JP7272583B2 - イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法 - Google Patents
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Description
粘着テープの粘着剤が塗布された粘着面をメンブレンの表面に載せ、ニップロールを用いてメンブレンと粘着テープとを圧着する。その後、メンブレンの表面から粘着テープを剥離する。粘着テープは、均一な速度で剥離することが好ましい。
ラミネートフィルムを用いる場合には、ラミネートフィルムの接着剤が塗布された接着面をメンブレンの表面に載せ、加熱ニップロールを用いて70~120℃、好ましくは80~110℃でメンブレンとラミネートフィルムとを加熱圧着する。その後、メンブレンの表面からラミネートフィルムを剥離する。ラミネートフィルムは、均一な速度で剥離することが好ましい。
まず、表面処理の対象となるイムノクロマトアッセイ用メンブレンを、以下の手法により製造した。
具体的には、ニトロセルロース樹脂4.6質量%、酢酸セルロース樹脂0.2質量%、アセトン43.7質量%、プロパノール46.2質量%、イソプロピルアルコール2.0質量%、及び水3.4質量%をタンクに収容し、攪拌して均一な製膜溶液とした。その後、湿度を55%に調節した雰囲気中にて、製膜溶液を33℃に加熱した支持体(ポリエステルフィルム)上に流延し、溶媒を蒸発させて製膜溶液を凝固させた。その後、乾燥させてメンブレンを得た。
得られたメンブレンにドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを添加して、サンプル1とした。サンプル1から幅10mm、長さ50mmの試験片を切り出し、試験片の長さ方向の一方の端から水を吸い上げた。その結果、40mmの高さまで水が吸い上がる時間は、109秒であった。
本発明の方法でメンブレンの表面を処理することによって、メンブレンにおけるセルロースエステルのダストの量が減少する。ダストの量の減少は、以下の手法により間接的に確認することができる。具体的には、表面処理前後のメンブレンから得られた抽出液の吸光度を測定し、吸光度の変化から、メンブレンにおけるニトロセルロースのダストの量の変化を求めることができる。
表面処理後のメンブレンについても、同様の試験片として抽出液を得、同様に吸光度を測定し、以下の式によりダスト変化率を算出する。
粘着テープの粘着力は、JIS Z0237「粘着テープ・粘着シート試験方法」に準じて、試験板に対する180°引きはがし粘着力として測定した。具体的には、SUS304の試験板に24mm幅の粘着テープを質量2kgの圧着ローラーを用いて貼り付け、粘着テープの一端を万能試験機((株)島津製作所製AGS-H)のチャックに固定した。試験機を300mm/minの速度で運転することで試験板から粘着テープを引きはがし、運転開始から25mm変位した地点から50mm引きはがされた範囲の試験力の平均を粘着力(N/24mm)とした。
イムノクロマト測定は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)を被検出物質として測定する系で、メンブレンに吸収パッドを組み付け、標識抗体とhCGの混合溶液を展開するハーフストリップ法で行った。
イムノクロマト測定用の媒体として、100μmの厚さのポリエステル製シートで裏打ちし前記の方法で作製したセルロースエステルメンブレンを用いた。このメンブレンに、hCG認識抗体をキャプチャー抗体として固定した検出ライン、標識抗体であるマウスIgGの認識抗体を固定化したコントロールラインを設置した。
ア.テストライン用抗体溶液
抗hCG抗体を、50mMのリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して、0.5mg/mLの濃度のテストライン用の抗体溶液とした。
イ.コントロールライン用抗体溶液
ヤギ抗マウスIgG抗体を、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で(pH7.0)で0.5mg/mLの濃度になるように希釈し、コントロールライン用の抗体溶液とした。
ウ.クロマト媒体へのスポッティング
上記ア.イ.の抗体溶液を、BioDot社製イムノクロマト分注システムXYZ3060を用いてクロマトグラフ媒体であるセルロースエステルメンブレンに抗体溶液を塗布し、50℃で30分間乾燥させた。
エ.ブロッキング処理
上記ウのメンブレンに、0.3質量%のホウ酸、0.095質量%のアジ化ナトリウムを含む0.5質量%のカゼイン溶液(pH8.5)を含浸させ、50℃で30分間乾燥させた。
オ.洗浄処理
上記エのメンブレンを、0.5質量%のスクロース、0.01%のドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを含む50mMのTris-HCl(pH7.5)に室温で30分浸漬し、取り出して50℃で30分間乾燥させた。
金コロイド液(BBI Solutions製:EMGC40)9mLに、50mMのリン酸緩衝液(pH7.5)を1mL加えて撹拌し、hCG認識抗体50μg/mL溶液1.1mLを加えて撹拌し、室温で10分放置した。更に1質量%のポリエチレングリコール(平均分子量20000)0.5mL、10質量%の牛血清アルブミン(BSA)を加えて撹拌した。
次いで、7500×gで15分間遠心分離を行った。上清を除去して1mLを残し、520nmにおける吸光度が6.0になるように1質量%のBSA、0.05質量%のポリエチレングリコール(平均分子量20000)、150mMの塩化ナトリウム、0.095質量%のアジ化ナトリウムを含む20mMのTris-HCl(pH8.2)を加え撹拌し、標識抗体溶液を作製した。
hCG試薬(標準物質)を、1質量%BSAを含むPBSに溶解し、50mIU/mLになるように希釈し、これを陽性検体とした。またhCG試薬を添加しない1質量%BSAを含むPBSを陰性検体とした。
バッキングシートに、上記(1)で作製したイムノクロマト測定用の媒体と吸収パッド(東洋濾紙株式会社製濾紙 No.590)を貼り付け、カッターで5mm幅にカットした試験ストリップを使用して、ハーフストリップ法によるイムノクロマトグラフィー測定を行った。
上記(2)の標識抗体溶液5μLと上記(3)の被験物質溶液100μLとを混合し、混合溶液を試験ストリップのメンブレン下端から吸い上げた。吸い上げ開始から10分後、20分後の試験ストリップに出現した検出ラインとコントロールラインの金コロイドの赤い発色を、イムノクロマトリーダーを用いて測定し、発色強度を測定した。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いて、サンプル1のメンブレンの表面処理を行った、その結果を以下に示す。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(3M社製 スコッチ(登録商標)はってはがせるテープ811)を用いて、上述した手法によりサンプル1の表面処理を行った。ニップロールの線圧は、0.5kgf/cmとした。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は0.6N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(トラスコ中山株式会社製 表面保護テープTSP-5B)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は1.3N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(日東電工株式会社製 金属板用表面保護フィルムSPV-M-6030)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は2.0N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(3M社製 スコッチ(登録商標)PTFEテープ5490)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はシリコーン系粘着剤であり、粘着力は5.4N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(ニチバン株式会社製 セロテープ(登録商標)No.405)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は10.5N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(3M社製 キズからまもる透明保護テープ)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は15.4N/24mmであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ(日東電工株式会社製 屋内平滑床面用ラインテープE-SD)を用いて、サンプル1に実施例1と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は19.7N/24mmであった。
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、PET基材のラミネートフィルムを用いて、上述した手法によりサンプル1の表面処理を行った。ニップロールの線圧は0.5kgf/cmとし、ラミネートフィルム側のニップロールを91℃に加熱した。このラミネートフィルムの接着剤はPE+EVAであった。
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、PET基材のラミネートフィルムを用いて、サンプル1に実施例8と同様の表面処理を行った。このラミネートフィルムの接着剤はPE+EEAであった。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル1のメンブレンである。
いずれの実施例においても、比較例1に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、いずれの実施例も、比較例1に比べて発色強度の大きな低下は見られず、表面処理によりイムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
実施例3と同様の表面処理を、サンプル2に行った。
実施例3と同様の表面処理を、サンプル3に行った。
ニップロールの温度を71℃に変更した以外は実施例9と同様の表面処理を、サンプル1に行った。
ニップロールの温度を82℃に変更した以外は実施例9と同様の表面処理を、サンプル1に行った。
ニップロールの温度を103℃に変更した以外は実施例9と同様の表面処理を、サンプル1に行った。
サンプル2に実施例12と同様の表面処理を行った。
サンプル2に実施例13と同様の表面処理を行った。
サンプル2に実施例9と同様の表面処理を行った。
サンプル2に実施例14と同様の表面処理を行った。
サンプル3に実施例12と同様の表面処理を行った。
サンプル3に実施例13と同様の表面処理を行った。
サンプル3に実施例9と同様の表面処理を行った。
サンプル3に実施例14と同様の表面処理を行った。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル2のメンブレンである。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル3のメンブレンである。
いずれの実施例においても、比較例に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、サンプル2を用いた実施例は、比較例2を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。また、サンプル3を用いた実施例は、比較例3を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。異なる製造条件で製造したセルロースエステルメンブレンサンプルにおいても、一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理により、イムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
Claims (5)
- イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法であって、
表面にダストを有するイムノクロマトアッセイ用メンブレンを準備し、
前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面に、一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを密着させた後、
前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの前記表面から前記可撓性シートを剥離することにより前記ダストを前記可撓性シートの表面に移動させて、前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの前記表面の均一性を高めることを特徴とするイムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法。 - 前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンは、セルロースエステル製であることを特徴とする請求項1に記載の表面処理方法。
- 前記可撓性シートは、圧着または加熱圧着により前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面に密着させることを特徴とする請求項1又は2に記載の表面処理方法。
- 前記可撓性シートが粘着テープであり、その粘着力は、1.0N/24mm以上であることを特徴とする請求項1~3のいずれか1項に記載の表面処理方法。
- 前記可撓性シートがラミネートフィルムであり、加熱圧着処理の加熱温度が70~120℃であることを特徴とする請求項3に記載の表面処理方法。
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