JPH04235351A - 免疫分析用試薬及びこれを用いる測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、リポソーム上の結合抗
原又は抗体を変えるだけで種々の物質の定量が可能であ
り、しかも高い精度の定量が可能な免疫分析用試薬及び
これを用いる分析方法に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】抗原抗
体反応を利用する免疫測定法は各種内分泌疾患の臨床診
断等において欠くべからざる程に重要なものとなってお
り、この方法は標識法と非標識法とに大別することがで
きる。

【０００３】これらの内で感度の点で優れている標識免
疫測定法を実施するためには各種の標識物質（マーカー
）、例えばラジオアイソトープ、蛍光物質、酵素又は酵
素関連物質等が用いられて来た。標識物質としては感度
の点からラジオアイソトープが従来汎用されて来たがラ
ジオアイソトープ試薬はその半減期がある上に不安定で
あり放射能障害や高価な施設の使用に問題点があるため
に、蛍光物質や酵素を標識とする測定法がその感度向上
に関する研究と相俟って一層注目を集めるに至っている
。

【０００４】蛍光物質又は酵素を標識物質とする免疫測
定法には、現在、標識物質の内で抗原抗体反応で結合し
たものと結合しなかったものとを分離する工程を必要と
するヘテロジニアスな系を使用する方法と、このような
分離工程を必要としないホモジニアスな系を使用する方
法とがある。

【０００５】ヘテロジニアスな系を使用する免疫測定法
としてはラジオアイソトープ標識免疫測定法においても
利用されている２抗体法や固相法があるが、これら方法
は未反応物と既反応物とを分離することを必須とするも
のであり、この分離工程の実施が繁雑であり、従って定
量の迅速化が困難であると謂う欠陥を有している。一方
、ホモジニアスな系を使用する免疫測定法は分離工程の
必要性を廃することによる定量の簡便化、迅速化を目的
として提案されたものであるが、実際には感度が低く且
つ測定範囲が狭いために抗原又は抗体の定量用として実
用化されるに至っていないのが実情である。

【０００６】斯かる問題点を克服する方法として、近年
、マーカーを封入させたリポソームを調製してこれに抗
原又は抗体を感作させ、この感作リポソームを検体と共
存させてリポソームに共有結合している抗原又は抗体と
検体中の抗体又は抗原と反応させて抗原抗体複合体を形
成し、この複合体を特異的に破壊させてリポソームから
流出するマーカーを測定し、一方上記と同様の感作リポ
ソームを種々既知量の抗原又は抗体と共存させ、且つ上
記と同様に流出マーカーを測定して標準検量線を予め作
成しておき、検体に関する上記測定結果を上記標準検量
線と照合させて、抗体又は抗原を定量する方法が提供さ
れた。

【０００７】このリポソームを使用した免疫分析方法に
よれば、前述の問題点を解消して短時間のうちに均一系
で被検物質を簡便に定量することができる。しかしなが
ら、被検試料中に含まれる定量分析対象の被検物質によ
り、それ固有のリポソームの調製が必要であり、また、
リポソームに結合させる抗原又は抗体が多量に必要であ
った。

【０００８】従って、固有のリポソームの調製を必要と
せず、しかもリポソームに結合させる抗原又は抗体が少
量で、且つ測定感度の高い免疫分析試薬及びこれを用い
た免疫分析方法が望まれていた。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者は上記実情に鑑
み鋭意研究を行なった結果、リポソーム表面上にアビジ
ンを介してビオチン結合抗原又は抗体を固定化したリポ
ソームを用いれば、ビオチン結合抗原又は抗体を変える
だけで、種々の被検抗体又は被検抗原の測定が可能とな
り、更に、リポソームに結合させる抗原又は抗体が非常
に微量でも高い精度で被検抗原又は被検抗体を定量でき
ることを見出し本発明を完成した。

【００１０】すなわち本発明はリポソーム表面上にアビ
ジンを介してビオチン結合抗原又は抗体が固定化されて
いる標識物質封入リポソームを含有する免疫分析用試薬
、この試薬を利用した免疫分析方法を提供するものであ
る。

【００１１】本発明の試薬に用いるリポソームは、例え
ば常法により標識物質含有リポソームを調製し、これに
架橋剤等でアビジンを結合させ、別途抗原又は抗体にビ
オチンを結合させてビオチン結合抗原又は抗体を得、次
いでこの両者を反応させてリポソーム表面上にアビジン
−ビオチン結合により、ビオチン結合抗原又は抗体を固
定化することにより製造される。

【００１２】リポソームの原料としては、ジパルミトイ
ルホスファチジルコリン、コレステロール、ジチオピリ
ジル化ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン
等の脂質を用いることができる。この脂質をクロロホル
ム、メタノール等の溶媒に溶解し、これをフラスコ等に
入れ、溶媒をエバポレーター等により留去すれば、フラ
スコ等の内壁に脂質薄膜を形成させることができる。こ
れを更に、真空乾燥等した後、標識物質を加え、ボルテ
ックスミキサーで激しく攪拌すれば標識物質封入リポソ
ームが得られる。ここに用いられる標識物質は、リポソ
ーム外に遊離されたとき定量可能であれば特に制限され
ないが、親水性であることが好ましい。斯かる物質とし
ては、例えば、高濃度では自己消光により蛍光は示さな
いが、低濃度（１０−３Ｍ　以下）で非常に強い蛍光を
発するカルボキシフルオレセインのような蛍光性化合物
；リポソーム外で酸化反応により発光するルミノールや
ルシフェリンのような発光性化合物；可視部あるいは紫
外部に特異的な吸収帯を有する吸光性化合物（水溶性色
素等）；酸化酵素の作用により分解され酸素消費あるい
は過酸化水素生成をもたらすグリコース及びシュークロ
ースなどの糖類；テトラペンチルアンモニウムのような
比較的大きなイオン性化合物；ニコチンアミドアデニジ
ンヌクレオチド（ＮＡＤ）のような補酵素類；メチルピ
オロゲンを初めとするラジカル化合物などが望ましい。 これらの化合物は、検出方法、感度及びリポソームの安
定性等の因子を勘案した上で、適宜に選択される。

【００１３】次いでこのリポソームに架橋剤又は過ヨウ
素酸等を用いてアビジンを結合させる。このとき用いる
架橋剤としては、Ｎ−サクシンイミジル−３−（２−ピ
リジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−サク
シンイミジル−４−（ｐ−マレイイミドフェニル）アセ
テート（ＳＭＰＡ）、Ｎ−サクシンイミジル−４−（ｐ
−マレイイミドフェニル）プロピオネート（ＳＭＰＰ）
、Ｎ−（γ−マレイイミドブチリルオキシ）サクシンイ
ミド（ＧＭＢＳ）、Ｎ−（ε−マレイイミドカプロイル
オキシ）サクシンイミド（ＥＭＣＳ）等が挙げられる。

【００１４】一方、ビオチン結合抗原又は抗体は、架橋
剤を介して抗原又は抗体とビオチンとを結合させること
により得られる。具体的には、予めビオチンと架橋剤を
結合させておき、これに抗原又は抗体を反応させること
により得るのが好ましい。かかる架橋化ビオチンとして
はＮ−ハイドロキシサクシンイミドビオチン、ビオチン
ロングアームヒドラジド、スルホサクシンイミジル２−
（ビオチンアミド）エチル−１，３′−ジチオプロピオ
ネート、スルホサクシンイミドビオチン等が挙げられる
。

【００１５】上記の如くして得られたアビジン結合リポ
ソームとビオチン結合抗原又は抗体とを適当な緩衝液中
で混合、攪拌すれば、アビジン−ビオチン結合によりリ
ポソーム表面上にビオチン結合抗原又は抗体が固定化さ
れる。この後、必要によりアビジンと結合しなかったビ
オチン結合抗原又は抗体を遠心分離又はゲル濾過法等に
より除去すれば、本発明の免疫分析用試薬を得ることが
できる。

【００１６】かくして得られた免疫分析用試薬を用いて
、被検抗体又は被検抗原を定量するには、例えば免疫分
析用試薬と被検抗体又は被検抗原とを補体の存在下に反
応させて抗原抗体反応に応じた補体の活性化によりリポ
ソームを破壊させ、リポソームより遊離した標識物質を
測定することにより行なわれる。この方法は、被検物質
が抗体である場合に有利である。また、本発明の免疫分
析方法は被検抗体又は被検抗原に一定量の当該被検体に
対する抗原又は抗体を反応させ、次いでこれに免疫分析
用試薬を補体の存在下に反応させ、リポソームより遊離
した標識物質を測定することよっても実施される。この
場合、測定される標識物質量は、一定量の当該被検体に
対する抗原又は抗体の中で被検抗体又は被検抗原により
中和されなかった抗原又は抗体の量に対応する。この方
法は、被検物質が抗原の場合に有利である。リポソーム
より遊離した標識物質の測定は、標識物質に応じた分析
方法、例えば、標識物質が蛍光物質であれば、蛍光分析
法により定量を行なえばよい。得られた標識物質量から
、例えば、予め作成した検量線により、試料中の抗体又
は抗原の量を測定することができる。定量操作において
使用する補体は、格別限定されないが、通常、モルモッ
ト血清が用いられる。しかし、ウサギ、マウス、ヒト等
の血清を使用してもよい。

【００１７】

【発明の効果】本発明によれば、リポソーム上の結合抗
原又は抗体を変えるだけで種々の物質の定量が可能であ
り、しかも高い精度で定量分析が可能である。

【００１８】

【実施例】実施例１ （１）　アビジン結合リポソーム試薬の調製：ジパルミ
トイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ：１０ｍＭ，　
１００μｌ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ：１０ｍＭ，
　１００μｌ）ジチオピリジル化ジパルミトイルホスフ
ァチジルエタノールアミン（ＤＴＰ−ＤＰＰＥ：１ｍＭ
，　４０μｌ）＝１：１：０．０４（モル比）の組成の
脂質（クロロホルム又はクロロホルム／メタノールに溶
解したもの）を１０ｍｌナシ型フラスコにとり、溶媒を
エバポレーターで留去し、フラスコ内壁にフィルム状に
脂質薄膜を形成させる。この脂質薄膜を１〜２時間真空
乾燥した後、標識物質として０．２Ｍカルボキシフルオ
レセイン溶液（ｐＨ７．５）１００　μｌ　を添加しボ
ルテックスミキサーで５分間激しく攪拌する。次いで過
剰のカルボキシフルオレセインを遠心除去すればカルボ
キシフルオレセイン封入リポソームが得られる。この際
、遠心洗浄には０．０１Ｍ　Ｈｅｐｅｓ　緩衝液（０．
１５Ｍ　ＮａＣｌ含有，ｐＨ７．５）を用いカルボキシ
フルオレセインが除去できたなら５００　μｌ　のＨｅ
ｐｅｓ　緩衝液に懸濁しておく。凍結乾燥品のアビジン
は前記Ｈｅｐｅｓ　緩衝液に溶解し５ｍｇ／ｍｌ　の溶
液とする。アビジン１ｍｌに３０ｍＭ　　Ｎ−サクシン
イミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート
（ＳＰＤＰ）１０μｌ　を添加し、室温で３０分間反応
させる。その後過剰のＳＰＤＰを除去するために０．１
Ｍ酢酸緩衝液（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有　ｐＨ４．５
）で平衡化したセファデックスＧ−２５でゲルろ過する
。ゲルろ過より得られたタンパク分画にジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）を終濃度５０ｍＭとなるように添加し室
温で２０分間反応させた後、上記Ｈｅｐｅｓ　緩衝液で
平衡化したセファデックスＧ−２５でゲルろ過し過剰の
ＤＴＴとタンパク分画を分離した。こうして得られたタ
ンパク分画０．５ｍｌ　に前記リポソーム懸濁液を加え
、６〜１０℃で１昼夜ゆっくり攪拌しながら反応させる
。反応後、リポソーム懸濁液を遠心し未結合のタンパク
を分離し、０．１　％　ＮａＮ３　含有ゼラチンベロナ
ール緩衝液（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ　含有，ｐＨ７．５
）１ｍｌに懸濁した。

【００１９】（２）　ビオチン結合ＨＢｓ　抗原の調製
：精製ＨＢｓ　抗原（１８０μｇ／ｍｌ）５００μｌ　
を０．１Ｍ重炭酸緩衝液（ｐＨ８．２）に透析した。そ
の後、Ｎ−ハイドロキシサクシンイミドビオチンをジメ
チルホルムアミドで１ｍｇ／ｍｌとなるように溶解し、
その２５μｌ　を前記ＨＢｓ　抗原に添加した。室温で
４時間反応させた後、０．０１Ｍ　Ｈｅｐｅｓ　緩衝液
（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有，ｐＨ７．５）で平衡化し
たセファデックスＧ−２５でゲルろ過し、未反応のＮ−
ハイドロキシサクシンイミドビオチンを除去してビオチ
ン結合ＨＢｓ　抗原を調製した。

【００２０】（３）　ビオチン結合ＣＲＰ　抗原の調製
：前記ビオチン結合ＨＢｓ　抗原の調製と同様に行なっ
た。

【００２１】実施例２　　　　抗ＨＢｓ　抗体の測定：
９６穴マイクロプレートを用いて測定を行なった。希釈
には、ゼラチン、ベロナール緩衝液に０．５ｍＭ　Ｍｇ
Ｃｌ２　及び０．１５ｍＭ　ＣａＣｌ２　を添加した希
釈液（ＧＶＢ２＋）を使用した。測定には実施例１（１
）　で調製したリポソーム試薬を３００　倍希釈して用
いた。モルモット補体は３ＣＨ５０となるように希釈し
て用いた。ビオチン結合ＨＢｓ　抗原は０．２，　０．
１，　０．０３，　０．０１μｇ／ｍｌとなるように希
釈し、検体として用いたウサギ抗ＨＢｓ　抗体（ＰＨＡ
　価１２８０００倍）は４０倍から倍々希釈して、以下
の操作に従って測定した。前記リポソーム試薬２５μｌ
　ビオチン結合ＨＢｓ　抗原２５μｌ　をプレートに分
注し、３７℃、３０分間反応させた。その後検体として
抗ＨＢｓ　抗体と補体を各２５μｌ　づつ分注し３７℃
１時間反応させた。補体反応を停止させるために１０ｍ
Ｍ　ＥＤＴＡ　含有ベロナール緩衝液１００　μｌ　を
添加した。抗原抗体反応に依存してリポソームから溶出
したカルボキシフルオレセインを蛍光測定器（励起波長
４９０ｎｍ、蛍光波長５３０ｎｍ）により測定した。そ
の時の相対蛍光強度は次式により求めた。

【数１】 結果を図１に示す。図１より、ビオチン結合ＨＢｓ抗原
の量が多いほど高いマーカーリリースを示した。また抗
ＨＢｓ　抗体の量に依存した標識物質の遊離を示した。

【００２２】実施例３　　　　抗ＣＲＰ　抗体の測定：
ビオチン結合ＣＲＰ　抗原は０．０１〜１μｇ／ｍｌと
なるように希釈した。検体は、ウサギ抗ＣＲＰ　抗体（
７．１ｍｇ／ｍｌ）を４０倍から希釈して測定を行なっ
た。以下の操作は実施例２に従った。結果を図２に示し
た。図２より測定系の中にフリーのビオチン化ＣＲＰ　
抗原が大量に存在するとリポソームに固相化された抗原
と競合反応を起こすため標識物質の遊離が低い値を示し
た。この系におけるビオチン化ＣＲＰ　抗原の至適濃度
は約０．１　μｇ／ｍｌであった。また、いづれのビオ
チン化ＣＲＰ抗原の濃度においても抗ＣＲＰ　抗体の量
に依存した標識物質の遊離を示した。

【００２３】実施例４　　　　ＨＢｓ　抗原の測定：実
施例１（１）　で調製したリポソーム５０μｌ　とビオ
チン結合ＨＢｓ　抗原（３０μｇ／ｍｌ）５０μｌ　を
試験管に分注し、更にＧＶＢ　９００　μｌ　を加え３
７℃で９０分反応させる。その後、リポソーム表面上に
固相化されなかったビオチン結合抗原を遠心（１２００
０ｒｐｍ×１０ｍｉｎ，３回）して除去しＧＶＢ　１ｍ
ｌに懸濁し、予めＨＢｓ　抗原固相化リポソームを調製
する。測定は次の如く行なった。すなわち種々の濃度に
希釈した精製ＨＢｓ　抗原２５μｌ　と８０倍希釈した
ウサギ抗ＨＢｓ　抗体（ＰＨＡ価１２８０００倍）２５
μｌ　を９６穴マイクロプレート（グライナー製）に分
注し３７℃で１時間反応させる。その後、前記ＨＢｓ　
抗原固相化リポソームを２５倍希釈して２５μｌ　加え
同時に、３単位に希釈したモルモット補体２５μｌ　を
加え３７℃で１時間反応させる。反応後、１０ｍＭ　Ｅ
ＤＴＡ　含有ベロナール緩衝液１００　μｌ　を加え補
体反応を停止させ、その時の蛍光強度を蛍光測定器によ
り測定した。なお、希釈にはＧＶＢ２＋を用いた。第１
次反応において精製ＨＢｓ　抗原に依存して抗ＨＢｓ　
抗体が中和され、その結果リポソームからの標識物質の
放出が抑制されることをもとにして、各抗原濃度におけ
る抑制率を以下の式から求めた。その際に抑制率０％の
蛍光強度は、精製ＨＢｓ抗原０ｎｇ／ｍｌ　のウエルの
蛍光強度とした。

【数２】 結果を図３に示した。図３より、ＨＢｓ　抗原３１ｎｇ
／ｍｌ　から濃度に依存した標識物質のリポソームから
の放出抑制が確認された。

【００２４】実施例５　　　　ＣＲＰ　抗原の測定実施
例４と同様に実験を行なった。ビオチン結合ＣＲＰ　抗
原は５０μｇ／ｍｌの濃度のものを使用し、ウサギ抗Ｃ
ＲＰ　抗体は７．１ｍｇ／ｍｌのものを８００　倍希釈
して用いた。また精製ＣＲＰ　抗原は１０００ｎｇ／ｍ
ｌ　から倍々希釈して検体とした。結果を図４に示した
。図４より精製ＣＲＰ　抗原１５ｎｇ／ｍｌ　から濃度
に依存した標識物質のリポソームからの放出抑制が確認
された。

【００２５】実施例６　　　　リポソームに固定化する
抗原又は抗体の量の比較 アジピンを介してビオチン結合抗原又は抗体をリポソー
ムに固定化する時に用いる抗原又は抗体の量と、架橋剤
を介して抗原又は抗体をリポソームに固定化する時に用
いる抗原又は抗体の量を比較した。また、双方の固定化
方法により調製したリポソームの測定感度の比較を行な
った。 抗ＨＢｓ　抗体測定に関して：アジピンを介してビオチ
ン結合ＨＢｓ　抗原をリポソームに固定化する方法は実
施例４に従った。その時のＨＢｓ　抗原とリポソームの
混合比は１０μｇ　ＨＢｓ　抗原／１μｍｏｌ　リン脂
質であった。また架橋剤を介したＨＢｓ　抗原の固定化
方法は平成１年特許出願第２９００３０号記載の方法に
従い、次の如く行なった。

【００２６】１０ｍｌナシ型フラスコに、ジパルミトイ
ルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ：１０ｍＭ，　１０
０　μｌ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ：１０ｍＭ，　
１００μｌ）及びジチオピリジル化ジパルミトイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＴＰ−ＤＰＰＥ：１ｍ
Ｍ，　４０μｌ）＝１：１：０．０４（モル比）から成
る脂質（クロロホルム又はクロロホルム／メタノールに
溶解したもの）をとり、溶媒をエバポレーターで留去し
、フラスコ内壁にフィルム状に脂質薄膜を形成させる。 この脂質薄膜を１〜２時間真空乾燥した後、標識物質と
して０．２Ｍカルボキシフルオレセイン溶液（ｐＨ７．
５）　１００　μｌ　を添加しボルテックスミキサーで
５分間激しく攪拌する。次いで過剰のカルボキシフルオ
レセインを遠心除去すればカルボキシフルオレセイン封
入リポソームが得られる。この際、遠心洗浄には０．０
１Ｍ　Ｈｅｐｅｓ　緩衝液（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有
，ｐＨ７．５）を用いカルボキシフルオレセインが除去
できたならリポソームをペレットとしておく。また精製
したＨＢｓ　抗原溶液（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有リン
酸緩衝液ｐＨ７．５　に溶解したもの１．１ｍｇ／ｍｌ
）１．４ｍｌ　に３０ｍＭ　ＳＰＤＰ　エタノール溶液
１４μｌ　を加え室温で３０分間反応させる。引き続き
過剰のＳＰＤＰを除去するために０．０２Ｍ　ＭＥＳ　
緩衝液（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有，ｐＨ６．０）で平
衡化したセファデックスＧ−２５でゲルろ過する。ゲル
ろ過により得られるタンパク分画２ｍｌをセントリコン
１０（アミコン社製）を用いて４倍濃縮した後ジチオス
レイトール（ＤＴＴ）を終濃度１００ｍＭ　となるよう
に添加し室温で３０分間反応させる。その後過剰のＤＴ
Ｔ　を除去するために０．０１Ｍ　Ｈｅｐｅｓ　緩衝液
（０．１５Ｍ　ＮａＣｌ含有，ｐＨ７．５）で平衡化し
たセファデックスＧ−２５でゲルろ過してタンパク分画
（１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを得る。このタンパク分画に前
記のリポソームペレットを加え６〜１０℃で１８〜２４
時間ゆっくり攪拌しながら反応させる。その後リポソー
ム懸濁液を遠心洗浄し未反応のタンパクを分離し、０．
１％ＮａＮ３　含有ゼラチン・ベロナール緩衝液ｐＨ７
．５　１ｍｌに再懸濁しＨＢｓ　抗原結合リポソーム試
薬を調製した。その時のＨＢｓ　抗原とリポソームの混
合比は１ｍｇ　ＨＢｓ抗原／１μｍｏｌ　リン脂質であ
った。

【００２７】測定の際に使用したプレート、希釈液、ウ
サギ抗ＨＢｓ　抗体は実施例２と同様のものを用いた。 測定はＨＢｓ　抗原固相化リポソーム２５μｌ　、ウサ
ギ抗ＨＢｓ　抗体２５μｌ、モルモット補体２５μｌ　
及び希釈液２５μｌ　をマイクロプレートに分注し、３
７℃で１時間反応させた。補体反応を停止させるために
１０ｍＭ　ＥＤＴＡ　含有ベロナール緩衝液１００　μ
ｌ　を添加し、その時の蛍光強度を蛍光測定器により測
定した。その時の相対蛍光強度は数１に従って計算した
。結果を図５に示す。図５よりアビジンを介してビオチ
ン結合ＨＢｓ　抗原を固相化したリポソームと架橋剤を
介してＨＢｓ　抗原を固相化したリポソームのマーカー
リリースは抗ＨＢｓ　抗体低濃度ではほぼ同等であり、
抗体高濃度域では前者がより高いマーカーリリースを示
した。 またＨＢｓ　抗原のリポソームへの固相化の際に使用し
た量は前者が後者の１／１００　量と非常に微量で高い
測定結果が得られた。

【図面の簡単な説明】

【図１】抗ＨＢｓ　抗体の測定結果を示す図面である。

【図２】抗ＣＲＰ　抗体の測定結果を示す図面である。

【図３】ＨＢｓ　抗原の測定結果を示す図面である。

【図４】ＣＲＰ　抗原の測定結果を示す図面である。

【図５】抗ＨＢｓ　抗体の測定結果を示す図面である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　リポソーム表面上にアビジンを介して
   ビオチン結合抗原又は抗体が固定化されている標識物質
   封入リポソームを含有する免疫分析用試薬。
2. 【請求項２】　　請求項１記載の免疫分析用試薬と被検
   抗体又は被検抗原とを、補体の存在下に反応させ、リポ
   ソームより遊離した標識物質を測定することを特徴とす
   る免疫分析方法。
3. 【請求項３】　　被検抗体又は被検抗原に一定量の当該
   被検体に対する抗原又は抗体を反応させ、次いでこれに
   請求項１記載の免疫分析用試薬を補体の存在下に反応さ
   せ、リポソームより遊離した標識物質を測定することを
   特徴とする免疫分析方法。