JP6793957B2 - 改変された全細胞触媒を用いたノンカロリー甘味料の生成 - Google Patents
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Description
配列表の紙コピー及びサイズが36,234バイトである(MICROSOFT WINDOWS(登録商標)EXPLORERで測定した場合)「32559_63_1.txt」という名前のファイルを含む配列表のコンピュータ読み取り可能な形態は、本明細書に提供され、参照により本明細書に組み込まれる。この配列表は配列番号1〜12からなる。
一態様において、本開示は、少なくとも1種類の全細胞触媒を対象とする。この態様において、少なくとも1種類の全細胞触媒は、ウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼ(UDP−グリコシルトランスフェラーゼ)及びスクロース合成酵素(SUS)を含むが、これらに限定されない少なくとも1種類の酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む形質転換宿主細胞である。適切なウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼの非限定的な例としては、UGT76G1、HV1、EUGT11、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
別の態様において、少なくとも1種類の全細胞触媒は、本明細書に記載の少なくとも1つのステビオールグリコシドを合成する方法において使用され得る。本方法は、基質を含む培地内で、少なくとも1種類の全細胞触媒をインビトロで培養することを含む。いかなる特定の理論に制限されることなく、形質転換宿主細胞内の少なくとも1つの発現カセットから生成される少なくとも1種類の酵素は、所望の少なくとも1つのステビオールグリコシドを合成するために培地内の基質を酵素的にグリコシル化する。
別の態様において、本開示は、UDP−グリコシルトランスフェラーゼをコードする第2のヌクレオチドセグメントのC末端にインフレームで挿入されたピキア細胞壁タンパク質をコードする第1のヌクレオチドセグメントを含む融合タンパク質をコードする第1のヌクレオチド配列、及びスクロース合成酵素をコードする第2のヌクレオチド配列を含む少なくとも1つのヌクレオチド配列を含有する少なくとも1つの発現カセットで形質転換されたピキア・パストリス宿主細胞を含む全細胞触媒を対象とする。形質転換されたピキア・パストリス細胞の少なくとも1つのヌクレオチド配列は発現されて、ピキア・パストリス細胞の細胞表面上に提示されるある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ及びある量の細胞内スクロース合成酵素によって特徴付けられる全細胞触媒を生成し得る。
別の態様において、本開示は、ステビオシドからレバウジオシドAを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドAを生成するのに十分な時間、ステビオシド基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはステビオシドに共有結合してレバウジオシドAを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/K4S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、レバウジオシドDからレバウジオシドMを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドMを生成するのに十分な時間、レバウジオシドD基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはレバウジオシドDに共有結合してレバウジオシドMを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/K4S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、レバウジオシドEからレバウジオシドDを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドDを生成するのに十分な時間、レバウジオシドE基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドDを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/K4S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、レバウジオシドAからレバウジオシドDを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドDを生成するのに十分な時間、レバウジオシドA基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはレバウジオシドAに共有結合してレバウジオシドDを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1−GCW61)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、ステビオシド基質からレバウジオシドEを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドEを生成するのに十分な時間、ステビオシド基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはステビオシドに共有結合してレバウジオシドEを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1−GCW61)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、ステビオシド及び/又はレバウジオシドAからレバウジオシドMを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドMを生成するのに十分な時間、ステビオシド及び/又はレバウジオシドA基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含む。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する第1の形質転換宿主細胞、及びある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1−GCW61)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する第2の形質転換宿主細胞を含む。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/K4S2株及びG/H5S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、レバウジオシドKAからレバウジオシドEを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドEを生成するのに十分な時間、レバウジオシドKA基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはレバウジオシドKAに共有結合してレバウジオシドEを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1−GCW61)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
別の態様において、本開示は、ルブソシドからレバウジオシドKAを合成するための方法を対象とする。本方法は、レバウジオシドKAを生成するのに十分な時間、ルブソシド基質を含む培地で全細胞触媒を培養することを含み、ここでグルコースはルブソシドに共有結合してレバウジオシドKAを生成し、続いて、グルコースはレバウジオシドKAに共有結合してレバウジオシドEを生成する。全細胞触媒は、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1−GCW61)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する形質転換宿主細胞である。一態様において、全細胞触媒は、ピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地は、リン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP−グルコース、UDP、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
一態様において、少なくとも1種類の全細胞触媒が提供される。この態様において、少なくとも1種類の全細胞触媒は、ウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼ(UDP−グリコシルトランスフェラーゼ又はUGT)及びスクロース合成酵素(SUS)を含むがこれらに限定されない少なくとも1種類の酵素を発現する、形質転換宿主細胞である。本明細書で以下に説明する様々な態様において、少なくとも1種類の全細胞触媒は、適当な基質と少なくとも1種類の全細胞触媒を混合することを含む、ノンカロリー甘味料を合成する方法において使用され得、少なくとも1種類の全細胞触媒によって生成される酵素は、基質及び任意の生じた中間生成物の少なくとも1つのグリコシル化反応を触媒して、所望のノンカロリー甘味料を生成する。
この態様において、形質転換宿主細胞は、各全細胞触媒により発現される少なくとも1種類の酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの発現カセットによって形質転換された任意の適切な宿主細胞であり得る。全細胞触媒への軽質変換に適する宿主細胞の非限定的な例として、細菌、酵母、糸状菌、シアノバクテリア藻類、及び植物細胞が挙げられる。
様々な態様において、少なくとも1種類の酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含有する少なくとも1つの発現カセットは、宿主細胞を全細胞触媒に形質転換するために宿主細胞中に組み込まれる。典型的には、少なくとも1つの発現カセットは、宿主細胞の種類との互換性について選択され、少なくとも1種類の酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列中のコドンは、選択された宿主細胞型内の少なくとも1種類の酵素の発現を増強するために公知の方法を用いてコドン最適化に供され得る。発現カセットの設計は、形質転換すべき宿主細胞の選択、及び所望の酵素の発現レベルなどの要因に依存する。発現カセットは、宿主細胞中に導入され、それによって、ウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼ(UDP−グリコシルトランスフェラーゼ)及びスクロース合成酵素(SUS)を含むが、これらに限定されない組み換えポリペプチド酵素を生成し得る。
様々な態様において、上記の少なくとも1種類の酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列は、全細胞触媒として用いられる形質転換宿主細胞を生成するために宿主細胞中に導入される少なくとも1つの発現カセット中に組み込まれる。任意の発現カセット、発現プラスミド、発現ベクター、又は宿主細胞中に外来遺伝物質を導入する任意の他の公知の手段は、少なくとも全細胞触媒の発現カセットとしての使用のために選択され得る。一態様において、発現カセットは、宿主細胞の種類との互換性、発現の効率、使いやすさ、及び任意の他の関連要因を含むが、これらに限定されない少なくともいくつかの要因のいずれか1以上に基づいて選択され得る。
様々な態様において、本明細書に上述した全細胞触媒を用いて、本明細書に開示される方法に従って、基質から所望のステビオールグリコシド化合物を生成することができる。図11は、一態様において、全細胞触媒を用いるステビオールグリコシド化合物の生成方法を説明するブロック図である。図11に示すように、本方法は、工程1102で、形質転換宿主細胞内で少なくとも1つのUGT酵素(UGT76G1、HV1、及び/又はEUGT11)及びSUS酵素(mbSUS1)をコードするヌクレオチド配列の発現を誘導することを含む。UGT及びSUS配列の発現は、細胞表面上に提示される複数のUGT酵素及び全細胞触媒中のある量の細胞内SUS酵素によって特徴付けられる全細胞触媒をもたらす。
開示した方法を用いて、ステビオシド基質からレバウジオシドAを合成できる。本方法は、レバウジオシドAを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をステビオシド基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応1に従ってステビオシドに共有結合されてレバウジオシドAを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスの誘導G/K4S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、レバウジオシドDからレバウジオシドMを合成できる。本方法は、レバウジオシドMを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をレバウジオシドD基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応3に従ってレバウジオシドDに共有結合されてレバウジオシドMを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスの誘導G/K4S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、レバウジオシドEからレバウジオシドDを合成できる。本方法は、レバウジオシドDを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をレバウジオシドE基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応2に従ってレバウジオシドEに共有結合されてレバウジオシドDを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスのG/K4S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、レバウジオシドAからレバウジオシドDを合成できる。本方法は、レバウジオシドDを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をレバウジオシドA基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応4に従ってレバウジオシドAに共有結合されてレバウジオシドDを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、ステビオシド基質からレバウジオシドEを合成できる。本方法は、レバウジオシドEを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をステビオシド基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応5に従ってステビオシドに共有結合されてレバウジオシドEを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、ステビオシド及び/又はレバウジオシドA基質からレバウジオシドMを合成できる。本方法は、レバウジオシドMを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT76G1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する第1の誘導細胞;並びにある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する第2の誘導細胞を含む誘導細胞をステビオシド及び/又はレバウジオシドA基質(複数可)と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応5、2及び3並びに/又は反応1、4、及び3に従って、ステビオシド及び/又はレバウジオシドAに共有結合されてレバウジオシドMを生成する。一態様において、第1の誘導細胞はピキア・パストリスのG/K4S2株であり得、第2の誘導細胞はピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、レバウジオシドKAからレバウジオシドEを合成できる。本方法は、レバウジオシドEを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をレバウジオシドKA基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応6に従ってレバウジオシドKAに共有結合されてレバウジオシドEを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
開示した方法を用いて、ルブソシド基質からレバウジオシドKA及びレバウジオシドEを合成できる。本方法は、レバウジオシドKAを生成するのに十分な時間、ある量のUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(HV1)及びある量のスクロース合成酵素(mbSUS1)を発現する誘導細胞をルブソシド基質と培養することを含み、ここでグルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応7に従ってルブソシドに共有結合されてレバウジオシドKAを生成する。さらに、グルコースは図9A、9B、9C、9D、9E、9F、9G、及び9Hの反応6に従ってレバウジオシドKAに共有結合されてレバウジオシドEを生成する。一態様において、全細胞触媒はピキア・パストリスのG/H5S2株であり得、培地はリン酸カリウム緩衝液、MgCl2、スクロース、UDP又はUDPグルコース、及びそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
以下の実施例は、本開示の様々な態様を実証する。
全細胞触媒として使用するのに適するいくつかの改変されたピキア株を生成するためのピキア・パストリス細胞の形質転換を実証するために、以下の実験を実施した。
ステビオシド基質を用いる誘導G/K4S2細胞によるレバウジオシドAの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。ピキア・パストリス株G/K4S2の単一コロニーをバッフル付きフラスコ中のBMGY培地中に接種し、培養物が2〜6のOD600(対数期増殖)に達するまで、振盪インキュベーター(250〜300rpm)で28〜30℃で増殖させた。G/K4S2細胞を遠心分離により収集し、BMMY培地中で1.0のOD600に再懸濁して、発現を誘導した。発現の誘導を維持するため24時間毎に100%メタノールを、1%メタノールの最終濃度に、BMMY培地に添加した。誘導後72時間の時点で、G/K4S2細胞を遠心分離により収集し、以下に記載するようにグリコシル化活性分析に供した。
レバウジオシドD基質を用いる誘導G/K4S2細胞によるレバウジオシドMの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/K4S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/K4S2細胞をレバウジオシドD基質のグリコシル化についてアッセイした。誘導G/K4S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、0.5mg/mlのレバウジオシドD(純度98%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系中に導入した。誘導G/K4S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
レバウジオシドE基質を用いる誘導G/K4S2細胞によるレバウジオシドDの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/K4S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/K4S2細胞をレバウジオシドE基質のグリコシル化についてアッセイした。誘導G/K4S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、3mg/mlのレバウジオシドE(95%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/K4S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
レバウジオシドA基質を用いる誘導G/H5S2細胞によるレバウジオシドDの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/H5S2中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/H5S2細胞を、基質としてレバウジオシドAを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、3mg/mlのレバウジオシドA(99%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/H5S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。比較のため、2つの追加の誘導ピキア・パストリス株:HV1配列のみを導入したH5株、及び空ベクターを導入したpHKA(対照)株について、類似したアッセイ及びHPLC分析を実行した。
ステビオシド基質を用いるG/H5S2細胞によるレバウジオシドEの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/H5S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/H5S2細胞を、基質としてステビオシドを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mmのMgCl2、3mg/mlのステビオシド(95%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/H5S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。比較のため、空ベクターを導入したpHKA(対照)株について、類似したアッセイ及びHPLC分析を実行した。
レバウジオシドA基質を用いる誘導G/K4S2細胞と誘導G/H5S2細胞の組み合わせによるレバウジオシドM及びレバウジオシドDの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/K4S2及びG/H5S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞を、基質としてレバウジオシドAを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、3mg/mlのレバウジオシドA(99%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
G/K4S2細胞及びG/H5S2細胞の異なる比での誘導G/K4S2細胞と誘導G/H5S2細胞の組み合わせによる、レバウジオシドA基質を用いるレバウジオシドM及びレバウジオシドDの酵素的生成の感受性を実証するために、以下の実験を実施した。G/H5S2:G/K4S2細胞のいくつかの比:2:1、1:1、1:2及び1:3について、実施例7の方法と類似した方法を使用して、基質としてレバウジオシドAを用いる誘導G/K4S2細胞と誘導G/H5S2細胞の組み合わせのグリコシル化活性を評価した。加えて、各G/H5S2:G/K4S2細胞比について、16時間、24時間、及び48時間の反応時間後に、この反応系から試料を抽出した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、全ての試料を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
ステビオシド基質を用いる誘導G/K4S2細胞と誘導G/H5S2細胞の組み合わせによるレバウジオシドMの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/K4S2及びG/H5S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞を、基質としてステビオシドを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、1mg/mlのステビオシド(純度95%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/K4S2細胞及び誘導G/H5S2細胞を、10及び24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
レバウジオシドKA基質を用いるG/H5S2細胞によるレバウジオシドEの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/H5S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/H5S2細胞を、基質としてレバウジオシドKAを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、1mg/mlのレバウジオシドKA(98%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/H5S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
ルブソシド基質を用いるG/H5S2細胞によるレバウジオシドKAの酵素的生成を実証するために、以下の実験を実施した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、ピキア・パストリス株G/H5S2の培養物中で発現を72時間誘導し、誘導細胞を収集した。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、誘導G/H5S2細胞を、基質としてルブソシドを用いるグリコシル化活性についてアッセイした。誘導G/H5S2細胞(60 OD)を、50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.2、3mMのMgCl2、1mg/mlのルブソシド(98%、Blue California、カリフォルニア州)、1mMのUDP又はUDPG、及び250mMのスクロースを含有する200μlのインビトロ反応系で試験した。誘導G/H5S2細胞を、24時間28〜30℃で反応系中に維持し、その後、1−ブタノールを添加することによって反応を終了させた。実施例2に記載の方法と類似した方法を使用して、この反応系から試料を抽出し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析に供した。
Claims (14)
- ステビオールグリコシドの生成のための全細胞触媒であって、細胞内に
(a)発現されるとUDP−グリコシルトランスフェラーゼ(UGT)酵素が宿主細胞の表面に付着するように提示ポリペプチドがUGT酵素に融合されている融合タンパク質をコードする少なくとも1つの第1のヌクレオチド配列であって、前記融合タンパク質は、HVI UGT(配列番号7)が細胞壁タンパク質GCW61(配列番号5)に融合されている配列番号1に記載されるHVI−GCW61融合タンパク質、または配列番号1の融合タンパク質に対して少なくとも90%の同一性を有する配列番号1の融合タンパク質の機能的変異体である、少なくとも1つの第1のヌクレオチド配列と、
(b)細胞内スクロース合成酵素(SUS)をコードする少なくとも1つの第2の配列と、
を含むように少なくとも1つの発現カセットによって形質転換された宿主細胞である、全細胞触媒。 - 前記SUSが、シロイヌナズナ由来のSUS、ヤエナリ由来のSUSおよびそれらの機能的相同体のうちの少なくとも1つを含む、請求項1に記載の全細胞触媒。
- 前記SUSが、シロイヌナズナスクロース合成酵素1;シロイヌナズナスクロース合成酵素3およびヤエナリスクロース合成酵素(mbSUS1)のうちの少なくとも1つを含む、請求項2に記載の全細胞触媒。
- 前記宿主細胞が、アルクスラ種、カンジダ種、デバリオミセス種、ハンゼヌラ種、クルイベロミセス種、ムコール種、パキソレン種、ファフィア種、ピキア種、ロドスポリジウム種、サッカロマイセス種、サッカロミコプシス種、シュワニオミセス種、トリコスポロン種、トルロプシス種、ヤロウィア種、及びチゴサッカロマイセス種からなる群より選択される酵母細胞である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の全細胞触媒。
- 前記酵母細胞が、アルクスラ・アデニニボランス、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・ボイジニイ、カンジダ・ファマータ、カンジダ・マルトーサ、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・ユティリス、カンジダ・シェハタエ、ハンゼヌラ・ポリモルファ、クリベロマイセス・マルキシアヌス、クリベロマイセス・ラクチス、パキソレン・タンノフィラス、ファフィア・ロドチーマ、ピキア・ギリエルモンデイ、ピキア・メタノリカ、ピキア・パストリス、ロドスポリジウム・トルロデス、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・セレビシエの変異体のジアスタチクス、サッカロマイセス・ブラウディ、サッカロマイセス・ピリフォルミス、サッカロマイセス・バヤヌス、サッカロミコプシス・フィブリゲラ、シュワニオミセス・カステリ、シュワニオミセス・オクシデンタリス、トリコスポロン・クタネウム、ヤロウィア・リポリティカ、及びチゴサッカロミセス・ロウキシからなる群より選択される、請求項4に記載の全細胞触媒。
- 前記宿主細胞がピキア・パストリス細胞である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の全細胞触媒。
- 前記宿主細胞が、前記第1および第2のヌクレオチド配列のそれぞれを2コピー以上含むように形質転換されている、請求項1〜6のいずれか1項に記載の全細胞触媒。
- 前記宿主細胞が、5コピーの配列番号2に記載されるHV1−GCW61コード配列及び2コピーの配列番号12に記載されるmbSUS1コード配列を含む、請求項7に記載の全細胞触媒。
- 第1の全細胞触媒と第2の全細胞触媒とを含む全細胞触媒組成物であって、
前記第1の全細胞触媒が、請求項8の全細胞触媒であり、
前記第2の全細胞触媒が、4コピーの配列番号4に記載されるUGT76G1−GCW61コード配列と2コピーの配列番号12に記載されるmbSUS1コード配列とを含む形質転換されたピキア・パストリス宿主細胞である、
全細胞触媒組成物。 - 開始ステビオールグリコシド基質から所望のステビオールグリコシドを生成する方法であって、前記開始ステビオールグリコシド基質とスクロースとUDPとUDP−グルコースとを含む培地中で請求項1〜8のいずれか1項に記載の全細胞触媒または請求項9の全細胞触媒組成物のいずれかを、前記培地中で前記開始ステビオールグリコシド基質が前記所望のステビオールグリコシドに変換されるような時間、インキュベートすることを含む、方法。
- 前記培地から前記所望のステビオールグリコシドを分離することをさらに含む、請求項10に記載の方法。
- 前記所望のステビオールグリコシドが、レバウジオシドKA、レバウジオシドA、レバウジオシドD、レバウジオシドE、レバウジオシドMおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され、
前記方法が、ルブソシド、レバウジオシドKA、ステビオシド、レバウジオシドA、レバウジオシドD、レバウジオシドEおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される開始ステビオールグリコシド基質をグリコシル化することを含む、
請求項10または11に記載の方法。 - 請求項8の全細胞触媒が以下の変換のうちの1つを実行するために使用される、請求項12に記載の方法:
(a)前記開始ステビオールグリコシド基質がレバウジオシドAであり、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドDである;
(b)前記開始ステビオールグリコシド基質がステビオシドであり、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドEである;
(c)前記開始ステビオールグリコシド基質がレバウジオシドKAであり、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドEである;
(d)前記開始ステビオールグリコシド基質がルブソシドであり、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドKAである;または
(e)前記開始ステビオールグリコシド基質がルブソシドであり、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドEである。 - 請求項9の全細胞触媒組成物が使用され、前記開始ステビオールグリコシド基質がステビオシド、レバウジオシドAまたはそれらの任意の組み合わせを含み、前記方法によって生成される前記所望のステビオールグリコシドがレバウジオシドMである、請求項12に記載の方法。
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KR102170340B1 (ko) | 2012-01-23 | 2020-10-27 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 다이테르펜 제조 |
CN102559528B (zh) * | 2012-02-09 | 2013-08-21 | 南京工业大学 | 一种产甜叶菊糖基转移酶ugt76g1的基因工程菌及其应用 |
MX352678B (es) | 2012-05-22 | 2017-12-04 | Purecircle Sdn Bhd | Glucosidos de esteviol de alta pureza. |
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JP6379112B2 (ja) | 2013-02-06 | 2018-08-22 | エヴォルヴァ エスアー.Evolva Sa. | レバウディオサイドdおよびレバウディオサイドmの改良された産生方法 |
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