JPH01187092A - Ｌ−イソロイシンの精製法 - Google Patents
Ｌ−イソロイシンの精製法Info
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- JPH01187092A JPH01187092A JP951988A JP951988A JPH01187092A JP H01187092 A JPH01187092 A JP H01187092A JP 951988 A JP951988 A JP 951988A JP 951988 A JP951988 A JP 951988A JP H01187092 A JPH01187092 A JP H01187092A
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Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はＬ−イソロイシンの精製法に関する。
さらに詳しくは醗酵法又は酵素法により得られたＬ−イ
ソロイシンを含む反応液等からバリン等のアミノ酸を主
体とする不純物を除去するインロイシンの精製法に関す
るものである。
ソロイシンを含む反応液等からバリン等のアミノ酸を主
体とする不純物を除去するインロイシンの精製法に関す
るものである。
Ｌ−イソロイシンは必須アミノ酸の一つであり、医薬品
、飼料等に使用される有用な化合物である。
、飼料等に使用される有用な化合物である。
Ｌ−イソロイシンの製造法としては、ＤＬ−α−アミノ
酪酸、α−ケト酪酸、Ｄ−スレオニン等を前駆体とする
醗酵法及び酵素法が確立され、反応液中に生成されたＬ
−イソロイシンを精製することが知られている。
酪酸、α−ケト酪酸、Ｄ−スレオニン等を前駆体とする
醗酵法及び酵素法が確立され、反応液中に生成されたＬ
−イソロイシンを精製することが知られている。
Ｌ−イソロイシンは醗酵法又は酵素法により中性付近の
水性媒体中で菌体や酵素の存在下、例えばＤＬ−α−ア
ミノ酪酸を前駆体として得られているが、得られた反応
液中に含有されているバリンその他のアミノ酸の不純物
を除去せねばならない、そのため非極性多孔質合成吸着
剤（特開昭５４−５５５１９）やイオン交換樹脂（特開
昭５６−１３１５５０）を用いてＬ−イソロイシンをｗ
Ｉｉ製する方法が知られている。ところで、活性炭を用
いてＬ−イソロイシンをクロマト分離した例は無く、類
似構造を持つロイシンとバリンを分離した報告において
も、溶離液として酢酸エチル水溶液あるいはリン酸緩衝
液を用いている（Ｊ、Ｐ。
水性媒体中で菌体や酵素の存在下、例えばＤＬ−α−ア
ミノ酪酸を前駆体として得られているが、得られた反応
液中に含有されているバリンその他のアミノ酸の不純物
を除去せねばならない、そのため非極性多孔質合成吸着
剤（特開昭５４−５５５１９）やイオン交換樹脂（特開
昭５６−１３１５５０）を用いてＬ−イソロイシンをｗ
Ｉｉ製する方法が知られている。ところで、活性炭を用
いてＬ−イソロイシンをクロマト分離した例は無く、類
似構造を持つロイシンとバリンを分離した報告において
も、溶離液として酢酸エチル水溶液あるいはリン酸緩衝
液を用いている（Ｊ、Ｐ。
ＧｒｅｅｎｓｔｅｉｎＪ、’ＷｉｎｉＬｚ、”Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ゛＾ｍｉｎ。
ｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ゛＾ｍｉｎ。
Ａｃ１ｄｓ＋ｖｏｌ ２’、ｐ１４４７． Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ ５ｏｎｓ、 Ｉｎｃ、。
Ｗｉｌｅｙ ＆ ５ｏｎｓ、 Ｉｎｃ、。
Ｎｅｗ Ｗｏｒｋ （１９６１）、Ｆ、Ｔｕｒｂａ ＋
Ｍ、Ｒｉｃｈｔｅｒ、 Ｆ、Ｋｕｃｈａｒ、 ＮａＬ
ｕｒｗｉｓｓ、、 、１１．５０８ （１９４３）、）
＊〔発明が解決しようとしている問題点〕従来の非極性
多孔質合成吸着剤は、その殆んどがスチレン−ジビニル
ベンゼン系の架橋重合体である。これら一般に使用され
ている非極性多孔質合成吸着剤ではＬ−イソロイシンと
バリン等のアミノ酸を主体とする不純物との破過点が殆
んど同じであるため充分な分離性能が得られず、Ｌ−イ
ソロイシンの回収率は非常に低い、このことは別の特許
でも発明者の大釜らが指摘している（特開昭６１−１７
８９５２．２買上から１２行〜１９行目）。
Ｍ、Ｒｉｃｈｔｅｒ、 Ｆ、Ｋｕｃｈａｒ、 ＮａＬ
ｕｒｗｉｓｓ、、 、１１．５０８ （１９４３）、）
＊〔発明が解決しようとしている問題点〕従来の非極性
多孔質合成吸着剤は、その殆んどがスチレン−ジビニル
ベンゼン系の架橋重合体である。これら一般に使用され
ている非極性多孔質合成吸着剤ではＬ−イソロイシンと
バリン等のアミノ酸を主体とする不純物との破過点が殆
んど同じであるため充分な分離性能が得られず、Ｌ−イ
ソロイシンの回収率は非常に低い、このことは別の特許
でも発明者の大釜らが指摘している（特開昭６１−１７
８９５２．２買上から１２行〜１９行目）。
又、イオン交換樹脂を用いた精製法では、イオン交換樹
脂の再生に多量の酸、アルカリを必要とするので、コス
ト高となる。さらに共存無機塩が多い場合、イオン交換
樹脂の交換能が無機塩と交換するためＬ−イソロイシン
に対して多量のイオン交換樹脂を必要とし、実質的に使
用できなくなる等の問題がある。
脂の再生に多量の酸、アルカリを必要とするので、コス
ト高となる。さらに共存無機塩が多い場合、イオン交換
樹脂の交換能が無機塩と交換するためＬ−イソロイシン
に対して多量のイオン交換樹脂を必要とし、実質的に使
用できなくなる等の問題がある。
又、前述の活性炭を用いた精製法では、回収液中に助剤
（酢酸エチルやリン酸緩衝液）が混入するため単離操作
が煩雑で活性炭の再生が必要となり助剤費が高くなり経
済的になりたたない。
（酢酸エチルやリン酸緩衝液）が混入するため単離操作
が煩雑で活性炭の再生が必要となり助剤費が高くなり経
済的になりたたない。
ｃ問題を解決するための手段〕
本発明者らは、上記のような問題点を解決すべく鋭意検
討の結果、本発明方法に到達したものである。
討の結果、本発明方法に到達したものである。
即ち本発明の精製法は、醗酵法又は酵素法により得たし
一インロイシンを含む反応液を活性炭に通液して、次い
で水を通液し、不純物を溶出せしめた時点で通水を止め
、活性炭に吸着されたＬ−イソロイシンをアンモニア水
を用いて溶離させ、溶離液から常法に従ってＬ−イソロ
イシンを単離することを特徴とするＬ−イソロイシンの
精製法である。
一インロイシンを含む反応液を活性炭に通液して、次い
で水を通液し、不純物を溶出せしめた時点で通水を止め
、活性炭に吸着されたＬ−イソロイシンをアンモニア水
を用いて溶離させ、溶離液から常法に従ってＬ−イソロ
イシンを単離することを特徴とするＬ−イソロイシンの
精製法である。
Ｌ−イソロイシンよりも活性炭に対し親和性の高い不純
物は、アンモニア水で溶層する時にクロマト分離出来る
。
物は、アンモニア水で溶層する時にクロマト分離出来る
。
本発明において使用されるＬ−イソロイシンを含む反応
液とは、例えば醗酵液又は酵素反応液より分離した液な
どがあげられる。この他にもバリンその他のアミノ酸等
が夾雑したＬ−イソロイシン含有水溶液であれば、本発
明を有効に適用できる。
液とは、例えば醗酵液又は酵素反応液より分離した液な
どがあげられる。この他にもバリンその他のアミノ酸等
が夾雑したＬ−イソロイシン含有水溶液であれば、本発
明を有効に適用できる。
本発明方法の出発物であるＬ−イソロイシン水溶液のＬ
−イソロイシン濃度としては、Ｌ−イソロイシンの飽和
溶解度以下なら良い。
−イソロイシン濃度としては、Ｌ−イソロイシンの飽和
溶解度以下なら良い。
本発明で用いられる活性炭の種類は、石炭系活性炭、や
し酸系活性炭、木炭系活性炭、石油ピンチ系活性炭等で
あって、特に−限されるものではなく、例えば、ダイヤ
ホープ００８．３８０．ダイヤソープＧ、Ｗ（三菱化成
工業ｗ製） 、ＨＣ−３０Ｓ、ＧＬ−３０，２ＧＬ、４
ＧＬ （ツルミコール■製） 、ＢＡＣ−ＬＰ、ＭＰ
（奥羽化学工業■製）、タラレコールＧＷ、ＯＬ、ＧＬ
Ｃ，’ ＰＫ（クラレケミカル＠１６１！Ｉ） 、ＬＨ
２Ｃ，Ｗ５Ｃ，ＫＬ（武田薬品工業■製）などを適宜使
用することができる。
し酸系活性炭、木炭系活性炭、石油ピンチ系活性炭等で
あって、特に−限されるものではなく、例えば、ダイヤ
ホープ００８．３８０．ダイヤソープＧ、Ｗ（三菱化成
工業ｗ製） 、ＨＣ−３０Ｓ、ＧＬ−３０，２ＧＬ、４
ＧＬ （ツルミコール■製） 、ＢＡＣ−ＬＰ、ＭＰ
（奥羽化学工業■製）、タラレコールＧＷ、ＯＬ、ＧＬ
Ｃ，’ ＰＫ（クラレケミカル＠１６１！Ｉ） 、ＬＨ
２Ｃ，Ｗ５Ｃ，ＫＬ（武田薬品工業■製）などを適宜使
用することができる。
活性炭の使用量としては、Ｌ−イソロイシンに対して１
０〜５０倍量（重量基準）程度で充分である。
０〜５０倍量（重量基準）程度で充分である。
又、通液時の被処理液のｐＨは中性が好ましく、温度は
８０℃以下で、空とう速度５ｖ＝ｏ、ｓ〜５ｈｒ−で行
う。
８０℃以下で、空とう速度５ｖ＝ｏ、ｓ〜５ｈｒ−で行
う。
Ｌ−イソロイシンの溶離に用いられるアンモニア水の濃
度は限定されず、活性炭からＬ−イソロイシンを溶離す
るために充分な濃度を用いれば良いが、０．１〜１０規
定程度のアンモニア水が好ましい、一般に低濃度のアン
モニア水を用いると、溶離する際にＬ−イソロイシンよ
りも活性炭に対し親和性の高い不純物をクロマト分離で
きる利点があり、高濃度のアンモニア水を用いると、Ｌ
−イソロイシンを高濃度で回収でき後の単離操作が容易
となる長所がある。
度は限定されず、活性炭からＬ−イソロイシンを溶離す
るために充分な濃度を用いれば良いが、０．１〜１０規
定程度のアンモニア水が好ましい、一般に低濃度のアン
モニア水を用いると、溶離する際にＬ−イソロイシンよ
りも活性炭に対し親和性の高い不純物をクロマト分離で
きる利点があり、高濃度のアンモニア水を用いると、Ｌ
−イソロイシンを高濃度で回収でき後の単離操作が容易
となる長所がある。
得られたＬ−イソロイシンを含むアンモニア溶離液は、
公知の単離方法即ち濃縮、晶析、固液分離、乾燥等の単
位操作により低コストで容易に高純度で収率良くＬ−イ
ソロイシンを単離することができる。
公知の単離方法即ち濃縮、晶析、固液分離、乾燥等の単
位操作により低コストで容易に高純度で収率良くＬ−イ
ソロイシンを単離することができる。
以上詳しく説明したごとく、本発明は活性炭を用い、Ｌ
−イソロイシン中に夾雑するバリン等のアミノ酸を主体
とする不純物を精製除去する新規にして簡便なＬ−イソ
ロイシン精製法を提供するものである。
−イソロイシン中に夾雑するバリン等のアミノ酸を主体
とする不純物を精製除去する新規にして簡便なＬ−イソ
ロイシン精製法を提供するものである。
実施例１
ＤＬ−α−アミノ酪酸を前駆体としてブレビバクテリウ
ム・フラバム（ＢｒｅｖｉｂａｃＬｅｒｉｕｍ ｆｌ
ａｖｕｍ）を用いて得られたＬ−イソロイシン醗酵液を
除菌して得たＬ−イソロイシン１９．７ｇ／ｊ及びＬ−
バリン０．１ｇ／１４．ｌ）−α−アミノ酪酸１１．５
ｇ／Ｊ、Ｌ−アラニン３．Ｉｇ／ｊ、グリシン２．７ｇ
／ｊ！、Ｌ−リジン０．２ｇ／１等を含むＬ−イソロイ
シン水溶液２００ｍｌをダイヤホープ００８ ２８０ｒ
ｎ＆を充填したカラム（φ３ 、 ２ ａｌ Ｘ Ｈ３
５ａｍ ）の上部に注入した０次にＳ 、Ｖ ＝ ３
ｈ ｒ−’で水を通し、バリン等の不純物が溶離した時
点で通水を止め、次いで２規定アンモニア水を通液しＬ
−イソロイシン溶液を得た。Ｌ−イソロイシン溶液中の
Ｌ−バリン、Ｄ−α−アミノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリ
シン、Ｌ−リジンの除去率はそれぞれ１００％、１００
％、１００％、１００％、５３％であり、Ｌ−イソロイ
シンの回収率は８４％であった。
ム・フラバム（ＢｒｅｖｉｂａｃＬｅｒｉｕｍ ｆｌ
ａｖｕｍ）を用いて得られたＬ−イソロイシン醗酵液を
除菌して得たＬ−イソロイシン１９．７ｇ／ｊ及びＬ−
バリン０．１ｇ／１４．ｌ）−α−アミノ酪酸１１．５
ｇ／Ｊ、Ｌ−アラニン３．Ｉｇ／ｊ、グリシン２．７ｇ
／ｊ！、Ｌ−リジン０．２ｇ／１等を含むＬ−イソロイ
シン水溶液２００ｍｌをダイヤホープ００８ ２８０ｒ
ｎ＆を充填したカラム（φ３ 、 ２ ａｌ Ｘ Ｈ３
５ａｍ ）の上部に注入した０次にＳ 、Ｖ ＝ ３
ｈ ｒ−’で水を通し、バリン等の不純物が溶離した時
点で通水を止め、次いで２規定アンモニア水を通液しＬ
−イソロイシン溶液を得た。Ｌ−イソロイシン溶液中の
Ｌ−バリン、Ｄ−α−アミノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリ
シン、Ｌ−リジンの除去率はそれぞれ１００％、１００
％、１００％、１００％、５３％であり、Ｌ−イソロイ
シンの回収率は８４％であった。
実施例２
α−ケト酪酸を前駆体としてブレビバクテリウム・フラ
バム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｓ ｆｌａｖｕｓ
）を用いて得られたＬ−イソロイシン酵素反応液を除菌
して得たＬ−イソロイシン１０．８ｇ／ｊ及びＬ−バリ
ン０．３ｇ／Ｉｔ、 Ｌ−α−アミノ酪酸０．１ｇ／Ｉ
ｔ、Ｌ−アラニン０，２ｇ／ｌ、グリシン０．５ｇ／ｊ
！、Ｌ−リジン０．６ｇ／ｊ等を含むＬ−イソロイシン
水溶液３６０ｍＪをＢＡＣ−ＬＰ２８０ｍｊを充填した
カラム（φ３．２３ＸＨ３５ｃｍ）の上部に注入した０
次にＳ Ｖ ＝ ３ ｈ ｒ−１で水を通液し、バリン
等の不純物が溶離した時点で通水を止め、カラムの温度
を６０℃に保ちなから２規定のアンモニア水を通液し、
Ｌ−イソロイシンを得た。Ｌ−イソロイシン溶液中のＬ
−バリン、Ｌ−α−アミノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリシ
ン、Ｌ−リジンの除去率はそれぞれ９７％、１００％、
１００％、 １００％、９５％であり、Ｌ−イソロイ
シンの回収率は７２％であった。
バム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｓ ｆｌａｖｕｓ
）を用いて得られたＬ−イソロイシン酵素反応液を除菌
して得たＬ−イソロイシン１０．８ｇ／ｊ及びＬ−バリ
ン０．３ｇ／Ｉｔ、 Ｌ−α−アミノ酪酸０．１ｇ／Ｉ
ｔ、Ｌ−アラニン０，２ｇ／ｌ、グリシン０．５ｇ／ｊ
！、Ｌ−リジン０．６ｇ／ｊ等を含むＬ−イソロイシン
水溶液３６０ｍＪをＢＡＣ−ＬＰ２８０ｍｊを充填した
カラム（φ３．２３ＸＨ３５ｃｍ）の上部に注入した０
次にＳ Ｖ ＝ ３ ｈ ｒ−１で水を通液し、バリン
等の不純物が溶離した時点で通水を止め、カラムの温度
を６０℃に保ちなから２規定のアンモニア水を通液し、
Ｌ−イソロイシンを得た。Ｌ−イソロイシン溶液中のＬ
−バリン、Ｌ−α−アミノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリシ
ン、Ｌ−リジンの除去率はそれぞれ９７％、１００％、
１００％、 １００％、９５％であり、Ｌ−イソロイ
シンの回収率は７２％であった。
比較例
Ｌ−イソロイシン２４゜９ ｇ ／ Ｊ 及びＬ−バリ
ン１． ８ ｇ／ｊ！、 ＤＬ−ａ−７ｔ／１１Ｍ５．
３ ｇ／ｌ、Ｌ−アラニン２．８ｇ／ｊ、グリシン２
゜１ｇ／ｊ、Ｌ−リジン０．６ｇ／ｌを含むＬ−イソロ
イシン水溶液３０ ｍ Ｊ！を非極性多孔質合成吸着剤
であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成工業特製）６
２５ｍｊを充填したカラム（φ３ ｃｍ ＸＨ８８ｃｍ
）の上部に注入した。５Ｖ＝１．５ｈｒ−１で水を通液
し、Ｌ−イソロイシン溶液を得た。
ン１． ８ ｇ／ｊ！、 ＤＬ−ａ−７ｔ／１１Ｍ５．
３ ｇ／ｌ、Ｌ−アラニン２．８ｇ／ｊ、グリシン２
゜１ｇ／ｊ、Ｌ−リジン０．６ｇ／ｌを含むＬ−イソロ
イシン水溶液３０ ｍ Ｊ！を非極性多孔質合成吸着剤
であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成工業特製）６
２５ｍｊを充填したカラム（φ３ ｃｍ ＸＨ８８ｃｍ
）の上部に注入した。５Ｖ＝１．５ｈｒ−１で水を通液
し、Ｌ−イソロイシン溶液を得た。
Ｌ−イソロイシン溶液中のＬ−バリン、ＤＬ−α−アミ
ノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリシン、Ｌ−リジンの除去率
は全て１００％であったが、Ｌ−イソロイシンの回収率
は７％と低く、８４％のＬ−イソロイシンはバリン等の
不純物と一緒に溶離していた。
ノ酪酸、Ｌ−アラニン、グリシン、Ｌ−リジンの除去率
は全て１００％であったが、Ｌ−イソロイシンの回収率
は７％と低く、８４％のＬ−イソロイシンはバリン等の
不純物と一緒に溶離していた。
前述の通り本発明方法により、バリンなどのアミノ酸を
主体とする不純物を夾雑したＬ−イソロイシンの水溶液
から極めて効率良くＬ−イソロイシンを精製することが
出来る。又、本発明方法は、助剤等の経費が嵩まず工業
的に画期的なＬ−イソロイシンの精製方法である。
主体とする不純物を夾雑したＬ−イソロイシンの水溶液
から極めて効率良くＬ−イソロイシンを精製することが
出来る。又、本発明方法は、助剤等の経費が嵩まず工業
的に画期的なＬ−イソロイシンの精製方法である。
Claims (1)
- （１）Ｌ−イソロイシンにバリン等のアミノ酸を主体と
する不純物の夾雑したＬ−イソロイシン含有水溶液を活
性炭と接触させて、Ｌ−イソロイシンを活性炭に吸着さ
せた後この活性炭に水を通液し、次いで吸着Ｌ−イソロ
イシンをアンモニア水を用いて溶離回収することを特徴
とするＬ−イソロイシンの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP951988A JP2587671B2 (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | Ｌ−イソロイシンの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP951988A JP2587671B2 (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | Ｌ−イソロイシンの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01187092A true JPH01187092A (ja) | 1989-07-26 |
| JP2587671B2 JP2587671B2 (ja) | 1997-03-05 |
Family
ID=11722510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP951988A Expired - Lifetime JP2587671B2 (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | Ｌ−イソロイシンの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2587671B2 (ja) |
-
1988
- 1988-01-21 JP JP951988A patent/JP2587671B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2587671B2 (ja) | 1997-03-05 |
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