JPH01501389A - ポリペプチド製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ポリペプチド製剤 本発明は、実質的に均一な径を有する小さな結晶並びに無定形物質を全く含まな いか少量含んでいる、新規なプロタミン亜鉛インシュリン製剤に関する。

糖尿病の治療において、多種類のインシュリン製剤が提藁されてきており更に用 いられている。これ等のあるものは、速効性であり、多の製剤は多かれ少なかれ 持続型である。持続作用を存する製剤は、異なった成分を用いて種々の方法で製 造されてきている。

持続作用を有するインシュリン製剤の例は、亜鉛インシュリン結晶の懸濁液であ る。このような製剤の持続時間は、インシュリンの種類に依存し、生インシュリ ンは最も長い持続時間を与え、豚インシュリンはより短い持続時間を与え更にヒ トインシュリンは最も短い持続時間を与える。ある人にとっては、ヒトインシュ リン製剤に対し、ヒトインシュリンの公知の亜鉛インシュリン結晶製剤によって 得られる作用よりもより長い持続作用を有する製剤を要求する。

プロクミン亜鉛インシュリン製剤は、１９３６年頃最初に公表された。その後数 十年間、異なった量のプロタミン、亜鉛及びインシュリンを有するプロクミン亜 鉛インシュリン製剤が調製された０本発明のプロタミン亜鉛インシュリン製剤と 比較して、溶解されたプロタミンの実質的量を含有する全ての公知のプロタミン 亜鉛インシュリン製剤は、プロタミン含量に関し実質的により高量の亜鉛を含有 する（以下の第■及び第１表参照）。

公知のプロタミン亜鉛インシュリン製剤は、非常に変化する粒径の結晶（例えば 、５〜５０ｊｎａの長さの結晶、以下の第■表及び第１表参照）を有し、更にそ れ等は実質的かつ非常に変化する量の無定形物質を含有する。しばしば、公知の 製剤において結晶及び無定形物質の量の割合は、保存中に変化するであろう。従 って、そのような製剤は、物理的に不安定であり、更にこれはおそらく保存時間 に依存して異なった吸収速度を与えるであろう、公知のプロタミン亜鉛インシュ リン製剤に対する市場は、多年において減少してきている。更に、このような製 剤は英国薬局法１９８０に対する補遺１９８３から削除されている。

粒径は、結晶の吸収に対し重要性があることが推定される。

更に又、吸収速度は結晶が実質的に不均一な粒径を有する場合更に断定し得るこ とが推定される。。

英国特許８８９．７６９の明細書において、亜鉛プロタミンインシュリン結晶製 剤が開示されており（請求の範囲第６項参照）、こ＼において、懸濁液媒質のプ ロタミン含量は１−当り０．００２５■未満である。懸濁媒質中に、実質的にプ ロタミンが存在しない、この公知の製剤は、実質的量の溶解されたプロタミンを 含有する本発明の製剤とは異なる。従って二種の製剤は同様のタイプ及び機能を 奏するものではない。

本発明の一つの目的は、小さな結晶を含有するプロタミン亜鉛インシュリン製剤 を調製することである。

本発明の第二の目的は、実質的に均一な粒径を有する結晶を含むプロタミン亜鉛 インシュリン製剤を調製することにある。

本発明の第三の目的は、無定形物質を全く含有しないかあるいは極めて少量しか 含有しない製剤を含有することにある。

本発明の第四の目的は、公知のヒトインシュリン製剤と比較して非常に作用時間 が長いプロタミン亜鉛インシュリン製剤を調製することにある。

今や驚くべきことに以下の内容が見い出された。即ち実質的に均一な粒径の小さ な結晶並びに無定形物質を全くあるいは極めて少量含有するプロタミン亜鉛イン シュリン製剤が、公知のプロタミン亜鉛インシュリン製剤において用いられてい るよりもより低濃度の亜鉛を用いることにより製造することができる。

本発明はプロタミン亜鉛インシュリン製剤に関し、こ＼において少なくとも９０ ％（重量／重量）の固体物質が結晶形であり更に、こ＼において好ましくは少な くとも９０％（重量／重量）の結晶が約２０マイクロメーター未満の長さを有す る。

本発明の好ましい態様によれば、本発明のプロタミン亜鉛インシュリン製剤は、 インシュリン１００　Ｉ　Ｕ当り約０．８〜１．４■のプロタミンを含有し、更 に次式から計算できる概算の量の亜鉛を有する： ａ　＝　１８２ｘ　ｂ−４４＋／　ｃ 上記式中、ａは１００ＩＵインシュリン当り亜鉛の！（、ｑ）であり、ｂは１０ ０ＩＵインシュリン当りプロタミンの量（■）であり、更にＣは３０を超えない 数字である。従って本発明の製剤における１００ＩＵインシュリン当り亜鉛の量 （■）は、１８２Ｘ　ｂ−１４及び１８２ｘ　ｂ　−７４（こ＼において１８２ Ｘｂは１８２に、１００１　Ｕインシュリン当りプロタミンの量（■）をかけた ものである）の間にある。

本発明の更に好ましい態様によれば、Ｃは２０を超えず、更にこれは特にインシ ュリンが牛又は豚から得られるものである場合に適用される。しかし、インシュ リンがヒト起源である場合にもＣが２０を超えないことが好ましい。本発明の好 ましい別の態様によれば、Ｃは１０を超えない。

本発明のインシュリン製剤は、上澄み中に一定量のプロタミンを含有する。好ま しくは、上澄みは、１−当りｏ、ｏｏｓ超、更に好ましくは０．０１■超のプロ タミンを含有し、更に好ましくは上澄みは１＠１当り５■未満、更に好ましくは １■未満のプロタミンを含有する。

インシュリン種が、ヒトである本発明の製剤は、ヒト種からの亜鉛インシュリン 結晶の公知の懸濁液よりも実質的により持続作用を有する。

プロタミンは、異なる成分の混合物であることが知られている。プロタミンは、 オンコルヒンヵスヶタ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｋｅｔａ）の如き魚から得る ことができる。しかし、他の魚がらのプロタミンも又使用できる。通常、プロタ ミンはプロタミン硫酸塩として市販されている。しかし他の塩も又使用できる。

好ましくは高純度のプロタミンが用いられる。

インシュリン種は、例えば牛、豚又はヒトであり、好ましくは豚又はヒトであり 、最も好ましくはヒトである。一種又はそれ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸 残基と交換されている哺乳動物のインシュリンから逸脱しているインシュリン製 剤誘導体を使用することも可能である。好ましくは、高純度のインシュリンが用 いられる。好ましくは本発明のプロタミン亜鉛インシュリン製剤におけるインシ ュリンの含量は、２０〜５００ＩＵ／−更に好ましくは３０〜２００ＩＵ／ｍ！ 、最も好ましくは４０〜１００１　Ｕ／ｍ１である。

好ましくは、本発明のプロタミン亜鉛インシュリン製剤は、ｐ）１６．５〜８を 有し、更に好ましくは７〜７．５、最も好ましくは７．２〜７．４のｐＨを有す る。

本発明の好ましい態様によれば、プロタミン亜鉛インシュリン製剤は、無定形物 質を全く含有しないかあるいは少量含有し、更に好ましくは無定形物質の量は、 約１０％未満、好ましくは約５％未満、最も好ましくは２％未満であり、バーセ ンテイジは結晶プラス無定形物質の量（Ｗ／Ｗ）に基ツ＜。

本発明の別の好ましい態様によれば、プロタミン亜鉛インシュリン製剤は、実質 的に均一な粒径の結晶を含有する。好ましくは、大部分の結晶は、約２０趨未満 、好ましくは約１０Ｊ！ｔａ未溝の長さを有する。本発明の更に別の好ましい態 様によれば、約９０％超の結晶が、約２０−未満の長さ、好ましくは約１０μ未 満の長さを有し、パーセンテイジは結晶の全量（Ｗ／Ｗ）に基づく。

更に本発明の好ましい態様によれば、９０％超の結晶が、約５Ｊｎａ未満の幅、 好ましくは約２ｐｍ未満の幅を有し、パーセンテイジは結晶の全含量（重量／重 量）に基づく。

本発明のインシュリン製剤は、以下の成分：インシュリン、プロタミン、亜鉛塩 、保存剤、等張化剤及び緩衝剤を混合することによって調製できる。これを行う 為の一つの方法は、インシュリン、プロタミン硫酸塩、塩化亜鉛、フェノール及 びグリセロールを含有する酸性溶液（塩酸）を調製することである。しかる後、 この溶液を、室温で撹拌しながら燐酸ナトリウム塩とゆっくり混合する。混合し た後、沈澱のｐＨを、所望ならば約７．３に調節する。特定の亜鉛塩の例は、塩 化亜鉛、硫酸亜鉛及び酢酸亜鉛である。保存剤の例は、フェノール及びメタクレ ゾールである０等張化剤の例はグリセロールである。緩衝剤の例は、燐酸ナトリ ウムである。

保存剤は、フェノール又はメタクレゾールでもよい０等張化剤はグリセロールで よい。緩衝剤はｆ：酸−水酸化ナトリウムである。

本発明の製剤は、糖尿病の治療において用いられる０本発明製剤の用量は、他の インシュリン製剤の用量の選択に対して同様に医者によって選ばれる。

本発明は更に以下の実施例により説明する。

例Ｉ Ａと命名した９０ｍの酸性保存溶液を、Ｂと称する保存液１０−と室温でゆっく り混合した。溶液Ａの成分の量は、最終混合物がＩＷＡ１当り１００ＩＵインシ エリン、１ｄ当り２．５■のフェノール、１−当り１６■のグリセロール及び以 下の第１表〜第ｍ表に述べる如き量のプロタミン硫酸塩及び亜鉛を含有するよう に選択した。用いた亜鉛塩は、塩化亜鉛であり、使用したプロタミン硫酸塩は約 １９％（Ｗ／Ｗ）の硫酸塩を含有した。溶液Ｂは、１−当り２５ｍの燐酸水素二 ナトリウム（ＮａＪＰＯａ、　２）１！０）並びに最終混合物が約７．３のｐＨ を有するように水酸化ナトリウムの量を含有した。

第１表〜第■表において、プロタミン亜鉛インシュリン結晶の粒径は、最長の及 び最短の結晶として更に最も厚い結晶更に最も薄い結晶として示されている。更 に、サンプル中の無定形物質の量の評価は、星印の数によって示される。星印１ 個は、微量の無定形物質を示し、星印２個はより大きな量の無定形物質等を示し 、星印のないものは無定形物質が観察されなかったことを示す。

１０二表 １．０５　９５　３．４−５．Ｉ　Ｘ　Ｏ，４−０，９★”　１２５　３．４− ５．１　ｘＯ，４−０，９★１．２５　１２０　３．４−５．Ｉ　Ｘ　Ｏ，４− ０，９＃１４０　３．４−５．Ｉ　Ｘ　Ｏ，４−０，９〃１６５　３．４−５． Ｉ　Ｘｏ、４−０．９１．４５　１６０　３．４−５．１　Ｘ　０．４−０．９ ＃１８５　３．４−５．Ｉ　Ｘｏ、４−０．９１．６５　１８０　３．４−５． １　ｘ　Ｏ，４−０，９〃１９５　３．４−５．Ｉ　Ｘ　Ｏ，４−０，９−２２ ０３，４−５，１Ｘ　０．４−０．９豚　インシュリン １．２５　１４０　３．４−７．７　ｘ　Ｏ，４−１，２★１．４５　１７０　 ３．４−６．８　Ｘ　Ｏ，４−０，９★１．６５　２００　３．４−８．５　ｘ 　Ｏ，４−０，９＊　＊芽」１表 １．２５　１４０　３．４−１０．２Ｘ０．４−１．７　★★１．４５　１７０ 　３．４−１０．２Ｘ　Ｏ，４−１，７★★★１．６５　２００　５．１−１０ ．２ｘ　Ｏ，９〜２．６　★★★例２ 第■表において、１００　ｉ　Ｕインシュリン当り全てプロタミン硫酸塩、プロ タミン及び亜鉛の量は、本発明による幾つかのプロタミン亜鉛インシュリン製剤 に対して与えられる。

プロタミン　プロタミン、　亜鉛の量、　平均亜鉛、硫酸塩、 ■　■　Ｒ１１ｇ ０．９９　０．８　８２−１２２　１０２１．２５　１．０１　１２０−１６０ 　１４０！、４５　１．１７５　１５０−１９０　１７０１．６５　１．３４　 １８０−２２０　２００１．７３　１．４　１９１−２３１　２１１例３ 例１で記載した如く調製した製剤を、上澄み中のプロタミンの含量に対し分析し 、結果を第ｖ表に示す。窒素の含量を測定し、上澄み中のヒトインシュリンの含 量が少ないものと推定した。

員呈１ １．０　？２　０．３１ １、０　１３２　０．０６ １．４５　１６０　０．１４ １．７３　１８１　０．３５ １．７３　２４１　０．０７ 例４ インシュリン依存性タイプ１の糖尿病患者についてこの研究を行った。研究は、 調べた各患者について無作為−秩序開放交叉計画に基づいて二回行い、１０日間 の間隔をおいた。

投与したインシュリンは、１！ｉｔ　（モノＡｌ４）ラベル化ウルトラタート（ Ｕｌｔｒａｔａｒｄ（商標））（ヒト）並びに本発明に係るヒトインシュリン製 剤（以下ウルトラファン（ＵｌｔｒａｐｈａｎｅＴＨ（商標））と呼ぶ）であり 、それぞれ１００ＩＵ／ｍＺ用いた。各々の研究に対し、患者の右側の太ももに ２４１Ｕを投与し、更に左の太ももに同じ製剤を６１０投与した。得られたデー タを第■表に示す。

】］Ｌ表 Ｕｌｔｒａｐｈａｎｅ　６　Ｕ　１８ Ｕｌｔｒａｐｈａｎｅ　２４Ｕ　２７ Ｕｌｔｒａｔａｒｄ　６　Ｕ　１２ Ｕｌｔｒａｔａｒｄ　２４Ｕ　１３ この表から明らかなように、本発明の製剤は、公知の亜鉛インシュリン製剤より もはるかによりゆっくり吸収される。

例５ 英国薬局法１９８０の要求を満たす公知のプロタミン亜鉛インシュリン製剤に対 する同様の結果を第■表に示す、これ等の製剤は１ｍｊ当り１００ｉＵインシユ リンとして調製されていた。

葉亘ｌ 牛／豚ロインシュリン １．３０　２３０　８．５−２７．２Ｘ１．７−３．４　★★★★★１．４０　 ２３０　１１．９−５１．ＯＸ３．４−５．１　★★★★★例６ 公知のプロタミン亜鉛インシュリン製剤の分析を第■に示す。

】昌り表 Ａ　１００　１８５　１．２５ ８　４０　２３０　１．４ Ｃ８０２３０１，３ Ｄ　４０　２２５　１．２５ Ｅ　１００　２２５　１．２５ Ｆ　１００　２２５　１．６５　８−３５Ｘ２−５　★★★★★Ｇ　１００　１ Ｂ５　１．２５　５−３０Ｘ２−４　★★★★★Ｈ１００１７５１，０５−３０ Ｘ　２．５−４　★★★★★Ｉ　１００　１７５　１．（Ｌ　５−４０　ｘ　２ ．５−５　★★★★★添付の図面（１／４−４／４　’）は、本発明に係る製剤 に関する写真（第１図〜第９図）であり、更に公知の製剤に関する写真（第１０ 図〜第１５図）であり、これ等は約４００倍に拡大されている。これ等の製剤に 対する更にデータは第１Ｘ表に示される。

■」１表 第１図〜第１５図に関する製剤に対するデータ１　１．４５　１６０ ２　１．２５　１４０ ３１．６５１９５ ４　１．２５　１４０　★ ５　１．４５　１７０　★ ６　１．６５　２００　★★ ７　１．２５　１４０　★★ ８１．４５１７０　★★★ ９１．６５２００　★★★ １０　１．３０　２３０　★★★★★ １１　１．４０　２３０　★★★★★ １２　１、Ｏ！７５　★★★★★ １３　１．６５　２２５　★★★★★ １４　１．０　１７５　★★★★★ １５　１．２５　１８５　★★★★★ 先の記載、以下の請求の範囲及び／又は添付図面（写真）における開示の特徴は 、それぞれ別々にあるいは又それ等を組み合わせることができ、本発明を多様の 形態で実現するのに重要である。

ＦＩＧ、　ｌ　ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、　３　ＦＩＧ、　１４ ＦＩＧ、　７　ＦＩＧ、　８ ＦＩＧ、　９　ＦＩＧ、　１０ ＦＩ６．１１　ＦＩＧ、　１２ ＦＩＧ、　１５ 国際調査報告 ｂｋｎ−１啼１１４１＾紳輪ζ−ｌ−横一　ｐｃ丁／ＤＫ８７１００１２６

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．プロタミン亜鉛インシュリン製剤であって、少なくとも９０％（重量／重量 ）の固体が結晶形であり、更に好ましくは少なくとも９０％（重量／重量）の結 晶が約２０マイクロメーター（ｍμ）未満の長さを有する、前記製剤。
2. ２．所望により、前記製剤が１００ＩＵのインシュリン当り約０．８〜１．４ｍ ｇのプロタミン並びに次式：ａ＝１８２×ｂ−４４／−ｃ （式中ａは１００１Ｕインシュリン当り亜鉛の量（μｇ）であり、更にｂは１０ ０１Ｕインシュリン当りプロタミンの量（ｍｇ）であり、更にｃは３０を超えな い数字である）から計算され得る亜鉛の概算の量を含有する、請求の範囲第１項 記載のプロタミン亜鉛インシュリン製剤。
3. ３．インシュリン含量が約２０〜５００ＩＵ／ｍｌの範囲にあり、好ましくは約 ３０〜２００ＩＵ／ｍｌの範囲にあり、最も好ましくは約４０〜１００ＩＵ／ｍ ｌの範囲内にある、請求の範囲第１項又は第２項記載の製剤。
4. ４．約６．５〜８の範囲内のｐＨを有し、好ましくは約７〜７．５の範囲内のｐ Ｈ、更に好ましくは約７．２〜７．４の範囲内のｐＨを有する、請求の範囲第１ 項〜第３項の何れかに記載の製剤。
5. ５．実質的に均一な粒径の結晶を実質的に含有する、請求の範囲第１項〜第４項 の何れかに記載の製剤。
6. ６．無定形物質を全く含有しないかあるいは実質的に含有しない、請求の範囲第 １項又は第５項記載の製剤。
7. ７．無定形物質の量が、約１０％未満、好ましくは約５％未満、更に好ましくは 約２％未満であり、パーセンテイジは固体物質の量（重量／重量）に基づく、請 求の範囲第６項記載の製剤。
8. ８．大部分の結晶が約２０μｍ未満の長さ、好ましくは約１０μｍ未満の長さを 有する、請求の範囲第１項〜第７項の何れかに記載の製剤。
9. ９．約９０％（重量／重量）の結晶が約２０μｍ未満の長さ、好ましくは約１０ μｍ未満の長さを有する、請求の範囲第８項記載の製剤。
10. １０．ｃが２０を超えず、好ましくは１０を超えない、請求の範囲第１項〜第９ 項の何れかに記載の製剤。
11. １１．上澄みが１ｍｌ当り０．００５ｍｇを超えるプロタミン、好ましくは０． ０１ｍｇ／ｍｌを超えるプロタミン、更に好ましくは１ｍｌ当り５ｍｇ未満のプ ロタミン、好ましくは１ｍｇ／ｍｌ未満のプロタミンを含有する、請求の範囲第 １項〜第１０項の何れかに記載の製剤。
12. １２．請求の範囲第１項〜第１１項の何れかに記載の製剤の調製の為のインシュ リンの使用。
13. １３．請求の範囲第１項〜第１１項の何れかに記載のプロタミン亜鉛インシュリ ン製剤の調製方法であって、プロタミン、亜鉛及びインシュリンを適業な量で混 合し、更に所望によりｐＨ値を調節する、前記方法。
14. １４．糖尿病患者に対し請求の範囲第１項〜第１１項の何れかに定義した製剤の 使用。