JP7313746B2 - キメラ抗原受容体及び当該キメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞 - Google Patents

キメラ抗原受容体及び当該キメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞 Download PDF

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Description

本発明は、２０１９年０８月１４日に中国特許庁に提出された、出願番号が２０１９１０７５０１３７．１である中国特許出願の優先権を主張し、その全内容は引用により本明細書に組み込まれている。
本発明は、バイオ医薬分野に関し、特にＢ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞、及びこれらの応用に関する。
がんは、ヒトの健康を脅かす主な疾患の一つである。一般的ながん治療方法として、放射線療法、化学療法、標的化療法などがある。現在、免疫療法は、がん治療の主流となっている。キメラ抗原受容体を介した細胞療法は、免疫療法の一種であり、ＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体を介したＴ細胞療法は、Ｂ細胞関連腫瘍の治療において目覚ましい成功を収め、一部の患者で治癒（腫瘍は５年間再発しない）が達成された。これにより、ＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体を介したＴ細胞療法は、ＦＤＡに承認され、血液がんの分野におけるこの治療の急速な発展にも貢献した。しかしながら、特異的標的の欠如、固形腫瘍の不均一性（異なる腫瘍細胞表現型）、および腫瘍微小環境のために、キメラ抗原受容体を介した細胞療法は、固形腫瘍の治療には理想的ではない。したがって、この問題を解決するには、新しい標的に対応するキメラ抗原受容体の開発が特に重要である。
Ｂ７－Ｈ３は、Ｂ７免疫制御因子ファミリーにおける１種類の膜タンパク質である。ヒトでは２Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３および４Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３という２種のサブタイプがあるが、マウスでは２Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３という１種のサブタイプしか存在しない。Ｂ７－Ｈ３は、Ｔ細胞からＩ型インターフェロンの放出を低減することができ、ナチュラルキラー細胞の殺傷機能を阻害することもできると文献に示されているため、Ｂ７－Ｈ３は免疫抑制因子であると見なされている。また、Ｂ７－Ｈ３が移植片対宿主反応、心臓移植拒絶反応、気道炎症、自己免疫性脳脊髄炎などの疾患を抑制できることは、他の文献にも確認されている。しかしながら、Ｂ７－Ｈ３は、自己免疫のインビボ及びインビトロのモデルにおいてＴ細胞共刺激因子であると説明する文献もある。
Ｂ７－Ｈ３は、正常なヒト組織において極めて低い発現を示すが、腫瘍において常に過剰発現する（７４％から９４％の範囲）。さらに、Ｂ７－Ｈ３が腫瘍関連血管および腫瘍間質の線維芽細胞にも高発現を示すことを見出す研究もある。Ｂ７－Ｈ３の高発現は、多くの場合、腫瘍内の腫瘍浸潤リンパ球の減少、がんの急速な進行、および臨床治療結果の低下と密接に関連し、神経膠腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、肺がん及び腎臓がん等のがんによく見られる。Ｂ７－Ｈ３は、さまざまな固形腫瘍で高発現しているため、さまざまな固形腫瘍を治療するための優れた標的として用いられる。また、Ｂ７－Ｈ３は細胞表面に発現するため、正常な細胞に損傷を与えず腫瘍細胞を殺傷するという目的を達成するために、キメラ抗原受容体を介した細胞治療の標的にすることができる。
そこで、本発明は、Ｂ７－Ｈ３タンパクを標的とするキメラ抗原受容体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、 ＣＡＲ）、当該ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞、及びこれらのがん診断、治療及び予防における応用を提供することを目的とする。
具体的に、本発明は、以下のような構成を提示する。
本発明の一態様は、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むことを特徴とする、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
本発明の一態様によれば、本発明に係るＣＡＲにおいて、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－７、１７－１９、２９－３１、４１－４３、５３－５５、６５－６７、７７－７９、８９－９１、１０１－１０３、１１３－１１５又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１２、２２－２４、３４－３６、４６－４８、５８－６０、７０－７２、８２－８４、９４－９６、１０６－１０８、１１８－１２０又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲを含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１７、２９、４１、５３、６５、７７、８９、１０１、１１３又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９１、１０３、１１５又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、２２、３４、４６、５８、７０、８２、９４、１０６、１１８又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、２３、３５、４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ３、を含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１６、２８、４０、５２、６４、７６、８８、１００、１１２又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖配列、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９３、１０５、１１７又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖配列、を含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３の抗体領域（ｓｃＦｖ）を含み、好ましくは、前記抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体のアミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、９８、１１０又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記膜貫通ドメインは、ＴＣＲのα、β、ζ鎖、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、４－１ＢＢ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＰＤ－１膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ－１、ＣＤ１５４、ＣＤ２８膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ２８膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記膜貫通ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。前記ヒンジ領域は、ＣＤ８の細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ１ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域、ＩｇＤヒンジ領域、ＣＤ２８細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域及びＣＤ４の細胞外ヒンジ領域から選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記ヒンジ領域が、ＣＤ８αヒンジ領域である。より好ましくは、前記ヒンジ領域のアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれたものである。より好ましくは、前記シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０又はこれの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。好ましくは、前記シグナル伝達ドメインが、さらに１つ又は複数の共刺激ドメインを含む。好ましくは、前記共刺激ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ２２３、ＣＤ２７０、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７８、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＦｃεＲＩγ、ＭｙＤ８８、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４、ＣＤ２８およびＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれるものである。好ましくは、前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記共刺激ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６、１２８又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、分離された核酸分子を提供する。好ましくは、前記核酸分子のヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、９７、１０９又はこれらの任意の改変体から選ばれるヌクレオチド配列である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係る核酸分子を含む、核酸構築体を提供する。好ましくは、前記核酸構築体が、ウイルスベクターである。より好ましくは、前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターから選ばれる１種又は複数種である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係る核酸分子、あるいは、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体を含む、ウイルスを提供する。好ましくは、前記ウイルスがレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスから選ばれる１種又は複数種である。
本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ、前記のいずれかの態様に係る核酸分子、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体、又は、前記のいずれかの態様に係るウイルスの、Ｂ７－Ｈ３を発現する腫瘍細胞を標的とする遺伝子改変免疫細胞を調製するための応用を提供する。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲを発現する、又は、前記のいずれかの態様に係る核酸分子を含む、又は、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体を含む、又は、前記のいずれかの態様に係るウイルスを含む、分離された宿主細胞を提供する。好ましくは、前記宿主細胞が、哺乳動物の細胞である。より好ましくは、前記宿主細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞又は細胞株、γδＴ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージまたは細胞株、ＰＧ１３細胞株から選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記宿主細胞が、Ｔ細胞である。最も好ましくは、前記宿主細胞が、初代培養Ｔ細胞である。
前記のいずれかの態様に係る宿主細胞によれば、前記宿主細胞は、他のエフェクターをさらに発現する。前記他のエフェクターとして、サイトカイン、もう一種のＣＡＲ、ケモカイン受容体、ＰＤ－１発現を低下するｓｉＲＮＡあるいはＰＤ－Ｌ１を阻害するタンパク、ＴＣＲ、又は安全スイッチを含むが、これらに限られない。
好ましくは、前記のサイトカインが、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、ＮＧＦ－β、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＥＰＯ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２５、ＬＩＦ、ＦＬＴ－３、インターフェロン、アンギオスタチン、トロンボスポンジン及びエンドスタチンから選ばれる１種又は複数種である。
好ましくは、前記ケモカイン受容体が、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４から選ばれる１種又は複数種である。
好ましくは、前記安全スイッチが、ＨＳＶＴＫ、ＶＺＶＴＫ、ｉＣａｓｐａｓｅ－９、ｉＣａｓｐａｓｅ－１、ｉＣａｓｐａｓｅ－８、短縮されたＥＧＦＲ及びＲＱＲ８から選ばれる１種又は複数種である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ、前記のいずれかの態様に係る核酸分子、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体、前記のいずれかの態様に係るウイルス、及び前記のいずれかの態様に係る宿主細胞から選ばれる１種又は複数種と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ、前記のいずれかの態様に係る核酸分子、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体、前記のいずれかの態様に係るウイルス、前記のいずれかの態様に係る宿主細胞、または前記のいずれかの態様に係る医薬組成物の、医薬を調製するための応用を提供する。好ましくは、前記医薬が、がん、炎症性疾患、自己免疫性疾患から選ばれる１種又は複数種の診断、治療又は予防に用いられる。
好ましくは、前記医薬が、Ｂ７－Ｈ３を発現する腫瘍の診断、治療又は予防に用いられる。より好ましくは、前記医薬が、脳がん、膵臓がん、卵巣がん、腎臓がん、膀胱がん、皮膚がん、胃がん、腸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、前立腺がん、肺がん、カポジ肉腫から選ばれる１種又は複数種の診断、治療又は予防に用いられる。より好ましくは、前記脳がんが、膠芽腫、星状細胞腫、髄膜腫、乏突起膠腫及び神経膠腫から選ばれる１種又は複数種である。
本発明の有益な効果は以下を含む。
マウス神経膠腫モデルによって確認されたように、本発明によって調製されたＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞は、ほとんどのマウスの腫瘍を除去し、一定期間内に再発することなく腫瘍を制御することができ、生存期間は、顕著に延長され、本発明に係るＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞がインビボで腫瘍細胞を殺傷することができ、潜在的な腫瘍治療法として使用できることを証明している。
異なる腫瘍細胞株におけるＢ７－Ｈ３の発現を示す図である。
神経膠腫サンプルにおけるＢ７－Ｈ３の発現を示す図である。
Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体の基本構造を示す図である。Ｂ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲは、共刺激ドメインがＣＤ２８であるキメラ抗原受容体を示し、Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲは、共刺激ドメインが４－１ＢＢであるキメラ抗原受容体を示す。
図４Ａは、本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞での発現（単一の健康なドナー）を示す図である。 図４Ｂは、本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞での発現（複数の健康なドナー）を示す図である。
インビトロ共培養システムにおける本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による異なる腫瘍細胞の殺傷を示す図である。
図６Ａは、同じ抗原に対する他のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ１、ＣＡＲ２）に比べて、抗原に対する本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体の親和性を示す図である。 図６Ｂは、同じ抗原に対する他のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ１、ＣＡＲ２）のＣＡＲ－Ｔ細胞に比べて、本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＣＡＲ－Ｔ細胞の、腫瘍細胞を殺傷する時のサイトカインレベルを示す図である。
インビボでの本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による神経膠腫の殺傷を示す図である。
本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞の治療による神経膠腫モデルマウスの生存率の向上を示す図である。
図９Ａは、インビトロでの本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による患者由来神経膠腫ニューロスフェア（Ｇｌｉｏｍａ ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ）の殺傷作用（明視野）を示す図である。 図９Ｂは、インビトロでの本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による患者由来神経膠腫ニューロスフェアの殺傷作用（フローサイトメトリー）を示す図である。
本発明に係るヒト化抗体１５Ｃ１１から誘導したＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞は、患者由来神経膠腫ニューロスフェアが移植されたモデルマウスの生存期間を顕著に延長させることを示す図である。
インビトロでの本発明に係る他の９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷を示す図である。
本発明に係る他の９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体Ｔ細胞が腫瘍を殺傷する時に放出されるサイトカインを示す図である。
Ｉ．定義
本発明では、別段の指定がない限り、本明細書で使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用されるタンパク質および核酸化学、分子生物学、細胞および組織培養、微生物学、免疫学に関連する用語および試験室の操作手順は、対応する分野で広く使用される用語および日常手順である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義と説明を以下に示す。
本明細書で使用される用語は、発明を実施するための形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。
本明細書で使用され、特に明記されていない限り、量、期間などの測定可能な値を指す場合の「約」という用語は、開示された方法を実行するのに適しているという条件で所与の値から±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±１％、さらにより好ましくは±０．１％の変動を含む。
本明細書で使用される「活性化」という用語は、検出可能な細胞増殖を誘導するのに十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化は、また、誘導されるサイトカイン産生および検出可能なエフェクター機能と関連している場合もある。「活性化されたＴ細胞」などの用語は、細胞***を受けたＴ細胞を指す。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然源または組換え源に由来する無傷免疫グロブリンであり得、無傷免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。抗体は通常、免疫グロブリン分子の四量体である。本発明における抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ）２など、ならびに１本鎖抗体及びヒト化抗体（Ｈａｒｌｏｗら、１９９９、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗら、１９８９、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）を含むが、これらに限定されない様々な形態で存在することができる。
本明細書で使用される場合、抗体の「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」とは、全長未満であるが、抗体に結合する前記抗体の可変領域（例えば、１つ又は複数のＣＤＲ及び／又は１つ又は複数の抗体結合サイト）の少なくとも一部を含む、全長抗体の任意の部分を指し、これにより、結合特異性および前記全長の抗体の特異的結合能力の少なくとも一部が保持されている。したがって、抗原結合フラグメントとは、抗体フラグメントが由来する抗体と同じ抗原に結合する抗原結合部分を含む抗体フラグメントを指す。抗体フラグメントには、全長抗体の酵素的処理によって産生された抗体誘導体、ならびに合成によって産生された誘導体、例えば、組換えして産生された誘導体が含まれる。抗体は、抗体フラグメントを含む。抗体フラグメントの実例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、ＦｄとＦｄ’フラグメント及び修飾フラグメント（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ ２０７：Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（２００３）；Ｃｈａｐｔｅｒ １；ｐ３－２５、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖを参照できる）を含む他のフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。前記フラグメントは、例えば、ジスルフィド結合および／またはペプチドリンカーによって連結された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントは、通常、少なくとも５０個のアミノ酸または約５０個のアミノ酸を含み、典型的には少なくとも２００個のアミノ酸又は約２００個のアミノ酸を含む。抗原結合フラグメントには、抗体フレームワークに挿入されるときに（例えば、対応する領域を置換することによって）免疫特異的に（すなわち、少なくとも１０７～１０８Ｍ－１のＫａまたは少なくとも約１０７～１０８Ｍ－１のＫａを示す）抗原を結合する抗体をもたらす任意の抗体フラグメントが含まれる。「機能的フラグメント」または「抗Ｂ７－Ｈ３抗体のアナログ」は、前記受容体がリガンドに結合するかまたはシグナル伝達を開始する能力を防止または実質的に低下させるフラグメントまたはアナログである。本明細書で使用される場合、機能的フラグメントは、一般的に、「抗体フラグメント」と同じ意味を有し、また、抗体に関しては、前記受容体がリガンドに結合したり、シグナル伝達を開始したりする能力を防止または大幅に低下させる、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などのフラグメントを指す場合がある。「Ｆｖ」フラグメントは、重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインとの非共有結合によって形成される二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。この構成では、無傷の抗体の場合と同様に、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬダイマーの表面に標的結合サイトを確定する。前記の６つのＣＤＲは、無傷の抗体に標的結合特異性を集合的に付与する。ただし、単一の可変ドメイン（又は、ただ３つの標的特異的なＣＤＲｓを含むＦｖの半分）でも、標的を認識・結合する能力を有する。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」とは、同一の抗体の集団を指し、モノクローナル抗体集団中の個々の抗体分子が他の抗体分子と同一であることを意味する。この特性は、さまざまな異なる配列を持つ抗体を含む抗体のポリクローナル群の特性とは逆である。モノクローナル抗体は、多くのよく知られた方法で調製することができる（Ｓｍｉｔｈ ｅｔａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．５７，９１２－９１７、及び、Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ（２０００），５３，１１１－１１７）。たとえば、モノクローナル抗体は、Ｂ細胞を不死化することによって調製でき、例えば、骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマ細胞株を産生することによって、またはＢ細胞をＥＢＶなどのウイルスに感染させることによって調製することができる。組換え技術は、また、抗体をコードするヌクレオチドの人工配列を保有するプラスミドで宿主細胞を形質転換することにより、インビトロで宿主細胞のクローン集団から抗体を調製することに使用することができる。
本明細書で使用される抗体「重鎖」とは、天然に存在するコンフォメーションですべての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。
本明細書で使用される抗体「軽鎖」とは、天然に存在するコンフォメーションですべての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指し、κ軽鎖およびλ軽鎖とは、２つの主な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
本明細書で使用される「ｓｃＦｖ」という用語とは、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、前記の軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域は、短い柔軟なポリペプチドリンカーを介して隣接しており、単鎖ポリペプチドとして表見され、かつ、前記ｓｃＦｖは、それが由来する無傷の抗体の特異性を保持している。特に明記しない限り、本明細書で使用されるｓｃＦｖは、いずれかの順序で（例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端により）前記ＶＬおよびＶＨ可変領域を有することができ、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでもよく、またＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。
本明細書で使用される「遺伝子合成」という用語は、組換えＤＮＡ技術を使用して生産すること、または、当分野で周知のＤＮＡ合成技術またはアミノ酸配列技術を使用して得ることを指す。
本明細書で使用される「抗原」または「Ａｇ」という用語は、抗体産生または特定の免疫担当細胞の活性化、あるいはその両方を含み得る免疫応答を誘発する分子として定義される。当業者は、実際的にすべてのタンパク質またはペプチドを含める任意の高分子が抗原として使用できることを理解すべきである。さらに、抗原は組換えＤＮＡまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。任意のＤＮＡは、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の一部を含むため、本明細書で使用される「抗原」をコードすることは、当業者に理解されるべきである。また、当業者は、抗原が単に遺伝子の全長ヌクレオチド配列によってコードされる必要がないことを理解すべきである。本発明が１つを超える遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むがこれに限定されないこと、およびこれらのヌクレオチド配列が異なる組み合わせで配置されて所望の免疫応答を誘発することは容易に明らかである。さらに、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要が全くないことは、当業者に理解されるべきである。抗原は、生成、合成、または生物学的サンプルから由来されることができることが、自明である。そのような生物学的サンプルとして、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、または生物学的流体を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、期待寿命の増加、または、がん性症状に関連するさまざまな生物学的症状の改善が明確に示される生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体のそもそもの腫瘍発生を防止する能力によって明確に表され得る。
本明細書で使用される「がん」という用語は、異常な細胞の急速で制御されていない増殖を特徴とする疾患として定義される。がん細胞は、局所的に広がることができ、または血流およびリンパ系を介して身体の他の部分に広がることができる。各がんの例示として、脳がん（例えば、星状細胞腫、髄膜腫、乏突起膠腫及び神経膠腫など）、膵臓がん、卵巣がん、腎臓がん、膀胱がん、皮膚がん、胃がん、腸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、前立腺がん、肺がん、カポジ肉腫等を含むが、これらに限らない。
本明細書で使用される「炎症性疾患」という用語の例として、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化骨関節症、関節炎、炎症性骨溶解、および、遅発性ウイルス感染および細菌感染によって引き起こされる慢性炎症を含むが、これらに限らない。
本明細書で使用される「自己免疫疾患」という用語の例として、円形脱毛症、アンキロス脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アディソン病、副腎自己免疫疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎及び***、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック病－皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、冷凝集素病、クローン病、円板状エリテマトーデス、特発性混合クリオグロブリン血症、線維筋痛－筋線維炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン－バレ症候群、橋本病、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、若年性関節炎、口腔粘膜扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合結合組織疾患、多発性硬化症、Ｉ型または免疫介在性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎（ｐｏｌｙｃｈｒｏｎｄｒｉｔｉｓ）、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎・皮膚筋炎、先天性無γグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー病、ライター症候群、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、多発性動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎（例えば、疱疹状皮膚炎性血管炎）、白斑及びウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない。自己免疫疾患の一部は、炎症状態に関連している。したがって、自己免疫疾患と炎症性疾患と見なされる状態の間には重なるところがあると考えられる。したがって、自己免疫疾患の一部は炎症性疾患とも呼ばれる。
本明細書で使用される場合、「共刺激リガンド」という用語は、Ｔ細胞上の関連共刺激分子に特異的に結合する抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上の分子を含む。これにより、ペプチドをロードしたＭＨＣ分子へのＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって提供される一次シグナルに加えて、増殖、活性化、分化などを含むがこれらに限定されないＴ細胞応答を媒介するシグナルも提供する。共刺激性リガンドは、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導可能な共刺激性リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンβ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト、または、抗体およびＢ７－Ｈ３に特異的に結合するリガンドを含むが、これらに限定されない。共刺激性リガンドは、特にＴ細胞に存在する共刺激分子に特異的に結合する抗体を含み、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３に特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「共刺激分子」という用語は、共刺激性リガンドに特異的に結合するＴ細胞上の関連結合パートナーを指し、これにより、例えば、増殖などに限られないＴ細胞の共刺激応答を仲介し、共刺激性分子として、ＭＨＣ－Ｉクラス分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「共刺激シグナル」という用語は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞増殖および／または重要な分子のアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションをもたらすシグナルを指す。
「コードする」とは、遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡのようなポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特異性配列がテンプレートとして機能し、生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび大分子を合成する固有特性を指し、前記ポリマーおよび大分子は、ヌクレオチド（即ち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）の規定された配列またはアミノ酸の規定された配列のいずれか、およびそれ由来の生物学的特性を有する。したがって、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を産生する場合、その遺伝子はタンパク質をコードする。ヌクレオチド配列は、ｍＲＮＡ配列と同等であり、通常、配列リストにおけるコード鎖に提供され、それと遺伝子またはｃＤＮＡを転写するためのテンプレートとして機能する非コード鎖の両方も、その遺伝子またはｃＤＮＡをコードするタンパク質または他の産物と呼ばれる。
本明細書で使用される「内因性」という用語は、生体、細胞、組織またはシステムに由来するまたはそれらの中で産生されるあらゆる物質を指す。
本明細書で使用される「外因性」という用語は、生体、細胞、組織またはシステムの外から導入され、または、それらの外で産生されるあらゆる物質を指す。
「発現」は、そのプロモーターにより駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳であると定義される。
本明細書で使用される「核酸構築体」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。核酸構築物は、発現のための十分なシス作用エレメントを含み、発現に用いられる他のエレメントは、宿主細胞によって、またはインビトロ発現システムにおいて供給され得る。核酸構築体は、組み換えポリヌクレオチドを取り込むコスミド、プラスミド（例えば、裸のまたはリポソームに含まれるもの）およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）等の当分野で知られるこのようなもののすべてを含む。
「同一」または「同一性」という用語は、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較された配列の位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、たとえば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で同一です。２つの配列間の同一性パーセントとは、２つの配列によって共有されるマッチングしているまたは同一な位置の数を比較位置数で割り、そして１００を掛けることにより計算される。例えば、２つの配列における１０個の位置のうち６個がマッチング又は同一である場合、２つの配列は６０％同一性を有する。例を挙げて説明すると、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣは５０％の同一性を有する。一般的に、２つの配列を比較して最大相同性を求める時、比較を行う。
本明細書で使用される「免疫グロブリン」又は「Ｉｇ」という用語は、抗体の役割を果たす１種類のタンパク質であると定義される。Ｂ細胞で発現される抗体は、ＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）又は抗原受容体と呼ばれることがある。このようなタンパク質に含まれる５つのメンバーは、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥである。ＩｇＡは、唾液、涙、親乳、胃腸分泌物、呼吸道、泌尿生殖路などの身体分泌物に存在する一次抗体である。ＩｇＧは最も一般的な循環抗体である。ＩｇＭは、ほとんどの対象の一次免疫応答で産生される主な免疫グロブリンである。それは凝集反応、補体結合及び他の抗体応答において最も効果的な免疫グロブリンであり、かつ細菌及びウイルスを抵抗する面で重要である。ＩｇＤは既知の抗体機能を有しない免疫グロブリンであるが、抗原受容体として用いることができる。ＩｇＥはアレルゲンに暴露された後、肥満細胞及び好塩基球からメディエーターを放出させることにより、即時型過敏症を媒介する免疫グロブリンである。
「分離」は、自然の状態から変更または除去されたことを意味する。例えば、生きている動物に自然に存在する核酸またはペプチドは「分離」されていないが、その天然状態で共存する物質から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは「分離」されている。分離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在でき、または、例えば、宿主細胞のような、非天然環境で存在できる。
本明細書において、特記しない限り、「アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンで（１つ又は複数の）イントロンを含む程度まで、イントロンを含み得る。
本明細書で使用される「作動可能に連結」という用語は、制御配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指し、これにより、後者の発現を生成する。例えば、第１核酸配列が第２核酸配列との機能関係に位置する場合、第１核酸配列が第２核酸配列に作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、プロモーターはコード配列に作動可能に連結されている。通常、作動可能に連結されているＤＮＡ配列は隣接しており、同じリーディングフレームで２つのタンパク質コード領域に連結されている必要がある。
「過剰発現する」腫瘍抗原または腫瘍抗原の「過剰発現」という用語は、組織または器官からの正常細胞における発現レベルに比べて、患者の特定の組織または器官内の固形腫瘍などの患部からの細胞における腫瘍抗原の発現の異常なレベルを意味する。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍を有する患者は、当分野で知られている標準的なアッセイによって特定することができる。
免疫原性組成物の「非経口」投与は、例えば、皮下（ｓ．ｃ）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）または胸骨内の注射または注入技術を含む。
「患者」、「対象」、「個体」などの用語は、本明細書で交換可能に使用され、インビトロまたはインサイチュであるかどうかにかかわらず、本明細書に記載の方法に適した任意の動物またはその細胞を指す。いくつかの非限定的な実施形態において、患者、対象又は個体は人である。
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド鎖と定義される。また、核酸は、ヌクレオチドの多量体である。そこで、本明細書で使用される核酸とポリヌクレオチドは交換可能である。当業者であれば、核酸を加水分解してモノマーである「ヌクレオチド」にすることができるという一般的な知識を有する。モノマーであるヌクレオチドは、加水分解してヌクレオシドになることができる。本明細書で使用されるポリヌクレオチドは、当分野で利用可能な任意の手段によって得られるすべての核酸配列を含むが、これらに限定されない。前記手段は、一般的なクローニング技術、および、ＰＣＲＴＭなどを使用して組換えライブラリーまたは細胞ゲノムから核酸配列をクローニングする組換え手段、および、合成手段を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、交換可能に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含む必要があり、タンパク質またはペプチドの配列に含めることができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合している２つ以上のアミノ酸を含有する任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、当分野で、通常、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、およびオリゴマーとも呼ばれる短鎖、および、当分野で、通常、タンパク質と呼ばれる長鎖を指し、これらは多くのタイプが存在する。「ポリペプチド」は、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質などを含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。
本明細書で使用される「安全スイッチ」という用語は、細胞治療の潜在的な毒性を防止するか、または他の方式で有害作用を防止するように設計された操作されたタンパク質を指す。場合によって、安全スイッチタンパク質の発現は、安全スイッチタンパク質をコードする遺伝子をそのゲノムに恒久的に組み込んだ移植された人工細胞の安全性の懸念に対処するために条件付きで制御されている。そのような条件付き制御は可変であり得、そして小分子を介した翻訳後活性化および組織特異的および／または時間的転写調節による制御を含み得る。前記安全スイッチは、アポトーシスの誘導、タンパク質合成の抑制、ＤＮＡ複製、成長停止、転写および転写後遺伝子調節、および／または抗体を介した枯渇を媒介することができる。場合によって、安全スイッチタンパク質は外因性分子（例えば、プロドラッグ）によって活性化され、活性化されると、処理された細胞のアポトーシスおよび／または細胞死を引き起こす。安全スイッチタンパク質の実例として、ＨＳＶＴＫ、ＶＺＶＴＫ、ｉＣａｓｐａｓｅ－９、ｉＣａｓｐａｓｅ－１、ｉＣａｓｐａｓｅ－８、短縮されたＥＧＦＲ、ＲＱＲ８等を含むが、これらに限定されない。この戦略では、有害事象が発生した場合に投与されたプロドラッグは、自殺遺伝子産物によって活性化され、形質導入された細胞を殺す。
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、細胞の合成機構によって認識されるか、または細胞の合成機構を引導する、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要とされるＤＮＡ配列として定義される。
本明細書で使用される場合、「プロモーター／制御配列」という用語は、プロモーター／制御配列に作動可能に連結されている遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。ある例において、この配列は、コアプロモーター配列であってよく、他の例において、この配列はまた遺伝子産物の発現に必要なエンハンサー配列および他の調節エレメントを含んでもよい。プロモーター／制御配列は、例えば、組織特異的な方法で遺伝子産物を発現する配列であり得る。
「構成型」プロモーターとは、遺伝子産物をコードする又は特定するポリヌクレオチドと操作可能に連結すると、細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下で遺伝子産物を細胞内で産生させるヌクレオチド配列である。
「誘導型」プロモーターとは、遺伝子産物をコードする又は特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結する場合、基本的にプロモーターに相当するインデューサーが細胞内に存在する場合にのみ、細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。
「組織特異的」プロモーターとは、遺伝子産物をコードする又は特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結すると、細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である限り、細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。
本明細書で使用される抗体またはその抗原結合フラグメントに関する「特異的に結合する」または「免疫特異的に結合する」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、抗体と抗原の抗体結合サイトとの間の非共有相互作用を介して同種抗原と１つまたは複数の非共有結合を形成する抗体または抗原結合フラグメントの能力を指す。前記抗原は分離された抗原であってもよく、細胞に存在してもよい。一般的に、免疫特異的結合（又は特異性結合）する抗原の抗体は、約１×１０７Ｍ－１又は約１×１０８Ｍ－１又はより大きな親和定数Ｋａ（１×１０－７又は１×１０－８Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ））で前記抗原に結合する。親和定数は、抗体反応の標準的な動力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍｙｓｚｋａ（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：５４、Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ（１９９８）Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９）、等温滴定熱測定（ＩＴＣ）又は本分野で知られている他の動的相互作用により測定することができる（例えば、Ｐａｕｌ、ｅｄ．、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２ｎｄ ｅｄ．、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ ３３２－３３６（１９８９）を参照できる。また、抗体の結合親和性を計算することに用いされる示例的なＳＰＲ及びＩＴＣ方法が記載されている米国特許第７，２２９，６１９号を参照できる）。結合速度をリアルタイムに検出し、モニタリングするための装置及び方法は既知であり、かつ購入可能である（ＢｉａＣｏｒｅ ２０００、Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２７：３３５を参照できる）。
本明細書で使用される「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を実質的に含まない細胞である。実質的に精製された細胞は、また、それらが自然に発生する状態で通常関連している他の細胞型から分離された細胞も言う。ある例において、実質的に精製された細胞の集団は、細胞の均一集団を指す。他の例において、この用語は、単に、その天然の状態で本来関連している細胞から分離されている細胞を指す。ある実施態様において、細胞は、インビトロで培養される。他の実施態様において、細胞は、インビトロで培養されない。
本明細書で使用される「治療的」という用語は、治療及び／又は予防を意味する。治療的効果は、疾患状態の抑制、緩和または根絶により得られる。
本明細書で使用される「治療的有効量」という用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている組織、システムまたは対象の生物学的または医学的応答を誘発する対象化合物の量を指す。「治療的有効量」という用語は、投与されたときに、治療されている障害または疾患の兆候または症状の１つまたは複数の発展を予防することができ、または、治療されている障害または疾患の兆候または症状の１つまたは複数をある程度で軽減することができる化合物の量を指す。治療的有効量は、化合物、疾患及びその重篤度、治療される対象の年齢、体重等によって変動し得る。
本明細書で使用される疾患を「治療する」という用語は、対象が経験する疾患又は障害の少なくとも１つの兆候又は症状の頻度又は重篤性を低減することを指す。
本明細書で使用される「トランスフェクション」または「形質転換」または「形質導入」とは、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクション」、「形質転換」または「形質導入」された細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換または形質導入した細胞であり、細胞は一次対象細胞およびその子孫を含む。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、分離された核酸を含み、かつ分離された核酸を細胞内部に送達することに使用できるモノ組成物を指す。直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミドおよびウイルスを含むがこれらに限定されない多くのベクターは、当分野で知られているベクターである。したがって、「ベクター」という用語は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。当該用語は、また、例えば、ポリリシン化合物、リポソームなどのような、核酸の細胞への転移を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物をさらに含むと解釈すべきである。ウイルスベクターの例として、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどを含むが、これらに限定されない。
ＩＩ．発明を実施するための形態
一態様において、本発明は、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体、及びＢ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を提供する。具体的に、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞は、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞である。
一態様において、本発明に係るＢ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３の抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－７、１７－１９、２９－３１、４１－４３、５３－５５、６５－６７、７７－７９、８９－９１、１０１－１０３、１１３－１１５又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１２、２２－２４、３４－３６、４６－４８、５８－６０、７０－７２、８２－８４、９４－９６、１０６－１０８、１１８－１２０又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲを含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１７、２９、４１、５３、６５、７７、８９、１０１、１１３又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９０、１０２、１１４又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９１、１０３、１１５又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、２２、３４、４６、５８、７０、８２、９４、１０６、１１８又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、２３、３５、４７、５９、７１、８３、９５、１０７、１１９又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１０８、１２０又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖ＣＤＲ３、を含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１６、２８、４０、５２、６４、７６、８８、１００、１１２又はこれらの任意の改変体から選ばれる軽鎖配列、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９３、１０５、１１７又はこれらの任意の改変体から選ばれる重鎖配列、を含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含む。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体は、Ｂ７－Ｈ３タンパク断片に対して得られたモノクローナル抗体から由来する。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、９８、１１０又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列を含む。
一態様において、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、前記のいずれかの態様に係る抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体部分と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の配列同一性を有する。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記膜貫通ドメインは、ＴＣＲのα、β、ζ鎖、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、４－１ＢＢ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＰＤ－１膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ－１、ＣＤ１５４、ＣＤ２８膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ２８膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記膜貫通ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４又はこれの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記ヒンジ領域は、ＣＤ８の細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ１ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域、ＩｇＤヒンジ領域、ＣＤ２８細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域及びＣＤ４の細胞外ヒンジ領域から選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記ヒンジ領域が、ＣＤ８αヒンジ領域である。より好ましくは、前記ヒンジ領域のアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２又はこれの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれたものである。より好ましくは、前記シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０又はこれの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
前記のいずれかの態様に係るＣＡＲによれば、前記シグナル伝達ドメインは、さらに１つ又は複数の共刺激ドメインをさらに含む。好ましくは、前記共刺激ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ２２３、ＣＤ２７０、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７８、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＦｃεＲＩγ、ＭｙＤ８８、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４、ＣＤ２８及びＯＸ４０の細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれたものである。より好ましくは、前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記共刺激ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６、１２８又はこれの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列である。
もう一態様において、本発明は、Ｂ７－Ｈ３を標的とする１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）をさらに提供する。具体的に、前記ｓｃＦｖは、Ｂ７－Ｈ３タンパク断片に対して得られたモノクローナル抗体から由来する。より具体的に、前記ｓｃＦｖのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、９８、１１０又はこれらの任意の改変体から選ばれるアミノ酸配列を含む。
一態様において、Ｂ７－Ｈ３を標的とするｓｃＦｖをコードする遺伝子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、９７、１０９又はこれらの任意の改変体から選ばれるヌクレオチド配列を含む。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ又はｓｃＦｖをコードする核酸分子を提供する。好ましくは、前記ｓｃＦｖをコードする核酸分子は、ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、９７、１０９又はこれらと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の配列同一性を有する核酸分子である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係る核酸分子を含む、核酸構築体を提供する。好ましくは、前記核酸構築体が、ウイルスベクターである。より好ましくは、前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターから選ばれる１種又は複数種である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係る核酸分子、あるいは、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体を含む、ウイルスを提供する。好ましくは、前記ウイルスがレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスから選ばれる１種又は複数種である。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲを発現する、あるいは、前記のいずれかの態様に係る核酸構築体又は前記のいずれかの態様に係るウイルスを含む、分離された宿主細胞を提供する。好ましくは、前記宿主細胞が、哺乳動物の細胞である。より好ましくは、前記宿主細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞又は細胞株、γδＴ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージまたは細胞株、あるいは、ＰＧ１３細胞株から選ばれる１種又は複数種である。より好ましくは、前記宿主細胞が、Ｔ細胞である。最も好ましくは、前記宿主細胞が、初代培養Ｔ細胞である。
一態様において、前記宿主細胞は、他のエフェクターをさらに発現する。前記他のエフェクターは、サイトカイン、他のＣＡＲ、ケモカイン受容体、ＰＤ－１発現を低下するｓｉＲＮＡまたはＰＤ－Ｌ１を阻害するタンパク、ＴＣＲ、あるいは安全スイッチを含むがこれらに限られない。好ましくは、前記のサイトカインが、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、ＮＧＦ－β、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＥＰＯ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２５、ＬＩＦ、ＦＬＴ－３、インターフェロン、アンギオスタチン、トロンボスポンジン及びエンドスタチンから選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記ケモカイン受容体が、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４から選ばれる１種又は複数種である。好ましくは、前記安全スイッチが、ＨＳＶＴＫ、ＶＺＶＴＫ、ｉＣａｓｐａｓｅ－９、ｉＣａｓｐａｓｅ－１、ｉＣａｓｐａｓｅ－８、短縮されたＥＧＦＲ及びＲＱＲ８から選ばれる１種又は複数種である。
一態様において、本発明は、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を提供する。具体的に、本発明は、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を提供する。より具体的に、前記Ｔ細胞は活性化されたＴ細胞である。より具体的に、前記Ｔ細胞の活性化は、ＣＤ３及び／又はＣＤ２８抗体による刺激によって達成される。
一態様において、本発明は、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ、核酸分子、核酸構築体、ウイルス、細胞から選ばれる１種又は複数種と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
前述した実施形態における治療薬によれば、適切な薬学的に許容される担体、賦形剤、および、改善された移動、送達、耐性などを提供するために製剤に組み込まれる他の試薬と共に投与されることが理解される。医薬品化学者に知られている薬局方には、多数の適切な製剤がある：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、 Ｅａｓｔｏｎ、 Ｐａ．（１９７５））、特にそのうち、Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、パップ剤、ゲル剤、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン又はアニオン）含有担体（例えば、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ）、ＤＮＡ抱合体、無水スラリー、水中油及び油中水エマルジョン、エマルジョンポリエチレングリコール（さまざまな分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル及びポリエチレングリコール含有半固形混合物を含む。前述の混合物のいずれも、製剤中の有効成分が製剤によって不活化されておらず、製剤が生理学的に許容され、かつ投与経路に耐えられる条件で、本発明による治療または治療方法に適用される。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、薬物投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことを意図する。適切な薬学的に許容される担体は、最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載され、これは、この分野の標準的な参考文献であり、参照により本明細書に組み込まれる。このような担体又は希釈剤の好ましい例として、水、食塩水、リンゲル液、グルコース溶液、および１～１０％のヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソームおよび固定油などの非水系ビヒクルを使用することもできる。そのような媒体および試薬を薬学的に活性な物質として使用することは、当技術分野でよく知られている。抗体と適合性のない従来の培地または試薬を除き、組成物におけるそれらの使用は、企図されている。
さらに、本発明によって提供される医薬組成物は、がん、炎症性疾患、自己免疫性疾患などの炎症性因子に関連する疾患を治療するために使用することができる。
一態様において、前記のいずれかの態様に係るＣＡＲ、核酸分子、核酸構築体、ウイルス、細胞、医薬組成物の、がんの診断、治療又は予防のための薬物の製造における応用を提供する。
一つの実施形態において、前記薬物を治療剤として使用することができる。このような試薬は、通常、対象の異常Ｂ７－Ｈ３発現、活性化及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病理の診断、治療、緩和及び／又は予防に用いられる。たとえば、がんまたは他の腫瘍性障害などの異常なＢ７－Ｈ３発現、活性化および／またはシグナル伝達に関連する疾患または障害を有する（またはリスクがあるまたは発症している）ヒト患者などの対象を、標準的な方法で特定してから治療計画を実施する。本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）として、標的抗原（例えば、Ｂ７－Ｈ３）に特異的に結合する抗体または抗体フラグメントを使用する。本発明のＣＡＲは、好ましくは、その標的抗原（例えば、Ｂ７－Ｈ３）に対して高い特異性および高い親和性を有する抗体から調製され、好ましくは、調製されたＣＡＲを利用してさらに免疫細胞（たとえば、Ｔ細胞）に対して遺伝子改変を行う。標的（例えば、Ｂ７－Ｈ３）の発現、活性及び／又はシグナル伝達機能は、本発明のＣＡＲ及び／又は本発明の遺伝子改変免疫細胞を投与することにより除去、抑制又は妨害され得る。標的（例えば、Ｂ７－Ｈ３）のその天然に結合している内因性リガンドへの結合は、本発明のＣＡＲおよび／または遺伝子改変免疫細胞を投与することにより排除、阻害または防止され得る。例えば、Ｂ７－Ｈ３の発現、活性化および／またはシグナル伝達は、本発明のＣＡＲおよび／または遺伝子改変免疫細胞を投与することにより、調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和、またはその他の方法で妨害することができる。いくつかの実施形態において、異常なＢ７－Ｈ３発現に関連する疾患または障害を治療するために、抗Ｂ７－Ｈ３抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲに対する抗体または抗体フラグメントから本発明に係るＣＡＲおよび／または遺伝子改変免疫細胞を調製して対象に投与する。一実施形態において、異常なＢ７－Ｈ３発現に関連する疾患または障害は、がんであってもよい。
明確かつ簡潔にするために、本明細書において、技術特徴を、同じまたは別々の実施形態の一部として本明細書に記載されているが、本発明の範囲は、いくつかの実施形態に記載されている技術特徴のすべてまたは一部を組み合わせてなる実施形態を含むことが理解される。
実施例１：腫瘍におけるＢ７－Ｈ３の発現検出
腫瘍におけるＢ７－Ｈ３抗原の発現状況を特定するために、まず、異なる腫瘍細胞株を検出のために選択した。原発腫瘍におけるＢ７－Ｈ３の発現をさらに検証するために、複数の患者の神経膠腫組織と正常組織を含む切片におけるＢ７－Ｈ３の発現状況を検出した。
方法：腫瘍細胞を集め、１×ＰＢＳで三回洗浄し、次にＢ７－Ｈ３の抗体１５Ｃ１１で氷上で３０分間染色し、１×ＰＢＳで洗浄した後にＡＰＣでカップリングしたヤギ抗マウスの二次抗体を添加し、室温で２０分間インキュベートし、１×ＰＢＳで洗浄した後、フローサイトメトリーでＢ７－Ｈ３の腫瘍細胞での発現を検出した。
免疫組織化染色：複数の患者の神経膠腫組織及び正常組織の切片に対して、免疫組織化学法を利用して１５Ｃ１１抗体を用いて原発腫瘍におけるＢ７－Ｈ３の発現を検出した。
パラフィン切片をキシレンで脱ロウし、アルコールで再水和した後、クエン酸ナトリウムを利用して抗原賦活を行った。その後、血清中で１時間ブロックした。Ｂ７－Ｈ３抗体１５Ｃ１１を４℃で一晩染色し、続いて西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウス二次抗体と３０分間インキュベートした。洗浄した後にＤＡＢで発色させた後、ヘマトキシリンで染色した。染色が完了した後、顕微鏡で観察・撮影した。
結果：図１から分かるように、検出された皮膚がん（ＷＭ－２６６－４）、卵巣がん（ＳＫ－ＯＶ－３）、神経膠腫（ＬＮ－２２９、Ｕ－８７ＭＧ）等の多種の腫瘍細胞株には、いずれもＢ７－Ｈ３の高発現があった。図２から分かるように、すべての患者の神経膠腫サンプルで異なるレベルのＢ７－Ｈ３発現が検出されたが、傍癌性組織と正常な脳組織では、極めて少量の細胞で微小量の発現を有し、かつ発現レベルが非常に低かった。これは、Ｂ７－Ｈ３が固形腫瘍治療の特定の標的であることを示唆した。
実施例２：細胞培養
本発明に用いられる細胞株は、１０％ＦＢＳ、１％ｇｌｕｔａＭＡＸ、および１％ダイアボディを含むＩＭＤＭ培地で培養されている２９３Ｔ細胞を含む。
ＷＭ－２６６－４、ＳＫ－ＯＶ－３、ＬＮ－２２９、ＬＮ－１８、Ｕ－８７ＭＧ細胞培地は、１０％ＦＢＳのＲＰＭＩ６４０又はＤＭＥＭであった。
ＧＦＰをコードするレトロウイルスは、３プラスミドシステム（ＧＦＳ－ＧＦＰ、ＭＭＬＶ－ｇａｇ－ｐｏｌ、ｐＶＳＶ－Ｇ）を使用して２９３Ｔ細胞を一過的にトランスフェクトすることにより調製された。ＧＦＰ陽性細胞は、ＧＦＰをコードするレトロウイルスに感染させることによって調製された。Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｌｕｃ）をコードするレンチウイルスは、Ｌｅｎｔｉ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ、ｐｓｐＡＸ２及びｐＶＳＶ－Ｇを利用して２９３Ｔ細胞を一過的にトランスフェクトすることにより調製された。ＧＦＰ－ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（ＧＦＰ－ＦＦＬｕｃ）をコードするレトロウイルスは、ＧＦＳ－ＧＦＰ－ＦＦＬｕｃ、ＭＭＬＶ－ｇａｇ－ｐｏｌ及びｐＶＳＶ－Ｇを利用して２９３Ｔ細胞を一過的にトランスフェクトすることにより調製された。マウス用腫瘍細胞株は、ＬｕｃをコードするレンチウイルスまたはＧＦＰ－ＦＦＬｕｃレトロウイルスに感染させた。
実施例３：キメラ抗原受容体の構築
キメラ抗原受容体は、１本鎖抗体領域、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激因子領域及びＣＤ３ζシグナル伝達領域で構成された（図３に示した）。キメラ抗原受容体の１本鎖抗体領域（ｓｃＦＶ）は、各モノクローナルハイブリドーマ細胞によって産生されたＢ７－Ｈ３に対する抗体に由来し、前記ｓｃＦＶアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、９８又は１１０に示した。キメラ抗原受容体は、遺伝子合成によって生成され、レトロウイルスベクターにクローニングされた。クローニングが完了した後、配列決定によりその配列の正しさを確認した。
表１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１：１５Ｃ１１の１本鎖抗体領域の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＧＣＣＴＣＴＣＡＧＡＡＣＧＴＧＣＧＧＡＣＡＧＣＣＧＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＣＴＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＴＧＧＡＡＣＴＡＣＣＣＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＣＴＴＧＣＡＡＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＣＣＣＧＧＣＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＧＡＣＴＡＣＧＡＴＴＡＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２：１５Ｃ１１の１本鎖抗体領域のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＬＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＰＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３：１５Ｃ１１の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＧＣＣＴＣＴＣＡＧＡＡＣＧＴＧＣＧＧＡＣＡＧＣＣＧＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＣＴＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＴＧＡＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＴＧＧＡＡＣＴＡＣＣＣＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４ ：１５Ｃ１１の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＬＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５：１５Ｃ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＱＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６：１５Ｃ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＬＰＳＮＲＬＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７：１５Ｃ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＬＱＨＷＮＹＰＦＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８：１５Ｃ１１の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＣＴＴＧＣＡＡＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＣＣＣＧＧＣＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＧＡＣＴＡＣＧＡＴＴＡＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９：１５Ｃ１１の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＰＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０：１５Ｃ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１タンパク質配列
ＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１：１５Ｃ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２タンパク質配列
ＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２：１５Ｃ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３タンパク質配列
ＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１３：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＴＧＴＴＧＴＧＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＴＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＣＡＧＴＡＡＣＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＧＴＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＴＡＴＧＧＧＴＧＴＴＧＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＣＧＧＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＡＧＣＧＣＴＡＴＡＡＣＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＣＡＣＴＧＣＧＧＡＴＡＣＴＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＡＴＡＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＣＴＧＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１４：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＶＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＴＰＧＤＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＩＮＬＨＷＹＱＱＫＳＨＥＳＰＲＬＬＩＫＹＡＳＱＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＨＳＶＥＴＥＤＦＧＭＦＦＣＱＨＳＮＳＷＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＧＷＩＲＱＰＳＲＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＶＫＲＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＳＳＱＶＦＬＫＩＡＳＶＤＴＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＩＰＨＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１５：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＴＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＣＡＧＴＡＡＣＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１６：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＶＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＴＰＧＤＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＩＮＬＨＷＹＱＱＫＳＨＥＳＰＲＬＬＩＫＹＡＳＱＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＨＳＶＥＴＥＤＦＧＭＦＦＣＱＨＳＮＳＷＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１７：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＲＡＳＱＳＩＳＩＮＬＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１８：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＹＡＳＱＳＩＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１９：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＱＨＳＮＳＷＰＬＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２０：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＧＴＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＴＡＴＧＧＧＴＧＴＴＧＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＣＧＧＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＡＧＣＧＣＴＡＴＡＡＣＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＣＡＣＴＧＣＧＧＡＴＡＣＴＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＡＴＡＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＣＴＧＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２１：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＧＷＩＲＱＰＳＲＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＶＫＲＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＳＳＱＶＦＬＫＩＡＳＶＤＴＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＩＰＨＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２２：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２３：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＨＩＷＷＤＤＶＫＲＹＮＰＡＬＫＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２４：５３Ｅ９Ｄ７の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＩＰＨＷＹＦＤＶ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２５：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＣＴＡＴＣＴＣＣＴＡＴＧＡＴＴＡＣＧＡＣＴＡＴＴＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２６：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＬＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＮＬＳＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＳＧＱＧＬＥＷＩＡＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＫＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２７：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２８：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＬＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２９：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３０：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＬＰＳＮＲＬＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３１：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＬＱＨＷＮＹＰＦＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３２：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＣＴＡＴＣＴＣＣＴＡＴＧＡＴＴＡＣＧＡＣＴＡＴＴＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３３：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＮＬＳＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＳＧＱＧＬＥＷＩＡＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＫＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３４：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１タンパク質配列
ＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３５：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２タンパク質配列
ＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３６：１５Ｃ１１Ｃ３の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３タンパク質配列
ＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３７：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＡＧＴＡＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＴＧＡＡＴＡＣＡＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＧＧＡＴＴＡＣＴＡＣＧＡＴＧＡＴＡＣＣＴＡＣＧＧＧＧＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３８：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＰＥＷＩＧＧＩＮＰＮＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＩＴＴＭＩＰＴＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３９：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＡＧＴＡＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４０：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４１：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４２：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＤＴＳＫＬＡＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４３：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＬＱＷＳＳＮＰＬＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４４：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＴＧＡＡＴＡＣＡＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＧＧＡＴＴＡＣＴＡＣＧＡＴＧＡＴＡＣＣＴＡＣＧＧＧＧＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４５：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＰＥＷＩＧＧＩＮＰＮＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＩＴＴＭＩＰＴＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４６：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４７：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＧＩＮＰＮＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４８：６Ｅ４Ｄ９の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＲＩＴＴＭＩＰＴＧＧＦＤＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４９：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＡＧＣＴＧＴＡＴＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＴＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＧＧＴＡＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＧＡＧＴＡＧＴＴＡＣＣＣＡＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＴＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＡＡＴＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＡＣＡＴＡＴＴＣＴＧＡＴＧＴＣＴＴＣＡＧＧＧＧＡＣＧＧＴＴＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＣＴＧＣＣＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＴＣＡＧＡＡＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＡＴＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＣＡＣＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５０：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＥＩＬＬＴＱＳＰＡＩＩＡＶＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＮＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＩＷＩＦＧＭＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＦＳＦＴＩＮＳＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＲＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＳＤＶＦＲＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＮＴＡＹＬＥＩＲＫＬＫＮＥＤＭＡＴＹＦＣＶＲＮＥＹＤＡＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５１：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＡＧＣＴＧＴＡＴＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＴＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＧＧＴＡＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＡＡＧＧＡＧＴＡＧＴＴＡＣＣＣＡＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５２：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＥＩＬＬＴＱＳＰＡＩＩＡＶＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＮＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＩＷＩＦＧＭＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＦＳＦＴＩＮＳＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５３：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＮ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５４：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＧＭＳＮＬＡＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５５：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＨＱＲＳＳＹＰＹＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５６：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＴＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＡＡＴＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＡＣＡＴＡＴＴＣＴＧＡＴＧＴＣＴＴＣＡＧＧＧＧＡＣＧＧＴＴＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＣＴＧＣＣＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＴＣＡＧＡＡＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＡＴＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＣＡＣＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５７：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＲＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＳＤＶＦＲＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＮＴＡＹＬＥＩＲＫＬＫＮＥＤＭＡＴＹＦＣＶＲＮＥＹＤＡＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５８：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５９：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＳＤＶＦＲＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６０：３１Ｆ３Ｅ５の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＶＲＮＥＹＤＡＰＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６１：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＴＧＧＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＴＡＴＡＧＴＴＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＡＧＧＴＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＡＴＡＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＡＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＡＴＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＴＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＧＡＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６２：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＮＩＶＬＡＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＹＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＳＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＳＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨＷＩＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＴＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＥＤＫＳＡＳＴＶＹＩＹＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６３：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＴＧＧＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＴＡＴＡＧＴＴＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＡＧＧＴＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＡＴＡＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６４：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＮＩＶＬＡＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＹＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＳＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＳＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６５：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＹＳＦＭＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６６：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＬＡＳＮＬＥＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６７：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＱＱＮＳＥＤＰＷＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６８：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＡＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＡＴＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＴＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＧＡＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６９：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨＷＩＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＴＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＥＤＫＳＡＳＴＶＹＩＹＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７０：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７１：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＴＮＱＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７２：２１Ｈ２Ｅ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７３： ２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＣＴＡＴＣＴＣＣＴＡＴＧＡＴＴＡＣＧＡＣＴＡＴＴＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７４：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＮＬＳＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＳＧＱＧＬＥＷＩＡＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＫＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７５：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７６：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＰＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７７：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７８：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＬＰＳＮＲＨＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７９：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＬＱＨＷＮＹＰＦＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８０：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＣＴＡＴＣＴＣＣＴＡＴＧＡＴＴＡＣＧＡＣＴＡＴＴＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８１：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＮＬＳＣＫＴＳＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＳＧＱＧＬＥＷＩＡＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＫＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８２：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＩＦＴＳＹＷＩＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８３：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＲＩＹＰＧＶＤＳＩＹＹＮＥＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８４：２４Ａ１１Ａ１１の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＴＩＳＹＤＹＤＹＳＭＤＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８５：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＧＣＡＧＧＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＡＴＣＴＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＴＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＴＴＡＣＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＴＣＣＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＣＡＴＴＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＡＣＣＴＣＡＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＴＧＧＴＧＧＣＴＴＣＡＡＴＡＴＧＣＴＴＴＧＧＡＣＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８６：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＦＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＳＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＶＲＲＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＡＬＱＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＳＳＡＳＴＡＨＬＱＩＳＹＬＫＤＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＷＷＬＱＹＡＬＤＮＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８７：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＧＣＡＧＧＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＡＴＣＴＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８８：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＦＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＳＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８９：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＦＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９０：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＱＭＳＳＬＡＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９１：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＱＮＬＥＬＰＹＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９２：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＴＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＴＴＡＣＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＴＣＣＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣＣＡＴＴＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＡＣＣＴＣＡＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＴＧＧＴＧＧＣＴＴＣＡＡＴＡＴＧＣＴＴＴＧＧＡＣＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９３：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＶＲＲＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＡＬＱＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＳＳＡＳＴＡＨＬＱＩＳＹＬＫＤＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＷＷＬＱＹＡＬＤＮＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９４：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＴＦＴＮＦＧＭＮ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９５：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９６：４２Ｂ５Ｃ１２の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＷＷＬＱＹＡＬＤＮ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９７：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＡＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＡＴＡＧＴＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＡＧＧＴＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＡＴＡＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＡＴＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＡＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９８：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＮＶＤＮＹＧＮＳＦＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＳＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＮＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＥＤＫＳＡＳＴＡＹＬＨＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９９：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＡＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＡＴＡＧＴＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＡＧＧＴＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＡＴＡＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１００：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＮＶＤＮＹＧＮＳＦＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＳＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０１：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＲＡＳＥＮＶＤＮＹＧＮＳＦＩＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０２：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＬＡＳＮＬＥＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０３：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＱＱＮＮＥＤＰＷＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０４：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＡＴＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＡＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０５：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＮＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＥＤＫＳＡＳＴＡＹＬＨＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０６：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＧＹＩＦＴＳＹＮＬＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０７：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＶＩＹＳＧＮＳＤＴＳＮＮＱＫＦＫＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０８：１４Ａ７Ａ８の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＧＥＹＧＮＨＧＧＦＡＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０９：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体の核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＡＡＣＴＧＴＡＴＴＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＧＡＧＡＡＴＡＴＴＴＡＣＡＧＴＡＡＴＴＴＡＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＴＣＴＡＴＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＡＴＴＴＡＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＣＴＡＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＡＴＴＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＴＴＴＴＣＡＡＣＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＡＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＧＴＣＴＴＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１０： ４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体のタンパク質配列
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＴＶＦＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＴＡＴＮＬＩＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＶＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＲＭＳＣＲＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＨＰＧＤＮＹＴＳＹＮＱＩＦＮＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＮＹＹＧＳＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１１：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体軽鎖の核酸配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＡＡＣＴＧＴＡＴＴＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＧＡＧＡＡＴＡＴＴＴＡＣＡＧＴＡＡＴＴＴＡＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＴＣＴＡＴＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＡＴＴＴＡＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１２：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体軽鎖のタンパク質配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＴＶＦＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＴＡＴＮＬＩＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＶＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１３：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ１のタンパク質配列
ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１４：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＴＡＴＮＬＩ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１５：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体軽鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＱＨＦＷＧＴＰＶＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１６：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体重鎖の核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＣＴＡＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＡＴＴＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＴＴＴＴＣＡＡＣＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＡＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＧＴＣＴＴＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１７：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体重鎖のタンパク質配列
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＲＭＳＣＲＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＨＰＧＤＮＹＴＳＹＮＱＩＦＮＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＮＹＹＧＳＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１８：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体重鎖のＣＤＲ１タンパク質配列
ＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１９：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ２のタンパク質配列
ＡＩＨＰＧＤＮＹＴＳＹＮＱＩＦＮＤ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２０：４１Ｃ１０Ｅ７の１本鎖抗体重鎖ＣＤＲ３のタンパク質配列
ＡＲＮＹＹＧＳＬＤＹ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２１：ＣＤ８αヒンジ領域の核酸配列
ＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２２：ＣＤ８αヒンジ領域のタンパク質配列
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２３：ＣＤ８α膜貫通領域の核酸配列
ＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２４：ＣＤ８α膜貫通領域のタンパク質配列
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２５：ＣＤ２８共刺激因子の核酸配列
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２６：ＣＤ２８共刺激因子のタンパク質配列
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２７：４－１ＢＢ共刺激因子の核酸配列
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２８：４－１ＢＢ共刺激因子のタンパク質配列
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２９：ＣＤ３ζシグナル伝達領域の核酸配列
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１３０：ＣＤ３ζシグナル伝達領域のタンパク質配列
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
実施例４：キメラ抗原受容体のレトロウイルスの調製
マウス白血病レトロウイルス（ＭＭＬＶ）の調製では、３プラスミドシステム（ＧＦＳ－ＣＡＲ、ＭＭＬＶ－ｇａｇ－ｐｏｌ、およびＲＶ－ＲＤ）を使用して２９３Ｔ細胞を一過性にトランスフェクトした。そのうち、ＣＤ１９．２８ＣＡＲは、コントロールであり、１５Ｃ１１ヒト化抗体から誘導されたＢ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲは、測定するターゲットＣＡＲであった。トランスフェクションを行ってから４８及び７２時間後、ＣＤ３およびＣＤ２８抗体で刺激された健康なヒトＴ細胞を感染させるために２９３Ｔ細胞の上清を回収した。
実施例５：Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体嵌を発現するＴ細胞の調製
１、Ｔ細胞のトランスフェクション及び増幅：
健常者から提供された末梢血を使用して、末梢血単核細胞を分離した。リンパ球密度勾配遠心法により単独の単核細胞を単離した。分離された単独の単核細胞をＣＤ３及びＣＤ２８の抗体により活性化された後、実施例４で回収されたレトロウイルス（ＣＤ１９．２８ ＣＡＲ、Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ及びＢ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲ）でＴ細胞を感染させた。次に、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体の発現及び腫瘍の殺傷を検出するために、キメラ抗原受容体をトランスフェクションしたＴ細胞を増幅させた。
２、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体発現の検出
トランスフェクションから３日後のＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞の一部を回収し、Ｂ７－Ｈ３と抗体Ｆｃフラグメントとの融合タンパク質を利用して、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体の発現を検出し、二次抗体はＡＰＣ蛍光染料で標識されたヤギ抗ヒトのＦｃ抗体であった。フローサイトメトリーを利用してＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞での発現を検出した。
結果：コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲと類似し、９０％を超えるＴ細胞は、本発明に係るＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体（Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ又はＢ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲ）を発現した（図４Ａ）。この結果は、他の複数の健常ドナーのＴ細胞で検証された（図４Ｂ）。
実施例６：インビトロ共培養システムにおけるＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
１、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷作用
本発明に係るキメラ抗原受容体がＴ細胞を介してＢ７－Ｈ３高発現の腫瘍細胞を殺傷したか否かを確認するために、Ｔ細胞と腫瘍細胞との共培養試験を設計して該Ｔ細胞による様々な腫瘍細胞の殺傷状況をテストした。腫瘍細胞が壁に接着してから２４時間後に、コントロール（ＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ）及びＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（Ｂ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ）を添加し、その後フローサイトメトリーでこれらによる様々な腫瘍細胞の殺傷状況を検出した。
方法：２４ウェルプレートに１－２×１０５／１ウェルのＧＦＰ標識腫瘍細胞（ＳＫ－ＯＶ－３、ＬＮ－１８、ＬＮ－２２９、ＷＭ－２６６－４）を接種し、２４時間後にＴ細胞：腫瘍細胞＝１：１の割合で、対応量のトランスフェクションから１０日間後のＣＡＲ－Ｔ細胞を添加した。７日後にウェル内の細胞を回収し、フローサイトメトリーを利用して残留腫瘍細胞の百分率を検出した。ここでＣＡＲ－Ｔ細胞はマウス抗ヒトのＣＤ３蛍光抗体により検出され、腫瘍細胞は自発的なＧＦＰ蛍光を利用して検出された。
結果：図５に示すように、コントロールとしてのＣＡＲ－Ｔ細胞はいずれの腫瘍細胞に対しても殺傷作用を有しなかったが、本発明に係るＢ７－Ｈ３のＣＡＲ－Ｔ細胞は、いずれの腫瘍細胞（ＳＫ－ＯＶ－３、ＬＮ－１８、ＬＮ－２２９、ＷＭ－２６６－４）との共培養においても腫瘍細胞を完全に殺滅することができると共に、当該ＣＡＲ－Ｔ細胞が細胞増殖の現象も示した。
２、本発明に係るＢ７－Ｈ３ＣＡＲと同じ抗原を標的とする他のＣＡＲとの比較：抗原に対する親和性及び３種類のＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞殺傷中のサイトカイン放出
既存の特許に同じ抗原を標的とする他の２つのキメラ抗原受容体が開示されていることを考慮して、本発明に係るＣＡＲとこれらの２種類のＣＡＲ（ＣＡＲ１は、ＷＯ２０１７／０４４６９９に由来し、ＣＡＲ２は、ＵＳ１０，２３３，２２６Ｂ２に由来した）のＢ７－Ｈ３抗原に対する親和性及び３種類のＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷過程におけるサイトカイン放出状況を比較した。
方法：親和性沈殿アッセイ（Ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ ａｓｓａｙ）
２９３Ｔ細胞にそれぞれＢ７－Ｈ３－ＦＬＡＧ又はＦＬＡＧ空ベクターコントロールをトランスフェクションした。また、別の２９３Ｔ細胞に対して、それぞれ３種類の異なるＢ７－Ｈ３ ＣＡＲをその発現量を一致するようにトランスフェクションした。４８時間後、ＲＩＰＡ溶解液でＢ７－Ｈ３－ＦＬＡＧ又はＦＬＡＧ空ベクターコントロールをトランスフェクションした２９３Ｔ細胞を溶解し、遠心分離して上清を回収し、抗－ＦＬＡＧ－Ｍ２アフィニティーゲルを添加し、４℃で２時間インキュベートし、ＲＩＰＡ溶解液で洗浄して置いた。ＲＩＰＡ溶解液で異なるＢ７－Ｈ３ ＣＡＲをトランスフェクションした２９３Ｔ細胞を分解し、遠心分離して上清を回収した後、それぞれＢ７－Ｈ３－ＦＬＡＧ又はＦＬＡＧ空ベクターコントロールをインキュベーションした後の抗－ＦＬＡＧ－Ｍ２アフィニティーゲルと４℃で１時間インキュベートした。ＲＩＰＡ溶解液で４回洗浄した後、溶出液（０．１Ｍ ｇｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ、ｐＨ ３．５）で室温で１０分間振動溶出し、上清を取り、１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ(ｐＨ ７．５)で中和反応をした後、ＳＤＳローディング緩衝液を加え、９５℃で５分間変性し、ウエスタンブロットで親和性を分析した。
結果：図６Ａに示すように、３種類のＣＡＲは、いずれもＢ７－Ｈ３と結合することができ、他の２種類のＣＡＲに比べて、本発明に係るＢ７－Ｈ３ＣＡＲは、Ｂ７－Ｈ３抗原タンパク質とより多く結合することができ、本発明に係るＣＡＲは、免疫抗原に対してより強い親和性を有することを示した。
方法：酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
４種類の異なる腫瘍細胞（ＬＮ－２２９、ＬＮ－１８、ＷＭ－２６６－４及びＳＫ－ＯＶ－３）とコントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ１、ＣＡＲ２及び本発明のＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔとの共培養試験において、トランスフェクションしてから１０日間のＴ細胞を添加してから２４時間後、上清の一部を回収した。ＥＬＩＳＡのキットを用いて上清中のサイトカインを検出した。
結果：図６Ｂに示すように、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍細胞との共培養過程で放出されたサイトカインレベルが検出限以下であったが、３種類の異なるＢ７－Ｈ３のＣＡＲ－Ｔ細胞は、いずれも殺傷過程でＴｈ１類サイトカイン（ＩＦＮγ及びＩＬ－２等を含む）を放出した。本発明に係るＢ７－Ｈ３ ＣＡＲ－Ｔは、ＣＡＲ１、ＣＡＲ２と比較して、４種類の細胞を殺傷する過程において、より高いレベルのＩＬ－２およびＩＦＮγを有意に放出することができた。これらサイトカインレベルがＣＡＲ－Ｔによる腫瘍の殺傷の最終的な効果に大きな影響を与えるため、本発明に係るＢ７－Ｈ３ＣＡＲ－Ｔは、腫瘍殺傷において、従来の２種類のＢ７－Ｈ３ ＣＡＲ－Ｔより顕著に高い効果を示した。
実施例７：同所性異種移植腫瘍マウス試験
本発明におけるＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞によるインビボでの腫瘍の殺傷作用を確認するために、ヌードマウスの神経膠腫モデルを選択した。６～８週齢のヌードマウス脳内にｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ標識されたヒト腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ又はＬＮ－２２９細胞）を注射し、腫瘍を形成した後にさらに溶媒ＰＢＳ、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ ＣＡＲ－Ｔ、Ｂ７－Ｈ３ ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲ－Ｔ細胞を同所性注射し、その後、Ｔ細胞による腫瘍クリアランスと治療されたマウスの生存状況を、画像化によって検出した。
方法：神経膠腫を標的するＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ試験は、６～８週齢のヌードマウスで完了した。まず、ヌードマウスの脳内に３Ｄポジショニングという方式でＧＦＰ‐ＦＦＬｕｃ標識された腫瘍細胞株（Ｕ‐８７ＭＧ細胞）を移植し、２週間後、体内撮像システムにおいて腫瘍移植が成功したことを確認した後、溶媒ＰＢＳ、トランスフェクションから１０日目のコントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ、Ｂ７－Ｈ３ ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞を同所性注射した。その後、週ごとに一回撮像し、Ｔ細胞による腫瘍の殺傷状況を観察した。
インビボ生存試験において、３Ｄポジショニングによってマウス脳にＧＦＰ‐ＦＦＬｕｃ標識されたＬＮ‐２２９細胞を同所性注射し、２週間後溶媒ＰＢＳ、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ、Ｂ７－Ｈ３ ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞を同所性注射した。その後、週ごとにマウスの体重を測定し、マウスの死亡時間を記録した。
結果：図７に示すように、ＰＢＳ群およびコントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ群における継続的な腫瘍増殖と比較して、本発明に係るＢ７－Ｈ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞（Ｂ７－Ｈ３．ＢＢＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ）は、ほとんどのマウスにおいてＵ－８７ＭＧ細胞によって形成された腫瘍を除去することができた。一定期間内に腫瘍を再発しないように制御することができた。この結果は、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞がインビボで腫瘍を殺傷することができることを示した。
また、コントロールおよびＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法を受けたＬＮ－２２９神経膠腫マウスの生存率を調べた。図８に示すように、コントロールとしてのＰＢＳ及びＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔに比べて、本発明に係るＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞（Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ ３．２８ ＣＡＲ－Ｔ）は、マウスの生存時間を顕著に延長し、本発明に係るＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞は、潜在的な腫瘍治療方法とすることができることが示された。
実施例８：Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による患者由来神経膠腫の殺傷作用
１、インビトロでのＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による患者由来神経膠腫ニューロスフェアの殺傷
本発明において、Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞による患者由来腫瘍の殺傷作用を検証するために、神経膠腫患者の神経膠腫幹細胞を分離し、かつ神経膠腫ニューロスフェアに培養した。さらに神経膠腫ニューロスフェアとコントロール（ＣＤ １９－ＣＡＲ）及びＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体（Ｂ７－Ｈ３．ＢＢＣＡＲ及びＢ７－Ｈ ３．２８ＣＡＲ）を発現するＴ細胞と共培養し、その後、顕微鏡観察及びフローサイトメトリーによってＴ細胞による患者神経膠腫ニューロスフェアの殺傷状況を検出した。
方法：患者の神経膠腫組織を取得した後、組織解離キットを利用して神経膠腫幹細胞を分離し、その後に神経膠腫完全培地で培養して神経膠腫ニューロスフェアを得た。２４ウェルプレートに１～２×１０５／１ウェルの患者神経膠腫ニューロスフェア細胞を接種し、２４時間後にＴ細胞：腫瘍細胞＝１：１の割合で対応量の、トランスフェクションから１０日間後のＣＡＲ－Ｔ細胞を添加した。５～７日後にウェル内の細胞を観察・回収し、フローサイトメトリーを利用して残留腫瘍細胞の百分率を検出した。ここでＣＡＲ－Ｔ細胞をマウス抗ヒトのＣＤ３蛍光抗体により検出し、標識されていない細胞は、神経膠腫ニューロスフェア細胞であった。
結果：図９に示すように、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＴＣＡＲ－Ｔ細胞は、神経膠腫ニューロスフェアを殺傷することができなかったが、本発明に係るＢ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔは、神経膠腫ニューロスフェア細胞を効果的に殺傷することができ、かつＣＡＲ－Ｔ細胞は、顕著な蓄積及び増殖を示した。
２、インビボでのＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による患者由来神経膠腫ニューロスフェアの殺傷
インビボでのＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞による患者由来神経膠腫ニューロスフェアの殺傷作用をさらに確認するために、患者神経膠腫ニューロスフェアを利用して異種同所性移植腫瘍マウスモデルを構築した。ヌードマウスの脳内に患者の膠腫ニューロスフェア細胞を同所性注射し、２週間後に同様に脳内に溶媒ＰＢＳ、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ、Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲ－Ｔ細胞を注射し、その後、各群の治療されたマウスの生存状況を記録した。
方法：患者由来神経膠腫を標的するＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ試験は、６－８週齢のヌードマウスで完了した。まず、ヌードマウスの脳内に３Ｄポジショニング装置でＧＦＰ‐ＦＦＬｕｃ標識された神経膠腫ニューロスフェア細胞を同所性注射し、２週間後、ＰＢＳ、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ、Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞を同所性注射した。週ごとにマウスの体重を測定し、マウスの死亡時間を記録した。
結果：図１０に示すように、本発明のＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞（Ｂ７－Ｈ３．ＢＢ ＣＡＲ－Ｔ及びＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ）は、コントロールとしてのＰＢＳ及びＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔに比べて、担がんマウスの生存時間を顕著に延長することができ、本発明に係るＢ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞は、インビボで患者由来神経膠腫細胞を効果的に殺滅することができ、患者の生存時間を延長する可能性があると示した。
実施例９：他の９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞によるインビトロで共培養体系における腫瘍細胞の殺傷
１．９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷作用
本発明において、１５Ｃ１１からクローンされたヒト化１本鎖抗体以外、他の９つのＢ７－Ｈ３抗原を識別するマウス由来１本鎖抗体（番号：５３Ｅ９Ｄ７、１５Ｃ１１Ｃ３、６Ｅ４Ｄ９、３１Ｆ３Ｅ５、２１Ｈ２Ｅ１１、２４Ａ１１Ａ１１、４２Ｂ５Ｃ１２、１４Ａ７Ａ８、４１Ｃ１０Ｅ７）をさらに含む。これらのマウス由来キメラ受容体が同様にＴ細胞を介してＢ７－Ｈ３を高く発現する腫瘍細胞を殺傷することができることを確認するために、共培養試験を設計してこれらのマウス由来ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞（ＬＮ－２２９）の殺傷状況をテストし、かつ比較した。腫瘍細胞を壁に接着させた後、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ ＣＡＲ－Ｔ及び９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲを発現するＴ細胞を添加し、その後フローサイトメトリーでそれらによる腫瘍細胞の殺傷状況を検出した。
方法：２４ウェルプレートに２×１０５／１ウェルのＧＦＰ標識されたＬＮ－２２９細胞を接種し、２４時間後にＴ細胞：腫瘍細胞＝１：１の割合で、対応量の、トランフェクションから３日目のＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ及び９種類の異なる１本鎖抗体のＢ７－Ｈ３．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞を添加した。５日後にウェル内の全ての細胞を回収し、フローサイトメトリーを利用して残留したＬＮ－２２９細胞の百分率を検出した。ここでＴ細胞は、マウス抗ヒトのＣＤ３蛍光抗体結合染色により検出され、ＬＮ－２２９細胞は自発的なＧＦＰ蛍光を利用して検出された。
結果：図１１に示すように、コントロールとしてのＣＤ１９．２８ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＬＮ－２２９細胞に対して明らかな殺傷作用がなかったが、本発明の他の９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞は、ＬＮ－２２９細胞との共培養において、いずれも腫瘍細胞に対してある程度の殺傷作用を示し、かつＢ７－Ｈ３のＣＡＲ－Ｔ細胞は、すべてある程度の細胞増殖の現象を示した。
２．９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷過程におけるサイトカイン放出
Ｔ細胞と腫瘍細胞との共培養試験において、９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷過程におけるサイトカインドの放出状況を検出した。
方法：酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
腫瘍細胞（ＬＮ－２２９とＷＭ－２６６－４）とキメラ抗原受容体－Ｔ細胞（ＣＤ１９．２８ ＣＡＲ－Ｔ及び９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３．２８ ＣＡＲ－Ｔ）との共培養試験にＣＡＲ－Ｔ細胞を添加し、２４時間後に、培養上清液の一部を回収した。ＥＬＩＳＡキットを用いて上清中のサイトカインを検出した。
結果：図１２から分かるように、コントロールとしてのＣＤ１９．２８細胞により放出されたサイトカインのレベルが検出限以下であったが、本発明における９種類のマウス由来Ｂ７－Ｈ３キメラ抗原受容体のＴ細胞は、いずれも殺傷過程において異なるレベルのＴｈ１類サイトカイン（ＩＦＮγ及びＩＬ－２等を含む）を放出し、これらの９種類のＣＡＲ－Ｔ細胞が腫瘍細胞を殺傷しかつ他の腫瘍の殺傷メカニズムを活性化する機能を有することを示した。

Claims (21)

  1. 抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含み、
    前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、下記のＣＤＲ組み合わせ（１）及び（２）：
    （１）アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５である軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６である軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７である軽鎖ＣＤＲ３、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０である重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１である重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２である重鎖ＣＤＲ３、及び
    （２）アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９である軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０である軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１である軽鎖ＣＤＲ３、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４である重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５である重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６である重鎖ＣＤＲ３、から選ばれる一種を含むことを特徴とする、Ｂ７－Ｈ３を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  2. 前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体又は抗原結合部を含み、前記抗体又は抗原結合部は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、２８から選ばれる軽鎖配列、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、３３から選ばれる重鎖配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  3. 前記抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３抗体領域（ｓｃＦｖ）を含み、前記抗Ｂ７－Ｈ３の１本鎖抗体のアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、２６から選ばれるアミノ酸配列である、請求項１又は２に記載のＣＡＲ。
  4. 前記膜貫通ドメインは、ＴＣＲのα、β、ζ鎖、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、４－１ＢＢ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＰＤ－１膜貫通ドメインから選ばれる１種又は複数種であり、
    前記ヒンジ領域は、ＣＤ８の細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ１ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域、ＩｇＤヒンジ領域、ＣＤ２８細胞外ヒンジ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ ＣＨ２ＣＨ３ヒンジ領域及びＣＤ４の細胞外ヒンジ領域から選ばれる１種又は複数種である、請求項１～３のいずれかに記載のＣＡＲ。
  5. 前記膜貫通ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列であり、
    前記ヒンジ領域のアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列である、請求項１～４のいずれかに記載のＣＡＲ。
  6. 前記シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である、請求項１～５のいずれかに記載のＣＡＲ。
  7. 前記シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０のアミノ酸配列である、請求項６に記載のＣＡＲ。
  8. 前記シグナル伝達ドメインが、さらに１つ又は複数の共刺激ドメインを含み、前記共刺激ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８３、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ２２３、ＣＤ２７０、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７８、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＦｃεＲＩγ、ＭｙＤ８８、４－１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインから選ばれる１種又は複数種である、請求項１～７のいずれかに記載のＣＡＲ。
  9. 前記共刺激ドメインのアミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６、１２８から選ばれるアミノ酸配列である、請求項８に記載のＣＡＲ。
  10. 請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、分離された核酸分子。
  11. 前記核酸分子のヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２５から選ばれるヌクレオチド配列である、請求項１０に記載の分離された核酸分子。
  12. 請求項１０又は１１に記載の核酸分子を含む、核酸構築体。
  13. 前記核酸構築体が、ウイルスベクターであり、前記ウイルスベクターがレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターから選ばれる１種又は複数種である、請求項１２に記載の核酸構築体。
  14. 請求項１０又は１１に記載の核酸分子あるいは請求項１２又は１３に記載の核酸構築体を含む、ウイルスであって、前記ウイルスがレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスから選ばれる１種又は複数種である、ウイルス。
  15. 請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲ、請求項１０又は１１に記載の核酸分子、請求項１２又は１３に記載の核酸構築体、請求項１４に記載のウイルスの、Ｂ７－Ｈ３を発現する腫瘍細胞を標的とする遺伝子改変免疫細胞を調製するための使用。
  16. 請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲ、又は請求項１０又は１１に記載の核酸分子、又は請求項１２又は１３に記載の核酸構築体、又は請求項１４に記載のウイルスを含む、分離された宿主細胞。
  17. 前記宿主細胞がＴ細胞、ＮＫ細胞又は細胞株、γδＴ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージまたは細胞株、ＰＧ１３細胞株から選ばれる１種又は複数種である、請求項１６に記載の分離された宿主細胞。
  18. 前記宿主細胞は、他のエフェクターをさらに発現し、前記他のエフェクターは、サイトカイン、もう一種のＣＡＲ、ケモカイン受容体、ＰＤ－１発現を低下するｓｉＲＮＡあるいはＰＤ－Ｌ１を阻害するタンパク、ＴＣＲ、又は安全スイッチを含む、請求項１６又は１７に記載の宿主細胞。
  19. 請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲ、請求項１０又は１１に記載の核酸分子、請求項１２又は１３に記載の核酸構築体、請求項１４に記載のウイルス、請求項１６～１８のいずれかに記載の宿主細胞から選ばれる１種又は複数種と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  20. 疾患の診断、治療又は予防に使用される、請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲ、請求項１０又は１１に記載の核酸分子、請求項１２又は１３に記載の核酸構築体、請求項１４に記載のウイルス、請求項１６～１８のいずれかに記載の宿主細胞、又は、請求項１９に記載の医薬組成物であって、前記疾患ががん、炎症性疾患、自己免疫性疾患から選ばれる１種又は複数種である、請求項１～９のいずれかに記載のＣＡＲ、請求項１０又は１１に記載の核酸分子、請求項１２又は１３に記載の核酸構築体、請求項１４に記載のウイルス、請求項１６～１８のいずれかに記載の宿主細胞、又は、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記疾患は、Ｂ７－Ｈ３を発現する腫瘍であり、前記腫瘍は、脳がん、膵臓がん、卵巣がん、腎臓がん、膀胱がん、皮膚がん、胃がん、腸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、前立腺がん、肺がん、カポジ肉腫から選ばれる１種又は複数種であり、前記脳がんが膠芽腫、星状細胞腫、髄膜腫、乏突起膠腫及び神経膠腫から選ばれる１種又は複数種である、請求項２０に記載の疾患の診断、治療又は予防に使用される、ＣＡＲ、核酸分子、核酸構築体、ウイルス、宿主細胞、又は、医薬組成物。
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Clin. Cancer Res., 2019年4月15日，Vol.25, No.8，p.2560-2574，doi: 10.1158/1078-0432.CCR-18-0432
Mol. Ther. Oncolytics. 2019年7月23日，Vol.14，p.279-287，doi: 10.1016/j.omto.2019.07.002

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