JP6635940B2 - 三機能性抗原結合分子 - Google Patents
三機能性抗原結合分子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6635940B2 JP6635940B2 JP2016562499A JP2016562499A JP6635940B2 JP 6635940 B2 JP6635940 B2 JP 6635940B2 JP 2016562499 A JP2016562499 A JP 2016562499A JP 2016562499 A JP2016562499 A JP 2016562499A JP 6635940 B2 JP6635940 B2 JP 6635940B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- antigen binding
- polypeptide
- antibody variable
- binding molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 252
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 252
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 252
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 197
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 165
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 164
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 81
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 27
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 18
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 17
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 claims description 13
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 13
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 10
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 10
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 claims description 9
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 7
- 101100334515 Homo sapiens FCGR3A gene Proteins 0.000 claims description 6
- -1 IGF-1R Proteins 0.000 claims description 4
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 3
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 claims description 3
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 claims description 2
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 claims description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001098352 Homo sapiens OX-2 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000795167 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037589 OX-2 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 claims description 2
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BLFWHYXWBKKRHI-JYBILGDPSA-N plap Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BLFWHYXWBKKRHI-JYBILGDPSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 3
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 101000878602 Homo sapiens Immunoglobulin alpha Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102100038005 Immunoglobulin alpha Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N FLAG peptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001369 Heparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000971538 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000589301 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000971513 Homo sapiens Natural killer cells antigen CD94 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 101000801255 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102100021458 Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000012570 Opti-MEM I medium Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100033726 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Human genes 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/626—Diabody or triabody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Description
三重特異性抗原結合分子であって、第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドを含む三重特異性抗原結合ポリペプチド二量体であり、各ポリペプチドが相互に連結した少なくとも4つの抗体可変領域を有する三重特異性抗原結合分子を提供するが、このとき
(a)第1ポリペプチドは、例えば約12個以下のアミノ酸残基の同一ポリペプチド内の分子内対合を防止する第1リンカーによって相互に結合された第1および第2抗体可変重鎖領域(VH)ならびに第2ペプチドリンカーによって抗体可変軽鎖領域(VL)と結合された第3抗体可変重鎖領域(VH)を有する一本鎖Fv抗原結合ユニットを含み、前記第3抗体可変重鎖領域(VH)および抗体可変軽鎖領域(VL)は、第1抗原結合部位に会合することができ、第2抗体可変重鎖領域(VH)は、第3ペプチドリンカーによって一本鎖Fv抗原結合ユニットと結合されている、および
(b)第2ポリペプチドは、例えば約12個以下のアミノ酸残基の同一ポリペプチド内の分子内対合を防止する第2リンカーによって相互に連結された第1および第2抗体可変軽鎖領域(VL)ならびに第2ペプチドリンカーによって抗体可変重鎖領域(VH)と連結された第3抗体可変領域(VL)を有する一本鎖Fv抗原結合ユニットを含み、前記第3抗体可変軽鎖領域(VL)および抗体可変重鎖領域(VH)は、第2抗原結合部位に会合することができ、第2抗体可変軽鎖領域(VL)は、第3ペプチドリンカーによって一本鎖Fv抗原結合ユニットと結合されている、および
(c)第1ポリペプチドの第1および第2抗体可変重鎖領域(VH)は、二つの追加の、すなわち第3および第4抗原結合部位へ第2ポリマーの第1および第2抗体可変軽鎖領域(VL)と結合するが、他方1つの好ましい実施形態では、第1ポリペプチドの第1抗体可変重鎖領域(VH)は、第2ポリペプチドの第2抗体軽鎖領域(VL)と第3抗原結合部位へ会合し、第1ポリペプチドの第2抗体可変重鎖領域(VH)は、第2ポリペプチドの第1抗体可変軽鎖領域(VL)と第4抗原結合部位へ会合する。
(図1)本発明による三機能性、すなわち三重特異性の抗原結合ポリペプチド二量体を形成するための第1および第2ポリペプチドを示す図である。第1ポリペプチドは、次々に連結された4つの抗体可変領域VH、VL、VH、VHを有する。第1および第2VH抗体可変領域(黒色)は、同一の第1特異性を有し、同一ポリペプチド内の分子内対合を防止するために短いリンカーL3および同一ポリペプチド内の可変領域対によって第2特異性の抗原結合部位を分子内で形成できる第2リンカーL1によって連結された他の第3可変抗体領域VLおよび第4可変抗体領域VHの抗体可変領域対(白色)を有する一本鎖Fvユニットによって連結されている。異なる特異性の第2抗体可変領域VHおよび第3抗体可変領域VLは、第3リンカーL2によって連結されている。
第2ポリペプチドは、次々に連結された4つの抗体可変領域VL、VL、VL、VHを有する。第1および第2VL抗体可変領域(黒色)は、同一の第1特異性を有し、同一ポリペプチド内の分子内対合を防止するために短いリンカーL4ならびに他の第3可変抗体領域VLおよび第3特異性を有する第4可変抗体領域VHの抗体可変領域対(灰色)を有する一本鎖Fvユニットによって連結され、および同一ポリペプチド内の可変領域対によって抗原結合部位を分子内で形成できる第2リンカーL1によって連結されている。異なる特異性の第2抗体可変領域VLおよび第3抗体可変領域VLは、第3リンカーL2によって連結されている。
(図2)図1の2つのポリペプチド間の非共有会合によって形成された抗原結合ポリペプチド二量体を示す図であり、第1ポリペプチドの短いリンカーによって連結された2つの抗体可変VH領域は第2ポリペプチドの2つの対応する抗体可変VL領域と会合し、それにより同一特異性を有する2つの抗原結合部位(黒色)を形成するが、他方第2特異性は、第1ポリペプチド(白色)の一本鎖Fvユニットによって提供され、第3特異性は第2ポリペプチド(灰色)の一本鎖Fvユニットによって提供される。
(図3)腫瘍細胞の二重標的化のための三重特異性抗体である、本発明による三機能性抗原結合分子、特に三機能性抗原結合ポリペプチドを示す図である。抗体、すなわち抗原結合ポリペプチドは、腫瘍細胞上の2つの異なる標的/エピトープを標的とするように設計されており、第3機能性はエフェクター細胞に高親和性で結合する。抗原結合ポリペプチドは、4つの抗原結合部位からなるが、2つの中央抗原結合部位は腫瘍細胞上の2つの異なる抗原に結合し、2つの周辺抗原結合部位はエフェクター細胞に結合する。
DNA構築物:
ポリペプチド鎖をコードするプラスミドDNAは、DNA操作または遺伝子合成およびシーケンシングによって生成される。哺乳動物細胞の一過性または安定性トランスフェクションのための発現構築物は、真核細胞発現ベクターpCDNA5/FRT(Life Technologies製)をベースとしており、ウイルスもしくはユビキタスなプロモーターの制御下で対象の生成物遺伝子ならびに選択マーカーとしてのハイグロマイシン(Hygromycin)耐性カセットを含む。精製および分析のためには、生成物鎖は、His−タグ、FLAG−タグまたはStrepII−タグを備えて発現する。
CHO−K1チャイニーズ・ハムスター(Chinese Hamster)卵巣細胞(ATCC、CCL−61)の誘導体であるFlp−In CHO細胞(Life Technologies製)(Kao and Puck,1968)は、L−グルタミン、10%のFCSおよび100μg/mLのゼオシンが補充されたHamのF−12 Nutrient Mix中で培養する。付着性細胞は、0.25%のトリプシン−EDTAで剥離し、標準細胞培養プロトコルにしたがって継代培養する。
三重特異性候補抗体を安定性に発現する組換えFlp−In CHO細胞系は、懸濁液順応細胞のトランスフェクションによって生成する。このため、細胞は、ポリエチレンイミン(PEI)を使用して、対象のタンパク質(pcDNA5/FRT)をコードする発現プラスミド(2.5μg)およびFlpリコンビナーゼ(pOG44、Life Technologies製)でのコトランスフェクションの前日にゼオシンを含まない標準培地中に静置する。手短には、ベクターDNAおよびトランスフェクション試薬を計100μLのOptiMEM I培地(Life Technologies製)中で1:3のDNA:PEI質量比で混合し、10分間インキュベートし、その後に1mLのCHO−S−SFMII培地(Life Technologies社)中に懸濁させた2E+6のFlp−In CHO細胞に添加する。24時間のインキュベーション後、安定性にトランスフェクトした細胞の選択は、培養をCHO−S−SFMII培地中での0.1E+6生存細胞/mLに希釈し、T75の培養フラスコ中で播種した後に500μg/mLのハイグロマイシンBの添加によって開始する。Flpリコンビナーゼは、部位特異性DNA組換え法(O’ Gorman et al 1991)を通して統合FRT部位でのゲノム内へのFlp−In発現構築物の挿入を媒介する。選択中、生存性細胞密度を週2回測定し、細胞を遠心し、0.1E+6の生存性細胞/mLの最高密度で新鮮選択培地中に再懸濁させる。組み換えタンパク質生成物を安定性で発現する細胞プールは、選択のおよそ三週間後に回収し、その時点に細胞は振とうフラスコ内で標準培養培地へ移す。組換え分泌タンパク質の発現は、Criterion Stain−Free(Bio−Rad製)テクノロジーを使用する細胞培養上清のタンパク質ゲル電気泳動法によって確証する。安定性細胞プールは、50%のProFreeze(Lonza製)および7.5%のDMSOを含有する培地中に低温保存する。
組換えタンパク質は、安定性にトランスフェクトしたCHO細胞系の10日間流加回分培養中で、細胞培養上清中への分泌によって生成する。このため、対象の生成物を安定性に発現する細胞プールは、ガス透過性キャップ(Corning製)を備えるポリカーボネート製エルレンマイヤーフラスコ内の標準培養培地中で6E+5細胞/mLの出発密度で播種し、140rpmで撹拌しながら37℃および5%のCO2でインキュベートする。流加回分培養中、培地には第0日(開始日)に40mL/LのActiCHO Feed A(PAA)および4mL/LのActiCHO Feed B(PAA)を、および第3、5および7日には2倍量を補充する。細胞培養上清は、典型的には>75%の培養生存性で10日後に採取する。サンプルは、補充する前に2日毎に生成培養から収集し、細胞密度および生存性を評価する。採取日に、さらに使用する前にMillipore Express PLUS Membrane Filter(Millipore製)を使用して細胞培養上清を遠心分離および真空濾過(0.22μm)によって澄ませる(clear)。
細胞培養上清(CCS)中のタンパク質発現力価および生成物完全性は、第7日および10日(0.22μm濾過の前および後)にCriterion Stain−Freeゲルイメージングシステム(Bio−Rad製)を使用してSDS−PAGEによって分析した。生成物力価は、公知の濃度の参照タンパク質との比較によって半定量的に決定する。
Hisタグ化生成物は、Ni−NTA−および予備的サイズ排除クロマトグラフィーを含む二段階手順でCHO細胞培養上清から精製する。第一に、上清は真空濾過(0.22μm)によって澄ませ、5mMのイミダゾールへ調整し、その後に5mL/分の流量でIMAC Buffer A中で平衡化したHisTrap FFクロマトグラフィーカラム(GE Healthcare製)に装填する。その後、カラムは5CVのIMAC Buffer Aおよび10CVのIMAC Buffer AおよびIMAC Buffer B(7%)の混合物で洗浄する。Hisタグ生成物は、その後同一流量で10CVの30%のIMAC Buffer Bおよび5CVの100%のIMAC Buffer Bを用いて連続的な洗浄により溶出させる。2.5mLの溶出画分を収集し、タンパク質の含量および純度は、各画分を一次元SDS−PAGEにかけその後にCriterion Stain−Freeテクノロジー(Bio−Rad製)を使用するタンパク質の可視化を実施することによって評価する。生成物含有画分をプールし、限外濾過によって濃縮する。引き続いて、濃縮サンプルは、HiLoad 26/600 Superdex 200pg(GE Healthcare製)カラムを使用するゲルろ過によって精製し、2.5mL/分でSEC Buffer (20mMのTris−HCl、100mMのNaCl、pH7.5)中で溶出させる。分子重量マーカータンパク質(GE Healthcare製)のカラム滞留を用いて溶出体積の比較によって決定した精製生成物を含有する画分を収集してプールする。PD−10脱塩カラム(GE Healthcare製)を使用した最終バッファー交換(10mMの酢酸ナトリウム、pH5.0)の後に、サンプルは、上述のように限外濾過によって1.0〜1.5mg/mLに濃縮する。最終サンプルの純度および均質性(典型的には>90%)は、選択した事例において、上述したように還元型および非還元型SDS−PAGEの後にタンパク質のCriterion Stain−Freeゲル可視化によって、その後に特異的抗体を用いた免疫ブロッティングおよび分析的SEC各々によって評価する。精製タンパク質は、その後に使用するまで−80℃でアリコートとして保存する。
CD3×CD19×CD30三重特異性分子
抗体OKT3、HD37およびHRS3各々に由来するCD3−、CD19−およびCD30−抗体可変結合領域を含有する抗原結合ポリペプチド二量体は、実施例1によって生成する。
VH(CD3)−(G2S)2−VH(CD3)−(G2S)3−VH(CD30)−(G2S)5−VL(CD30)−HiS6(配列番号1)
VL(CD3)−(G2S)2−VL(CD3)−(G2S)3−VH(CD19)−(G2S)5VL(CD19)−FLAG(配列番号2)
VH(CD30)−(G2S)2−VH(CD19)−(G2S)2−VH(CD3)−(G2S)5−VL(CD3)−His6(配列番号3)
VL(CD19)−(G2S)2−VL(CD30)−(G2S)2−VH(CD3)−(G2S)5−VL(CD3)−FLAG(配列番号4)
三重特異性抗体によって媒介される細胞傷害活性の評価
試験手順
バッフィーコートからのPBMCの単離およびT細胞の濃縮
PBMCは、バッフィーコートから密度勾配遠心分離によって単離する。T細胞は、PBMC集団から、製造業者の取扱説明書にしたがって、手つかずのヒトT細胞の免疫磁気単離用のEasySep(商標)HUMAN T Cell Enrichment KitおよびBig Easy EasySep(商標)Magnetを使用して濃縮する。
エフェクター細胞として使用されるT細胞は、記載されたようにフローサイトメトリーによって特徴付ける。
標的細胞(MEC−1:DSMZ、カタログ番号:ACC497;NALM−6:DSMZ、カタログ番号:ACC128)は、下記に記載するように標準条件下で培養する。細胞傷害性アッセイのために、標的細胞を採取し、FCSを含まないRPMI 1640培地を用いて二回洗浄し、2×107/mLの密度へPKH67Green Fluorescent Cell Linker Mini Kit内に用意された希釈液C中に再懸濁させる。細胞懸濁液は次に、等量の二重濃縮PKH67標識溶液(例えば、250μLの希釈液C中の1μLのPKH67)と混合し、製造業者の取扱説明書にしたがってインキュベートする。染色反応を停止させる。標識した標的細胞を完全RPMI培地で洗浄した後、細胞を計数し、完全RPMI培地中で2×105/mLの密度へ再懸濁させる。
所定の抗体濃度について得られた溶解値は、Prismソフトウエア(GraphPad Prism、バージョン6.00、Windows用、GraphPad Software、米国カリフォルニア州ラ・ホーヤ)を使用するシグモイド用量応答/4パラメーターロジスティックフィット分析によって決定および分析し、EC50値および反復した溶解率の平均値およびSDを計算するために使用した。
Trispec 1およびTrispec 2は、各単一陽性細胞系と比較すると、二重陽性細胞系(CD19+およびCD30+)上でより高い細胞傷害能を示す。
Claims (12)
- 三機能性抗原結合分子であって、前記抗原結合分子は、各ポリペプチドが相互に連結した4つの抗体可変領域を有する、第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドを含む抗原結合ポリペプチド二量体であり、
(a)前記第1ポリペプチドは、約12個以下のアミノ酸残基のリンカーによって相互に連結された第1および第2抗体可変重鎖領域(VH)、ならびに、抗体可変軽鎖領域(VL)と連結された第3抗体可変重鎖領域(VH)を有する一本鎖Fv抗原結合ユニットを含み、前記第3抗体可変重鎖領域(VH)および抗体可変軽鎖領域(VL)は、第1抗原結合部位に会合することができ、前記第1または第2抗体可変重鎖領域(VH)は、ペプチドリンカーによって前記一本鎖Fv抗原結合ユニットと連結されている、
(b)前記第2ポリペプチドは、約12個以下のアミノ酸残基のリンカーによって相互に連結された第1および第2抗体可変軽鎖領域(VL)、ならびに、抗体可変重鎖領域(VH)と連結された第3抗体可変軽鎖領域(VL)を有する一本鎖Fv抗原結合ユニットを含み、前記第3抗体可変軽鎖領域(VL)および抗体可変重鎖領域(VH)は、第2抗原結合部位に会合することができ、第1または第2抗体可変軽鎖領域は前記一本鎖Fv抗原結合ユニットとペプチドリンカーによって連結されている、
(c)前記第1ポリペプチドの前記第1抗体可変重鎖領域(VH)は、前記第2ポリペプチドの前記第2抗体可変軽鎖領域(VL)と第3抗原結合部位に対して会合する、
(d)前記第1ポリペプチドの前記第2抗体可変重鎖領域(VH)は、前記第2ポリペプチドの前記第1抗体可変軽鎖領域(VL)と第4抗原結合部位に対して会合する、
(e)前記4つの抗原結合部位のうちの2つは、同一抗原に対して特異的である、三機能性抗原結合分子。 - 2つの前記一本鎖Fv抗原結合ユニットの前記第1および第2抗原結合部位は、同一抗原に対して特異的である請求項1に記載の三機能性抗原結合分子。
- 前記第1および第2ポリペプチド間の会合によって形成された前記第3および第4抗原結合部位は、同一抗原に対して特異的である請求項1または2に記載の三機能性抗原結合分子。
- 前記同一抗原に対して特異的である前記2つの抗原結合部位は、T細胞またはナチュラルキラー(NK)細胞上に提示される抗原に対して特異的である請求項1〜3のいずれか一項に記載の三機能性抗原結合分子。
- 免疫エフェクター細胞に対する特異性は、CD3、CD16およびCD16Aからなる群から選択される請求項4に記載の三機能性抗原結合分子。
- 他の2つの結合部位は、同一細胞上の2つの異なる抗原に対して特異的である請求項4または5に記載の三機能性抗原結合分子。
- 前記細胞は、腫瘍細胞である請求項6に記載の三機能性抗原結合分子。
- 前記2つの異なる抗原は、CD19、CD20、CD26、CD29、CD30、CD33、CD200、CD267、EGFR、EGFRvIII、HER2、HER3、IGFR、IGF−1R、Ep−CAM、PLAP、トムゼン・フリーデンライヒ(Thomsen−Friedenreich:TF)抗原、MUC−1(ムチン)、CD5、IL4−Rα、IL13−R、FcεRI、IgE、gpA33、および、MHCI/ペプチド複合体からなる群から選択される、請求項7に記載の三機能性抗原結合分子。
- 第1抗原結合部位および第2抗原結合部位は、ナチュラルキラー(NK)細胞上に提示される2つの異なる抗原エピトープに対して特異的である請求項1または2に記載の三機能性抗原結合分子。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の三機能性抗原結合分子のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むベクター。
- 請求項10に記載のベクターによって形質転換された宿主細胞。
- 腫瘍療法において使用するための請求項7または8に記載の三機能性抗原結合分子。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14164523.4 | 2014-04-13 | ||
EP14164523.4A EP2930188A1 (en) | 2014-04-13 | 2014-04-13 | Trifunctional antigen-binding molecule |
PCT/EP2015/057919 WO2015158636A1 (en) | 2014-04-13 | 2015-04-12 | Trifunctional antigen-binding molecule |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017513476A JP2017513476A (ja) | 2017-06-01 |
JP2017513476A5 JP2017513476A5 (ja) | 2018-05-31 |
JP6635940B2 true JP6635940B2 (ja) | 2020-01-29 |
Family
ID=50478320
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016562499A Active JP6635940B2 (ja) | 2014-04-13 | 2015-04-12 | 三機能性抗原結合分子 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170037128A1 (ja) |
EP (2) | EP2930188A1 (ja) |
JP (1) | JP6635940B2 (ja) |
KR (1) | KR102392598B1 (ja) |
CN (1) | CN106661108A (ja) |
AU (1) | AU2015249006B2 (ja) |
BR (1) | BR112016023362A2 (ja) |
CA (1) | CA2945053A1 (ja) |
DK (1) | DK3131928T4 (ja) |
MX (1) | MX2016013218A (ja) |
RU (1) | RU2753882C2 (ja) |
SI (1) | SI3131928T2 (ja) |
WO (1) | WO2015158636A1 (ja) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113549153A (zh) | 2014-05-29 | 2021-10-26 | 宏观基因有限公司 | 三特异性结合分子和其使用方法 |
CN115057936A (zh) * | 2015-06-15 | 2022-09-16 | 努玛治疗有限公司 | 异源二聚体多特异性抗体形式 |
EP3156417A1 (en) | 2015-10-13 | 2017-04-19 | Affimed GmbH | Multivalent fv antibodies |
EP3579848A4 (en) | 2017-02-08 | 2021-03-03 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | MULTISPECIFIC BINDING PROTEINS FOR ACTIVATING NATURAL KILLER CELLS AND THEIR THERAPEUTIC USES FOR TREATING CANCER |
AU2018220736A1 (en) | 2017-02-20 | 2019-09-05 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Proteins binding HER2, NKG2D and CD16 |
WO2019035938A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Elstar Therapeutics, Inc. | MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF |
EP3713959A1 (en) * | 2017-11-21 | 2020-09-30 | Innate Pharma | Multispecific antigen binding proteins |
CN111601824A (zh) * | 2017-11-21 | 2020-08-28 | 诺华股份有限公司 | 针对肿瘤相关抗原的三特异性结合分子及其用途 |
CN112368012A (zh) | 2018-02-08 | 2021-02-12 | 蜻蜓疗法股份有限公司 | 靶向nkg2d受体的抗体可变结构域 |
KR20200132919A (ko) * | 2018-03-14 | 2020-11-25 | 아피메트 게엠베하 | 이중특이적 egfr/cd16 항원-결합 단백질 |
CN111566127A (zh) * | 2018-03-27 | 2020-08-21 | 西雅图免疫公司 | 制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法 |
EP3802609A2 (en) | 2018-05-24 | 2021-04-14 | Janssen Biotech, Inc. | Psma binding agents and uses thereof |
AU2019297451A1 (en) | 2018-07-03 | 2021-01-28 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
CA3109732A1 (en) | 2018-08-27 | 2020-03-05 | Affimed Gmbh | Cryopreserved nk cells preloaded with an antibody construct |
CN113747944A (zh) | 2019-04-19 | 2021-12-03 | 詹森生物科技公司 | 用抗psma/cd3抗体治疗***癌的方法 |
KR20220119467A (ko) | 2019-12-27 | 2022-08-29 | 아피메트 게엠베하 | 이중특이적 fcyriii x cd30 항체 작제물의 제조 방법 |
IL300314A (en) | 2020-10-08 | 2023-04-01 | Affimed Gmbh | Coupling materials with triple specificity |
EP4247850A1 (en) | 2020-11-20 | 2023-09-27 | Simcere Innovation, Inc. | Armed dual car-t compositions and methods for cancer immunotherapy |
BR112023015097A2 (pt) | 2021-01-28 | 2023-10-03 | Janssen Biotech Inc | Proteínas de ligação a psma e usos das mesmas |
BR112023020832A2 (pt) | 2021-04-08 | 2023-12-19 | Marengo Therapeutics Inc | Moléculas multifuncionais ligadas a tcr e seus usos |
AU2022320948A1 (en) | 2021-07-30 | 2024-01-18 | Affimed Gmbh | Duplexbodies |
CN114044822B (zh) * | 2021-10-28 | 2023-06-27 | 杭州博茵生物技术有限公司 | 血清淀粉样蛋白a抗体的重链和轻链可变区、抗体及运用 |
CN114316060B (zh) * | 2021-12-15 | 2023-06-13 | 北京市肿瘤防治研究所 | 抗人cd19与cd206双特异性抗体及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3720353B2 (ja) | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
UA40577C2 (uk) * | 1993-08-02 | 2001-08-15 | Мерк Патент Гмбх | Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин |
DE69731836T2 (de) * | 1996-07-23 | 2005-12-01 | Pangenetics B.V. | Induzierung von t zell toleranz unter verwendung eines löslichen moleküls, dass gleichzeitig zwei kostimulierungswege blockieren kann |
US6306393B1 (en) * | 1997-03-24 | 2001-10-23 | Immunomedics, Inc. | Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies |
ES2276735T3 (es) * | 2001-09-14 | 2007-07-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpos fv multimericos de cadena sencilla en tandem. |
KR20040091616A (ko) * | 2001-12-26 | 2004-10-28 | 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 | Vh 및 vl 도메인으로부터 멀티특이성, 다원자가제제를 제조하는 방법 |
KR101229731B1 (ko) * | 2003-10-16 | 2013-03-07 | 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 | 다중특이적 탈면역화된 cd3-바인더 |
DK1976880T3 (en) * | 2005-12-21 | 2016-09-26 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Pharmaceutical compositions with resistance to soluble cea |
SG190572A1 (en) * | 2008-04-29 | 2013-06-28 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
WO2010136172A1 (en) * | 2009-05-27 | 2010-12-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tri- or tetraspecific antibodies |
EP2332994A1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-15 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | Trispecific therapeutics against acute myeloid leukaemia |
JP6121906B2 (ja) * | 2010-10-22 | 2017-04-26 | シアトル ジェネティクス,インコーポレーテッド | アウリスタチン系抗体薬物複合体とPI3K−AKTmTOR経路インヒビターの間の相乗効果 |
-
2014
- 2014-04-13 EP EP14164523.4A patent/EP2930188A1/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-04-12 KR KR1020167030836A patent/KR102392598B1/ko active IP Right Grant
- 2015-04-12 AU AU2015249006A patent/AU2015249006B2/en active Active
- 2015-04-12 SI SI201531107T patent/SI3131928T2/sl unknown
- 2015-04-12 BR BR112016023362A patent/BR112016023362A2/pt active Search and Examination
- 2015-04-12 JP JP2016562499A patent/JP6635940B2/ja active Active
- 2015-04-12 MX MX2016013218A patent/MX2016013218A/es unknown
- 2015-04-12 CA CA2945053A patent/CA2945053A1/en active Pending
- 2015-04-12 CN CN201580019685.7A patent/CN106661108A/zh active Pending
- 2015-04-12 RU RU2016138347A patent/RU2753882C2/ru active
- 2015-04-12 WO PCT/EP2015/057919 patent/WO2015158636A1/en active Application Filing
- 2015-04-12 EP EP15719420.0A patent/EP3131928B2/en active Active
- 2015-04-12 DK DK15719420.0T patent/DK3131928T4/da active
-
2016
- 2016-10-11 US US15/290,255 patent/US20170037128A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-11-03 US US17/517,869 patent/US20220048994A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016138347A3 (ja) | 2018-12-04 |
RU2016138347A (ru) | 2018-05-14 |
DK3131928T4 (da) | 2023-05-30 |
JP2017513476A (ja) | 2017-06-01 |
RU2753882C2 (ru) | 2021-08-24 |
AU2015249006A1 (en) | 2016-10-20 |
KR20160143739A (ko) | 2016-12-14 |
DK3131928T3 (da) | 2020-02-24 |
AU2015249006B2 (en) | 2020-10-29 |
MX2016013218A (es) | 2017-05-19 |
BR112016023362A2 (pt) | 2018-03-27 |
WO2015158636A1 (en) | 2015-10-22 |
SI3131928T1 (sl) | 2020-04-30 |
EP2930188A1 (en) | 2015-10-14 |
KR102392598B1 (ko) | 2022-04-29 |
WO2015158636A8 (en) | 2016-11-17 |
EP3131928A1 (en) | 2017-02-22 |
CA2945053A1 (en) | 2015-10-22 |
EP3131928B2 (en) | 2023-04-05 |
US20170037128A1 (en) | 2017-02-09 |
EP3131928B1 (en) | 2019-11-20 |
US20220048994A1 (en) | 2022-02-17 |
CN106661108A (zh) | 2017-05-10 |
SI3131928T2 (sl) | 2023-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6635940B2 (ja) | 三機能性抗原結合分子 | |
JP6936497B2 (ja) | 多価Fv抗体 | |
AU2018241624B2 (en) | Improved antigen binding receptors | |
AU2012362378B2 (en) | Light chain-bridged bispecific antibody | |
KR20200026995A (ko) | 향상된 이중 특이성 폴리펩티드 분자 | |
JP2019500032A (ja) | 二重特異性タンパク質複合体を用いる方法 | |
KR102316091B1 (ko) | Bcma를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도 | |
WO2019156566A1 (en) | Bispecific molecules comprising gamma-delta tcr and t-cell or nk cell binding domain | |
WO2020232447A1 (en) | Lockr-mediated recruitment of car t cells | |
CN114127112A (zh) | 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途 | |
RU2785766C9 (ru) | Мультивалентные fv-антитела | |
RU2785766C2 (ru) | Мультивалентные fv-антитела | |
WO2023078431A1 (zh) | 一种特异性结合间皮素的合成t细胞受体抗原受体及其应用 | |
WO2023010068A2 (en) | Multiprotein-engineered cells secreting a multispecific antibody | |
AU2022215561A1 (en) | Self-polarizing immune cells | |
CA3210650A1 (en) | Bispecific antibodies enhancing cell mediated immune responses |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180412 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180412 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190402 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190701 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190902 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191002 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20191203 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20191217 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6635940 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |