JPH01320989A

JPH01320989A - ワックスエステルの生産方法

Info

Publication number: JPH01320989A
Application number: JP15346788A
Authority: JP
Inventors: Hikari Shikayama; 光鹿山; Mitsumasa Makura; 三正万倉; Tadashi Funada; 船田　正; Jiro Hirano; 二郎平野
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1988-06-23
Filing date: 1988-06-23
Publication date: 1989-12-27

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、ワックスエステルの生産方法に関する。さら
に詳述すれば、ワックスエステル合成能力を有する動植
物や微生物を用いて、そのなかに含まれるワックスエス
テル合成酵素、ワックスエステル分解酵素などを利用し
、油脂類、脂肪酸、高級−価アルコール類、高級二価ア
ルコール類等の基質からワックスエステルを酵素的又は
発酵的に生産する方法に関する。

（従来の技術）ワックスエステルは慣用的に「ワックス」とのみ称され
ることもあり、伝統的には、ロウ（蝋）と言われること
もあるが、ここでワックスエステルとして示すものと同
義である。ここでのワックスエステルとは、脂肪酸と高
級−価アルコール類又は二価アルコール類とのエステル
で、脂肪酸アルコールエステルとモ称スる。

ワックスエステルは、その形状から固体ワックスエステ
ル（例：カルナウバワックス、ミツロウなど）及び液体
ワックスエステル（例：マツコラ鯨油、ホホバ油（Ｊｏ
ｊｏｂａ　ｏｉｌ）など）に分類され、その出所から植
物性ワックスエステル（例：カルナウバワックス、キャ
ンデリラワックス、ライスワックスなど）及び動物性ワ
ックスエステル（例：ミツロウ、羊毛ロウなど）等に分
類される。ワックスエステルの多くは化粧品、医薬品、
食品その他の広い分野で現に使用されており、他にロウ
ツクとか電気絶縁体の材料としても古くから利用されて
いる。また、魚類などにおいてはその消化・吸収の観点
から研究が行われ、養魚上の飼料としての特異的な役割
も推定されている。

ワックスエステルの生産に関し微生物による方法につい
ては、アメリカ及び日本で幾つかの報告がみられる。す
なわち、ｎ−パラフィン資化菌を用いて、その代謝産物
としてワックスエステルを得る方法〔参考文献：　Ｓ、
　Ｄｅｗｉｔｔら、Ｊ＾ＯＣ５，５９゜６９〜７４　（
１９８２）　）　、ユーグレナによる発酵的生産方法〔
参考文献：乾ら、発酵と工業、４４．４９４〜５０１　
（１９８６）　；化量ら、公開特許公報、昭５９−１１
８０９０　（１９８４）　）　、また、アシネトバクタ
−カルコアクチリアによる不飽和脂肪酸からのワックス
エステルの生産方法〔参考文献：奥付ら、第２５回日本
油化学討論会講演要旨集、２３頁（１９８６）　）など
が知られている。

（発明が解決しようとする課題）前記の動物性や植物性の天然骨由来のワックスエステル
は供給が不安定で、品質も一定しないという欠点を有し
ている。さらに、近年捕鯨産業が国際的に禁止される傾
向の中で、マツコラ鯨を原料として生産されてきた動物
性ワックスエステルの生産は大きな打撃を受け、代替ワ
ックスエステルとしてホホバ油及びその加工品等がアメ
リカ合衆国などでは脚光を浴びるに至っているが、現在
のところ、なお研究段階を越えず、量的には不足してい
るのが現状である。

また前記の天然又は発酵的に得られたワックスエステル
は各種の狭雑物を含んでいるため、脱色、脱臭、脱ガム
、脱酸等々の工程が必要となり、これらを完全に除去し
良質のワックスを得るには多くの工程を必要とするため
、高価になりすぎるという欠点を有している。また、炭
素数４０以上のワックスエステルを得ることは通常困難
である。

上述の問題点に鑑み、本発明は鎖長や不飽和度等を任意
に変化させることが可能で、かつ、純度の高い高品質の
ワックスエステルを大量かつ効率的に生産するためのプ
ロセスを提供することを目的とする。

（課題を解決するための手段）本発明におけるワックスエステルの生産方法は脂肪酸及
び／又はその誘導体を基質とし、スタフィロコッカ７．
し：／ツ（Ｓｔ仰膓中に匹並りカニ国吐ヲ培養すること
によりワックスエステル含有脂質を得ることを特徴とす
る。

また、脂肪酸及び／又はその誘導体を基質とし、ワック
スエステル合成酵素としてアシルＣｏＡ：アルコールア
シルトランスフェラーゼを用いることを特徴とする。

さらに、脂肪酸及び／又はその誘導体を基質とし、動物
プランクトンであるアカルティアクラウシ（Ａｃａｒｔ
ｉａ　ｃｌａｕｓｉ）から得られるワックスエステル分
解酵素を用いることを特徴とする。

以下、さらに詳しく本発明を説明する。

第一の発明では、ワックスエステル生産能力を有する動
植物類及び微生物類、特に、スタフィロコッカスレンツ
（Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　１ｅｎｔｕｓ）を培
養することにより、基質を培養液中に加えて、微生物利
用によって発酵的にワックスエステル含有脂質を得る。

第二の発明では、ワックスエステル生産能力を有する動
植物類及び微生物類中のワックスエステル合成酵素を用
いてワックスエステルを酵素的に生産する。ここでワッ
クスエステル合成酵素としてアシルＣｏＡ：アルコール
アシルトランスフェラーゼを用いる。

第三の発明では、ワックスエステル生産能力を有する動
植物類及び微生物類中のワックスエステル分解酵素、特
に動物プランクトンであるアカルティアクラウシ（Ａｃ
ａｒｔｉａ　ｃｌａｕｓｉ）から得られるワックスエス
テル分解酵素を用いることを特徴とする特本発明に用いる基質としては脂肪酸及び／又はその誘導
体、具体的には油脂類、脂肪酸、高級−価アルコール類
、高級二価アルコール類等が挙げられる。この場合、脂
肪酸源又は脂肪族アルコール源として炭素数２０以上の
脂肪酸又はアルコールを有する魚油を用いることができ
る。

本発明に用いられる基質の一つである脂肪酸としては、
炭素数２〜２４個までのあらゆる種類の脂肪酸を単独で
、又は２種類以上の混合物として用いことができる。従
って、飽和脂肪酸でも、不飽和脂肪酸でも、分枝脂肪酸
でも用いることができる。また動植物油等から調製した
各種の脂肪酸を含む混合物でも良い。この条件を満たす
脂肪酸源の一つとして、炭素数２０以上の脂肪酸を含む
魚油、例えばイワシ油、タラ肝油、イカ肝油等が特に好
ましい。

本発明に用いられる基質の一つである高級−価又は二価
アルコールとしては炭素数２〜３４個までのあらゆる種
類の脂肪族アルコールを単独で、又は２種類以上の混合
物として用いることができる。従って、飽和、不飽和を
問わず、分枝の有無にかかわらずワックスエステルのア
ルコール部分として成立するものであれば、すべて基質
として利用できる。また、動植物から調製した各種の脂
肪族アルコールを含む混合物でも良い。

また、上述の脂肪酸又は脂肪族アルコールは遊離型でも
良いし、グリセリドとしても用いられることはリパーゼ
の介在を考慮すれば当然である。

従って、トリグリセリド、部分グリセリド、エーテル脂
質、リン脂質等の油脂類も利用できる。

本発明者らはワックスエステル合成酵素を多く含む微生
物を鋭意スクリーニングし、スタフィロコッカスレンツ
がワックスエステル生産能力を有する微生物類の中でも
特異的にワックスエステル合成活性の高いことを見出し
た。

従って、本発明は、スタフィロコッカスレンツのワック
スエステル合成酵素系を用い、さらに、脂肪酸を例にと
ると下図の如き反応によって、最本冬的にアシルＣｏＡ
：アルコールアシルトランスフェラーゼを用いてワック
スエステルを得ることができる。この酵素は前述の動植
物及びバクテリア類から調製できる７脂肪酸Ｃ−Ｈｚｎ、＋Ｃ０ＯＨワックスエステルＣ，Ｈ，、。＋Ｃ００ＣＨｚＣ１，ｆｉｚ□。

即ち、微生物によるワックスエステルの発酵生産方法は
ワックスエステル合成活性の高い微生物、例えばスタフ
ィロコッカスレンツの如きバクテリアを用いて、培養液
中に前述の様な脂肪酸又は脂肪族アルコール又はグリセ
リド、又はこれらの混合物を加えることにより成し遂げ
られる。

以下に各方法に関し、さらに詳細な説明を述べる。

第一の発明において、ワックスエステル含有脂質製造の
ためスタフィロコッカスレンツを培養する場合、高濃度
の脂肪酸、脂肪族アルコール、グリセリド類を単独で又
は混合物として培養液に加えるが、それぞれ共に培地Ｉ
Ｉ！中に０．１〜１５０ｇ用いるのが好ましい。これら
基質類は、培地中にそのまま加えて激しく攪拌しエマル
ジョンとして用いることもできるが、脂肪酸類の場合、
好ましくは当該基質類をナトリウム塩又はカリウム塩等
の水溶性の塩として用いても良い。

また、基質乳化のためトリトンＸ−１ｏｏ、ポリビニル
アルコール、胆汁酸塩等々の乳化剤の添加も効果がある
。炭素源として、例えばグルコース、フラクトース、サ
ッカロース、糖蜜、デン粉、木材糖化液等が用いられる
。炭水化物として、培地ｌｌ中に６０〜４００ｇ用いる
ことが好ましい。また窒素源としては、例えば硝酸アン
モニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン
酸アンモニウムなどの様な無機窒素源、又は、尿素、ペ
プトン、酵母エキス、コーンスチープリカーなど有機窒
素源が用いられる。無機塩としては、例えばＫｌｈＰＯ
４、Ｋ２ＨＰＯ，、ＮａＣ１，Ｆｅ５Ｏｎ　・７ＪＯ１
Ｍｇｓｏ、　・７Ｈ２０、Ｚｎ５Ｏａ・７Ｈ２０等が用
いられる。その他必要に応じて微量元素、その他の栄養
源を添加する。

スタフィロコッカスレンツの培養は通常、？ａ体培地で
通気攪拌培養などにより行われる。培地のｐＨは４．０
〜９．０が良＜、撹拌速度３００〜８００　ｒ、ｐ。

慣１、通気１０．５〜２　ｕ、ｖ、ｍ、で１〜１５日間
培養が行われる。

このようにして、ワックスエステルに富む培地及び菌体
を発酵生産的に得ることができる。培地や菌体中からワ
ックスエステルに富む全脂質を抽出する方法は、ブライ
・ダイヤ−（Ｂｌｉｇｈ　＆　Ｄｙｅｒ）の方法〔参考
文献、　Ｅ、　Ｇ、　Ｂｌｉｇｈ　＆　Ｗ、　Ｊ、　Ｄ
ｙｅｒ；Ｃａｎ、　　Ｊ、　　Ｂｒｏｃｈｅｍ、　　Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ、＋　　３Ｌ　　９１１〜９１７（１９５
９）　）に代表される溶媒抽出法など、あるいは、超臨
界炭酸ガス抽出法なども有効であるが、本発明において
抽出法の違いが特に制約を受けることはない。

さらに、このようにして得られたスタフィロコッカスレ
ンツ菌体よりワックスエステル合成酵素系を抽出・分離
し、以下の様にワックスエステルの酵素的生産を行うこ
とができることは言うまでもない。

以上の方法でスタフィロコッカスレンツを用いワックス
エステルを発酵的に生産すると、培地１β当たり０．１
〜１５０ｇのワックスエステルに冨む脂質を得ることが
できる。また、ワックスエステル生産能力が高いこれら
微生物、例えばスタフィロコッカスレンツを担体に固定
化し連続的にワックスエステル含有油脂を生産すること
もできる。

次に第二の発明において、ワックスエステル生産のため
、ワックスエステル合成酵素としてアシルＣｏＡ：アル
コールアシルトランスフェラーゼを用いる場合について
説明する。

この酵素は精製酵素として用いてもよいが粗酵素のまま
用いても良い。バッチ式生産の場合、反応溶液（１００
ａｄ）中への酵素添加量は精製品換算で０．００１ｗ〜
３，０００　ｍｇ、望ましくは１００〜５００■が適当
であるが、基質類の種類のちがい、酵素源の差によって
最適添加量が変わるので、これらの添加量は特に限定さ
れることはない。精製品の作成方法は、例えば、参考文
献（Ｍ、にＡＹＡＭＡ、　Ｍ、ＭＡＮＫＩＪＲＡ　ａｎ
ｄ　Ｙ、ＩＫＥＤＡ　　：　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
８５．　１〜６（１９７９）　）を参照することができ
る。

また、基質となる脂肪酸や脂肪族アルコール又はグリセ
リドは共に１０■〜１５．０００ｍｇ、望ましくは１０
０ｍｇ〜３．０００ｍｇ添加することができるが、基質
類の組み合わせ方、酵素源の相異により最適添加量は変
わるので〜、これらの添加量は特に限定されない。基質
類は反応液中にそのまま加えて激しく撹拌しエマルジョ
ンとして用いることもできるが、脂肪酸類の場合、望ま
しくは当該基質類をナトリウム塩又はカリウム塩などの
水溶性の塩として用いた方が取り扱い易い。

別に、基質類乳化のためトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）　Ｘ
−１００，ポリビニルアルコール、胆汁酸塩、ショ糖脂
肪酸エステル、その他の一般的乳化剤などの添加も効果
がある。反応溶液のｐＨは３．５〜９．５の範囲が好ま
しく、このｐＨを調節するのに緩衝液を用いるとさらに
効果的で、ｐＨとして５．５〜８．０が特に好ましい範
囲である。また、補助因子としてはＭｇＺｏ、ＡＴＰ　
、　Ｃｏ１、ＮＡＤＨ１ＮＡＤＩ’Ｈ等を用いても良い
。ワックスエステル合成反応は４〜８５℃の範囲で行う
のが好ましい、１０℃未満では反応が遅く、６０℃を超
えると一般に酵素の失活をもたらす。従って、３５〜４
０℃で行うのが更に好ましい。また、反応は攪拌した方
が望ましいが、乳化状態にして静止反応もできる。ワッ
クスエステル合成反応は反応開始後３日間以上もの間進
行する。しかし、合成されたワックスエステル自身の再
分解、酵素蛋白質の変質を防ぐため、なるべく２４時間
以内の反応時間が好ましいが、反応溶液組成の違い、目
的とする製品の特徴を考えると、反応時間の長短は特に
限定されるものではない。反応は一段反応でも構わない
が、さらに反応を効率的に進める多段反応でも良い。ま
た、連続反応として固定化酵素カラムの使用もできる。

以上のようにして、ワックスエステル合成反応を行った
場合、合成率は通常３０〜９５％に達する。

反応の停止とワックスエステルを含む油脂類の抽出は、
前記ブライ・ダイア−の方法に従い、例えば以下のよう
に行うことができる。

即ち、反応溶液量の３倍量のクロロホルム−メタノール
混液を加えて５分間激しく攪拌し充分に混合した後、吸
引濾過する。濾液を分液ロートに移し一夜放置後、下層
（クロロホルム層）を分取し、無水硫酸ナトリウム又は
無水硫酸マグネシウムを用いて脱水し、エバポレーター
によりクロロホルムを減圧下に除くと、残留物としてワ
ックスエステルを含む油脂類が得られる。又は別法とし
て、超臨界炭酸ガス抽出法なども有効であるが、抽出法
の違いで特に制約を受けることはない。

さらに第三の発明に用いるワックスエステル分解酵素と
しては、ワックスエステルを本来生体内で代謝すること
の可能な前述の如き動植物類及び微生物類から調製でき
る。このような分解酵素は、例えば、動植物プランクト
ンであるアカルティアクラウシ（Ａｃａｒｔｉａ　ｃｌ
ａｕｓｉ）から調製できる。本酵素を用いる場合、精製
酵素として用いても良いが、粗酵素のまま用いても良い
。

バッチ式生産の場合、反応溶液（１００ｄ）中への酵素
添加量は精製品換算で０．００１■〜３　、０００■、
好ましくは１００〜５００■が適当であるが、酵素源の
違い、基質類の組合せ次第で最適添加量は変化するので
、これらの範囲に限定されることはない。

また、基質となる脂肪酸や脂肪族アルコール又はグリセ
リド類は共に１００〜４０，０００■、望ましくは１　
、０００■〜３０．０００■添加することができるが、
酵素源の違い、基質類の組合せ次第で最適添加量は変化
するので、これらの範囲に限定されることはない。基質
類は反応溶液中にそのまま加えて激しく撹拌しエマルジ
ョンとして用いることもできるが、脂肪酸類を用いる場
合には好ましくは当該基ｆｆ類をナトリウム塩又はカリ
ウム塩等の水溶性の塩とした方が扱い易い。別に基ｆ［
乳化のためトリトンｘ−ｔｏｏ、ポリビニルアルコール
、胆汁酸塩などの添加も効果がある。

ワックスエステル合成反応には水及び酵素を不活性化し
ない有機溶媒、例えば、石油エーテル、ヘキサン等を基
質に対して０．３〜１０倍、好ましくは０．５〜５倍量
用いるのが良い。水は基質に対し０．１〜１０％の範囲
で用いるのが良い。本酵素によるワックスエステル合成
の過程においては脂肪酸と脂肪族アルコールがエステル
化する際、水の生成と縮合反応を伴うため、ワックスエ
ステル合成の量に比例して系内の水分量が増加するので
、反応系内に脱水剤等を存在させて脱水しながら反応を
進めるのが望ましい。

反応は反応温度１０〜６０℃、望ましくは３０〜４０℃
において５〜８０時間続けるのが好ましい。

また、連続反応として固定化酵素カラムも使用できる。

即ち、酵素の再利用や回収、又は反応効率の向上を図る
ため、例えばセライト、アルミナ、キトサン等の様な不
活性支持体に固定化ないし吸着させて用いることもでき
る。さらに別に、メンプランバイオリアクター（Ｍｉｃ
ｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｍｅｎ＋ｂｒａｎｅｂｉｏｒｅａｃ
ｔｏｒ）を用いて、脱水とワックスエステル合成反応を
同時に行うこともできる。〔参考文献Ｍ、　Ｍ、　ｆｌ
ｏｇら：　ＪＡＯＣ３，６１（４）、　７７６〜７８０
１９８４））以上のようにしてワックスエステル合成反
応を行った場合、合成率は通常、２０〜９０％に達する
。

反応の停止とワックスエステルを含む油脂類の抽出は前
述のブライ・ダイヤ−法、超臨界炭酸ガス抽出法等々を
用いて行うことができるが、抽出法の違いは特に制約の
対象とはならない。さらに、ワックスエステル合成酵素
として、アシルＣｏＡ：アルコールアシルトランスフェ
ラーゼとワックスエステル分解酵素が共存する場合も以
上述べてぎたものと同様に操作することにより処理でき
る。

（発明の効果）本発明の方法によればスタフィロコッカスレンツを用い
て、あるいはアシルＣｏＡ：アルコールアシルトランス
フェラーゼを用いて、あるいは動物プランクトンである
アカルティアクラウシから得られるワックスエステル分
解酵素を用いて、酵素的にあるいは発酵的にワックスエ
ステルを高収率で高純度品を大量に生産することができ
る。

これらの生産物は食品、化粧品、医薬品等々の用途に利
用できる。例えばバルミチン酸又は／及びオレイルアル
コールを基質として、本発明の方法でワックスエステル
生産を行うならば、鯨油の主成分の一つであるオレイル
パルミテートを効率的に生産できる。

（実施例）以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１スタフィロコッカスレンツン（鎚北賎蝕図匹憇ｆｅｎ　
ｔｕｓ）を培養し、ワックスエステルを含む油脂類の生
産を行う方法に関する実施例を示す。

培地としては乾燥ブイヨンにッスイ製薬）　３０ｇを１
１の精製水に加えて加温溶解した後、所定の容器に分注
し、１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌したものを用いた
。表１に主な成分組成及びｐＨを示す。

表１　培地ＩＩ！中の組成（ｐＨ７，０±０．１）（単
位　ｇ）肉エキス　　　　　　　　　　　５．０ペプトン　　　
　　　　　　　１５．０塩化ナトリウム　　　　　　　
　５．０リン酸第−水素カリウム　　　　５．０合計　
　　　　　　　　　　　３０．０表１に示した培地に、
脂肪酸としてオレイン酸（１０，０ｇ）　、脂肪族アル
コールとしてオレイルアルコール（１０，０ｇ）を合わ
せたもの（計２０．０ｇ）をトリトンＸ　−１００（１
，０ｇ）で乳化し、培地中に加えた後、スタフィロコッ
カスレンツを接種した。以上の培地中にワックスエステ
ルが含まれていなかったことは言うまでもない。４０℃
で１週間培養した後、菌体を含む培養液から、ブライ・
ダイヤ−法にて総脂質を回収したところ、その含量は２
０．５ｇであった。なお、培養期間中に雑菌等の混入は
認められなかった。

得られた総脂質を薄層クロマトグラフィーにより定性的
に検討したところ、ワックスエステル、遊離脂肪酸、遊
離脂肪族アルコールの他、リン脂質、遊離ステロール類
、トリアジルグリセロール等が確認できた。総脂質のう
ち０．５ｇをケイ酸カラムクロマトグラフィーにより分
画し、ワックスエステル画分を０．１３　ｇ得た。従っ
て、培地１１当たり５．３３　ｇのワックスエステル（
主にオレイルオレエートとして）が生産されたことにな
る。

実施例２アシルＣｏＡ：アルコールアシルトランスフェラーゼに
よる脂肪酸を基質とした時のワックスエステル生産方法
に関する実施例を示す。

実施例１に示した乾燥ブイヨン培地にて４０℃で１週間
培養することにより得られたスタフィロコ・ノカスレン
ツ菌体を常法により破砕し、遠心分離（１０，０００ｘ
　ｇ、１０分）後、その上清を０．０１Ｍリン酸緩衝液
中（ｐＨ７，０）で硫安分画し、Ｏ〜５０％画分（０，
５ｇ　）を得、透析後これを粗酵素標品とした。

基質としてリノール酸（１，０ｇ）をカリウム塩とじ反
応溶液中に加えた。さらに、補助因子としてＡＴＰ、Ｃ
ｏＡ、　ＮＡＤＨＳＮＡＤＰＩＩ等を表２に示した割合
で加え、最終的に反応溶液容量を０．０１　Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，０）により１００−とじ、３５℃にて２
４時間インキュベーションした。

＊０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）により合計容
量を１００−に調整した。

反応終了後、各区より全脂質をブライ・ダイヤ−法に従
い抽出し、実施例１と同様にしてフックスエステル含量
を求めたところ、Ｎｏ、１　（０，１１ｇ）、Ｎｏ、２
　（０，３７ｇ）、Ｎｏ、３　（０，２５ｇ）、Ｎｏ、
４　（０，３５ｇ）となった。すなわち、本実施例の場
合、アシルＣｏＡ：アルコールアシルトランスフェラー
ゼによる脂肪酸からワックスエステルを生産するには、
脂肪酸の対化合物を得るために用いた粗酵素標品中に含
まれている脂肪酸の脂肪族アルコールへの還元酵素系を
賦活するためＭｇＺ＋、＾ＴＰ、　ＮＡＤＩＩ、又はＮ
ＡＤＰＩ＋の存在が効果的である。また、ＣｏＡはワッ
クスエステル合成の中間体となるＣｏ　Ａ　ＦＡ　導体
を合成するのに効果的である。

実施例３アシルＣｏＡ：アルコールアシルトランスフェラーゼに
よる脂肪族アルコールを基質とした時のワックスエステ
ル生産方法に関する実施例を示す。

コイー四り猛お阻し旦肛且神）の養殖場より新鮮なコイ
肝膵Ｉｉｉａ（５０ｇ）を入手し、水冷下ニ２　倍Ｗｋ
　Ｏ）　０　、０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）と共
にホモジエナイズし、遠心分離（１０，０００ｘ　ｇ　
、　１０分）後、その上清を硫安分画し、０〜５０％画
分を得（１，０ｇ）、透析後これを酵素標品とした。

基質としてオレイルアルコール（２，０ｇ）をトリトン
Ｘ　−１００（０，２ｇ）と共に乳化して反応溶液中に
加えた。補助因子としてＡＴＰ　、　ＣｏＡを表３に示
すように加えた。最終的に反応溶液容量を０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，０）により１００−とじて、３０
℃にて２４時間インキュベートした。

＊　０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）により合計
容量を１００−に調整した。

反応終了後、各区より全脂質をブライ・ダイヤ−法によ
り抽出し、実施例１と同様にしてフックスエステル含量
を求めたところ、Ｎｏ、１　（０，３２ｇ）、Ｎｏ、２
　（１，２８ｇ）、Ｎｏ、３　（１，６３ｇ）であった
。従って、ＡＴＰ　、　ＣｏＡ等の反応溶液中への添加
はさらに有効であることがわかる。

実施例４ワックスエステル分解酵素による脂肪酸又は脂肪族アル
コールからのワックスエステル生産方法に関する実施例
を示す。

ワックスエステルを多く含む動物プランクトンであるア
カルチアクラウシ（Ａｃａｒｔｉａ　ｃｌａｕｓｉｓか
い脚類）　１００ｇ　（湿重量として）を入手し、水冷
下に２倍量の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）　
と共にホモジェナイズし、遠心分離（１０，０ＯＯｘ　
ｇ　、　１０分）後、その上清を硫安分画し、０〜５０
％画分を得た（１．０ｇ）。透析後セファデックス（Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　−２００カラムによりゲル濾過
し、ワックスエステル分解酵素画分の粗精製品を得た（
タンパク質含量１２０ｍｇ１０．ＯＩＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）　９−）。基質としてオレイン酸、オレイ
ルアルコールをｎ−ヘキサンと共に加え、マグネソトス
クーラーで激しく攪拌しながら４８時間、３０℃で反応
させた。反応溶液組成を表４に示す。

表４＊粗酵素標品（１２０■のタンパク質を含む）は９　ｍ
ｌの０．００１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ＋７．０）に溶解
されている。

反応終了後、遠心分離（６，０００Ｘ　ｇ　、　３０分
）により脱水し、油脂成分を回収し、実施例１と同様に
してワックスエステル含量を求めた。Ｎｏ、１　（２１
ｇ、合成率１０．５％）　、Ｎｏ、２　（８８ｇ　、合
成率２２％）、Ｎｏ、３　（７８ｇ　１合成率１３．０
ｇ　）　、Ｎｏ、４　（６９ｇ、合成率８．６％）であ
った。

実施例５スタフィロコッカスレンツを培養し、トリグリセリドか
らワックスエステルを多く含む油脂類の生産を行う方法
に関し実施例を示す。

基質として精製イワシ油５０ｇ（）リグリセリド含量９
９％以上）を用い、表５の培地組成を用いた。

表５　培地ｌｌ中の組成　（ｐＨ７，５）イオン交換水
にて１１にメスアップする。

３５°Ｃで４日間培養後、菌体を含む培養液からブライ
・ダイヤ−法にて総脂質を回収したところ、その含量は
４１ｇであった。実施例１の方法に従い、精製分画した
ところ、１８．０　ｇのワックスエステルを得た。従っ
て、培地１１当たり１８．０　ｇのワックスが生産され
たことになり、与えた基質量に対する収率は３６．０％
となる。この時、得られたワックスエステルの鎖長分布
をＧＬＣにより求めたところ、表６に示す様な分布が得
られた。

表６分析条件は文献に準じて行った。（引用文献：Ｍ、　　
ＫＡＹＡＭＡ　　ら、　　Ｙｕｋａｇａｋｕ、、　　２
３．　２９０〜２９５　　（１９７４））。

この表から、炭素数３０以上がほとんどで、特に生理活
性の高い炭素数４０以上のワックスエステルが全体の約
２０％得られたことになる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）脂肪酸及び／又はその誘導体を基質とし、スタフ
ィロコッカスレンツ（￥Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ｌｅｎｔｕｓ￥）を培養することによりワックスエステ
ル含有脂質を得ることを特徴とするワックスエステルの
生産方法。
（２）脂肪酸及び／又はその誘導体を基質とし、ワック
スエステル合成酵素としてアシルＣｏＡ：アルコールア
シルトランスフェラーゼを用いることを特徴とするワッ
クスエステルの生産方法。
（３）脂肪酸及び／又はその誘導体を基質とし、動物プ
ランクトンであるアカルティアクラウシ（Ａｃａｒｔｉ
ａｃｌａｕｓｉ）から得られるワックスエステル分解酵
素を用いることを特徴とするワックスエステルの生産方
法。