JPH0627072B2 - アミノ安息香酸誘導体を有効成分とする生体内抗酸化機構調節剤 - Google Patents
アミノ安息香酸誘導体を有効成分とする生体内抗酸化機構調節剤Info
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- JPH0627072B2 JPH0627072B2 JP22935188A JP22935188A JPH0627072B2 JP H0627072 B2 JPH0627072 B2 JP H0627072B2 JP 22935188 A JP22935188 A JP 22935188A JP 22935188 A JP22935188 A JP 22935188A JP H0627072 B2 JPH0627072 B2 JP H0627072B2
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖は示す） で表わされるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬
上許容し得る塩を有効成分とする生体内抗酸化機構調節
剤に関する。
上許容し得る塩を有効成分とする生体内抗酸化機構調節
剤に関する。
［従来の技術］ 現在、世界の先進諸国における種々の疾患は、飽食によ
る生体内代謝の過剰な上昇がその主原因であると考えら
れるようになってきた。すなわち生体内代謝活性の上昇
は、酸素消費量を増大させ、その結果ミトコンドリアで
酸素が４電子還元されて水が生成される過程で発生する
活性酸素量が内因性抗酸化酵素によるその消去を上まわ
るような場合、様々な疾患が引き起こされることが明ら
かになり、現在重要な問題となっている（腎と透析24
(5),737〜741、1988）。
る生体内代謝の過剰な上昇がその主原因であると考えら
れるようになってきた。すなわち生体内代謝活性の上昇
は、酸素消費量を増大させ、その結果ミトコンドリアで
酸素が４電子還元されて水が生成される過程で発生する
活性酸素量が内因性抗酸化酵素によるその消去を上まわ
るような場合、様々な疾患が引き起こされることが明ら
かになり、現在重要な問題となっている（腎と透析24
(5),737〜741、1988）。
これらの疾患の原因となる活性酸素は生体内における抗
酸化機構を介して除去されるが、この生体内防御系にお
いて主要な役割を果しているのは、スーパーオキサイド
ジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、ペルオキシダー
ゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、メチオニンスルホ
オキシドレダクターゼ等の一連の酵素群、及びアスコル
ビン酸（ビタミンＣ）、還元型グルタチオンα−トコフ
エロール（ビタミンＥ）等の物質であり、これらの各種
抗酸化物質を用いた各種疾患の治療が現在試みられつつ
ある。
酸化機構を介して除去されるが、この生体内防御系にお
いて主要な役割を果しているのは、スーパーオキサイド
ジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、ペルオキシダー
ゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、メチオニンスルホ
オキシドレダクターゼ等の一連の酵素群、及びアスコル
ビン酸（ビタミンＣ）、還元型グルタチオンα−トコフ
エロール（ビタミンＥ）等の物質であり、これらの各種
抗酸化物質を用いた各種疾患の治療が現在試みられつつ
ある。
［本願が解決しようとする問題点］ 活性酵素により生じる各種疾患に対する治療として現在
異種ＳＯＤの投与が臨床的に行なわれている。
異種ＳＯＤの投与が臨床的に行なわれている。
しかしながら、一般にこのような異種蛋白質の投与は、
アレルギーを発生させる危険性がある。事実小数ではあ
るが異種ＳＯＤ投与による発熱、あるいは局所の硬結が
生じることが報告されている（医薬と薬学、14，55-67
(1985)）。
アレルギーを発生させる危険性がある。事実小数ではあ
るが異種ＳＯＤ投与による発熱、あるいは局所の硬結が
生じることが報告されている（医薬と薬学、14，55-67
(1985)）。
更にＳＯＤは元来、蛋白質であることから、プロテアー
ゼによる分解、腎***等の生体内投与後の代謝安定性の
問題、又生産性の問題、鈍度の高い精製法、無菌操作等
の問題点が存在しており、これらの十分な解決策が得ら
れないのが現状である。
ゼによる分解、腎***等の生体内投与後の代謝安定性の
問題、又生産性の問題、鈍度の高い精製法、無菌操作等
の問題点が存在しており、これらの十分な解決策が得ら
れないのが現状である。
［問題点を解決するための手段］ 本発明者等は、異種ＳＯＤ投与が本質的に含有している
上記問題点を解決する方法について鋭意検討した結果、
本発明を完成した。
上記問題点を解決する方法について鋭意検討した結果、
本発明を完成した。
すなわち本発明は、一般式（Ｉ）で示される物質がＳＯ
Ｄをはじめとする内因性各種抗酸化酵素により形成され
る生体内抗酸化機構を賦活化するばかりでなく、直接に
抗酸化剤としても機能することにより、活性酸素により
引き起こされる各種疾患を制御するという知見に基づく
ものである。
Ｄをはじめとする内因性各種抗酸化酵素により形成され
る生体内抗酸化機構を賦活化するばかりでなく、直接に
抗酸化剤としても機能することにより、活性酸素により
引き起こされる各種疾患を制御するという知見に基づく
ものである。
従って本発明は、一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖を示す） で示されるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬上
許容し得る塩の少なくとも１種を有効成分として含有す
る生体内抗酸化機構調節剤に存する。
許容し得る塩の少なくとも１種を有効成分として含有す
る生体内抗酸化機構調節剤に存する。
本発明者等は、一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、医
薬として有用であることを既に提案した（特開昭54-135
738，特開昭54-154729，特開昭55-92319，特開昭55-923
20，特開昭56-34629，特開昭56-34630，特開昭56-5536
9，特開昭56-55397，特開昭56-86198，特開昭56-9519
7，特開昭57-16898，特開昭57-136519，特開昭57-13652
0，特開昭57-136521，特開昭57-136522，特開昭59-1043
16，特開昭59-104317）。
薬として有用であることを既に提案した（特開昭54-135
738，特開昭54-154729，特開昭55-92319，特開昭55-923
20，特開昭56-34629，特開昭56-34630，特開昭56-5536
9，特開昭56-55397，特開昭56-86198，特開昭56-9519
7，特開昭57-16898，特開昭57-136519，特開昭57-13652
0，特開昭57-136521，特開昭57-136522，特開昭59-1043
16，特開昭59-104317）。
上記一般式（Ｉ）で示される化合物（以下、“本物質”
と略称する）は簡単な構造でありながら、極めて低毒性
であり且つ抗菌活性がないので腸内菌叢攪乱などの心配
がなく、長期投与が可能である。また変異原生や細胞性
及び体液性免疫にも影響を与えず、したがって健康な人
に対する催奇形性やアレルギー反応などの危険もなく、
極めて安全な薬剤である。
と略称する）は簡単な構造でありながら、極めて低毒性
であり且つ抗菌活性がないので腸内菌叢攪乱などの心配
がなく、長期投与が可能である。また変異原生や細胞性
及び体液性免疫にも影響を与えず、したがって健康な人
に対する催奇形性やアレルギー反応などの危険もなく、
極めて安全な薬剤である。
本物質のアミノ基の位置はｐ−，ｍ−，ｏ−と３種類あ
り、それぞれ活性に多少の違いがみられることもある
が、本質的にはいずれも有用である。
り、それぞれ活性に多少の違いがみられることもある
が、本質的にはいずれも有用である。
本物質は塩の形態であってもよく、その場合医薬上許容
し得る塩であればいずれも包含される。
し得る塩であればいずれも包含される。
本物質の等部分は、アミノ安息香酸のアミノ基と結合す
る等であればよく、単糖が好ましい。
る等であればよく、単糖が好ましい。
糖はＤ又はＬ体もしくはα型，β型またはその混合物の
形であってもよい。従って本物質もα型又はβ型もしく
はこれらの混合であることができる。
形であってもよい。従って本物質もα型又はβ型もしく
はこれらの混合であることができる。
次に本物質の物理的特性の例を表１に示す。
次に本物質の毒物学的特性を示す。
1)急性毒性 Ｊcl：ＩＣＲ系マウスを用いて腹腔内及び強制経口投与
による急性毒性を調べた。本物質は腹腔内投与では生理
食塩水に、経口投与では蒸溜水に溶解し、これを注射筒
または胃ゾンデを用いて所定の量に調整して与えた。
による急性毒性を調べた。本物質は腹腔内投与では生理
食塩水に、経口投与では蒸溜水に溶解し、これを注射筒
または胃ゾンデを用いて所定の量に調整して与えた。
投与後中毒症状の観察を続け、７日目までの経時的死亡
率からＬＤ50値を求めた。生存例、死亡例とも解剖して
所見を得た。ＬＤ50値はリッチフィールド・ウィルコク
ソン（Litchfield-Wilcoxon ）図計算法により求めた。
結果は表２に示す。いずれも腹腔内、経口を問わずＬＤ
50値は 6ｇ／kg以上で、更に１12種類中 6種類の化合
物、すなわち半数以上がＬＤ50値で10ｇ／kg以上と極め
て安全性の高い薬剤であった。
率からＬＤ50値を求めた。生存例、死亡例とも解剖して
所見を得た。ＬＤ50値はリッチフィールド・ウィルコク
ソン（Litchfield-Wilcoxon ）図計算法により求めた。
結果は表２に示す。いずれも腹腔内、経口を問わずＬＤ
50値は 6ｇ／kg以上で、更に１12種類中 6種類の化合
物、すなわち半数以上がＬＤ50値で10ｇ／kg以上と極め
て安全性の高い薬剤であった。
2)抗菌活性 本物質を蒸溜水に溶解して２倍希釈系列を作成し、この
希釈液を９倍量の加温溶解した寒天培地に混和し、ペト
リ皿に注いで平板とした。培地にはハートインヒュージ
ョン寒天（細菌）及びサブロー寒天（真菌）を用い、前
培養した試験菌を塗抹接種後細菌は37℃、24ｈｒ、酵母
は25℃、３日、糸状菌は25℃で、７日間それぞれ培養し
て生育の有無を調べた。
希釈液を９倍量の加温溶解した寒天培地に混和し、ペト
リ皿に注いで平板とした。培地にはハートインヒュージ
ョン寒天（細菌）及びサブロー寒天（真菌）を用い、前
培養した試験菌を塗抹接種後細菌は37℃、24ｈｒ、酵母
は25℃、３日、糸状菌は25℃で、７日間それぞれ培養し
て生育の有無を調べた。
被検菌としては次の各菌種を使用した。
縁濃菌（Pseudomonas aeruginosa ＩＡＭ1514） 大腸菌（Escherichia coli ＩＦＯ 12734） 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus 209Ｐ） 枯草菌（Bacillus subtilis ＩＡＭ 1069） パン酵母（Saccharomyces cerevisiae ＩＡＭ 4207） カンジダ酵母（Candida albicans ＡＴＣＣ 752） 白癬菌（Trichophyton mentagrophytes ＩＦＯ 612
4） 黒かび（Aspergillus niger ＩＡＭ 3001） その結果、本物質はいずれの菌に対しても 1mg／mlの濃
度でも生育阻止を示さなかった。
4） 黒かび（Aspergillus niger ＩＡＭ 3001） その結果、本物質はいずれの菌に対しても 1mg／mlの濃
度でも生育阻止を示さなかった。
3)変異原性 まずRec-assayによる検討を行なった。すなわち、組換
修復欠損株（Bacillus subtilis Ｍ45）と組換修復保
持株（Ｂ・subtilis Ｈ17）の２株をＢ−II寒天培地
（肉エキス10ｇ，ポリペプトン10ｇ，Ｎａcl 5ｇ，寒天
15ｇ，蒸溜水1000ml，pH７．０）上に出発点が互いに接
触しないように画線した。本物質を滅菌水に溶解し、そ
の0.05mlを直径 8mmの円形濾紙に吸収させた後、直ちに
画線の開始点をおおうように静置し、37℃で１晩培養し
て生育阻止域の長さを測定した。陰性対照としてカナマ
イシン、陽性対照としてマイトマイシンＣを用いた。
修復欠損株（Bacillus subtilis Ｍ45）と組換修復保
持株（Ｂ・subtilis Ｈ17）の２株をＢ−II寒天培地
（肉エキス10ｇ，ポリペプトン10ｇ，Ｎａcl 5ｇ，寒天
15ｇ，蒸溜水1000ml，pH７．０）上に出発点が互いに接
触しないように画線した。本物質を滅菌水に溶解し、そ
の0.05mlを直径 8mmの円形濾紙に吸収させた後、直ちに
画線の開始点をおおうように静置し、37℃で１晩培養し
て生育阻止域の長さを測定した。陰性対照としてカナマ
イシン、陽性対照としてマイトマイシンＣを用いた。
次に復帰変異試験をＳalmonella typhimurium ＴＡ98
とＴＡ100 （いずれもヒスチジン要求性）を用いて行な
った。0.5mＭビチオン−0.5mＭヒスチジン溶液 1／10容
を加えた軟寒天液（Ｎａcl 6ｇ，寒天 6ｇ，蒸溜水1000
ml） 2mlに菌数１×108ケの菌液 0.1ml，薬液 0.1mlを
加えてよく混合し、最小寒天培地上に重層した。37℃で
2日間培養し復帰変異コロニー数を係数した。陽性対照
としてフリルフラマイド（ＡＦ2）を使用した。
とＴＡ100 （いずれもヒスチジン要求性）を用いて行な
った。0.5mＭビチオン−0.5mＭヒスチジン溶液 1／10容
を加えた軟寒天液（Ｎａcl 6ｇ，寒天 6ｇ，蒸溜水1000
ml） 2mlに菌数１×108ケの菌液 0.1ml，薬液 0.1mlを
加えてよく混合し、最小寒天培地上に重層した。37℃で
2日間培養し復帰変異コロニー数を係数した。陽性対照
としてフリルフラマイド（ＡＦ2）を使用した。
Rec-assay の結果を表３、復帰変異試験の結果を表４に
それぞれ示す。Rec-assay においては本物質は変異原性
を高濃度まで示さないが、特に p-アミノ安息香酸ナト
リウム誘導体が優れていた。また復帰変異試験では本物
質による変異発生率に高濃度を作用させた場合でも無添
加対照と比較して何ら変化はみられず、安全性の高い薬
剤であることが証明された。
それぞれ示す。Rec-assay においては本物質は変異原性
を高濃度まで示さないが、特に p-アミノ安息香酸ナト
リウム誘導体が優れていた。また復帰変異試験では本物
質による変異発生率に高濃度を作用させた場合でも無添
加対照と比較して何ら変化はみられず、安全性の高い薬
剤であることが証明された。
４）遅延型皮内反応 本物質の細胞性免疫への影響を知るためにＪcl：ＩＣＲ
マウスを用いてヒツジ赤血球を抗原とする足蹠反応（Fo
ot pad reaction ）を行なった。ヒツジ赤血球を生理食
塩水に10％量懸濁せしめ、この液 0.2mlを尾静脈より注
入して１次感作を行ない、さらに 7日後にヒツジ赤血球
の40％量懸濁液0.05mlを足蹠に注射して２次感作を行な
い翌日足蹠厚の測定を行なった。本物質は１次感作の日
を中心に本物質（2.5％生理食塩水溶液）を 250mg／kg
となるように腹腔内へ連日 5回投与した。
マウスを用いてヒツジ赤血球を抗原とする足蹠反応（Fo
ot pad reaction ）を行なった。ヒツジ赤血球を生理食
塩水に10％量懸濁せしめ、この液 0.2mlを尾静脈より注
入して１次感作を行ない、さらに 7日後にヒツジ赤血球
の40％量懸濁液0.05mlを足蹠に注射して２次感作を行な
い翌日足蹠厚の測定を行なった。本物質は１次感作の日
を中心に本物質（2.5％生理食塩水溶液）を 250mg／kg
となるように腹腔内へ連日 5回投与した。
その結果、本物質投与群の足蹠厚の増加は対照（非投
与）群と比較して何ら有意差は認めなかった。
与）群と比較して何ら有意差は認めなかった。
５）抗体産生能 本物質の体液性免疫への影響を知るために、Ｊcl：ＩＣ
Ｒマウスに対し、ヒツジ赤血球の10％量懸濁液 0.2mlを
尾静脈より注入して感作し、感作後 7日目に採血して赤
血球凝集反応により抗体産生能を測定した。なお本物質
は感作日を中心にして本物質（2.5％生理食塩水溶液）
を 250mg／kgとなるように連日 5回腹腔内へ投与した。
Ｒマウスに対し、ヒツジ赤血球の10％量懸濁液 0.2mlを
尾静脈より注入して感作し、感作後 7日目に採血して赤
血球凝集反応により抗体産生能を測定した。なお本物質
は感作日を中心にして本物質（2.5％生理食塩水溶液）
を 250mg／kgとなるように連日 5回腹腔内へ投与した。
結果は、本物質投与群と対照群を凝集価に何ら有意差は
みられなかった。
みられなかった。
次に本物質の薬理学的特性を述べる。
本物質は、腎臓における抗酸化機構を有意に上昇させ
た。更に本物質は乳酸デヒドロゲナーゼー還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド系（ＬＤＨ−ＮＡＤＨ
系）（キサンチンオキシダーゼあるいは分離マクロフア
ージ）において産生される活性酸素を直接抑制した。本
物質は、老人性痴呆のモデルである老化促進マウス（Ｓ
ＡＭ−Ｐ／８）の脳内抗酸化機構を上昇させると共にパ
ーキンソン病モデルであるＮ−メチル−４−フエニル−
1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭＰＴＰ）投与ア
カゲザルの脳内抗酸化機構を賦活化した。
た。更に本物質は乳酸デヒドロゲナーゼー還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド系（ＬＤＨ−ＮＡＤＨ
系）（キサンチンオキシダーゼあるいは分離マクロフア
ージ）において産生される活性酸素を直接抑制した。本
物質は、老人性痴呆のモデルである老化促進マウス（Ｓ
ＡＭ−Ｐ／８）の脳内抗酸化機構を上昇させると共にパ
ーキンソン病モデルであるＮ−メチル−４−フエニル−
1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭＰＴＰ）投与ア
カゲザルの脳内抗酸化機構を賦活化した。
次に本物質の製剤化について述べる。
本物質は生体内抗酸化機構調節剤として使用する場合、
疾患の種類及び症状に応じて薬効を得るのに都合のよい
形状で使用でき、そして単独または製薬上許容し得る希
釈剤及び他の薬剤との混合物として使用できる。
疾患の種類及び症状に応じて薬効を得るのに都合のよい
形状で使用でき、そして単独または製薬上許容し得る希
釈剤及び他の薬剤との混合物として使用できる。
本物質は経口的または非経口的に適用される。したがっ
て経口的または非経口的に投与するための形態を任意に
とり得る。
て経口的または非経口的に投与するための形態を任意に
とり得る。
本物質は任意の投薬単位形で提供することができ、本物
質は人間及び動物に経口的または非経口的に投与される
が経口投与が好ましい。
質は人間及び動物に経口的または非経口的に投与される
が経口投与が好ましい。
本物質の投与量は動物か人間かにより、また年齢、個人
差、病状などに影響されるので場合によっては下記範囲
外量を投与する場合も生じるが、一般に人間を対象とす
る場合、本物質の経口投与量は体重 1kg、 1日当り 0.1
〜1000mg、好ましくは 1〜 500mg、非経口的投与量は同
じく、 0.01〜 300mg、好ましくは 0.1〜 100mgを 1回
〜 4回に分けて投与する。
差、病状などに影響されるので場合によっては下記範囲
外量を投与する場合も生じるが、一般に人間を対象とす
る場合、本物質の経口投与量は体重 1kg、 1日当り 0.1
〜1000mg、好ましくは 1〜 500mg、非経口的投与量は同
じく、 0.01〜 300mg、好ましくは 0.1〜 100mgを 1回
〜 4回に分けて投与する。
［発明の効果］ 本物質は、老人性痴呆のモデルである老化促進マウス〜
ＳＡＭ−Ｐ／８の脳内抗酸化機構を上昇させると共に、
パーキンソン病モデルであるＮＭＰＴＰ投与アカゲザル
の脳内抗酸化機構を賦活化した。
ＳＡＭ−Ｐ／８の脳内抗酸化機構を上昇させると共に、
パーキンソン病モデルであるＮＭＰＴＰ投与アカゲザル
の脳内抗酸化機構を賦活化した。
又、本物質は、腎臓における抗酸化機構を有意に上昇さ
せた。更に本物質はＬＤＨ−ＮＡＤＨ系（キサンチンオ
キシダーゼあるいは分離マクロフアージ）において産生
される活性酸素を直接抑制する効果がある。
せた。更に本物質はＬＤＨ−ＮＡＤＨ系（キサンチンオ
キシダーゼあるいは分離マクロフアージ）において産生
される活性酸素を直接抑制する効果がある。
実施例−１ ウィスター系雄性ラットに本物質 900mg／kgを１週間強
制経口投与した。対照群は無処置とした（ｎ＝３）、投
与終了後エーテルにて屍殺したのち腎を摘出し、腎皮質
をホモゲナイズした。これを3000 rpm，10 min（４℃）
で遠心し、分離された上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡ
Ｃ35μｌに、測定試料を50μｌ及び5,5−dimethyl−１
−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）（三井東圧社製）
15μｌにxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ，0.272 uni
t／ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液
セル（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加
45秒後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−Ｉ
Ｘ）にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクトを分析した。
検量線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内
部標準物質に酸化マンガンを使用した。
制経口投与した。対照群は無処置とした（ｎ＝３）、投
与終了後エーテルにて屍殺したのち腎を摘出し、腎皮質
をホモゲナイズした。これを3000 rpm，10 min（４℃）
で遠心し、分離された上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡ
Ｃ35μｌに、測定試料を50μｌ及び5,5−dimethyl−１
−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）（三井東圧社製）
15μｌにxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ，0.272 uni
t／ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液
セル（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加
45秒後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−Ｉ
Ｘ）にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクトを分析した。
検量線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内
部標準物質に酸化マンガンを使用した。
また、測定条件は以下のとおりである。
magnetic field 335 ±5 mT：power 8.0 mW response
0.3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表５に示す如く、本物質投与により腎皮質の
ＳＯＤ活性が上昇していることが判明した。
0.3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表５に示す如く、本物質投与により腎皮質の
ＳＯＤ活性が上昇していることが判明した。
実施例−２ 125mMのNa−リン酸buffer（80μＭ ＥＤＴＡ−２Ｎａ
含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／m
l） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように段階希釈した本物質の水溶液 0.2mlを
加えた。なお別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその
最終濃度が４μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶
液を 0.2ml加えた。水 7.7mlを加えた後80μＭのヒポキ
サンチン 0.2ml及び0.05Ｕ／mlのキサンチンオキシダー
ゼ 0.3mlを加え、さらに 0.2 mMのＮＡＤＨ 0.5mlを加
えた後、37℃で反応を開始させた。10分後、340nm の吸
光度を測定することにより、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（キサン
チンオキシダーゼ〜ＸＯＤ）系において発生するＯ２ −
の本物質による除去作用に関し検討した。
含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／m
l） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように段階希釈した本物質の水溶液 0.2mlを
加えた。なお別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその
最終濃度が４μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶
液を 0.2ml加えた。水 7.7mlを加えた後80μＭのヒポキ
サンチン 0.2ml及び0.05Ｕ／mlのキサンチンオキシダー
ゼ 0.3mlを加え、さらに 0.2 mMのＮＡＤＨ 0.5mlを加
えた後、37℃で反応を開始させた。10分後、340nm の吸
光度を測定することにより、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（キサン
チンオキシダーゼ〜ＸＯＤ）系において発生するＯ２ −
の本物質による除去作用に関し検討した。
その結果、表６に示すように本物質は、ＬＤＨ−ＮＡＤ
Ｈ（ＸＯＤ）系において発生するＯ２ −を除去すること
が判明した。
Ｈ（ＸＯＤ）系において発生するＯ２ −を除去すること
が判明した。
なお、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（ＸＯＤ）系はＸＯＤによりヒ
ポキサンチンから生じるＯ２ −によりＮＡＤＨが酸化さ
れてＮＡＤ。となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 n
m）の低下を指標とすることにより、生成されるＯ２ −
の量を評価することが可能な系である。すなわち、上記
系にＯ２−消去能を有する本物質を添加した場合、340
nmの吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量
は、本物質のＯ２ −消去能と正の相関を示す。
ポキサンチンから生じるＯ２ −によりＮＡＤＨが酸化さ
れてＮＡＤ。となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 n
m）の低下を指標とすることにより、生成されるＯ２ −
の量を評価することが可能な系である。すなわち、上記
系にＯ２−消去能を有する本物質を添加した場合、340
nmの吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量
は、本物質のＯ２ −消去能と正の相関を示す。
実施例−３ 125mM のＮａ−リン酸buffer（80μＭ ＥＤＴＡ−２Ｎ
ａ含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／
ml） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように本物質の水溶液 0.2mlを加えた。なお
別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその最終濃度が４
μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶液を 0.2ml加
えた。水 0.9mlを加えた後、最終細胞濃度が３×１０６
／mlになるようにマクロファージの懸濁液 0.3mlを加え
た。
ａ含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／
ml） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように本物質の水溶液 0.2mlを加えた。なお
別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその最終濃度が４
μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶液を 0.2ml加
えた。水 0.9mlを加えた後、最終細胞濃度が３×１０６
／mlになるようにマクロファージの懸濁液 0.3mlを加え
た。
なおマクロファージは、ウィスター系雄性ラット５週令
に 0.5％チオグリコレートを５ml腹腔内に注射してから
４日後に125 mM Ｎａ−リン酸緩衝液（８０μＭ ＥＤ
ＴＡ−２Ｎａ含、pH 6.5）を用いて腹腔内より採取し、
洗浄後３×１０７／mlに調製したものを用いた。
に 0.5％チオグリコレートを５ml腹腔内に注射してから
４日後に125 mM Ｎａ−リン酸緩衝液（８０μＭ ＥＤ
ＴＡ−２Ｎａ含、pH 6.5）を用いて腹腔内より採取し、
洗浄後３×１０７／mlに調製したものを用いた。
ＮＡＤＨ 0.5mlを加えた後、37℃で反応を開始させた。
10分後340 nmの吸光度を測定することにより、ＮＤＨ−
ＮＡＤＨ（マクロファージ）系において発生するＯ２ −
の本物質による除去作用に関し検討した。
10分後340 nmの吸光度を測定することにより、ＮＤＨ−
ＮＡＤＨ（マクロファージ）系において発生するＯ２ −
の本物質による除去作用に関し検討した。
その結果、表７に示すように本物質は、ＬＤＨ−ＬＡＤ
Ｈ（マクロファージ）系において発生するＯ２ −を除去
することが判明した。
Ｈ（マクロファージ）系において発生するＯ２ −を除去
することが判明した。
なお、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（マクロファージ）系はマクロ
ファージにより生じるＯ２ −によりＮＡＤＨが酸化され
てＮＡＤ・となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 nm）
の低下を指標とすることにより、生成されるＯ２ −の量
を評価することが可能な系である。すなわち、上記系に
Ｏ２ −消去能を有する本物質を添加した場合、340 nmの
吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量は、本
物質のＯ２ −消去能と正の相関を示す。
ファージにより生じるＯ２ −によりＮＡＤＨが酸化され
てＮＡＤ・となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 nm）
の低下を指標とすることにより、生成されるＯ２ −の量
を評価することが可能な系である。すなわち、上記系に
Ｏ２ −消去能を有する本物質を添加した場合、340 nmの
吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量は、本
物質のＯ２ −消去能と正の相関を示す。
実施例−４ ３ケ月齢の老化促進モデルマウス（ＳＡＭ−Ｐ／８）に
本物質 500mg／kgを１ケ月間、連日強制経口投与した。
なお対照群は無処置とした。用い動物数は各群ｎ＝５と
した。投与終了後、エーテルにて屍殺し、脳をを摘出
し、細切した後、0.15Ｍ−ＫＣｌ（４℃）中にて洗浄
し、血液を除去した。次に３mlの 0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ
／ 0.135ＭＫＣｌ，pH7.4buffer を加え、Polytron(Bri
nkmann ）で15秒間ホモジネートした（目盛８）。その
後、４℃で10分間750×ｇで遠心分離し、分離された上
澄みをＳＯＤ測定用試料とした。
本物質 500mg／kgを１ケ月間、連日強制経口投与した。
なお対照群は無処置とした。用い動物数は各群ｎ＝５と
した。投与終了後、エーテルにて屍殺し、脳をを摘出
し、細切した後、0.15Ｍ−ＫＣｌ（４℃）中にて洗浄
し、血液を除去した。次に３mlの 0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ
／ 0.135ＭＫＣｌ，pH7.4buffer を加え、Polytron(Bri
nkmann ）で15秒間ホモジネートした（目盛８）。その
後、４℃で10分間750×ｇで遠心分離し、分離された上
澄みをＳＯＤ測定用試料とした。
なお、ＳＯＤ活性は単位蛋白量当りのユニット数で表示
した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定した。
した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定した。
２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡＣ
35μｌに、測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5.5−d
imethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μ
ｌにxanthine oxidase 50 μｌ（ＸＯＤ，0.272 unit／
ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクト分析した。検量線
はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標準
物質に酸化マンガンを使用した。また、測定条件は以下
のとおりである。
35μｌに、測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5.5−d
imethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μ
ｌにxanthine oxidase 50 μｌ（ＸＯＤ，0.272 unit／
ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクト分析した。検量線
はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標準
物質に酸化マンガンを使用した。また、測定条件は以下
のとおりである。
magnetic field 335±5 mT：power 8.0 mW response 0.
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表８に示す如く、本物質投与により、老化促
進モデルマウスＳＡＭ−Ｐ／８の脳内ＳＯＤ活性が上昇
したことが判明した。老化も遅延された。
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表８に示す如く、本物質投与により、老化促
進モデルマウスＳＡＭ−Ｐ／８の脳内ＳＯＤ活性が上昇
したことが判明した。老化も遅延された。
実施例−５ 老人性神経障害であるパーキンソン病のモデル動物に本
物質を投与した場合の効果について検討を加えた。
物質を投与した場合の効果について検討を加えた。
体重５kgの雄性アカゲザルにAldrich 社製Ｎ−メチル−
４−フェニル−1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭ
ＰＴＰ）の水／ＥｔＯＨ溶液（8.7mg／mlになるように
エタノールに溶解後、９倍量の水で希釈したもの）を、
８日間に渡り、連日静注した。投与量は、初回を 0.15
mg／kgとし、８日間で、 9.9mgになるよう連日close-up
した。本物質 500mg／kgをＮＭＰＴＰと同時に８日間に
渡り連日強制経口投与した。なお、対照群にはＮＭＰＴ
Ｐのみ投与した。各群における動物数（ｎ）は５とし
た。投与終了後、ペントバルビタールを静注することに
より屍殺、脳を摘出し細切した後、 0.15Ｍ−ＫＣｌ
（４℃）中にて洗浄し、血液を除去した。次に 150mlの
0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ／ 0.135Ｍ ＫＣｌ，pH 7.4 buf
fer を加え、polytron（Brinkmann ）で15秒間ホモジネ
ートした（目盛８）。その後、４℃で10分間 750×ｇで
遠心分離し、分離れた上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。なお、ＳＯＤ活性は単位蛋白量当りのユニット数で
表示した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定し
た。
４−フェニル−1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭ
ＰＴＰ）の水／ＥｔＯＨ溶液（8.7mg／mlになるように
エタノールに溶解後、９倍量の水で希釈したもの）を、
８日間に渡り、連日静注した。投与量は、初回を 0.15
mg／kgとし、８日間で、 9.9mgになるよう連日close-up
した。本物質 500mg／kgをＮＭＰＴＰと同時に８日間に
渡り連日強制経口投与した。なお、対照群にはＮＭＰＴ
Ｐのみ投与した。各群における動物数（ｎ）は５とし
た。投与終了後、ペントバルビタールを静注することに
より屍殺、脳を摘出し細切した後、 0.15Ｍ−ＫＣｌ
（４℃）中にて洗浄し、血液を除去した。次に 150mlの
0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ／ 0.135Ｍ ＫＣｌ，pH 7.4 buf
fer を加え、polytron（Brinkmann ）で15秒間ホモジネ
ートした（目盛８）。その後、４℃で10分間 750×ｇで
遠心分離し、分離れた上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。なお、ＳＯＤ活性は単位蛋白量当りのユニット数で
表示した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定し
た。
２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡＣ
35μｌに測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5,5−dim
ethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μｌ
にxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ， 0.272 unit／m
l）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクトを分析した。検量
線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標
準物質に酸化マンガンを使用した。測定条件は以下のと
おりである。
35μｌに測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5,5−dim
ethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μｌ
にxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ， 0.272 unit／m
l）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ２ −スピンアダクトを分析した。検量
線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標
準物質に酸化マンガンを使用した。測定条件は以下のと
おりである。
magnetic field 335±5 mT：power 8.0 mW response 0.
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表９に示す如く、本物質の併用投与により、
老人性神経障害であるパーキンソン病のモデル動物にお
けるＮＭＰＴＰによるＳＯＤ活性の低下が抑制された。
パーキンソン病も改善された。
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表９に示す如く、本物質の併用投与により、
老人性神経障害であるパーキンソン病のモデル動物にお
けるＮＭＰＴＰによるＳＯＤ活性の低下が抑制された。
パーキンソン病も改善された。
実施例−６ 製剤化例 本物質（p-アミノ安息香酸ナトリウム−Ｎ−Ｄ−ガラク
トシド） 0.6部 非イオン系界面活性剤 2.4部 生理食塩水 ９７ 部 を加温混合後滅菌して注射剤とする。
トシド） 0.6部 非イオン系界面活性剤 2.4部 生理食塩水 ９７ 部 を加温混合後滅菌して注射剤とする。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 平井 亨 埼玉県川越市霞ヶ関北５―31―１ (72)発明者 藤井 孝美 東京都足立区東和５―11―21 (72)発明者 生沢 正則 東京都立川市若葉町１―25―20
Claims (4)
- 【請求項１】一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖を示す） で示されるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬上
許容し得る塩の少なくとも１種を有効成分として含有す
る生体内抗酸化機構調節剤。 - 【請求項２】Ｒが単糖である特許請求の範囲第１項に記
載の生体内抗酸化機構調節剤。 - 【請求項３】単糖がアラビノシド，キシロシド，グルコ
シド，ガラクトシド，ラムノシド及びマンノシドよりな
る群から選ばれたものであることを特徴とする特許請求
の範囲第２項に記載の生体内抗酸化機構調節剤。 - 【請求項４】医薬上許容し得る塩がナトリウム塩である
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の生体内
抗酸化機構調節剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22935188A JPH0627072B2 (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | アミノ安息香酸誘導体を有効成分とする生体内抗酸化機構調節剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22935188A JPH0627072B2 (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | アミノ安息香酸誘導体を有効成分とする生体内抗酸化機構調節剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0278620A JPH0278620A (ja) | 1990-03-19 |
| JPH0627072B2 true JPH0627072B2 (ja) | 1994-04-13 |
Family
ID=16890802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22935188A Expired - Lifetime JPH0627072B2 (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | アミノ安息香酸誘導体を有効成分とする生体内抗酸化機構調節剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0627072B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5668117A (en) * | 1991-02-22 | 1997-09-16 | Shapiro; Howard K. | Methods of treating neurological diseases and etiologically related symptomology using carbonyl trapping agents in combination with previously known medicaments |
| ES2251935T3 (es) * | 1993-03-29 | 2006-05-16 | Queen's University At Kingston | Acido propan-1,3-disulfonico y sus sales farmaceuticamente aceptables para el tratamiento de amiloidosis. |
| US20040208875A1 (en) | 1995-03-15 | 2004-10-21 | Queen's University At Kingston | Method for treating amyloidosis |
| WO2006085149A2 (en) | 2004-12-22 | 2006-08-17 | Neurochem (International) Limited | Methods and compositions for treating amyloid-related diseases |
| TW200716088A (en) | 2005-04-15 | 2007-05-01 | Neurochem Int Ltd | Formulations and methods for treating amyloidosis |
| JP5607930B2 (ja) | 2006-10-12 | 2014-10-15 | ビーエイチアイ リミテッド パートナーシップ | ３−アミノ−１−プロパンスルホン酸を送達するための方法、化合物、組成物および媒体 |
-
1988
- 1988-09-13 JP JP22935188A patent/JPH0627072B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0278620A (ja) | 1990-03-19 |
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