JPH02149512A - リポソームおよびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤に関する
。

本発明はさらにリポソーム凝集防止剤に関する。

本発明はさらに蛋白質吸着の抑制されたあるいはリポソ
ームの凝集が防止されたリポソームおよびその製法に関
する。

〔従来の技術〕

リポソームを水溶性あるいは詣溶性の薬物の担体として
利用しようとする試みが広く行われている（Ｇｒｅｇｏ
ｒｉａｄｌｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｎｎ、　Ｎ、　Ｙ、
　Ａｃａｄ。

８８１、、４４６．３１９（１９８５））。また、リポ
ソームの内水相に動物の酸素運搬体であるヘモグロビン
を含有させ、リポソームを人工赤血球として利用する試
みも行われている（特開昭６２−１７８５２１）。しが
しながら、これらの試みにおいて使用されているリポソ
ームのリポソーム膜構成材料はリン脂質やコレスチロー
ルなどの天然あるいは合成の脂質からのみなるものであ
った。

〔発明が解決しようとする課題〕

リポソームを薬物等の運搬体として利用する場合、リポ
ソームを生体の血管内へ投与する必要がある。しかし、
従来一般に使用されている脂質のみから成るリポソーム
は、生体の血漿成分の蛋白質（例えばアルブミン、グロ
ブリン、フィブリノーゲン等）を吸着し、吸着された蛋
白質を介してリポソーム同士が凝集するという問題があ
った。

特にリポソームの粒径が０．１−を越える場合に、この
問題は顕著であった。通常一般に利用されるリポソーム
の粒径は０６１−〜ＩＩＩｍであって、そのままの状態
であれば、毛細血管でも内径が数−はあるので生体の血
管内を通過するのに障害とはならない。しかしながら、
リポソームが血漿成分の蛋白質を吸着することにより凝
集してしまうと、その凝集物の大きさは数十−にも達す
る。もし、血管内で凝集が生起すればリポソームの凝集
物が血管を栓寒し、血流を阻害して生体を死に至らしめ
る危険性がある。

特にリポソームを人工赤血球として利用する場合、大量
のリポソームを投与しなければならず、血漿中でのリポ
ソームの凝集は無視できない問題であった。しかし、血
漿中でのリポソームの凝集を防止する技術は従来全くな
かった。

また、リポソームを生体内に投与した場合、リポソーム
を抗原とした抗体としての蛋白質（イムノグロブリン）
がリポソームに吸着し、貧食細胞（マクロファージ）に
異物認識を与え、リポソームがマクロファージに取り込
まれ、リポソームが短時間のうちに消失してしまう。そ
こでリポソームへの蛋白質吸着を抑制することにより、
血漿中のリポソームの消失時間を遅延させることができ
る。

また、天然の赤血球中のヘモグロビン濃度は約３０％で
あり、全血液中の赤血球の体積割合（ヘマトクリット）
が約５０％であるので、全血液中のヘモグロビン濃度は
約１５％である。従って、天然の赤血球に比べて、粒径
の小さなリポソームにヘモグロビンを内包させる人工赤
血球では、ヘモグロビン濃度３０％以上のヘモグロビン
水溶液をリポソーム化しなければ、人工赤血球懸濁液中
のヘモグロビン濃度を１５％としたとき人工赤血球懸濁
液中の人工赤血球の体積割合が５０％を越えてしまい、
流動性の乏しい懸濁液となり、これを循環血流中に投与
すれば循環動態に悪影響を及ぼす。即ち、できるかぎり
少量の脂質で大量のヘモグロビンをリポソームの内水相
にカプセル化すること、言い替えれば、高いカプセル化
効率の人工赤血球製造方法が望ましい。しかし、透析法
や逆相法ではヘモグロビン濃度３０％以上の高濃度、高
粘度のヘモグロビン水溶液をリポソーム化することは困
難である。また、薄膜法はリポソーム形成脂質を有機溶
媒に均−溶解後、有機溶媒を除去した脂質薄膜に水性溶
液を加えて分散させる方法であるが、有機溶媒を除去し
た後のリポソーム形成脂質は固化、あるいはほとんど流
動性を失った状態となるため、この状態で水性溶液を加
えても容易に水和分散させることができない。水性溶液
が高濃度のヘモグロビン水溶液である場合、グロビンタ
ンパクへの結合水の割合が高く、脂質を水和させるため
の自由水の二が少ないので、さらに、効率の良いリポソ
ーム化が困難であった。従って本発明の目的は、リポソ
ーム表面への蛋白質吸着抑制剤およびリポソーム凝集防
止剤、血漿中での蛋白質吸着が抑制されたリポソームお
よびその製法を提供することにある。さらに本発明の目
的は、高濃度のヘモグロビンを効率良くリポソーム化す
る人工赤血球の製造方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

上記目的を達成するため、本発明者が鋭意研究を重ねた
結果、リポソームの脂質層に特定の蛋白質吸着抑制剤を
含有させることにより血漿中で蛋白質がリポソーム表面
に吸着するのを防止することができ、ひいてはリポソー
ム同士の凝集を防止し、さらに高濃度のヘモグロビン水
溶液を用いて人工赤血球を製造する場合でも、脂質の水
和が容易となり、効率良く高濃度のヘモグロビンをリポ
ソーム化できることを見出し、本発明を完成した。

本発明によれば下記のリポソーム表面への蛋白質吸着抑
制剤、リポソーム凝集防止剤、これらを含有するリポソ
ームおよびその製法が提供される。

ｌ）一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子鎖
部を有する化合物からなることを特徴とするリポソーム
表面への蛋白質吸着抑制剤。

２）疎水性部と親水性高分子鎖部とは共有結合してなる
１項記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。

３）親水性高分子鎖部の重合度は５〜１０００モルであ
る１項または２項に記載のリポソーム表面への蛋白質吸
着抑制剤。

４）親水性高分子鎖部はポリエチレングリコールからな
る１項ないし３項のいずれかに記載のリポソーム表面へ
の蛋白質吸着抑制剤。

５）疎水性部と親水性高分子鎖部とはエーテル結合で結
合している１項ないし４項のいずれかに記載のリポソー
ム表面への蛋白質吸着抑制剤。

６）長鎖脂肪族アルコール、スチロール、ポリオキシプ
ロピレンアルキルまたはグリセリン脂肪酸エステルのア
ルコール性残基に親水性高分子鎖部が結合してなる５項
に記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。

７）リン脂質の親水性基に親水性高分子鎖部が結合して
なる１項ないし４項のいずれかに記載のリポソーム表面
への蛋白質吸着抑制剤。

８）リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである
７項記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。

９）前記結合はトリアジン環を介してなる７項記載のリ
ポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。

１０）前記結合はアミド結合を介してなる７項記載のリ
ポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。

１１）一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子
鎖部を有することを特徴とするリポソーム凝集防止剤。

１２）１項ないし９項のいずれかに記載のリポソーム表
面への蛋白質吸着抑制剤の疎水性部を、リポソーム膜を
構成する脂質層に固定してなり、かつ親水性高分子鎖部
はリポソーム表面から外方向に伸びてなる蛋白質の吸着
が抑制されたリポソーム。

１３）リポソームの内部にはヘモグロビンを内包してな
る１２項記載のリポソーム。

１４）リポソームの懸濁液に１項ないし９項のいずれか
に記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤を添加し
、次いで該懸濁液からリポソームを採取することを特徴
とする蛋白質の吸着が抑制されたリポソームの製法。

１５）１項ないし９項のいずれかに記載のリポソーム表
面への蛋白質吸着抑制剤をリポソーム膜形成脂質と均一
に混合し、得られた混合物を用いてリポソームを形成さ
せることを特徴とする蛋白質の吸着が抑制されたリポソ
ームの製法。

１６）親水性高分子鎖部の一端がリポソーム膜を構成す
る脂質に直接結合し、他端はリポソーム表面から外方向
に伸びてなる蛋白質の吸着が抑制されたリポソーム。

１７）リポソームの懸濁液にリポソーム膜を構成する脂
質と結合しうる状態に活性化された親水性高分子を添加
し、親水性高分子の一端はリポソーム膜を構成する脂質
と結合し、他端はリポソーム表面から外方向に伸びるよ
うに反応させることを特徴とする蛋白質の吸着が抑制さ
れたリポソームの製法。

本発明におけるリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤ま
たはリポソーム凝集防止剤は、一端に疎水性部を有し、
かつ他端に親水性高分子鎖部を有する化合物である。

疎水性部の好適な例としては長鎖脂肪族アルコール、ス
チロール、ポリオキシプロピレンアルキルまたはグリセ
リン脂肪酸エステルのアルコール性残基、およびリン脂
質があげられる。親水性高分子鎖部の好適な例としては
、ポリエチレングリコールがあげられる。

本発明においては特に、ポリエチレングリコール（以下
ＰＥＧという）と上記疎水性部アルコール性残基とがエ
ーテル結合したＰＥＧ付加型非イオン界面活性剤、およ
びＰＥＧとリン脂質とが共有結合したＰＥＧ結合リン脂
質が好ましい。

本発明におけるポリエチレングリコール結合リン脂質と
は、リン脂質の親木部（極性頭部）にポリエチレングリ
コール（Ｐ　Ｅ　Ｇ）を共有結合した構造の分子であり
、−分子中に１または複数のＰＥＧ鎖を含有する。ＰＥ
Ｇ鎖のリン脂質と結合していない側の末端は、水酸基あ
るいはメチル、エチル等の短鎖のエーテル、酢酸、乳酸
等の短鎖のエステルであっても良い。

本発明の目的のためには、ＰＥＧ結合リン脂質分子中の
ＰＥＧ鎖長は、平均重合度で５〜１０００モルの範囲が
望ましく、より好ましくは４０〜２００モルである。こ
の範囲を下回る場合には血漿中でのリポソーム凝集防止
効果が発現され難く、この範囲を上回る場合にはＰＥＧ
結合リン脂質の水溶性が高くなり、リポソーム膜中に固
定され難くなる。

ＰＥＧとリン脂質を共有結合するには、リン脂質の極性
部に反応活性な官能基が必要である。これには、ホスフ
ァチジルエタノールアミンのアミノ基、ホスファチジル
グリセロールの水酸基、ホスファチジルセリンのカルボ
キシル基等があり、ホスファチジルエタノールアミンの
アミノ基が好ましく利用される。

リン脂質の反応活性な官能基とＰＥＧを共有結合させる
には、塩化シアヌルを用いる方法、カルボジイミドを用
いる方法、酸無水物を用いる方法、グルタルアルデヒド
を用いる方法、等がある。

ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基とＰＥＧを
結合するには、塩化シアヌル（２，４，Ｇ−）ジクロロ
−Ｓ−トリアジン）を用いる方法が好ましく利用される
。例えば、モノメトキシポリエチレングリコールと塩化
シアヌルを公知の反応操作で結合することにより、２−
０−メトキシポリエチレングリコール−４，６−ジクロ
ロ−ｓ−トリアジン（活性化ＰＥＧＩ）または２，４−
ビス（〇−メトキシポリエチレングリコール）−６−ク
ロロ−８−トリアジン（活性化ＰＥ０２）が得られる　
ｆＹ、　Ｉｎａｄａ、　ｅｔ　ａｔ、、　Ｃｈｅｗ、　
ｔ、ｅＬｔ、＋　７　、７７３−７７８（１９８０）ｌ
。これらとアミノ基を脱塩酸縮合反応により結合させる
ことで、ホスファチジルエタノールアミンの極性頭部に
ＰＥＧを共有結合させたリン脂質が得られる。ここで、
活性化ＰＥＧＩを用いた場合は一分子のリン脂質中に１
本のＰＥＧ鎖を、活性化ＰＥＧ２を用いた場合は２本の
ＰＥＧ鎖を含有することになる。また、モノメトキシＰ
ＥＧと無水コハク酸を反応させてＰＥＧ末端にカルボキ
シル基を導入し、これとホスファチジルエタノールアミ
ンをカルボジイミド存在下で反応させることにより、ア
ミド結合を介したＰＥＧ結合リン脂質が得られる。

本発明のＰＥＧ結合リン脂質を脂質層に含有するリポソ
ームを製造するには、ＰＥＧ結合リン脂質をリポソーム
形成脂質と予め均一に混合して、得られた混合脂質を用
いて常法によりリポソームを形成させれば良い。ここで
言うリポソーム形成脂質とは、ホスファチジルコリン、
スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタノールアミン
、ホスファチジルセリン等に代表されるリン脂質で卵黄
、大豆その他の天然材料に由来するもの、または、有機
化学的な合成手段により得られるものを単独でまたは混
合して主成分とする。さらに膜安定化剤としてコレスチ
ロール、コレスタノール等のスチロール類や、荷電物質
としてホスファチジン酸、ジセチルホスフエート、高級
脂肪酸等を添加しても良い。リポソーム形成脂質とＰＥ
Ｇ結合リン脂質の混合比は、主成分であるリン脂質に対
して、モル比で０９１モル％〜５０モル％、好ましくは
０．５モル％〜２０モル％、より好ましくは１モル％〜
５モル％である。この範囲を下回る場合には、血漿中で
のリポソーム凝集防止効果が不十分となり、この範囲を
上回る場合には、ＰＥＧ結合リン脂質の可溶化能により
、リポソームが不安定となる。

ＰＥＧ結合リン脂質と予め均一に混合するには、例えば
、両者を揮発性の有機溶媒に溶解させた後、エバポレー
ションにより、有機溶媒を除去すれば良い。もし、脂溶
性の薬物等をリポソームに含有させるのであれば、この
とき、リポソーム形成脂質と共に混合しておけば良い。

得られた混合脂質からリポソームを形成させるには、通
常一般に行われているリポソーム化の方法に従って行う
ことが可能であり、例えば、振とう法、超音波照射法、
フレンチプレス法等いずれの方法を用いても良い。

上記のＰＥＧ結合リン脂質を上記の範囲で使用するかぎ
りにおいては、粒径０．１ｔＩＪａ〜１−のリポソーム
が得られ、内水相に十分な水溶性の薬物や生理活性物質
等を担持させることができる。６得られたリポソームの
脂質層中にはＰＥＧ結合リン脂質が含有されているが、
その含有率は必ずしも初めの脂質との混合割合と同一で
はない。ＰＥＧ結合リン脂質の水溶性が高い場合にはリ
ポソーム化の過程で、その一部が膜外の水相中に溶出し
ている場合もありうる。リポソーム脂質膜中におけるＰ
ＥＧ結合リン脂質の存在状態は明らかではないが、ＰＥ
Ｇ結合リン脂質の疎水性部がリポソーム膜中の疎水性領
域内にあって、親水性のＰＥＧ鎖が膜中の親水性領域か
ら膜外の水性媒体中にかけて存在しているものと推定さ
れる。従って、本方法によって得られたリポソームにお
いては、ＰＥＧ結合リン脂質のＰＥＧ鎖がリポソームの
外水相側及び内水相側の両側に存在することになる。

本発明のＰＥＧ結合リン脂質は、必ずしも水に透明に溶
解する必要はない。しかし、本発明のＰＥＧ結合リン脂
質が水に対し、均一に溶解する場合は、さらに別の方法
によっても本発明のリポソームを製造することができる
。すなわち、通常一般に行われているリポソーム化の方
法に従って製造された、すでに水溶性あるいは脂溶性の
薬物等を担持しているリポソームの懸濁液に、本発明の
ＰＥＧ結合リン脂質をそのままあるいは水溶液として添
加することによっても、本発明のＰＥＧ結合リン脂質を
脂質層中に含有するリポソームを製造することができる
。この場合、ＰＥＧ結合リン脂質は水溶液中でミセル様
の分子集合体を形成して分散していると思われるが、こ
こにリポソームが共存すれば、ＰＥＧ結合結合リン分質
分子中水性部が、リポソーム膜中の疎水性領域に疎水的
相互作用によって固定され、親水性のＰＥＧ鎖はリポソ
ームの外水相側表面にのみ露出した構造となる。

ＰＥＧ結合リン脂質を水溶液として添加する場合、その
濃度は、臨界ミセル濃度以上であれば良いが、その濃度
が低いと、リポソームへの吸着量が不十分となり血漿中
でのリポソーム凝集防止効果が低下し、その濃度が高す
ぎるとリポソームを不安定にし、内水相に担持された水
溶性薬物等の漏れ出しを引き起こしてしまう。従って、
その濃度はリポソーム懸濁液中の濃度で０．０１％〜２
０％、より好ましくは、０．０５％〜２％である。

本発明のＰＥＧ結合リン脂質を脂質層に含有するリポソ
ームは、また別の方法によっても製造することができる
。すなわち反応活性な官能基を持つリン脂質を含有する
リポソームを常法にて製造した後、リポソーム外液に片
末端活性化ＰＥＧを添加してリン脂質と結合させる。例
えば、ホスファチジルエタノールアミンを全リン脂質中
１モル％〜５０モル％含有するリポソームを製造し、塩
基性（ｐ）１９以上）緩衝液中、活性化ＰＥ０２を１％
〜２０％の濃度で添加し、室温で１時間〜２４時間反応
させる。この場合、親水性のＰＥＧ鎖はリポソームの外
水相側表面にのみ露出した構造となる。

本発明におけるポリオキシエチレンエーテル付加型非イ
オン界面活性剤とは、親水性部としてポリオキシエチレ
ン鎖を有し、親油性部（疎水性部）のアルコール性残基
と、このポリオキシエチレン鎖とがエーテル結合により
結ばれた分子構造を持つ非イオン界面活性剤である。例
えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキ
シエチレンスチロールエーテル、ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキ
シブロビレンブロックポリマー、ポリオキシエチレンポ
リオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチ
レングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソ
ルビタン脂肪酸エステル、等である。

ポリオキシエチレン付加型非イオン界面活性剤でも、ポ
リオキシエチレン鎖と親油性部がエステル結合により結
ばれた分子構造を持つポリオキシエチレンエステル付加
型非イオン界面活性剤をリポソームの脂質層に含有させ
た場合には、血漿中での蛋白質吸着抑制およびリポソー
ム凝集防止効果は低い。

本発明の目的のためにはポリオキシエチレンエーテル付
加型非イオン界面活性剤分子中のポリオキシエチレン鎖
長は、エチレンオキサイド平均重合度で５〜１０００モ
ルの範囲が望ましく、より好ましくは１０〜４０モルで
ある。この範囲を下回る場合には血漿中でのリポソーム
凝集防止効果が発現され難く、この範囲を上回る場合に
は非イオン界面活性剤の水溶性が高くなり、リポソーム
膜中に固定され難くなる。

種々のポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界面
活性剤の中でも、特にポリオキシエチレンアルキルエー
テル、ポリオキシエチレンスチロールエーテル、ポリオ
キシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステルをリポソ
ームの脂質層に含Ｈさせた場合に、リポソームの血漿中
での蛋白質吸着抑制および凝集防止効果が高い。

ポリオキシエチレンアルキルエーテルは、ポリオキシエ
チレンと飽和または不飽和の高級脂肪族アルコールがエ
ーテル結合により結ばれた構造を持つ。脂肪族アルコー
ルの炭素数は８〜２２の範囲が好適に用いられる。

ポリオキシエチレンスチロールエーテルとは、ポリオキ
シエチレンとスチロールがエーテル結合により結ばれた
分子構造を持つものを言う。スチロールにはコレスチロ
ール、コレスタノールなどの動物スチロール（ズースチ
ロール）、シトスチロール、スチグマスチロールなどの
植物スチロール（フィトスチロール）、エルゴスチロー
ル、チモスチロールなどの菌類スチロール（マイコスチ
ロール）などが有り、本発明のポリオキシエチレンスチ
ロールエーテル中のスチロールの種類は特に限定する必
要はないが、コレスチロールと同様の側鎖構造を持つも
のが好適に用いられる。

ポリオキシエチレンポリオキシブロピレンアルキルエー
テルとは、飽和または不飽和の高級脂肪族アルコールに
ポリオキシプロピレンがエーテル結合により付加し、さ
らにそのポリオキシプロピレンの末端水酸基にポリオキ
シエチレンがエーテル結合により付加した分子構造を持
つ。ポリオキシプロピレンの平均重合度は２〜８が好ま
しく、脂肪族アルコールの炭素数は８〜２２の範囲が好
適に用いられる。

ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステルとは、グ
リセリン脂肪酸エステル（モノグリセリドまたはジグリ
セリド）の遊離の水酸基にポリオキシエチレンがエーテ
ル結合により付加した分子構造を持つ。脂肪酸は飽和、
不飽和のいずれであっても良いが、その炭素数は８〜２
２の範囲が好適に用いられる。

本発明のポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界
面活性剤を脂質層に含有するリポソームを製造するには
、ポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界面活性
剤をリポソーム形成脂質と予め均一に混合して、得られ
た混合脂質を用いて常法によりリポソームを形成させれ
ば良い。ここで言うリポソーム形成脂質とは、ホスファ
チジルコリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエ
タノールアミン、ホスファチジルセリン等に代表される
リン脂質で卵黄、大豆その他の天然材料に由来するもの
、または、有機化学的な合成手段により得られるものを
単独でまたは混合して主成分とする。さらに膜安定剤と
してコレスチロール、コレス・タノール等のスチロール
類や、荷電物質としてホスファチジン酸、ジセチルホス
フェート、高級脂肪酸等を添加しても良い。リポソーム
形成脂質とポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン
界面活性剤の混合比は、主成分であるリン脂質１モルに
対して、エチレンオキサイド単位で０．５モル〜２０モ
ル、より好ましくは１モル〜５モルである。これは、例
えば、リン脂質としてジパルミトイルホスファチジルコ
リン（分子１ａ７５２）、ポリオキシエチレンエーテル
付加型非イオン界面活性剤としてエチレンオキサイドの
平均重合度２５のポリオキシエチレンフィトスタノール
エーテル（分子間約１５００）を用いる場合、リン脂質
１モルに対するポリオキシエチレンエーテル付加型非イ
オン界面活性剤分子では０．０２〜０．８モル、より好
ましくは０，０４〜０．２モルであり、重量比ではリン
脂質１重量部に対し、ポリオキシエチレンエーテル付加
型非イオン界面活性剤０．０４〜１．８重量部、より好
ましくは０．０８〜０．４重量部である。この範囲を下
回る場合には、血漿中でのリポソーム凝集防止効果が不
十分となり、この範囲を上回る場合には、ポリオキシエ
チレンエーテル付加型非イオン界面活性剤の可溶化能に
より、リポソームが不安定となる。

ポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界面活性剤
をリポソーム形成脂質と予め均一に混合するには、例え
ば、両者を揮発性の有機溶媒に溶解させた後、エバポレ
ーションにより、有機溶媒を除去すれば良い。もし、脂
溶性の薬物等をリポソームに含有させるのであれば、こ
のとき、リポソーム形成脂質と共に混合しておけば良い
。得られた混合脂質からリポソームを形成させるには、
通常一般に行われているリポソーム化の方法に従って行
うことが可能であり、例えば、振とう法、超音波照射法
、フレンチプレス法等いずれの方法を用いても良い。上
記のポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界面活
性剤を上記の範囲で使用するかぎりにおいては、粒径０
．１虜〜１虜のリポソームが得られ、内水相に十分な水
溶性の薬物や生理活性物質等を担持させることができる
。得られたリポソームの脂質層中にはポリオキシエチレ
ンエーテル付加型非イオン界面活性剤が含有されている
が、その含有率は必ずしも初めの脂質との混合割合と同
一ではない。ポリオキシエチレンエーテル付加型非イオ
ン界面活性剤の水溶性が高い場合にはリポソーム化の過
程で、その一部が膜外の水相中に溶出している場合もあ
りうる。リポソーム脂質膜中におけるポリオキシエチレ
ンエーテル付加型非イオン界面活性剤の存在状態は明ら
かではないが、ポリオキシエチレンエーテル付加型非イ
オン界面活性剤分子中の疎水性部がリポソーム膜中の疎
水性領域内にあって、親水性のポリオキシエチレン鎖が
膜中の親水性領域から膜外の水性媒体中にかけて存在し
ているものと推定される。従って、本方法によって得ら
れたリポソームにおいては、ポリオキシエチレンエーテ
ル付加型非イオン界面活性剤のポリオキシエチレン鎖が
リポソームの外水相側及び内水相側の両側に存在するこ
とになる。

本発明のポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界
面活性剤は、必ずしも水に透明に溶解する必要はない。

しかし、本発明のポリオキシエチレンエーテル付加型非
イオン界面活性剤が水に対し、均一に溶解する場合は、
さらに別の方法によっても本発明のリポソームを製造す
ることができる。すなわち、通常一般に行われているリ
ポソーム化の方法に従って製造された、すでに水溶性あ
るいは脂溶性の薬物等を担持しているリポソームの懸濁
液に、本発明のポリオキシエチレンエーテル付加型非イ
オン界面活性剤をそのまま、あるいは水溶液として添加
することによっても、本発明のポリオキシエチレンエー
テル付加型非イオン界面活性剤を脂質層中に含有するリ
ポソームを製造することができる。この場合、ポリオキ
シエチレンエーテル付加型非イオン界面活性剤は水溶液
中でミセルを形成して分散しているが、ここにリポソー
ムが共存すれば、ポリオキシエチレンエーテル付加型非
イオン界面活性剤分子中の疎水性部が、リポソーム膜中
の疎水性領域に疎水的相互作用によって固定され、親水
性のポリオキシエチレン鎖はリポソームの外水相側表面
にのみ露出した構造となる。

ポリオキシエチレンエーテル付加型非イオン界面活性剤
を水溶液として添加する場合、その濃度は、臨界ミセル
濃度以上であれば良いが、その７衰度が低いと、リポソ
ームへの吸着量が不十分となり血漿中でのリポソーム凝
集防止効果が低下し、その濃度が高すぎるとリポソーム
を不安定にし、内水相に担持された水溶性薬物等の漏れ
出しを引き起こしてしまう。従って、その濃度はリポソ
ーム懸濁液中の濃度で０．０１％〜５％、より好ましく
は０．１％〜２％である。

人工赤血球を製造する場合、非イオン界面活性剤とリポ
ソーム形成脂質との混合割合は０．５〜３０重量％が好
ましく、この範囲を下回る場合には効率の良いヘモグロ
ビンのリポソーム化が達成され難く、この範囲を上回る
場合には、非イオン界面活性剤の可溶化能により、生成
する人工赤血球が不安定となる。

本発明で使用するリポソーム形成脂質は、ホスファチジ
ルコリン（レシチン）、スフィンゴミエリン、ホスファ
チジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン等に代
表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天然材料に由来
するもの、または、有機化学的な合成手段により得られ
るものを単独でまたは混合して主成分とする。さらに膜
安定化剤としてコレスチロール、コレスタノール等のス
チロール類や、荷電物質としてホスファチジン酸、ジセ
チルホスフエート、高級脂肪酸等を添加しても良い。

特に、これらリン脂質が不飽和結合を有する場合、これ
が過酸化反応を受けることによって発生する脂質過酸化
物による毒性の問題、また内包ヘモグロビンが酸化変性
を受は易いといった問題があるため、この不飽和基に水
素添加したものが好適に用いられる。例えば、入手が容
易な水素添加天然リン脂質として水素添加卵黄レシチン
、水素添加大豆レシチンなどがある。これら水ｘｉ加天
然リン脂質を主成分とする場合、その相転移温度は５０
℃程度と高温である。一般にリポソームは相転移温度以
下で操作しなければ形成され難いが、ヘモグロビンをリ
ポソーム化する場合、４０℃以上で操作するとヘモグロ
ビンが熱変性を受けてしまう。しかし、リポソーム形成
脂質としてスチロール類を含有させれば、脂質混合物全
体として明確な相転移点が存在しなくなり、操作温度が
主成分リン脂質の相転移温度以下でも十分に人工赤血球
を製造することができる。また、生成した人工赤血球同
士が凝集することを防止するために通常、荷電物質を含
有させるが、これには高級飽和脂肪酸が好ましく用いら
れる。これらリポソーム形成脂質の混合比率はリン脂質
１重量部に対してスチロール類０．２〜１重量部、高級
飽和脂肪酸０．０５”−０，２重量部が適当である。

非イオン界面活性剤とリポソーム形成脂質を混合するに
は、例えばクロロホルム、ジクロロメタン等の非イオン
界面活性剤とリポソーム形成脂質を均一に溶解しうる揮
発性有機溶媒に、これらを均一溶解後、有機溶媒をエバ
ポレーション、凍結乾燥、スプレードライ等の方法によ
り除去すれば良い。

得られた混合脂質から人工赤血球を形成させるには、ヘ
モグロビン水溶液中に該混合脂質を水和分散させればよ
い。水和分散の方法は単に両者を機械的に混合するだけ
でも良いが、さらに、フレンチプレス細胞破砕機等を用
いての高圧吐出処理を行うことが望ましい。ヘモグロビ
ン水溶液のヘモグロビン濃度は３０〜６０％が好ましく
、この範囲を下回る場合には、ヘモグロビンのカプセル
化効率が低く、この範囲を上回る場合には、ヘモグロビ
ン水溶液の粘度が著しく高くなり、非イオン界面活性剤
を加えた場合でも、水和分散が困難になる。

特に、水素添加リン脂質、スチロール類、高級飽和脂肪
酸を上記範囲で混合したリポソーム形成脂質と上記範囲
のヘモグロビン水溶液を使用する本発明の人工赤血球の
製造方法においては、ヘモグロビンカプセル化効率の著
しく低い粒径０、旧μｓ〜０．０３４ａｕの人工赤血球
は殆ど生成せず、大部分が粒径０．１節以上のヘモグロ
ビンカプセル化効率の高い人工赤血球となる。

得られた人工赤血球の脂質層中には非イオン界面活性剤
が含有されているが、その含有率は必ずしも初めの脂質
との混合割合と同一ではない。

非イオン界面活性剤の水溶性が高い場合にはリポソーム
化の過程で、その一部が膜外の水相中に溶出している場
合もありうる。

次に実施例および比較例を示して本発明をさらに具体的
に説明する。

実施例　１ 水素添加卵黄レシチンｆｉ３０ｍｇ、コレスチロール３
１７１１１ｇ５　ミリスチン酸５３ａ＋ｇ、ポリオキシ
エチレンフィトスタノールエーテル（エチレンオキサイ
ド平均重合度２５、日光ケミカルズ■社製ＢＰＳＨ２５
）１５（ｌｏｇをジクロロメタン２０ｍ１に溶解し、エ
バポレーションにより有機溶媒を除去した。得られた混
合脂質に５０％ヘモグロビン水溶液２０ｍ１を加え、振
とう混合後、２５０ｋｇ／ｅｍ２の圧力でフレンチプレ
ス処理を１０回繰り返した。得られたフレンチプレス処
理液を生理食塩水により１０倍に希釈して遠心分離処理
（１７，０ＯＯｒ、ｐ、ｍ、３０分）し、沈澱リポソー
ムを生理食塩水１４０ｍ１により、さらに遠心洗浄を２
回繰り返した。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグロビン
濃度で５％となるように生理食塩水中に懸濁させた。得
られたリポソームの平均粒径は０．２ｔＩｒｎであった
。このリポソーム懸濁液０．１ｍｌとクエン酸加ヒト血
漿０．５ｍｌを混合し、光学顕微鏡（４００倍）により
観察したところ、１節を越えるリポソーム凝集物はほと
んど認められなかった。

実施例　２ 水素添加卵黄レシチン６３０ｍｇ、コレスチロール３１
７　ｍｇ、　ミリスチン酸５３ｎｇをジクロロメタン２
０ｍ１に溶解し、エバポレーションにより有機溶媒を除
去した。得られた混合脂質に５０％ヘモグロビン水溶液
２０ｍ１を加え、振とう混合後、５００ｋｇ／ｅｍ２の
圧力でフレンチプレス処理を１０回繰り返した。得られ
たフレンチプレス処理液を生理食塩水により１０倍に希
釈して遠心分離処理（１７，００Ｏｒ、ｐ、Ｉｌｌ、３
０分）し、沈澱リポソームを生理食塩水１４０ｍ１によ
り、さらに遠心洗浄を２回繰り返した。洗浄後の沈澱リ
ポソームをヘモグロビン濃度で５％となるように生理食
塩水中に懸濁させた。得られたリポソームの平均粒径は
０．２ｔ１Ｍであった。このリポソーム懸濁液０．１ｍ
ｌとクエン酸加ヒト血漿０．５ｍｌを混合し、光学顕微
鏡（４００倍）により観察したところ、リポソームは完
全に凝集し、その凝集物の大きさは５０−を越えるもの
であった。

ヘモグロビン濃度で５％に調整した上記のリポソーム懸
濁ｍ　１　ｍｌに、２％のポリオキシエチレンオレイル
エーテル（エチレンオキサイド平均重合度２０）を含む
生理食塩水９ｍｌを加え、室温で３０分間放置した後、
生理食塩水により１０倍に希釈して遠心分離処理（１７
，ｏｏＯｒ、ｐ、＋ｎＪＯ分）し、沈澱リポソームを生
理食塩水１４０ｍ１により、さらに遠心洗浄を２回繰り
返した。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグロビン濃度で
５％となるように生理食塩水中に懸濁させた。このリポ
ソーム懸濁液０．１ｍｌとクエン酸加ヒト血漿０．５ｍ
ｌを混合し、光学顕微鏡（４００倍）により観察したと
ころ、１庫を越えるリポソーム凝集物はほとんど認めら
れなかった。

実施例　３ 実施例１のポリオキシエチレンフィトスタノールのかわ
りに、ポリオキシエチレンポリオキシブロビレンセチル
エーテル（エチレンオキサイド平均重合度２０、プロピ
レンオキサイド平均重合度８）１５０　ｍｇを用いる以
外は、実施例１と全く同様の検討を行ったところ、実施
例１と同様の結果を得た。

実施例　４ 実施例１のポリオキシエチレンフィトスタノールのかわ
りに、ポリオキシエチレングリセリルジステアレート（
エチレンオキサイド平均重合度３０）１５（１ｍｇを用
いる以外は、実施例１と全く同様の検討を行ったところ
、実施例１と同様の結果を得た。

比較例　１ 実施例１のポリオキシエチレンフィトスタノールエーテ
ルのかわりに、エチレンオキサイド平均重合度２５のポ
リオキシエチレンモノステアレート１５０ｍｇを用いる
以外は実施例１と全く同様の検討を行ったところ、リポ
ソームは完全に凝集し、その凝集物の大きさは５０ｍを
越えるものであった。

尚、ポリオキシエチレンジステアレート（ｎ　−１０ｏ
ｒ　１４０）についても同様の結果であった。

比較例　２ 実施例２のポリオキシエチレンオレイルエーテルにかえ
て、ポリオキシエチレンモノステアレートを用いたとこ
ろ、リポソームは完全に凝集し、その凝集物の大きさは
５０趣を越えるものであった。

実施例　５ 水素添加卵黄レシチン１．８１ｇ、コレスチロール０．
９１３ｇ、ミリスチン酸０．１５３ｇ、非イオン界面活
性剤であるポリオキシエチレンフィトスタノール（エチ
レンオキサイド平均重合度２５、日光ケミカルズ■社製
Ｂ　Ｐ　Ｓ　Ｈ２Ｓ）　０．１４２ｇをジクロロメタン
２０ｍ１に溶解し、エバポレーションにより有機溶媒を
除去した。得られた混合脂質に５０％ヘモグロビン水溶
液２０ｍ１を加え、振とう混合後、２５０ｋｇ／Ｃ１１
１２の圧力でフレンチプレス処理を１０回繰り返した。

得られたフレンチプレス処理液を生理食塩水により１０
倍に希釈して、孔径０．４５ｍのフィルターで濾過した
後、遠心分離処理（１７，０００ｒ、ｐ、ｍ、３０分）
し、沈澱リポソームを生理食塩水１４０ｍ１により、さ
らに遠心洗浄を２回繰り返した。ヘモグロビンカプセル
化効率の低い人工赤血球は比重が小さいため、このとき
沈澱せず除去される。洗浄後の沈澱人工赤血球をヘモグ
ロビン濃度で５％となるように生理食塩水中に懸濁させ
た。得られた人工赤血球の平均粒径は０．２塵であった
。この人工赤血球懸濁液中の全脂質濃度は３３ｍｇ／ｍ
ｌ、ヘモグロビン回収率は１２％であった。

非イオン界面活性剤を加えずに、実施例と全く同様の操
作を行ったところ、平均粒径０．２□□□の人工赤血球
が得られ、ヘモグロビン濃度で５％となるように生理食
塩水中に懸濁させた人工赤血球懸濁液中の全脂質濃度は
３９■／ｍｌ、ヘモグロビン回収率は７％であった。

実施例　６ ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン１５０
ｍｇ、活性ＰＥＧ２　（ＰＥＧ平均分子量５．０００　
Ｘ　２．生化学工業側製）２．５ｇを脱水クロロホルム
５０ｍ１に溶解、炭酸ナトリウム２ｇを加えて、室温終
夜反応させた。ニンヒドリン呈色の消失により反応終了
を確認後、反応液を濾過し、ヘキサンを加えて再沈精製
、真空乾燥してＰＥＧ結合リン脂質を得た。

水素添加卵黄レシチン［１３０ｍｇ、コレスチロール３
１７１１ｇ、ミリスチン酸５３ｍｇ、上記のＰＥＧ結合
リン脂質１５０■をジクロロメタン２０ｍ１に溶解し、
エバポレーションにより有機溶媒を除去した。

得られた混合脂質に５０％ヘモグロビン水溶液２０ｍ１
を加え、振とう混合後、２５０ｋｇ／ｃｍ２の圧力でフ
レンチプレス処理を１０回繰り返した。得られたフレン
チプレス処理液を生理食塩水により１０倍に希釈して遠
心分離処理（１７，０ＱＯｒ、ｐ、ｍ、３０分）し、沈
澱リポソームを生理食塩水１４０ｍ１により、さらに遠
心洗浄を２回繰り返した。洗浄後の沈澱リポソームをヘ
モグロビン濃度で５％となるように生理食塩水中に懸濁
させた。得られたリポソームの平均粒径は０．２ｍであ
った。このリポソーム懸濁液０．１ｍｌとクエン酸加ヒ
ト血漿０．５ｍｌを混合し、光学顕微ｍ（４００倍）に
より観察したところ、１坤を越えるリポソーム凝集物は
ほとんど認められなかった。

実施例　７ 水素添加卵黄レシチン６３０ａ＋ｇ、コレスチロール３
１７麿ｇ１　ミリスチン酸５３＋＋ｇをジクロロメタン
２０ｍ１に溶解し、エバポレーションにより有機溶媒を
除去した。得られた混合脂質に５０％ヘモグロビン水溶
液２０ｍ１を加え、振どう混合後、５００ｋｇ／ｃｍ２
の圧力でフレンチプレス処理を１０回繰り返した。得ら
れたフレンチプレス処理液を生理食塩水により１０倍に
希釈して遠心分離処理（１７，０００ｒ、ｐ、ｓ、３０
分）し、沈澱リポソームを生理食塩水１４０ｍ１により
、さらに遠心洗浄を２回繰り返した。洗浄後の沈澱リポ
ソームをヘモグロビン濃度で５％となるように生理食塩
水中に懸濁させた。得られたリポソームの平均粒径は０
．２−であった。このリポソーム懸濁液０．１ｍｌとク
エン酸加ヒト血漿０．５ｍｌを混合し、光学顕微鏡（４
００倍）により観察したところ、リポソームは完全に凝
集し、その凝集物の大きさは５０ｔＩｎを越えるもので
あった。

ヘモグロビン濃度で５％に調整した上記のリポソーム懸
濁液１ｍｌに、１％の実施例６で得られたＰＥＧ結合リ
ン脂質を含む生理食塩水９ｍｌを加え、室温で３０分間
放置した後、生理食塩水により１０倍に希釈して遠心分
離処理（１７，０００ｒ、ｐ、膳、３０分）し、沈澱リ
ポソームを生理食塩水１４０ｍ１により、さらに遠心洗
浄を２回繰り返した。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグ
ロビン濃度で５％となるように生理食塩水中に懸濁させ
た。このリポソーム懸濁液０．１ｍｌとクエン酸加ヒト
血漿０．５ｍｌを混合し、光学顕微鏡（４００倍）によ
り観察したところ、１ｔＩＭを越えるリポソーム凝集物
はほとんど認められなかった。

実施例　８ ホスファチジルエタノールアミンを３０モル％含有する
水素添加大豆レシチンを水素添加卵黄レシチンのかわり
に用いる以外は実施例７と同様にして、ヘモグロビン含
有リポソームを得た。０．１Ｍはう酸緩衝液（ｐＨ１０
）中ヘモグロビン濃度で５％に調整した上記のリポソー
ム懸濁液１ｍｌに、活性化ＰＥＧ２を１０ｈｇｉ加し、
室温終夜反応させた。

生理食塩水により１０倍に希釈して遠心分離処理（１７
，ｏｏＯｒ、９．ｍ、３０分）し、沈澱リポソームを生
理食塩水１４０ｍ１により、さらに遠心洗浄を２回繰り
返した。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグロビン濃度で
５％となるように生理食塩水中に懸濁させた。このリポ
ソーム懸濁液０．１ｍｌとクエン酸加ヒト血漿０．５ｍ
ｌを混合し、光学顕微鏡（４００倍）により観察したと
ころ、１如を越えるリポソーム凝集物はほとんど認めら
れなかった。

実施例　９ モノメトキシＰ　Ｅ　Ｇ５０００　（ユニオンカーバイ
ド社製）　５０ｇを１．２−ジクロロメタン２５０ｍ１
に溶解、無水コハク酸５ｇとピリジン４ｍｌを加えて、
３日間沸点還流した。濾過、エバポレーション後、１０
０　ｍｌの蒸留水に溶解し、水相をエーテルで洗浄後ク
ロロホルム１００ｍ１に抽出した。エバポレーション後
、酢酸エチルで再結晶して片末端カルボキシＰＥＧを得
た。これを７２５ｍｇとジパルミトイルホスファチジル
エタノールアミンｌＯｈｇ、さらにジシクロへキシルカ
ルボジイミド３０ｍｇを３０ｍ１のクロロホルムに溶解
、５０℃で終夜反応させた。反応液をヘキサン３００ｍ
１に再沈してアミド結合を介するＰＥＧ結合リン脂質を
得た。これを用いた実施例６および７と同様の実験で同
様の結果を得た。

〔発明の効果〕

以上詳しく説明したように、本発明によればリポソーム
の脂質層に特定の蛋白質吸着抑制剤を含有させることに
よって、血漿中でのリポソームへの蛋白質の吸着を抑制
し、リポソームの凝集を防止したリポソームを提供する
ことができる。

蛋白質吸着抑制剤は疎水性部と親水性高分子鎖部からな
り、親水部がリポソームの表面に露出していることによ
って、血漿タンパクのリポソームへの吸着が抑制され、
その結果、血漿中でのリポソームの凝集が防止される。

従って、生体の血管内へリポソームを投与した場合でも
、リポソームの凝集物が血管内で栓寒しで血流を阻害す
る心配がなく、特に大量のリポソームを投与する必要が
ある人工赤血球として有用性が高い。

本発明のリポソームの製造方法は、リポソーム形成脂質
と蛋白質吸着抑制剤を予め均一に混合して、得られた混
合脂質を用いて常法によりリポソームを形、成させる方
法及び常法により製造されたリポソームの懸濁液に蛋白
質吸着抑制剤を添加する方法であるので、従来知られて
いるリポソームの応用技術のいずれの例にも広く適用す
ることができる。

さらに本発明のリポソーム蛋白質吸着抑制剤を使用する
ことにより、リポソーム形成脂質の水和分散が促進され
、高濃度のヘモグロビン水溶液を用いた場合でも、ヘモ
グロビンカプセル化効率の高い人工赤血球を高い収率で
得ることができる。

特に、水素添加リン脂質、スチロール類、高級飽和脂肪
酸を混合したリポソーム形成脂質と高濃度のヘモグロビ
ン水溶液を使用する本発明の人工赤血球の製造方法にお
いては、ヘモグロビンカプセル化効率の著しく低い粒径
０．０１ｐ〜Ｄ、ｒＪ３ｕｎの人工赤血球は殆ど生成せ
ず、大部分が粒径０．１−以上のヘモグロビンカプセル
化効率の高い人工赤血球となる。

本発明の製造方法で得られるヘモグロビンカプセル化効
率の高い人工赤血球では、人工赤血球懸濁液中のヘモグ
ロビン濃度を高くしても、全脂質濃度は低く抑えること
ができるので、循環血流中へ投与した時の循環動態に与
える悪影響も少なく、また脂質に由来する毒性も低く抑
えることができる。しかも、従来の脂質分散のための手
法はそのまま適用できるので、工業的な人工赤血球の製
造方法として広範に応用し得る極めて優れた方法である
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子鎖
   部を有する化合物からなることを特徴とするリポソーム
   表面への蛋白質吸着抑制剤。 ２）疎水性部と親水性高分子鎖部とは共有結合してなる
   請求項１記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 ３）親水性高分子鎖部の重合度は５〜１０００モルであ
   る請求項１または２に記載のリポソーム表面への蛋白質
   吸着抑制剤。 ４）親水性高分子鎖部はポリエチレングリコールからな
   る請求項１ないし３のいずれかに記載のリポソーム表面
   への蛋白質吸着抑制剤。 ５）疎水性部と親水性高分子鎖部とはエーテル結合で結
   合している請求項１ないし４のいずれかに記載のリポソ
   ーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 ６）長鎖脂肪族アルコール、スチロール、ポリオキシプ
   ロピレンアルキルまたはグリセリン脂肪酸エステルのア
   ルコール性残基に親水性高分子鎖部が結合してなる請求
   項５に記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 ７）リン脂質の親水性基に親水性高分子鎖部が結合して
   なる請求項１ないし４のいずれかに記載のリポソーム表
   面への蛋白質吸着抑制剤。 ８）リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである
   請求項７記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 ９）前記結合はトリアジン環を介してなる請求項７記載
   のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 １０）前記結合はアミド結合を介してなる請求項７記載
   のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤。 １１）一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子
   鎖部を有することを特徴とするリポソーム凝集防止剤。 １２）請求項１ないし９のいずれかに記載のリポソーム
   表面への蛋白質吸着抑制剤の疎水性部を、リポソーム膜
   を構成する脂質層に固定してなり、かつ親水性高分子鎖
   部はリポソーム表面から外方向に伸びてなる蛋白質の吸
   着が抑制されたリポソーム。 １３）リポソームの内部にはヘモグロビンを内包してな
   る請求項１２記載のリポソーム。 １４）リポソームの懸濁液に請求項１ないし９のいずれ
   かに記載のリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤を添加
   し、次いで該懸濁液からリポソームを採取することを特
   徴とする蛋白質の吸着が抑制されたリポソームの製法。 １５）請求項１ないし９項のいずれかに記載のリポソー
   ム表面への蛋白質吸着抑制剤をリポソーム膜形成脂質と
   均一に混合し、得られた混合物を用いてリポソームを形
   成させることを特徴とする蛋白質の吸着が抑制されたリ
   ポソームの製法。 １６）親水性高分子鎖部の一端がリポソーム膜を構成す
   る脂質に直接結合し、他端はリポソーム表面から外方向
   に伸びてなる蛋白質の吸着が抑制されたリポソーム。 １７）リポソームの懸濁液にリポソーム膜を構成する脂
   質と結合しうる状態に活性化された親水性高分子を添加
   し、親水性高分子の一端はリポソーム膜を構成する脂質
   と結合し、他端はリポソーム表面から外方向に伸びるよ
   うに反応させることを特徴とする蛋白質の吸着が抑制さ
   れたリポソームの製法。