JPH0682450A - 免疫学的測定試薬 - Google Patents
免疫学的測定試薬Info
- Publication number
- JPH0682450A JPH0682450A JP26054392A JP26054392A JPH0682450A JP H0682450 A JPH0682450 A JP H0682450A JP 26054392 A JP26054392 A JP 26054392A JP 26054392 A JP26054392 A JP 26054392A JP H0682450 A JPH0682450 A JP H0682450A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- salt
- reagent
- polyvalent
- carboxylic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【発明の名称】免疫学的測定試薬
【要約】
【目的】 ＰＥＧ等の反応促進剤を用いる免疫比濁法な
どの免疫学的測定法において、添加剤と試料中の干渉物
質との非特異反応を抑制することにより、正確度や精密
度を向上させた免疫学的測定試薬を提供する。 【構成】 試薬中に多価カルボン酸又はその塩あるいは
多価スルホン酸又はその塩を測定時の最終濃度で０．０
１モル／ｌから１．０モル／ｌ含有させることにより、
ＰＥＧ等の添加剤と試料中の干渉物質との濁りを生ずる
非特異反応を抑制することを特徴とする免疫学的測定試
薬。
どの免疫学的測定法において、添加剤と試料中の干渉物
質との非特異反応を抑制することにより、正確度や精密
度を向上させた免疫学的測定試薬を提供する。 【構成】 試薬中に多価カルボン酸又はその塩あるいは
多価スルホン酸又はその塩を測定時の最終濃度で０．０
１モル／ｌから１．０モル／ｌ含有させることにより、
ＰＥＧ等の添加剤と試料中の干渉物質との濁りを生ずる
非特異反応を抑制することを特徴とする免疫学的測定試
薬。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗原抗体反応を利用し
た免疫学的活性物質の測定に用いる免疫学的測定用試薬
に関する。より詳しくは免疫学的測定法において非特異
反応を抑制する試薬組成に関する。
た免疫学的活性物質の測定に用いる免疫学的測定用試薬
に関する。より詳しくは免疫学的測定法において非特異
反応を抑制する試薬組成に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗原抗体反応を利用して、生体試料中の
免疫活性物質を測定する免疫学的測定方法は臨床検査の
分野で広く用いられている。例えば一元免疫拡散法（Ｓ
ＲＩＤ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、免疫比ろう法、赤血
球凝集法（ＨＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡ）、酵素免
疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）等が挙
げられ、それぞれ操作性、感度、精度等に一長一短が有
り、使用目的により使い分けられている。
免疫活性物質を測定する免疫学的測定方法は臨床検査の
分野で広く用いられている。例えば一元免疫拡散法（Ｓ
ＲＩＤ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、免疫比ろう法、赤血
球凝集法（ＨＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡ）、酵素免
疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）等が挙
げられ、それぞれ操作性、感度、精度等に一長一短が有
り、使用目的により使い分けられている。
【０００３】その中でも、抗原抗体反応で生ずる不溶性
の免疫複合体を光学的に測定する免疫比濁法は、Ｂ／Ｆ
分離操作が不要と操作が簡便であり、中程度の感度を有
し、一般の分光計や汎用の自動分析機で使用可能である
ので広く用いられている。例えば血清試料中の免疫グロ
ブリン（Ｉｇ）Ｇ、Ａ、Ｍ、トランスフェリン、補体、
アポリポ蛋白、β−リポ蛋白、Ｌｐ（ａ）、Ｃ反応性蛋
白（ＣＲＰ）、抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）、リウ
マチ因子（ＲＦ）、プラスミノーゲン、アルブミン等の
測定に利用されている。
の免疫複合体を光学的に測定する免疫比濁法は、Ｂ／Ｆ
分離操作が不要と操作が簡便であり、中程度の感度を有
し、一般の分光計や汎用の自動分析機で使用可能である
ので広く用いられている。例えば血清試料中の免疫グロ
ブリン（Ｉｇ）Ｇ、Ａ、Ｍ、トランスフェリン、補体、
アポリポ蛋白、β−リポ蛋白、Ｌｐ（ａ）、Ｃ反応性蛋
白（ＣＲＰ）、抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）、リウ
マチ因子（ＲＦ）、プラスミノーゲン、アルブミン等の
測定に利用されている。
【０００４】その原理は試料中の抗原／抗体が試薬中の
抗体／抗原と反応する抗原抗体反応の結果、不溶性の抗
原抗体複合体からなる反応生成物（懸濁粒子）が定量的
に生じ、この懸濁粒子が光の透過を妨げること（散乱さ
せること）を利用して光学的に定量する分析法である。
従って感度や精度、分析所用時間は懸濁粒子の形成程度
に大きく左右される。一般的に抗原溶液とその抗原に特
異的な抗体を混合した場合、１０-3秒オーダーで抗原抗
体反応が起こるが、その後、光学的に測定可能な懸濁粒
子が形成されるまでには数分から数時間、或は数日間を
要する場合もある。
抗体／抗原と反応する抗原抗体反応の結果、不溶性の抗
原抗体複合体からなる反応生成物（懸濁粒子）が定量的
に生じ、この懸濁粒子が光の透過を妨げること（散乱さ
せること）を利用して光学的に定量する分析法である。
従って感度や精度、分析所用時間は懸濁粒子の形成程度
に大きく左右される。一般的に抗原溶液とその抗原に特
異的な抗体を混合した場合、１０-3秒オーダーで抗原抗
体反応が起こるが、その後、光学的に測定可能な懸濁粒
子が形成されるまでには数分から数時間、或は数日間を
要する場合もある。
【０００５】そこで、懸濁粒子の形成を促進し、測定の
迅速化、高感度化、高精度化を目的としてその反応を補
助するために種々の反応促進剤、添加剤を用いる方法が
研究されている。例えば、クリニカル ケミストリー(C
LINICAL CHEMISTRY)２０巻、１０７１頁（１９７４年）
にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の使用が、特公
昭６０−４９３８号にはＰＥＧと非イオン性界面活性剤
の共存下に免疫反応を行う方法が記載されている。特開
昭５９−４３３６２号には、一般式
迅速化、高感度化、高精度化を目的としてその反応を補
助するために種々の反応促進剤、添加剤を用いる方法が
研究されている。例えば、クリニカル ケミストリー(C
LINICAL CHEMISTRY)２０巻、１０７１頁（１９７４年）
にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の使用が、特公
昭６０−４９３８号にはＰＥＧと非イオン性界面活性剤
の共存下に免疫反応を行う方法が記載されている。特開
昭５９−４３３６２号には、一般式
【化１】 で表される化合物を用いることが記載されている。特開
平２−１０３４６６号には、一般式
平２−１０３４６６号には、一般式
【化２】 で表される化合物を用いることが記載されている。更に
特開昭６１−２５０６２号には、コンドロイチン硫酸、
ヘパリン、デキストランなどの水溶性高分子物質を添加
することが記載されている。
特開昭６１−２５０６２号には、コンドロイチン硫酸、
ヘパリン、デキストランなどの水溶性高分子物質を添加
することが記載されている。
【０００６】しかし、これらの公知の添加物を用いて
も、必ずしも満足する結果は得られていない。例えば溶
液中で抗原と抗体を免疫反応させた反応混合物を吸光度
法、光散乱法などの光学的方法で測定する際に、抗体の
特異性に起因する非特異反応のみならず、生体試料その
ものの濁り、試料中に存在する測定対象でない他の物質
いわゆる干渉物質と試薬との反応で生ずる濁りが、誤差
の原因となっている。この原因としてＰＥＧ等の添加物
自身が夾雑蛋白などと反応して濁りの原因となることも
知られており、このような反応も非特異反応と呼ばれて
いる。このような誤差の原因となる濁りを生じる非特異
反応の抑制、回避は従来の技術では満足な結果は得られ
ていなかった。
も、必ずしも満足する結果は得られていない。例えば溶
液中で抗原と抗体を免疫反応させた反応混合物を吸光度
法、光散乱法などの光学的方法で測定する際に、抗体の
特異性に起因する非特異反応のみならず、生体試料その
ものの濁り、試料中に存在する測定対象でない他の物質
いわゆる干渉物質と試薬との反応で生ずる濁りが、誤差
の原因となっている。この原因としてＰＥＧ等の添加物
自身が夾雑蛋白などと反応して濁りの原因となることも
知られており、このような反応も非特異反応と呼ばれて
いる。このような誤差の原因となる濁りを生じる非特異
反応の抑制、回避は従来の技術では満足な結果は得られ
ていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記のような
従来技術の問題点を解消し、非特異反応を抑制し、測定
対象を精度良く、かつ正確に測定する試薬を提供する。
従来技術の問題点を解消し、非特異反応を抑制し、測定
対象を精度良く、かつ正確に測定する試薬を提供する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、抗原抗体反応
で生ずる不溶性の免疫複合体を光学的に測定することに
より、生体試料中の免疫学的活性物質を測定する方法に
用いる試薬において、試薬中に多価カルボン酸又はその
塩及び／または多価スルホン酸又はその塩を含有するこ
とを特徴とする免疫学的測定試薬である。
で生ずる不溶性の免疫複合体を光学的に測定することに
より、生体試料中の免疫学的活性物質を測定する方法に
用いる試薬において、試薬中に多価カルボン酸又はその
塩及び／または多価スルホン酸又はその塩を含有するこ
とを特徴とする免疫学的測定試薬である。
【０００９】本発明で用いる多価カルボン酸又はその塩
及び／または多価スルホン酸又はその塩は特に限定され
るものではないが、水溶性、毒性、入手の難易度等を考
慮すると、多価カルボン酸としてはシュウ酸、マロン
酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、
アゼライン酸、セバシン酸、ブラシル酸、メチルマロン
酸、フタル酸、メチルコハク酸、マレイン酸、フマル
酸、ゲルタコン酸、２，４−ヘキサジエン二酸、アセチ
レンジカルボン酸、酒石酸、リンゴ酸、エチレンジアミ
ン二酢酸、イミノ二酢酸、Ｎ−（２−アセトアミド）イ
ミノ二酢酸、１，４−シクロヘキサンジカルボン酸、ヒ
ドロキシエチルイミノ二酢酸などの２価カルボン酸、ト
リカルバリル酸、アコニット酸、カンホロン酸、トリメ
ジン酸、トリメリット酸、ニトリロ三酢酸、ニトリロ三
プロピオン酸などの３価カルボン酸、ピロメリット酸、
メロファン酸、ジアミノプロパン四酢酸、ジアミノプロ
パノール四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸な
どの４価カルボン酸又はそれらの塩が適当であり、多価
スルホン酸としては、メタンジスルホン酸、１，２−エ
タンジスルホン酸、ｍ−ベンゼンジスルホン酸、ピペラ
ジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、１，
４−ブタンジスルホン酸、トルエン−３，４−ジスルホ
ン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、７−アミノ−
１，３−ナフタレンジスルホン酸などの２価スルホン
酸、１，３，５−ベンゼントリスルホン酸、ナフタレン
−１，３，６−トリスルホン酸などの３価スルホン酸又
はそれらの塩が適当である。その中でも特にマレイン
酸、酒石酸、アジピン酸、リンゴ酸、トリメリット酸、
ピロメリット酸、ｍ−ベンゼンジスルホン酸、１，２−
エタンジスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２
−エタンスルホン酸）、１，３，５−ベンゼントリスル
ホン酸またはそれらの塩は特に好ましい。
及び／または多価スルホン酸又はその塩は特に限定され
るものではないが、水溶性、毒性、入手の難易度等を考
慮すると、多価カルボン酸としてはシュウ酸、マロン
酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、
アゼライン酸、セバシン酸、ブラシル酸、メチルマロン
酸、フタル酸、メチルコハク酸、マレイン酸、フマル
酸、ゲルタコン酸、２，４−ヘキサジエン二酸、アセチ
レンジカルボン酸、酒石酸、リンゴ酸、エチレンジアミ
ン二酢酸、イミノ二酢酸、Ｎ−（２−アセトアミド）イ
ミノ二酢酸、１，４−シクロヘキサンジカルボン酸、ヒ
ドロキシエチルイミノ二酢酸などの２価カルボン酸、ト
リカルバリル酸、アコニット酸、カンホロン酸、トリメ
ジン酸、トリメリット酸、ニトリロ三酢酸、ニトリロ三
プロピオン酸などの３価カルボン酸、ピロメリット酸、
メロファン酸、ジアミノプロパン四酢酸、ジアミノプロ
パノール四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸な
どの４価カルボン酸又はそれらの塩が適当であり、多価
スルホン酸としては、メタンジスルホン酸、１，２−エ
タンジスルホン酸、ｍ−ベンゼンジスルホン酸、ピペラ
ジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、１，
４−ブタンジスルホン酸、トルエン−３，４−ジスルホ
ン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、７−アミノ−
１，３−ナフタレンジスルホン酸などの２価スルホン
酸、１，３，５−ベンゼントリスルホン酸、ナフタレン
−１，３，６−トリスルホン酸などの３価スルホン酸又
はそれらの塩が適当である。その中でも特にマレイン
酸、酒石酸、アジピン酸、リンゴ酸、トリメリット酸、
ピロメリット酸、ｍ−ベンゼンジスルホン酸、１，２−
エタンジスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２
−エタンスルホン酸）、１，３，５−ベンゼントリスル
ホン酸またはそれらの塩は特に好ましい。
【００１０】多価カルボン酸又はその塩及び／または多
価スルホン酸又はその塩は単独で用いても、又複数の混
合物として用いてもよい。本発明で用いる多価カルボン
酸又はその塩及び／または多価スルホン酸又はその塩の
使用量は反応時の最終濃度で０．０１モル／ｌないし
１．０モル／ｌ含有すること、より好ましくは０．０１
モル／ｌないし０．５モル／ｌ含有するように添加量を
調節する。なぜなら多価カルボン酸又はその塩及び／ま
たは多価スルホン酸又はその塩を加えすぎると目的とす
る免疫反応そのものも抑制される傾向があるので。
価スルホン酸又はその塩は単独で用いても、又複数の混
合物として用いてもよい。本発明で用いる多価カルボン
酸又はその塩及び／または多価スルホン酸又はその塩の
使用量は反応時の最終濃度で０．０１モル／ｌないし
１．０モル／ｌ含有すること、より好ましくは０．０１
モル／ｌないし０．５モル／ｌ含有するように添加量を
調節する。なぜなら多価カルボン酸又はその塩及び／ま
たは多価スルホン酸又はその塩を加えすぎると目的とす
る免疫反応そのものも抑制される傾向があるので。
【００１１】多価カルボン酸又はその塩及び／または多
価スルホン酸又はその塩は最終的な免疫反応の場に必要
量存在するようにすれば良いが、好ましくは多価カルボ
ン酸又はその塩及び／または多価スルホン酸又はその塩
は、試料の希釈剤又は第一試薬中に含まれるようにする
のが調製の容易さ、試薬の安定性等に有利である。
価スルホン酸又はその塩は最終的な免疫反応の場に必要
量存在するようにすれば良いが、好ましくは多価カルボ
ン酸又はその塩及び／または多価スルホン酸又はその塩
は、試料の希釈剤又は第一試薬中に含まれるようにする
のが調製の容易さ、試薬の安定性等に有利である。
【００１２】本発明による免疫学的測定用試薬における
多価カルボン酸又はその塩及び／または多価スルホン酸
又はその塩以外の成分は従来公知のものを利用すればよ
い。例えば緩衝剤としてはｐＨが中性付近のリン酸緩衝
液やＨＥＰＥＳ等のグッドの緩衝液が利用可能であり、
反応促進剤としては、ＰＥＧ等の公知の水溶性高分子や
界面活性剤が使用可能である。更に必要に応じて試薬中
にアジ化ナトリウムやパラベン等の防腐剤、安定化剤を
添加して構わない。
多価カルボン酸又はその塩及び／または多価スルホン酸
又はその塩以外の成分は従来公知のものを利用すればよ
い。例えば緩衝剤としてはｐＨが中性付近のリン酸緩衝
液やＨＥＰＥＳ等のグッドの緩衝液が利用可能であり、
反応促進剤としては、ＰＥＧ等の公知の水溶性高分子や
界面活性剤が使用可能である。更に必要に応じて試薬中
にアジ化ナトリウムやパラベン等の防腐剤、安定化剤を
添加して構わない。
【００１３】
【作用】本発明の詳細な作用機序は不明である。しか
し、ＰＥＧ等の反応促進剤は免疫反応による懸濁粒子の
形成を促進する作用を有するが、その反面、検体中の夾
雑蛋白と反応することが知られている（非特異反応）。
本発明の多価カルボン酸又はその塩及び／または多価ス
ルホン酸又はその塩は免疫反応には影響を与えず、非特
異反応のみを特異的に抑制するものと推定される。
し、ＰＥＧ等の反応促進剤は免疫反応による懸濁粒子の
形成を促進する作用を有するが、その反面、検体中の夾
雑蛋白と反応することが知られている（非特異反応）。
本発明の多価カルボン酸又はその塩及び／または多価ス
ルホン酸又はその塩は免疫反応には影響を与えず、非特
異反応のみを特異的に抑制するものと推定される。
【００１４】
【実施例】以下実施例に基づき本発明を詳細に説明す
る。 実施例１．試薬の調製 次の試薬を調製し、必要に応じて多価カルボン酸又はそ
の塩あるいは多価スルホン酸又はその塩を添加し、測定
用試薬とした。 試薬１Ａ： ０．９ W/V％塩化ナトリウム、４．５ W/V
％ＰＥＧ６０００を０．０２モル／ｌリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）に溶解する。 試薬１Ｂ： ０．９ W/V％塩化ナトリウム、５．０ W/V
％プロノン２０８（日本油脂社製の非イオン型界面活性
剤）を０．０５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に
溶解する。 試薬２ ： ０．０２ W/V％デキストラン硫酸を０．０
５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解する。 試薬３ ： 抗ＲＦ血清、４．０ W/V％ＰＥＧ６０００
を０．０５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解
する。 ＬＡ試薬： 栄研化学（株）製 ＬＡ ＡＳＯ‘栄研’
試薬
る。 実施例１．試薬の調製 次の試薬を調製し、必要に応じて多価カルボン酸又はそ
の塩あるいは多価スルホン酸又はその塩を添加し、測定
用試薬とした。 試薬１Ａ： ０．９ W/V％塩化ナトリウム、４．５ W/V
％ＰＥＧ６０００を０．０２モル／ｌリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）に溶解する。 試薬１Ｂ： ０．９ W/V％塩化ナトリウム、５．０ W/V
％プロノン２０８（日本油脂社製の非イオン型界面活性
剤）を０．０５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に
溶解する。 試薬２ ： ０．０２ W/V％デキストラン硫酸を０．０
５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解する。 試薬３ ： 抗ＲＦ血清、４．０ W/V％ＰＥＧ６０００
を０．０５モル／ｌグッド緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解
する。 ＬＡ試薬： 栄研化学（株）製 ＬＡ ＡＳＯ‘栄研’
試薬
【００１５】実施例２ 試薬１Ａに、マレイン酸又は酒石酸を０．２モル／ｌ添
加し第一試薬とした。ヒト血清２０μｌに第一試薬３２
０μｌを加え、３７℃で５分間、３０秒おきに波長３４
０ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。対照として同時に
多価カルボン酸無添加のものも測定した。結果を表１及
び図１に示す。
加し第一試薬とした。ヒト血清２０μｌに第一試薬３２
０μｌを加え、３７℃で５分間、３０秒おきに波長３４
０ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。対照として同時に
多価カルボン酸無添加のものも測定した。結果を表１及
び図１に示す。
【００１６】
【表１】 多価カルボン酸の添加により、ＰＥＧと試料中の干渉物
質との濁りを生ずる非特異反応による吸光度の上昇が抑
えられた。
質との濁りを生ずる非特異反応による吸光度の上昇が抑
えられた。
【００１７】実施例３ 試薬１Ｂに、アジピン酸を０．０５モル／ｌ添加し第一
試薬とし、試薬２をそのまま用いて第二試薬とした。試
料としてヒト血清１０例をとり、それぞれ２０μｌに第
一試薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間加温後、第二
試薬８０μｌを添加し、３７℃における５分間の吸光度
変化量（ΔＯＤ）を、主波長３４０ｎｍ、副波長７００
ｎｍの二波長で測定した。対照として同時に多価カルボ
ン酸無添加のものも測定した。結果を表２に示す。
試薬とし、試薬２をそのまま用いて第二試薬とした。試
料としてヒト血清１０例をとり、それぞれ２０μｌに第
一試薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間加温後、第二
試薬８０μｌを添加し、３７℃における５分間の吸光度
変化量（ΔＯＤ）を、主波長３４０ｎｍ、副波長７００
ｎｍの二波長で測定した。対照として同時に多価カルボ
ン酸無添加のものも測定した。結果を表２に示す。
【００１８】
【表２】 多価カルボン酸の添加により、デキストラン硫酸と試料
中の干渉物質との非特異反応を抑制できた。
中の干渉物質との非特異反応を抑制できた。
【００１９】実施例４ 試薬１Ｂに、アジピン酸、マレイン酸又はリンゴ酸を
０．０５モル／ｌ添加し第一試薬とし、試薬２にストレ
プトリジンＯ（ＳＬＯ）を２０００ＩＵ／ｍｌ加え第二
試薬とした。試料としてヒト血清５例をとり、それぞれ
２０μｌに第一試薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間
加温後、第二試薬８０μｌを加え、３７℃５分間の吸光
度変化量（ΔＯＤ）を、主波長３４０ｎｍ、副波長７０
０ｎｍの二波長で測定し、別に作成した検量線よりＡＳ
Ｏ値（ＩＵ／ｍｌ）を求めた。対照として同時に多価カ
ルボン酸無添加のものも測定した。また同一血清をラテ
ックス凝集法（ＬＡ法）でも測定し、両者を比較した。
結果を表３に示す。
０．０５モル／ｌ添加し第一試薬とし、試薬２にストレ
プトリジンＯ（ＳＬＯ）を２０００ＩＵ／ｍｌ加え第二
試薬とした。試料としてヒト血清５例をとり、それぞれ
２０μｌに第一試薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間
加温後、第二試薬８０μｌを加え、３７℃５分間の吸光
度変化量（ΔＯＤ）を、主波長３４０ｎｍ、副波長７０
０ｎｍの二波長で測定し、別に作成した検量線よりＡＳ
Ｏ値（ＩＵ／ｍｌ）を求めた。対照として同時に多価カ
ルボン酸無添加のものも測定した。また同一血清をラテ
ックス凝集法（ＬＡ法）でも測定し、両者を比較した。
結果を表３に示す。
【００２０】
【表３】 多価カルボン酸無添加の場合は表３に示すように非特異
反応が生じＡＳＯ値が高値となり、ＬＡ法の値と大きく
解離した。それに対し、多価カルボン酸添加の場合は非
特異反応はほとんど認められず、ＬＡ法の値とほぼ一致
した正確な値が得られた。
反応が生じＡＳＯ値が高値となり、ＬＡ法の値と大きく
解離した。それに対し、多価カルボン酸添加の場合は非
特異反応はほとんど認められず、ＬＡ法の値とほぼ一致
した正確な値が得られた。
【００２１】実施例５ 実施例４で調製したアジピン酸を含む第一試薬とＳＬＯ
を含む第二試薬を用い、実施例４と同じ操作を行い、血
清２０例のＡＳＯ値を測定し、本法（ＴＩＡ法）とＬＡ
法の相関を調べた。結果を図２に示す。Ｒ＝０．９９、
Ｙ＝０．９７Ｘ＋１７（Ｘ：ＬＡ法、Ｙ：本発明）と良
好な相関係数及び回帰式が得られ、ＬＡ法と本発明は良
好な相関関係を示した。
を含む第二試薬を用い、実施例４と同じ操作を行い、血
清２０例のＡＳＯ値を測定し、本法（ＴＩＡ法）とＬＡ
法の相関を調べた。結果を図２に示す。Ｒ＝０．９９、
Ｙ＝０．９７Ｘ＋１７（Ｘ：ＬＡ法、Ｙ：本発明）と良
好な相関係数及び回帰式が得られ、ＬＡ法と本発明は良
好な相関関係を示した。
【００２２】実施例６ 実施例５と同じ第一試薬、第二試薬を用い、実施例５と
同じ操作を行い、同一血清を同時に１０回測定し再現性
を調べた。同様に多価カルボン酸無添加のもの、ＬＡ法
でも測定を行いそれぞれ比較した。結果を表４に示す。
同じ操作を行い、同一血清を同時に１０回測定し再現性
を調べた。同様に多価カルボン酸無添加のもの、ＬＡ法
でも測定を行いそれぞれ比較した。結果を表４に示す。
【００２３】
【表４】 多価カルボン酸無添加の場合は表４に示すように非特異
反応が生じＡＳＯ値が高値となり、ＬＡ法の値と大きく
解離した。それに対し多価カルボン酸添加の場合は非特
異反応がほとんど認められず、ＬＡ法とほぼ一致した正
確な値が得られた。また変動係数（ＣＶ）も良好であっ
た。
反応が生じＡＳＯ値が高値となり、ＬＡ法の値と大きく
解離した。それに対し多価カルボン酸添加の場合は非特
異反応がほとんど認められず、ＬＡ法とほぼ一致した正
確な値が得られた。また変動係数（ＣＶ）も良好であっ
た。
【００２４】実施例７ 試薬１Ａに、ｍ−ベンゼンジスルホン酸を０．２モル／
ｌ添加し第一試薬とした。ヒト血清２０μｌに第一試薬
３２０μｌを加え、３７℃で５分間、３０秒おきに波長
３４０ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。対照として同
時に多価スルホン酸無添加のものも測定した。結果を表
５及び図３に示す。
ｌ添加し第一試薬とした。ヒト血清２０μｌに第一試薬
３２０μｌを加え、３７℃で５分間、３０秒おきに波長
３４０ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。対照として同
時に多価スルホン酸無添加のものも測定した。結果を表
５及び図３に示す。
【００２５】
【表５】 多価スルホン酸の添加により、ＰＥＧと血清成分との非
特異反応による吸光度の上昇が抑えられた。
特異反応による吸光度の上昇が抑えられた。
【００２６】実施例８ 試薬１Ａに、ｍ−ベンゼンジスルホン酸を０．２モル／
ｌ添加し第一試薬とし、試薬２を第二試薬とした。試料
としてヒト血清５例をとり、それぞれ２０μｌに第一試
薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間加温後、第二試薬
８０μｌを加え、３７℃５分間の主波長３４０ｎｍ、副
波長７００ｎｍの二波長における吸光度変化量（ΔＯ
Ｄ）を測定した。対照として同時に多価スルホン酸無添
加のものも測定した。結果を表６に示す。
ｌ添加し第一試薬とし、試薬２を第二試薬とした。試料
としてヒト血清５例をとり、それぞれ２０μｌに第一試
薬３２０μｌを加え、３７℃で５分間加温後、第二試薬
８０μｌを加え、３７℃５分間の主波長３４０ｎｍ、副
波長７００ｎｍの二波長における吸光度変化量（ΔＯ
Ｄ）を測定した。対照として同時に多価スルホン酸無添
加のものも測定した。結果を表６に示す。
【００２７】
【表６】 多価スルホン酸無添加の場合は表６に示すようにデキス
トラン硫酸と血清成分との非特異反応が生じ、ΔＯＤが
高値となる。それに対し、多価スルホン酸添加の場合は
非特異反応はほとんど認められない。
トラン硫酸と血清成分との非特異反応が生じ、ΔＯＤが
高値となる。それに対し、多価スルホン酸添加の場合は
非特異反応はほとんど認められない。
【００２８】実施例９ 試薬３にトリメリット酸又はピロメリット酸を０．０５
モル／ｌ〜０．５モル／ｌ添加し、凝集反応測定用試薬
とした。凝集反応測定用試薬とＲＦ陽性血清又はＲＦ陰
性血清をそれぞれガラス板上で等量混合し、２分間攪拌
後、凝集の有無を肉眼で判定した。対照として同時に多
価カルボン酸無添加のものも測定した。結果を表７に示
す。
モル／ｌ〜０．５モル／ｌ添加し、凝集反応測定用試薬
とした。凝集反応測定用試薬とＲＦ陽性血清又はＲＦ陰
性血清をそれぞれガラス板上で等量混合し、２分間攪拌
後、凝集の有無を肉眼で判定した。対照として同時に多
価カルボン酸無添加のものも測定した。結果を表７に示
す。
【００２９】
【表７】 多価カルボン酸の添加により、非特異反応が抑制され、
正確な判定が可能となった。
正確な判定が可能となった。
【００３０】
【発明の効果】試薬中の抗体／抗原と試料中の干渉物質
との非特異反応により濁りが生じるが、実施例２、３、
７、８より試薬中に抗体／抗原がなくともＰＥＧ等の添
加剤と試料中の干渉物質により非特異反応が起こり、吸
光度（濁度）が増加する。多価カルボン酸又はその塩及
び／または多価スルホン酸又はその塩の添加によりこれ
らの非特異反応が抑制される。本発明により、測定対象
でない試料中の干渉物質との非特異反応が抑制されるの
で正確な測定対象の測定が可能となり、正確度、再現
性、信頼性、精度の向上した免疫学的測定試薬の供給が
可能となる。
との非特異反応により濁りが生じるが、実施例２、３、
７、８より試薬中に抗体／抗原がなくともＰＥＧ等の添
加剤と試料中の干渉物質により非特異反応が起こり、吸
光度（濁度）が増加する。多価カルボン酸又はその塩及
び／または多価スルホン酸又はその塩の添加によりこれ
らの非特異反応が抑制される。本発明により、測定対象
でない試料中の干渉物質との非特異反応が抑制されるの
で正確な測定対象の測定が可能となり、正確度、再現
性、信頼性、精度の向上した免疫学的測定試薬の供給が
可能となる。
【００３１】
【図１】実施例２の２価カルボン酸による非特異反応の
抑制の効果を示す。
抑制の効果を示す。
【図２】実施例５のＬＡ法と本発明との相関を示す。
【図３】実施例７の２価スルホン酸による非特異反応の
抑制の効果を示す。
抑制の効果を示す。
Claims (6)
- 【請求項１】抗原抗体反応で生ずる不溶性の免疫複合体
を光学的に測定することにより、生体試料中の免疫学的
活性物質を測定する方法に用いる試薬において、試薬中
に多価カルボン酸又はその塩及び／または多価スルホン
酸又はその塩を含有することを特徴とする免疫学的測定
試薬。 - 【請求項２】多価カルボン酸が、２価カルボン酸、３価
カルボン酸、４価カルボン酸又はそれらの塩である請求
項１に記載の免疫学的測定試薬。 - 【請求項３】多価スルホン酸が、２価スルホン酸、３価
スルホン酸又はそれらの塩である請求項１に記載の免疫
学的測定試薬。 - 【請求項４】試薬中に多価カルボン酸又はその塩及び／
または多価スルホン酸又はその塩を、最終濃度で０．０
１モル／ｌないし１．０モル／ｌ含有することを特徴と
する請求項１に記載の免疫学的測定試薬。 - 【請求項５】多価カルボン酸又はその塩及び／または多
価スルホン酸又はその塩が試料の希釈剤又は第一試薬中
に含まれる請求項１に記載の免疫学的測定試薬。 - 【請求項６】抗原抗体反応で生ずる不溶性の免疫複合体
を光学的に測定することにより、生体試料中の免疫学的
活性物質を測定する方法において、試薬中に多価カルボ
ン酸又はその塩及び／または多価スルホン酸又はその塩
を含有することを特徴とする非特異反応の抑制方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26054392A JPH0682450A (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | 免疫学的測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26054392A JPH0682450A (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | 免疫学的測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0682450A true JPH0682450A (ja) | 1994-03-22 |
Family
ID=17349423
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26054392A Pending JPH0682450A (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | 免疫学的測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0682450A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003010541A1 (fr) * | 2001-06-14 | 2003-02-06 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Procede d'analyse par immunoreaction, et reactif correspondant |
| WO2003056333A1 (fr) * | 2001-12-27 | 2003-07-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Methode de dosage immunologique et trousse de reactif de dosage immunologique destinee a etre utilisee dans ladite methode |
| WO2004053489A1 (ja) * | 2002-12-10 | 2004-06-24 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | 免疫反応測定方法 |
| JP2010054516A (ja) * | 2002-11-18 | 2010-03-11 | Denka Seiken Co Ltd | 血清および血漿の測定値乖離を防止する免疫測定法 |
| EP2833141A4 (en) * | 2012-03-30 | 2015-09-09 | Denka Seiken Kk | IMMUNOLOGICAL ANALYSIS METHOD AND REAGENT |
| WO2020096029A1 (ja) * | 2018-11-09 | 2020-05-14 | 積水メディカル株式会社 | 自動分析装置での免疫測定における異常検出抑制方法、及び免疫測定試薬 |
-
1992
- 1992-09-04 JP JP26054392A patent/JPH0682450A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1396724A1 (en) * | 2001-06-14 | 2004-03-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Method of assay by immunoreaction and reagent for use in the immunoreaction assay |
| WO2003010541A1 (fr) * | 2001-06-14 | 2003-02-06 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Procede d'analyse par immunoreaction, et reactif correspondant |
| EP1396724A4 (en) * | 2001-06-14 | 2004-07-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | IMMUNOREACTION ANALYSIS METHOD, AND CORRESPONDING REAGENT |
| EP1369689A4 (en) * | 2001-12-27 | 2005-09-28 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | IMMUNOLOGICAL ASSAY METHOD AND IMMUNOLOGICAL ASSAY REAGENT KIT FOR USE IN SAID METHOD |
| EP1369689A1 (en) * | 2001-12-27 | 2003-12-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Immunoassay method and immunoassay reagent kit to be used therein |
| WO2003056333A1 (fr) * | 2001-12-27 | 2003-07-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Methode de dosage immunologique et trousse de reactif de dosage immunologique destinee a etre utilisee dans ladite methode |
| US7056682B2 (en) | 2001-12-27 | 2006-06-06 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Immunoassay method and immunoassay reagent kit to be used therein |
| JP2010054516A (ja) * | 2002-11-18 | 2010-03-11 | Denka Seiken Co Ltd | 血清および血漿の測定値乖離を防止する免疫測定法 |
| WO2004053489A1 (ja) * | 2002-12-10 | 2004-06-24 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | 免疫反応測定方法 |
| JPWO2004053489A1 (ja) * | 2002-12-10 | 2006-04-13 | 松下電器産業株式会社 | 免疫反応測定方法およびそれに用いる免疫反応測定用試薬 |
| US7202041B2 (en) | 2002-12-10 | 2007-04-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Immunoreaction measurement method |
| JP4512492B2 (ja) * | 2002-12-10 | 2010-07-28 | パナソニック株式会社 | 免疫反応測定方法およびそれに用いる免疫反応測定用試薬 |
| EP2833141A4 (en) * | 2012-03-30 | 2015-09-09 | Denka Seiken Kk | IMMUNOLOGICAL ANALYSIS METHOD AND REAGENT |
| US9939436B2 (en) | 2012-03-30 | 2018-04-10 | Denka Seiken Co., Ltd. | Immunological analysis method and reagent |
| WO2020096029A1 (ja) * | 2018-11-09 | 2020-05-14 | 積水メディカル株式会社 | 自動分析装置での免疫測定における異常検出抑制方法、及び免疫測定試薬 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI114342B (fi) | Menetelmä virtsan proteiinin ja kreatiniinin määrittämiseksi | |
| US8524452B2 (en) | Measurement value lowering inhibitor for immunoassay method and immunoassay method using the same | |
| JPH06300761A (ja) | 免疫比濁測定試薬及び測定方法 | |
| US6210975B1 (en) | Process for determining a bindable analyte via immune precipitation and reagent therefor | |
| JPH0682450A (ja) | 免疫学的測定試薬 | |
| JP2005283250A (ja) | 金コロイド凝集反応の測定方法 | |
| CN102369441B (zh) | 免疫分析方法及用于该方法的试剂 | |
| US8900882B2 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| CN112763731B (zh) | 一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法 | |
| EP0439611B1 (en) | Method for assaying immunologically active substance and reagent therefor | |
| JP5294257B2 (ja) | ヘモグロビンの測定方法および測定用キット | |
| JP2002303630A (ja) | ラテックス免疫比濁測定法及びそれに用いるキット | |
| JPH0261561A (ja) | 免疫反応の測定方法 | |
| JPH0658935A (ja) | 免疫学的測定方法及びその試薬 | |
| PrIce et al. | Kinetic immunoturbidimetry of human choriomammotropin in serum. | |
| JP2885092B2 (ja) | Ｃ反応性タンパク質の測定法及び測定試薬 | |
| JP3041382B2 (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JP2000258419A (ja) | 免疫測定試薬及び免疫測定法 | |
| IE54400B1 (en) | A method for the determination of antigens | |
| JPH0712807A (ja) | 体液試料中の濁りを防止する方法 | |
| JP2022161884A (ja) | 自動分析装置の測定値の正確性を向上させる方法 | |
| JPH08233816A (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JPS62218865A (ja) | リウマチ因子の定量法 | |
| JP2589088B2 (ja) | 抗ストレプトリジンｏの定量法 | |
| JPH07107534B2 (ja) | ヒトｃ反応性タンパクの定量法 |