JP7315594B2 - Lrrk2発現を低減するための化合物及び方法 - Google Patents
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Description
本出願は、電子形式で配列表と共に出願されている。配列表は、サイズが1.12MBである、2019年6月14日に作成されたBIOL0324WOSEQ_ST25.txtのファイル名で提供される。配列表の電子形式での情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、ならびに医薬的及び薬学的化学に関連して使用される用語法、ならびにそれらの手順及び技法は、当該技術分野で周知のものであり、一般的に使用される。許される場合、本開示全体において参照される全ての特許、出願、公開された出願、ならびに他の出版物及び他のデータは、それらの全体が本明細書において参照により組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「2’-デオキシヌクレオシド」とは、天然型のデオキシリボ核酸(DNA)中に見出されるような、2’-H(H)デオキシリボシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態では、2’-デオキシヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含み得るか、またはRNA核酸塩基(ウラシル)を含み得る。
本開示は、以下の非限定的な番号付きの実施形態を提供する。
実施形態1.12~50個の結合されたヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、LRRK2核酸の等長部分と少なくとも90%相補的であり、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖、糖サロゲート、及び修飾されたヌクレオシド間結合から選択される少なくとも1つの修飾を含む、前記オリゴマー化合物。
配列番号2の核酸塩基18,633~18,658の等長部分、
配列番号2の核酸塩基21,721~21,755の等長部分、
配列番号2の核酸塩基27,963~28,016の等長部分、
配列番号2の核酸塩基35,415~35,446の等長部分、
配列番号2の核酸塩基77,221~77,264の等長部分、
配列番号2の核酸塩基81,581~81,612及び/または87,838~87,869の等長部分、
配列番号2の核酸塩基81,627~81,651の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,058~82,081の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,180~82,220の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,500~82,525の等長部分、
配列番号2の核酸塩基91,038~91,067の等長部分、
配列番号2の核酸塩基92,148~92,173の等長部分、
配列番号2の核酸塩基98,186~98,220の等長部分、
配列番号2の核酸塩基98,218~98,242の等長部分、
配列番号2の核酸塩基99,199~99,223の等長部分、
配列番号2の核酸塩基119,903~119,936の等長部分、または
配列番号1の核酸塩基4,062~4,086の等長部分に相補的である、前記オリゴマー化合物。
1~5個の結合された5’領域ヌクレオシドからなる5’領域、
6~10個の結合された中心領域ヌクレオシドからなる中心領域、及び
1~5個の結合された3’領域ヌクレオシドからなる3’領域を含む糖モチーフを有し、
前記5’領域ヌクレオシドの各々及び前記3’領域ヌクレオシドの各々が、修飾された糖部分を含み、前記中心領域ヌクレオシドの各々が、修飾されていない2’-デオキシリボシル糖部分を含む、実施形態1~12のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
Ges mCeo Teo mCeo Aes Tds Ads Tds mCds Tds Ads Ads Ads Gds Ads mCeo mCeo Ges mCes Ae(配列番号222);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
Tes mCeo Aeo mCeo mCes Ads mCds Ads Ads Ads mCds Tds mCds Ads Tds Geo Geo Aes mCes Te(配列番号888);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
Aes mCeo mCeo mCeo Tes Tds Tds mCds mCds Ads Tds Gds Tds Gds Ads Aeo mCeo Aes Tes Te(配列番号1431);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
Aes mCeo Geo mCeo Aes mCds Tds Tds Ads Ads mCds Ads Ads Tds Ads Teo mCeo Aes Tes Ae(配列番号3590)、式中、
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
ある特定の実施形態では、結合されたヌクレオシドからなるオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物が本明細書に提供される。オリゴヌクレオチドは、修飾されていないオリゴヌクレオチド(RNAまたはDNA)であり得るか、または修飾されたオリゴヌクレオチドであり得る。修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾されていないRNAまたはDNAに対して少なくとも1つの修飾を含む。すなわち、修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド(修飾された糖部分及び/または修飾された核酸塩基を含む)及び/または少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む。
修飾されたヌクレオシドは、修飾された糖部分または修飾された核酸塩基または修飾された糖部分及び修飾された核酸塩基の両方を含む。
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、非二環式の修飾された糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、二環式または三環式糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、糖サロゲートである。そのような糖サロゲートは、修飾された糖部分の他の種類のものに対応する1つ以上の置換を含み得る。
式中、
xは、0、1、または2であり、
nは、1、2、3、または4であり、
各Ra及びRbは独立して、H、保護基、ヒドロキシル、C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、置換C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、置換C2-C12アルキニル、C5-C20アリール、置換C5-C20アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、C5-C7脂環式ラジカル、置換C5-C7脂環式ラジカル、ハロゲン、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、アシル(C(=O)-H)、置換アシル、CN、スルホニル(S(=O)2-J1)、またはスルホキシル(S(=O)-J1)であり、
各J1及びJ2は独立して、H、C1-C12アルキル、置換C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、置換C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、置換C2-C12アルキニル、C5-C20アリール、置換C5-C20アリール、アシル(C(=O)-H)、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、C1-C12アミノアルキル、置換C1-C12アミノアルキル、または保護基である。
Bxは、核酸塩基部分であり、
T3及びT4は各々独立して、修飾されたTHPヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であるか、またはT3及びT4の一方は、修飾されたTHPヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であり、T3及びT4の他方は、H、ヒドロキシル保護基、結合された複合群、または5’もしくは3’-末端基であり、
q1、q2、q3、q4、q5、q6、及びq7は、各々独立して、H、C1-C6アルキル、置換C1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、置換C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、または置換C2-C6アルキニルであり、
R1及びR2の各々は独立して、水素、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、NJ1J2、SJ1、N3、OC(=X)J1、OC(=X)NJ1J2、NJ3C(=X)NJ1J2、及びCNの中から選択され、Xは、O、S、またはNJ1であり、各J1、J2、及びJ3は独立して、HまたはC1-C6アルキルである。
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾されていない核酸塩基を含む1つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含む1つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオシドと称される、核酸塩基を含まない1つ以上のヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を使用して一緒に結合されてもよい。ヌクレオシド間結合基の2つの主な分類は、リン原子の存在または不在下によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、これらに限定されないが、ホスホジエステル結合(「P=O」)(修飾されていないまたは天然型結合とも称される)を含むホスフェート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、及びホスホロチオエート(「P=S」)、及びホスホロジチオエート(「HS-P=S」)を含む。代表的な非リン含有ヌクレオシド間結合基には、これらに限定されないが、メチレンメチルイミノ(-CH2-N(CH3)-O-CH2-)、チオジエステル、チオノカルバメート(-O-C(=O)(NH)-S-)、シロキサン(-O-SiH2-O-)、及びN,N’-ジメチルヒドラジン(-CH2-N(CH3)-N(CH3)-)が含まれる。修飾されたヌクレオシド間結合は、天然型ホスフェート結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を改変、典型的には増加するために使用され得る。ある特定の実施形態では、キラル原子を有するヌクレオシド間結合は、ラセミ混合物、または別個のエナンチオマーとして調製され得る。リン含有及び非リン含有ヌクレオシド間結合の調製方法は、当業者に周知である。
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された糖部分を含む1つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含む1つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、1つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。そのような実施形態では、修飾された、修飾されていない、及び異なって修飾された糖部分、核酸塩基、及び/または修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、パターンまたはモチーフを定義する。ある特定の実施形態では、糖部分、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合のパターンはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、修飾されたオリゴヌクレオチドは、その糖モチーフ、核酸塩基モチーフ、及び/またはヌクレオシド間結合モチーフによって説明され得る(本明細書で使用される場合、核酸塩基モチーフは、核酸塩基の配列とは無関係である核酸塩基に対する修飾を説明する)。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたは糖モチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される1つ以上の種類の修飾された糖及び/または修飾されていない糖部分を含む。ある特定の例では、そのような糖モチーフは、これらに限定されないが、本明細書に記載される糖修飾うちのいずれかを含む。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び/または修飾されていない核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、各核酸塩基は、修飾されている。ある特定の実施形態では、核酸塩基のうちのいずれも修飾されていない。ある特定の実施形態では、各プリンまたは各ピリミジンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各アデニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各グアニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各チミンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各ウラシルは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各シトシンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドにおけるシトシン核酸塩基のいくつかまたは全ては、5-メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、シトシン核酸塩基の全ては、5-メチルシトシンであり、修飾されたオリゴヌクレオチドの他の核酸塩基の全ては、修飾されていない核酸塩基である。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び/または修飾されていないヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、各ヌクレオシド間結合基は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(P=O)である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合基は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(P=S)である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は独立して、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合及びホスホジエステルヌクレオシド間結合から選択される。ある特定の実施形態では、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は独立して、ステレオランダムホスホロチオエート、(Sp)ホスホロチオエート、及び(Rp)ホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ギャップ内のヌクレオシド間結合は全て、修飾されている。ある特定のそのような実施形態では、ウイングにおけるヌクレオシド間結合のうちのいくつかまたは全ては、修飾されていないホスホジエステルヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、末端ヌクレオシド間結合は、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ヌクレオシド間結合モチーフは、少なくとも1つのウイングにおいて少なくとも1つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含み、少なくとも1つのホスホジエステル結合は、末端ヌクレオシド間結合ではなく、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある特定のそのような実施形態では、ホスホロチオエート結合の全ては、ステレオランダムである。ある特定の実施形態では、ウイングにおける全てのホスホロチオエート結合は、(Sp)ホスホロチオエートであり、ギャップは、少なくとも1つのSp、Sp、Rpモチーフを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、そのようなヌクレオシド間結合モチーフを含む修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。
オリゴヌクレオチドの長さを、活性を排除することなく増加または減少させることが可能である。例えば、Woolf et al.(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:7305-7309,1992)において、13~25核酸塩基長の一連のオリゴヌクレオチドが、卵母細胞注射モデルにおいて標的RNAの切断を誘発するそれらの能力について試験された。オリゴヌクレオチドの末端付近に8または11個の不適合塩基を有する25核酸塩基長のオリゴヌクレオチドは、不適合を含まないオリゴヌクレオチドよりも少ない程度ではあるが、標的RNAの特異的切断を指示することができた。同様に、標的特異的切断は、1または3つの不適合を有するものを含む13個の核酸塩基オリゴヌクレオチドを使用して達成された。
ある特定の実施形態では、上記の修飾(糖、核酸塩基、ヌクレオシド間結合)は、修飾されたオリゴヌクレオチドに抱合される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、それらの修飾、モチーフ、及び全体の長さによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、そのようなパラメータはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、特に指示がない限り、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾されていても修飾されていなくてもよく、糖修飾のギャップマー修飾パターンに従っていても従っていなくてもよい。例えば、糖ギャップマーのウイング領域内のヌクレオシド間結合は、互いに同じであっても異なっていてもよく、糖モチーフのギャップ領域のヌクレオシド間結合と同じであっても異なっていてもよい。同様に、そのような糖ギャップマーオリゴヌクレオチドは、糖修飾のギャップマーパターンとは無関係の1つ以上の修飾された核酸塩基を含み得る。別段の指示がない限り、全ての修飾は、核酸塩基配列とは無関係である。
集団の修飾されたオリゴヌクレオチドの全てが同じ分子式を有する修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、ステレオランダム集団またはキラル的に濃縮された集団であり得る。修飾されたオリゴヌクレオチドの全てのキラル中心の全ては、ステレオランダム集団においてステレオランダムである。キラル的に濃縮された集団において、少なくとも1つの特定のキラル中心は、集団の修飾されたオリゴヌクレオチドにおいてステレオランダムではない。ある特定の実施形態では、キラル的に濃縮された集団の修飾されたオリゴヌクレオチドは、β-Dリボシル糖部分が濃縮されており、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全ては、ステレオランダムである。ある特定の実施形態では、キラル的に濃縮された集団の修飾されたオリゴヌクレオチドは、β-Dリボシル糖部分、及び特定の立体化学的配置にある少なくとも1つの、特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合の両方が濃縮されている。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド(修飾されていないまたは修飾されたオリゴヌクレオチド)は、それらの核酸塩基配列によってさらに説明される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、第2のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域は、第2のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域または全体の長さの核酸塩基配列は、第2のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの核酸と少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%相補的である。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド(修飾されたまたは修飾されていない)、ならびに任意に1つ以上の複合群及び/または末端基からなるオリゴマー化合物が本明細書に提供される。複合群は、1つ以上の複合部分、及び複合部分をオリゴヌクレオチドに結合する複合リンカーからなる。複合群は、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に、及び/または任意の内部位置で結合され得る。ある特定の実施形態では、複合群は、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの2’-位置に結合され得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に結合される複合群は、末端基である。ある特定のそのような実施形態では、複合群または末端基は、オリゴヌクレオチドの3’及び/または5’-末端で結合される。ある特定のそのような実施形態では、複合群(または末端基)は、オリゴヌクレオチドの3’-末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの3’-末端に近接して結合される。ある特定の実施形態では、複合群(または末端基)は、オリゴヌクレオチドの5’-末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの5’-末端に近接して結合される。
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、1つ以上の複合群に共有結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、これらに限定されないが、薬力学、薬物動態学、安定性、結合、吸収、組織分布、細胞分布、細胞取り込み、電荷、及びクリアランスを含む、結合されたオリゴヌクレオチドの1つ以上の特性を修飾する。ある特定の実施形態では、複合群は、結合されたオリゴヌクレオチド、例えば、オリゴヌクレオチドの検出を可能にするフルオロフォアまたはレポーター基に新しい特性を与える。ある特定の複合群及び複合部分は、以前に説明されており、例えば、コレステロール部分(Letsinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86,6553-6556)、コール酸(Manoharan et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1994,4,1053-1060)、チオエーテル、例えば、ヘキシル-S-トリチルチオール(Manoharan et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660,306-309、Manoharan et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1993,3,2765-2770)、チオコレステロール(Oberhauser et al.,Nucl.Acids Res.,1992,20,533-538)、脂肪族鎖、例えば、ド-デカン-ジオールもしくはウンデシル残基(Saison-Behmoaras et al.,EMBO J.,1991,10,1111-1118、Kabanov et al.,FEBS Lett.,1990,259,327-330、Svinarchuk et al.,Biochimie,1993,75,49-54)、リン脂質、例えば、ジ-ヘキサデシル-rac-グリセロールもしくはトリエチル-アンモニウム1,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-H-ホスホネート(Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36,3651-3654、Shea et al.,Nucl.Acids Res.,1990,18,3777-3783)、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖(Manoharan et al.,Nucleosides&Nucleotides,1995,14,969-973)、またはアダマンタン酢酸パルミチル部分(Mishra et al.,Biochim.Biophys.Acta,1995,1264,229-237)、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ-カルボニル-オキシコレステロール部分(Crooke et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277,923-937)、トコフェロール基(Nishina et al.,Molecular Therapy Nucleic Acids,2015,4,e220、及びNishina et al.,Molecular Therapy,2008,16,734-740)、またはGalNAcクラスター(例えば、WO2014/179620)である。
複合部分には、限定することなく、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、ビタミン部分、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸塩、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、フルオロフォア、及び色素が含まれる。
複合部分は、複合リンカーによってオリゴヌクレオチドに結合される。ある特定のオリゴマー化合物では、複合リンカーは、単一の化学結合である(すなわち、複合部分は、単結合によってオリゴヌクレオチドに直接的に結合される)。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、ヒドロカルビル鎖などの鎖構造、またはエチレングリコール、ヌクレオシド、もしくはアミノ酸単位などの繰り返し単位のオリゴマーを含む。
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、1つ以上の末端基を含む。ある特定のそのような実施形態では、オリゴマー化合物は、安定化された5’-ホスフェートを含む。安定化された5’-ホスフェートには、これらに限定されないが、5’-ビニルホスホネートを含むがこれらに限定されない5’-ホスファネート(5’-phosphanate)が含まれる。ある特定の実施形態では、末端基は、1つ以上の脱塩基ヌクレオシド及び/または逆ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、末端基は、1つ以上の2’-結合ヌクレオシドを含む。ある特定のそのような実施形態では、2’-結合ヌクレオシドは、脱塩基ヌクレオシドである。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるオリゴマー化合物は、標的核酸の配列と相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、第2のオリゴマー化合物と対合して、オリゴマー二本鎖を形成する。そのようなオリゴマー二本鎖は、標的核酸と相補的な領域を有する第1の第1のオリゴマー化合物、及び第1のオリゴマー化合物と相補的な領域を有する第2のオリゴマー化合物を含む。ある特定の実施形態では、オリゴマー二本鎖の第1のオリゴマー化合物は、(1)修飾されたまたは修飾されていないオリゴヌクレオチド及び任意に複合群と、(2)第2の修飾されたまたは修飾されていないオリゴヌクレオチド及び任意に複合群とを含むか、またはそれらからなる。オリゴマー二本鎖のオリゴマー化合物のいずれかまたは両方は、複合群を含み得る。オリゴマー二本鎖の各オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドは、非相補的突出ヌクレオシドを含み得る。
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物及びオリゴマー二本鎖は、標的核酸にハイブリダイズすることができ、少なくとも1つのアンチセンス活性をもたらし、そのようなオリゴマー化合物及びオリゴマー二本鎖は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、それらが標準細胞アッセイにおいて標的核酸の量または活性を25%以上低減または阻害する場合に、アンチセンス活性を有する。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、選択的に1つ以上の標的核酸に影響を与える。そのようなアンチセンス化合物は、1つ以上の標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列を含み、1つ以上の所望のアンチセンス活性をもたらし、重要な所望でないアンチセンス活性をもたらすような方法で1つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしないか、または1つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしない。
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、標的核酸は、内因性RNA分子である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、タンパク質をコードする。ある特定のそのような実施形態では、標的核酸は、イントロン、エキソン、及び非翻訳領域を含む成熟mRNA及びプレmRNAから選択される。ある特定の実施形態では、標的RNAは、成熟mRNAである。ある特定の実施形態では、標的核酸は、プレmRNAである。ある特定のそのような実施形態では、標的領域は、全体的にイントロン内にある。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン/エキソンジャンクションにわたる。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン内で少なくとも50%である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、レトロ遺伝子のRNA転写産物である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、非コードRNAである。ある特定のそのような実施形態では、標的非コードRNAは、長い非コードRNA、短い非コードRNA、イントロンRNA分子から選択される。
不適合塩基を、活性を排除することなく導入することが可能である。例えば、Gautschi et al(J.Natl.Cancer Inst.93:463-471,March 2001)は、bcl-2 mRNAとの100%相補性を有し、bcl-xL mRNAとの3つの不適合を有し、インビトロ及びインビボでbcl-2及びbcl-xLの両方の発現を低減するオリゴヌクレオチドの能力を示した。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強力な抗腫瘍活性を示した。Maher及びDolnick(Nuc.Acid.Res.16:3341-3358,1988)は、一連のタンデム14核酸塩基オリゴヌクレオチドを試験し、28及び42核酸塩基オリゴヌクレオチドは、ウサギ網赤血球アッセイにおいてヒトDHFRの翻訳を停止するそれらの能力として、それぞれタンデムオリゴヌクレオチドのうちの2または3個の配列を含んだ。3個の14核酸塩基オリゴヌクレオチドの各々は単独で、28または42核酸塩基オリゴヌクレオチドよりも適度なレベルではあるが、翻訳を阻害することができた。
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、標的核酸は、LRRK2である。ある特定の実施形態では、LRRK2核酸は、配列番号1(GENBANK受託番号NM_198578.3)及び配列番号2(ヌクレオチド2759000~2909000から切断されたGENBANK受託番号NT_029419.11)に示される配列を有する。
ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、標的核酸は、薬理学的に関連する組織中に発現される。ある特定の実施形態では、薬理学的関連する組織は、中枢神経系(CNS)を含む細胞及び組織である。そのような組織には、皮質、黒質、線条体、中脳、及び脳幹などの脳組織、ならびに脊髄が含まれる。
ある特定の実施形態では、1つ以上のオリゴマー化合物を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、1つ以上のオリゴマー化合物はそれぞれ、修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される希釈剤または担体を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、減菌食塩水溶液及び1つ以上のオリゴマー化合物を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌食塩水は、薬学的等級の生理食塩水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、1つ以上のオリゴマー化合物及び減菌水を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌水は、薬学的等級の水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、1つ以上のオリゴマー化合物及びリン酸緩衝食塩水(PBS)を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、減菌PBSは、薬学的等級のPBSを含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、1つ以上のオリゴマー化合物及び人工脳脊髄液を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、人工脳脊髄液は、薬学的等級である。
1.化合物番号780241
化合物番号780241は、GCTCATATCTAAAGACCGCA(配列番号222として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3、3~4、4~5、16~17、及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
化合物番号802714は、TCACCACAAACTCATGGACT(配列番号888として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3、3~4、4~5、16~17、及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
化合物番号803268は、ACCCTTTCCATGTGAACATT(配列番号1431として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3、3~4、4~5、16~17、及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
化合物番号876031は、ACGCACTTAACAATATCATA(配列番号3590として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3、3~4、4~5、16~17、及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
化合物番号876604は、AGCAATCATTGGTAGCATAC(配列番号3385として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3、3~4、4~5、16~17、及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
化合物番号934556は、CGCACTTAACAATATCATAT(配列番号852として本明細書に組み込まれる)の配列(5’~3’)を有する5-10-5MOEギャップマーとして特徴付けられてもよく、ヌクレオシド1~5及び16~20の各々(5’~3’)は、2’-MOE修飾を含み、ヌクレオシド6~15の各々は、2’-デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド2~3及び17~18の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、ヌクレオシド1~2、3~4、4~5、5~6、6~7、7~8、8~9、9~10、10~11、11~12、12~13、13~14、14~15、15~16、16~17、18~19、及び19~20の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、各シトシンは、5-メチルシトシンである。
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。
1.配列番号2の核酸塩基18,633~18,658
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基18,633~18,658は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基18,633~18,658と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基18,633~18,658と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基21,721~21,755は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基21,721~21,755と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基21,721~21,755と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基27,963~28,016は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基27,963~28,016と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基27,963~28,016と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基35,415~35,446は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基35,415~35,446と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基35,415~35,446と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基77,221~77,264は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基77,221~77,264と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基77,221~77,264と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基81,581~81,612及び87,838~87,869は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基81,581~81,612及び87,838~87,869と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基81,581~81,612及び87,838~87,869と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基81,627~81,651は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基81,627~81,651と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基81,627~81,651と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基82,058~82,081は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基82,058~82,081と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基82,058~82,081と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基82,180~82,220は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基82,180~82,220と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基82,180~82,220と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基82,500~82,525は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基82,500~82,525と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基82,500~82,525と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基91,038~91,067は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基91,038~91,067と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基91,038~91,067と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基92,148~92,173は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基92,148~92,173と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基92,148~92,173と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基98,186~98,220は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基98,186~98,220と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基98,186~98,220と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基98,218~98,242は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基98,218~98,242と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基98,218~98,242と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基99,199~99,223は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基99,199~99,223と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基99,199~99,223と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号2の核酸塩基119,903~119,936は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号2の核酸塩基119,903~119,936と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号2の核酸塩基119,903~119,936と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
ある特定の実施形態では、配列番号1の核酸塩基4,062~4,086は、ホットスポット領域を含む。ある特定の実施形態では、siRNAは、配列番号1の核酸塩基4,062~4,086と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号1の核酸塩基4,062~4,086と相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20核酸塩基長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある特定の実施形態では、ギャップマーは、5-10-5MOEギャップマーである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、ホスホジエステル(「o」)及びホスホロチオエート(「s」)ヌクレオシド間結合は、5’から3’:sooosssssssssssoossの順に配列される。
本明細書に列挙される文献及び特許公開の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
ヒトLRRK2核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでLRRK2 RNAへのそれらの効果について試験した。
ヒトLRRK2核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでLRRK2 RNAへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
ヒトLRRK2核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでLRRK2 RNAへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
ヒトLRRK2核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでLRRK2 RNAへのそれらの効果について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
上記実施例1から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、SH-SY5Y細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、1.125μM、2.250μM、4.500μM、9.000μM、及び18.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットRTS3133_MGB(本明細書の実施例1に記載される)を使用してRNAレベルを測定した。RIBOGREEN(登録商標)によって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
上記実施例2及び3から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、SH-SY5Y細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、0.333μM、1.000μM、3.000μM、及び9.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットRTS3132(上文の実施例2に記載される)を使用してRNAレベルを測定した。RIBOGREEN(登録商標)によって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
上記実施例4から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、SH-SY5Y細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、0.296、0.888、2.666、及び8.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットRTS3132(本明細書の実施例2に記載される)を使用して、RNAレベルを測定した。RIBOGREEN(登録商標)によって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
上記実施例4から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、SH-SY5Y細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、0.444、1.333、4.000、及び12.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットRTS3132(本明細書の実施例2に記載される)を使用して、RNAレベルを測定した。RIBOGREEN(登録商標)によって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
ヒトLRRK2核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計した。表71の修飾されたオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ギャップマーは、2’-デオキシヌクレオシドを含む中心ギャップセグメントを有し、及びcEtヌクレオシド及び/または2’-MOEヌクレオシドを含む5’末端及び3’末端の両方のウイングセグメントに隣接している。各ギャップマー全体の全てのシトシン残基は、5’-メチルシトシンである。ヌクレオシド間結合は、混合ホスホジエステルヌクレオシド間結合及びホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。配列及び化学表記法の列は、5’-メチルシトシン、糖化学、及びヌクレオシド間結合化学を含む配列を明記し、下付き文字「d」は、2’-デオキシリボース糖を表し、下付き文字「e」は、2’-MOE修飾された糖を表し、下付き文字「k」は、cEt修飾された糖を表し、下付き文字「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を表し、下付き文字「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、シトシン残基の前の「m」の下付き文字は、5-メチルシトシンを示す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である5’-末端側ヌクレオシドを示す。「終結部位」は、ギャップマーがヒト核酸配列で相補的である3’-末端側ヌクレオシドを示す。
上の実施例から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、自由摂取によりA431細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、0.039、0.156、0.625、2.500、及び10.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドとともに、細胞を1ウェルあたり10,000個の細胞の密度で播種した。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットRTS3132(本明細書の実施例2に記載される)を使用して、RNAレベルを測定した。RIBOGREEN(登録商標)によって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
アカゲザルLRRK2と相補的でもある、上の実施例から選択された修飾されたオリゴヌクレオチドを、LLC-MK2サル細胞において様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、0.011、0.034、0.103、0.309、0.926、2.778、8.333、及び25.000μM濃度の修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。対照オリゴヌクレオチド、676630、標的不明の混合されたホスホジエステル及びホスホロチオエート骨格を有する5-10-5MOEギャップマー、ならびに配列CCTATAGGACTATCCAGGAA(配列番号3848)も試験した。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットhLRRK2 LTS35700(配列番号20として本明細書で指定される順方向配列CCAGGTACAATGCAAAGCTTAAT、配列番号21として本明細書で指定される逆方向配列TCAGTCCAATCACTGACAAGTT、配列番号22として本明細書で指定されるプローブ配列TTGGGAAGTCCTTGGTGTTCACCA)を使用して、RNAレベルを測定した。RIBOGREENによって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
**これらの修飾されたオリゴヌクレオチドは、アカゲザルLRRK2核酸配列番号3と相補的であり、それに対して2つの不一致を含む。
上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、SH-SY5Y細胞中様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を1ウェルあたり20,000個の細胞の密度で播種し、0.011、0.034、0.103、0.309、0.926、2.778、8.333、及び25.000μMの修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。対照オリゴヌクレオチド、676630、標的不明の混合されたホスホジエステル及びホスホロチオエート骨格を有する5-10-5MOEギャップマーも試験した。約24時間の治療期間後、全RNAを、細胞から単離し、LRRK2 RNAレベルを、定量的リアルタイムPCRによって測定した。ヒトLRRK2プライマープローブセットLTS35700(本明細書の実施例11に記載される)を使用して、RNAレベルを測定した。RIBOGREENによって測定されるように、全RNA含量に従ってLRRK2 RNAレベルを調節した。処置されていない対照細胞に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、LRRK2 RNAレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療細胞において用量依存的様式で低減された。IC50を、Prism6ソフトウェアを使用して「log(阻害剤)対応答-可変スロープ(4パラメータ)」式を使用して計算した。
2週間後の活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトBAC野生型LRRK2トランスジェニックマウスモデル(B6;SJL-Tg(LRRK2)66Mjff/J;ストック番号013725、The Jackson Laboratory)において試験した。BAC LRRK2-Wt導入遺伝子に対して半接合であるマウスは、生存能力及び繁殖能力がある。これらのマウスは、BAC導入遺伝子のヒトLRRK2プロモーター/エンハンサー領域の指示を受ける野生型ヒトロイシンリッチ反復キナーゼ2(LRRK2)遺伝子を発現する(Ouyang Y et al.,2011)。このモデルからのマウスは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトLRRK2を発現する。
LRRK2トランスジェニックマウスは各々、以下の表に列挙される300μgの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回脳室内(ICV)投与を受けた。各治療群は、4匹のマウスから構成された。4匹のマウスの群は、陰性対照としてPBSを受けた。
2週間後、マウスを屠殺し、プライマープローブセットhLRRK2 LTS35700を使用して、LRRK2のRNA発現の測定のリアルタイムPCR分析のために、RNAを皮質脳組織及び脊髄から抽出した(本明細書の上文の実施例11に記載)。シクロフィリンAを用いて正規化した、PBS対照に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
8週間後の活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトBAC野生型LRRK2トランスジェニックマウスモデル(本明細書の上文に記載)において試験した。BAC LRRK2-Wt導入遺伝子に対して半接合であるマウスは、生存能力及び繁殖能力がある。これらのマウスは、BAC導入遺伝子のヒトLRRK2プロモーター/エンハンサー領域の指示を受ける野生型ヒトロイシンリッチ反復キナーゼ2(LRRK2)遺伝子を発現する(Ouyang Y et al.,2011)。このモデルからのマウスは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトLRRK2を発現する。
LRRK2トランスジェニックマウスは各々、以下の表に列挙される300μgの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ICV投与を受けた。各治療群は、4匹のマウスから構成された。4匹のマウスの群は、陰性対照としてPBSを受けた。
8週間後、マウスを屠殺し、プライマープローブセットhLRRK2 LTS35700を使用して、LRRK2のRNA発現の測定のリアルタイムPCR分析のために、RNAを皮質脳組織及び脊髄から抽出した(本明細書の上文の実施例11に記載)。シクロフィリンAを用いて正規化した、PBS対照に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
活性を評定するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、ヒトBAC G2019S変異型LRRK2トランスジェニックラット(NTac:SD-Tg(LRRK*G2019S)571Cjli;Taconic)モデルにおいて試験した。このモデルは、NTac:SD接合体へのG2019S変異を有する全ヒトLRRK2遺伝子の前核注射により創出した。このモデルからのラットは、脊髄及び脳を含む様々な組織中でヒトLRRK2を発現する(West AB et al.,J.Comp.Neurology,2014,522(11):2465-2480)。
LRRK2トランスジェニックラットは各々、以下の表に列挙される1,000μgの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ICV投与を受けた。各治療群は、4~5匹のラットから構成された。4匹のラットの群は、陰性対照としてPBSを受けた。
2週間後、ラットを屠殺し、プライマープローブセットhLRRK2 LTS35700を使用して、LRRK2のRNA発現の測定のリアルタイムPCR分析のために、RNAを、脳幹、皮質脳組織、脊髄、肺、及び腎臓から抽出した(本明細書の上文の実施例11に記載)。シクロフィリンAを用いて正規化した、PBS対照に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
オリゴヌクレオチドの有効性を試験するために、上記の修飾されたオリゴヌクレオチドを、本明細書で上述したヒトBAC G2019S変異型LRRK2トランスジェニックラット(NTac:SD-Tg(LRRK*G2019S)571Cjli)モデルにおいて試験した。
LRRK2トランスジェニックラットは各々、以下の表に列挙される10、30、100、300、700、1,000、または3,000μgの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回脳室内(ICV)投与を受けた。各治療群は、5匹のラットから構成された。5匹のラットの群は、各投薬群につき陰性対照としてPBSを受けた。
2週間後、ラットを屠殺し、プライマープローブセットhLRRK2 LTS35700を使用して、LRRK2のRNA発現の測定のリアルタイムPCR分析のために、RNAを、皮質から抽出した(本明細書の上文の実施例11に記載)。シクロフィリンAを用いて正規化した、PBS対照に対するLRRK2 RNAレベルのパーセントとして、以下の表に結果を表す。
上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドを野生型雌C57/Bl6マウスで試験して、オリゴヌクレオチドの耐容性を評定した。野生型雌C57/Bl6マウスは各々、以下の表に列挙される700μgの修飾されたオリゴヌクレオチドの単回ICV投与を受けた。各治療群は、4匹のマウスから構成された。4匹のマウスの群は、各実験につき陰性対照としてPBSを受けた(以下の別個の表に特定される)。注射後3時間で、マウスを7つの異なる基準に従って評価した。基準は、(1)マウスは、明晰であり、機敏であり、反応が良かった、(2)マウスは、刺激なしで起立または背を丸めていた、(3)マウスは、刺激なしで任意の動きを示した、(4)マウスは、持ち上げられた後に前方への動きを示した、(5)マウスは、持ち上げられた後に任意の動きを示した、(6)マウスは、尾部をつまむことに対して反応した、(7)正常な呼吸、である。7つの基準の各々について、マウスに、基準を満たした場合に0、満たさなかった場合に1のサブスコアを与えた(機能観察総合評価スコアまたはFOB)。全ての7つの基準を評価した後、スコアを各マウスについて合計し、各治療群内で平均化した。以下の表に結果を表す。
上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドをSprague Dawleyラットで試験して、オリゴヌクレオチドの耐容性を評価した。Sprague Dawleyラットは各々、以下の表に列挙される3mgのオリゴヌクレオチドの単回髄腔内(IT)投与を受けた。各治療群は、3~4匹のラットから構成された。4匹のラットの群は、各実験につき陰性対照としてPBSを受けた(以下の別個の表に特定される)。注射後3時間で、各ラットについて体の7つの異なる部分の動きを評価した。7つの体の部分は、(1)ラットの尾部、(2)ラットの後方姿勢、(3)ラットの後肢、(4)ラットの後足、(5)ラットの前足、(6)ラットの前方姿勢、(7)ラットの頭部である。7つの異なる体の部分の各々について、各ラットに、体の部分が動いていた場合に0、または体の部分が動いていなかった場合に1のサブスコアを与えた。7つの基準の各々について、ラットに、基準を満たした場合に0、満たさなかった場合に1のサブスコアを与えた(機能観察総合評価スコアまたはFOB)。全ての7つの基準を評価した後、スコアを各ラットについて合計し、各治療群内で平均化した。以下の表に結果を表す。
野生型マウスは、以下の表に列挙される700μgのオリゴヌクレオチドまたはPBSビヒクルのみの単回ICV注射を受けた。各治療群は、11または12匹のマウスから構成された。オリゴヌクレオチド治療の2週間後、α-シヌクレインの事前形成線維(PFF)を線条体に注射し、記載されているように(Luk et al.,Science,2012,338,949-953を参照されたい)、いくつかの脳領域におけるα-シヌクレイ凝集体の形成及び運動障害を生じさせた。1つの対照群はPFFの注射を受けなかった。オリゴヌクレオチド治療の55日後、運動機能をワイヤーハング試験において試験した。各治療群のマウスがワイヤ上に留まった時間の長さの平均として、以下の表に結果を表す。
PFFの注射後の野生型マウスにおけるオリゴヌクレオチド低減の効果を、690093を使用して評価した。オリゴヌクレオチド治療をPFF注射の2週間前ではなくPFF注射の2週間後に行ったことを除き、実施例19に記載のとおりにマウスを治療した。各治療群は、10匹の動物から構成された。PFF注射の55日後、実施例19に記載のとおり、マウスをワイヤーハング試験において評定した。ワイヤーハング試験の1日後、マウスを屠殺し、実施例19に記載のとおり、中脳、線条体、及び黒質を収集し、LRRK2 RNA及びp-α-syn凝集体を測定した。各治療群についての平均として、以下の表に結果を示す。「nd」の記入は、その治療群についてはデータが収集されなかったことを示す。結果により、修飾されたオリゴヌクレオチドが、PFFモデルの発症後に投与された場合であっても、運動機能を改善させ、病的凝集体の数を低減させたことが示される。
修飾されたオリゴヌクレオチドを長期的研究において試験して、修飾されたオリゴヌクレオチドによる長期的治療によりドーパミン作動性ニューロンが保護されるかどうかを決定した。黒質緻密部におけるα-syn凝集体の蓄積は、時間とともにドーパミン作動性ニューロンの生存を損なった(Luk 2012、Tran 2014)。
同じ条件で行った別個の試験において、上に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドをSprague Dawleyラットで試験して、オリゴヌクレオチドの長期的耐容性を評価した。Sprague Dawleyラットは各々、3mgのオリゴヌクレオチドまたはPBSの単回の髄腔内(IT)送達による投与を受けた。治療後1週目で開始して6週の間、訓練を受けた観察者が、有害事象について、各動物を毎週秤量し、評価した。有害事象は、PBS治療を行った対照動物において典型的ではない神経機能障害、例えば、非限定的に、異常な肢の脱臼、歩行異常、振戦、呼吸異常、麻痺、及び痙直として定義した。有害事象の発症は、異常が最初に記録された投薬後の週として定義する。有害事象が成されなかった場合、発症なし(-)とする。有害事象の発症は、典型的には、PBS治療動物に類似した体重増加/維持を欠くことと定義した成長障害と相関する。類似の耐容性評定が、Ostergaard et al.,Nucleic Acids Res.2013 Nov;41(21):9634-9650 and Southwell et al.,Mol Ther.2014 Dec;22(12):2093-2106に記載されている。以下の表に示すように、876031、780241、802714、803268、876604、及び934556は、長期的耐容性評定において耐容性が良好であった。
[態様1]12~50個の結合されたヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、LRRK2核酸の等長部分と少なくとも90%相補的であり、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖及び修飾されたヌクレオシド間結合から選択される少なくとも1つの修飾を含む、前記オリゴマー化合物。
[態様2]12~50個の結合されたヌクレオシドからなり、配列番号30~3847の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも12個、少なくとも13個、少なくとも14個、少なくとも15個、少なくとも16個、少なくとも17個、少なくとも18個、少なくとも19個、または少なくとも20個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、オリゴマー化合物。
[態様3]12~50個の結合されたヌクレオシドからなり、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも11個、少なくとも12個、少なくとも13個、少なくとも14個、少なくとも15個、少なくとも16個、少なくとも17個、少なくとも18個、少なくとも19個、または少なくとも20個の隣接する核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、前記部分が、
配列番号2の核酸塩基18,633~18,658の等長部分、
配列番号2の核酸塩基21,721~21,755の等長部分、
配列番号2の核酸塩基27,963~28,016の等長部分、
配列番号2の核酸塩基35,415~35,446の等長部分、
配列番号2の核酸塩基77,221~77,264の等長部分、
配列番号2の核酸塩基81,581~81,612及び/または87,838~87,869の等長部分、
配列番号2の核酸塩基81,627~81,651の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,058~82,081の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,180~82,220の等長部分、
配列番号2の核酸塩基82,500~82,525の等長部分、
配列番号2の核酸塩基91,038~91,067の等長部分、
配列番号2の核酸塩基92,148~92,173の等長部分、
配列番号2の核酸塩基98,186~98,220の等長部分、
配列番号2の核酸塩基98,218~98,242の等長部分、
配列番号2の核酸塩基99,199~99,223の等長部分、
配列番号2の核酸塩基119,903~119,936の等長部分、または
配列番号1の核酸塩基4,062~4,086の等長部分に相補的である、前記オリゴマー化合物。
[態様4]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列全体にわたって測定された場合に、配列番号1または配列番号2の核酸塩基配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%相補的である核酸塩基配列を有する、態様1~3のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様5]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様1~4のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様6]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、修飾された糖部分を含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様5に記載のオリゴマー化合物。
[態様7]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、二環式糖部分を含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様6に記載のオリゴマー化合物。
[態様8]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、2’-4’架橋を有する二環式糖部分を含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含み、前記2’-4’架橋が、-O-CH2-及び-O-CH(CH3)-から選択される、態様7に記載のオリゴマー化合物。
[態様9]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様5~8のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様10]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、2’-MOE修飾された糖または2’-OMe修飾された糖を含む非二環式の修飾された糖部分を含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様9に記載のオリゴマー化合物。
[態様11]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、糖サロゲートを含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様5~10のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様12]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、モルホリノ及びPNAから選択される糖サロゲートを含む少なくとも1つの修飾されたヌクレオシドを含む、態様11に記載のオリゴマー化合物。
[態様13]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
1~5個の結合された5’領域ヌクレオシドからなる5’領域、
6~10個の結合された中心領域ヌクレオシドからなる中心領域、及び
1~5個の結合された3’領域ヌクレオシドからなる3’領域を含む糖モチーフを有し、
前記5’領域ヌクレオシドの各々及び前記3’領域ヌクレオシドの各々が、修飾された糖部分を含み、前記中心領域ヌクレオシドの各々が、修飾されていない2’-デオキシリボシル糖部分を含む、態様1~12のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様14]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む、態様1~13のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様15]前記修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合である、態様14に記載のオリゴマー化合物。
[態様16]少なくとも1つのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様14または15に記載のオリゴマー化合物。
[態様17]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも1つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様14または16に記載のオリゴマー化合物。
[態様18]各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合のいずれかである、態様14、16、または17のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様19]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾された核酸塩基を含む、態様1~18のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様20]前記修飾された核酸塩基が、5-メチルシトシンである、態様19に記載のオリゴマー化合物。
[態様21]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、12~30、12~22、12~20、14~20、15~25、16~20、18~22、または18~20個の結合されたヌクレオシドからなる、態様1~20のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様22]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、17または20個の結合されたヌクレオシドからなる、態様1~21のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様23]前記修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、態様1~22のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様24]複合部分及び複合リンカーを含む複合群を含む、態様1~22のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様25]前記複合群が、1~3個のGalNAcリガンドを含むGalNAcクラスターを含む、態様24に記載のオリゴマー化合物。
[態様26]前記複合リンカーが、単結合からなる、態様24または25に記載のオリゴマー化合物。
[態様27]前記複合リンカーが、切断可能である、態様25に記載のオリゴマー化合物。
[態様28]前記複合リンカーが、1~3個のリンカーヌクレオシドを含む、態様27に記載のオリゴマー化合物。
[態様29]前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの5’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、態様24~28のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様30]前記複合群が、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの3’末端で前記修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている、態様24~28のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様31]末端基を含む、態様1~30のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様32]前記オリゴマー化合物が、一本鎖オリゴマー化合物である、態様1~31のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様33]前記オリゴマー化合物が、リンカーヌクレオシドを含まない、態様1~27または29~31のいずれかに記載のオリゴマー化合物。
[態様34]態様1~31または33のいずれかに記載のオリゴマー化合物を含むオリゴマー二本鎖。
[態様35]態様1~33のいずれかに記載のオリゴマー化合物または態様34に記載のオリゴマー二本鎖を含むか、またはそれらからなるアンチセンス化合物。
[態様36]態様1~33のいずれかに記載のオリゴマー化合物または態様34に記載のオリゴマー二本鎖、及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
[態様37]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様38]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様39]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様40]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様41]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様42]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
またはその塩。
[態様43]前記式のナトリウム塩である、態様37~42のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド。
[態様44]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様45]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様46]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様47]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様48]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様49]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチド
[態様50]態様37~49のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドのキラル的に濃縮された集団であって、前記集団が、特定の立体化学的配置を有する少なくとも1つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、前記キラル的に濃縮された集団。
[態様51]前記集団が、(Sp)配置を有する少なくとも1つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様50に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様52]前記集団が、(Rp)配置を有する少なくとも1つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様50または51に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様53]前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において特定の、独立して選択される立体化学的配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様50に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様54]前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記(Sp)配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様53に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様55]前記集団が、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において前記(Rp)配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様53に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様56]前記集団が、5’から3’の方向で、Sp-Sp-Rp配置における少なくとも3個の隣接するホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、態様50または態様53に記載のキラル的に濃縮された集団。
[態様57]態様37~49のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチドの集団であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全てが、ステレオランダムである、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの集団。
[態様58]態様37~49のいずれかに記載の修飾されたオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物。
[態様59]前記薬学的に許容される希釈剤が、人工脳脊髄液である、態様58に記載の薬学的組成物。
[態様60]前記薬学的組成物が、前記修飾されたオリゴヌクレオチド及び人工脳脊髄液から本質的になる、態様59に記載の薬学的組成物。
[態様61]態様36または58~60のいずれかに記載の薬学的組成物を動物に投与することを含む方法。
[態様62]LRRK2に関連する疾患を治療する方法であって、LRRK2に関連する疾患を有するかまたはそれを発症する危険性のある個体に、治療有効量の、態様36または58~60のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによりLRRK2に関連する前記疾患を治療することを含む、前記方法。
[態様63]LRRK2に関連する前記疾患が、神経変性疾患である、態様62に記載の方法。
[態様64]前記神経変性疾患が、パーキンソン病である、態様63に記載の方法。
[態様65]前記神経変性疾患の少なくとも1つの症状または特徴が、改善される、態様64に記載の方法。
[態様66]前記症状または特徴が、運動失調、神経障害、及び凝集体形成のうちのいずれかである、態様65に記載の方法。
[態様67]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Ges mCeo Teo mCeo Aes Tds Ads Tds mCds Tds Ads Ads Ads Gds Ads mCeo mCeo Ges mCes Ae(配列番号222);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様68]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Tes mCeo Aeo mCeo mCes Ads mCds Ads Ads Ads mCds Tds mCds Ads Tds Geo Geo Aes mCes Te(配列番号888);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様69]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Aes mCeo mCeo mCeo Tes Tds Tds mCds mCds Ads Tds Gds Tds Gds Ads Aeo mCeo Aes Tes Te(配列番号1431);
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様70]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、
Aes mCeo Geo mCeo Aes mCds Tds Tds Ads Ads mCds Ads Ads Tds Ads Teo mCeo Aes Tes Ae(配列番号3590)、式中、
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様71]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、Aes Geo mCeo Aeo Aes Tds mCds Ads Tds Tds Gds Gds Tds Ads Gds mCeo Aeo Tes Aes mCe(配列番号3385)、式中、
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様72]以下の式の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物であって、mCes Geo mCes Aes mCes Tds Tds Ads Ads mCds Ads Ads Tds Ads Tds mCes Aeo Tes Aes Te(配列番号852)、式中、
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-MOE修飾された糖、
d=2’-デオキシリボース糖、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、前記オリゴマー化合物。
[態様73]前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、RNAi化合物である、態様3に記載のオリゴマー化合物。
[態様74]前記RNAi化合物が、ssRNAまたはsiRNAである、態様73に記載のオリゴマー化合物。
Claims (21)
- 以下の化学構造:
に従う、又はその塩の形態である、修飾されたオリゴヌクレオチド。 - 塩がナトリウム塩又はカリウム塩である、請求項1に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド。
- 以下の化学構造:
に従う、修飾されたオリゴヌクレオチド。 - 以下の化学表記法;
Aes mCeo Geo mCeo Aes mCds Tds Tds Ads Ads mCds Ads Ads Tds Ads Teo mCeo Aes Tes Ae(配列番号3590);式中、
A=アデニン核酸塩基、
mC=5-メチルシトシン核酸塩基、
G=グアニン核酸塩基、
T=チミン核酸塩基、
e=2’-O(CH2)2OCH3リボシル糖部分、
d=2’-デオキシリボシル糖部分、
s=ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
o=ホスホジエステルヌクレオシド間結合、
に従う修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、オリゴマー化合物。 - 請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド又は請求項4に記載のオリゴマー化合物の集団であって、修飾されたオリゴヌクレオチドのホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全てがステレオランダムである、上記集団。
- 請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド、請求項4に記載のオリゴマー化合物又は請求項5に記載の集団、及び薬学的に許容される希釈剤を含む、薬学的組成物。
- i)薬学的に許容される希釈剤が人工脳脊髄液又はリン酸緩衝食塩水(PBS)である;又は
ii)薬学的組成物が、前記修飾されたオリゴヌクレオチド、前記オリゴマー化合物又は前記集団、及び
a)人工脳脊髄液;又は
b)リン酸緩衝食塩水(PBS)
から本質的になる、
請求項6に記載の薬学的組成物。 - 請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド、請求項4に記載のオリゴマー化合物、請求項5に記載の集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物を含む、動物における疾患の治療のための薬学的組成物。
- 前記治療が、細胞内のLRRK2の発現の低減を含み、場合により、該細胞がヒト細胞である、請求項8に記載の薬学的組成物。
- 請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド、請求項4に記載のオリゴマー化合物、請求項5に記載の集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物を含む、LRRK2に関連する疾患の治療のための薬学的組成物であって、
該治療が、LRRK2に関連する疾患を有するか又はそれを発症する危険性のある個体に、治療有効量の、該修飾されたオリゴヌクレオチド、該オリゴマー化合物、該集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物を投与し、それによりLRRK2に関連する疾患を治療することを含む、上記薬学的組成物。 - LRRK2に関連する疾患が神経変性疾患である、請求項10に記載の薬学的組成物。
- 神経変性疾患がパーキンソン病である、請求項11に記載の薬学的組成物。
- 神経変性疾患の少なくとも1つの症状又は特徴が改善される、請求項11又は12に記載の薬学的組成物。
- 前記症状又は特徴が、運動失調、神経障害、及び凝集体形成のうちのいずれかである、請求項13に記載の薬学的組成物。
- 動物における疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド、請求項4に記載のオリゴマー化合物、請求項5に記載の集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物の使用。
- 前記使用が、細胞内のLRRK2の発現の低減を含み、場合により、該細胞がヒト細胞である、請求項15に記載の使用。
- LRRK2に関連する疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項1~3のいずれか1項に記載の修飾されたオリゴヌクレオチド、請求項4に記載のオリゴマー化合物、請求項5に記載の集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物の使用であって、
該治療が、LRRK2に関連する疾患を有するか又はそれを発症する危険性のある個体に、治療有効量の、該修飾されたオリゴヌクレオチド、該オリゴマー化合物、該集団、又は請求項6若しくは7に記載の薬学的組成物を投与し、それによりLRRK2に関連する前記疾患を治療することを含む、上記使用。 - LRRK2に関連する疾患が神経変性疾患である、請求項17に記載の使用。
- 神経変性疾患がパーキンソン病である、請求項18に記載の使用。
- 神経変性疾患の少なくとも1つの症状又は特徴が改善される、請求項18又は19に記載の使用。
- 前記症状又は特徴が、運動失調、神経障害、及び凝集体形成のうちのいずれかである、請求項20に記載の使用。
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