ）の測定を行い、第４級ア
ンモニウム塩と非イオン系界面活性剤を添加した試薬に
よる測定値との比較を行った。以下に示す分析条件にて
免疫比濁法によるＬｐ（ａ）の測定を行った。標準には
濃度既知のヒト血清を用いた。
製）を対照に用いてＬｐ（ａ）の測定を行い、第４級ア
ンモニウム塩と非イオン系界面活性剤を添加した試薬に
よる測定値との比較を行った。以下に示す分析条件にて
免疫比濁法によるＬｐ（ａ）の測定を行った。標準には
濃度既知のヒト血清を用いた。
【００６０】
【化６】
【００６１】Ｌｐ（ａ）含有ヒト血清１５μl に対し３
２０μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置
した。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５分間の主
波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における
吸光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分
析機を用い、抗ヒトＬｐ（ａ）血清は、常法によりＬｐ
（ａ）をウサギに免疫し得られたものを用いた。結果を
表８に示す。
２０μｌの試薬１を添加・混和し、３７℃で５分間温置
した。次いで試薬２を８０μl 加え、添加後５分間の主
波長３４０ｎｍ及び副波長７００ｎｍの２波長における
吸光度変化量を測定した。測定は日立７１５０形自動分
析機を用い、抗ヒトＬｐ（ａ）血清は、常法によりＬｐ
（ａ）をウサギに免疫し得られたものを用いた。結果を
表８に示す。
【００６２】
【表８】
【００６３】表８に示されるように無添加では非特異反
応により負誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩と非
イオン系界面活性剤を添加したものは非特異反応が抑制
されているためＥＬＩＳＡ法との差がほとんど認められ
なかった。
応により負誤差を受けるが、第４級アンモニウム塩と非
イオン系界面活性剤を添加したものは非特異反応が抑制
されているためＥＬＩＳＡ法との差がほとんど認められ
なかった。
【００６４】次に無添加で負誤差を受けた検体（Ｎｏ．
４９）について吸光度の経時変化を調べた。結果を表９
及び図４に示す。
４９）について吸光度の経時変化を調べた。結果を表９
及び図４に示す。
【００６５】
【表９】
【００６６】表９及び図４に示されるように、無添加で
は、抗体が含まれず本来なら血清と反応しない試薬１の
みで吸光度の大きな上昇が認められ、又無添加に界面活
性剤のみを加えた試薬１（図４）でも吸光度のかなりの
上昇が認められた。しかし、第４級アンモニウム塩と非
イオン系界面活性剤の両方を添加した試薬１では非特異
反応による吸光度の上昇が認められなかった。非イオン
系界面活性剤単独でもある程度の非特異反応を抑制でき
るが第４級アンモニウム塩と組み合わせた試薬の方が抑
制効果が優れており良好な結果が得られた。
は、抗体が含まれず本来なら血清と反応しない試薬１の
みで吸光度の大きな上昇が認められ、又無添加に界面活
性剤のみを加えた試薬１（図４）でも吸光度のかなりの
上昇が認められた。しかし、第４級アンモニウム塩と非
イオン系界面活性剤の両方を添加した試薬１では非特異
反応による吸光度の上昇が認められなかった。非イオン
系界面活性剤単独でもある程度の非特異反応を抑制でき
るが第４級アンモニウム塩と組み合わせた試薬の方が抑
制効果が優れており良好な結果が得られた。
【００６７】
【発明の効果】試薬中の抗体／抗原と試料中の干渉物質
との非特異反応により濁りが生じる。又、実施例１、
４、５、６より試薬中に抗体／抗原がなくともポリエチ
レングリコール等の添加剤と試料中の干渉物質により非
特異反応が起こり、吸光度（濁度）が増加する。第４級
アンモニウム塩の添加によりこれらの非特異反応は抑制
される。
との非特異反応により濁りが生じる。又、実施例１、
４、５、６より試薬中に抗体／抗原がなくともポリエチ
レングリコール等の添加剤と試料中の干渉物質により非
特異反応が起こり、吸光度（濁度）が増加する。第４級
アンモニウム塩の添加によりこれらの非特異反応は抑制
される。
【００６８】本発明により、測定対象でない試料中の干
渉物質との非特異反応が抑制されるので測定対象の正確
な測定が可能となり、正確度、信頼性、精度の向上した
免疫比濁測定試薬の供給が可能となる。
渉物質との非特異反応が抑制されるので測定対象の正確
な測定が可能となり、正確度、信頼性、精度の向上した
免疫比濁測定試薬の供給が可能となる。
【００６９】
【図１】実施例１の第４級アンモニウム塩による非特異
反応の抑制効果を示す。
反応の抑制効果を示す。
【図２】実施例４の第４級アンモニウム塩による非特異
反応の抑制効果を示す。
反応の抑制効果を示す。
【図３】実施例５の第４級アンモニウム塩による非特異
反応の抑制効果を示す。
反応の抑制効果を示す。
【図４】実施例６の第４級アンモニウム塩による非特異
反応の抑制効果を示す。
反応の抑制効果を示す。
【化３】
Claims (14)
- 【請求項１】 不溶性担体を用いることなく、抗原抗体
反応で生ずる不溶性の免疫複合体を光学的に測定するこ
とにより、生体試料中の免疫学的活性物質を測定する方
法に用いる試薬において、試薬中に第４級アンモニウム
塩を含有することを特徴とする免疫比濁測定試薬。 - 【請求項２】 第４級アンモニウム塩が、塩化コリン、
臭化コリン、ヨウ化コリン、重酒石酸コリン、塩化アセ
チルコリン、塩酸ベタインよりなる群より選ばれた１種
又は２種以上の混合物として試薬中に含まれることを特
徴とする請求項１記載の免疫比濁測定試薬。 - 【請求項３】 第４級アンモニウム塩を反応の場に０．
１〜１０．０重量／容量％の濃度で存在するように試薬
中に含むことを特徴とする請求項１及び請求項２記載の
免疫比濁測定試薬。 - 【請求項４】 （１）第４級アンモニウム塩とともに、
（２）ポリエチレングリコール、ポリエチレン−ポリプ
ロピレン−ブロック共重合体、ポリアニオンよりなる群
より選ばれた１種又は２種以上の物質とを、試薬中に含
有することを特徴とする請求項１〜請求項３記載の免疫
比濁測定試薬。 - 【請求項５】 ポリエチレングリコールを反応の場に１
〜１５重量／容量％の濃度で存在するように試薬中に含
むことを特徴とする請求項４記載の免疫比濁測定試薬。 - 【請求項６】 ポリエチレン−ポリプロピレン−ブロッ
ク共重合体を反応の場に１〜１５重量／容量％の濃度で
存在するように試薬中に含むことを特徴とする請求項４
記載の免疫比濁測定試薬。 - 【請求項７】 ポリアニオンを反応の場に０．００１〜
１．０００重量／容量％の濃度で存在するように試薬中
に含むことを特徴とする請求項４記載の免疫比濁測定試
薬。 - 【請求項８】 （１）第４級アンモニウム塩と、（２）
ポリエチレングリコール、ポリエチレン−ポリプロピレ
ン−ブロック共重合体、ポリアニオンよりなる群より選
ばれた１種又は２種以上の物質と、（３）非イオン系界
面活性剤とを、試薬中に含有することを特徴とする請求
項１〜請求項３記載の免疫比濁測定試薬。 - 【請求項９】 非イオン系界面活性剤を反応の場に０．
０１〜５．００重量／容量％の濃度で存在するように試
薬中に含むことを特徴とする請求項８記載の免疫比濁測
定試薬。 - 【請求項１０】 第４級アンモニウム塩及びポリエチレ
ングリコールとともに非イオン系界面活性剤を反応の場
に０．０１〜５．００重量／容量％の濃度で存在するよ
うに試薬中に含むことを特徴とする請求項９記載の免疫
比濁測定試薬。 - 【請求項１１】 第４級アンモニウム塩及びポリエチレ
ン−ポリプロピレン−ブロック共重合体とともに非イオ
ン系界面活性剤を反応の場に０．０１〜５．００重量／
容量％の濃度で存在するように試薬中に含むことを特徴
とする請求項９記載の免疫比濁測定試薬。 - 【請求項１２】 第４級アンモニウム塩及びポリアニオ
ンとともに非イオン系界面活性剤を反応の場に０．０１
〜５．００重量／容量％の濃度で存在するように試薬中
に含むことを特徴とする請求項９記載の免疫比濁測定試
薬。 - 【請求項１３】 不溶性担体を用いることなく、抗原抗
体反応で生ずる不溶性の免疫複合体を光学的に測定する
ことにより、生体試料中の免疫学的活性物質を測定する
方法において、反応の場に第４級アンモニウム塩を存在
させることを特徴とする免疫比濁測定方法。 - 【請求項１４】 不溶性担体を用いることなく、抗原抗
体反応で生ずる不溶性の免疫複合体を光学的に測定する
ことにより、生体試料中の免疫学的活性物質を測定する
方法において、反応の場に第４級アンモニウム塩を存在
させることにより、目的とする抗原抗体反応以外の非特
異反応を抑制する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11631993A JPH06300761A (ja) | 1993-04-19 | 1993-04-19 | 免疫比濁測定試薬及び測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11631993A JPH06300761A (ja) | 1993-04-19 | 1993-04-19 | 免疫比濁測定試薬及び測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06300761A true JPH06300761A (ja) | 1994-10-28 |
Family
ID=14684044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11631993A Pending JPH06300761A (ja) | 1993-04-19 | 1993-04-19 | 免疫比濁測定試薬及び測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06300761A (ja) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
1993
- 1993-04-19 JP JP11631993A patent/JPH06300761A/ja active Pending
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