JPH0459714A

JPH0459714A - チロシナーゼ活性阻害剤

Info

Publication number: JPH0459714A
Application number: JP2169637A
Authority: JP
Inventors: Mamoru Tomita; 守冨田; Seiichi Shimamura; 島村　誠一; Hiroshi Miyagawa; 博宮川; Susumu Kobayashi; 進小林
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1990-06-26
Filing date: 1990-06-26
Publication date: 1992-02-26
Anticipated expiration: 2013-01-21
Also published as: JP2702590B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、哺乳類の乳汁から分離したラクトフェリン、
アポラクトフェリン、金属飽和ラクトフェリン、及びこ
れらの任意の混合物からなる群より選択されるラクトフ
ェリンを有効成分として含有することを特徴とするチロ
シナーゼ活性阻害剤に関する。

［技術の背景及び従来技術の説明１ラクトフエリンは、涙、唾液、抹消面、乳汁等に含まれ
ている天然の鉄結合性蛋白質であり、大腸菌、カンジダ
菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作
用を示すことか知られているか［ジャーナル・オブ・ペ
ディアトリクス（Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｐｅｄｉａｔ
ｒｉｃｓ）、第９４巻、第１ページ、１９７９年］、ラ
クトフェリンかチロシナーゼ活性阻害剤果を有すること
は従来知られていない。

チロシナーゼは、チロシン、その他の１価フェノール類
及び相当するオルソ−２価フェノール類の分子状酸素に
よる酸化を触媒する酵素であり、キノコ、ジャガイモ、
リンゴ等多くの植物及び動物組織に広く存在し、植物に
おいては切傷部分の黒変現象に関与し、動物においては
組織、特に皮膚表皮細胞のメラニン色素の形成に関与し
ていることが知られている（化学大辞典編集委員会編、
化学大辞典、第５巻、第９７６ページ、共立出版、昭和
３５年）。アジラン病において皮膚粘膜に黒褐色のメラ
ニン色素沈着を生するのは、チロシナーゼ活性を促進す
るメラノトロピンと拮抗する副腎皮質ホルモンの分泌減
少に起因することも知られている（化学大辞典編集委員
全編、化学大辞典、第１巻、第６５ページ、共立出版、
昭和３５年）。

更にチロシナーゼは、食品の鮮度低下にも関与している
ともいわれている。

上述のようＩコ従来知られている食品、化粧品又は医薬
品分野において、チロシナーゼによる望ましくない作用
を防止し、予防し又は治療するためのチロシナーゼ活性
阻害剤の開発か強く望まれていた。特に化粧品業界では
、メラニン色素の生成を有効に抑制し、美白効果を付与
した化粧品又は皮膚外用剤の研究か活発であり、チロシ
ナーゼ活性阻害剤を配合した製品が次々と開発されてい
る。

チロシナーゼ活性阻害剤としては、システィン、ヒタミ
ンＣ（三島豊等、基礎皮膚科学、第２５８ページ、朝食
書店、昭和４８年）、コウジ酸（日経産業新聞、昭和６
３年５月２４日）、アルブチン（富田健〜、第２０回Ｆ
Ｊセミナー予稿集、第２１ペーソ、フレグランスンヤー
ナル社、平成２年３月１４日）、トリコデルマ属に属す
る微生物の産生物（特開平２−１４５１８９号公報）等
が知られている。

しかしなから、従来のチロシナーゼ活性阻害剤よ、製品
中で不安定であったり、メラニン色素を合成するメラノ
サイト細胞への作用か強すぎたり、原料の入手か困難で
あるため極めて高価であったり、いずれも欠点かあり、
安全で美白効果にすくれた化粧品又は皮膚外用剤として
満足できるものではなかった。

［発明か解決しようとする課題］本発明者等は、従来の化粧品等に認められた前記の欠点
を克服するのみならず、食品及び医薬品にも使用か可能
な安全、かつ安定なチロシナーゼ活性阻害剤について鋭
意研究した結果、哺乳類の乳汁中に存在するラクトフェ
リン、該ラクトフェリンに化学的処理を施したアポラク
トフェリン、金属飽和ラクトフェリン、又はこれらの任
意の混合物に、顕著なチロシナーゼ活性阻害剤作用のあ
ることを見出たし、本発明を完成した。

［課題を解決するための手段］本発明において使用するラクトフェリンは、市販品、哺
乳類（例えは、人、牛、羊、山羊、馬等）の初乳、移行
乳、窩孔、末期孔等又はこれらの処理物である脱脂乳、
ホユー等（以下これらをまとめて乳等と記載する）から
常法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）により
分離したラクトフェリン、それらから常法により鉄を除
去したアポラクトフェリン、それらを常法により鉄、銅
、亜鉛、マンガン等の金属をキレートさせた金属飽和ラ
クトフェリン（以下これらをまとめてＬＦと記載する）
である。

本発明のチロシナーゼ活性阻害剤は、ＬＦそのものであ
っても良いが、ＬＦの有効量を成分として含有している
ＬＦ配配合老若くは組成物であっても良い。例えば精製
水にＬＦを溶解し、必要に応じ適宜乳化剤、賦形剤、香
料などの食品、化粧品、医薬部外品又は医薬品またはそ
れらの成分として許容されている各種成分のひとつ以上
と混合いて乳化あるいは分散することかできる。ＬＦの
荷効量は、少なくとも０５％、望ましくはチロシナーゼ
活性阻害剤果か５０％以上を示す１．０％〜２．０％、
である。

次に試験例を示して本発明を詳述する。

（試験例）この試験は、各種ＬＦのチロシナーゼ活性阻害効果を調
へるために行われた。

（１）試料の調整１）アポラクトフェリン乳等から分離したままの市販のＬＦ（ベルギのオレオフ
ィナ社製。以下間し）［以下の記載において１乳等から
分離したままの」なる文言は、ラクトフェリンを乳等か
ら分離したのみであって、脱鉄、金属飽和等の化学的処
理を行っていないこと（即ちアポラクトフェリン、金属
飽和ラクトフェリンでないことを意味する１　９０ｇを
精製水２１００ｍ＋２に溶解し、１０％クエン酸水溶液
を添加してｐ）（を２．５に調整し、室温で１時間反応
させた。

この反応生成物を限外濾過し、そのケーキを凍結乾燥し
てアポラクトフェリン約８７ｇを調製した。

２）ラクトフェリン亜鉛前記ｌ）のアポラクトフェリン３０ｇを０．０５Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７−６）７００ｍＱに溶解し、これを２
．６ｍＭクエン酸含有２゜６ｍＭ硫酸亜鉛水酸液２８５
ｍ＋２と、室温において１５分間反応させた。

この反応生成物を限界濾過し、そのケーキを凍結乾燥し
てラクトフェリン亜鉛約２５ｇを調製した。

３）ラクトフェリン銅前記２）において、２．５ｍＭクエン酸含有２．６ｍＭ
硫酸亜鉛水溶液の代わりに、２゜６ｍＭクエン酸含有２
．６ｍＭ硫酸銅水溶液を使用したこと以外は２）と同様
にしてラクトフェリン銅約２４ｇを調製した。

４）ラクトフェリン鉄市販のＬＰ（オレオフィナ社製）３０ｇを精製水７００
ｍ１２に溶解し、これを２．６’ｍＭ硫酸鉄水溶液２８
５ｍ＋２と室温において２４時間反応させた。この反応
生成物を限外濾過し、そのケーキを凍結乾燥してラクト
フェリン鉄約２６ｇを調製した。

（３）試験方法 ■）チロシナーゼ活性阻害効果の測定ａ）各種溶液の調製 ■基質溶液の調製試薬特級のし一チロシン（和光紬薬工業社製）を０．１
Ｍリン酸緩衝液に０．０４５％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解
した。

■酵素溶液の調製マツシュルーム由来のチロシナーゼ（シグマ社製。３．
０００単位／　ｍ　ｇ　）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）にＯ，１％（Ｗ；／　Ｖ　）の濃度で溶解し
た。

■銅イオン溶液の調製試薬特級の硫酸銅（和光紬薬工業社製）を精製水に１％
（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解した。

■試料溶液の調製前期（１）において調製した各試料を表１に示した各濃
度でＯ，１ＭＩＪン酸暖衝液（ｐＨ７゜０）に溶解した
。

ｂ）酸素反応予め３７°Ｃに加温した基質溶液０．９ｍＱ、試料溶液
１．０ｍρ、銅イオン溶液０．０２ｍρを試験管に採取
し、同温度に加温した酵素溶液０゜０８ｍ４を添加し、
（全量２．０ｒｒｌ）　、３７°Ｃで３分間反応させた
。次いで３０％酢酸溶液２ｍＱを添加して反応を停止き
せ、分光光度計で波長６４０ｎｍでの吸殉度を測定した
。（この吸光値をＢとする）。対照として試料溶液の代
わりにＯ，１Ｍリン酸緩衝液１．０ｍｆｆを添加して同
様に吸光度を測定した（この吸光値をＡとする）。尚、
試験溶液が白濁している場合は、酵素溶液の代わりに０
．１Ｍリン酸緩衝液０゜０８ｍＱを添加して同様に吸光
度を測定しくこの吸光値をＣとする）、反応液の濁り部
分に由来する吸光度を除去した。測定された各吸光値か
らチロシナーゼ活性阻害率（％）を次式により算出した
。

阻害率（％）＝ｌＯＯ［１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ］（３）試
験結果この試験の結果は表１に示すとおりであった。

（注）チロシナーゼ活性阻害率（％）表１から明らかなようにラクトフェリン、ラクトフェリ
ンに結合している鉄を除去したアポラクトフェリン、ア
ポラクトフェリンに亜鉛、□銅、鉄をそれぞれ結合させ
たラクトフェリン亜鉛、ラクトフェリン銅、ラクトフェ
リン鉄は、いずれも０１１％の添加で約ｌＯ％のチロシ
ナーゼ活性阻害効果を示した。阻害効果は添加量が増大
するにつれて向上し、１％の添加で約５０％、２％の添
加で約８０％の阻害率を示した。なお、これらのラクト
フェリン類の間には阻害率に有意な差は認められなかっ
た。

次に実施例を示して本発明を更に詳述する。

実施例Ｉ市販のＬＦ（オレオフィナ社製）２７０ｇを精製水６３
００ｍｆｆに溶解した後、１０％クエン酸水溶液を添加
してそのｐＨを２．５に調整し、室温において１時間反
応させた。この反応生成物を限外濾過し、そのケーキを
凍結乾燥してアポラクトフェリン約２６０ｇを得た。こ
のアポラクトフェリン２００　ｇ、グリシン（和光紬薬
工業社製）７００ｇ及びリゾチーム（和光紬薬工業）１
００ｇを均一に混合し、食品の鮮度保持用のチロシナー
活性阻害剤約１０００ｇを得た。

得られた食品の鮮度保持用のチロシナーゼ活性阻害剤を
１０％の濃度で水に溶解し、チロ／ナゼ活性阻害率を試
験例と同一の方法で測定した結果、８２％であった。

実施例２実施例１で得たアポラクトフェリン６０ｇを０゜０５Ｍ
リン酸暖衝液（ｐＨ７，６）１４００ｍｃに溶解し、こ
れを２．６ｍＭクエン酸含有２．６ｍＭ硫酸銅水溶液５
７０ｍ（ｌと、室温において１５分間反応させた。この
反応生成物を限外濾過し、そのケーキを凍結乾燥してラ
クトフェリン銅約５０ｇを調製した。

このラクトフェリン銅４０ｇ、　プロピレングリコール
（和光紬薬工業社製）２００ｇ、オレイルアルコール（
和光紬薬工業社製）２ｇ、エタノール（和光紬薬工業社
製）１００ｇ及び精製水１６５８ｇを均一に混合し、化
粧品用チロシナーゼ活性阻害剤約２０００ｇを得た。

得られた化粧品用チロシナーゼ活性阻害剤のチロシナー
ゼ活性阻害率を試験例と同一の方法で測定した結果、見
掛けの阻害率は５１％であったが、濃度換算を行った実
際の阻害率は８１％であった。

実施例３市販のＬＦ（オレオフィナ社製）９０ｇを精製水２１０
０ｍＱに溶解し、これを２．６ｍ（２硫酸鉄水溶液７５
５ｍＱと室温において２４時間反応させた。この反応生
成物を限外濾過し、そのケーキを凍結乾燥してラクトフ
ェリン鉄約７８ｇを調製しｌ二。このラクトフェリン鉄
６０ｇ１　ヒアルロン酸ナトリウム（和光紬薬工業社製
）２ｇ、グリセリン（和光紬薬工業社製）２０ｇ及び精
製水１９１８ｇを均一に混合し、化粧品用チロシナーゼ
活性阻害剤約２０００ｇを得た。

得られた化粧品用チロシナーゼ活性阻害剤のチロシナー
ゼ活性阻害率を試験例と同一の方法で測定した結果、見
掛けの阻害率は７５％であったが、濃度換算を行った実
際の阻害率は９０％であった。

［発明の効果］本発明によって奏せられる効果は次のとおりである。

（１）本発明のチロシナーゼ活性阻害剤は各種製品に添
加しても安定であり、すぐれた作用か得られる。

（２）本発明のチロ／カーゼ活性阻害剤は液状又は粉末
状のいずれの状態も使用できるので、用途か広範である
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）噛乳類の乳汁から分離したラクトフェリン、アポ
ラクトフェリン、金属飽和ラクトフェリン、及びこれら
の任意の混合物からなる群より選択されるラクトフェリ
ンを有効成分として含有することを特徴とするチロシナ
ーゼ活性阻害剤。
（２）有効成分が少なくとも０．５％（重量）の濃度で
含有されている請求項（１）記載のチロシナーゼ活性阻
害剤。