JPH0215092A - 求核性三級有機ホスフインによる特異的ペプチド結合切断 - Google Patents

求核性三級有機ホスフインによる特異的ペプチド結合切断

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JPH0215092A
JPH0215092A JP1083848A JP8384889A JPH0215092A JP H0215092 A JPH0215092 A JP H0215092A JP 1083848 A JP1083848 A JP 1083848A JP 8384889 A JP8384889 A JP 8384889A JP H0215092 A JPH0215092 A JP H0215092A
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cleavage
phosphine
proteins
formula
tertiary
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JP1083848A
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Lois M Hinman
ロイス・エム・ヒンマン
Libby S Miller
リビイ・エス・ミラー
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American Cyanamid Co
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Publication date
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    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な求核性三級有機ホスフィン及び求核性
三級有機ホスフィンによるペプチド結合の特異的切断（
ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｌｅａｎａｇｅ）に関する。本発
明は、特に、タンパク質の切断及びタンパク質のアミノ
酸配列の決定に使用するための化学品剤を提供するのに
有用である。
タンパク質中のアミノ酸配列の決定には、ポリペプチド
鎖を切断してフラグメントとする再現性のある方法が必
要である。アミノ酸配列の分析の計画には、少なくとも
２つの異なる特定の方法によりタンパク質を切断してフ
ラグメントとし、部分的に重複する（ｏｖｅｒｌａｐｐ
ｉｎｇ）ペグチドフラグメントの配列を得ることができ
ることを必要とする。
ポリペプチド鎖を切断するための種々の方法、例えば、
下記する酵素的及び化学的方法が知られている。トリプ
シン、キモトリプシン、サーモリシン及びペプシンなど
のタンパク質分解酵素がアミノ酸配列に基づいた特異的
部位でタンパク質を切断することができることは、当業
者には周知されている。これらの酵素の内、トリプシン
は、リシン又はアルギニン残基のＣ−末端側でポリペプ
チドを切断する最も特異的なプロテアーゼである。
キモトリプシン及びペプシンは、フェニルアラニン、ト
リプトファン又はチロンン残基のＣ−末端側でポリペプ
チドを切断するが、サーモリシンは、ロイシン、インロ
イシン又はバリン残基のＮ−末端側で切断する。［レー
ニンガー、ニー・エル、バイオケミストリー、第二編、
１９７５、ワース・パブリツシャーズ（Ｌｅｈｎｉｎｇ
ｅｒ、Ａ、Ｌ、、　ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒＶ　２ｎｄ
　ｅｄｉｔｉｏｎ、　１９７５．　Ｗｏｒｔｈ　Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｅｒｓ）］。
ポリペプチド鎖を切断するだめの化学的方法のうち、最
も良く知られている方法は、メチオニン残基のＣ−末端
側で切断する臭化シアンの使用を含む。［グロス、イー
１．臭化シアン反応、メソッズ・イン・エンザイモロジ
ー、１１．２３８．（１９６７ＸＧｒｏｓｓ、　　Ｅ、
、　　丁ｈｅ　　ｃｙａｎｏｇｅｎ　　ｂｒｏｍｒｄｅ
　　ｒａａｃｔｉｏｎ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１１．２３８．　（１９６７）］
。
他の化学的切断反応には、Ｎ−ブロモスクシンイミドに
よるトリプトファニル残基での切断が包含される［シェ
フター　ワイ８．　バチョルニク、ニー・及ヒバースタ
イン、ワイ、Ｎ−ブロモスクシンイミドによる酸化塩素
化によるトリプトファニルペプチド結合の選択的化学的
切断、バイオケミ　ス　ト　リ　−、　ｊ　　１　　　
５　０　７　１％１　９　７　６（Ｓｃｈｅｃｔｅｒ。
Ｙ、、　Ｐａｔｃｈｏｒｎｉｋ、　Ａ、　ａｎｄ　Ｂｕ
ｒｓＬｅｉｎ、　Ｙ、　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ｃｈｍｉ
ｃａｌ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａ
ｎｙｌ　ｐｅｐｔｉｄｅｂｏｎｄｓ　ｂｙ　ｏｘｉｄａ
ｔｉｖｅ　ｃｈｌｏｒｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｎ−
ｂｒｏｍ。
ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、　Ｂｉｏｃｈｅｎ＋１ｓｔｒ
ｙ、　Ｉｌ＋　５０７１＋　１９７６）］。
この反応はタンパク質においては比較的効率が良くない
傾向があり、タンパク質におけるトリプト７アニルペプ
チド結合のｔｏ−５０％しか切断しない。主としてトリ
プトファニル残基で反応する追加の化学的切断剤が記載
されている。これらには、２−（２−ニトロフェニル−
スルホニル）−３−メチル−３−ブロモインドレニンＥ
フォンタナ、ユ゛−、、ＢＮＰＳ−スカトールによるト
リプトファンの修飾、メソッズ・イン・エンザイモロジ
＝２５１２９、ｌ　９７２　（Ｆｏｎｔａｎａ、　Ａ、
、　Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍ恒凹位、胆、　２９．１９７
２）　］　、］２，４．６−ドリブロモー４−メチルシ
クロへキサジオン［バースタイン、ワイ・及びバチョル
ニク、ニー、ペプチド及びタンパク質におけるトリプト
ファニルペプチド結合の選択的化学的切断、バイオケミ
ストリー１１　４６４１、　１９７’２（Ｂｕｒｓｔｅ
ｉｎ　Ｙ　　ａｎｄ　　Ｐａｔｃｈｏｒｎｉｋ、　Ａ、
　　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ｃｈｍｉｃａｌ　ｃｌｅａｖ
ａｇｅ　ｏｆｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｙｌ　ｐｅｐｔｉｄ
ｅ　ｂｏｎｄｓ　ｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１１，
４６４１．１９７２）］　、ｏ　−ヨード安息香酸［マ
ホネイ、ダブリュ・シー及びハーモドソン、エム・ニー
、０−ヨード安息香ａによるトリプトファニルペプチド
結合の高い収率１　９７９　（Ｍａｈｏｎｅｙ、　　Ｗ
、Ｃ，ａｎｄ　Ｈｅｒｍｏｄｏｓｏｎ、　　Ｍ、Ａ、。
Ｈｉｇｈ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ
　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｙｌ　ｐｅｐＬｉｄｅ　　ｂｏ
ｎｄｓ　　ｂｙ　ｏ−１ｏｄｏｂｅｎｚｏｉｃ　　ａｃ
ｉｄ、ＢｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ、　１８．３８１０．
１９７９）］及び］Ｎ−クロロスクシンイミドシェフタ
ー、ワイ、、バチョルニク、ニー・及ヒバースタイン、
ワイ、Ｎ−クロロスクシンイミドによる酸化塩素化によ
るトリプトファニルペプチド結合の選択的化学的切断、
バイオケミストリー　１５　５０７１、ｌ　９７６　（
ＳｃｈｅｃＬｅｒ。
Ｙ、、　Ｐａｔｃｈｏｒｎｉｋ、　Ａ、　ａｎｄ　Ｂｕ
ｒｓｔｅｉｎ、　Ｙ、　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ＬｒｙｐＬｏｐｈ
ａｎｙｌ　ｐｅｐｔｉｄｅｂｏｎｄｓ　ｂｙ　ｏｘｉｄ
ａｔｉｖｅ　ｃｈｌｏｒｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｎ
−ｃｈｌ。
ｒｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ、　１５．５０７１．１９７６）］が包含される。
Ｎ−ブロモスクシンイミドの反応と同様に、これらの試
薬のすべてが比較的効率の良くない切断をもたらしそし
て更にいくらかの他のアミノ酸残基の化学的修飾を生じ
させる。更に、ヒドロキシルアミンがアスパラギニル−
グリシルペプチド結合でポリペプチドを切断することは
知られているしホルンスタイン、ビー・及びパリアン、
ジー０．　ヒドロキシルアミンによるＡｓｎ−Ｇｌｙ結
合の切断、メソッズ・イン・エンザイモロジ−４７，１
３２、ｌ　９７７　（ＢｏｒｎｓＬｅｉｎ、　Ｐ。
ａｎｄ　Ｂａ１ｉａｎ、　Ｇ、、　Ｃｌｅａｖａｇｅ　
ｏｆ　Ａｓｎ−Ｇｌｙ　ｂｏｎｄｓｗｉｔｈ　ｈｙｄｒ
ｏｘｙｌａｍｉｎｅ、　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ＋　４７．１３２、１９７７）］。これらの切断法
のすべては、そのままの（ｉｎｔａｃｔ）ジスルフィド
結合を持ったタンパク質に対するよりも、還元及びアル
キル化されたタンパク質に対してのみ最適に作用する。
システィン又はセリンでのポリペプチドの切断は、該ア
ミノ酸残基のデヒドロアラニンへの転化及び、このデヒ
ドロアラニン含有ポリペプチドの酸中でのその後の加水
分解により行うことができることも知られている［ウィ
トコツプ、ビー・及びラマチャンドラン、エル・ブー・
　タンパク質の非酵素的選択的修飾及び切断の進歩、メ
タポリズム、１３．１０１６．１０６４　（ＷｉＬｋｏ
ｐ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ、　Ｌ
、　Ｋ、　；　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｎｏｎｅｎｚ
ｙｍａｔｉｃ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｍｏｄｉｆｉｃａ
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ、　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、　１３．１０１６．
１０６４）：パチョルニク、ニー、及ヒソコロースルキ
ー、エム、ｌシスチン及びセリン残基のデヒドロアラニ
ン残基への転化によるシスチン及びセリン残基でのペプ
チド鎖の非酵素的切断、ジャーナル・オブ・アメリカン
・ケミカル・ソサイエティ−８６，１２０６、ｌ　９５
４　（Ｐａｔｃｈｏｒｎｉｋ、　Ａ、　ａｎｄ　５ｏｋ
ｏｌｏｏｓｌｋ’／、　Ｍ、、　ＮｏｎｅｎｚｙｍａＬ
ｉｃ　ｃｌｅａｖａｇｅｓ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａ
ｈａｉｎｓ　ａｔ　ｃｙｓｔｉｎｅ　ａｎｄ　５ｅｒｉ
ｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈａｉｒ
　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　１ｎｔｏ　　ｄｅｈｙｄｒｏ
ａｌａｎｉｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ、　Ｊ、　Ａｍｅｒ
、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　８６．１２０６．１９６
４）；ソコロースキー、エム・サブ−、ティ及びバチョ
ルニク、ニー１．　シスチン及びセリン残基のデヒドロ
アラニン（ＤＨＡＬ）への転化によるシスチン及びセリ
ン残基でのペプチド鎖の非酵素的切断、（Ｓｏｋｏｌｏ
ｏｓｋｙ、　Ｍ、　５ａｄｅｈ、　Ｔ、　ａｎｄ　Ｐａ
ｔｃｈｏｒｎｉｋ、　Ａ、。
ＮｏｎｅｎｚｙｍａＬｉｃ　ｃｌｅａｖａｇｅｓ　ｏｆ
　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｃｈａｉｎｓ　ａｔｃｙｓｔｉｒ、
ｅ　ａｎｄ　５ｅｒｉｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｔｈｒ
ｏｕｇｈ　ｔｈｅｉｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　１ｎｔｏ
　ｄｅｈｙｄｒｏａｌａｎｉｎｅ　（ＤＨＡＬ）、　Ｍ
　。
システイニルペプチドの特異的化合物切断（■。
Ｔｈｅ　　５ｐｅｃｉｆｉｃ　　ｃｈｅｍｉｃａｌ　　
ｃｌｅａｖａｇｅ　　ｏｆ　　ｃｙｓｔｅｉｎｙ＋ｐｅ
ｐｔ　１ｄｅｓ）、　　ジャーナル・オプ・アメリカン
・ケミカル・ソサイエティ−８６，１２１２，１９６４
（Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　８６，
１２１２．１９６４）］　。
本本発明前に知られていたもので、シスチン残基でポリ
ペプチドを特異的に切断する唯一の化学的試薬はシアン
化物である。［カルチンブーラス、エヌ・及びウッド、
ジエー・エル・　シアン化物１３２、Ｉ　９６４　（Ｃ
ａｒｔｓｉｍｐｏｏｌａｓ、　Ｎ、　ａｎｄ　Ｗｏｏｄ
。
Ｊ、Ｌ、Ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　　ｃｙａｎ
ｉｄｅ　ｗｉｔｈ　ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕ
ｍｉｎ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２３９．
４１３２＋　１９６４）；カルチンブーラス、エヌ・及
びウッド、ジェー・エル・　シアン化物によるシスチン
ペプチドの特異的切断、ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー、２４１，１７９０．１９６４（Ｃ
ａｒｔｉｍｐｏｏｌａｓ、　Ｎ、　ａｎｄ　Ｗｏｏｄ、
　Ｊ−Ｌ、　Ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｌｅａｖａｇｅ　　ｏ
ｆ　　ｃｙｓｔｉｎｅ　　ｐｅｐｔｉｄｅ　　ｂｙ　　
ｃｙａｎｉｄｅ。
Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２４↓、　１７９０
．１９６６）］　、シアン化物はシスチンと反応してス
ルフヒドリル基及びチオシアノ基を生じる。チオシアノ
含有誘導体は、８又はそれ以下のｐＨで環化し、次いで
加水分解を受けてペプチド結合を切断される。システィ
ン又はシスチン残基での切断は、ポリペプチドを２ニト
ロ−５−チオシアノ−安息香酸と反応させることによっ
て達成することができる［ヤコブソン、ジー・アール１
．　シャツファー、エム・エイチ、、　スタフク、ジー
・アール５．バナマン、チー・シー１．　システィン及
びシスチン残基のアミノペプチド結合における高収率で
の特異的化ｏｂｓｏｎ、Ｇ、Ｒ，，５ｃｈａｆｆｅｒ、
Ｍ、Ｈ，，５ｔａｎｋ、Ｇ、Ｒ，。
Ｖａｎａｍａｎ、Ｔ、Ｃ，，５ｐｅｃｉｆｉｃ　　ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ　　ｃｌｅａｖａｇｅｉｎ　　ｈｉｇｈ　
　ｙｉｅｌｄ　ａｔ　　ｔｈｅ　　ａｍｉｎｏ　ｐｅｐ
ｔｉｄｅ　　ｂｏｎｄｓ　ｏｆｃｙｓｔｅｉｎｅ　　ａ
ｎｄ　　ｃｙｓｔｉｎｅ　　ｒｅｓｉｄｕｅｓ、Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ　　ＣｈｅｌＩｌ、。
２４８、６５８３．１９７３）］。ポポリペブチのＮ末
端はこの方法によりブロックされそして、修飾されたア
ミノ酸残基をアラニンに転化するのにニッケル及びナト
リウムボロハイドライドによる追加の処理を必要とする
。シアン化物及びシアノ誘導体によるフェニルアラニル
−セリル及びフェニルアラニルトレオニルベプチド結合
の切断も又報告されている［ウィトコツプ、ビー・及び
ラマチャンドラン、エル・チー・タンパク質の非酵素的
選択的修飾及び切断の進歩、メタポリズム、１３，１０
１６、ｉ　０６４　（Ｗｉｔｋｏｐ、　Ｂ、　ａｎｄ　
Ｒａｍａｃｈａｎｃｒａｎ。
Ｌ、　Ｋ、　：　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｎｏｎｅｎ
ｚｙｍａｔｉｃ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｍｏｄｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ　　ａｎｄ　　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　　
ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｍｅｔａｂ。
１１５ｍ、　１３．１０１６．１０６４）］　。しかし
ながら、この切断反応における特異性の欠如及びシアン
化物による他のアミノ酸残基の付随する修飾のため、こ
の反応はタンパク質化学における切断方法としては希に
しか使用されない。　成る種の三級有機ホスフィンは、
ケラチン繊維の形状を変える能力及び成る条件下で毛髪
の抜毛（ｄｅｐ　ｉ　ｌａ　ｔ　１ｏｎ）を引き起こす
能力を有することが記載された。トラッカー（Ｄｒｕｃ
ｋｅｒ）等への米国特許第３，４８９．８１１号は、ヘ
アーウェービング組成物における如き化粧品用途に好適
な成る種の三級有機ホスフィンを開示している。更に、
その特許は、実質的に臭いのない三級ホスフィンを製造
する方法を開示すると共に請求している。ケラチン繊維
を変形させるため又は抜毛を引き起こすのに特定の有機
ホスフィンを使用することはグレイソン（Ｇｒａｙｓｏ
ｎ）等への米国特許第３．６２８．９１０号に開示され
ている。
グレイソン特許は、特定の有機ホスフィンによるケラチ
ン繊維に対する変形及び抜毛効果は、ケラチン繊維のポ
リペプチド間に存在するシスチンジスルフィド結合連結
部の破壊及び再構成の結果であることを教示している。
更に、成る種の非対称三級有機ホスフィンが抜毛を行う
ことができることが、米国特許第３．７５４．０３５号
に開示されている。ここでも、このような有機ホスフィ
ンの効果は９１毛髪ケラチンのジスルフィド結合を切断
することであることを教示している。有機ホスフィンが
還元剤として作用することによりジスルフィド結合を還
元することができることがモデル化合物を使用して示さ
れた。更に、タンパク質の研究において、還元剤として
トリブチルホスフィンの使用が報告された［ルエッグ、
ニー・チー及びルジンゴ、ジェー・　トリブチルホスフ
ィンによるシスチンジスルフィドの還元切断、メソッズ
・イン・エンザイモロジー、上７．ｉｌｌ−１２６（Ｒ
ｕｅｇｇ、Ｕ、Ｔ、ａｎｄ　Ｒｕｄｉｎｇｏ、Ｊ、Ｒｅ
ｄｕｃｔｉｖａ　Ｃｌｅａｖａｇｅ　　ｏｆ　　Ｃｙｓ
ｔｉｎｅ　　Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｓ　　ｗｉｔｈ　　Ｔ
ｒｉｂｕｔｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ　
　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、４７，１１１−１２６
）］　　。
しかしながら、我々の知る限りでは、本発明以前には、
求核性三級有機ホスフィンが特異的ペプチド結合切断を
行うであろうということは知られていなかった。
故に、本発明の主要な目的は、ペプチド結合切断を行う
ことができる求核性三級有機ホスフィンを提供すること
である。本発明の他の特定の目的は、特異的にペプチド
結合切断を行うことができる求核性三級有機ホスフィン
を提供することである。なお更に、本発明の目的は、こ
のような求核性三級有機ホスフィンによってこのような
ペプチド結合切断を行うのに使用される方法を提供する
ことである。本発明の追加の目的及び利点は、部は、下
記の説明に記載されそして、一部は下記の説明から自明
であるか又は後に説明しそして後記する及び特許請求の
範囲に記載されているような本発明の実施により理解す
ることができる。
本発明の新規な求核性三級有機ホスフィンは、式； ％式％ Ｙ及び２は、　ＮＲ＋−Ｒ＋＋又は−ＯＲｔ　＊であり
、Ｒ１゜及びＲｏは、Ｎと一緒になって、イミダゾリル
、ピリドニル、ピリジル又はモルホリニル環を形成し、 Ｒ１２は−ＣＨ２ＣＨ２０Ｈであり、 ２口 ＲＩ３はＨ又は−ＯＨであり、 Ｒ１４は、　（ＣＨｘ）、ＣＨｚＯＨであり、ｎ、　ｍ
及びＬは独立に０−３であり、Ｒ、−Ｒ、は、独立に、
Ｈ又はアルキル（ｃ＋　　Ｃ４）であり、 但し、ＺとＹは、いずれの化合物についても同一ではな
いものとする、 により表すことができる。
前記新規な求核性三級有機ホスフィンの他に、本発明は
、特異的ペプチド結合切断剤としての求核性三級有機ホ
スフィンの新規な使用にも関する。
後記するようにシスティンにおいて特異的にペプチド結
合を切断するのに本発明で使用される求核性三級有機ホ
スフィンは、式、 Ｑ“ Ｑ−Ｐ−Ｑ’ であり； Ｑ′はＱ又はＱ″であり、 Ｙ及びＺは、　ＯＨ，Ｎ　Ｒ＋ｏＲ１１又はＯＲ＋　ｚ
であり、 Ｒ１゜及びＲ１１は、独立に、Ｈ又はアルキル（Ｃ＋−
〇、）であるか、又は、 Ｒ３゜及びＲ１１は、Ｎと一緒になって、モルホリニル
、ピペリジニル、イミダゾリル又はピロリジニルを形成
し、又は、 Ｒ１１は、ＲＩ。がＨである場合には、アセチル、カル
バミル又はグアニルであり、 ＲＩＢ Ｒ１２は−ＣＨＩ−ＣＨであり；ＲＩＢはＨ又は−ＯＨ
であり； Ｒｌｆｉは−（ＣＨＺ）、−ＣＨ、ＯＨであり；ｎ、　
ｍ及びＬは、独立に、０−３である、により表すことが
できる。
求核性三級有機ホスフィンの製造 本発明の求核性三級有機ホスフィンは、当業者に周知さ
れた方法により製造される。例えば、ジャーナル・オブ
・オルガニック・ケミストリー（Ｊ。
」］ユ勺旦畦、ム止、５１３８（１９６１）、スティレ
ス（Ｓｔｉｌｅｓ）等への米国特許第２．８０３．５９
７号及びグレーソン・ニー（Ｇｒａｙｓｏｎ、　Ａ）等
への米国特許第３，７５４．０３６号を参照されたい。
下記の実施例は本発明をより詳細に説明するのに役立つ
であろう。しかしこの実施例は本発明の範囲を限定する
ものと解するべきではない。一般的方法は、２．２’　
−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）（以後ＡＢＮ
と呼ぶ）のような遊離基開始剤の存在下に、ホスフィン
（ＰＨ３）を末端エチレン性不飽和アミン又はアルコー
ルと加圧された容器中で反応させることである。蒸留に
より反応混合物から所望の生成物（−級又は二級ホスフ
ィン）を分離した後、それを適尚な溶媒に溶解しそして
、再び遊離基開始剤の存在下に、末端エチレン性不飽和
アルコール又はアミンと不活性雰囲気で反応させる。末
端エチレン性不飽和アミンの典型は、３−アリル−１−
ｐ−モルホリン、３−アリル−１−イミダゾール、３−
アリル−１−ピロリドン及び３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミ
ンプロパンである。末端エチレン性アルコールの典型は
、３−ヒドロキシプロペン、アリル−２−ヒドロキシエ
チルエーテル及び６．７−シヒドロキシー４−オキサヘ
プト−１−エン（３−アリルオキシ−１゜２−プロパン
−ジオール）である。
式、 Ｑ“ 響 Ｑ−Ｐ−Ｑ’ において、ＱがＱ“と同じであるかどうかは、上記反応
で使用した反応比に依存する。上記方法に従って製造さ
れた化合物の製品純度は微量分析及び”Ｐ　　ＮＭＲス
ペクトル法により決定することができる。
実施例１ Ａ、３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルホスフィン ５００ｒｒｌの２−プロパツールを含有する１ガロンの
オートクレーブをＰＨ，で６００ｐｓｉに加圧しそして
８５°Ｃに加熱した。Ｎ、Ｎ−ジエチルアリルアミン５
００ｇ（４，４モル）、２−プロパツール５００ｇ及び
２．２′−アゾ−ビス（２−メチルブチロニトリル）ｌ
　Ｏｇ（０、０５モル）の混合物を系に供給して１５０
０ｇの全仕込み量とした。
反応系を６００ｐｓｉで２時間保持し、次いで８５°Ｃ
で１時間加熱した。オートクレーブを排気しそして一級
ホスフィン（２２９ｇ、１．５４モル）を溶媒及び二級
及び三級ホスフィン生成物から蒸留により分離した。
上記Ａからの３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルホス
フィン１８．５ｇを不活性雰囲気を含む反応フラスコ中
で２−プロパツール１５０ｍＱに溶解した。この溶液に
１／２ｇの２，２′−アゾビス（２−メチルブチロニト
リル）を加え、次いで油浴で５５−６０°Ｃに加熱した
。２−プロパツール３ＯｍＱ中のアリルイミダゾール２
８．１ｇの溶液を、反応混合物に、反応混合物の温度を
５５−６０℃に保ちながら、４５分間にわたり滴下によ
り加えた。次いで、反応混合物を７５°Ｃに６時間加熱
した。次いで、溶媒、出発物質及び中間体を高真空下に
除去した。生成物（２７ｇ）、３−ジエチルアミノプロ
ピル　ビス（３−イミダゾリルプロピル）ホスフィンが
、２００℃及び０．ｌｍｍＨｇで蒸留ポット中に残留し
た。所望により、この生成物の更なる精製は、バルブツ
ーバルブ装置（ｂｕｌｂ−ｔｏ−ｂｕｌｂ　ａｐｐａｒ
ａｔｕｓ）（例えば、原管）を使用して２００°Ｃ及び
Ｑ、ｌｍｍＨｇでの蒸留により達成することができる。
３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルホスフィン（実施
例１の上記Ａに記載の如くして製造した）１４．２ｇを
、不活性雰囲気を含む反応フラスコ中で２−プロパツー
ル１５０ｍ（２に溶解した。この溶液に１／２ｇの２．
２′−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）を加え、
次いで溶液を７０°Ｃに加熱した。２−プロパツール５
０ｍＱ中にアリルヒドロキシエチルエーテル２２．４ｇ
を含有する溶液を、反応混合物に、反応混合物の温度を
７０−８０°Ｃに保ちながら、４５分間にわたり滴下に
より加えた。次いで、反応混合物の温度を、更に６時間
７０−８０°Ｃに保ち、その際、３．５時間にＡＢＮｏ
、５ｇを添加した。３−ジエチルアミノプロピル　ビス
（２−ヒドロキシエチルオキシ−３−プロピル）ホスフ
ィン２１ｇの生成物を、溶媒、出発物質及び中間体から
分離しそして実施例１に記載の如くして精製した。
実施例３．４及び５ 表１に記載の三級ホスフィンを、それぞれのアミノアル
キル又はシクロアミノアルキルホスフィン中間体及びア
ルテノールから、実施例１に記載の方法を使用して製造
した。
実施例６ Ａ、３−ヒドロキシプロピルホスフィン本質的に実施例
ＩＡにな記載の如くして、２゜２′−アゾビス（２−メ
チルイソブチロニトリル）の存在下にＰＨ，及びアリル
アルコールから３−ヒドロキシプロピルホスフィンを製
造した。
混合物） 上記Ａの反応生成物１２．０ｇを不活性雰囲気下の反応
フラスコ中で２−プロパツール１５０ｍαに溶解した。
次いで、ＡＢＮｏ、５ｇを加えそして混合物を５０−５
５℃に加熱した。２−プロパツール３ＯｍＱ中に３−ア
リルイミダゾール２８゜１ｇを含有する混合物を３０分
間にわたり反応混合物に滴下により加えた。次いで反応
混合物を合計６時間８０℃で加熱し、その際３時間で０
．２ｇのＡＢＮを添加した。この反応により、３−イミ
ダゾリルプロピルビス（３−ヒドロキシプロピル）ホス
フィン（５）２０％と３−ヒドロキシプロピルビス（３
−イミダゾリルプロピル）ホスフィン（６）８０％の分
離できない混合物が生成され、次いで、このものを出発
物質、中間体及び溶媒から本質的に実施例１に記載の如
くして分離した。
実施例１−６の反応生成物は、元素分析及び”ＰＮＭＲ
により確かめられた。その結果は表２に示されている。
求核性三級有機ホスフィンによるペプチド結合の切断 三級有機ホスフィンによるタンパク質中のペプチド結合
の切断を、約０．１　５　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑの範囲の
濃度及び約３．０−１１．０の範囲のｐＨでのタンパク
質の処理により検討した。
タンパク質の消化の結果は、当業者には周知されている
方法に従って、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルア
ミドゲル電気泳動（Ｓ　Ｄ　Ｓ　−Ｐ　ＡＧＥ）により
決定された。
このような方法は、例えば、ウェーバ−・ブー及びオス
ポーン・エム、ザ・プロテインズ、編者、エイチ・ニュ
ーラス及びアール・エル・ヒル、アカデミツク・プレス
、ニューヨーク１９　７５．１巻、第三板、１７９−２
２３頁（Ｗｅｂｅｒ、　Ｋ、　ａｎｄＯｓｂｏｒｎｅ、
　Ｍ、、　Ｔｈｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、　Ｈ−Ｎｅｕｒ
ａＬｈ　　ａｎｄＲ，Ｌ、　Ｈｉｌｌ、　ｅｄｉｔｏｒ
ｓ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏ
ｒｋ　１９７５．　Ｖｏｌ、　　Ｉ　　３ｒｄ、、　ｐ
ｐ　１７９−２２３）により記載されている。タンパク
質バンドは、クーマシーブルーＲ（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ
　Ｂｌｕｅ−Ｒ）又はゲル：ｌ−ト銀染色（Ｇｅｌ−Ｃ
ｏｄｅ　５ｉｌｖｅｒ　５ｔａｉｎ）のいずれカラ使用
シて染色することにより同定された。このような切断の
特定の例を下記の実施例に示す。これらの実施例は本発
明をより詳細に説明するためのものであって、本発明の
範囲を限定するものとみなすべきではない。
実施例７ 切断 チオグリコレートと比較して、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノ
プロビル−ビス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィン
による毛髪ケラチンの切断を検討した。細かく切り刻ん
だ人間の毛髪を０，２ＭのＮ、Ｎ　−’；エチルアミノ
プロピルービス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィン
又は０．２Ｍのチオグリコール酸ナトリウムを含有する
８Ｍの尿素１Ｏｍｆ２中でｐＨ１ｏ、５．３７°Ｃで４
時間消化した。
消化に続いて、毛髪タンパク質はシェフター等、ジャー
ナル・オブ・インベスティゲイティブ・デルマトロジ−
５２巻、５７　（１９６９Ｘ５ｈｅｃｔｅｒ。
ｅｔ　ａｔ、、　　Ｊ、　　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｒｍ
、５２　、５７　（１９６９）により記載されている方
法に従ってヨード酢酸との反応によりアセチル化された
。消化生成物の試料を、次いで上述の方法に従う５ＤＳ
−ＰＡＧＥにより分析した。第１図は、Ｎ、Ｎ−ジエチ
ルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロキシプロピル）ホ
スフィン及びチオグリコール酸ナトリウムによる毛髪の
消化を比較するこのようなゲルの表示である。第１図に
見られるとおり、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビ
ス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィンによる毛髪の
消化は、ジスルフィド結合の還元のみ（即ち、チオグリ
コレートによる消化）により生成したフラグメントより
低分子量の７ラグメントを生成する。
実施例８ ドロキシプロピル）ホスフィンによるウシ血清アＮ　、
　Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−１ドロキシ
プロピル）ホスフィンのＢＳＡを切断する能力を検討し
、そしてＢＳＡに対するジスルフィド結合還元剤チオグ
リコレート（ＴＧ）及び２−メルカプトエタノール（Ｅ
ｔＳＨ）の効果と比較した。ｐＨ８，０の０．１Ｍトリ
ス緩衝液中のｌＯｍ　ｇ　／　ｍ　ＱのＢＳＡの溶液を
等容量の０．２ＭのＮ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−
ビス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィン、チオグリ
コール酸ナトリウム又は２−メルカプトエタノールと一
緒にし、１５分間煮沸し、次いで還元剤を加えないでＳ
ＤＳ試料緩衝液と１＝１で混合しＩ；。
第２図は、チオグリコレートで処理されたＢＳＡとＮ、
Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロキシプ
ロピル）ホスフィンで処理されたＢＳＡを示す５ＤＳ−
ＰＡＧＥゲルの表示である。
ＥｔＳＨ又はＴＧによるＢＳＡの処理は、６６にモノマ
ーの生成をもたらす。Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノフロピル
ービス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィンによるＢ
ＳＡの処理は、６６にモノマーのより小さいペプチドフ
ラグメントへの切断を生じ、これは共有結合の切断を示
している。ＥｔＳＨ又はＴＧによる６６にモノマーにお
ける共有結合の切断は見られない。
実施例９ 切断 Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロキ
シプロピル）ホスフィンによるその後の切断に対するＢ
ＳＡ中のジスルフィド結合の前以ての還元の効果を検討
した。ＢＳＡのｌ　Ｏｍｇ／　ｍＱ試料を等容量の０．
２Ｍの２−メルカプトエタノール又はチオグリコレート
と混合し、そして沸騰水中で１５分間加熱した。反応混
合物を、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−
ヒドロキシプロピル）ボスフィンにおいて０．２Ｍなら
しめ、そして反応混合物を実施例８の如くして処理した
。
この検討の結果を第２図に示す。第２図は５ＤＳ−ＰＡ
ＧＥゲルにおける表示である。第２図に示される如＜、
ＢＳＡがチオグリコレートで予備処理されている場合に
は、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒド
ロキシプロピル）ホスフィンによるペプチド結合切断は
見られない。これらの結果は、本発明の化合物によるタ
ンパク質の切断を行うためには、そのままの（ｉｎｔａ
ｃｔ）ジスルフィド結合が必要であることを示している
。
実施例１０ 処」Ｌ Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロキ
シプロピル）ホスフィンがマツコラクジラのミオグロビ
ンを切断する能力を検討した。マツコラクジラのミオグ
ロビンはシスティン残基を含まない。特に、このタンパ
ク質は、実施例８に記載の如く０．２Ｍメルカプ）・エ
タノール又はホスフィンで濃度１０ｍｇ／ｍＱで処理さ
れた。
５ＤＳ−ＰＡＧＥは、マツコラクジラのミオグσビンが
Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロキ
シプロピル）ホスフィンにより切断されないことを示し
た。
実施例１１ 他のシスチン含有タンパク質の切断 実施ｆＩＩ８に記載の方法と同じ方法を使用して、ずべ
てシスチン残基を含有する下記のタンパク質；アルコー
ルデヒドロゲナーゼ、ホスホリラーゼＢ１ピルベートキ
ナーゼ、クレアチニンキナーゼ及びホスホグルコ−ムタ
ーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏ−ｍｕｔａｓｅ）　；
をＮ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒドロ
キシプロピル）ホスフィン溶液により処理し、生成物を
５ＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。
上記のタンパク質のすべては、ＳＤＳゲルでの低分子量
ペプチドフラグメントの存在により証明されるようにペ
プチド結合切断を示した。
実施例１２ Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピル−ビス（３−ヒベグチ
ド結合切断の主部位がシスチン残基にあることを確認す
るために、モデルタンパク質として生成したアスパラギ
ナーゼを使用した。アスパラギナーゼのそのままのペプ
チド鎖は、３４，０００の分子量を有する。システィン
残基は、３２１アミノ酸中の残基７６及び１０５にある
。第３図は、アスパラギナーゼとＮ、Ｎ−ジエチルアミ
ノプロピルービス（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィ
ンとの反応の後のアスパラギナーゼの構造及びＳＤＳゲ
ルを表示している。ペプチドフラグメントの寸法は、標
準曲線プロットから決定された。
反応後に見られるペプチドフラグメントは、２６゜５０
０．２３，５００．１９，０００及び８．０００ダルト
ンの分子量に相当する。更に、低分子量のバンド（はぼ
３０００ダルトン）が見られる。反応は、完了するには
至らず、相当な元のポリペプチド（３４ｋ）が切断され
ないで残っている。
もしもホスフィンがすべての可能なシスティン部位を同
時に切断するならば、−次配列から予想され乙フラグメ
ントは、２９７１，８０５５．１１．０２ｆｉ及び２３
．０５４ダルトンである。これは実情ではない。その理
由は、ゲルパターンに存在する２６，５００フラグメン
トが見られるからである。故に、更にポリペプチドの部
分的切断が起こっている。
１つのシスティン残基に的中するアスパラギナーゼの部
分的切断は、アミノ末端から定めて下記の可能な７ラグ
メント；８０５５．２６，０２５．１１．０２６及び２
３，０５４をもたらす。これは依然として１１．０２５
７ラグメントの欠如及び１９．０００分子量のバンドの
存在の説明とはならない。故に、可能な説明としては下
記の如く進めることができる：ｌｌ、０２５がもしも８
０５５フラグメントと架橋するならば、１９，０００フ
ラグメントを生じるであろう。ｉ応が完了するまで行な
うと仮定すれば、両システィン残基の同時的的中がらの
８０５５は残るが、１１，０２５は、過剰の８０５５７
ラグメントにより結合される０）ｏｕｎｄ　ｕｐ）ので
残らないであろう。これは、ゲルデータと合致している
。その理由は、８０５５７ラグメントはゲル中に見られ
るからである。
２３．０５４７ラグメントは、他のフラグメントのほぼ
２倍の濃度で存在していることは、バンドの強度から明
らかである。これは、多分、上記の仮定が成り立つとす
れば、１つへの的中と同時的な的中の２つが等しい割合
で起こるからであろう。
ｕＬＬＬ！ 他の三級有機ホスフィンのペプチド結合切断能力 求核性側鎖を持っている三級有機ホスフィンと求核性側
鎖を持たない三級有機ホスフィンのペプチドを切断する
能力を評価した。前記した消化の基本的方法を使用して
、求核性側鎖を有する三級有機ホスフィンは、システィ
ン残基を含むタンパク質を切断するが、これに対して、
求核性側鎖を持たない三級有機ホスフィンは還元剤とし
て作用するが、このようなタンパク質を切断しないこと
が見出だされた。例えば、トリス−カルボキシ−エチル
、トリス−ｎ−ブチル、トリス−イソブチル、又はトリ
ーンアノエチル側鎖を持った三級有機ホスフィンは、ペ
プチド結合を切断する徴候を示さない。ＢＳＡ及びトリ
ス（イソブチル）ホスフィンを使用したこのような実験
の結果は、第２図に示されている。もとの６６にのタン
パク質のみが反応後に見られる。
本発明の求核性三級有機ホスフィンは、システィン残基
を含むタンパク質を、システィン残基部位で選択的に切
断する。ウシ血清アルブミンのような、多数のシスティ
ン−システィン配列を含むタンパク質は、すべて本発明
の化合物により容易に切断される。より少数のシスティ
ン残基を持った他のタンパク質では、反応が完了するま
で押し進めるには、消化反応に熱を加える必要がある。
本発明の化合物の切断反応は、広いｐＨ範囲（４−１２
）にわたって起こり、そして本発明が関係する当業者に
より最適の結果が得られるように調節することができる
。反応は、種々の適当な水性緩衝液中で行うことができ
る。
システィン残基部位に対する本発明の切断の選択性によ
り、これらの化合物はタンパク質配列のマツピング及び
タンパク質構造分析用の試薬として非常に有用である。
このようなマツピング及び分析は、上述の消化方法を使
用して行うことができる。
ケラチンは、高い百分率のシスティン残基を含有してい
るので、本発明の化合物によるケラチンの処理はケラチ
ンを可溶化するであろう。限定ではなく例として、羽毛
、カルス組織（ｃａｌｌｕｓ　ｔｉｓｓｕｅ）、毛髪及
び爪は、これらの求核性三級有機ホスフィンにより可溶
化することができる。このような可溶化は、動物の皮革
（ｈｉｄｅｓ）のなめしの前の脱毛剤として、又肉に食
い込んだ（ｉｎｇｒｏｖｎ）足指の爪（ｔｏｅｎａ　ｉ
　！ｓ）除去用の剤として有用でありうる。
本発明の化合物は、抗バクテリア活性、抗ウィルス活性
及び抗菌活性も有することができる。その理由は、これ
らの化合物はシスチン含有タンパク質を切断するからで
ある。
特定のタンパク質のエンジニアリングを含む生物工学の
最近の進歩によって、本発明の化合物は、タンパク質の
選択的切断によるタンパク質の修飾において追加の選択
的道具として有用であろう。
本発明の化合物についての前記した使用は、例として述
べられたものであり、本発明の範囲を限定するものでは
ない。これらの化合物の他の用途は、本明細書に含まれ
た開示の助けにより当業者には明らかであり、従って、
このような使用は本発明の範囲内にあるであろう。
本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。
１、そのままの、鋼量ジスルフィド結合又は鎖内ジスル
フィド結合を含むポリペプチド鎖及びタンパク質中のシ
スティン残基においてペプチド結合を切断する方法であ
って、求核性側鎖を持った有機ホスフィンで処理するこ
とより成り、前記ホスフィンは、一般式、 Ｑ“ Ｑ−Ｐ−Ｑ’ 式中、Ｑ、Ｑ’及びＱ“は、ヒドロキシルアルキル、ポ
リ（ヒドロキシアルキル）、アミノアルキル又はシクロ
アミノアルキルであり、ここに、前記アルキルはＣ，−
Ｃ，であり、前記アミンは一級、二級又は三級であり、
前記シクロアミンは窒素を含む５員又は６員の複素環で
ある、 の三級有機ホスフィンから成る群より選ばれるものであ
ることを特徴とする方法。
２、前記三級ホスフィンが、式、 Ｑ＃ Ｑ−Ｐ−Ｑ’ であり、 Ｑ′はＱ又はＱ“であり、 Ｒ８ Ｙ及びＺは、−ＮＲ，。Ｒ１，又は−ＯＲ１！であり、 ＲＩＧ及びＲ１１は、Ｎと一緒になって、イミダグリル
、ピリドニル、ピリジル又はモルホリニル環を形成し、 Ｒ１２はｃＨｔ　　ＣＨＣＨＲ１４であり、Ｒ３，はＨ
又は−ＯＨであり、 Ｒ１，は、　（ＣＨ２）−ＣＨｚＯＨであり、０％ｍ及
びｔは独立に０−３であり、 Ｒ、−Ｒｓは、独立に、Ｈ又はアルキル（Ｃ１−Ｃｔ）
であり、 但し、ＺとＹは、いずれの化合物についても同一ではな
いものとする、 の化合物から選ばれる上記ｌに記載の方法。
３、前記有機ホスフィンが、３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミ
ノプロピルビス−（３−イミダゾリルプロピル）ホスフ
ィンである、 上記２に記載の方法。
４、式、 Ｑ＃ Ｑ−Ｐ−Ｑ’ 式中、 Ｑは−（ＣＨ２）、−ＣＨ −Ｚ であり、 Ｑ′はＱ又はＱ＃であり、 Ｑ“は−（ＣＨ、）、−ＣＨ−Ｃ−Ｙであり、薯 Ｙ及びＺは、　Ｎ　Ｒ＋。Ｒ１１又は−○Ｒ＋２であり
、 ＲＩＧ及びＲ１，は、Ｎと一緒になって、イミダゾリル
、ピリドニル、ピリジル又はモルホリニル環を形成し、 Ｒ目 Ｒ１！はＣＨｚ　　ＣＨＣＨＲ＋＋であり、Ｒ１３はＨ
又は−ＯＨであり、 Ｒ１１は、　　（ＣＨ２）１ＣＨ２０Ｈであり、ｎ、　
ｍ及びしは独立に０−３であり、Ｒ、−Ｒ、は、独立に
、Ｈ又はアルキル（Ｃ３−Ｃ４）であり、 但し、ＺとＹは、いずれの化合物についても同一ではな
いものとする、 の化合物から選ばれる二級ホスフィン。
５、化合物、３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルビス
−（３−イミダゾリルプロピル）ホスフィン。
６、化合物、３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルビス
−（２−ヒドロキシ−エチルオキシ−３−プロピル）ホ
スフィン。
７、化合物、３−イミダゾリルプロピルビス（３−ヒド
ロキシ−プロピル）ホスフィン。
８、化合物、３−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノプロピルビス
（１，２−ジヒドロキシプロピルオキシ−３−プロピル
）ホスフィン。
９、化合物、Ｎ−ピロリドニルエチルビス（１゜２−ジ
ヒドロキシプロピルオキシ−３−プロピル）ホスフィン
。
ＩＯ１化合物、３−ヒドロキシプロピルビス（３−イミ
ダゾリルプロピル）ホスフィン。
【図面の簡単な説明】
第１図は実施例７に記載の５ＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示
す図である。 第２図は実施例８．９及び１３に記載の５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅの結果を示す図である。 第３図は実施例１３に記載の５ＤＳ−ＰＡＧＥの結果を
示す図である。 特許出願人　アメリカン・サイアナミド・カンパＡ開の
毛）をイ火用（マの作用噂１美Ｑ矛支容すＲ構モ示ワ吏
（ている

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、そのままの、鎖間ジスルフィド結合又は鎖内ジスル
    フィド結合を含むポリペプチド鎖及びタンパク質中のシ
    ステイン残基においてペプチド結合を切断する方法であ
    って、求核性側鎖を持った有機ホスフィンで処理するこ
    とより成り、 前記ホスフィンは、一般式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ、Ｑ′及びＱ″は、ヒドロキシルアルキル、ポ
    リ（ヒドロキシアルキル）、アミノアルキル又はシクロ
    アミノアルキルであり、ここに、前記アルキルはＣ＿１
    −Ｃ＿４であり、前記アミンは一級、二級又は三級であ
    り、前記シクロアミンは窒素を含む５員又は６員の複素
    環である、 の三級有機ホスフィンから成る群より選ばれるものであ
    ることを特徴とする方法。 ２、式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑは▲数式、化学式、表等があります▼ であり、 Ｑ′はＱ又はＱ″であり、 Ｑ″は▲数式、化学式、表等があります▼であり、 Ｙ及びＺは、−ＮＲ＿１＿０Ｒ＿１＿１又は−ＯＲ＿１
    ＿２であり、 Ｒ＿１＿０及びＲ＿１＿１は、Ｎと一緒になって、イミ
    ダゾリル、ピリドニル、ピリジル又はモル ホリニル環を形成し、 Ｒ＿１＿２は▲数式、化学式、表等があります▼であり
    、 Ｒ＿１＿３はＨ又は−ＯＨであり、 Ｒ＿１＿４は、−（ＣＨ＿２）＿ｔ−ＣＨ＿２ＯＨであ
    り、ｎ、ｍ及びｔは独立に０−３であり、 Ｒ＿３−Ｒ＿８は、独立に、Ｈ又はアルキル（Ｃ＿１−
    Ｃ＿４）であり、 但し、ＺとＹは、いずれの化合物について も同一ではないものとする、 の化合物から選ばれる三級ホスフィン。
JP1083848A 1988-04-01 1989-04-01 求核性三級有機ホスフインによる特異的ペプチド結合切断 Pending JPH0215092A (ja)

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