JPH04248465A - 結合可能なアナライトを測定するための免疫沈降法、およびこの方法を実施するための試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アナライトを含む試料
溶液を、そのアナライトに結合可能な特異的レセプター
、及びこれらに適合した試薬とインキュベートすること
によって、結合可能なアナライトを定量するための免疫
沈降法に関する。

【０００２】

【従来の技術】免疫沈降法は、結合可能なアナライトの
定量のために長い間利用されてきた。これについては、
多くの免疫反応によって、分子集合体が生じ、あるいは
凝集反応の場合には粒子凝集体が生じることが利用され
ている。これらの集合体または凝集体の散乱光の挙動は
出発物質とはかなり異なり、この性質によってそれらの
濃度を測定することができる。散乱光の光度測定　（比
濁分析）　のみならず媒質を透過する光線の光度低下の
測定　（濁り分析）　を通じて、均質な媒質中に存在す
る粒子による光散乱がアナライトの定量のために利用さ
れる。

【０００３】あらゆる定量的免疫沈降法の根本的な問題
点は、反応曲線の形に起因する。抗体濃度が一定で、抗
原添加量を徐々に増加させる場合には、典型的な沈降曲
線　（ハイデルベルガー曲線）　が与えられる　（図１
参照）　。抗体過剰の領域では、沈降物の濃度は増大し
、したがって測定シグナルは増加する。さらに抗原を添
加すると曲線は最大値をすぎて、抗原過剰領域では再び
減少する。この結果に基づいて、測定シグナルを二つの
抗原濃度に帰結させることができる。抗原過剰　（Ｃ２
　）　で、測定シグナルがハイデルベルガー曲線の上昇
部分に適合する　（ＣＯ　−ＣＭ　）　測定範囲にある
ならば、間違った抗原濃度Ｃ１　を読みとってしまう。 免疫測定法の場合には、この作用は「高用量フック作用
　（ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｈｏｏｋ　ｅｆｆｅｃｔ）」
とも称されるが、以下簡単に「フック作用」と呼ぶこと
にする。多くのアナライトの場合、また特にタンパク質
の場合には、生理的に存在し得る最も高い濃度はハイデ
ルベルガー曲線の最大値をはるかに越えており、このよ
うなエラーの起こる可能性はきわめて高い。このような
エラーを避けるために、測定時には測定シグナルがハイ
デルベルガー曲線の上昇部分にあるのか、下降部分にあ
るのかを確認すべきである。

【０００４】最も古くそして最も確実な方法は、Ｈ．　
Ｅ．　Ｓｃｈｕｌｚｅ　および　Ｇ．　Ｓｃｈｗｉｃｋ
　によりＰｒｏｔ．　Ｂｉｏｌ．　Ｆｌｕｉｄｓ，　５
，　１５−２５／１９５８　に記載され、これは試料を
二つの異なる希釈度に希釈する二重検定法を与える。抗
原過剰の場合には、希釈度の高い試料について、これよ
り高濃度の試料よりも高い測定シグナルが測定される。 この方法の改良態様は、抗体を更に添加することに関す
る。抗原が過剰に存在する場合には、シグナル増加が起
こる　（Ｔ．　Ｏ．　Ｔｉｆｆａｎｙ　ら、Ｃｌｉｎ．
　Ｃｈｅｍ．，　２０，　　１００５−１０６１／１９
７４）　。一定濃度の抗原物質をさらにピペッティング
することによって、抗原過剰を認識することもできる　
（Ｊ．　Ｃ．　Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ，　Ｃｌｉｎ．　Ｃ
ｈｅｍ．，　２３，　１４５６−１４６４／１９７７）
　。

【０００５】さらに、手数のかかるコンピューター制御
された数値表現によりフック作用を認識することを目指
すいくつかの方法が記述されている。比濁測定に於て最
大反応速度が出現するまでの反応時間を測定することに
よって、抗原過剰および抗体過剰を区別することが可能
である　（ＤＥ−Ａ−２７　２４　７２２；　ＥＰ−Ｂ
−Ｏ，　１４８，　４６３）　。これらの方法はすべて
、追加のピペッティングステップやコンピューター制御
の数値表現のいずれかが必要であり、さらにこのことは
自動操作の場合には必然的に装置のコスト増に繋がると
いう難点に悩まされる。免疫沈降法に於て誤った判断を
避けるために可能なよりよい方法は、ハイデルベルガー
曲線の形を変えることであり、すなわち最大となった後
プラトーに達してフック作用がまったく出現しない、ま
たはフック作用の現われる領域が生理的にあり得ない抗
原濃度領域に移動することである。

【０００６】米国特許明細書第４，５９５，６６１号に
はサンドイッチ法および比濁測定イムノアッセイが記載
されているが、これはフック作用を除くために、通常イ
ムノアッセイ系に存在する高度に特異的な抗体および試
薬の他に、アナライトに対する低親和性抗体をさらに少
なくとも一つ含有する。この方法の欠点は、検出したい
アナライトの各々についてそのアナライトに対する親和
性の異なる二つの特異抗体を調製しなければならいない
ことから、明白である。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、フック作用の妨害を受けない結合可能なアナラ
イト定量のための簡略な免疫沈降法を提供することであ
る。

【０００８】

【課題を解決するための手段】このように、本発明によ
れば、アナライトを含む試料溶液をアナライトと特異的
に結合し得るレセプターとインキュベートすることによ
って、結合可能なアナライトを定量するための免疫沈降
法が提供される。その場合、このテスト溶液には、分子
量５００，０００以上のデキストラン、分子量１００，
０００以上のポリビニルピロリドン、および分子量１０
，０００以上のポリエチレングリコールより成る群から
選択された非イオン系ポリマーが添加される。

【０００９】また、本発明は試料溶液中の結合可能なア
ナライトを定量する免疫沈降法を実施するための試薬を
提供するが、ここにおいて、試料溶液は免疫沈降法に必
要な物質の他に、分子量５００，０００以上のデキスト
ラン、分子量１００，０００以上のポリビニルピロリド
ン、および分子量１０，０００以上のポリエチレングリ
コールより成る群から選択された非イオン系ポリマーを
含有する。

【００１０】テストバッチに於ける非イオン系ポリマー
濃度は最低１重量％である。この濃度以下では、本発明
に記載の作用はもはや達成されない。高濃度では、ポリ
マー濃度が高い場合に起こる非特異的な濁りを生ずる。 テストバッチでは、非イオン系ポリマー濃度２−６重量
％が有利であり、特に３−４重量％が好適であることが
証明された。本発明にしたがった試薬は粉末、凍結乾燥
粉末、または溶液として存在し得る。

【００１１】使用可能な非イオン系ポリマーとしては、
例えばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン
、またはデキストランがある。非イオン系ポリマーは、
様々な重合度のもの、すなわち様々な分子量のものを入
手することが可能である。本発明には高分子量の非イオ
ン系ポリマーが適しており、その分子量の上限は、その
ポリマーが本発明にしたがって有効に機能するに足る溶
解性をテストバッチ中で示さなくなる分子量によってき
まる。本発明方法に利用するためには、ポリエチレング
リコールの分子量は１０，０００以上であり、１０，０
００から３００，０００までが望ましく、特に分子量４
０，０００がきわめて望ましい。ポリビニルピロリドン
の分子量は１００，０００以上で、３６０，０００から
７５０，０００が望ましい。分子量２００，０００以上
のデキストランの使用が望ましく、特に５００，０００
から１，０００，０００の分子量が望ましい。

【００１２】ポリエチレングリコール、デキストラン、
またはヒアルロン酸といったポリマーの添加によって、
免疫沈降法に於いては感度が上がり、反応促進剤として
これらを添加することは公知であった。分子量約６００
０のポリエチレングリコールは、免疫沈降反応の比濁測
定または濁り測定に於いては通常約４重量％の濃度で用
いられる　（ＥＰ−Ｂ−０，１４８，４６３）　。

【００１３】驚くべきことには、本発明に記載の上記分
子量及び濃度の非イオン系ポリマーを添加することによ
って、免疫沈降法に於いて、抗原濃度の高い場合に起こ
る妨害作用のフック作用が避けられた。言い換えると、
フック作用は避けられ、または生理的条件下では起こり
得ない抗原濃度範囲へ移動することができる。同時に、
この添加によって、免疫沈降反応の感度及び速度が増加
し、他に通常行われるポリエチレングリコール６０００
の添加によって達成される値よりも高くなることもしば
しばである。したがって、本発明の方法に於いてはポリ
エチレングリコール６０００の添加はもはや不要である
。本発明の方法に於いて、抗原濃度が増加する場合に、
沈降曲線の最大値を過ぎた後測定シグナルがはっきりと
減少することはなく、非生理的な高濃度抗原の場合にの
み減少して再び測定範囲にはいるようになるので、誤っ
た抗原濃度が測定されることはもはやありえない。先行
技術の方法に於いてかつて必要であった追加のピペッテ
ィングステップやコンピューター制御の数値表現による
ハイデルベルガー曲線の上昇及び下降部分の区別は、し
たがって不要である。これまでの通常の方法と比べてコ
ストの上昇無しに、本発明の方法を行うことができる。 これは本発明にしたがって非イオン系ポリマーを使用す
ることで、これまで通常添加されていたポリエチレング
リコール６０００に置き換えることができるからである
。さらに、自動操作利用の場合には、追加のピペッティ
ッグステップやめんどうな数値化を省くことができるの
で装置費用を減少させることができる。

【００１４】本発明の趣意における免疫沈降法とは、ア
ナライト−レセプター複合体の形成の結果としてテスト
溶液の濁りを生じるような、免疫学的レセプターとアナ
ライトのあらゆる反応であると解釈すべきである。これ
に関して、その濁りを、免疫反応の一方の構成成分、す
なわちレセプターまたはアナライトまたはアナライト類
縁体、が結合した、あるいは結合可能な、光散乱粒子に
よって強めることができる。この場合は凝集テストであ
る。免疫沈降法に於いて濁りがアナライトレセプター複
合体によってのみ引き起こされ、しかもその方法が光散
乱粒子を含有しないような免疫沈降法に於いては、本発
明にしたがって非イオン系ポリマーを使用することが、
特に望ましい。さらに、免疫沈降法とは、免疫拡散法、
とりわけ放射免疫拡散であるとも考えられる。

【００１５】本発明の範囲に於いて、アナライト及びレ
セプターは相互に結合可能なあらゆる物質の組合せが可
能である。この定義に於いて、免疫学的に結合可能な物
質の組合せの他に、類似の挙動をとる物質対も本発明の
範囲内に含まれる。本発明の趣意に於いて、分析すべき
アナライトの結合成分を、結合可能な特異的レセプター
として考えることができる。レセプターとしては抗体ま
たは抗体フラグメントの使用が望ましい。抗体または抗
体フラグメントの場合、これらはポリクローナル抗体、
モノクローナル抗体のいずれであってもよい。

【００１６】アナライトとは、エピトープ、すなわち特
異的レセプターに対する結合部位、を少なくとも二つ有
する物質であると考えられる。本発明にしたがった方法
はアナライトがタンパク質である場合に特に優れている
。アナライトは体液中、例えば、血漿、血清、尿、唾液
など、または適当なバッファー溶液中に存在することが
できる。本発明に記載の方法は例えば尿中のアルブミン
定量、血清または血漿中のアポリポタンパク質ＡＩおよ
びＢの定量、および免疫グロブリン、フェリチン、Ｌｐ
（ａ）　及びα−１−ミクログロブリンの定量に特に適
している。アナライトそれ自体が抗体である場合には、
特異的レセプターとして、この抗体と反応する抗原また
はこの抗体に対する抗−抗体を使用することができる。

【００１７】本発明の免疫沈降法に於ける濁度の測定は
、適当な装置を用いて比濁測定、濁りの測定のいずれの
方法によっても行うことができる。試料中のアナライト
濃度の決定は、既知アナライト濃度標準との比較によっ
て行う。試料溶液中の結合可能なアナライトを定量する
免疫沈降法を実施するための試薬とは、免疫沈降法に必
要な物質、例えばアジュバント、バッファーまたは凝集
テストの場合には結合成分でコートされた粒子、特にラ
テックス粒子、のほかに、本発明にしたがって有効に作
用する非イオン系ポリマーを含有する組成物であると考
えられる。試薬中の上記非イオン系ポリマーの濃度は、
テストバッチに於いて、すなわち試薬に試料を添加後、
ポリマーの最終濃度が最低１重量％となり、望ましくは
２〜６重量％となるように選択されるべきである。

【００１８】

【実施例】以下の実施例は本発明を説明する目的で提示
される： 実施例１．　 尿中のヒトアルブミンの定量 尿による診断に際して、アルブミンの定量は腎臓のダメ
ージを評価する重要な基準である。尿中のアルブミンの
正常値は、１０〜２０ｍｇ／ｌ　であるが、生理的濃度
は２０，０００ｍｇ／ｌ　まで可能である。誤った判断
を避けるために、アルブミン定量に於いてはフック作用
を完全に除くべきであり、あるいは２０，０００ｍｇ／
ｌ　以上の濃度範囲に移動させて除外すべきである。一
般に、濁り測定による定量の場合には、標準的な測定範
囲は、アルブミン濃度３００ｍｇ／ｌ　までにすぎない
。

【００１９】実験の実施、並びに用いた試薬は、妨害と
してのフック作用を避けるために非イオン系ポリマーを
添加する以外は下記実施例と同様である：溶液１　（反
応バッハァー）　： ５０ｍｍｏｌ／ｌ　トリス，　ｐＨ８．０　１重量％非
イオン系界面活性剤 ０．１重量％アジ化ナトリウム 溶液１に非イオン系ポリマー、または先行技術の方法と
の比較のためＰＥＧ６０００　をテストバッチ中で所定
の最終濃度となるように添加した。 溶液２　（抗血清）　： １００ｍｍｏｌ／ｌ　トリス，　ｐＨ７．２　１００ｍ
ｍｏｌ／ｌ　塩化ナトリウム ０．１重量％アジ化ナトリウム １５ｍｇ／ｍｌポリクローナル抗−ヒト血清アルブミン
ヒツジ抗体　（ＰＡＢ＜ＨＳＡ＞Ｓ−ＩｇＧ）溶液３　
（測定標準）　： ５０ｍｍｏｌ／ｌ　リン酸バッファー，　ｐＨ８．０　
１００ｍｍｏｌ／ｌ　塩化ナトリウム ０．１重量％アジ化ナトリウム ０−２０，０００ｍｇ／ｌ　ヒトアルブミン　（ＨＳＡ
）測定は３７℃で　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈ
ｅｉｍ　ＧｍｂＨ　、ドイツ、の　Ｈｉｔａｃｈｉ７０
４　を用いて、波長　３４０ｎｍ　（補正波長７００ｎ
ｍ）で二色的に　（ｂｉｃｈｒｏｍａｔｉｃａｌｌｙ）
行った。２０μｌ　の溶液３を　３５０μｌ　の溶液１
と混合し、５分間インキュベートした。その後、最初の
吸光測定を行った　（Ｅ１）　。これに７０μｌ　の溶
液２をピペットで加え、テストバッチをさらに５分間イ
ンキュベートした。その後、もう一度吸光測定　（Ｅ２
）　を行った。結果を数値処理するために、吸光の差Δ
Ｅ＝Ｅ２−Ｅ１をアルブミン濃度に対してプロットした
。 １．１．　ポリエチレングリコール添加によるフック作
用の除去 １．１．１．　先行技術の方法　（ＰＥＧ６０００添加
）　と本発明の方法　（ＰＥＧ４０，０００）　との比
較溶液１にＰＥＧ６０００またはＰＥＧ４０，０００を
、各場合についてテストバッチ中の最終濃度が４重量％
となるような濃度に添加した。１以下に記載のようにテ
ストを行った。

【００２０】先行技術の方法、すなわちＰＥＧ６０００
添加の場合には、約４００ｍｇ／ｌ　ＨＳＡまでの測定
範囲以上のアルブミン濃度ではフック作用が起きた。測
定範囲以上のＨＳＡ濃度について、本発明にしたがって
ＰＥＧ４０，０００を添加した場合には、吸光の有意な
減少は起こらなかった。生理的条件下で起こり得るＨＳ
Ａ濃度約２０，０００ｍｇ／ｌ　までは、妨害としての
フック作用は避けられる　（添付図面の図２参照）　。 さらに、本発明の方法は、免疫沈降法の反応を促進し、
その感度を増加させ、それは先行技術の方法によって行
われる測定をはるかに越えていることが見だされた。 １．１．２．　ＰＥＧ４０，０００の濃度の影響ＰＥＧ
４０，０００を様々な濃度で溶液１に添加した。テスト
バッチ中の最終濃度は０〜６重量％とした。６重量％以
上のＰＥＧ４０，０００では非特異的な濁りが生じ正確
な測定を妨げるため、これ以上の濃度を用いることは無
意味である。

【００２１】ＰＥＧ４０，０００濃度が１重量％までの
時は、ＨＳＡ濃度４００ｍｇ／ｌ　以上でフック作用が
生じた　（添付図３参照）　。ＰＥＧ４０，０００が１
重量％以上では、先行技術の方法　（４重量％ＰＥＧ６
０００、その値は図３には図示しない）　と比較して、
フック作用の明らかな減少が見られた。以上の結果より
、非イオン系ポリマーを本発明にしたがって最低１重量
％、望ましくは２〜６重量％、そして特に３〜４重量％
の濃度で使用することができると考えられる。 １．１．３．　ポリエチレングリコールの分子量の影響
免疫沈降法に関するＰＥＧ分子量の影響を判定するため
に、様々な重合度のポリマーを使用した。分子量２００
０、６０００、１０，０００、４０，０００および３０
０，０００のＰＥＧをテストした。テストバッチ中の個
々の濃度は、一様に４重量％とした。

【００２２】分子量１０，０００以上では、妨害として
のフック作用は避けられた。分子量４０，０００のＰＥ
Ｇの使用が特に望ましい　（添付図面の図４参照）　。 １．２．　デキストラン添加による尿中のアルブミン定
量実施例１．１．３．の様に、本発明に於けるもう一つ
の非イオン系ポリマー、ここではデキストラン、の分子
量の影響を、尿中のアルブミン定量の実施例を用いて判
定する。 各々の場合に於いて、テストバッチのデキストラン濃度
は４重量％とした。

【００２３】分子量５００，０００以上では、デキスト
ランを免疫沈降法に於ける妨害としてフック作用を避け
るための添加物として使用することができる。これより
低い分子量のデキストランは、本発明に記載の作用を達
成しない　（添付図面の図５参照）　。１．３．　ＰＶ
Ｐ添加による尿中のアルブミン定量アルブミン定量の実
施例を用いて、本発明の方法に関するポリビニルピロリ
ドン　（ＰＶＰ）　の分子量の影響を判定する。いずれ
の場合も、テストバッチに関しては最終濃度４重量％の
ＰＶＰを使用した。

【００２４】１００，０００以上の分子量では、妨害と
してのフック作用を避けるためにＰＶＰを用いることが
できる。添付図面の図６からわかるように、分子量３６
０，０００および７５０，０００のＰＶＰでは、測定範
囲以上で吸光の有意な低下は起こらなかったが、分子量
１０，０００のＰＶＰではこのような作用は達成されな
かった。 実施例２ アポリポタンパク質Ａ−Ｉ　（アポＡ−Ｉ）　の定量ア
ポリポタンパク質Ａ−Ｉ濃度の定量の場合には、実施例
１に記載のように実験を行った。３０℃で　Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ　、ドイツ、
の　Ｈｉｔａｃｈｉ７０４　を用いて、波長　３７６ｎ
ｍ　（補正波長　７００ｎｍ）　で二色的に測定を行っ
た。

【００２５】以下の試薬溶液を使用した：溶液１　（反
応バッファー）　： ５０ｍｍｏｌ／ｌ　トリス，　ｐＨ８．０　１重量％非
イオン系界面活性剤 溶液にＰＥＧ４０，０００、または先行技術の方法との
比較のためＰＥＧ６０００を、テストバッチ中で最終濃
度４重量％となるような濃度で添加した。 溶液２　（抗血清）　： 個別製品番号１３８１１３０　として　Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ　から入手可能な
、ポリクローナル抗−アポリポタンパク質ＡＩヒツジ抗
体　（ＰＡＢ＜Ａｐｏ　Ａｌ＞Ｓ−ＩｇＧ）　を　　１
００ｍｍｏｌ　トリス、ｐＨ７．２に含有する抗血清を
、使用した。 溶液３　（測定標準）　： 測定標準としては、個別製品番号１３８１１５６　とし
て　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　Ｇｍｂ
Ｈ　から入手可能な凍結乾燥ヒト血清を用いた。

【００２６】２μｌ　の溶液３を　３５０μｌ　の溶液
１と混合し、５分間インキュベートした。その後、第１
回目の吸光測定を行った　（Ｅ１）　。それに　１４０
μｌ　の溶液２をピペットで加え、そのテストバッチを
更に５分間インキュベートし、第２回目の吸光測定を行
った。数値処理するために、吸光の差ΔＥ＝Ｅ２−Ｅ１
をアポリポタンパク質Ａ−Ｉ濃度に対してプロットした
。

【００２７】標準曲線は、　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ　の　Ｔｉｎａ−ｑｕａｎｔ
（登録商標）　アポリポタンパク質Ａ−１テストキット
　（個別製品番号１３７８６８６）の添付説明書と同様
に測定された。　２１１ｍｇ／ｄｌのアポリポタンパク
質Ａ−Ｉを含有する標準物質を様々な希釈段階で０．９
重量％塩化ナトリウム溶液を用いて希釈した。高濃度の
アポリポタンパク質Ａ−Ｉは、無希釈の標準物質を比較
的高容量で　（２μｌ　、４μｌ　など）　ピペッティ
ングすることによって達成された。

【００２８】添付図面の図７から、先行技術の方法の場
合には、すなわちＰＥＧ６０００使用の場合には、アポ
Ａ−Ｉ濃度約　２１０ｍｇ以上でフック作用が生じると
考えられる。本発明にしたがってＰＥＧ４０，０００を
用いることによって、フック作用は高濃度域に移動して
除外された。 実施例３ α−１−ミクログロブリン　（α−１−Ｍ）　の定量Ｈ
ｉｔａｃｈｉ７０４を用いて前記実施例のように測定を
行った。 測定温度は３７℃とした。補正波長７００ｎｍとし波長
３４０ｎｍで測定を行った。

【００２９】以下の試薬溶液を使用した：溶液１　（反
応バッファー）　： ５０ｍｍｏｌ／ｌ　トリス，　ｐＨ８．０　１５０ｍｍ
ｏｌ／ｌ　塩化ナトリウム １重量％非イオン系界面活性剤、すなわちＰＥＧ６００
０及びＰＥＧ４０，０００、テストバッチ中で最終濃度
４重量％を達成する濃度とする。 溶液２　（抗血清）　： ２００ｍｇ／ｌ　ポリクローナル抗−α−１−ミクログ
ロブリンヒツジＩｇＧ抗体　（ＰＡＢ＜α−１−Ｍ＞Ｓ
−ＩｇＧ）　を５０ｍｍｏｌ／ｌ　トリス、ｐＨ８．０
中に含有。 溶液３　（測定標準）　： 測定標準としては、α−１−ミクログロブリン含量　２
７００ｍｇ　／ｌ　の尿濃縮物を使用した。

【００３０】２０μｌ　の溶液３を　３５０μｌ　の溶
液１と混合し、５分後、吸光　（Ｅ１）　を測定した。 ７０μｌ　の溶液２を添加しさらに５分間インキュベー
トした後、第２回目の吸光　（Ｅ２）　を測定した。数
値処理のために、吸光の差ΔＥ＝Ｅ２−Ｅ１をプロット
した　（添付図面の図８参照）　。標準曲線を作成する
ために、標準物質を２０ｍｍｏｌ／ｌ　ヘペスで希釈し
た。

【００３１】ＰＥＧ６０００を用いた場合には　（先行
技術の方法）　、α−１−Ｍ濃度１０００ｇ／ｌ　以上
でフック作用が観察された。ＰＥＧ４０，０００を用い
た場合には、濃度２７００ｍｇ／ｌ　までの測定領域の
すべてにわたって、フック作用は観察されなかった。

【図面の簡単な説明】

【図１】定量的免疫沈降法の典型的な沈降曲線（ハイデ
ルベルガー曲線）を示す図。

【図２】先行技術の方法　（ＰＥＧ６０００添加）　と
本発明の方法　（ＰＥＧ４０，０００）　との比較を示
す図。

【図３】ＰＥＧ４０，０００の濃度の影響を示す図。

【図４】ポリエチレングリコールの分子量の影響を示す
図。

【図５】デキストラン添加による尿中のアルブミン定量
を示す図。

【図６】ＰＶＰ添加による尿中のアルブミン定量を示す
図。

【図７】アポリポタンパク質Ａ−Ｉ　（アポＡ−Ｉ）　
の定量を示す図。

【図８】α−１−ミクログロブリン　（α−１−Ｍ）　
の定量を示す図。

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　アナライトを含む試料溶液をそのアナ
   ライトに結合可能な特異的レセプターとインキュベート
   することにより結合可能なアナライトを測定するための
   免疫沈降法であって、その試験溶液に分子量５００，０
   ００以上のデキストラン、分子量１００，０００以上の
   ポリビニルピロリドンおよび分子量１０，０００以上の
   ポリエチレングリコールより成る群から選択された非イ
   オン系ポリマーを添加することを特徴とする方法。
2. 【請求項２】　　非イオン系ポリマーが少なくとも１重
   量％の濃度でテストバッチ中に存在する、請求項１記載
   の方法。
3. 【請求項３】　　非イオン系ポリマーが２〜６重量％の
   濃度でテストバッチ中に存在する、請求項２記載の方法
   。
4. 【請求項４】　　分子量１０，０００から３００，００
   ０までのポリエチレングリコールを使用した、請求項１
   、２又は３記載の方法。
5. 【請求項５】　　分子量４０，０００のポリエチレング
   リコールを使用した、請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】　　分子量３６０，０００から７５０，０
   ００までのポリビニルピロリドンを使用した、請求項１
   、２又は３記載の方法。
7. 【請求項７】　　凝集試験である、請求項１〜６のいず
   れか１項に記載の方法。
8. 【請求項８】　　特異的レセプターがポリクローナル抗
   体である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 【請求項９】　　特異的レセプターが少なくとも二つの
   モノクローナル抗体の混合物である、請求項１〜７のい
   ずれか１項に記載の方法。
10. 【請求項１０】　　アナライトがタンパク質である、請
    求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 【請求項１１】　　アナライトがアルブミン、アポリポ
    タンパク質Ａ−Ｉまたはα−１−ミクログロブリンであ
    る、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 【請求項１２】　　実質的に本文前記の例示された、結
    合可能なアナライトを定量するための免疫沈降法に関す
    る、請求項１記載の方法。
13. 【請求項１３】　　免疫沈降法に必須な物質の他に、分
    子量５００，０００以上のデキストラン、分子量１００
    ，０００以上のポリビニルピロリドンおよび分子量１０
    ，０００以上のポリエチレングリコールより成る群から
    選択された非イオン系ポリマーを含有することを特徴と
    する、試料溶液中の結合可能なアナライトを定量する免
    疫沈降法を実施するための試薬。
14. 【請求項１４】　　テストバッチ中の非イオン系ポリマ
    ー濃度が少なくとも１重量％である、請求項１３記載の
    試薬。
15. 【請求項１５】　　テストバッチ中の非イオン系ポリマ
    ー濃度が２〜６重量％である、請求項１４記載の試薬。
16. 【請求項１６】　　実質的に本文前記の例示された、試
    薬溶液中の結合可能なアナライトを定量するための免疫
    沈降法を実施するための、請求項１３記載の試薬。
17. 【請求項１７】　　免疫沈降法の妨害となるフック作用
    を除去するための非イオン系ポリマーの利用。
18. 【請求項１８】　　免疫沈降法の感度を高め、その妨害
    となるフック作用を除去するための、反応促進剤として
    の非イオン系ポリマーの利用。