JPH02114181A - ヒトプラスミン−α↓２−プラスミンインヒビター複合体測定用の免疫学的測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ａ、産業上の利用分野 本発明は汎発性血管向凝固疾患（ＤＩＣ）等の患者血漿
中に存在するヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒ
ビター複合体を、高感度に測定できる免疫学的測定試薬
に関する。

ｂ、従来技術および発明が解決しようとする課題ヒトの
α２−プラスミンインヒビターは青水と開弁によって最
初に単離・精製され、線維素溶解酵素であるプラスミン
のエステラーゼ活性を瞬間的に阻害する強力なプラスミ
ンインヒビタ−であり、１１．７％の糖を含む分子旧約
６７、０００の１本鎖の糖蛋白質であることが知られて
いる（Ｈｏｒｏｉ　＆ＡＯｋｉ；　　丁ｈｅ　　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ。

２５１、５９５６−５９６５　（１９７Ｂ））。

また、ヒトのα２−プラスミノーンヒごターは、プラス
ミンの線維溶解作用を阻止する部位（Ｂ。

Ｗｉｍａｎ　＆　Ｄ、　Ｃｏ１１ｅｎ、　Ｊ、Ｂ、Ｃ，
２５４，９２９１−９２９７（１９７９））以外にカル
ボキシル基末端側のプラスミン結合部位（Ｂ、　Ｗｉｍ
ａｎ　＆　Ｄ、　Ｃｏ１１ｅｎ；　ＥｕｒｏｐｅａｎＪ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　８
４．５７３−５７８　（１９７８））と、アミノ基末端
のフィブリン結合部位（Ｙ。

５ａｋａｔａ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉ
ｓ　ｆ？ｅｓｅａｒｃｈ　１６．２７９−２８２　（１
９７９））を有していることが知られている。

従ってヒトα２−プラスミンインヒビターはプラスミン
活性をほとんど瞬間的に阻害し、かつプラスミンと１：
１の割合で結合し複合体を形成する（Ｂ、　Ｗｉｍａｎ
　＆　Ｄ、　Ｃｏ１１ｅｎ；　Ｊ、Ｂ、Ｃ，２５４，９
２９１−９２９７（１９７９））。

例えばＤＩＣＩＣ患者血漿中口ウロキナーゼる血栓溶解
療法実施中の患者血漿中ではプラスミノーゲンの活性化
が起り、生成したプラスミンとα２−プラスミンインヒ
ビターが反応して両者の複合体が形成される。

最近、血漿中のプラスミン−α２−プラスミンインヒビ
ター複合体の定量は、血栓溶解療法のモニターやＤＩＣ
の診断等に有効であると考えられている。従って血液又
は血漿中のプラスミン−α２−プラスミンインヒビター
複合体の量を正確かつ簡便に測定する必要がある。

従来知られている方法として次の３つの方法がある。第
１の方法は二次的交叉免疫電気泳動を用いる方法であり
、第２の方法はプラスミン−α２−プラスミンインヒビ
ター複合体のネオアンチゲンに対するポリクローナル抗
体を用いたラテックス凝集法である。第３の方法はプラ
スミノーゲンに対するポリクローナル抗体とα２−プラ
スミンインヒビターに対するポリクローナル抗体を、−
方を固定抗体にし、使方を酵素標識抗体にした酵素免疫
測定法である。

しかしながら、第１の方法は感度と定量性が低いという
欠点があり、第２の方法では特異性の問題がある。第３
の方法は他の２つの方法にくらべ感度の面では良好だが
、ヒトα２−プラスミンイン仁ビターに対する一定の活
性を有する抗血清を安定して得ることが極めて困難なた
め、測定における再現性および操作の煩雑性において問
題があった。しかし、先に提案した（特開昭６２−８１
５６８号公報）方法を用いることにより、簡便で正確、
かつ再現性のよいヒトプラスミン−α２−プラスミンイ
ンヒビター複合体の１ステツプ測定が可能となった。し
かしながら実際には、ざらに高感度で血漿中のプラスミ
ン−α２−プラスミンインヒビター複合体を測定する必
要がある。

そこで本発明者は、この点に鑑み鋭意研究した結果、標
識抗体の抗体を抗ヒトα２−プラスミンインヒビター抗
体のＦａｂ　’とすることによって高感度にヒトプラス
ミン−α２−プラスミンインヒビター複合体を測定でき
ることを知見して本発明に到達したものである。

Ｃ１課題を解決するための手段 すなわら本発明は、標識化抗ヒトα２−プラスミンイン
ヒビター抗体と固定化抗ヒトプラスミノーゲン抗体とか
らなるヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター
複合体測定用の免疫学的測定試薬において、該標識化抗
体が抗ヒトα２−プラスミンインヒビター抗体のＦａｂ
　’であることを特徴とするヒトプラスミン−α２−プ
ラスミンインヒビター複合体測定用の免疫学的測定試薬
でおる。

また、本発明は上記の免疫学的測定試薬を用いてヒトの
体液に存在するヒトプラスミン−α２プラスミンインヒ
ビタ−複合体を溶液中における免疫反応を利用して測定
することを特徴とするヒトプラスミン−α２−プラスミ
ンインヒビター複合体の測定方法である。

本発明の測定試薬においては、標識化抗ヒトα２−プラ
スミンインヒビター抗体が抗ヒトα２−プラスミンイン
ヒビター抗体のＦａｂ’フラグメントであることを特徴
とするが、かかるＦａｂ’フラグメントは、抗ヒトα２
−プラスミンインヒビター抗体を公知の方法、例えば該
抗体をペプシンで分解して得られるＦ　（ａｂ’）２　
フラグメントを還元処理することにより調整することが
できる（Ａ。

Ｎ１５ｏｒｏｆｆ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｒｃｈ、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、。

８９、２３０　（１９６０）；　Ｐ、　Ｐａｒｈａｍ、
　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３１゜２８９５　（１
９８３））。

抗ヒトα２−プラスミンインヒビター抗体としては、抗
ヒトα２−プラスミンインヒビターポリクローナル抗体
又はモノクローナル抗体があげられる。かかるポリクロ
ーナル抗体は、通常行われている方法、例えば「日本生
化学会編、続生化学実験講座、５巻、１〜１０頁、東京
化学同人、　１９８６年」に記載されている方法で得る
ことができる。

また、かかるモノクローナル抗体は、例えば、ヒトα２
−プラスミンインヒビターで免疫したマウスの牌臓細胞
と、マウスの骨髄腫細胞とを融合させて、所望のモノク
ローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを得、これをｉ
ｎ　ｖｉｖｏ又はｉｎ　ｖｉｔｒ。

で培養することによって任意に得ることができる。

特に好ましいのは、先に提案したく特開昭６０−２２２
４２６号公報）ヒトα２−プラスミンインヒビター中に
存在するプラスミンの線維系溶解作用を阻止する部位を
特異的に認識し、かかる作用を抑制するという性質を有
するモノクローナル抗体である。

そして本発明においては、抗ヒトα２−プラスミンイン
ヒビター・モノクローナル抗体のＦａｂ’を用いるのが
好ましい。

また、本発明の標識化抗体の標識物質としては、酵素、
蛍光物質２発光物質又は放射性物質などがあげられる。

酵素としてはアルカリフォスファターゼ、パーオキシダ
ーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、リゾチーム、マレー
ト・デヒドロゲナーゼ。

グルコース−６−フォスフェート・デヒドロゲナゼ、グ
ルコース・オキシダーゼ、ルシフェラーゼなど、蛍光物
質としてはフルオレンセイン、ローダミン、ウンベリフ
ェロン、ランタニド、キレートなど１発光物質としては
ルミナール、アクリジニウムエステル、ルシフェリンな
ど、また、放躬性物質としては　　１．Ｉ、Ｃ，Ｈなど
を使用することができる。これらのなかでも標識物質と
しては酵素が好ましい。これら標識物質と、前記Ｆａｂ
　’フラグメントどの結合方法は、グルタルアルデヒド
法、過ヨーソ酸法、マレイミド法など通常の方法に従う
ことができる。

かくして、本発明のヒトプラスミン−α２−プラスミン
インヒビター複合体測定用の免疫学的測定試薬における
標識化抗体としての標識物質を、標識した抗ヒトα２−
プラスミンインヒビター抗体のＦａｂ’フラグメントを
得ることができる。

本発明の測定試薬のうち固定化抗ヒトプラスミノーゲン
抗体、すなわち不溶性担体に固定される抗ヒトプラスミ
ノーゲン抗体としては抗体分子、あるいは抗原結合能が
失われないそのフラグメントたとえばＦ　（ａｂ’）ｚ
　、　Ｆａｂ’、　Ｆａｂ　、　ＦａＣｂなど、あるい
は抗原結合能が失われない抗体分子またはそのフラグメ
ントの誘導体があげられる。かかる抗ヒトプラスミノー
ゲン抗体としては、抗ヒトプラスミノーゲン・ポリクロ
ーナル抗体又はヒトプラスミノーゲン・モノクローナル
抗体があげられる。なかでも抗ヒトプラスミノーゲン・
ポリクローナル抗体がヒトプラスミノーゲンとの反応性
から測定感度が良いので好ましい。かかる抗ヒトプラス
ミノーゲン・ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体
は、抗ヒトα２−プラスミンインヒビター抗体の場合と
同様、公知の方法に従って得ることができる。

また、かかる固定化抗体を固定する不溶性担体としては
、天然から得られる重合体とその誘導体。

合成重合体とその誘導体をあげることができる。

前者には多糖類とその誘導体、たとえばセルロース、セ
ファデックス、セファロース、カルボキシメチルセルロ
ース、ニトロセルロース、酢酸セルロース、デキストラ
ンなど、あるいはガラス、シリカゲルなどの無ａ重合体
などがある。また後者にはビニル系重合体、たとえばポ
リスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ＡＢＳ、
ポリフッ化ビニル、ポリアミン−メチルビニルエーテル
−マレイン酸共重合体、エチレン−マレイン酸共重合体
など、縮合系重合体、たとえば６−ナイロン。

６．６−ナイロンなどのポリアミド、ポリエチレンテレ
フタレートなどのポリエステル、アミノ酸重合体などが
ある。またその形状としては、試験管。

マイクロタイタープレート、ビーズあるいはメンブレン
など特に限定されない。

前述の固定化抗体を不溶性担体へ固定する方法は、物理
的吸着法、たとえばポリスチレンの担体を該第１抗体の
溶液に浸漬する方法など、イオン結合法たとえばイオン
交換樹脂あるいはアミノ基。

カルボン酸基、スルホン酸基、リン酸基などのイオン化
する官能基をもった担体を用いる方法など、あるいは化
学反応による共有結合法たとえばカルボキシ・クロライ
ド法、カルボジイミド法、無水マレイン酸誘導体法、イ
ソシアナート誘導体法。

臭化シアン活性化多糖法、ジアゾ法、活性エステル法、
架橋試薬による担体結合法（架橋試薬としてゲルタール
アルデヒド、ヘキサメチレンインシアナート、コハク酸
イミド、マレイミド化合物など）など、更にはプラスミ
ン、プラスミノーゲン。

α２−プラスミンインヒビター等に対しては結合能はな
いが、固定されるべき抗体に対し、生物学的反応により
結合し得る物質を介して結合する方法である。

次に、このようにして得られる免疫学的測定試薬を用い
てヒトの体液に存在するヒトプラスミンα２−プラスミ
ンインヒビター複合体を溶液中における免疫反応を利用
して測定することを特徴とする本発明のヒトプラスミン
−α２−プラスミンインヒビター複合体の測定方法につ
いて説明する。

本発明の免疫学的測定の測定方法としては、いわゆるサ
ンドイッチ法、Ｈ争法等が挙げられる。

本発明においてサンドイツチ法とは、例えば第１抗体と
しては固定化抗体である抗ヒトプラスミノゲン抗体を、
第２抗体としては標識化抗ヒトα２−プラスミンインヒ
ビター抗体のＦａｂ　’を用い、この両者にヒトプラス
ミン−α２−プラスミンインヒビター複合体を抗原抗体
反応により結合させ、洗浄操作の後標識物質の間を測定
する方法をいう。

また本発明において競争法とは、一定量の同相化抗原と
試料中の抗原を一定量の標識抗体に対して競合させ、洗
浄後同相に結合した標識物質を測定する方法をいう。

本発明の測定方法においては、免疫反応溶液に分子量１
．６万〜５．０万および等電点１．０〜５．０である蛋
白質を存在せしめ、この蛋白質の免疫反応液における最
終濃度が０．００２〜０．８重量％となるように調整す
るのが、非特異的吸着が抑制され、したがってバックグ
ランドが著しく低くなり高感度が得られやすいので好ま
しい。かかる物質としては、例えばカビイン（αカゼイ
ン、βカゼイン）、ペプシン、オボグリコプロテイン、
オロソムコイドなどがあげられる。あるいはまた、免疫
反応溶液にスキムミルクを存在せしめ、免疫反応溶液に
おけるその最終濃度が０．００２〜０．８重量％となる
ように調整するのも、同様に高感度が得られるので好ま
しい。

本発明では、前述の測定試薬及びこれら添加剤の免疫反
応溶液におけるＲ終濃度が０．００２〜０．８重量％と
なるように調整された溶液をその構成要素の一部とする
試薬キットも、その態様として含む。

上記における測定系に用いられる溶媒としては、反応に
悪影響を与えない通常の各種のものであればいずれであ
ってもよい。なかでも、例えばリン酸緩衝液、トリス塩
酸緩衝液、酢Ｍ緩衝液などのｐＨが６．０から８．０程
度のものを用いるのが好ましい。

測定に際しての免疫反応温度条件は、構成要素である蛋
白質の性質を変成させず、かつ免疫反応を著しく抑制し
ないかぎり特に制限はないが、般には、５０℃以下、好
ましくは約４〜４５°Ｃ程度の温度条件下に約５分から
２０時間程度を要して反応を行なえばよい。

また本発明の測定方法における検体としては、通常の臨
床サンプル、例えば血清あるいは血漿形態の血液、関節
液、リンパ液、胸腺水、腹水、羊水、細胞組織液、骨髄
液、尿などの体液のいずれであってもよい。

ｄ１発明の効果 かくして、本発明の測定試薬、測定方法によれば、ヒト
プラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体を高
感度、高精度に、しかも簡便な操作で定量することがで
きる。

以下実施例により本発明の詳細な説明するが、本発明は
これによって限定されるものではない。

実施例１ （１）固定抗体の調整 ウサギをヒトプラミノーゲンで免疫して１ｑた、ヒトプ
ラスミノーゲンに対する抗血清からＩｇＧ成分を分離精
製した。得られた抗プラスミノーゲン抗体溶液（２０μ
ｑ／ｄ＞に、ポリスチレンボールを加え４°Ｃで一昼夜
浸漬し固定化した。これをＰＢＳで洗浄後、更に１％Ｂ
ＳＡ　（牛胎児血清）溶液に４℃で一昼夜浸漬し、アフ
ターコートを行ない、次いでＰＢＳで洗浄して、抗ヒト
プラスミノゲン抗体固定ポリスチレンボールを得た。

（２）パーオキシダーゼ標識抗ヒトα２−プラスミンイ
ンヒビター抗体Ｆａｂ“の調製 ヒトα２−プラスミンインヒビターに対するモノクロー
ナル抗体（ＭＣＡ）のＦａｂ’フラグメントをＮ１５ｏ
ｎｏｆｆらの方法に準じて調製し、常法によりパーオキ
シダーゼと結合せしめてパーオキシダーゼ識Ｆａｂ’を
得た（日本生化学会編、続生化学実験講座、５巻、　１
０９−１１２頁、東京化学同人、　１９８６年）。すな
わち、該ＭＣＡ溶液の濃度１ｍ（１／ｄのもの２ｄを、
１Ｍクエン酸−クエン酸ナトリウム塩緩衝液でｐＨを３
．７に調整した後、４０μｇのペプシンを加え３７℃で
４５分間消化分解した。反応液に１Ｎ　　Ｎａ０）−１
を滴下し、ｌ）Ｈを６．０として反応を停止した。

ＴＳＫ　ｇｅｌ　３０００ＳＷカラム−ＨＰＬＣで、溶
出液に５ｍＨＥＤＴＡ−０，１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ８，０）を用いて、この反応液から分子量９２
．０００のＦ　（ａｂ’）２　フラグメントを分離した
。これを限外）濾過器により濃縮しＦ　（ａｂ’）２の
濃度が０．４２５ｍｑ　／ｒｒｄ：ｌである液を得た。

これに０．１Ｍ２−メルカプトエチル・アミン２３μｌ
を加え３７℃で２時間処理した後、さらに１７７μｌを
加え１４０分間還元処理をした。Ｆ　（ａｂ’　）２の
場合と同様に、この反応液からＨＰＬＣによって分子ｉ
４６，０００のＦａｂ’フラグメントを分離した。これ
を限外）濾過器によりｆｉｉ縮し、０．４／１５１１１
（１／ｍ！！のＦａｂ’フラグメントの液を得た。

一方、西洋ワサビパーオキシダーゼ（東洋紡）の６．０
ｍｇを０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）
０．９ｍに溶解し、サクシンイミジル４−　（Ｎ−マレ
イミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート
のジメチルホルムアミド液を５０μ１（３６，２５ｍ（
１／ｄ）滴下し３０’Ｃで１時間反応させた。

この反応液を０．１Ｈリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６
，０）で平衡化したセファデックスＧ２５カラムに添加
した。流速は１分間当たり０．５６ｍ１で１．７０ｍ１
ずつ分取し、２８０ｎｍにおける吸収を測定しマレイミ
ドパーオキシダーゼを分離した。これを限外）濾過器で
濃縮し、３．７４５ｍｑ　／ｍｌのマレイミド−パーオ
キシダーゼを得た。

かくして得られたマレイミド−バーオキシダｔ２１６０
μｌを上記のＦａｂ’フラグメント液に滴下し、４℃で
２４時間反応させた。Ｆ　（ａｂ’）ｚの場合と同様に
、この反応液からＨＰ　Ｌ　Ｃによって分子量８６、０
００のバーオキシダーぜ標識したＦａｂ’を分離した。

これを限外）濾過器により濃縮し、０．２４ｍ（］／ｄ
のパーオキシダーゼ標識したＦａｂ’を得た。この標識
Ｆａｂ“を以下の検量線作成に用いた。

（３）検量線の作成 前記（１）で１９られた抗ヒトプラスミノーゲン抗体固
定ポリスチレンボールにＰＩＯＷらの方法（Ｊ。

Ｌａｂ、　Ｃｌ１ｎ、　）ｌｅｄ、９３．１９９．　（
１９７９）参照）に従って精製した、ヒトプラスミン−
α２−プラスミンインヒビター複合体、１１００ｎ／ｍ
ｌ！、　５０ｍＭＩｒｄ；！、　２５ｎ（］／Ｉｄ！の
希釈系列の０．５％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液各２００μｌと
前記（２）のパーオキシダーゼ標識Ｆａｂ　’のＦａｂ
’成分の濃度が０．１２μｇ／ｍ１で、最終濃度０．２
５％スキムミルクを含む０．５％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液で
希釈調整した標識Ｆａｂ’溶液の２００μｌを加え、３
７℃で１時間反応させた。次いで精製水にて洗浄後、パ
ーオキシダーゼ用基質液（０，１Ｍリン酸クエン酸緩衝
液（１）Ｈ４，５）中にＴＭＢｌ、０４５％および５ｍ
ＨＨ２Ｏ２を含む’）　４００μｌを加え、３７℃で３
０分発色させた。２％酢酸溶液中にＮａＦ３を０．１％
含む溶液１．０ｄで停止及反応を行ない、３７２ｎｍに
て吸光度を測定した。得られた検量線を第１図に示した
。複合体濃度は反応溶液中の終濃度で示した。

（４）パーオキシダーゼ標識抗体との比較（２）のパー
オキシダーゼ標識Ｆａｂ　’の代りに、ヒトα２−プラ
スミンインヒビターに対するＭＣＡのＩ（ＩＧ酸成分常
法により・パーオキシダーゼを標識化した抗体を二次抗
体として用いて、前記（３）と同様に操作を行ない、３
７２ｎｍにて吸光度を測定した。その結果および前記（
３）の結果より、パーオキシダーゼ標識したＩｇＧ抗体
と、パーオキシダーゼ標識したＦａｂ　’とを比較し、
第１表に示した。本発明の標識Ｆａｂ’を用いた方が、
非特異的吸着が少なくかつヒトプラスミン−α２−プラ
スミンインヒビター複合体（α２　ＰＩＣ）の５０ｎＭ
　ｒｄの吸光度が大きかった。α２　ＰＩＣの濃度がＯ
ｎｇ／ｍｉのときの吸光度をＮ、α２　ＰＩＣの濃度が
５０ｎＭ　ｍｌのときの吸光度をＳとした時のＳ／Ｎ比
で見ると、パーオキシダーゼ標識Ｉ（ＪＧ抗体を用いた
場合は１３．３であるのに対し、本発明の標識Ｆａｂ’
を用いた場合３５．９であった。また測定下限もＯ９５
ｎｇ／７！まで測定可能であり、高感度に複合体を測定
できることがわかる。

実施例２ 限定 （１）固定抗体の調整 実施例１に記載のａ度２０μ（１／ｄの抗ヒトプラスミ
ノーゲン抗体溶液をマイクロタイタープレートに加え３
７℃で２時間静置し固定化した。ＰＢＳで洗浄後、１％
ＢＳＡ液にて室温で２時間静置しアフターコートを行な
い、次いでＰＢＳで洗浄することにより抗ヒトプラスミ
ノーゲン抗体固定マイクロタイタープレートを得た。

（２）検量線の作製 前記（１）で得られた抗ヒトプラスミノーゲン抗体固定
マイクロタイタープレートに、ヒトプラスミン−α２−
プラスミンインヒビター複合体１００ｎ（］／ｍｆ！、
　５０ｎＣＩ／ｄ、　２５ｎ（］／ｄの希釈系列の溶液
各５０μでと、実施例１に記載のパーオキシダーゼ標Ｗ
ｉ、Ｆａ　ｂ　’溶液５０ｔｉ１を加え２５°Ｃで１５
分間反応させた。

次いで０．０１）Ｉ　Ｐｕｓにて洗浄後、実施例１に記
載のパーオキシダーゼ基質液１００μｌにて２５°Ｃで
１５分間発色させた。８ＮｆｊＡ酸水溶液２５μｌで停
止反応を行ない、４５０ｎｍの吸光度をプレートリーダ
ーにて測定した。１ｑられた検量線を第２図に示した。

Ｓ／Ｎ比は１９７となった。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗ヒトプラスミノーゲン抗体固定ポリスチレン
ボールおよびパーオキシダーゼ標識した抗ヒ１〜α２−
プラスミンインヒビター・モノクローナル抗体のＦａｂ
’を用いた測定試薬によるヒトプラスミン−α２−プラ
スミンインヒビター複合体の検量線である。 第２図は抗ヒトプラスミノーゲン抗体固定マイクロタイ
タープレートおよびパーオキシダーゼ標識した抗ヒトα
２−プラスミンインヒビター・モノクローナル抗体のＦ
ａｂ’を用いた測定試薬によるヒトプラスミン−α２−
プラスミンインヒビタ複合体の検量線である。 第１図 第２図 １２．５５０ ヒト７°ヲ々ンーダ、−アラ入ミンインとヒ゛ター８芒
＄１（”ち４１）０　　　　１２．５　　　　２５　　
　　　　　　　　　　Ｓ。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、標識化抗ヒトα＿２−プラスミンインヒビター抗体
   と固定化抗ヒトプラスミノーゲン抗体とからなるヒトプ
   ラスミン−α＿２−プラスミンインヒビター複合体測定
   用の免疫学的測定試薬において、該標識化抗体が抗ヒト
   α＿２−プラスミンインヒビター抗体のＦａｂ′である
   ことを特徴とするヒトプラスミン−α＿２−プラスミン
   インヒビター複合体測定用の免疫学的測定試薬。 ２、該標識化抗ヒトα＿２−プラスミンインヒビター抗
   体の標識が、酵素、蛍光物質、発光物質および放射性物
   質のいずれかである請求項１記載の免疫学的測定試薬。 ３、請求項１記載の免疫学的測定試薬を用いてヒトの体
   液に存在するヒトプラスミン−α＿２−プラスミンイン
   ヒビター複合体を溶液中における免疫反応を利用して測
   定することを特徴とするヒトプラスミン−α＿２−プラ
   スミンインヒビター複合体の測定方法。 ４、免疫反応溶液に分子量１．６万〜５．０万および等
   電点１．０〜５．０である蛋白質又はスキムミルクを存
   在せしめ、免疫反応溶液における該蛋白質又は該スキム
   ミルクの最終濃度が０．００２〜０．８重量％となるよ
   うに調整することを特徴とする請求項３記載のヒトプラ
   スミン−α＿２−プラスミンインヒビター複合体の測定
   方法。