JPH02304008A - 抗菌・抗線虫剤、植物細胞活性剤及びそのための微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、抗菌・抗線虫・植物細胞活性剤及びそのため
の微生物に係り、特にキチン質（キチン、キトサン）を
微生物培養処理することにより得られた培養材料に、水
を加えて、固液分離して得られる、強酸性条件下の培養
液からなる抗菌剤、抗線虫剤乃至は植物細胞活性剤、並
びにそれらを与える微生物に関するものである。

（背景技術） 近年、キチンやキトサンの如きキチン質を微生物によっ
て分解処理する手法が、種々検討されてきている。これ
は、昆虫類や甲殻類の外殻の処理の一つの手段としては
勿論のこと、そのような微生物処理によって得られる培
養物や培養生成物に有用な薬理活性が存することが認め
られたことによるものである。

かかる状況下、本発明者らにあっても、キチンやキトサ
ンの如きキチン質をよく分解し、またそれらの分解酵素
類の生産能力の高い微生物を広く自然界から検索してい
るうち、ｐ　Ｉ（に応じて特５″？：な挙動を示す菌株
を見い出し、そしてそのような菌株（微生物）をキチン
培地乃至はキトサン培地にて培養して得られた培養体か
ら採取される培養液が、優れた抗菌作用や抗線虫作用、
植物細胞活性作用を有することを見い出したのである。

（解決課題） ここにおいて、本発明は、かかる知見に基づいて完成さ
れたものであって、その解決課題とするところは、抗菌
作用、抗線虫作用乃至は植物細胞活性作用を有する薬剤
を微生物の培養体から得ることにあり、またそのような
薬剤を与える微生物を提供することにある。

（解決手段） そして、本発明は、かかる課題解決のために、コリネバ
クテリウム属のパイネーム株若しくはアクロモバクタ属
のバイネ−Ｂ株またはそれら菌株を含む混合微生物を、
キチン培地またはキトサン培地にて培養して得られた培
養材料に対して、水を加えて、固液分離して得られる、
強酸性条件下の培養液からなる抗菌・抗線虫・植物細胞
活性剤を、その要旨とするものである。

また、本発明は、そのような薬剤を与える微什物として
、キチンやキトサンの如きキチン質を分解する能力を有
し、微工研閑寄第１．０７０２号または第１０７０３号
として寄託されたコリネバクテリウム・バイネ−Ａまた
はアクロモバクタ・バイネ−Ｂからなる菌株をも、その
特徴とするものである。

（具体的構成） ところで、かくの如き本発明における微生物の一つは、
コリネバクテリウム属に属する菌株であって、コリネバ
クテリウム・ハイネーＡと称されるものであり、また他
の一つは、アクロモバクタ属に属する菌株であって、ア
クロモバクタ・バイネ−Ｂと称されるものである。これ
らの菌株は、滋賀県内のじゃがいもを原料とする食品（
コロッケ）工場の水処理廃水汚泥から採取され、そのよ
うな汚泥にモミ殻を混ぜて発酵さセ、そしてその発酵終
了前に更にキトザンを配合して好気的に発酵培養させた
ものから単離されたものであって、それぞれ、工業技術
院微生物工業技術研究所に、平成元年５月１日に、前者
は「微工研菌寄第１０７０２号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０７
０２）　Ｊとして、また後者は［微工研菌寄第１０７０
３号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０７０３）　Ｊとして受託され
ており、それぞれの菌学的性質は、以下の通りである。

（Ｉ）形態学的性質 ａ）ハイネーム株 本菌株は、ダラム陽性の短桿菌（１，５〜２．０μｍＸ
１．０〜１．５μｍ）である。

ｂ）バイネ−Ｂ株 本菌株は、ダラム陰性の桿菌（１，５〜２．０μｍ　Ｘ
　０．５〜０，７μｍ）で、胞子は形成しない。

（ＩＩ）各種培地上の性質 ａ）バイネ−ム株 （１）ブイヨン寒天培地 殆ど生育が観られない。

（２）コロイダルキチン寒天培地 コロニーの色は白色で、周辺は少々波打っており、***
はあまりない、、３０°Ｃで２日培養後、微かにコロニ
ーの周辺にクリアーゾーンが見られるが、１０日以上培
養を続けると、コロニーの周りに大きなりリアーゾーン
を形成する。生育速度はハイネーＢ株に比べると遅い。

ｂ）バイネ−Ｂ株 （１）ブイヨン寒天培地 コロニーは、半透明で、やや白色を呈し、培地上を無秩
序に広がっていく。３０°Ｃで１日培養後には、生育が
認められる。

（２）コロイダルキチン寒天培地 コロニーは、最初透明で、クリアーゾーンが形成されて
いることで、生育が確認出来る。培養を続けると、どん
どん広がり、菌が良く生育した所は半透明で白色に見え
る。コロニーとクリアーゾーンの面積ば略同じであるか
、多少クリアーゾーンの方が大きい。

（ＩＩＩ）生理的性質 ａ）バイネ−Ａ株 （１）各温度におけるコロイダルキチン寒天培地（ｐＨ
＝７．０）でのクリアーゾーンの状態（大きさ）は、下
表の通りである。

（２）生育ｐＨ ■Ｌ　Ｂ　（Ｌｕｒｉａ　Ｂｅｒｔａｎｉ）培地（ｐＨ
７，８゜６．９．５．９．５．０．４．０．３．０．　
１．９゜１．０） 何れも３週間培養したが、生育は観られなかった。

■キチン培地（ｐ　Ｈ７，９、７，２、６，３、５゜５
．５．２，３．９，２．３，１．３）各培地での０Ｄ６
６ｏ値（６６０ｎｍの波長で測定された光学密度：生存
菌体の数を表わす）は下表の通りである。

ｐ　Ｈ７，９〜６．３で生育。

＼１、 ″、 ＼、 ■　上記■、■で生育が観られなかった培養液（ＬＢ培
地：　、ｐ　Ｈ７，８〜１．０のもの。

キチン培地：ｐＨ５，５〜１．３のもの）を、ｐ　Ｈ７
，０のキチン培地にｌｍｆｆ移し、生育を観た。なお、
■のＬＢ培地ｐ　Ｈ７，８〜１．０の培養液は３週間振
盪培養後のものであり、■のキチン培地ｐ　Ｈ５，５〜
１゜３の培養液は、同様に、２週間培養後のものである
。

生育結果（ＯＤ６６０値）は下表の通りである。

以上の結果より、本菌株は、中性付近で良く生育し、酸
性条件下では休眠状態にあると考えられる。

（３）硝酸塩の還元・・・・・陰性 （４）硫化水素の発生・・・・陰性 （５）インドールの生成・・・陰性　。

（６）Ｖ−Ｐテスト・・・・・陰性 （７）０−Ｆテスト・・・・・陰性 （８）メチルレッドテスト・・陰性 （９）カタラーゼ・・・・・・陽性 ０■　オキシダーゼ・・・・・陰性 （］］）　　ウレアーゼ・・・・・・陰性０２）糖から
の酸とガスの生成試験 酸も、ガスも生成しないニ ゲルコース、サッカロース２　ラ ムノース、ソルビトール、キシ ロース、ラクトース、ガラクト −ス、マルトース、マンノース。

アラビノース、フラクト−ス。

マンニトール ■　嫌気培養・・・・・・生育しない。

ｂ）バイネ−Ｂ株 （１）各温度におけるコロイダルキチン寒天培地（ｐ　
Ｈ＝　７．０　）でのクリアーゾーンの直径（大きさ）
は、下表の通りである。

＊：コロニーがきれいな円形でないため、一方向の直径
しか測定していない。

−二生育していない。

十：シャーレの略−面に広がっている。

（２）生育ｐＨ（３０°Ｃ） ■ＬＢ培地（ｐ　Ｈ７，８、６，９、５，９、５，０。

４．０．３．０．　１．９．　１．０）生育結果（ＯＤ
、ｌ、。値）は下表の通りである。ｐ　Ｈ７，８〜５．
９で生育（２４時間後には完全に定常期に達する）。

■３ ■　上記の図で生育が観られなかった培養液（ｐＨ５，
０，４，０，３，０，１，９，１，０）を、７日後に、
Ｐ　Ｈ７，０のＬＢ培地に移す。その結果、元のｐＨが
５．０〜３．０のものは生育した。

これらの結果から、本菌株は、中性付近で良く生育する
が、酸性条件下では休眠状態であると考えられる。

（３）硝酸塩の還元・・・・・陰性 （４）硫化水素の発生・・・・陽性 （５）インドールの生成・・・陰性 （６）Ｖ−Ｐテスト・・・・・陰性 （７）Ｏ−Ｆテスト・・・・・陰性 （８）メチルレッドテスト・・陽性 （９）カタラーゼ・・・・・・陽性 ００）オキシダーゼ・・・・・陽性 （１１）　　ウレアーゼ・・・・・・陰性０２）糖から
の酸及びガスの生成試験 酸もガスも生成しないニ ゲルコース、サッカロース、ラ ムノース、ソルビトール、キシ ロース、ラクトース、ガラクト ース、マルトース、マンノース。

アラビノース、フラクトース。

マンニトール 側　嫌気培養・・・・・・生育する。

（ＩＶ）同定 ａ）バイネ−ム株 以上の諸性質から、本菌株は、「微生物の分類と同定（
下）」（長谷用武治編著、学芸出版センター）及び「バ
ーシーズ・マニュアル・オプ・システマチック・バイオ
テクノロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ
　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
）　Ｊがら検索すると、コリネバクテリウム属の１菌株
と考えられが、既知菌株の何れにも完全に一致しないの
で、コリネバクテリウム・バイネ−Ａ（Ｃｏｒｙｎｅｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｂｉｎｅ−Ａ）　　と命名した。

ｂ）バイネ−Ｂ株 以上の諸性質から、本菌株は、アクロモバクタ属の１菌
株と考えられるが、上記書籍に記載の既知菌株の何れに
も一致しないので、アクロモバクタ・バイネ−Ｂ　（Ａ
ｃｈｒ。

ｍｏｂａｃｔｅｒ　Ｂｉｎｅ−Ｂ）と命名した。

（Ｖ）微生物の培養 それぞれの菌株の培養には、通常の放線菌の培養方法が
用いられる。培養基の炭素源としては、菌に誘導された
キチン質分解活性を喪失させないためにも、コロイダル
キチンやキトサン等のキチン質を主体とし、これに必要
に応じて公知の適当な炭素源を組み合わせて用いられる
こととなる。また、窒素源としては、アンモニウム塩、
硝酸塩、酵母エキス１、　ペプトン等が単独でまたは組
み合わせて用いられ、更にＰ源としては燐酸塩等が用い
られることとなる。更にその他、必要に応じて、無機塩
、例えばアルカリ金属塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、
硫酸亜鉛、塩化マンガン等が適宜に添加されることとな
る。

なお、培養方法としては、固体培地上での培養も可能で
あるが、一般の酵素生産の方法と同様に、液体培養を採
用することが好ましく、その際には、例えば次の如き組
成の液体培地が用いられる。コロイダルキチン：４ｇ、
ＫＨ２Ｏ４：０．７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４：０．３ｇ。

ＭｇＳＯ４・５ＨｚＯ：０．５ｇ、Ｆｅ５Ｏａ・７Ｈｚ
Ｏ：０．０１ｇ、ＺｎＳＯ４：０．００１ｇ、　ＭｎＣ
ｆｆ１ｚ　　：　０．００１　ｇ−酵母エキス：０．２
５ｇ、・ペプトン：　０．２５　ｇ、寒天：１５　　　
ｇ、蒸溜水：１０１００Ｏ！、ＰＨニア、Ｏｏまた、か
かる培養は、バイネ−Ｂ株にあっては、好気的条件下及
び嫌気的条件下の何れにおいても行なわれ得るが、バイ
ネ−ム株にあっては、好気的条件下で行なわれる振盪培
養法や撹拌と通気による深部培養法などにて実施され、
更にそれらの培養温度は、一般に２０〜４０℃程度であ
る。

そして、本発明は、上記のコリネバクテリウム・バイネ
−Ａ若しくはアクロモバクタ・バイネ−Ｂを用いて、更
に好適にはそれら菌株を含む混合微生物を用いて、キチ
ンやキトサンの如きキチン質を含む培地、即ちキチン培
地若しくはキトサン培地にて培養するものである。より
具体的には、先ず、それらの微生物を、キチンまたはキ
１−サンの如きキチン質に微生物用栄養剤を適当量配合
してなる混合培地に接種して、好気的条件下にて発酵を
行なう。この好気発酵は、大気中で所要日数放置するこ
とにより実施することが出来るが、また必要に応じて、
加温したり、撹拌或いは強制通気したりする等の公知の
好気発酵操作が採用される。また、キチン質に配合され
る栄養剤としては、米糠、糖蜜、油粕等があり、このよ
うな栄養剤は、キチン質の１重量部に対して、一般に０
．０５〜２０重景部程度配合される。更に、このキチン
質と栄養剤からなる混合培地には、適当量の水分が加え
られ、発酵可能な水分量（４０〜６０％）程度に調整さ
れることとなる。

次いで、このようにして得られた好気発酵材料（生成物
）には、更にキチン質（キチン乃至ばキトサン）、過リ
ン酸石灰、塩化カリ、微生物用栄養剤（米糠や糖蜜等）
が適宜に配合され、μ）成が行なわれる。なお、この熟
成のための培地は、一般に、上記好気発酵材料の１重量
部当たり、キチン乃至はキトサンを０．１〜１重量部、
過リン酸石灰を１５〜２５重量部、塩化カリを８〜１２
重量部、米糠を０．５〜１．５重量部、糖蜜を０．５〜
１．５重量部程度、配合せしめることにより調整され、
また水分率が４０〜６０％程度の湿潤状態において、１
０〜４０日程度、熟成される。更に、この熟成のための
培地内には、必要に応じて、空気が通気せしめられたり
、加温が施される。

そして、このように熟成して得られた培養相別に対して
、所定量（一般に等量乃至ば２倍量程度）の水が加えら
れ、かかる材料中の可溶成分が溶出せしめられた後、通
常の固液分離操作が施されて、その液相が目的とする培
養液として取得されるのである。この培養液中には、−
１−記の微生物培養によって生成する有効成分の他、微
生物そのものも存在し、例えばキトサン培地を用いた場
合にあっては、未分解のキ１−ザンを始め、低分子キト
ザン、キトサナーゼ、オリゴ糖、キトサン分解微生物（
ハイネーム菌、バイネ−Ｂ菌）等の有効成分が含まれ、
以て優れた抗菌作用、抗線虫作用、植物細胞活性作用が
奏され得るのである。また、キチン培地を用いた場合に
あっても、キチンの分解によってキトサンが生成される
ものであるところから、上記と同様な有効成分を含む培
養液が得られることとなる。

なお、かかる固液分離により、液相より取り出された培
養液は、ｐ　Ｈ１〜３程度の強酸性条件下の溶液であり
、このため該培養液中に存在する各微生物は休眠状態に
あり、従ってかかる培養液の貯蔵中においては、その成
分組成が生産時の状態で比較的良く維持されていると考
えられる。即ち、強酸性条件下にある培養液中では、有
効成分の分解、変性、消化、腐敗が惹起され難いものと
考えられるのである。

また、この培養液中に存在する微生物（バイネ−ム菌、
ハイネーＢ菌）は、種培養菌として有利に利用すること
が出来、例えばこの培養液の一部を、前述の如く、キチ
ン質培地に配合して好気発酵を行ない、更に熟成させる
ことによって、目的とする培養液を得るサイクルを確立
することが出来る。

そして、本発明にあっては、このような培養液からなる
抗菌剤、抗線虫剤或いは植物細胞活性剤を、そのままで
、或いは稀釈して、植物若しくは土壌に適用しようとす
るものであるが、その際、かかる培養液が稀釈されると
、ｐＨは中性付近にまで上昇することとなるところから
、各微生物は活発に活動し始め、生理的に活性な成分が
どんどんと蓄積されるようになるものと考えられる。な
お、この生理的に活性な成分は、微生物共存下では不安
定なもので、長期保存は難しく、且つ生成直後に植物細
胞や病害微生物に作用させるのが好ましいのである。ま
た、かかる培養液をそのまま種子或いは病患部に塗布す
る場合において、該培養液の酸性の状態は、他の病害微
生物、昆虫等にとって生育し難い環境であるために、そ
の−次的排除に寄与し、そして酸性状態に強いハイネ−
Δ菌やバイネ−Ｂ菌のみが生存している状態で、次第に
ｐＨが中性に近づき、活発な活動が惹起されて、前記の
ような現象が現出されるようになるのである。

ところで、かくの如き培養液が病原微生物の増殖を阻害
し、同時に植物細胞を活性化する機構については、未だ
充分に解明されていないが、現時点では、そのメカニズ
ムは、次のように考えられている。先ず、培養液中に存
在するキトサン、低分子キトサン、そのオリゴ糖成分は
、植物に吸収され、細胞を刺激、活性化して、ＤＮＡか
らＲＮＡへの転写を促進して、キトサン分解酵素（キト
サナーゼ）やキチン分解酵素（キチナーゼ）を誘導生合
成する。また、β−グルカナーゼ、抗菌性物質：ファイ
トアレキシンやリグニン形成に関与するフェニルアンモ
ニアリアーゼの生産を促す。

そして、活性化された細胞は、植物生産（蛋白質。

炭水化物、脂質）を増加させると共に、耐病性を獲得す
る。培養液中に存在し、また植物細胞により誘導生合成
されたキチナーゼ、キトサナーゼは、病原性微生物の細
胞壁のキチン、キトサンを分解して崩壊させ、障害を与
え、そこへ抗菌性物質：ファイトアレキシン等が侵入し
て、病原性微生物の生育を阻害する。また、主１−サン
オリゴ糖は、病原性微生物の細胞内に侵入して、その増
殖を抑制する。なお、病原微生物の細胞壁の分解物のう
ち、キトサン、キトサンオリゴ糖は、植物細胞に上記と
同様に作用し、その細胞の活性化に役立つ。

更に、キトサン分解微生物（バイネ−ム菌、バイネ−Ｂ
菌）は植物の根圏に付着し、接近する病害微生物の細胞
壁をキチナーゼ、キトサナーゼで溶解して、植物の根を
病原微生物から守る。要するに、本発明に従う培養液中
に存在する有効成分によって、溶菌作用が直接的に或い
は間接的に惹起され、それにより病原菌の生育を阻害し
て、優れた抗菌作用や抗線虫作用が発揮されるようにな
るのであり、また植物の養分の吸収を向上し、更に植物
細胞を刺激、活性化して、植物生産の向上を図り得るの
である。

そして、その結果、本発明に従う培養液からなる薬剤は
、極めて優れた抗菌作用、抗線虫作用、植物細胞活性作
用を奏し得るのであり、特にキチン質で構成された病原
菌に起因する病害の予防及び防除効果に優れており、例
えばバラやキク等の組頭ガン腫瘤、カーネーションの立
ち枯れ病や黒点病、胡蝶間やキャベツの軟腐病、メロン
の蔓枯れ病や蔓割れ病及び萎凋病（細菌性）、イネ、花
、野菜の育苗期間における病害等に対して、優れた抗菌
作用を示し、またマッノザイセン虫、トマトの根こぶ線
虫等の線虫に対して殺虫乃至は抗線虫効果を示すもので
ある。

また、植物の生育に関して、本発明に係る培養液からな
る薬剤の植物細胞活性作用によって、例えば定植、移植
に際しての植え傷み防止効果が大きい、カーネーション
の親株と育苗期に施用して健苗が得られる、エントウ豆
を移植して多収穫を達成する等の効果に加えて、サンド
豆の多収穫化や、大豆の機械刈り取りを可能にして多収
穫化を達成する、春菊の高品質、多収穫化、メロンの糖
度アップ、きゅうりの高品質、多収穫化を図り、またイ
ネを倒伏し難くして、多収穫化を達成する等の優れた特
徴を発揮するのである。

なお、このような本発明に係る培養液からなる薬剤を植
物に施用するに際しては、従来の薬剤の施用方法と同様
な手法が採用され、例えばそのような薬剤（培養液）を
植物の羅患した患部に直接に振りかけたり、塗り付けた
りする方法、またそのような薬液を植物の種子に付着さ
せて播種する方法、更にはそのような薬液の稀釈液を散
布したり、そのような稀釈液中に植物を浸漬した後、植
え付けたりする方法等が、適宜に採用されることとなる
。

（実施例） 以下に、本発明の実施例を示し、本発明を更に具体的に
明らかにすることとするが、本発明が、そのような実施
例の記載によって何等の制約をも受けるものでないこと
は、言うまでもないとごろである。

また、本発明には、以下の実施例の他にも、更には上記
の具体的記述以外にも、本発明の趣旨を逸脱しない限り
において、当業者の知識に基づいて種々なる変更、修正
、改良等を加え得るものであることが、理解されるべき
である。

隻養散１ゑ裁去斐贋Ｉ 先ず、キトサン粉末１　ｋｇと米糠０．２　ｋｇと糖蜜
Ｑ、　２　ｋｇと油粕０．６　ｋｇからなる混合培地を
用い、これに、コリネバクテリウム・ハイネーＡ株及び
アクロモバクタ・バイネ−Ｂ株の種培養菌を含む培養液
を接種し、培地の水分量を約５０％に調整して、大気中
で１０日間放置することにより、好気発酵せしめた。

次いで、この得られた好気発酵材料の１重量部に対して
、過リン酸石灰２０重量部、塩化カリ１０重量部、米糠
１重量部、糖蜜１重量部及びキトサン０．５重量部を配
合して、室温下において、１ケ月間熟成せしめた。

かくして得られた培養材料に対して、等量の水を添加し
て、かかる培養材料中の可溶成分を溶出せしめた後、固
液分離することにより、その液相である培養液を得た。

この培養液は、強酸性であり、またかかる培養液中には
、キチン培地で生育する微生物が、１ｍｆｆ１当たり約
２゜２×１０５個存在していることが認められた。

ハｉ匁皿■ｉｆ　７鳳劃」旧約Ｍ炙− （１）バラの組頭ガン肺病に対する上記培養液の効果に
ついて調べるために、先ず、羅病しているハラ（品種：
ソニア及びいすも）の根元部分に存在するガン腫に傷を
付けて、前記培養液の５ｍＩ！、／個をガン腫の上にか
けた。ごの培養液施用後５日目にして、何れの品種のバ
ラのガン腫にあっても、その縮小が認められ、更にその
施用後１５日ｒｌ］にして、品種：いずものバラにおい
てガン腫は完全に崩壊した。また他方の品種：フェアの
ハラにあっても、施用後２０日目において、そのガン腫
は完全に崩壊し、組頭ガン肺病の防除効果が優れている
ことが認められた。

（２）数種のバラ台木に対する前記培養液の効果を調べ
るため、次の試験を行なった。供試品種としては、ムル
チフローラ、ムルチフローうに−１，ムルチフローラに
−２，ツクシノイバラを用い、試験区は、５号ビニール
ポット植え、１区１０〜１３株とした。先ず、それぞれ
の品種の苗木をパーライトに挿し木する一方、組頭ガン
腫の擦り潰し液を挿し木用上に潅注した。１力月後、蒸
気消毒法土壌に定植を行なった。そして、上記培養液の
１００倍稀釈液を、定植時と定植７日後に１ポツト当た
り３００ｍ１ｌ権注した。そして、かかる定植後、６力
月後において、供試株を掘り上げ、組頭ガン腫の発病調
査を行ない、その結果を下表に示す。

かかる表から明らかなように、本発明に従う前記培養液
は、植物体の生育には特に影響を及ぼすことなく、組頭
ガン腫に対して、優れた防除効果を示すのである。

エントウーの　盲ｉ エントウ豆（品種ニスナック）を１１月下旬に播種する
一方、手箱に川砂を入れて播種し、発芽させた。１２月
中旬に、この箱播きのエントウ豆を移植した。そして、
この移植に際して、その移植５日前に、前記培養液の１
００倍稀釈液を２１．７ｍ２の割合で施用した。

半の結果、直播き区が１２月上旬より徐々に生育したの
に対し、移植区は、植え傷みせず、生育を始め、１１月
上旬播きのオオサヤエンドウの生育に追いつき、生育は
早く、分枝数も多くなった。開花は３月上旬で、直播き
区より１０日早くなり、段数も多くなった。そして、６
月中旬に立毛調査の結果、直播き区においては、枝数二
８本（分枝数４本）、着さや段数：１０〜１２段であり
、最も多い分枝は３本であった。

これに対して、移植区においては、枝数＝２２本（分枝
数１３本）、着さや段数：１３〜１４段であり、最も多
い分枝は１０本であった。

この結果より、本発明に係る前記培養液を施用すること
によって、移植を嫌うエントウ豆が、移植しても優れた
成長を示し、また収量の増加をもたらすことは明らかで
ある。

トマ　の　こぶ　　友１成験 トマト（品種：モモタロウ）の播種に際して、前記培養
液の５０倍稀釈液を潅注する一方、苗の定植に際して、
苗をかかる培養液の１００倍稀釈液に浸漬した後、定植
して栽培を行なった。

また、比較のために、そのような培養液の施用を全く行
なうことなく、トマトの栽培を行なった。

そして、栽培後、それぞれの１ヘマトの木を掘り上げ、
根を調査したところ、培養液処理を行なったものにあっ
ては、全く根こぶの発生が認められなかったのに対して
、無処理のトマトにあっては、１本当たり数個の根こぶ
が発生していることが認められた。

マツノザイセンチュウに・　る　　、六マツクイ虫によ
る松の枯死の主要な原因と考えられているマツノザイセ
ンチュウに対する前記培養液の殺虫効果を調べた。その
結果を、第１図に示すが、４°Ｃ及び２５゛Ｃの何れの
試験条件下においても、本発明に従う前記培養液は、マ
ツノザイセンチュウに対して優れた殺虫効果を示し、特
に２５°Ｃの試験条件下においては、２４時間後に９０
％以上の線虫を殺すことが認められた。なお、コントロ
ールは１００％の生存率であった。

（発明の効果） 以上の説明から明らかなように、本発明に従うコリネバ
クテリウム・バイネ−ム株若しくはアクロモバクタ・バ
イネ−Ｂ株、またはそれら菌株を含む混合微生物は、キ
チンやキトサンの如きキチン質を分解して、優れた抗菌
作用、抗線虫作用、更には植物細胞活性作用を有する培
養液を与えるものであり、そしてそのような培養液を施
用することによって、各種の病原菌、例えばハラやキク
等の組頭ガン肺病、メロンの蔓枯れ病や蔓割れ病、萎凋
病（細菌性）、キャベツや胡蝶間の軟腐病、カーネーシ
ョンの立ち枯れ病や黒点病等に対して、優れた抗菌作用
を示し、またマツノザイセンチ１つやトマトの根こぶ線
虫等の線虫に対する殺虫乃至は抗線虫効果を示し、更に
はイネ、花、野菜の育苗期間における病害を抑制し、そ
の他活着促進や植え傷み防止を図り、またエントウ豆の
移植を可能ならしめ、イネの倒伏防止を図り、そしてま
た、高品質や多収穫化を達成する等、数々の優れた効果
を奏するのである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例において得られた、マツノザイセンチ
ュウに対する、本発明に従う微生物培養液の殺虫性を示
すグラフである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）コリネバクテリウム属のバイネ−Ａ株若しくはア
   クロモバクタ属のバイネ−Ｂ株またはそれら菌株を含む
   混合微生物を、キチン培地またはキトサン培地にて培養
   して得られた培養材料に対して、水を加えて、固液分離
   して得られる、強酸性条件下の培養液からなる抗菌・抗
   線虫・植物細胞活性剤。
2. （２）キチン及びキトサンを分解する能力を有し、微工
   研菌寄第１０７０２号として寄託されたコリネバクテリ
   ウム・バイネ−Ａ。
3. （３）キチン及びキトサンを分解する能力を有し、微工
   研菌寄第１０７０３号として寄託されたアクロモバクタ
   ・バイネ−Ｂ。