JPH0627072B2 - In-vivo antioxidant mechanism regulator containing aminobenzoic acid derivative as active ingredient - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖は示す） で表わされるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬
上許容し得る塩を有効成分とする生体内抗酸化機構調節
剤に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of Industrial Application] The present invention provides a compound represented by the general formula (I): (In the formula, R represents a sugar) An aminobenzoic acid derivative represented by: or a pharmaceutically acceptable salt of the derivative as an active ingredient, and relates to a regulator of in vivo antioxidant mechanism.

［従来の技術］ 現在、世界の先進諸国における種々の疾患は、飽食によ
る生体内代謝の過剰な上昇がその主原因であると考えら
れるようになってきた。すなわち生体内代謝活性の上昇
は、酸素消費量を増大させ、その結果ミトコンドリアで
酸素が４電子還元されて水が生成される過程で発生する
活性酸素量が内因性抗酸化酵素によるその消去を上まわ
るような場合、様々な疾患が引き起こされることが明ら
かになり、現在重要な問題となっている（腎と透析24
(5),737〜741、1988）。[Prior Art] At present, various diseases in developed countries around the world have been considered to be mainly caused by an excessive increase in in vivo metabolism due to satiation. In other words, the increase in metabolic activity in vivo increases oxygen consumption, and as a result, the amount of active oxygen generated in the process of water being produced by four-electron reduction of oxygen in mitochondria is increased by the endogenous antioxidant enzymes. It has become clear that a variety of diseases can be caused by such cases, and it is now an important issue (renal and dialysis 24
(5), 737-741, 1988).

これらの疾患の原因となる活性酸素は生体内における抗
酸化機構を介して除去されるが、この生体内防御系にお
いて主要な役割を果しているのは、スーパーオキサイド
ジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、ペルオキシダー
ゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、メチオニンスルホ
オキシドレダクターゼ等の一連の酵素群、及びアスコル
ビン酸（ビタミンＣ）、還元型グルタチオンα−トコフ
エロール（ビタミンＥ）等の物質であり、これらの各種
抗酸化物質を用いた各種疾患の治療が現在試みられつつ
ある。The active oxygen responsible for these diseases is eliminated through an antioxidant mechanism in vivo, but the main roles in this in vivo defense system are superoxide dismutase (SOD), catalase, peroxidase, A series of enzymes such as glutathione peroxidase and methionine sulfoxide reductase, and substances such as ascorbic acid (vitamin C) and reduced glutathione α-tocopherol (vitamin E). Treatment is currently being attempted.

［本願が解決しようとする問題点］ 活性酵素により生じる各種疾患に対する治療として現在
異種ＳＯＤの投与が臨床的に行なわれている。[Problems to be solved by the present application] As a treatment for various diseases caused by active enzymes, administration of heterologous SOD is currently clinically performed.

しかしながら、一般にこのような異種蛋白質の投与は、
アレルギーを発生させる危険性がある。事実小数ではあ
るが異種ＳＯＤ投与による発熱、あるいは局所の硬結が
生じることが報告されている（医薬と薬学、14，55-67
(1985)）。However, in general, administration of such heterologous proteins will
There is a risk of developing allergies. In fact, a small number of heterogeneous SOD administrations have been reported to cause fever or local induration (Pharmaceuticals and Pharmacy, 14 , 55-67).
(1985)).

更にＳＯＤは元来、蛋白質であることから、プロテアー
ゼによる分解、腎***等の生体内投与後の代謝安定性の
問題、又生産性の問題、鈍度の高い精製法、無菌操作等
の問題点が存在しており、これらの十分な解決策が得ら
れないのが現状である。Furthermore, since SOD is originally a protein, there are problems of metabolic stability after in vivo administration such as degradation by protease, renal excretion, etc., productivity problems, highly inefficient purification method, and aseptic operation. Exists and the current situation is that these sufficient solutions cannot be obtained.

［問題点を解決するための手段］ 本発明者等は、異種ＳＯＤ投与が本質的に含有している
上記問題点を解決する方法について鋭意検討した結果、
本発明を完成した。[Means for Solving the Problems] The inventors of the present invention have diligently studied a method for solving the above problems inherently contained in the heterologous SOD administration, and as a result,
The present invention has been completed.

すなわち本発明は、一般式（Ｉ）で示される物質がＳＯ
Ｄをはじめとする内因性各種抗酸化酵素により形成され
る生体内抗酸化機構を賦活化するばかりでなく、直接に
抗酸化剤としても機能することにより、活性酸素により
引き起こされる各種疾患を制御するという知見に基づく
ものである。That is, in the present invention, the substance represented by the general formula (I) is SO
Controls various diseases caused by active oxygen by not only activating the in vivo antioxidant mechanism formed by various endogenous antioxidant enzymes including D, but also by directly functioning as an antioxidant It is based on the knowledge.

従って本発明は、一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖を示す） で示されるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬上
許容し得る塩の少なくとも１種を有効成分として含有す
る生体内抗酸化機構調節剤に存する。Therefore, the present invention provides a compound of general formula (I) (In the formula, R represents a sugar) An aminobenzoic acid derivative represented by: or a pharmaceutically acceptable salt of the derivative as an active ingredient, which is present as an in vivo antioxidant mechanism regulator.

本発明者等は、一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、医
薬として有用であることを既に提案した（特開昭54-135
738，特開昭54-154729，特開昭55-92319，特開昭55-923
20，特開昭56-34629，特開昭56-34630，特開昭56-5536
9，特開昭56-55397，特開昭56-86198，特開昭56-9519
7，特開昭57-16898，特開昭57-136519，特開昭57-13652
0，特開昭57-136521，特開昭57-136522，特開昭59-1043
16，特開昭59-104317）。The present inventors have already proposed that the compound represented by the general formula (I) is useful as a medicine (JP-A-54-135).
738, JP-A-54-154729, JP-A-55-92319, JP-A-55-923
20, JP-A-56-34629, JP-A-56-34630, JP-A-56-5536
9, JP-A-56-55397, JP-A-56-86198, JP-A-56-9519
7, JP-A-57-16898, JP-A-57-136519, JP-A-57-13652
0, JP-A-57-136521, JP-A-57-136522, JP-A-59-1043
16, JP-A-59-104317).

上記一般式（Ｉ）で示される化合物（以下、“本物質”
と略称する）は簡単な構造でありながら、極めて低毒性
であり且つ抗菌活性がないので腸内菌叢攪乱などの心配
がなく、長期投与が可能である。また変異原生や細胞性
及び体液性免疫にも影響を与えず、したがって健康な人
に対する催奇形性やアレルギー反応などの危険もなく、
極めて安全な薬剤である。The compound represented by the above general formula (I) (hereinafter referred to as "the substance").
Although it has a simple structure, it has extremely low toxicity and has no antibacterial activity, so that it can be administered for a long time without worrying about disturbance of intestinal flora. In addition, it does not affect mutagenicity or cellular and humoral immunity, so there is no risk of teratogenicity or allergic reaction in healthy people.
It is an extremely safe drug.

本物質のアミノ基の位置はｐ−，ｍ−，ｏ−と３種類あ
り、それぞれ活性に多少の違いがみられることもある
が、本質的にはいずれも有用である。There are three types of amino group positions of this substance, p-, m-, and o-, and there may be some differences in activity, but essentially all are useful.

本物質は塩の形態であってもよく、その場合医薬上許容
し得る塩であればいずれも包含される。The substance may be in the form of a salt, in which case any pharmaceutically acceptable salt is included.

本物質の等部分は、アミノ安息香酸のアミノ基と結合す
る等であればよく、単糖が好ましい。The equimolar portion of this substance may be such that it binds to the amino group of aminobenzoic acid, and is preferably a monosaccharide.

糖はＤ又はＬ体もしくはα型，β型またはその混合物の
形であってもよい。従って本物質もα型又はβ型もしく
はこれらの混合であることができる。The sugar may be in the D or L form or in the α form, the β form or a mixture thereof. Thus, the substance can also be in the α form or β form or mixtures thereof.

次に本物質の物理的特性の例を表１に示す。Next, Table 1 shows examples of physical properties of this substance.

次に本物質の毒物学的特性を示す。 The toxicological properties of this substance are shown below.

1)急性毒性 Ｊcl：ＩＣＲ系マウスを用いて腹腔内及び強制経口投与
による急性毒性を調べた。本物質は腹腔内投与では生理
食塩水に、経口投与では蒸溜水に溶解し、これを注射筒
または胃ゾンデを用いて所定の量に調整して与えた。1) Acute toxicity Jcl: ICR mice were used to examine the acute toxicity by intraperitoneal and oral gavage. This substance was dissolved in physiological saline for intraperitoneal administration and dissolved in distilled water for oral administration, and this was adjusted to a predetermined amount using a syringe or a gastric tube and given.

投与後中毒症状の観察を続け、７日目までの経時的死亡
率からＬＤ₅₀値を求めた。生存例、死亡例とも解剖して
所見を得た。ＬＤ₅₀値はリッチフィールド・ウィルコク
ソン（Litchfield-Wilcoxon ）図計算法により求めた。
結果は表２に示す。いずれも腹腔内、経口を問わずＬＤ
₅₀値は 6ｇ／kg以上で、更に１12種類中 6種類の化合
物、すなわち半数以上がＬＤ₅₀値で10ｇ／kg以上と極め
て安全性の高い薬剤であった。After the administration, the observation of intoxication symptoms was continued, and the LD ₅₀ value was calculated from the mortality rate over time until the 7th day. Findings were obtained by dissecting both surviving cases and dead cases. The LD ₅₀ value was obtained by the Litchfield-Wilcoxon diagram calculation method.
The results are shown in Table 2. LD for both intraperitoneal and oral
_{The 50} value was 6 g / kg or more, and 6 kinds of compounds out of 112 kinds, that is, more than half were LD ₅₀ values of 10 g / kg or more, which were extremely safe drugs.

2)抗菌活性 本物質を蒸溜水に溶解して２倍希釈系列を作成し、この
希釈液を９倍量の加温溶解した寒天培地に混和し、ペト
リ皿に注いで平板とした。培地にはハートインヒュージ
ョン寒天（細菌）及びサブロー寒天（真菌）を用い、前
培養した試験菌を塗抹接種後細菌は37℃、24ｈｒ、酵母
は25℃、３日、糸状菌は25℃で、７日間それぞれ培養し
て生育の有無を調べた。 2) Antibacterial activity This substance was dissolved in distilled water to prepare a 2-fold dilution series, and this diluted solution was mixed with 9-fold amount of the warmed and dissolved agar medium and poured into a Petri dish to form a plate. Heart infusion agar (bacteria) and Sabouraud agar (fungus) are used as the medium, and the pre-cultured test bacteria are smeared and inoculated, and the bacteria are 37 ℃, 24hr, yeast are 25 ℃, 3 days, and filamentous fungi are at 25 ℃. The cells were cultured for 7 days and examined for growth.

被検菌としては次の各菌種を使用した。The following bacterial strains were used as test bacteria.

縁濃菌（Pseudomonas aeruginosa ＩＡＭ1514） 大腸菌（Escherichia coli ＩＦＯ 12734） 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus 209Ｐ） 枯草菌（Bacillus subtilis ＩＡＭ 1069） パン酵母（Saccharomyces cerevisiae ＩＡＭ 4207） カンジダ酵母（Candida albicans ＡＴＣＣ 752） 白癬菌（Trichophyton mentagrophytes ＩＦＯ 612
4） 黒かび（Aspergillus niger ＩＡＭ 3001） その結果、本物質はいずれの菌に対しても 1mg／mlの濃
度でも生育阻止を示さなかった。Pseudomonas aeruginosa IAM1514 Escherichia coli IFO 12734 Staphylococcus aureus 209P Bacillus subtilis IAM 1069 Baker's yeast (Saccharomyces cerevisiae IAM 4207) Candida yeast (Cacida albicans) Trichophyton mentagrophytes IFO 612
4) Black mold (Aspergillus niger IAM 3001) As a result, this substance showed no growth inhibition against any bacteria at a concentration of 1 mg / ml.

3)変異原性 まずRec-assayによる検討を行なった。すなわち、組換
修復欠損株（Bacillus subtilis Ｍ45）と組換修復保
持株（Ｂ・subtilis Ｈ17）の２株をＢ−II寒天培地
（肉エキス10ｇ，ポリペプトン10ｇ，Ｎａcl 5ｇ，寒天
15ｇ，蒸溜水1000ml，pH７．０）上に出発点が互いに接
触しないように画線した。本物質を滅菌水に溶解し、そ
の0.05mlを直径 8mmの円形濾紙に吸収させた後、直ちに
画線の開始点をおおうように静置し、37℃で１晩培養し
て生育阻止域の長さを測定した。陰性対照としてカナマ
イシン、陽性対照としてマイトマイシンＣを用いた。3) Mutagenicity First, rec-assay was performed. That is, two strains, a recombinant repair-deficient strain (Bacillus subtilis M45) and a recombinant repair-holding strain (B.subtilis H17), were added to B-II agar medium (meat extract 10 g, polypeptone 10 g, Nacl 5 g, agar).
15 g, distilled water 1000 ml, pH 7.0) were streaked so that the starting points did not come into contact with each other. Dissolve this substance in sterilized water, absorb 0.05 ml of it into a circular filter paper with a diameter of 8 mm, and immediately leave it still so as to cover the starting point of the streak, incubate at 37 ° C overnight, and grow in the growth inhibition zone. The length was measured. Kanamycin was used as a negative control and mitomycin C was used as a positive control.

次に復帰変異試験をＳalmonella typhimurium ＴＡ98
とＴＡ100 （いずれもヒスチジン要求性）を用いて行な
った。0.5mＭビチオン−0.5mＭヒスチジン溶液 1／10容
を加えた軟寒天液（Ｎａcl 6ｇ，寒天 6ｇ，蒸溜水1000
ml） 2mlに菌数１×10⁸ケの菌液 0.1ml，薬液 0.1mlを
加えてよく混合し、最小寒天培地上に重層した。37℃で
2日間培養し復帰変異コロニー数を係数した。陽性対照
としてフリルフラマイド（ＡＦ2）を使用した。Next, a reverse mutation test was performed on Salmonella typhimurium TA98.
And TA100 (both requiring histidine). 0.5 mM biotin-0.5 mM histidine solution 1/10 volume of soft agar solution (Nacl 6 g, agar 6 g, distilled water 1000
0.1 ml of bacterial solution containing 1 × 10 ⁸ cells and 0.1 ml of chemical solution were added to 2 ml and mixed well, and overlaid on the minimal agar medium. At 37 ° C
After culturing for 2 days, the number of revertant colonies was calculated. Furylfuramide (AF2) was used as a positive control.

Rec-assay の結果を表３、復帰変異試験の結果を表４に
それぞれ示す。Rec-assay においては本物質は変異原性
を高濃度まで示さないが、特に p-アミノ安息香酸ナト
リウム誘導体が優れていた。また復帰変異試験では本物
質による変異発生率に高濃度を作用させた場合でも無添
加対照と比較して何ら変化はみられず、安全性の高い薬
剤であることが証明された。Table 3 shows the results of Rec-assay and Table 4 shows the results of the reverse mutation test. In Rec-assay, this substance does not show mutagenicity up to high concentration, but the p-aminobenzoic acid sodium derivative was particularly excellent. In the reverse mutation test, no change was observed in the mutation rate of this substance even when a high concentration was applied, compared with the control without addition, demonstrating that it is a highly safe drug.

４）遅延型皮内反応 本物質の細胞性免疫への影響を知るためにＪcl：ＩＣＲ
マウスを用いてヒツジ赤血球を抗原とする足蹠反応（Fo
ot pad reaction ）を行なった。ヒツジ赤血球を生理食
塩水に10％量懸濁せしめ、この液 0.2mlを尾静脈より注
入して１次感作を行ない、さらに 7日後にヒツジ赤血球
の40％量懸濁液0.05mlを足蹠に注射して２次感作を行な
い翌日足蹠厚の測定を行なった。本物質は１次感作の日
を中心に本物質（2.5％生理食塩水溶液）を 250mg／kg
となるように腹腔内へ連日 5回投与した。 4) Delayed intradermal reaction To understand the effect of this substance on cell-mediated immunity, Jcl: ICR
Foot-pad reaction (Fo) using sheep red blood cells as an antigen in mice
ot pad reaction) was performed. Sheep erythrocytes were suspended in physiological saline in an amount of 10%, 0.2 ml of this solution was injected through the tail vein for primary sensitization, and after 7 days, 0.05 ml of a 40% suspension of sheep erythrocytes was added to the foot pads. A secondary sensitization was performed and the footpad thickness was measured the next day. This substance is 250 mg / kg mainly on the day of primary sensitization (2.5% saline solution).
Was administered intraperitoneally 5 times daily.

その結果、本物質投与群の足蹠厚の増加は対照（非投
与）群と比較して何ら有意差は認めなかった。As a result, there was no significant difference in the increase in footpad thickness in the substance-administered group compared with the control (non-administered) group.

５）抗体産生能 本物質の体液性免疫への影響を知るために、Ｊcl：ＩＣ
Ｒマウスに対し、ヒツジ赤血球の10％量懸濁液 0.2mlを
尾静脈より注入して感作し、感作後 7日目に採血して赤
血球凝集反応により抗体産生能を測定した。なお本物質
は感作日を中心にして本物質（2.5％生理食塩水溶液）
を 250mg／kgとなるように連日 5回腹腔内へ投与した。5) Antibody-producing ability In order to know the effect of this substance on humoral immunity, Jcl: IC
R mice were sensitized by injecting 0.2 ml of a 10% suspension of sheep red blood cells through the tail vein, and blood was collected 7 days after the sensitization, and the antibody producing ability was measured by hemagglutination. This substance is mainly on the day of sensitization (2.5% saline solution)
Was intraperitoneally administered 5 times daily at a dose of 250 mg / kg.

結果は、本物質投与群と対照群を凝集価に何ら有意差は
みられなかった。As a result, there was no significant difference in the aggregation value between the substance-administered group and the control group.

次に本物質の薬理学的特性を述べる。Next, the pharmacological properties of this substance are described.

本物質は、腎臓における抗酸化機構を有意に上昇させ
た。更に本物質は乳酸デヒドロゲナーゼー還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド系（ＬＤＨ−ＮＡＤＨ
系）（キサンチンオキシダーゼあるいは分離マクロフア
ージ）において産生される活性酸素を直接抑制した。本
物質は、老人性痴呆のモデルである老化促進マウス（Ｓ
ＡＭ−Ｐ／８）の脳内抗酸化機構を上昇させると共にパ
ーキンソン病モデルであるＮ−メチル−４−フエニル−
1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭＰＴＰ）投与ア
カゲザルの脳内抗酸化機構を賦活化した。This substance significantly increased the antioxidant mechanism in the kidney. Furthermore, this substance is a lactate dehydrogenase-reducing nicotinamide adenine dinucleotide system (LDH-NADH
System) (xanthine oxidase or separated macrophages) directly suppressed the active oxygen produced. This substance is a model of senile dementia and is used in aging-promoted mice (S
AM-P / 8) increases the brain antioxidant mechanism and N-methyl-4-phenyl- which is a model of Parkinson's disease
The brain antioxidant mechanism of rhesus monkeys administered with 1,2,3,6-tetrahydropyridine (NMPTP) was activated.

次に本物質の製剤化について述べる。Next, the formulation of this substance will be described.

本物質は生体内抗酸化機構調節剤として使用する場合、
疾患の種類及び症状に応じて薬効を得るのに都合のよい
形状で使用でき、そして単独または製薬上許容し得る希
釈剤及び他の薬剤との混合物として使用できる。When this substance is used as an in vivo antioxidant mechanism regulator,
It can be used in a form suitable for obtaining a beneficial effect depending on the type and condition of the disease, and can be used alone or as a mixture with a pharmaceutically acceptable diluent and another drug.

本物質は経口的または非経口的に適用される。したがっ
て経口的または非経口的に投与するための形態を任意に
とり得る。This substance is applied orally or parenterally. Therefore, it may be in any form for oral or parenteral administration.

本物質は任意の投薬単位形で提供することができ、本物
質は人間及び動物に経口的または非経口的に投与される
が経口投与が好ましい。The substance may be provided in any dosage unit form, which is administered orally or parenterally to humans and animals, with oral administration being preferred.

本物質の投与量は動物か人間かにより、また年齢、個人
差、病状などに影響されるので場合によっては下記範囲
外量を投与する場合も生じるが、一般に人間を対象とす
る場合、本物質の経口投与量は体重 1kg、 1日当り 0.1
〜1000mg、好ましくは 1〜 500mg、非経口的投与量は同
じく、 0.01〜 300mg、好ましくは 0.1〜 100mgを 1回
〜 4回に分けて投与する。The dose of this substance depends on whether it is an animal or a human, and depending on the age, individual differences, medical conditions, etc., it may occur that a dose outside the following range is administered in some cases. Oral dose is 1 kg body weight, 0.1 per day
~ 1000 mg, preferably 1 to 500 mg, and the parenteral dose is also 0.01 to 300 mg, preferably 0.1 to 100 mg, in 1 to 4 divided doses.

［発明の効果］ 本物質は、老人性痴呆のモデルである老化促進マウス〜
ＳＡＭ−Ｐ／８の脳内抗酸化機構を上昇させると共に、
パーキンソン病モデルであるＮＭＰＴＰ投与アカゲザル
の脳内抗酸化機構を賦活化した。[Effects of the Invention] This substance is a model of senile dementia and is used as an aging-promoting mouse.
While increasing the brain antioxidant mechanism of SAM-P / 8,
The antioxidant mechanism in the brain of rhesus monkeys treated with NMPTP, which is a model of Parkinson's disease, was activated.

又、本物質は、腎臓における抗酸化機構を有意に上昇さ
せた。更に本物質はＬＤＨ−ＮＡＤＨ系（キサンチンオ
キシダーゼあるいは分離マクロフアージ）において産生
される活性酸素を直接抑制する効果がある。In addition, this substance significantly increased the antioxidant mechanism in the kidney. Furthermore, this substance has the effect of directly suppressing the active oxygen produced in the LDH-NADH system (xanthine oxidase or separated macrophages).

実施例−１ ウィスター系雄性ラットに本物質 900mg／kgを１週間強
制経口投与した。対照群は無処置とした（ｎ＝３）、投
与終了後エーテルにて屍殺したのち腎を摘出し、腎皮質
をホモゲナイズした。これを3000 rpm，10 min（４℃）
で遠心し、分離された上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡ
Ｃ35μｌに、測定試料を50μｌ及び5,5−dimethyl−１
−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）（三井東圧社製）
15μｌにxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ，0.272 uni
t／ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液
セル（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加
45秒後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−Ｉ
Ｘ）にてＤＭＰＯ−Ｏ_２ ⁻スピンアダクトを分析した。
検量線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内
部標準物質に酸化マンガンを使用した。Example-1 900 mg / kg of this substance was forcibly orally administered to male Wistar rats for 1 week. The control group was left untreated (n = 3), and after completion of administration, it was necrotized with ether, and then the kidney was extracted and the renal cortex was homogenized. 3000 rpm, 10 min (4 ℃)
Centrifugation was performed and the separated supernatant was used as a sample for SOD measurement. 2 mM hypoxanthine 50 μl, 5.5 mM DETAPA
To 35 μl of C, 50 μl of measurement sample and 5,5-dimethyl-1
-Pyrroline-1-oxide (DMPO) (Mitsui Toatsu Co., Ltd.)
50 μl of xanthine oxidase in 15 μl (XOD, 0.272 uni
(t / ml), and after stirring, transfer the reaction solution to a special flat aqueous solution cell (160 μl capacity, made by JEOL) and add XOD.
After 45 seconds, ESR spectrometer (JES-FE-I
It was analyzed spin adduct ^- _{DMPO-O 2} at X).
A calibration curve was prepared using SOD of 0.8 to 100 unit / ml, and manganese oxide was used as an internal standard substance.

また、測定条件は以下のとおりである。The measurement conditions are as follows.

magnetic field 335 ±5 mT：power 8.0 mW response
0.3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表５に示す如く、本物質投与により腎皮質の
ＳＯＤ活性が上昇していることが判明した。magnetic field 335 ± 5 mT: power 8.0 mW response
0.3s: modulation 0.2 mT temperature room temperature: amplitude 3.2 × 1000: sweep time 2 minutes As a result, as shown in Table 5, it was revealed that the administration of this substance increased the SOD activity in the renal cortex.

実施例−２ 125mMのNa−リン酸buffer（80μＭ ＥＤＴＡ−２Ｎａ
含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／m
l） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように段階希釈した本物質の水溶液 0.2mlを
加えた。なお別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその
最終濃度が４μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶
液を 0.2ml加えた。水 7.7mlを加えた後80μＭのヒポキ
サンチン 0.2ml及び0.05Ｕ／mlのキサンチンオキシダー
ゼ 0.3mlを加え、さらに 0.2 mMのＮＡＤＨ 0.5mlを加
えた後、37℃で反応を開始させた。10分後、340nm の吸
光度を測定することにより、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（キサン
チンオキシダーゼ〜ＸＯＤ）系において発生するＯ_２ ⁻
の本物質による除去作用に関し検討した。 Example-2 125 mM Na-phosphate buffer (80 μM EDTA-2Na
LDH (20 U / m) derived from pig heart in 0.5 ml containing (pH 6.5)
l) After adding 0.6 ml, the final concentration of this substance is 0,30 mg
0.2 ml of an aqueous solution of this substance, which was serially diluted so that the concentration became / ml, was added. Separately, as a positive control, 0.2 ml of an SOD aqueous solution in which the final concentration of SOD was adjusted to 4 μg / ml was added. After adding 7.7 ml of water, 0.2 ml of 80 μM hypoxanthine and 0.3 ml of 0.05 U / ml xanthine oxidase, and 0.5 ml of 0.2 mM NADH were added, and the reaction was started at 37 ° C. After 10 minutes, by measuring the absorbance at 340 nm, O ₂ ⁻ generated in the LDH-NADH (xanthine oxidase to XOD) system was measured.
The removal action of this substance was investigated.

その結果、表６に示すように本物質は、ＬＤＨ−ＮＡＤ
Ｈ（ＸＯＤ）系において発生するＯ_２ ⁻を除去すること
が判明した。As a result, as shown in Table 6, this substance showed that LDH-NAD
It was found to remove O ₂ ⁻ generated in the H (XOD) system.

なお、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（ＸＯＤ）系はＸＯＤによりヒ
ポキサンチンから生じるＯ_２ ⁻によりＮＡＤＨが酸化さ
れてＮＡＤ。となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 n
m）の低下を指標とすることにより、生成されるＯ_２ ⁻
の量を評価することが可能な系である。すなわち、上記
系にＯ_２−消去能を有する本物質を添加した場合、340
nmの吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量
は、本物質のＯ_２ ⁻消去能と正の相関を示す。In the LDH-NADH (XOD) system, NADH is oxidized by O ₂ ⁻ generated from hypoxanthine by XOD. NADH absorbance (λ = 340 n
m 2) is used as an index to generate O ₂ ^−.
It is a system that can evaluate the amount of. That is, when this substance having O ₂ -eliminating ability is added to the above system, 340
residual amount of NADH was obtained by measuring nm absorbance of the substance O ₂ ^- shows a positive correlation with scavenging ability.

実施例−３ 125mM のＮａ−リン酸buffer（80μＭ ＥＤＴＡ−２Ｎ
ａ含、pH 6.5） 0.5ml中にブタ心臓由来ＬＤＨ（20Ｕ／
ml） 0.6mlを加えた後、本物質の最終濃度が０，３０mg
／mlになるように本物質の水溶液 0.2mlを加えた。なお
別に陽性コントロールとしてＳＯＤをその最終濃度が４
μｇ／mlになるように調節したＳＯＤ水溶液を 0.2ml加
えた。水 0.9mlを加えた後、最終細胞濃度が３×１０^６
／mlになるようにマクロファージの懸濁液 0.3mlを加え
た。 Example-3 125 mM Na-phosphate buffer (80 μM EDTA-2N
a), pH 6.5) 0.5 ml of LDH from pig heart (20 U /
After the addition of 0.6 ml, the final concentration of this substance is 0,30 mg
0.2 ml of an aqueous solution of this substance was added so that the concentration became / ml. Separately, SOD was used as a positive control and its final concentration was 4
0.2 ml of an SOD aqueous solution adjusted to have a concentration of μg / ml was added. After adding 0.9 ml of water, the final cell concentration is 3 × 10 ^6.
0.3 ml of a suspension of macrophages was added so that the amount became / ml.

なおマクロファージは、ウィスター系雄性ラット５週令
に 0.5％チオグリコレートを５ml腹腔内に注射してから
４日後に125 mM Ｎａ−リン酸緩衝液（８０μＭ ＥＤ
ＴＡ−２Ｎａ含、pH 6.5）を用いて腹腔内より採取し、
洗浄後３×１０^７／mlに調製したものを用いた。Macrophages were injected into 125-mM Na-phosphate buffer (80 μM ED) 4 days after intraperitoneal injection of 5% 0.5% thioglycolate into 5-week-old Wistar male rats.
It was collected from the abdominal cavity using TA-2Na, pH 6.5),
After washing, the one prepared to 3 × 10 ⁷ / ml was used.

ＮＡＤＨ 0.5mlを加えた後、37℃で反応を開始させた。
10分後340 nmの吸光度を測定することにより、ＮＤＨ−
ＮＡＤＨ（マクロファージ）系において発生するＯ_２ ⁻
の本物質による除去作用に関し検討した。After adding 0.5 ml of NADH, the reaction was started at 37 ° C.
After 10 minutes, by measuring the absorbance at 340 nm, NDH-
O ₂ ⁻ generated in NADH (macrophage) system
The removal action of this substance was investigated.

その結果、表７に示すように本物質は、ＬＤＨ−ＬＡＤ
Ｈ（マクロファージ）系において発生するＯ_２ ⁻を除去
することが判明した。As a result, as shown in Table 7, this substance showed that LDH-LAD
It was found to remove O ₂ ⁻ generated in the H (macrophage) system.

なお、ＬＤＨ−ＮＡＤＨ（マクロファージ）系はマクロ
ファージにより生じるＯ_２ ⁻によりＮＡＤＨが酸化され
てＮＡＤ・となる際のＮＡＤＨの吸光度（λ＝340 nm）
の低下を指標とすることにより、生成されるＯ_２ ⁻の量
を評価することが可能な系である。すなわち、上記系に
Ｏ_２ ⁻消去能を有する本物質を添加した場合、340 nmの
吸光度を測定することにより得た残存ＮＡＤＨ量は、本
物質のＯ_２ ⁻消去能と正の相関を示す。The LDH-NADH (macrophage) system is the absorbance of NADH (λ = 340 nm) when NADH is oxidized by O ₂ ⁻ generated by macrophages to become NAD.
It is a system that can evaluate the amount of O ₂ ⁻ produced by using the decrease in γ as an index. That, O ₂ in the system ^- when adding the substance having a scavenging ability, residual amount of NADH was obtained by measuring the absorbance at 340 nm is of the substances O ₂ ^- shows a positive correlation with scavenging ability.

実施例−４ ３ケ月齢の老化促進モデルマウス（ＳＡＭ−Ｐ／８）に
本物質 500mg／kgを１ケ月間、連日強制経口投与した。
なお対照群は無処置とした。用い動物数は各群ｎ＝５と
した。投与終了後、エーテルにて屍殺し、脳をを摘出
し、細切した後、0.15Ｍ−ＫＣｌ（４℃）中にて洗浄
し、血液を除去した。次に３mlの 0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ
／ 0.135ＭＫＣｌ，pH7.4buffer を加え、Polytron(Bri
nkmann ）で15秒間ホモジネートした（目盛８）。その
後、４℃で10分間750×ｇで遠心分離し、分離された上
澄みをＳＯＤ測定用試料とした。 Example-4 500 mg / kg of this substance was forcibly orally administered every day for 3 months to a model mouse (SAM-P / 8) of 3 months old which promotes aging.
The control group was untreated. The number of animals used was n = 5 in each group. After the administration was completed, the cells were killed with ether, the brain was excised, cut into small pieces, and washed with 0.15 M KCl (4 ° C) to remove blood. Next, add 3 ml of 0.1 M Tris.HCl.
/ Add 0.135M KCl, pH7.4buffer and add Polytron (Bri
nkmann) and homogenized for 15 seconds (graduation 8). Then, it was centrifuged at 750 × g for 10 minutes at 4 ° C., and the separated supernatant was used as a sample for SOD measurement.

なお、ＳＯＤ活性は単位蛋白量当りのユニット数で表示
した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定した。The SOD activity was expressed as the number of units per unit amount of protein. Protein quantification was measured by the Lowry-Folin method.

２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡＣ
35μｌに、測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5.5−d
imethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μ
ｌにxanthine oxidase 50 μｌ（ＸＯＤ，0.272 unit／
ml）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ_２ ⁻スピンアダクト分析した。検量線
はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標準
物質に酸化マンガンを使用した。また、測定条件は以下
のとおりである。2 mM hypoxanthine 50 μl, 5.5 mM DETAPAC
To 35 μl, 50 μl of the measurement sample and 5.5-d manufactured by Mitsui Toatsu Co., Ltd.
imethyl-1-pyrroline-1-oxide (DMPO) 15μ
xanthine oxidase 50 μl (XOD, 0.272 unit /
ml), and after stirring, the reaction solution was transferred to a special flat aqueous solution cell (160 μl capacity, made by JEOL), and 45 seconds after the addition of XOD, ESR spectrometer (JES-FE-IX) was started.
By _{DMPO-O 2} ^- it was spin adduct analysis. A calibration curve was prepared using SOD of 0.8 to 100 unit / ml, and manganese oxide was used as an internal standard substance. The measurement conditions are as follows.

magnetic field 335±5 mT：power 8.0 mW response 0.
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表８に示す如く、本物質投与により、老化促
進モデルマウスＳＡＭ−Ｐ／８の脳内ＳＯＤ活性が上昇
したことが判明した。老化も遅延された。magnetic field 335 ± 5 mT: power 8.0 mW response 0.
3s: modulation 0.2 mT temperature room temperature: amplitude 3.2 × 1000: sweep time 2 minutes As a result, as shown in Table 8, administration of this substance increased the SOD activity in the brain of aging-promoting model mouse SAM-P / 8. found. Aging was also delayed.

実施例−５ 老人性神経障害であるパーキンソン病のモデル動物に本
物質を投与した場合の効果について検討を加えた。 Example-5 The effect of administering this substance to a model animal of Parkinson's disease, which is senile neuropathy, was examined.

体重５kgの雄性アカゲザルにAldrich 社製Ｎ−メチル−
４−フェニル−1,2,3,6-テトラハイドロピリジン（ＮＭ
ＰＴＰ）の水／ＥｔＯＨ溶液（8.7mg／mlになるように
エタノールに溶解後、９倍量の水で希釈したもの）を、
８日間に渡り、連日静注した。投与量は、初回を 0.15
mg／kgとし、８日間で、 9.9mgになるよう連日close-up
した。本物質 500mg／kgをＮＭＰＴＰと同時に８日間に
渡り連日強制経口投与した。なお、対照群にはＮＭＰＴ
Ｐのみ投与した。各群における動物数（ｎ）は５とし
た。投与終了後、ペントバルビタールを静注することに
より屍殺、脳を摘出し細切した後、 0.15Ｍ−ＫＣｌ
（４℃）中にて洗浄し、血液を除去した。次に 150mlの
0.1Ｍ Tris・ＨＣｌ／ 0.135Ｍ ＫＣｌ，pH 7.4 buf
fer を加え、polytron（Brinkmann ）で15秒間ホモジネ
ートした（目盛８）。その後、４℃で10分間 750×ｇで
遠心分離し、分離れた上澄みをＳＯＤ測定用試料とし
た。なお、ＳＯＤ活性は単位蛋白量当りのユニット数で
表示した。蛋白定量はLowry−Folin 法により測定し
た。Male Rhesus monkey weighing 5 kg was made with Aldrich N-methyl-
4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (NM
Water / EtOH solution of PTP) (dissolved in ethanol to 8.7 mg / ml and diluted with 9 times amount of water)
Intravenous injection was given every day for 8 days. The initial dose is 0.15
mg / kg, close-up every day so that it will be 9.9 mg in 8 days
did. This substance (500 mg / kg) was forcibly orally administered daily for 8 days simultaneously with NMPTP. The control group was NMPT
Only P was administered. The number of animals (n) in each group was 5. After the administration, pentobarbital was intravenously injected to kill the corpse. The brain was excised and finely chopped, and then 0.15 M-KCl was added.
The blood was removed by washing in (4 ° C). Then 150 ml
0.1M Tris ・ HCl / 0.135M KCl, pH 7.4 buf
fer was added and homogenized with a polytron (Brinkmann) for 15 seconds (graduation 8). Then, the mixture was centrifuged at 750 xg for 10 minutes at 4 ° C, and the separated supernatant was used as a sample for SOD measurement. The SOD activity was expressed as the number of units per unit amount of protein. Protein quantification was measured by the Lowry-Folin method.

２mM hypoxanthine 50μｌ，5.5 mM ＤＥＴＡＰＡＣ
35μｌに測定試料を50μｌ及び三井東圧社製5,5−dim
ethyl−１−pyrroline−１−oxide（ＤＭＰＯ）15μｌ
にxanthine oxidase 50μｌ（ＸＯＤ， 0.272 unit／m
l）を加え、かくはん後、反応液を特殊偏平水溶液セル
（ 160μｌ容量，ＪＥＯＬ製）に移し、ＸＯＤ添加45秒
後よりＥＳＲ spectrometer （ＪＥＳ−ＦＥ−ＩＸ）
にてＤＭＰＯ−Ｏ_２ ⁻スピンアダクトを分析した。検量
線はＳＯＤを 0.8〜100 unit／ml用いて作成し、内部標
準物質に酸化マンガンを使用した。測定条件は以下のと
おりである。2 mM hypoxanthine 50 μl, 5.5 mM DETAPAC
50 μl of measurement sample in 35 μl and 5,5-dim manufactured by Mitsui Toatsu Co., Ltd.
ethyl-1-pyrroline-1-oxide (DMPO) 15 μl
Xanthine oxidase 50 μl (XOD, 0.272 unit / m
l) was added and after stirring, the reaction solution was transferred to a special flat aqueous solution cell (160 μl capacity, made by JEOL), and 45 seconds after the addition of XOD, ESR spectrometer (JES-FE-IX) was started.
It was analyzed spin adduct ^- _{DMPO-O 2} at. A calibration curve was prepared using SOD of 0.8 to 100 unit / ml, and manganese oxide was used as an internal standard substance. The measurement conditions are as follows.

magnetic field 335±5 mT：power 8.0 mW response 0.
3s ：modulation 0.2 mT 温度 室温：amplitude 3.2×1000：sweep time ２分 その結果、表９に示す如く、本物質の併用投与により、
老人性神経障害であるパーキンソン病のモデル動物にお
けるＮＭＰＴＰによるＳＯＤ活性の低下が抑制された。
パーキンソン病も改善された。magnetic field 335 ± 5 mT: power 8.0 mW response 0.
3s: modulation 0.2 mT temperature room temperature: amplitude 3.2 × 1000: sweep time 2 minutes As a result, as shown in Table 9, by co-administration of this substance,
The decrease in SOD activity by NMPTP was suppressed in a model animal of Parkinson's disease, which is senile neuropathy.
Parkinson's disease also improved.

実施例−６ 製剤化例 本物質（p-アミノ安息香酸ナトリウム−Ｎ−Ｄ−ガラク
トシド） 0.6部 非イオン系界面活性剤 2.4部 生理食塩水 ９７ 部 を加温混合後滅菌して注射剤とする。 Example-6 Formulation example This substance (sodium p-aminobenzoate-N-D-galactoside) 0.6 part Nonionic surfactant 2.4 parts Physiological saline 97 parts After heating and mixing, sterilize to give an injection. .

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 平井 亨 埼玉県川越市霞ヶ関北５―31―１ (72)発明者 藤井 孝美 東京都足立区東和５―11―21 (72)発明者 生沢 正則 東京都立川市若葉町１―25―20 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Toru Hirai 5-31-1 Kasumigaseki, Kawagoe City, Saitama Prefecture (31) (72) Inventor Takami Fujii Towa, Adachi-ku, Tokyo 5-11-21 (72) Inventor Masanori Ikusawa Tokyo 1-25-20 Wakaba-cho, Tachikawa-shi

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】一般式（Ｉ） （式中、Ｒは糖を示す） で示されるアミノ安息香酸誘導体又は該誘導体の医薬上
許容し得る塩の少なくとも１種を有効成分として含有す
る生体内抗酸化機構調節剤。1. A general formula (I) (In the formula, R represents a sugar) An in vivo antioxidant mechanism regulator containing, as an active ingredient, at least one aminobenzoic acid derivative represented by: or a pharmaceutically acceptable salt of the derivative. 【請求項２】Ｒが単糖である特許請求の範囲第１項に記
載の生体内抗酸化機構調節剤。2. The in vivo antioxidant mechanism regulator according to claim 1, wherein R is a monosaccharide. 【請求項３】単糖がアラビノシド，キシロシド，グルコ
シド，ガラクトシド，ラムノシド及びマンノシドよりな
る群から選ばれたものであることを特徴とする特許請求
の範囲第２項に記載の生体内抗酸化機構調節剤。3. The in vivo anti-oxidation mechanism regulation according to claim 2, wherein the monosaccharide is selected from the group consisting of arabinoside, xyloside, glucoside, galactoside, rhamnoside and mannoside. Agent. 【請求項４】医薬上許容し得る塩がナトリウム塩である
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の生体内
抗酸化機構調節剤。4. The in vivo antioxidant mechanism regulator according to claim 1, wherein the pharmaceutically acceptable salt is a sodium salt.