JPH02210265A

JPH02210265A - 分析素子

Info

Publication number: JPH02210265A
Application number: JP2968289A
Authority: JP
Inventors: Mutsuhiko Tamura; 田村　睦彦; Yutaka Iwadate; 裕岩舘; Takeshi Yamamoto; 毅山本
Original assignee: Konica Minolta Inc
Current assignee: Konica Minolta Inc
Priority date: 1989-02-10
Filing date: 1989-02-10
Publication date: 1990-08-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は分析素子、特に液体中の特定成分を定量する分
析素子に関し、更に詳しくは、血液などの体液中の高比
重リポタンパク（以下、ＨＤＬと略記する）分画中に含
まれる特定成分、特に脂質成分の定量分析に用いる分析
素子に関する。

〔従来の技術〕

従来、液体試料中の特定成分を分析する方法は、多数開
発がなされてきたが、これらは大別して溶液内で反応が
行われる反応系と、固相担体内で行われる反応系との２
８類に別けることができる。溶液系における分析反応（
以下、ウェット・ケミストリーという）は、用手法と呼
ばれる全く機械を用いない方法から、自動分析機器まで
幅広く知られている。特に臨床化学の分野ではその進歩
が著しく、近年種々の臨床検査用自動定量分析機器が病
院の臨床検査室などに導入されている。

しかしながら、上述の方法は、基本的には水浴液の形で
反応を行わせるために１．ａ々の欠点を有している。す
なわち、その分析過程で大量の水、特に精製された純水
あるいは蒸留水を必要とすることからエネルギー消費の
増大を招く。

また、種々の自動分析機器はそれ自体著しく高価でろり
、かつその操作に多大の熟ａを必要とし、美大な時間と
労力を必要とするばかりでなく、その廃液は必然的に環
境汚染を引起こすという欠点を有している。

これに対して固相系における分析反応（以下、ドライ・
ケミストリーといり）を用いる分析方法も広範に用いら
れているが、これらは２Ｆ紙等に試薬を含浸させた形で
行われる。

上記のｆ紙は、例えば米国特許第３，０５０，３７５号
あるいは同３．［１６１，５２３号各明細書等に記載さ
れているようにｆ紙のごとき吸水性繊維質担体に試薬溶
液を含浸させ、乾燥させて作られるものである。これら
は一般に分析試験紙又は単に試験片と呼ばれるもので、
試験片に液体試料ｔ−滴下するか、又は液体試料中へ試
験片を浸漬させ試験片の色変化又は濃度変化を肉眼判定
か、又は反射濃度計により測定し、液体試料中の特定成
分の濃度レベルを決定するものである。

これらの試験片は、その取扱いが簡便でめり、かつ直ち
に結果が得られるので有用ではあるが、その構成上から
半定量又は定性分析の領域にとどまっている。

他方、上述のごとき従来の分析方法に対して操作性の簡
便なドライ・ケミストリーを用い、その上高い定量性を
有する多層分析素子が知られている。例えば、特公昭５
３−２１６７７号、時開＠５５−１６４５５６号、同５
７−１２５８４７号、特願昭５６−６５４４６号、並び
に同５６−１８９７８４明細明細誉に多層分析素子が記
載されている。

これらに記載の素子によれば、分析反応に用いられる一
切の試薬類を一枚の分析素子中に含有しており、血清又
は全血液を一定容量上記素子上に滴下し、一定温度で一
定時間保温した後、支持体側から反射濃度の測定を行い
、この反射濃度から物質濃度を決定することが可能でる
る。

上記方法は、従来の試験紙型のものに対して飛躍的な分
析精度を有し、かつ予め試薬をｇ４裏することなくウェ
ット・ケミストリーと同等以上の性能を有するものであ
る。

近年、血液中の特定成分、特にＨＤＬ−分画中の特定成
分を定量分析することが臨床医学上欠かせなくなってい
る。従来、ＨＤＬ−分画中の特定成分を測定する際には
、リポタンパクを分画する操作、分画されたＨＤＬ中の
特定成分を測定する操作の２段階で構成されている。

ＨＤＬを分画するには超遠心法、ゲルＰ通法、ポリアニ
オン沈殿法などが用いられている。コレステロールを測
定するには前記のドライケミストリーを用いた乾式分析
素子が、特開昭６１−１７７９９７号公報などに記載さ
れている。

〔発明が解決しようとする課題〕

生物体液中、特に血液中のＨＤＬ−分画中の特定成分の
含有ｉを定量測定するには、上記のようＶＣ’）ボタン
バク分画操作、続いて特定成分の分析操作の２段階を経
ることが必要で、操作が複雑で時間を要するとい９工部
合を有する。

本発明の目的は、このよりな不都合を解消した分析素子
を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は分析素子に関する発明で
あって、支持体上に少なくとも一層の試薬層、及びその
上方に多孔性展開層を有し、液体試料の高比重りボタン
バク分画中の特定成分を分析するための分析素子におい
て、該素子が、液体試料中の高比重りボタンバクを分画
する分画剤を含有する層ｔ−有し、かつ核層が、該特定
成分の測定反応を行う層より上方に設けられていること
を特徴とする。

本発明者等は、鋭意検討の結果、２段階の操作を１段階
とし、簡単迅速でかつ正確なＨＤＬ−分画中の特定成分
の測定か可能な分析素子を得るに至った。

本発明は、特定成分の検出試薬金言む分析素子の層中に
リポタンパク分画に用いられる試薬を含有させ、測定に
供しないリポタンパク分画を不溶性の沈殿とし、ＨＤＬ
分画中の特定成分だけを測定できるようにしたことによ
り完成した。

前記のりボタンバク分画に用いられる試薬には、ポリア
ニオン沈殿法で通常用いられる試薬を用いることができ
る。例えば、ヘパリン、デキストラン硫酸、リン・タン
グステン酸ナトリウムなどのポリアニオンとマグネシウ
ム、カルシウム、マンガンなどの２価の金属イオンの組
合せのいずれも用いることができる。

これらの試薬は、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）、超低
比重リポタンパク（ＶＬＤＬ　）分画を不溶性の沈殿と
し、ＨＤＬ分画は沈殿させない。

従来の方法では、血清などの被検物質にこれらの試薬を
加え、ＬＤＬ、ＶＬＤＬを沈殿させたのち、遠心分離を
行う、という段階を経た後、上清中のＨＤＬ分画に含ま
れる特定成分を測定するという２段階の操作を必要とし
次。

本発明による分析素子は、彼達する特定成分の測定反応
に用いられる試薬系を含む層より上方、すなわち、液体
が滴下される面側に、上記分画剤も含む層を設けたもの
である。この分画剤を含む層は最上層、すなわち、液体
が最初に接触する層であることが好ましく、滴下された
液体中に含まれるＬ　Ｄ　Ｌ、　ＶＬＤＬはこの海中で
沈殿する。この際、都合のよいことに、層を構成する物
質のマトリクスが、生じた沈殿を捕捉するため、それよ
り下層にはＨＤＬ分画だけを含む液体が供給される。こ
のため、分画のための前処理が不要となった。

また、この鳩に、特開昭６１−９６４６６号公報に記載
されたような血球濾過機能をもたせることにより、全血
液を試料として用いることができる。この場合は、血漿
分離も同時に行え、更に効率的である。

この分画剤を含有する層は、液体を単位面積当り一定容
ｔを下層に供給する展開層を兼ねることができる。

本発明に係る展開層は、（１）一定容量の液体試料を単
位面積当シ一定容量を試薬層に均一に配布する機能を有
するものである。その上、更に、特公昭５３−２１６７
７号公報に記載された性能、すなわち（２）液体試料中
の分析反応を阻害する物質又は要因を除去する機能、及
び／又は（３）分光光度分析を行うときに支持体ｔ−経
て透過する測定光を反射するバックグランド作用を行う
機能を有するものであれば好ましい。したがって、本発
明に係る展開層は、上記＋１）の機能のみを有する層、
（１）に加えて（２）及び／又は（３）の機能を併せて
有する層のいずれかとすることができ、あるいは、１１
＋を包含する複数の機能を適宜分離し、各機能ごとに別
の層を使用することも可能である。更に＋１１．　＋２
１及び（３）の機能のうち、２つの機能を有する層と、
残りの１つの機能を有する層を組合せて使用することも
できる。

本発明におりては、展開／ｉ１は、（１）及び（２）の
機能を有する第１の展開層と、（１）に加えて（２）及
び／又は（３）の機能をもつ第２の展開層からなること
が好ましか。

第１の展開層は、例えば全血中から血球部分を除去する
機能を有する濾過材として用いられている本のを使用す
ることができる。

一般に市販されているガラス繊維フィルターメンブラン
フィルタ−１綿ウ一ル繊維裂品などを挙げることができ
る。これらはいずれも本発明の分析素子に使用しうるが
、ガラス繊維フィルターが特に好ましい。ガラス繊維フ
ィルターの実例としては特開昭５７−５３６６１号公報
に記載されたもの、東洋濾紙（株）より市販されている
Ｃ）Ａ−１００（厚さ約４５０μｍ）、ＧＡ−２００（
厚さ約７５０μｆｆｉ〕及びＧＢ−１０ＯＲ（厚さ約４
００μｍ）などがある。この層に前記分画剤を含有させ
るには、この分画剤を溶解しない溶媒中に粒径５〜１０
μＷ１程度の微粒子状に分散し、前記濾過材に宮浸させ
、乾燥することによって得られる。分画剤は微粒子状の
ため、濾過材のマトリクス中に捕えられるので、効率よ
く含有させることができる。こうして得た分画剤含有の
濾過材を前記第２の展開層の上に設置する。

設置するには従来用いられている方法を用いることがで
きる。例えば、物理的圧着、各種接着剤を用いての接着
、などを用いることができる。

このよりな濾過材を用いることにより、試料として全血
液を用いての特定成分の測定が可能である。

第１の展開層は、また特開昭５８−９ｍｍ６７号公報に
記載された粒子結合体構造をもつ膚であってもよい。こ
れは空隙率が２５〜８０チの相互連絡空隙を有する非膨
潤性三次元格子である粒子結合体からなｐ、前記試料溶
液に非膨潤性、不浸透性であｐｌかつ反応性基を有する
サイズ１〜１０μｍの熱安定性有機高分子重合体粒子か
らなることを特徴とする。この層を塗設する際、塗布液
中に分画試薬を分散含有させ、塗布乾燥後に粒子に分画
試薬が物理的に吸着するようにし、分画濾過層とするこ
とが望ましい。

これらの第１の展開層には、分画試薬のほか、所望に応
じて界面活性剤、緩衝剤等を添加することができる。こ
の分画濾過層では、試料溶液を滴下した際、分画試薬に
よって測定に供しないリポタンパク成分は沈殿を生成し
、構成層内に捕捉される。測定されるＨＤＬ成分は、沈
殿を生成せず、下層へと浸透する。ただしこの際、層内
で捕捉されなかった沈殿が、試料溶液と共に下層へ浸透
するのを防ぐために、この壜の下の層、すなわち液体が
供給される面とは反対側に位置する層は、濾過機能を有
する第２の展開層であることが好ましい。第１の展開層
と第２の展開層の界面において、沈殿は完全に捕捉され
、第２の展開層以下には沈殿しないＨＤＬ分画のみを含
む液体が供給される。この第２の展開層は、第１の展開
層の機能を補うため、前記の（１）に加えて、（２）及
び／又は（３）の機能をもつことが好ましい。例えば、
第２の展開層は、Ｉ￥ｊ公昭５３−２１．６７７号公報
に記載された二酸化チタン及び二酢酸セルロースから成
るプラッシュポリマーと呼称される非繊維多孔質媒体の
展開層、特開昭５５−１６４３５６号公報に記載された
親水化処理した織物の展開層、特開昭５７−９４６５８
号、同５７−１２５８４７号、同５７−１９７４６６号
及び同５８−７０１６１号等の各公報に記載された繊維
構造展開層、特開昭５８−９０１６７号各公報明記載さ
れた粒子結合体構造展開層が挙げられる。

本発明の分析素子における第２の展開層の膜厚は、その
空隙率によって決定されるべきであるが、好ましくは約
１００〜約５００μｍ１更に好ましくは約１５０〜３５
０μｍである。また、空隙率は好ましくは約２０〜約８
５俤である。

また他の付加的な添加剤として、例えば保恒剤、緩衝剤
、界面活性剤等、種々の添加剤も所望に応じて添加する
ことができる。

特に界面活性剤は液体試料を本発明の素子に適用した際
の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性〕、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の例としては、例えば２，５−ジ−
ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−オ
クチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−インノ
ニルフェノキシポリエチレングリコール等のアルキル置
換フェノールのポリアルキレングリコール誘導体、高級
脂肪酸のポリアルキレングリコールエステル等が挙げら
れる。これらの界面活性剤は液体試料の受答層への浸透
速度を調節し、同時に好ましからざる「クロマトグラフ
ィ現象」発生を抑制する効果ｔ−有する。

上記界面活性剤は広範に選択されたｔを用いることが可
能であるが、塗布液の重量に対して１０重量％〜（ＬＯ
Ｏ５重ｉ％、好ましくは６重量％〜α０５重量％用いる
ことができる。

本発明による分析素子は、測定しようとする目的物質に
応じ、それぞれに適した測定試薬を含有させることによ
って、多くの成分の測定に用いることができる。例えば
、コレステロール、トリグリセライド、リン脂質などの
１ｌ１１定に用いられる試薬を含有させることにより、
ＨＤＬ分画中に含まれるそれぞれの成分の定量分析を行
うことができる。

以下、ＨＤＬ−コレステロールの定量分析を例として説
明するが、本発明はＨＤＬ−コレステロールの定量分析
だけに限られるものではない。

分画剤によって分画されたＨＤＬ中のコレスチロールな
、コレステロールニステルト遊離コレステロールの混合
物として存在することが知られている。これらは下記の
反応によって検出される。

コレステロール＋脂肪酸コレステロールオキシダーゼ（２）　　　コレステロールコレステモノ十ＨＩＯ鵞＋３１　　Ｈ２Ｏ２検出反応（１）及び（２）Ｋ用いられる酵素、すなわちコレステ
ロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼは
％ＨＤＬ中のコレステロールだけと反応させるため、第
１の展開層より下の層、好ましくは第２の展開層に含有
させることが望ましり。

この際、酵素を核層に官有させるためには、核層は、水
又はそれに準する系で塗設することが望ましい。しかし
ながら、該方法を用いると、試薬層から、水溶性の試薬
の移動を誘起し、十分な分析性能を達成することができ
ない。これを解決するには、前記層を非水溶媒で塗設す
るとよいが、その際、酵素を直接該層中に分散含有させ
ると、酵素の有機溶媒による変性失活を招き、著しい感
度の低下を引起す。

上記問題点を解決するために本発明においては、特開昭
６１−１７７９９７号公報に記載され九ように、妨害物
質を含有しないタンパク質及び／又はポリペプチド化合
物を使用することが好ましい。

本発明において使用する「該分析及び該反応を実質的に
妨害する物質ｔｌ−宮有官有いタンパク質及び／又はポ
リペプチド化合物」とは、分析目的念る特定成分及び′
＃、素活性を実質的に含有せず、且つ該特定成分を検知
可能な物質に誘導させる反応を実質的に妨害する物質を
含有しないタンパク質及び／又はポリペプチド化合物を
意味する。

前記定義したタンパク質及び／又はポリペプチド化合物
の例としてはアルブミン（牛血清アルブミン、卵白アル
ブミン等）、グロブリン、ゼラチン及びゼラチン分解物
等が好ましい。

該酵素と妨害物質を含有しないタンパク質及び／又はポ
リペプチド化合物の比率は広範に選択された割合を用い
ることが可能であるが、各々のタンパク量として重量で
ＩＯ対１〜１対５０００が好ましく、特に１対１〜１対
２００の比率の範囲で用いることが、特に好適である。

本発明において、酵素とタンパク質及び／又はポリペプ
チド化合物との混合物を分散含有する多孔性層を形成す
るための有機溶媒としては、例えばキシレン、ベンゼン
、トルエン、メタノール、エタノール、ブタノール、ア
セトン、クロロホルム、テトラヒドロ７ラン等の非水溶
媒が挙げられるが、これらの中で好適なものは、キシレ
ン、ベンゼン、トルエン、ブタノール、クロロホルム等
の水不混和性有機溶媒である。

ペルオキシダーゼを用いる場合には、常法に従って水素
供与体及びカプラーを併用する。

水素供与体の例としては、特開昭４８−５２１５８号公
報に開示されている４−置換アンチピリン、同５５−２
０４７１号公報に開示されている２−ヒドラジノペンジ
チアゾリン、同５５−１４８１００号公報に開示されて
いるｐ−ハロゲノフェノール（以上、時開１１１５５７
−１７４０９９号公報参照）、更に特開昭５０−１５７
１９２号、同５７−９４６５５号、及び同５７−１７４
０９９明細公報に開示されてｈる。−又はｐ−フェニレ
ンジアミン系化合物が挙げられる。

これらの中で好ましいものは、４−置換アンチピリン及
びｐ−フェニレンジアミン系化合物であり、特に、４−
アミノアンチピリン、特開昭５７−９４６５５号公報に
具体例として挙げられているｐ−７ユニレンジアミン系
化合物が好ましい。

水素供与体は広範に選択された量を用いることが可能で
あるが、αｏ１〜ｔ　ｏｏ６リモル／ｍ２、好ましくは
α０５〜５０ミリモル／ｍ２の範囲で用いることができ
る。

カプラーの例としては、特開昭５７−９４６５４号公報
に開示されているアシルアセトアミド化合物、同５７−
９４６５６号及び同５７−１７４０９９明細公報に開示
されているピラゾロン系化合物、同５７−９４６５５号
及び同５７−１７４０９９明細公報に開示されているフ
ェノール系化合物、同５７−９４６５５号及び同５７−
１７４０９９明細公報に開示されているナフトール系化
合物、及び同５７１７４０９９号公報に開示されている
Ｎ、Ｎ−ジ置換アニリン化合物が挙げられる。これらの
中で好ましいものは、ピラゾロン系化合物、フェノール
系化合物及びナフトール系化合物でめり、特に特開昭５
７−９４６５６号、同５７−９４６５５号、同５７−９
４６５５号及び同５７−１７４０９９明細公報に具体例
として挙げられている化合物、及び７−クロロ−５−（
２−（２−ヘキシルデシルスルホニルンエチル〕−６−
メチル−ピラゾロ−（３，２−ａ）−ｓ−）リアゾール
が好ましいカブラ−は広範に選択された量を用いることが可能であ
るが、α、１〜１００ミリモル／　ｍ”、好ましくはα
５〜５０ミリモル／ｍｚの範囲で用いることができる。

本発明の分析素子は支持体上に、液体試料中の成分と反
応する少なくとも一種の試薬を宮み且つ親水性コロイド
からなる少なくとも一層の試薬層と、その上方に前記液
体試料中の成分を前記試薬層へ透過又はＰ遇する展開＃
を順次積層してつくられる。

本発明に係る支持体は、従来公知のものでよく、好適な
ものには、液体不浸透性で、且つ光透過性のものがめり
、例えば酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート
、ポリカーボネート、又はポリスチレンのような種々の
重合体材料が、この使用目的に適する。更には、上記重
合体材料のみならず、ガラスのごとき無機材料も同様に
用いることが可能である。本発明に係る支持体の厚さは
任意であるが、好ましくは約５０〜約２５０μｍである
。また、本発明に係る支持体の観測側の一側面は、その
目的に応じて任意に加工することが可能である。更に試
薬層を積層する側の支持体面に、場合によっては光透過
性の下塗り層を使用して試薬層と支持体との接着性を改
良することができる。

本発明に係る試薬層は親水性バインダーから構成される
ものであり、二層以上の試薬層に分離することも可能で
ある。

バインダーとしては、ゼラチン、７タル化ゼラチン等の
ゼラチン誘導体、ヒドロキシエチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロースナトリウム塩等の水溶性セルロー
ス誘導体、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド
、ポリメタクリルアミド、ポリ（モノ又はジアルキル置
換）アクリル方ミド、ポリ（モノ又はジアルキル置換）
メタクリルアミド、及びこれらの水溶性共重合体等が挙
げられる。

本発明の分析素子は、必要に応じて、例えば米国特許筒
５．９９２，１５８号明細書記載の反射層、下塗９層、
米国特許筒４，０４２，５５５号明細書記載の放射線ブ
ロッキング膚、米国特許筒４．０６６．４０３号明＃１
−ｉＦ記載のバリヤー層、米国特許筒４，１６６，０９
５号明細書記載のマイグレーション阻止層、特開昭５５
−９０８５９号公報記載のスカベンジャー層及び米国特
許筒４．１１０．０７９号明細書記載の破壊性ボンド状
部材等を任意に組合せて本発明の目的に合わせた任意の
構成とすることができる。

これら分析素子の種々の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において公知のスライ
ドホッパー塗布法、押出し金布法、浸漬塗布法等を適宜
選択して用い、順次積層することで任意の厚みの層を塗
設することができる。

本発明の分析素子を用いて、液体試料中の特定成分のｆ
ｔ−１本発明に係る支持体側から反射スペクトロホトメ
トリーにより初速開法又は反応終結法に従って測定する
ことができる。このようＫして得られた測定値は、あら
かじめ作成しておい友検量線に当てはめることで特定成
分の量を決定することができる。

本発明の分析素子に適用される液体試料の量は任意に定
めることができるが、好ましくは約５μｔから約５０１
Ｌｔでろり、更に好ましくは５　ｔｉｔ。

から２０μｔである。通常的１０ｔｔｌの液体試料を適
用するのが好ましい。

本発明の分析素子は、全血液、血清及び血漿のいずれの
分析にも不都合なく用いることができる。更には尿、リ
ンパ液、髄液等の他の体液も不都合なく用いられる。全
血液を用いる場合には、必要に応じて検出のための放射
線が血球により妨害を受けるのをさけるために前述の放
射線ブロッキング層又は他の反射層を設けることができ
る。

本発明の分析素子に用いられる分析反応は、その目的に
より任意に定めることができるが、例えば臨床化学の分
野に有用でアシ、特に生物学的液体試料、すなわち血液
又は尿中の成分の分析に用いられる。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて不発ＢＡｆ、更に具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない
。

実施例１膜厚１８０翔の透明な下引済ポリエチレンテレフタレー
ト支持体上に、下記組成の試薬層を塗設した。

ゼラチン　　　　　　　　　　　　　１五０９７ｍ”ペ
ルオキシダーゼ　　　　　　　　　　　　１３０００　
Ｕ／；＋ｓ”アスコルビン酸オキシダーゼ　　　　　　
　　９５００　Ｕ／ｍ”トリイソプロピルナフタレンス
ルホン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　
　α５６１２１．２−ビス（ビニルスルホニルエタン）
　　　　　０．２０９７ｍ”フタル酸ジブチル　　　　
　　　　　　　　　　１．０２９７ｍ”アジ化ナトリウ
ム　　　　　　　　　　　　　　α１６９／讐上記試薬
層を塗布、乾燥後、下記組成の接着層を塗役し九。

上記接着層を塗布、乾燥後、下記組成の第２の展開層を
塗設した。

２Ｆ紙原材料用繊維（東洋濾紙社製）　　　　　？　ｔ
ｏ　９７ｍ”ポリオキシエチレ／ラウリルエーテル１ＡＱｆ／ｍ” 塩酸４−Ｎ、Ｎジエチルアミノ−２−（２’−メタンス
ルホンアミドエチル）アニリンａ　１８９７ｍ” 上記第２の展開層を塗布、乾燥後、下記組成の第１の展
開層を塗設した。

ポリ（スチレンーコー・°グリシジルメタクリレート〔
９０／１０］（平均粒径約５Ａｍ）エチレンジアミン１５α０わ４− α１ｆ７− デキストラン［酸ナトリウム　　　　　　　　α０２９
７ｍ”塩化マグネシクム　　　　　　　　　　　　　［
Ｌ４６９７ｍ”塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　
　　　α１０９７ｍ”上記のようＫして本発明の分析素
子（１）ｔ−製造した。

第１の展開膚ｆ、塗設し々い以外は本発明の分析素子（
１）と同様の、従来の分析素子と比較して、本発明の分
析素子＋１１を評価した。

；レスチロール含有量の異なる分画操作前の各種ヒト血
清５　′！ＩＩを用意し、それぞれを生理食塩水で２分
の１に希釈し、本発明の分析素子。

及び従来の分析素子に１０μｔｙ４下し、３７℃で７分
間インキエベーションした後の波長５４６ｎｍ　におけ
る反射光学濃度（Ｄｒ　）を測定した。

第１表にその結果を示す。

第　　１表第２表上記５種のヒト血清″ｆ、、中外製薬（株）製、ユニキ
ラ）ＨＤＬ−コレステロールＮに付属の分画試薬を用い
て、分画操作を行った。血清に、同量の分画試薬を混合
し、１０分間放置後、３０００回転で１０分間遠心分離
し九。それぞれの上清を、本発明の分析素子（１）、及
び従来の分析素子に１０μｔ＃４下し、５７℃で７分間
インキュベーションした後の波長５４６ｎｍＶｃおける
反射光学濃度（Ｄｒ　）を測定した。第２衆にその結果
を示す。

第１表、第２表の結果から、本発明の分析素子（１１で
は、分画操作を経ない血清を用いても、ＨＤＬ−コレス
テロール濃度に相応した良好な発色が得られるが、従来
の分析素子では、分画操作を行った血清を用いないと、
ＨＤＬ−コレステロール濃度に相応した発色が得られな
いことがわかる。

実施例２実施例１の試薬Ｎを塗布、乾燥した後、約５０ｆ／ｎ！
の水を塗布し、湿らせた後、ポリエチレンテレフタレー
ト紡績糸（６６ゲージ、５０Ｄ）からなるトリコット編
物を圧着し、乾燥させ九。

その後、下記組成の水溶液を、１−となるように塗布し
、第２の展開層とした。

ポリオキシエチレン−ラウリルエーテル　　　　　１五
〇２コレステロールオキシダーゼ　　　　　　　　　１
８０ｏυコレステロールエステ５−ゼ　　　　　　　　
　１８００Ｕアスコルビン酸オキシダーゼ　　　　　　
　　　７５００Ｕ水００ｆ上記第２の展開層を塗布乾□燥後、下記のように作成し
た第１の展開層を、α−シアノアクリレート系の接着剤
を用いて接着した。

テーファクタントＩＯＧ　　　　　　　　　　　　五〇
　ｆ／Ｂ”デキストラン硫酸ナトリウム　　　　　　　
　　１０２Ｖ−塩化マグネシウム　　　　　　　　　　
　　　　１４６Ｖ−塩化ナトリウム　　　　　　　　　
　　　　　１１０Ｖ−上記の試薬をサンドグラインダー
を用いて平均粒径５μｍ程度になるまでキシレン中で微
粒子化し、東洋濾紙（株）製　ガラス繊維フィルターＣ
）Ｂ１００Ｒ（直径７■の円盤状ンに、上記含有量にな
るように含浸させ、乾燥したもの。

このようにして本発明の分析素子（２）ｔ−製造し次。

Ｉ（ＤＬ−コレステロール官有量の異なる各種のヒトの
全血ａｓｉｔ−用意し、本発明の分析素子（２）に２０
μｔずつ滴下し、３７℃で７分間インキュベーションし
た後の波長５４６ｎｍにおける反射光学濃度（Ｄｒ　）
を測定した。第６表にその結果を示す。

第３表第３表の結果から、本発明の分析素子（２）は、全血液
を試料としてその試料のＨＤＬ−コレステロール含有量
に相応した良好な発色が得られることがわかる。

〔発明の効果〕以上詳説したように、本発明の分析素子によれば、煩雑
な分画操作を必要とせず、極めて迅速簡便にＨＤＬ−分
画中の特定成分の高精度な定量分析が可能となり、実用
的に非常に有効である。

Claims

【特許請求の範囲】

１、支持体上に少なくとも一層の試薬層、及びその上方
に多孔性展開層を有し、液体試料の高比重リポタンパク
分画中の特定成分を分析するための分析素子において、
該素子が、液体試料中の高比重リポタンパクを分画する
分画剤を含有する層を有し、かつ該層が、該特定成分の
測定反応を行う層より上方に設けられていることを特徴
とする分析素子。