JP7023758B2 - 防黴性に優れた乳酸菌ならびにこれを用いた発酵液およびその製造方法 - Google Patents
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これらの提案の技術では、ある程度の防黴性が認められるものの、近年の消費期限の延長という要望に応えるためには、さらなる改良が求められているのが現状である。
<1> 培地中に防黴性物質を放出する乳酸菌であって、前記乳酸菌がラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)であり、前記防黴性物質がロイテリンおよびペプチドではないことを特徴とする乳酸菌である。
<2> 前記乳酸菌が、ラクトバチルス・ロイテリL-015株(NITE P-02599)である前記<1>に記載の乳酸菌である。
<3> 前記<1>または<2>に記載の乳酸菌を培養した培地を含有することを特徴とする防黴性を有する発酵液である。
<4> 前記<1>または<2>に記載の乳酸菌を培養することを含むことを特徴とする防黴性を有する発酵液の製造方法である。
本発明の乳酸菌は、培地中に防黴性物質を放出するラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)であり、前記防黴性物質がロイテリンおよびペプチドではない乳酸菌である。
本発明の防黴性を有する発酵液(以下、「発酵液」と称することがある。)は、本発明の乳酸菌を培養した培地を少なくとも含み、必要に応じてさらにその他の成分を含む。前記発酵液は、本発明の発酵液の製造方法により好適に製造することができる。以下、本発明の発酵液の製造方法の説明と併せて、本発明の発酵液についても説明する。
本発明の発酵液の製造方法は、本発明の乳酸菌を培養する培養工程を少なくとも含み、必要に応じてさらにその他の工程を含む。
前記培養工程は、本発明の乳酸菌を培養する限り、特に制限はなく、公知の培養方法を適宜選択することができる。
前記培養の時間としては、特に制限はなく、通常乳酸菌の培養に用いられる時間を適宜選択することができ、例えば、12~40時間とするなどが挙げられる。
前記培養の態様、乳酸菌の接種量等のその他の培養条件としても、特に制限はなく、通常乳酸菌の培養に用いられる態様、条件を適宜選択することができる。
前記その他の工程としては、本発明の効果を損なわない限り特に制限はなく、適宜選択することができ、例えば、遠心分離等により菌体残渣等を除去する除去工程、得られた発酵液を加熱殺菌する加熱殺菌工程などが挙げられる。
前記発酵液の使用方法としては、特に制限はなく、食品の種類に応じて適宜選択することができ、例えば、パン類では生地の原料に添加して用いることができる。また、前記発酵液の使用量としても、特に制限はなく、食品の種類に応じて適宜選択することができ、例えば、パン類では、用いる穀粉類に対し、例えば、0.5~20質量%とするなどが挙げられる。
出願人が保有する乳酸菌のライブラリーを用い、防黴性を有する乳酸菌のスクリーニングを以下のようにして行った。
MRS培地を0.3mLずつ分注した96ウェルプレートに乳酸菌を植菌し、30℃で1日間培養した。遠心(2,000rpm、5分間)した後、上清を捨て、50mMリン酸バッファー(2質量%グリセロール、0.5質量%炭酸カルシウム含有)0.3mLを添加し、37℃で4時間培養した。遠心(2,000rpm、5分間)した後、上清0.1mLを別のウェルに添加し、カビ液を植菌(黒カビ(IAM-2020、Aspergillus niger)、30個/50μL)し、30℃で40時間培養した。
上記培養により、黒カビの生育が遅れる乳酸菌をスクリーニングし、黒カビの菌糸が生育しない、或いは生育が遅れることが確認された以下の乳酸菌A~Dの4株が選抜された。
・ 乳酸菌A株 ・・・ ラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)L-015株
・ 乳酸菌B株 ・・・ ラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)L-011株
・ 乳酸菌C株 ・・・ ラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)L-021株
・ 乳酸菌D株 ・・・ ペディオコッカス・ペントサセウス(Pediococcus pentsaceus)Mees 1934 P-007株
試験例1で選抜された乳酸菌4株について、発酵液を製造し、製パン試験による防黴性の評価を行った。
小麦粉400gに水道水1,100gを加えよく撹拌した後ポリ容器に移し、上記乳酸菌を約107CFU/g添加し、乳酸菌Aの場合は37℃、乳酸菌B~Dの場合は30℃で20時間、インキュベーター中で静置培養した。20時間の培養後、炭酸カルシウム7.5gを加えよく撹拌した後、24%NaOHでpH6.5に調整し、乳酸菌Aの場合は37℃、乳酸菌B~Dの場合は30℃で4時間培養した。得られた発酵液を65℃で30分間加熱殺菌した。
上記で製造した発酵液を用い、中種法により食パンを製造した。配合及び工程は、以下のとおりである。なお、発酵液を用いなかった以外は同様にして製造した食パンを対照(以下、「無添加」と称することがある。)とした。
[配合]
中種 本捏
・ 小麦粉 70質量部 30質量部
・ パン品質改良剤 0.1質量部 -
・ イースト 2質量部 -
・ 砂糖 - 5質量部
・ 脱脂粉乳 - 2質量部
・ 食塩 - 2質量部
・ 発酵液 - 5質量部
・ 油脂 - 5質量部
・ 水 40質量部 30質量部
[工程]
中種 本捏
・ ミキシング L2分M2分 L2分M5分↓M4分H2分
・ 捏上温度 24℃ 27℃
・ 発酵(フロア)時間 4時間 20分
・ 分割重量 - 220g×6
・ ベンチ時間 - 17分
・ ホイロ条件 - 38℃、相対湿度85%
・ 焼成条件 - 210℃、35分
・ 放冷 - 室温、90分
なお、上記工程において、Lは低速、Mは中速、Hは高速を表し、↓は油脂の添加を表す。
得られた食パンのクラム部分に黒カビを2個/スポット植菌し、28℃で96時間保存してカビの生育を確認し、カビの生育度合いを「+」の数で評価した。具体的には、カビの生育が多いものほど「+」の数を多くした。食パンのpH、乳酸含量および酢酸含量と併せて、結果を表1に示す。
<発酵液の製造>
乳酸菌として前記A株を用い、加熱殺菌の温度を65℃又は80℃とした以外は、試験例2と同様にして発酵液を製造した。
上記で製造した発酵液を用い、試験例2と同様にして食パンを製造した。なお、発酵液を用いなかった以外は同様にして製造した食パンを対照とした。
試験例2と同様にして、食パンにおけるカビの生育度合いを評価した。食パンのpH、乳酸含量および酢酸含量と併せて、結果を表2に示す。また、保存後の食パンの状態の一例を図1に示す。
ラクトバチルス・ロイテリの中には、防黴活性に寄与するロイテリンを生産する株が存在することが報告されている。そこで、本発明における防黴活性に寄与する物質がロイテリンであるかどうかを以下のようにして検討した。また、本発明の発酵液と醸造酢との比較も併せて行った。
乳酸菌として前記A株を用いて、下記のようにして製造した発酵液について、HPLCクロマトグラフィーを用いて検討を行った。なお、検出条件は以下のとおりである。
-発酵液の製造-
小麦粉400gに水道水1,100gを加えよく撹拌した後ポリ容器に移し、乳酸菌Aを約107CFU/g添加し、37℃で20時間、インキュベーター中で静置培養した。20時間の培養後、炭酸カルシウム7.5gを加えよく撹拌した後、24%NaOHでpH6.5に調整し、150gのグリセリンを添加した後、37℃4時間培養した。得られた発酵液を65℃で30分間加熱殺菌した。
[検出条件]
・ カラム : SCR-101N(φ7.9×300mm)
・ 溶媒 : 水
・ 流速 : 0.8mL/分間、55℃
・ 検出 : 示差屈折率検出器(RID)
ロイテリンは、カビだけではなく、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)やバチルス・サブチリス(Bacillus subtilisi)にも抗菌活性を有することが報告されている。
そこで、本発明の発酵液の一例として、乳酸菌として前記A株を用いて試験例2と同様にして製造した発酵液を用いて食パンを製造し、本発明の発酵液における防黴活性成分がロイテリンであるかどうかを検討した。
なお、食パンは、以下の3種類を製造した。
(A)発酵液を用いた食パン
乳酸菌として前記A株を用いて試験例2と同様にして製造した発酵液を用い、試験例2の製パン試験と同様にして食パンを製造した。
(B)発酵液を用いなかった食パン
発酵液を用いなかった以外は、上記(A)と同様にして食パンを製造した。
(C)醸造酢を用いた食パン
発酵液を用いず、本捏において、醸造酢を1.1質量部加え、水を28質量部に変えた以外は、上記(A)と同様にして食パンを製造した。
食パンの製造において、発酵液を用いた上記(A)の場合と、発酵液を用いなかった上記(B)の場合とで、ホイロ時間を比較したところ、両者は同等であった。そのため、本発明の発酵液の酵母に対する影響は確認されず、本発明の乳酸菌が放出する防黴性物質は、ロイテリンではないと考えられた。
製造した各食パンを半分に切り、バチルス属菌を2個植菌し、密閉して30℃で保管した。保管3日目にパンを水抽出し、菌数を測定した。結果を図3に示す。
図3に示したように、本発明の発酵液を用いた上記(A)の場合はバチルス属菌の生育抑制効果は認められなかった。したがって、この結果からも、本発明の乳酸菌が放出する防黴性物質は、ロイテリンではないと考えられた。
試験例4-2で製造した各食パンに黒カビまたは青カビを2個/スポット植菌し、試験例2と同様にして、食パンにおけるカビの生育度合いを評価した。食パンのpH、乳酸含量および酢酸含量と併せて、結果を表3に示す。また、保存後の食パンの状態の一例を図4に示す。
Claims (3)
- ラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)L-015株(NITE P-02599)であることを特徴とする乳酸菌。
- 請求項1に記載の乳酸菌を培養した培地を含有することを特徴とする防黴性を有する発酵液。
- 請求項1に記載の乳酸菌を培養することを含むことを特徴とする防黴性を有する発酵液の製造方法。
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Food Control,2018,Vol.88,p.139-148,(Open Manuscript, p.1-38, Available Online Nov.30,2017) |
Int.J.Food.Microbiol.,2016,Vol.239,p.79-85 |
J.Food Protect.,2010,Vol.73,No.4,p.758-762 |
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