JPH0362395B2 - - Google Patents
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- JPH0362395B2 JPH0362395B2 JP13446184A JP13446184A JPH0362395B2 JP H0362395 B2 JPH0362395 B2 JP H0362395B2 JP 13446184 A JP13446184 A JP 13446184A JP 13446184 A JP13446184 A JP 13446184A JP H0362395 B2 JPH0362395 B2 JP H0362395B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
Ｌ−イソロイシンはアミノ酸輸液及び総合アミ
ノ酸製剤の重要な成分である。本発明はこのＬ−
イソロイシンを発酵法で製造する方法を改良する
ものである。 〔従来の技術〕 ブレビバクテリウム属及びコリネバクテリウム
属の微生物がＬ−イソロイシン生産能を有するた
めには、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸（以
下AHVと略す）等への耐性を付与せしめれば良
いことがわかつている。更に、前記の薬剤耐性に
加えてＯ−メチルスレオニン耐性、β−ヒドロキ
シロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐性を付
与すること、及びプリン系物質又はリジン等の要
求性を付与することによりＬ−イソロイシンの生
産能が向上することは知られている。 〔問題が解決しようとする問題点〕 Ｌ−イソロイシンの発酵収率及び蓄積を向上さ
せることは工業生産上に於て、重要な問題であ
る。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は上記問題点を解決するためになされた
ものであり、従来より知られているブレビバクテ
リウム属及びコリネバクテリウム属に属するＬ−
イソロイシン生産能を有する微生物を改良して更
に発酵収率の向上した菌株を見いだすべく研究し
た結果、メチルリジン（以下MLと略す。）に耐
性を付与した菌株の中に、従来のＬ−イソロイシ
ン生産菌よりも高収率でＬ−イソロイシンを生産
する菌株が存在することを発見した。 即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリ
ネバクテリウム属に属し、ML耐性を有し、且つ
Ｌ−イソロイシン生産能を有する微生物を液体倍
地中で培養し、培地中に生成蓄積したＬ−イソロ
イシンを採取することを特徴とするＬ−イソロイ
シンの製造法に関する。 本発明のMLとしてはγ−ML、β−ML、δ
−ML、ε−ML等のメチルリジンがあり、これ
らに対する耐性菌はＬ−イソロイシン生産能を向
上せしめるのに有効である。 本発明において用いられる微生物はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属し、メ
チルリジン耐性を有し、かつＬ−イソロイシン生
産能を有する変異株である。 本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先
にＬ−イソロイシン生産能を付与し、次いでML
耐性を付与しても良いし、又先にML耐性を付与
し、次いでイソロイシン生産能を付与しても良
い。 本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属等のコリネホ
ルムＬ−グルタミン酸生産菌として知られている
ものであり、例えば以下のものがある。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869 ブレビバクテリウム・デイバリカタム
ATCC14020 ブレビバクテリウム・サツカロリテイカム
ATCC14066 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14067 コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC13032 コリネバクテリウム・アセドアシドフイラム
ATCC13870 これらの親株より本発明の変異株を得る方法
は、Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン処理する等の通常の変異誘導方法が適用
できる。変異処理した菌液から本発明の変異株を
分離する方法はMLを含む培地で生育するような
菌株を採取することによつて行われる。 本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法と
MLとしてγ−MLを使用した場合のγ−MLに
対する菌株の生育度の関係を以下に示す。 〔変異誘導方法〕 ブイヨン寒天スラント上に30℃で24時間生育さ
せたブレビバクテリウム・フラバム
AJ3686FERM−P2433、FERM BP−755
（ATCC14067より誘導したAHV耐性株）及びコ
リネバクテリウム・グルタミクムAJ12150FERM
−P7674、FERM BP−756（ATCC13032より誘
導したAHV耐性株）の菌体をＭ／30リン酸緩衝
液に懸濁し菌体濃度108〜109／mlの菌体懸濁液に
500μｇ／mlのＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンを加え30℃に20分間保持した。
ついで遠心分離して菌体を集め、Ｍ／30リン酸緩
衝液で良く洗滌した後、下記の組成の培地に接種
し、31.5℃で２〜10日間培養した。
ノ酸製剤の重要な成分である。本発明はこのＬ−
イソロイシンを発酵法で製造する方法を改良する
ものである。 〔従来の技術〕 ブレビバクテリウム属及びコリネバクテリウム
属の微生物がＬ−イソロイシン生産能を有するた
めには、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸（以
下AHVと略す）等への耐性を付与せしめれば良
いことがわかつている。更に、前記の薬剤耐性に
加えてＯ−メチルスレオニン耐性、β−ヒドロキ
シロイシン耐性又はトリクロロアラニン耐性を付
与すること、及びプリン系物質又はリジン等の要
求性を付与することによりＬ−イソロイシンの生
産能が向上することは知られている。 〔問題が解決しようとする問題点〕 Ｌ−イソロイシンの発酵収率及び蓄積を向上さ
せることは工業生産上に於て、重要な問題であ
る。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は上記問題点を解決するためになされた
ものであり、従来より知られているブレビバクテ
リウム属及びコリネバクテリウム属に属するＬ−
イソロイシン生産能を有する微生物を改良して更
に発酵収率の向上した菌株を見いだすべく研究し
た結果、メチルリジン（以下MLと略す。）に耐
性を付与した菌株の中に、従来のＬ−イソロイシ
ン生産菌よりも高収率でＬ−イソロイシンを生産
する菌株が存在することを発見した。 即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリ
ネバクテリウム属に属し、ML耐性を有し、且つ
Ｌ−イソロイシン生産能を有する微生物を液体倍
地中で培養し、培地中に生成蓄積したＬ−イソロ
イシンを採取することを特徴とするＬ−イソロイ
シンの製造法に関する。 本発明のMLとしてはγ−ML、β−ML、δ
−ML、ε−ML等のメチルリジンがあり、これ
らに対する耐性菌はＬ−イソロイシン生産能を向
上せしめるのに有効である。 本発明において用いられる微生物はブレビバク
テリウム属又はコリネバクテリウム属に属し、メ
チルリジン耐性を有し、かつＬ−イソロイシン生
産能を有する変異株である。 本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先
にＬ−イソロイシン生産能を付与し、次いでML
耐性を付与しても良いし、又先にML耐性を付与
し、次いでイソロイシン生産能を付与しても良
い。 本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属等のコリネホ
ルムＬ−グルタミン酸生産菌として知られている
ものであり、例えば以下のものがある。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869 ブレビバクテリウム・デイバリカタム
ATCC14020 ブレビバクテリウム・サツカロリテイカム
ATCC14066 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14067 コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC13032 コリネバクテリウム・アセドアシドフイラム
ATCC13870 これらの親株より本発明の変異株を得る方法
は、Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン処理する等の通常の変異誘導方法が適用
できる。変異処理した菌液から本発明の変異株を
分離する方法はMLを含む培地で生育するような
菌株を採取することによつて行われる。 本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法と
MLとしてγ−MLを使用した場合のγ−MLに
対する菌株の生育度の関係を以下に示す。 〔変異誘導方法〕 ブイヨン寒天スラント上に30℃で24時間生育さ
せたブレビバクテリウム・フラバム
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（ATCC14067より誘導したAHV耐性株）及びコ
リネバクテリウム・グルタミクムAJ12150FERM
−P7674、FERM BP−756（ATCC13032より誘
導したAHV耐性株）の菌体をＭ／30リン酸緩衝
液に懸濁し菌体濃度108〜109／mlの菌体懸濁液に
500μｇ／mlのＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンを加え30℃に20分間保持した。
ついで遠心分離して菌体を集め、Ｍ／30リン酸緩
衝液で良く洗滌した後、下記の組成の培地に接種
し、31.5℃で２〜10日間培養した。
【表】
寒天培地に生育した菌株の中からＬ−イソロイ
シン生産能の高い菌株としてブレビバクテリウ
ム・フラバムAJ12149FERM−P7677、FERM
BP−759（AHV耐性、γ−メチルリジン耐性）、
及びコリネバクテリウム・グルタミクム
AJ12151FERM−P7675、FERM BP−757
（AHV耐性株、γ−メチルリジン耐性）を得た。 このようにして得られた変異株のγ−ML耐性
度を親株と比較した。 グルコース0.5ｇ／dl、尿素0.2ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO40.3ｇ／dl、K2HPO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、CaCl2・
2H2O0.1mg／dl、ビオチン100μｇ／、サイアミ
ン塩酸塩100μｇ／、FeSO4・7H2O0.002ｇ／
dl、MnSO4・7H2O0.002ｇ／dl、および表に示
す量のα−MMを含み、PH7.0に調節した培地に
天然培地（ペプトン１ｇ／dl、酵母エキス１ｇ／
dl、NaCl0.5ｇ／dl、PH7.0）スラントで24時間培
養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培
養して生育度を濁度で測定した。
シン生産能の高い菌株としてブレビバクテリウ
ム・フラバムAJ12149FERM−P7677、FERM
BP−759（AHV耐性、γ−メチルリジン耐性）、
及びコリネバクテリウム・グルタミクム
AJ12151FERM−P7675、FERM BP−757
（AHV耐性株、γ−メチルリジン耐性）を得た。 このようにして得られた変異株のγ−ML耐性
度を親株と比較した。 グルコース0.5ｇ／dl、尿素0.2ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO40.3ｇ／dl、K2HPO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、CaCl2・
2H2O0.1mg／dl、ビオチン100μｇ／、サイアミ
ン塩酸塩100μｇ／、FeSO4・7H2O0.002ｇ／
dl、MnSO4・7H2O0.002ｇ／dl、および表に示
す量のα−MMを含み、PH7.0に調節した培地に
天然培地（ペプトン１ｇ／dl、酵母エキス１ｇ／
dl、NaCl0.5ｇ／dl、PH7.0）スラントで24時間培
養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、24時間培
養して生育度を濁度で測定した。
このような変異株を培養する際に用いる培地
は、炭素源、窒素源、無機イオン、上記要求性を
満足させるべき物質及び必要に応じビタミン等そ
の他の有機微量栄養素を含有する通常の培地であ
る。 炭素源としてはグルコース、シユクロース等の
炭水化物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としては
アンモニア水、アンモニアガス、アンモニウム塩
等が好適である。無機イオンとしてはカリイオ
ン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、リ
ン酸イオンその他が必要に応じ適宜培地に添加さ
れる。 培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地の
PHを４ないし８に温度を25℃ないし37℃に調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。かくし
て１ないし７日間も培養すれば培地中に著量のＬ
−イソロイシンが生成蓄積される。培養液よりＬ
−イソロイシンを採取する方法はイオン交換樹脂
による方法等通常の方法で採取できる。 以下実施例にて説明する。 実施例 １ グルコース10ｇ／dl、（NH4）2SO47ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04ｇ／dl、
FeSO4・7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、
サイアミン・HCl100μｇ／、ビチオン100μｇ／
、大豆蛋白酸加水分解液60mg／dl（全窒素とし
て）炭酸カルシウム５ｇ／dl（別殺菌）を含む培
地をPH7.0に調節し、その20mlを500ml容肩付フラ
スコに入れ加熱殺菌した。これに第１表に示す菌
株を一白金耳接種し、31.5℃に保ちつつ４日間振
盪した。各菌株の培養液中には第２表に示す量の
Ｌ−イソロイシンが蓄積した。AJ12149を上記の
方法で培養して培養液１を得、これより遠心分
離にて菌体を除き、上清を、強酸性イオン交換樹
脂「ダイヤイオン」SK−IB（NH4 +型）に通過さ
せた。樹脂を水洗後、2N−アンモニア水にて溶
出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ−イソ
ロイシンの粗結晶17.0ｇを得た。
は、炭素源、窒素源、無機イオン、上記要求性を
満足させるべき物質及び必要に応じビタミン等そ
の他の有機微量栄養素を含有する通常の培地であ
る。 炭素源としてはグルコース、シユクロース等の
炭水化物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としては
アンモニア水、アンモニアガス、アンモニウム塩
等が好適である。無機イオンとしてはカリイオ
ン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、リ
ン酸イオンその他が必要に応じ適宜培地に添加さ
れる。 培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地の
PHを４ないし８に温度を25℃ないし37℃に調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。かくし
て１ないし７日間も培養すれば培地中に著量のＬ
−イソロイシンが生成蓄積される。培養液よりＬ
−イソロイシンを採取する方法はイオン交換樹脂
による方法等通常の方法で採取できる。 以下実施例にて説明する。 実施例 １ グルコース10ｇ／dl、（NH4）2SO47ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04ｇ／dl、
FeSO4・7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、
サイアミン・HCl100μｇ／、ビチオン100μｇ／
、大豆蛋白酸加水分解液60mg／dl（全窒素とし
て）炭酸カルシウム５ｇ／dl（別殺菌）を含む培
地をPH7.0に調節し、その20mlを500ml容肩付フラ
スコに入れ加熱殺菌した。これに第１表に示す菌
株を一白金耳接種し、31.5℃に保ちつつ４日間振
盪した。各菌株の培養液中には第２表に示す量の
Ｌ−イソロイシンが蓄積した。AJ12149を上記の
方法で培養して培養液１を得、これより遠心分
離にて菌体を除き、上清を、強酸性イオン交換樹
脂「ダイヤイオン」SK−IB（NH4 +型）に通過さ
せた。樹脂を水洗後、2N−アンモニア水にて溶
出し、ついで溶出液を濃縮し、これよりＬ−イソ
ロイシンの粗結晶17.0ｇを得た。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウ
ム属に属しメチルリジン耐性を有し、且つＬ−イ
ソロイシン生産能を有する微生物を液体培地中で
培養し、培地中に生成蓄積したＬ−イソロイシン
を採取することを特徴とするＬ−イソロイシンの
製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13446184A JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
| EP85108049A EP0167132B1 (en) | 1984-06-29 | 1985-06-28 | Process for producing l-isoleucine by fermentation |
| DE8585108049T DE3585052D1 (de) | 1984-06-29 | 1985-06-28 | Verfahren zur herstellung von l-isoleucin durch fermentation. |
| US06/750,289 US4656135A (en) | 1984-06-29 | 1985-07-01 | Process for producing L-isoleucine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13446184A JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6115696A JPS6115696A (ja) | 1986-01-23 |
| JPH0362395B2 true JPH0362395B2 (ja) | 1991-09-25 |
Family
ID=15128870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13446184A Granted JPS6115696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6115696A (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010017082A (ja) | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010110216A (ja) | 2007-02-20 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法 |
| JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2009093703A1 (ja) | 2008-01-23 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
| WO2011013707A1 (ja) | 2009-07-29 | 2011-02-03 | 味の素株式会社 | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
| KR101773755B1 (ko) | 2013-05-13 | 2017-09-01 | 아지노모토 가부시키가이샤 | Ｌ-아미노산의 제조법 |
| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| WO2015050234A1 (ja) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| BR112016008830B1 (pt) | 2013-10-23 | 2023-02-23 | Ajinomoto Co., Inc | Método para produzir uma substância alvo |
| RU2015114955A (ru) | 2015-04-22 | 2016-11-10 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-изолейцина с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой сверхэкспрессирован ген cycA |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
-
1984
- 1984-06-29 JP JP13446184A patent/JPS6115696A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6115696A (ja) | 1986-01-23 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |