CN114127112A

CN114127112A - 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途

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Publication number: CN114127112A
Application number: CN202080030461.7A
Authority: CN
Inventors: A·洛; 谭申来; 乔纳森·徐; B·E·瓦什; 斯蒂芬妮·J·马奥科; 尼迪·马尔霍特拉; 马丹·卡特拉加达
Original assignee: Marengo Treatment Co
Current assignee: Marengo Treatment Co
Priority date: 2019-02-21
Filing date: 2020-02-21
Publication date: 2022-03-01
Also published as: AU2020224680A1; CA3130628A1; US20210380691A1; GB2599227A; WO2020172598A1; SG11202109033XA; EP3927745A1; GB2599227B; GB202112702D0; JP2022522662A

Abstract

多功能分子，其包含i)与TCR可变β链(TCRBV)抗原结合的抗原结合域；以及以下各项中的一种、两种或全部：(ii)免疫细胞衔接物(例如，选自NK细胞衔接物、T细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)；(iii)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；和/或(iv)死亡受体信号增强剂。此外，还公开了编码该多功能分子的核酸、产生前述分子的方法，以及利用前述分子治疗自身免疫性疾病的方法。

Description

与T细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途

相关申请

本申请要求2019年2月21日提交的美国临时申请62/808,713以及2020年1月3日提交的美国临时申请62/957,045的优先权，每件所述美国临时申请的全部内容通过援引并入。

序列表

本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表，并通过引用将其全部内容并入本文。所述ASCII副本创建于2020年2月19日，被命名为E2070-7024WO_SL.txt，大小为1,519,578字节。

背景技术

T细胞介导的抗原识别取决于T细胞受体(TCR)与抗原-主要组织相容性复合体(MHC)的相互作用。异源二聚体TCR由通过大部分T细胞表达的α和β链的组合(αβTCR)或者仅存在于约1-5％的T细胞中的γδ链(γδTCR)组成。高度多样性的TCR库是有效的免疫***的基本性质。但是，免疫库可能随着疾病例如癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病和感染性疾病的发病和进程而大幅改变。

自身免疫可能起因于免疫***的异常调节。这可以体现在攻击患者自身细胞的自身反应性TCR克隆。需要用于自身免疫性疾病的改进疗法。

发明内容

本公开内容尤其涉及新颖的多特异性或多功能分子，其包含(i)与T细胞上的TCR可变β链(TCRBV)抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)结合的抗原结合域；以及以下各项中的一种、两种或全部：(ii)免疫细胞衔接物(例如，选自NK细胞衔接物、T细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)；(iii)细胞因子分子；和/或(iv)基质修饰部分。术语“多特异性”或“多功能”在本文中可互换使用。

不希望受限于理论，TCR偏性可能存在于自身免疫性疾病中。此偏性可能与引起疾病的显性自身反应性TCR克隆相关，或与症状相关。重新平衡TCR库(例如，通过消除或耗尽包括自身反应性克隆型的T细胞)可以治疗相关的自身免疫性疾病并且/或者减轻自身免疫性疾病的症状。因此，本文公开的多特异性或多功能分子预期会将免疫细胞(例如，选自NK细胞、T细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞的免疫效应细胞)靶向(例如，定位、桥连和/或激活)靶细胞(例如，包括偏性TCRBV克隆型的T细胞或包括对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的T细胞)。使用本文所述的多特异性分子来增加免疫细胞的邻近度和/或活性预期会增强对靶细胞(例如，包含TCRBV例如TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的T细胞)的免疫应答，从而提供更有效的疗法(例如，更有效的自身免疫性疾病疗法)。不受限于理论，对靶细胞(例如，包括偏性TCRBV克隆型的T细胞，例如，而不是不包括偏性TCRBV克隆型的T细胞)的靶向、定位的免疫应答被认为会降低本文所述的多特异性分子的全身毒性的效果。在较低程度上靶向非自身反应性T细胞(例如，不靶向非自身反应性T细胞)的针对自身反应性T细胞群的靶向免疫应答被认为会相比于全部T细胞的全身性消融具有较少的有害效果。

因此，本文尤其提供了包含前述部分的多特异性分子(例如，多特异性或多功能抗体分子)、编码所述多特异性分子的核酸、产生前述分子的方法，以及利用前述分子治疗自身免疫性疾病的方法。本文还提供了抗TCRβV抗体分子、编码所述抗TCRβV抗体分子的核酸、产生前述分子的方法，以及利用所述抗TCRβV抗体分子治疗自身免疫性疾病的方法。

进一步提供了例如在自身免疫性疾病的情形中用多特异性分子或抗TCRβV抗体分子耗尽(例如，体内耗尽)偏性TCRBV克隆型的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在患者中鉴定在TCRBV使用(例如，与自身反应性亚群相关)方面的克隆偏性，以及响应于此分析而施用靶向与偏性TCRBV克隆型对应的TCRBV抗原的多功能分子以降低例如消除所述克隆偏性并且促进例如建立正常的TCRBV分布。

因此，在一个方面，本公开内容特征在于多功能分子，其包含：(i)结合至例如选择性结合至T细胞受体可变β(TCRBV)例如TCRBV抗原的第一抗原结合域，

以及(ii)以下各项中的一种、两种或全部：

(a)选自NK细胞衔接物、T细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物的免疫细胞衔接物；

(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；和

(c)死亡受体信号衔接物。

在一些实施方案中，第一抗原结合域包括抗TCRβV抗体分子，例如，如本文所述。

在另一方面，本公开内容特征在于编码本文公开的多功能分子的核酸分子。

在另一方面，本公开内容特征在于包含本文公开的核酸分子的载体，例如，表达载体。

在另一方面，本公开内容特征在于包含本文公开的核酸分子或载体的宿主细胞。

在另一方面，本公开内容特征在于制备，例如产生本文公开的多功能分子的方法，该方法包括在合适的条件下，例如，在适合于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件下培养本文公开的宿主细胞。

在另一方面，本公开内容特征在于包含本文公开的多功能分子的药物组合物。

在另一方面，本公开内容特征在于治疗TCR偏性的方法，该方法包括向有需要的受试者施用本文公开的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述TCR偏性的量施用。

在另一方面，本公开内容特征在于治疗自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用本文公开的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述自身免疫性疾病的量施用。

在另一方面，本公开内容特征在于使用本文公开的多功能分子来鉴别需要治疗TCR偏性或(例如，与TCR偏性相关的)自身免疫性疾病的受试者的方法，该方法包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，其中：响应于确定所述受试者具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，将所述受试者鉴别为使用包含与TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者。

在另一方面，本公开内容特征在于评价需要治疗TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病的受试者的方法，该方法包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)。

在又一方面，本文公开了治疗有需要的受试者中的自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量例如治疗有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)，从而治疗所述病症。

在另一方面，本公开内容提供了耗尽患有自身免疫性病症(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的受试者中的T细胞群的方法，该方法包括使所述T细胞群与有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)接触。

在一些实施方案中，所述接触发生在体内或在体外。

在一些实施方案中，所述抗TCRβV抗体分子不是美国专利5,861,155中公开的抗体分子。

在一些实施方案中，所述抗TCRβV抗体分子以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV12结合。

在一些实施方案中，所述抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV12结合。

在一些实施方案中，所述抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01结合。

在一些实施方案中，所述抗TCRβV抗体分子包含Fc区，例如，具有效应子功能(例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC))的Fc区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，所述抗TCRβV抗体分子包含例如相比于野生型Fc区具有增强的效应子功能的Fc区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，所述抗TCRβV抗体分子包含人IgG1区或人IgG4区。

在另一方面，本公开内容特征在于编码本文公开的抗TCRβV抗体分子的核酸分子。

在另一方面，本公开内容特征在于制备，例如产生本文公开的抗TCRβV抗体分子的方法，该方法包括在合适的条件下，例如，在适合于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件下培养本文公开的宿主细胞。

在另一方面，本公开内容特征在于包含本文公开的抗TCRβV抗体分子的药物组合物。

任何前述多功能分子、核酸、载体、宿主细胞或方法的附加特征包括以下列举的实施方案中的一个或多个。

本领域技术人员将认识到，或仅通过常规实验便能够确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等同方案。这些等同方案旨在由以下列举的实施方案涵盖。

列举的实施方案

1.一种多功能分子，包含：

(i)结合至例如选择性结合至T细胞受体可变β(TCRBV)例如TCRBV抗原的第一抗原结合域，

以及

(ii)以下各项中的一种、两种或全部：

(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；和

(c)死亡受体信号衔接物。

2.实施方案1的多功能分子，其中所述TCRBV抗原对应于偏性TCRBV克隆型，所述偏性TCRBV克隆型例如存在于受试者例如患者，例如，患有自身免疫性疾病的受试者或患者中。

3.任何在前实施方案的多功能分子，其中所述多功能分子：

(i)特异性结合至TCRBV抗原例如，与本文所述的抗TCRBV抗体分子识别的表位相同或相似的表位；

(ii)显示与本文所述的抗TCRBV抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性，或两者兼有；

(iii)抑制，例如，竞争性地抑制本文所述的抗TCRBV抗体分子的结合；

(iv)与本文所述的抗TCRBV抗体分子结合相同或重叠的表位；或

(v)与本文所述的抗TCRBV抗体分子竞争结合和/或结合相同的表位。

4.实施方案3的多功能分子，其中所述抗原结合域包含选自表13或14中的一个或多个CDR、构架区、可变域、重链或轻链、或抗原结合域，或与其基本相同的序列。

5.实施方案1-4中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域特异性地结合至TCRβV6(例如，TCRβV6-5*01)。

6.实施方案5的多功能分子，其中所述抗原结合域包含来自抗体A-H.1或抗体A-H.2的或如表1A中所述的或由表1A中的核苷酸序列编码的至少一个(例如，一个、两个、三个或四个)可变区或其抗原结合片段，或与任何前述序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。

7.实施方案5或6的多功能分子，其中所述抗原结合域包含来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)，所述重链可变区包含表1A中所示的氨基酸序列或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列(或相对于表1A中所示的氨基酸序列或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变(例如，氨基酸置换或缺失)的序列)。

8.实施方案5-7中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)，所述轻链可变区包含表1A中所示的氨基酸序列或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列(或相对于表1A中所示的氨基酸序列或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变(例如，氨基酸置换或缺失)的序列)。

9.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)中的一个、两个或全部，和/或

(ii)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)中的一个、两个或全部。

10.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含SEQ ID NO:2的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:1的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。

11.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含SEQ ID NO:10的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。

12.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含SEQ ID NO:11的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。

13.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:6的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:7的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:8的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:3的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:4的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:5的HC CDR3氨基酸序列。

14.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:7的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:8的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:4的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:5的HC CDR3氨基酸序列。

15.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:51的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:52的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:53的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:45的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:46的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:47的HC CDR3氨基酸序列。

16.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:51的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:52的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:53的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:45的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:46的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:47的HC CDR3氨基酸序列。

17.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:54的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:55的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:56的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:48的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:49的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:50的HC CDR3氨基酸序列。

18.实施方案5-8中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:54的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:55的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:56的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:48的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:49的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:50的HC CDR3氨基酸序列。

19.实施方案5-18中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1B中所示，例如，SEQ IDNO:2、10或11)的轻链构架区1(VLFWR1)。

20.实施方案5-19中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1B中所示，例如，SEQ IDNO:2、10或11)的轻链构架区2(VLFWR2)。

21.实施方案5-20中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1B中所示，例如，SEQ IDNO:2、10或11)的轻链构架区3(VLFWR3)。

22.实施方案5-21中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1B中所示，例如，SEQ IDNO:2、10或11)的轻链构架区4(VLFWR4)。

23.实施方案5-22中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

24.实施方案5-22中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:10的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

25.实施方案5-22中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

26.实施方案5-25中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含构架区，例如，构架区1(VLFWR1)，所述架构区包括改变，例如，根据Kabat编号在位置10处的置换(例如，保守置换)，其中在位置10处的改变是变成苯丙氨酸，例如，丝氨酸至苯丙氨酸置换。

27.实施方案5-26中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含构架区，例如，构架区2(VLFWR2)，所述架构区包括一个或多个(例如，一个或两个)改变，例如，根据Kabat编号在选自36和46的位置处的置换(例如，保守置换)，其中在位置36处的改变是变成组氨酸，例如，酪氨酸至组氨酸置换，并且在位置46处的改变是变成丙氨酸，例如，精氨酸至丙氨酸置换。

28.实施方案5-27中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含构架区，例如，构架区3(VLFWR3)，所述架构区包括改变，例如，根据Kabat编号在位置87处的置换(例如，保守置换)，其中在位置87处的改变是变成苯丙氨酸，例如，酪氨酸至苯丙氨酸置换。

29.实施方案5-28中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含(a)构架区1(VLFWR1)，其包括在位置10处的苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号在位置10处的置换，例如，丝氨酸至苯丙氨酸置换；(b)构架区2(VLFWR2)，其包括在位置36处的组氨酸，例如，根据Kabat编号在位置36处的置换，例如，酪氨酸至组氨酸置换和在位置46处的丙氨酸，例如，根据Kabat编号在位置46处的置换，例如，精氨酸至丙氨酸置换；以及(c)构架区3(VLFWR3)，其包括在位置87处的苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号在位置87处的置换，例如，酪氨酸至苯丙氨酸置换，例如，如SEQ ID NO:10的氨基酸序列所示。

30.实施方案5-28中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含(a)构架区2(FR2)，其包括在位置36处的组氨酸，例如，根据Kabat编号在位置36处的置换，例如，酪氨酸至组氨酸置换和在位置46处的丙氨酸，例如，根据Kabat编号在位置46处的置换，例如，精氨酸至丙氨酸置换；以及(b)构架区3(FR3)，其包括在位置87处的苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号在位置87处的置换，例如，酪氨酸至苯丙氨酸置换，例如，如SEQ ID NO:11的氨基酸序列所示。

31.实施方案5-30中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1A中所示，例如，SEQ IDNO:1或9)的重链构架区1(VHFWR1)。

32.实施方案5-31中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1A中所示，例如，SEQ IDNO:1或9)的重链构架区2(VHFWR2)。

33.实施方案5-32中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1A中所示，例如，SEQ IDNO:1或9)的重链构架区3(VHFWR3)。

34.实施方案5-33中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含抗体A-H.1或抗体A-H.2(例如，如图1A中所示，例如，SEQ IDNO:1或9)的重链构架区4(VHFWR4)。

35.实施方案5-34中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的重链构架区1(VHFWR1)、重链构架区2(VHFWR2)、重链构架区3(VHFWR3)和重链构架区4(VHFWR4)。

36.实施方案5-34中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:9的重链构架区1(VHFWR1)、重链构架区2(VHFWR2)、重链构架区3(VHFWR3)和重链构架区4(VHFWR4)。

37.实施方案5-36中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变域，所述重链可变域包含构架区，例如，构架区3(VHFWR3)，所述构架区包括一个或多个(例如，一个或两个)改变，例如，根据Kabat编号在选自73和94的位置处的置换(例如，保守置换)，其中在位置73处的改变是变成苏氨酸，例如，谷氨酸至苏氨酸置换，并且在位置94处的改变是变成甘氨酸，例如，精氨酸至甘氨酸置换。

38.实施方案5-37中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变域，所述重链可变域包含构架区3(FR3)，所述构架区3在位置73处包括苏氨酸(例如，根据Kabat编号在位置73处的置换，例如，谷氨酸至苏氨酸置换)，并且在位置94处包括甘氨酸(例如，根据Kabat编号在位置94处的置换，例如，精氨酸至甘氨酸置换)，例如，如SEQ IDNO:10的氨基酸序列所示。

39.实施方案5-18中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含抗体A-H.1(例如，SEQ ID NO:9)的重链构架区1-4；以及抗体A-H.1(例如，SEQ ID NO:10或如图1A和1B中所示)的轻链构架区1-4。

40.实施方案5-18中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含抗体A-H.2(例如，SEQ ID NO:9)的重链构架区1-4；以及抗体A-H.2(例如，SEQ ID NO:11或如图1A和1B中所示)的轻链构架区1-4。

41.实施方案5-18中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VH域，所述VH域包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列、与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列、与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

42.实施方案5-18中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列、与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:11的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

43.实施方案1-4中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域特异性结合至TCRβV12(例如，TCRβV12-3*01)。

44.实施方案43的多功能分子，其中所述抗原结合域包含如表2A中所述的或由表2A中的核苷酸序列编码的至少一个(例如，一个、两个、三个或四个)可变区或其抗原结合片段，或与任何前述序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。

45.实施方案43或44的多功能分子，其中所述抗原结合域包含来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)，所述重链可变区包含表2A中所示的氨基酸序列或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列(或相对于表2A中所示的氨基酸序列或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变(例如，氨基酸置换或缺失)的序列)。

46.实施方案43-45中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)，所述轻链可变区包含表2A中所示的氨基酸序列或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列(或相对于表2A中所示的氨基酸序列或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变(例如，氨基酸置换或缺失)的序列)。

47.实施方案43-46中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)中的一个、两个或全部，和/或

(ii)SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)中的一个、两个或全部。

48.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:20的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:21的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:22的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:17的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:18的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:19的HC CDR3氨基酸序列。

49.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:20的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:21的LC CDR2氨基酸序列，和SEQ ID NO:2的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:18的HC CDR2氨基酸序列，和SEQ ID NO:19的HC CDR3氨基酸序列。

50.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:63的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:64的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:65的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:57的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:58的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:59的HC CDR3氨基酸序列。

51.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:63的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:64的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:65的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:57的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:58的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:59的HC CDR3氨基酸序列。

52.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

(i)SEQ ID NO:66的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:67的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:68的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)SEQ ID NO:60的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:61的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:62的HC CDR3氨基酸序列。

53.实施方案43-47中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

54.实施方案43-53中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(例如，如图2B中所示的，例如，SEQ ID NO:16或26-30的)轻链构架区1(VLFWR1)。

55.实施方案43-54中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(例如，如图2B中所示的，例如，SEQ ID NO:16或26-30的)轻链构架区2(VLFWR2)。

56.实施方案43-55中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(例如，如图2B中所示的，例如，SEQ ID NO:16或26-30的)轻链构架区3(VLFWR3)。

57.实施方案43-56中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(例如，如图2B中所示的，例如，SEQ ID NO:16或26-30的)轻链构架区4(VLFWR4)。

58.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:16的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

59.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:26的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

60.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

61.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:28的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

62.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:29的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

63.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:30的轻链构架区1(VLFWR1)、轻链构架区2(VLFWR2)、轻链构架区3(VLFWR3)和轻链构架区4(VLFWR4)。

64.实施方案43-57中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含构架区，例如，构架区1(VLFWR1)，所述架构区包括一个或多个(例如，一个、两个或三个)改变，例如，根据Kabat编号在选自1、2和4的位置处的置换(例如，保守置换)，其中在位置1处的改变是变成天冬氨酸，例如，丙氨酸至天冬氨酸置换，在位置2处的改变是变成天冬酰胺，例如，异亮氨酸至天冬酰胺置换，并且在位置4处的改变是变成亮氨酸，例如，蛋氨酸至亮氨酸置换。

65.实施方案43-57或64中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链可变域，所述轻链可变域包含构架区，例如，构架区3(VLFWR3)，所述架构区包括一个或多个(例如，一个、两个或三个)改变，例如，根据Kabat编号在选自66、69和71的位置处的置换(例如，保守置换)，其中在位置66处的改变是变成甘氨酸，例如，赖氨酸至甘氨酸置换，在位置69处的改变是变成天冬酰胺，例如，酪氨酸至天冬酰胺置换，并且在位置71处的改变是变成酪氨酸，例如，苯丙氨酸至酪氨酸置换。

66.实施方案43-57、64或65中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链，所述轻链包含：构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如，异亮氨酸至天冬酰胺置换；以及构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如，苏氨酸至天冬酰胺置换，和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如，苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如，如SEQ ID NO:26的氨基酸序列所示。

67.实施方案43-57、64或65中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置1处的置换(例如，丙氨酸至天冬氨酸置换)和根据Kabat编号在位置2处的置换(例如，异亮氨酸至天冬酰胺置换)的；以及(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如，苏氨酸至天冬酰胺置换，和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如，苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如，如SEQ ID NO:27的氨基酸序列所示。

68.实施方案43-57、64或65中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链，所述轻链包含(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换；以及(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:28的氨基酸序列所示。

69.实施方案43-57、64或65中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含轻链，所述轻链包含(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换；以及(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换；根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换；以及根据Kabat编号在位置71处的置换，例如丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:29的氨基酸序列所示。

70.实施方案43-69中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(例如，如图2A中所示的，例如，SEQ ID NO:15或23-25的)重链构架区1(VHFWR1)。

71.实施方案43-70中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(例如，如图2A中所示的，例如，SEQ ID NO:15或23-25的)重链构架区2(VHFWR2)。

72.实施方案43-71中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(例如，如图2A中所示的，例如，SEQ ID NO:15或23-25的)重链构架区3(VHFWR3)。

73.实施方案43-72中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(例如，如图2A中所示的，例如，SEQ ID NO:15或23-25的)重链构架区4(VHFWR4)。

74.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:23的重链构架区1(VHFWR1)、重链构架区2(VHFWR2)、重链构架区3(VHFWR3)和重链构架区4(VHFWR4)。

75.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:24的重链构架区1(VHFWR1)、重链构架区2(VHFWR2)、重链构架区3(VHFWR3)和重链构架区4(VHFWR4)。

76.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:25的重链构架区1(VHFWR1)、重链构架区2(VHFWR2)、重链构架区3(VHFWR3)和重链构架区4(VHFWR4)。

77.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:23、24或25的重链构架区1-4；所述轻链包含SEQ ID NO:26、27、28、29或30的轻链构架区1-4。

78.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VH域，所述VH域包括选自SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列中的氨基酸序列、与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或

VL域，所述VL域包括选自SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列中的氨基酸序列、与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

79.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VH域，所述VH域包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:26的氨基酸序列、与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

80.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:27的氨基酸序列、与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

81.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列、与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

82.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:29的氨基酸序列、与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

83.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VL域，所述VL域包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

84.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VH域，所述VH域包括SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

85.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

86.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

87.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

88.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

89.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

VH域，所述VH域包括SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

90.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

91.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

92.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

93.实施方案43-73中的任一项的多功能分子，其中所述抗原结合域包含：

94.实施方案1-93中的任一项的多功能分子，其中所述第一抗原结合域对包含TCRBV抗原的T细胞受体具有较高亲和力，任选地其中所述第一抗原结合域与包含TCRBV抗原的T细胞受体之间结合的K_D不超过所述第一抗原结合域与不包含TCRBV抗原的T细胞受体之间结合的K_D的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。

95.任何在前实施方案的多功能分子，其中所述第一抗原结合域与例如淋巴细胞(例如，T细胞)上的TCRBV抗原的结合不激活淋巴细胞例如T细胞。

96.任何在前实施方案的多功能分子，其中所述第一抗原结合域与例如淋巴细胞(例如，T细胞)上的TCRBV抗原的结合不显著激活淋巴细胞例如T细胞(例如，如通过T细胞增殖、T细胞激活标志物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达测量的)。

97.任何在前实施方案的多功能分子，其中相比于不包含TCRBV抗原的淋巴细胞，所述多功能分子优先地结合至包含TCRBV抗原的淋巴细胞，任选地其中所述多功能分子与包含TCRBV抗原的淋巴细胞之间的结合是所述多功能分子与不包含TCRBV抗原的淋巴细胞之间的结合的超过10倍、20倍、30倍、40或50倍。

98.实施方案1-97中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包含选自NK细胞衔接物、T细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物的免疫细胞衔接物。

99.实施方案98的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物结合至并且激活免疫细胞，例如，效应子细胞。

100.实施方案98的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物结合至但不激活免疫细胞例如，效应子细胞。

101.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物是T细胞衔接物，例如，介导与T细胞的结合和T细胞激活的T细胞衔接物，或介导与T细胞的结合但不介导T细胞激活的T细胞衔接物。

102.实施方案101的多功能分子，其中所述T细胞衔接物结合至TCRα、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2、CD3或CD226，例如，所述T细胞衔接物是抗CD3抗体分子。

103.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物是NK细胞衔接物，例如，介导与NK细胞的结合和NK细胞激活的NK细胞衔接物，或介导与NK细胞的结合但不介导NK细胞激活的NK细胞衔接物。

104.实施方案103的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物选自抗体分子，例如，抗原结合域或配体，所述抗体分子或配体结合至(例如，激活)：NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例如，CD16a、CD16b或二者)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(也称为SLAMF4或2B4)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2E或CD160，例如，所述NK细胞衔接物是结合至(例如，激活)NKp30的抗体分子或配体。

105.实施方案103的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是抗体分子，例如，抗原结合域。

106.实施方案104或105的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物能够衔接NK细胞。

107.实施方案103-106中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的抗体分子，例如，抗原结合域。

108.任何在前实施方案的多功能分子，其中所述多功能分子：(i)特异性地结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的表位，例如，与由本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子识别的表位相同或相似的表位；

(ii)表现出与本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或二者；

(iii)抑制例如竞争性抑制本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子的结合；

(iv)与本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子结合相同或重叠的表位；或者

(v)与本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子竞争结合和/或结合相同的表位。

109.实施方案103-108中的任一项的多功能分子，其中所述抗NKp30或抗NKp46抗体分子包含选自表7-10的一个或多个CDR、构架区、可变域、重链或轻链或抗原结合域，或与其基本相同的序列。

110.实施方案103-109中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是结合至NKp30的抗体分子，例如，抗原结合域。

111.实施方案103-110中的任一项的多功能分子，其中淋巴细胞，例如包含对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的淋巴细胞的溶解由NKp30介导。

112.实施方案103-111中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子当在TCRBV抗原不存在下与NK细胞一起温育时不激活NK细胞。

113.实施方案103-112中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞是表达NKp30的NK细胞并且当TCRBV抗原也存在时，所述多功能分子激活NK细胞。

114.实施方案103-113中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞不是表达NKp30的NK细胞并且TCRBV抗原也存在时，所述多功能分子不激活NK细胞。

115.实施方案103-113中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，以及

(ii)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6065的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

116.实施方案115的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列，以及

(ii)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6065的VLCDR3氨基酸序列。

117.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(1)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6003的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，和/或

(2)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6066的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6068的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

118.实施方案117的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(1)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6003的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，以及

(2)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6066的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6068的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。

119.实施方案103-118中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)VH，所述VH包含SEQ ID NO:6121的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6121具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或

(ii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:6135的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6135具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

120.实施方案103-119中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:6148或6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148或6149具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

121.实施方案103-120中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

122.实施方案103-121中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:6148或6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148或6149具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，以及轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

123.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6014的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6015的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

124.实施方案123的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6014的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。

125.实施方案124的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6123的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6123具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

126.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6018的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6019的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

127.实施方案126的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6018的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。

128.实施方案127的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6124的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6124具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

129.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6022的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6023的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

130.实施方案129的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6022的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。

131.实施方案130的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6125的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6125具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

132.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6026的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6027的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

133.实施方案132的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6026的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。

134.实施方案133的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6126的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6126具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

135.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6030的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6032的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

136.实施方案135的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6030的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。

137.实施方案136的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6127的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6127具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

138.实施方案103-116中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6035的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ IDNO:6036的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

139.实施方案138的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6035的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。

140.实施方案139的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6128的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6128具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

141.实施方案103-116或123-140中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6077的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

142.实施方案141的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6077的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。

143.实施方案142的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6137的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6137具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

144.实施方案103-116或123-140中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6081的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

145.实施方案144的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6081的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。

146.实施方案145的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6138的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6138具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

147.实施方案103-116或123-140中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6085的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

148.实施方案147的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6085的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。

149.实施方案148的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6139的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6139具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

150.实施方案103-116或123-140中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6089的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

151.实施方案150的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6089的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。

152.实施方案151的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6140的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6140具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

153.实施方案103-116或123-140中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6093的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

154.实施方案153的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6093的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。

155.实施方案154的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6141的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6141具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

156.实施方案103-114中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，以及

(ii)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

157.实施方案156的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列，以及

(ii)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。

158.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(1)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6010的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，和/或

(2)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6073的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

159.实施方案158的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(1)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6010的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，以及

(3)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6073的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。

160.实施方案103-114或156-159中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含：

(i)VH，所述VH包含SEQ ID NO:6122的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6122具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或

(ii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:6136的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6136具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

161.实施方案103-114或156-160中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:6151或6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151或6152具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

162.实施方案103-114或156-161中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

163.实施方案103-114或156-162中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:6151或6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151或6152具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，以及轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

164.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6039的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

165.实施方案164的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6039的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。

166.实施方案165的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6129的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6129具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

167.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6043的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

168.实施方案167的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6043的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。

169.实施方案168的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6130的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6130具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

170.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6047的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

171.实施方案170的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6047的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。

172.实施方案171的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6131的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6131具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

173.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6051的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

174.实施方案173的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6051的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。

175.实施方案174的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6132的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6132具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

176.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6055的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

177.实施方案176的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6055的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。

178.实施方案177的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6133的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6133具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

179.实施方案103-114、156或157中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6059的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

180.实施方案179的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6059的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。

181.实施方案180的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQID NO:6134的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6134具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

182.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6097的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

183.实施方案182的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6097的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。

184.实施方案183的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6142的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6142具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

185.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6101的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

186.实施方案185的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6101的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。

187.实施方案186的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6143的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6143具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

188.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6105的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

189.实施方案188的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6105的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。

190.实施方案189的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6144的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6144具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

191.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6109的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

192.实施方案191的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6109的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。

193.实施方案192的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6145的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6145具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

194.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6113的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

195.实施方案194的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6113的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。

196.实施方案195的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6146的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6146具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

197.实施方案103-114、156、157或164-181中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6117的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。

198.实施方案197的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6117的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。

199.实施方案198的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQID NO:6147的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6147具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

200.实施方案103-106中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是与NKp46结合的抗体分子，例如，抗原结合域。

201.实施方案200的多功能分子，其中淋巴瘤细胞的溶解由NKp46介导。

202.实施方案200或201中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子当在TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)不存在下与NK细胞一起温育时不激活NK细胞。

203.实施方案200-202中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞是表达NKp46的NK细胞并且当TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子激活NK细胞。

204.实施方案200-203中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞不是表达NKp46的NK细胞并且TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子不激活NK细胞。

205.实施方案200-204中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:6182的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6182具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

206.实施方案200-205中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:6183的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6183具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

207.200-205的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含scFV，所述scFV包含SEQID NO:6181的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6181具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

208.实施方案103-106中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是与NKG2D结合的抗体分子，例如，抗原结合域。

209.实施方案208的多功能分子，其中淋巴瘤细胞的溶解由NKG2D介导。

210.实施方案208或209中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子当在TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)不存在下与NK细胞一起温育时不激活NK细胞。

211.实施方案208-210中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞是表达NKG2D的NK细胞并且TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子激活NK细胞。

212.实施方案208-211中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞不是表达NKG2D的NK细胞并且TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子不激活NK细胞。

213.实施方案208-212中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:6176的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6176具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

214.实施方案208-213中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:6177的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6177具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

215.实施方案208-214中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含scFV，所述scFV包含SEQ ID NO:6175的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6175具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

216.实施方案208-212中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:6179的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6179具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

217.实施方案208-212或216中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:6180的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6180具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

218.实施方案208-212、216或217中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含scFV，所述scFV包含SEQ ID NO:6178的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6178具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

219.实施方案103-106中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是结合至CD16的抗体分子，例如，抗原结合域。

220.实施方案219的多功能分子，其中淋巴瘤细胞的溶解由CD16介导。

221.实施方案219或220中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子当在TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)不存在下与NK细胞一起温育时不激活NK细胞。

222.实施方案219-221中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞是表达CD16的NK细胞并且TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子激活NK细胞。

223.实施方案219-222中的任一项的多功能分子，其中当NK细胞不是表达CD16的NK细胞并且TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)也存在时，所述多功能分子不激活NK细胞。

224.实施方案219-223中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:6185的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6185具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

225.实施方案219-224中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:6186的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6186具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

226.实施方案219-225中的任一项的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包含scFV，所述scFV包含SEQ ID NO:6184的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6184具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

227.实施方案103的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是配体，任选地，所述配体进一步包含免疫球蛋白恒定区，例如，Fc区。

228.实施方案227的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是NKp44或NKp46的配体，例如，病毒HA。

229.实施方案227的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是DAP10的配体，例如，NKG2D的共受体。

230.实施方案227的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物是CD16的配体，例如，CD16a/b配体，例如，CD16a/b配体进一步包含抗体Fc区。

231.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物介导与B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一种或多种的结合，或介导B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一种或多种的激活，或者二者兼有。

232.实施方案231的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物包括B细胞衔接物、巨噬细胞衔接物和/或树突细胞衔接物，其选自以下各项中的一种或多种：CD40配体(CD40L)或CD70配体；与CD40或CD70结合的抗体分子；针对OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体的激动剂(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；41BB；CD2激动剂；CD47；或STING激动剂，或它们的组合。

233.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物是B细胞衔接物，例如，CD40L、OX40L或CD70配体，或与OX40、CD40或CD70结合的抗体分子。

234.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物是巨噬细胞衔接物，例如，CD2激动剂；CD40L；OX40L；与OX40、CD40或CD70结合的抗体分子；Toll样受体(TLR)的激动剂(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；CD47；或STING激动剂。

235.实施方案98-100中的任一项的多功能分子，其中所述免疫细胞衔接物是树突细胞衔接物，例如，CD2激动剂、OX40抗体、OX40L、41BB激动剂、Toll样受体激动剂或其片段(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4))、CD47激动剂或STING激动剂。

236.实施方案234或235的多功能分子，其中所述STING激动剂包括环二核苷酸，例如，环二GMP(cdGMP)、环二AMP(cdAMP)或其组合，任选地具有2’,5’或3’,5’磷酸酯键，例如，其中所述STING激动剂共价偶联至所述多功能分子。

237.实施方案1-97中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包含细胞因子分子。

238.实施方案237的多功能分子，其中所述细胞因子分子选自白介素-2(IL-2)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)或干扰素γ，或其片段或变体，或任何上述细胞因子的组合。

239.实施方案237或238的多功能分子，其中所述细胞因子分子是单体或二聚体。

240.实施方案237-239中的任一项的多功能分子，其中所述细胞因子分子进一步包括受体二聚化域，例如，IL15Rα二聚化域。

241.实施方案240的多功能分子，其中所述细胞因子分子(例如，IL-15)和所述受体二聚化域(例如，IL15Rα二聚化域)不是共价连接的，例如，是非共价缔合的。

242.实施方案1-97中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包含细胞因子抑制剂分子。

243.实施方案242的多功能分子，其中所述细胞因子抑制剂分子是TGF-β抑制剂。

244.实施方案242或243的多功能分子，其中所述TGF-β抑制剂抑制(例如，降低以下各项的活性)：(i)TGF-β1；(ii)TGF-β2；(iii)TGF-β3；(iv)(i)和(ii)；(v)(i)和(iii)；(vi)(ii)和(iii)；或(vii)(i)、(ii)和(iii)。

245.实施方案242-244中的任一项的多功能分子，其中所述TGF-β抑制剂包含TGF-β受体的能够抑制TGF-β(例如，降低其活性)的部分(例如，TGF-β受体的胞外域)，或其功能片段或变体。

246.实施方案245的多功能分子，其中所述TGF-β抑制剂包含(i)TGFBR1；(ii)TGFBR2；(iii)TGFBR3；(iv)(i)和(ii)；(v)(i)和(iii)；(vi)(ii)和(iii)；或(vii)(i)、(ii)和(iii)的部分。

247.实施方案242-246中的任一项的多功能分子，其中所述TGF-β抑制剂包含选自表16的氨基酸序列，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

248.实施方案1-97中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包含死亡受体信号衔接物，所述死亡受体信号衔接物选自TNF-相关的凋亡诱导配体(TRAIL)分子、死亡受体分子，或与死亡受体特异性结合的抗原结合域。

249.实施方案248的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物激活包含TCRBV抗原的淋巴细胞(例如，T细胞)中的死亡受体信号传导，例如，并且诱导所述细胞中的凋亡或细胞死亡。

250.实施方案248或249的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物不激活除了包含TCRBV抗原的淋巴细胞之外的其他细胞上的死亡受体信号传导。

251.实施方案248-250中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含TRAIL分子，例如，一种或多种TRAIL多肽或其片段。

252.实施方案251的多功能分子，其中所述TRAIL分子特异性结合至死亡受体4(DR4)或死亡受体5(DR5)。

253.实施方案251或252的多功能分子，其中所述TRAIL分子包含例如相对于野生型TRAIL多肽截短的TRAIL多肽。

254.实施方案253的多功能分子，其中所述TRAIL分子至少包含与人TRAIL的氨基酸95-281对应的残基，例如，包含与人TRAIL的氨基酸95-281对应的残基的截短的TRAIL分子。

255.实施方案254的多功能分子，其中所述TRAIL分子包含截短的TRAIL多肽，所述截短的TRAIL多肽包含例如人TRAIL的氨基酸95-281，而不包含人TRAIL的氨基酸1-94。

256.实施方案253的多功能分子，其中所述TRAIL分子至少包含与人TRAIL的氨基酸122-281对应的残基，例如，包含与人TRAIL的氨基酸122-281对应的残基的截短的TRAIL分子。

257.实施方案256的多功能分子，其中所述TRAIL分子包含截短的TRAIL多肽，所述截短的TRAIL多肽包含例如人TRAIL的氨基酸122-281，而不包含人TRAIL的氨基酸1-121。

258.实施方案251-257中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含一个、两个或三个TRAIL分子。

259.实施方案248-250中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含与死亡受体(例如，死亡受体4(DR4)或死亡受体5(DR5))特异性结合的抗原结合域。

260.实施方案259的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含与死亡受体特异性结合的一个、两个或三个抗原结合域。

261.实施方案259或260的多功能分子，其中与死亡受体特异性结合的抗原结合域结合至DR5。

262.实施方案259-261中的任一项的多功能分子，其中与死亡受体特异性结合的抗原结合域包括替加组单抗(tigatuzumab)、曲齐妥单抗(drozitumab)或可那木单抗(conatumumab)。

263.实施方案248-262中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含选自表11的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

264.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6157的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

265.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6158的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

266.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6159的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

267.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6160的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

268.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6161的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

269.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6162的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

270.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6163的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

271.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6164的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

272.实施方案248-263中的任一项的多功能分子，其中所述死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6165的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

273.实施方案102的多功能分子，其中所述T细胞衔接物结合至TCRβ。

274.实施方案273的多功能分子，其中所述T细胞衔接物包含结合至(例如并且在一些实施方案中激活)CD3的抗原结合域(例如，抗体分子或其片段)。

275.实施方案273或274的多功能分子，其中所述T细胞衔接物不结合至包含TCRBV抗原的淋巴细胞。

276.实施方案273-275中的任一项的多功能分子，其中所述T细胞衔接物不激活包含TCRBV的淋巴细胞。

277.实施方案1-276中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包含：

(i)免疫细胞衔接物(例如，T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)和细胞因子分子，

(ii)免疫细胞衔接物(例如，T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)和细胞因子抑制剂分子，

(iii)免疫细胞衔接物(例如，T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)和死亡受体信号衔接物，

(iv)细胞因子分子和死亡受体信号衔接物，

(v)细胞因子抑制剂分子和死亡受体信号衔接物，

(vi)免疫细胞衔接物(例如，T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)、细胞因子分子和死亡受体信号衔接物，或者

(vii)免疫细胞衔接物(例如，T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)、细胞因子抑制剂分子和死亡受体信号衔接物。

278.实施方案1-277中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子包括以下构型：

A,B-[二聚化模块]-C,-D，其中：

(a)所述二聚化模块包括免疫球蛋白恒定域，例如，重链恒定域(例如，同源二聚体或异源二聚体重链恒定区，例如，Fc区)，或免疫球蛋白可变区的恒定域(例如，Fab区)；并且

(b)A、B、C和D为独立地不存在；(i)选择性结合至TCRBV抗原的抗原结合域；(ii)选自T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物的免疫细胞衔接物；(iii)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；(iv)死亡受体信号衔接物；或(v)基质修饰部分，前提是：

A、B、C和D中的至少一个、两个或三个包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且

A、B、C和D中的任何剩余项为不存在，或包含免疫细胞衔接物、细胞因子分子、细胞因子抑制剂分子、死亡受体信号衔接物或基质修饰部分之一。

279.实施方案278的多功能分子，其中：

(1)A包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且B、C或D包含免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子；

(2)A包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且B、C或D包含免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子；

(3)A包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且B、C或D包含细胞因子分子；

(4)A包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且B、C或D包含细胞因子抑制剂分子；

(5)A包含与TCRBV抗原选择性结合的抗原结合域，并且B、C或D包含死亡受体信号衔接物；

(6)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子；

(7)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子；

(8)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含细胞因子分子；

(9)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含细胞因子抑制剂分子；

(10)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含死亡受体信号衔接物；

(11)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子；

(12)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子；

(13)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含细胞因子分子；

(14)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含细胞因子抑制剂分子；

(15)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含死亡受体信号衔接物；

(16)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(17)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(18)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(19)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(20)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(21)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(22)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号衔接物；

(23)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，并且B、C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号衔接物；(24)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(25)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(26)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(27)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)基质修饰部分；

(28)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(29)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(30)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(31)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号衔接物；

(32)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，B包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号衔接物；

(33)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(34)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(35)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(36)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子分子；

(37)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)细胞因子抑制剂分子；

(38)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)免疫细胞衔接物，例如，T细胞衔接物，例如，抗CD3抗体分子，和(b)死亡受体信号衔接物；

(39)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号衔接物；

(40)A包含与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，C包含与TCRBV抗原选择性结合的第二抗原结合域，并且B或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号衔接物；或

280.实施方案278或279的多功能分子，其中所述二聚化模块包括一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，所述免疫球蛋白链恒定区包括以下一种或多种：成对的腔-突起(“杵臼结构(knob-in-a hole)”)、静电相互作用或链交换。

281.实施方案280的多功能分子，其中所述一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在选自例如人IgG1的Fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个的位置包括氨基酸置换，任选地其中所述一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包括选自以下的氨基酸置换：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)或其组合。

282.实施方案1-281中的任一项的多功能分子，进一步包含接头，例如，以下各项中的一个或多个之间的接头：抗原结合域与免疫细胞衔接物、抗原结合域与细胞因子分子、抗原结合域与基质修饰部分、免疫细胞衔接物与细胞因子分子、免疫细胞衔接物与基质修饰部分、细胞因子分子与基质修饰部分、抗原结合域与二聚化模块、免疫细胞衔接物与二聚化模块、细胞因子分子与二聚化模块、或基质修饰部分与二聚化模块。

283.实施方案282的多功能分子，其中所述接头选自：可裂解的接头、不可裂解的接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。

284.实施方案282或283的多功能分子，其中所述接头是肽接头。

285.实施方案284的多功能分子，其中所述肽接头包括Gly和Ser。

286.实施方案285的多功能分子，其中所述肽接头包括选自SEQ ID NO:7248-7251或7252-7253和77-78的氨基酸序列。

287.一种多功能分子，包含：

(i)与TCRBV抗原选择性结合的第一抗原结合域，和

(ii)NK细胞衔接物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子。

288.实施方案287的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包括抗NKp30抗体分子。

289.实施方案287的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包括抗NKp46抗体分子。

290.一种多功能分子，包含：

(i)第一抗原结合域，所述第一抗原结合域结合至，例如选择性结合至T细胞受体可变β(TCRBV)，例如，TCRBV抗原，和

(ii)死亡受体信号衔接物。

291.一种多功能分子，包含：

(ii)细胞因子抑制剂分子，例如，TGF-β抑制剂。

292.实施方案1-291中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子单价地结合至TCRBV抗原。

293.实施方案1-291中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子多价(例如，二价、三价、四价、五价、六价、七价、八价、九价或十价)地结合至TCRBV抗原。

294.实施方案2-261中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子结合至在表达TCRBV抗原的淋巴细胞上的TCRBV抗原。

295.任何在前实施方案的多功能分子，其中所述多功能分子例如经由免疫细胞衔接物而单价地结合至免疫细胞。

296.实施方案1-294中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子例如经由免疫细胞衔接物而多价(例如，二价、三价、四价、五价、六价、七价、八价、九价或十价)地结合至免疫细胞。

297.任何在前实施方案的多功能分子，进一步包含介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的重链恒定区，例如，Fc区。

298.任何在前实施方案的多功能分子，进一步包含(例如，经由C1q)介导补体依赖性细胞毒性的重链恒定区，例如，Fc区。

299.一种核酸分子，编码实施方案1-298中的任一项的多功能分子。

300.一种载体，例如，表达载体，包含实施方案299的核酸分子。

301.一种宿主细胞，包含实施方案299的核酸分子或实施方案300的载体。

302.一种制备，例如产生实施方案1-298中的任一项的多功能分子或抗体分子的方法，包括在合适的条件下，例如，在适合于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件下培养实施方案301的宿主细胞。

303.一种药物组合物，包含实施方案1-298中的任一项的多功能分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。

304.一种治疗TCR偏性的方法，包括向有需要的受试者施用实施方案1-298中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述TCR偏性的量施用。

305.一种治疗自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括向有需要的受试者施用实施方案1-298中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述自身免疫性疾病的量施用。

306.实施方案304或305的方法，进一步包括鉴别、评价或选择需要治疗的受试者，其中鉴别、评价或选择包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性或自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)。

307.实施方案306的方法，进一步包括响应于确定受试者具有TCR偏性或自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)：

任选地，选择所述受试者用多功能分子进行治疗，所述多功能分子包含与TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)结合的抗原结合域，以及

施用多功能分子，所述多功能分子包含与TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)结合的抗原结合域。

308.一种治疗TCR偏性的方法，包括：

响应于确定受试者具有TCR偏性，向有需要的受试者施用实施方案1-298中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述TCR偏性的量施用。

309.一种治疗自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括：

响应于确定受试者患有自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)，向有需要的受试者施用实施方案1-298中的任一项的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的量施用。

310.实施方案304-309中的任一项的方法，其中所述受试者具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病。

311.一种使用实施方案1-298中的任一项的多功能分子来鉴别需要治疗癌症的受试者的方法，包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，其中：响应于确定所述受试者具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，将所述受试者鉴别为使用包含与TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者，任选地，鉴别为不是使用包含不与所述TCRBV抗原结合(例如，与不同的TCRBV抗原结合)的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者。

312.实施方案311的方法，进一步包括：

响应于将所述受试者鉴别为使用包含与TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者，用(例如，向所述受试者施用)包含与TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗所述受试者。

313.一种评价需要治疗TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病的受试者的方法，包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性。

314.实施方案313的方法，进一步包含响应于所述评价，用(例如，向所述受试者施用)包含与TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗所述受试者。

315.实施方案304-314中的任一项的方法，其中所述TCR偏性与自身免疫性疾病相关。

316.实施方案315的方法，其中所述自身免疫性疾病选自Churg-Strauss综合征、结节病、***性红斑狼疮(SLE)、1型糖尿病、自身免疫性肝炎(例如，1型或2型)、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、多发性硬化、Guillain-Barre综合征和AMAN(轴突&神经元神经病)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(CIDP)、横贯性脊髓炎、Tolosa-Hunt综合征(THS)、德维克病(视神经脊髓炎)、副肿瘤性小脑变性(PCD)、Lambert-Eaton综合征、银屑病、硬皮病、CREST(钙质沉着症、雷诺现象、食道运动障碍、指端硬化和毛细血管扩张)综合征、疱疹样皮炎、皮肌炎、大疱性类天疱疮、瘢痕性类天疱疮/良性粘膜类天疱疮、妊娠性类天疱疮、类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎、复发性多软骨炎、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、血管炎、川崎病、肉芽肿并多血管炎(GPA)、白塞病(血管炎)、大动脉炎、结节性多动脉炎、显微镜下多血管炎(MPA)、白细胞破裂性血管炎、Cogan综合征、葡萄膜炎、周边葡萄膜炎(睫状体平坦部炎)、巩膜炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、克罗恩病、溃疡性结肠炎(UC)、德雷斯勒综合征、风湿热、Evans综合征、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、溶血性贫血、血小板减少性紫癜(TTP)、多肌炎、幼年型肌炎(JM)(包括幼年型皮肌炎(JDM)和幼年型多肌炎(JPM))、Sjogren综合征、眼瘢痕性类天疱疮，或桥本甲状腺炎。

317.实施方案304-316中的任一项的方法，进一步包括施用第二治疗性治疗。

318.实施方案317的方法，其中所述第二治疗性治疗包括治疗剂(例如，化学治疗剂、生物制剂、激素疗法)、放射或外科手术。

319.一种治疗有需要的受试者中的自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括向所述受试者施用有效量例如治疗有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)，从而治疗所述病症。

320.一种耗尽患有自身免疫性病症(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的受试者中的T细胞群的方法，包括使所述T细胞群与有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)接触。

321.根据实施方案320的方法，其中所述接触发生在体内或在体外。

322.根据实施方案319-321中的任一项的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子：

(i)不是美国专利5,861,155中公开的抗体分子；

(ii)以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV12结合；

(iii)以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV12结合；

(iii)以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01结合；或者

(iv)以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01结合。

323.根据实施方案319-322中的任一项的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含Fc区，例如，具有效应子功能(例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC))的Fc区。

324.实施方案323的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含例如相比于野生型Fc区具有增强的效应子功能的Fc区。

325.根据实施方案319-324中的任一项的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含人IgG1区或人IgG4区。

326.根据实施方案319或321-325中的任一项的方法，其中所述自身免疫性疾病选自Churg-Strauss综合征、结节病、***性红斑狼疮(SLE)、1型糖尿病、自身免疫性肝炎(例如，1型或2型)、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、多发性硬化、Guillain-Barre综合征和AMAN(轴突&神经元神经病)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(CIDP)、横贯性脊髓炎、Tolosa-Hunt综合征(THS)、德维克病(视神经脊髓炎)、副肿瘤性小脑变性(PCD)、Lambert-Eaton综合征、银屑病、硬皮病、CREST(钙质沉着症、雷诺现象、食道运动障碍、指端硬化和毛细血管扩张)综合征、疱疹样皮炎、皮肌炎、大疱性类天疱疮、瘢痕性类天疱疮/良性粘膜类天疱疮、妊娠性类天疱疮、类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎、复发性多软骨炎、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、血管炎、川崎病、肉芽肿并多血管炎(GPA)、白塞病(血管炎)、大动脉炎、结节性多动脉炎、显微镜下多血管炎(MPA)、白细胞破裂性血管炎、Cogan综合征、葡萄膜炎、周边葡萄膜炎(睫状体平坦部炎)、巩膜炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、克罗恩病、溃疡性结肠炎(UC)、德雷斯勒综合征、风湿热、Evans综合征、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、溶血性贫血、血小板减少性紫癜(TTP)、多肌炎、幼年型肌炎(JM)(包括幼年型皮肌炎(JDM)和幼年型多肌炎(JPM))、Sjogren综合征、眼瘢痕性类天疱疮，或桥本甲状腺炎。

327.根据实施方案319-326中的任一项的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含表1A、2A、10A、11A、12A或13A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表1A、2A、10A、11A、12A或13A中提供的HCCDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。

328.根据实施方案319-327中的任一项的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含表1A、2A、10A、11A、12A或13A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。下面描述了合适的方法和材料，但类似于或等同于本文所述方法和材料的方法和材料均可以用于本发明的实践或测试中。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以其全文并入本文。在发生冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。此外，材料、方法和示例仅是说明性的，并不意图是限制性的。

通过以下详细描述和权利要求，本发明的其他特征和优点将显而易见。

附图说明

图1A-图1B示出了源自抗体A的小鼠VH和VL构架区1、CDR1、构架区2、CDR 2、构架区3、CDR3和构架区4以其各自的人源化序列的比对。Kabat CDR以粗体示出，Chothia CDR以斜体示出，并且组合的CDR以方框示出。反向突变的构架位置用双下划线标出。图1A示出了鼠抗体A的VH序列(SEQ ID NO:1)和人源化抗体A-H的VH序列(SEQ ID NO:9)。图1B示出了鼠抗体A的VL序列(SEQ ID NO:2)和人源化抗体A-H的VL序列(SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11)。

图2A-图2B示出了源自抗体B的小鼠VH和VL构架区1、CDR1、构架区2、CDR2、构架区3、CDR3和构架区4以其各自的人源化序列的比对。Kabat CDR以粗体示出，Chothia CDR以斜体示出，组合的CDR以方框示出。反向突变的构架位置用双下划线标出。图2A示出了鼠抗体B的VH序列(SEQ ID NO:15)和人源化VH序列B-H.1A至B-H.1C(SEQ ID NO:23-25)。图2B示出了鼠抗体B的VL序列(SEQ ID NO:16)和人源化VL序列B-H.1D至B-H.1H(SEQ ID NO:26-30)。

图3描绘了TCRBV基因家族和亚家族的***树，并映射了相应的抗体。亚家族身份如下：亚家族A：TCRβV6；亚家族B：TCRβV10；亚家族C：TCRβV12；亚家族D：TCRβV5；亚家族E：TCRβV7；亚家族F：TCRβV11；亚家族G：TCRβV14；亚家族H：TCRβV16；亚家族I：TCRβV18；亚家族J：TCRβV9；亚家族K：TCRβV13；亚家族L：TCRβV4；亚家族M：TCRβV3；亚家族N：TCRβV2；亚家族O：TCRβV15；亚家族P：TCRβV30；亚家族Q：TCRβV19；亚家族R：TCRβV27；亚家族S：TCRβV28；亚家族T：TCRβV24；亚家族U：TCRβV20；亚家族V：TCRβV25；以及亚家族W：TCRβV29亚家族。亚家族成员在本文标题为“TCRβV(TCRβV)”的部分详细描述。

图4是示出NKp30抗体与NK92细胞的结合的图。将数据计算为AF747阳性群体百分比。

图5是示出通过NKp30抗体激活NK92细胞的图。使用仓鼠抗NKp30 mAb生成数据。

具体实施方式

本文公开了多功能分子(本文中也称为“多特异性分子”)，其包括多种(例如，两种或更多种)功能(或结合特异性)，包含(i)与T细胞受体可变β(TCRBV)(例如，TCRBV抗原)结合(例如选择性结合)的抗原结合域；以及(ii)以下各项中的一种、两种或全部：(a)选自T细胞衔接物、NK细胞衔接物(例如，与NKp30、NKp46、NKG2D或CD16结合的分子)、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物的免疫细胞衔接物；(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；和(c)死亡受体信号衔接物。在一些实施方案中，所述抗原结合域包含表13或14中所见的序列或序列的部分。在一些实施方案中，所述免疫细胞衔接物包含NK细胞衔接物，所述NK细胞衔接物包含表7-10中所见的序列或序列的部分。在一些实施方案中，所述抗原结合域包含表13或14中所见的序列或序列的部分，并且所述免疫细胞衔接物包含NK细胞衔接物，所述NK细胞衔接物包含表7-10中所见的序列或序列的部分。

在实施方案中，所述多特异性或多功能分子是双特异性(或双功能)分子、三特异性(或三功能)分子或四特异性(或四功能)分子。

在一些实施方案中，所述多功能分子包含与淋巴细胞例如T细胞表面上的TCRBV抗原结合的抗原结合域。在一些实施方案中，所述TCRBV抗原对应于偏性TCRBV克隆型，例如，包含所述TCRBV抗原的TCR可能在受试者(例如，患有与TCR偏性相关的自身免疫性疾病的受试者)的TCR库或淋巴细胞(例如，T细胞)池中过度表现，或者以高于其他受试者(例如，非自身免疫性疾病受试者)中的水平的水平表达。

不受限于理论，本文公开的多特异性或多功能分子预期会在(例如，在细胞表面上)表达TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的细胞(例如，淋巴细胞，例如，T细胞)存在下将免疫细胞(例如，选自NK细胞、T细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞的免疫效应细胞)定位(例如，桥连)和/或激活。使用本文所述的多特异性或多功能分子在表达TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的细胞(例如，淋巴细胞，例如，T细胞)存在下增加免疫细胞的邻近度和/或活性预期会增强对靶细胞的免疫应答，从而提供更有效的疗法(例如，通过降低偏性TCR和/或表达偏性TCR的T细胞的水平)。在另一实施方案中，用还包含细胞死亡诱导部分(例如，死亡受体信号衔接物)的多功能分子来靶向表达TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的细胞(例如，淋巴细胞，例如，T细胞)被认为会促使靶细胞的死亡(例如，通过降低偏性TCR和/或表达偏性TCR的T细胞的水平)。

不受限于理论，在一些实施方案中，据预期，通过利用对特定的TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)具有特异性而对其他或所有类型的T细胞受体无特异性的多特异性或多功能分子，普遍地增加免疫细胞趋向T细胞的邻近度和/或活性或普遍地促进T细胞的细胞死亡的有害效果可以被减轻。以此方式，使用本文公开的多特异性或多功能分子被认为可以增加免疫细胞趋向包含对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的细胞的邻近度或活性而不必普遍地增加免疫细胞趋向T细胞的邻近度和/或活性，或者促进包含对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的细胞的细胞死亡而不必普遍地增加T细胞的细胞死亡。

因此，本文尤其提供了包含前述部分的多特异性或多功能分子(例如，多特异性或多功能抗体分子)、编码所述分子的核酸、产生前述分子的方法，以及使用前述分子治疗疾病或病症例如自身免疫性疾病或TCR偏性的方法。

定义

在一些实施方案中，多功能分子包括免疫细胞衔接物。“免疫细胞衔接物”是指结合和/或激活免疫细胞(例如，参与免疫应答的细胞)的一种或多种结合特异性。在实施方案中，免疫细胞选自T细胞、NK细胞、B细胞、树突细胞和/或巨噬细胞。免疫细胞衔接物可以是抗体分子、受体分子(例如，全长受体、受体片段或其融合体(例如，受体-Fc融合体))或配体分子(例如，全长配体、配体片段或其融合体(例如，配体-Fc融合体))，其结合至免疫细胞抗原(例如，T细胞、NK细胞抗原、B细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)。在实施方案中，免疫细胞衔接物特异性结合至靶免疫细胞，例如，优先结合至靶免疫细胞。例如，当免疫细胞衔接物是抗体分子时，它以小于约10nM的解离常数结合至免疫细胞抗原(例如，T细胞抗原、NK细胞抗原、B细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)。

在一些实施方案中，多功能分子包括细胞因子分子。如本文所用，“细胞因子分子”是指细胞因子的全长、片段或变体；还包括受体结构域，例如，细胞因子受体二聚化域的细胞因子；或细胞因子受体的激动剂，例如，针对细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)，其激发天然存在的细胞因子的至少一种活性。在一些实施方案中，细胞因子分子选自白介素2(IL-2)、白介素7(IL-7)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)或干扰素γ，或其片段或变体，或任何上述细胞因子的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可以进一步包括细胞因子受体二聚化域。在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如，针对选自IL-15Ra或IL-21R的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。

如本文所用，在例如抗体分子、细胞因子分子、受体分子中使用的术语“分子”包括全长的、天然存在的分子，以及变体，例如，功能变体(例如，其截短、片段、突变(例如，基本上相似的序列)或衍生形式)，只要未修饰的(例如，天然存在的)分子的至少一种功能和/或活性得到保留。

如本文所用，术语“自身免疫性”疾病、病症或病况是指身体免疫***攻击其自身细胞或组织的疾病。自身免疫性疾病可导致自身抗体的产生，该自身抗体不适当地和/或过度地针对自体抗原或自身抗原产生。自身免疫性疾病包括但不限于心血管疾病、类风湿疾病、腺病、胃肠疾病、皮肤疾病、肝脏疾病、神经***疾病、肌肉疾病、肾脏疾病、生殖相关疾病、***疾病和全身性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病由T细胞、B细胞、先天免疫细胞(例如，巨噬细胞、嗜酸性粒细胞或天然杀伤细胞)或补体介导的通路介导。

某些术语定义如下。

如本文所用，冠词“一”和“一个”是指一个或超过一个(例如，至少一个)的冠词语法对象。当与术语“包括”一起使用时，术语“一”或“一个”的使用可以表示“一个”，但也与“一个或多个”、“至少一个”和“一个或超过一个”的含义一致。

如本文所用，“约”和“近似”通常是指在给定测量的性质或精度的情况下，所测量的量的可接受的误差程度。示例性误差程度在给定值范围的20％之内，通常在10％之内，更通常在5％之内。

如本文所用，“抗体分子”是指包括至少一个免疫球蛋白可变域序列的蛋白质，例如，免疫球蛋白链或其片段。抗体分子包括抗体(例如，全长抗体)和抗体片段。在实施方案中，抗体分子包括全长抗体的抗原结合或功能片段，或全长免疫球蛋白链。例如，全长抗体是天然存在或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的免疫球蛋白(Ig)分子(例如，IgG抗体)。在实施方案中，抗体分子是指免疫球蛋白分子的免疫活性的抗原结合部分，如抗体片段。抗体片段，例如，功能片段，是抗体的一部分，例如，Fab、Fab′、F(ab′)₂、F(ab)₂、可变片段(Fv)、域抗体(dAb)或单链可变片段(scFv)。功能性抗体片段与完整(例如，全长)抗体识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”或“功能片段”还包括由可变区组成的分离的片段(如由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段)，或重组单链多肽分子，其中轻链和重链可变区通过肽接头连接(“scFv蛋白”)。在一些实施方案中，抗体片段不包括无抗原结合活性的抗体部分，如Fc片段或单个氨基酸残基。示例性抗体分子包括全长抗体和抗体片段，例如，dAb(域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)₂片段，以及单链可变片段(scFv)。

如本文所用，“免疫球蛋白可变域序列”是指可以形成免疫球蛋白可变域的结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，或可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。

在实施方案中，抗体分子是单特异性的，例如，其包含对单个表位的结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是多特异性的，例如，其包含多个免疫球蛋白可变域序列，其中第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，而第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子。如本文所用，“双特异性抗体分子”是指对超过一个(例如，两个、三个、四个或更多个)表位和/或抗原具有特异性的抗体分子。

如本文所用，“抗原”(Ag)是指可以引起免疫应答(例如涉及某些免疫细胞的激活和/或抗体生成)的分子。包括几乎所有蛋白质或肽在内的任何大分子均可以是抗原。抗原也可以源自基因组重组体或DNA。例如，包含编码能够引发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA都编码“抗原”。在实施方案中，抗原不必仅由基因的全长核苷酸序列编码，抗原也不必由基因编码。在实施方案中，抗原可以被合成或者可以衍生自生物样品，例如组织样品，血液样品、细胞或具有其他生物学组分的流体。如本文所用，“TCRBV抗原”包括可引起免疫应答或被抗原结合域靶向的任何TCR可变β链或其部分。在一些实施方案中，偏性TCR克隆型的特性可以在于，包含该克隆型的大部分(例如所有)细胞例如在它们的表面上呈现的一种或多种TCRBV抗原。

抗体分子的“抗原结合位点”或“结合部分”是指参与抗原结合的抗体分子例如免疫球蛋白(Ig)分子的一部分。在实施方案中，抗原结合位点由重(H)链和轻(L)链的可变(V)区的氨基酸残基形成。在重链和轻链的可变区内的三个高度分歧的序列段称为高变区，位于更保守的侧翼序列段(称为“构架区”(FR))之间。FR是天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间并与其相邻的氨基酸序列。在实施方案中，在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此布置以形成抗原结合表面，其与结合抗原的三维表面互补。每一个重链和轻链中的三个高变区称为“互补决定区”或“CDR”。构架区和CDR已经在例如Kabat,E.A.，等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242和Chothia,C.等人，(1987)J.Mol.Biol.196:901-917中定义和描述。每条可变链(例如，可变重链和可变轻链)通常由三个CDR和四个FR组成，它们按以下氨基酸顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。

如本文所用，“免疫细胞”是指在免疫***中起作用以例如保护免受感染源和异物侵害的各种细胞中的任何一种。在实施方案中，该术语包括白细胞，例如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。固有的白细胞包括吞噬细胞(例如巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和天然杀伤细胞。固有白细胞通过经由接触来攻击更大的病原体或通过吞噬并杀死微生物来识别和消灭病原体，并且是激活适应性免疫应答的介质。适应性免疫***的细胞是特殊类型的白细胞，称为淋巴细胞。B细胞和T细胞是重要的淋巴细胞类型，它们来源于骨髓中的造血干细胞。B细胞参与体液免疫应答，而T细胞参与细胞介导的免疫应答。术语“免疫细胞”包括免疫效应细胞。

如本文所用，术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答，例如，促进免疫效应子应答的细胞。免疫效应细胞的实例包括但不限于T细胞(例如α/βT细胞和γ/δT细胞)、B细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T(NK T)细胞和肥大细胞。

术语“效应子功能”或“效应子应答”是指细胞的专有功能。T细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。

本发明的组合物和方法包括具有指定序列或与其基本相同或相似的序列(例如与指定序列至少80％、85％、90％、95％相同或更加相同的序列)的多肽和核酸。在氨基酸序列的上下文中，本文使用的术语“基本上相同”是指包含足够或最少数目的氨基酸残基的第一氨基酸，所述氨基酸残基与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基i)相同，或ii)具有保守置换，使得第一氨基酸序列和第二氨基酸序列可以具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，氨基酸序列含有与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的共同结构域。

在核苷酸序列的上下文中，本文使用的术语“基本上相同”是指第一核酸序列包含与第二核酸序列中的比对核苷酸相同的足够或最小数目的核苷酸，使得第一核苷酸序列和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同的结构多肽结构域或共同的功能多肽活性的多肽。例如，与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。

术语“变体”是指具有与参考氨基酸序列基本相同的氨基酸序列，或由基本相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，变体是功能变体。

术语“功能变体”是指具有与参考氨基酸序列基本相同的氨基酸序列，或由基本相同的核苷酸序列编码，并且能够具有参考氨基酸序列的一个或多个活性的多肽。

如下进行序列之间的同源性或序列同一性(这些术语在本文中可互换使用)的计算。

为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入空位，以供最佳比对，并且出于比较的目的可以忽略非同源序列)。在一个优选的实施方案中，出于比较的目的而比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，并且甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸的“同一性”等同于氨基酸酸或核酸“同源性”)。

在考虑到需要将其引入以供两个序列进行最佳比对的空位的数目和每个空位的长度的情况下，两个序列之间的同一性百分比是由该序列共享的相同位置的数目的函数。

可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定。在一个优选的实施方案中，使用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法(已结合到GCG软件包中的GAP程序中(可从http://www.gcg.com获取))，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及空位权重为16、14、12、10、8、6或4以及长度权重为1、2、3、4、5或6，来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。在又一个优选的实施方案中，使用GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，空位权重为40、50、60、70或80以及长度权重为1、2、3、4、5或6，来确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。一组特别优选的参数(除非另有说明，否则应使用的一组参数)是Blossum 62评分矩阵，其空位罚分为12，空位延伸罚分为4，移码空位罚分为5。

可以使用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS,4:11-17)的算法(已结合至ALIGN程序(2.0版)中)，使用PAM120权重残基表，空位长度罚分为12和空位罚分为4，来确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比。

本文所述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，从而例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行搜索。可以用NBLAST程序(评分＝100，字长＝12)进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以使用XBLAST程序(评分＝50，字长＝3)进行BLAST蛋白质搜索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以利用Altschul等人，(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402中描述的空位BLAST。使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用各个程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。

应当理解，本发明的分子可以具有另外的保守或非必需氨基酸置换，该置换对它们的功能没有实质性影响。

术语“氨基酸”旨在涵盖所有分子，无论是天然的还是合成的，其既包括氨基官能团又包括酸官能团并且能够被包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性的氨基酸包括天然存在的氨基酸；类似物、衍生物和同类物；具有变异侧链的氨基酸类似物；以及前述的任一种的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-或L-旋光异构体和拟肽。

“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的一种置换。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、具有β支链侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

本文可互换使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果是单链的话)是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。该术语还涵盖已被修饰的氨基酸聚合物，所述修饰是例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，例如与标记组分的缀合。多肽可以从天然来源中分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主中产生，或者可以是合成方法的产物。

术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸的聚合形式，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链的，并且如果是单链的，则可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可在聚合后进一步被修饰，例如与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸，或者是基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，其不是天然存在的，或是以非天然的方式与另一多核苷酸连接。

如本文所用，术语“分离的”是指从其来源或天然环境(例如，自然环境，如果其天然存在的话)中取出的材料。例如，存在于活体动物中的天然存在的多核苷酸或多肽是没有分离的，而是通过人为干预从天然***中的某些或全部共存物质中分离的相同多核苷酸或多肽则是分离的。这样的多核苷酸可以是载体的一部分，并且/或者这样的多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这样的载体或组合物不是其在自然界中发现的环境的一部分。

下面进一步详细描述本发明的各个方面。整个说明书中阐述了其他定义。

抗体分子

在一个实施方案中，抗体分子结合至TCRBV抗原，例如，(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)。在一些实施方案中，TCRBV抗原是例如，哺乳动物(例如人)TCRBV抗原。在一些实施方案中，抗体分子与淋巴细胞(例如，T细胞，例如，哺乳动物(例如人)淋巴细胞，例如，T细胞)上的TCRBV抗原结合。例如，抗体分子与在淋巴细胞(例如，T细胞)的表面上(例如，作为包含TCRBV的TCR的部分)表达的TCRBV抗原特异性结合。

在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子，并结合单个表位。例如，单特异性抗体分子具有多个免疫球蛋白可变域序列，每个序列结合相同的表位。

在一个实施方案中，抗体分子是多特异性或多功能抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，而所述多个中的第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同抗原，例如相同蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同的抗原上，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变域。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。

在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变域序列。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在相同的抗原上，例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一个实施方案中，第一表位和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在不同的抗原上，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段。

在一个实施方案中，抗体分子包含双抗体、单链分子以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)₂和Fv)。例如，抗体分子可以包括重(H)链可变域序列(在本文中缩写为VH))和轻(L)链可变域序列(在本文中缩写为VL)。在一个实施方案中，抗体分子包含重链和轻链或由其组成(在本文中称为半抗体)。在另一个实例中，抗体分子包括两个重(H)链可变域序列和两个轻(L)链可变域序列，从而形成两个抗原结合位点，例如Fab、Fab'、F(ab’)₂、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单可变域抗体、双抗体(Dab)(双价和双特异性)和嵌合(例如人源化)抗体，它们可以通过修饰完整抗体而产生或使用重组DNA技术从头合成。这些功能性抗体片段保留与它们各自的抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何种类的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自抗体的任何亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子的制剂可以是单克隆的或多克隆的。抗体分子也可以是人的、人源化的、CDR移植的或体外产生的抗体。抗体可以具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体还可具有选自例如κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可以与术语“抗体”互换使用。

抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)₂片段，一种包含两个在铰链区通过二硫键连接的Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH域组成的Fv片段；(v)由VH域组成的双抗体(dAb)片段；(vi)骆驼或骆驼化可变域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如Bird等人，(1988)Science 242:423-426；和Huston等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；(viii)单域抗体。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。

抗体分子包括完整分子及其功能片段。可以改变抗体分子的恒定区，例如使其突变，以修饰抗体的特性(例如，增加或减少以下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能，或补体功能)。

抗体分子也可以是单域抗体。单域抗体可以包括其互补决定区是单域多肽的一部分的抗体。实例包括但不限于重链抗体、天然不含轻链的抗体、衍生自常规4链抗体的单域抗体、工程化的抗体和并非衍生自抗体的单域支架。单域抗体可以是任何本领域的单域抗体，或任何未来的单域抗体。单域抗体可衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、人类、骆驼、美洲驼羊、鱼、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一个方面，单域抗体是天然存在的单域抗体，称为缺乏轻链的重链抗体。例如在WO 9404678中公开了这种单域抗体。为了清楚起见，这种源自天然缺乏轻链的重链抗体的可变域在本文中被称为VHH或纳米抗体，以使其与四链免疫球蛋白的常规VH区分开。这样的VHH分子可以源自在骆驼科物种(例如骆驼、美洲驼羊、单峰骆驼、羊驼和原驼)中产生的抗体。除骆驼科外，其他物种也可能产生天然缺乏轻链的重链抗体；这样的VHH在本发明的范围内。

VH和VL区可以细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，其间散布着更为保守的区，称为“构架区”(FR或FW)。

构架区和CDR的范围已通过多种方法精确地定义(参见Kabat，E.A.，等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department ofHealth and Human Services，NIH Publication No.91-3242；Chothia,C.等人，(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；和Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。通常参见，例如，抗体可变域的蛋白质序列和结构分析(Protein Sequence and StructureAnalysis of Antibody Variable Domains)。载于《抗体工程实验室手册(AntibodyEngineering Lab Manual)》(编辑：Duebel，S.和Kontermann，R.，Springer-Verlag，Heidelberg)。

如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内的赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，每个重链可变区中有三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，每个轻链可变区中有三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。

可以使用多种已知方案中的任何一种来确定给定CDR的精确氨基酸序列边界，包括Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版，美国国立卫生研究院公共卫生局(Public Health Service,National Institutes ofHealth)，Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)描述的方案。如本文所用，根据“Chothia”编号方案定义的CDR有时也称为“高变环”。

例如，在Kabat下，重链可变域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；而轻链可变域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；而VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。

每个VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，它们按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。

如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或不使用杂交瘤技术的方法(例如重组方法)制备。

抗体可以重组产生，例如通过噬菌体展示或通过组合方法产生。

用于产生抗体的噬菌体展示和组合方法在本领域中是已知的(如在例如Ladner等人，美国专利号5,223,409；Kang等人，国际公开号WO 92/18619；Dower等人，国际公开号WO91/17271；Winter等人，国际公开号WO 92/20791；Markland等人，国际公开号WO 92/15679；Breitling等人，国际公开号WO 93/01288；McCafferty等人，国际公开号WO 92/01047；Garrard等人，国际公开号WO 92/09690；Ladner等人，国际公开号WO 90/02809；Fuchs等人，(1991)Bio/Technology 9:1370-1372；Hay等人，(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse等人，(1989)Science 246:1275-1281；Griffths等人，(1993)EMBO J 12:725-734；Hawkins等人，(1992)J Mol Biol 226:889-896；Clackson等人，(1991)Nature 352:624-628；Gram等人，(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等人，(1991)Bio/Technology 9:1373-1377；Hoogenboom等人，(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；以及Barbas等人，(1991)PNAS88:7978-7982中所述，其全部内容通过引用并入本文)。

在一个实施方案中，抗体是完全人抗体(例如，在已被基因工程化以从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中制备的抗体)，或非人抗体，例如啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如猴)、骆驼的抗体。优选地，非人抗体是啮齿动物抗体(小鼠或大鼠抗体)。产生啮齿动物抗体的方法是本领域已知的。

可以使用携带人免疫球蛋白基因而非小鼠***的转基因小鼠来产生人单克隆抗体。这些用感兴趣的抗原免疫的转基因小鼠的脾细胞被用于产生杂交瘤，该杂交瘤分泌对人蛋白质的表位具有特定亲和力的人mAb(参见，例如，Wood等人，国际申请WO 91/00906，Kucherlapati等人，PCT公开WO 91/10741；Lonberg等人，国际申请WO 92/03918；Kay等人，国际申请92/03917；Lonberg,N等人，1994 Nature 368:856-859；Green,L.L.等人，1994Nature Genet.7:13-21；Morrison,S.L.等人，1994 Proc.Natl.Acad.Sci.US 81:6851-6855；Bruggeman等人，1993 Year Immunol 7:33-40；Tuaillon等人，1993 PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等人，1991 Eur J Immunol 21:1323-1326)。

抗体分子可以是在非人类生物体例如大鼠或小鼠中产生可变区或其一部分例如CDR的抗体分子。嵌合的、CDR移植的和人源化的抗体在本发明之内。在非人类生物体例如大鼠或小鼠中产生，然后例如在可变构架或恒定区中修饰以降低在人中的抗原性的抗体分子在本发明之内。

“有效人”蛋白是基本上不引起中和抗体应答，例如人抗鼠抗体(HAMA)应答的蛋白。在许多情况下，例如，如果反复施用抗体分子，例如用于治疗慢性或复发性疾病，HAMA可能会成问题。由于从血清中清除的抗体增加(参见例如Saleh等人，CancerImmunol.Immunother.,32:180-190(1990))，并且还由于潜在的***反应(参见，例如LoBuglio等人，Hybridoma,5:5117-5123(1986))，HAMA应答可能会使重复的抗体给药无效。

嵌合抗体可以通过本领域已知的重组DNA技术来产生(参见Robinson等人，国际专利公开号PCT/US86/02269；Akira等人，欧洲专利申请184,187；Taniguchi,M.，欧洲专利申请171,496；Morrison等人，欧洲专利申请173,494；Neuberger等人，国际申请WO 86/01533；Cabilly等人，美国专利号4,816,567；Cabilly等人，欧洲专利申请125,023；Better等人，(1988 Science 240:1041-1043)；Liu等人，(1987)PNAS 84:3439-3443；Liu等人，1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等人，(1987)PNAS 84:214-218；Nishimura等人，1987,Canc.Res.47:999-1005；Wood等人，(1985)Nature 314:446-449；和Shaw等人，1988,J.NatlCancer Inst.80:1553-1559)。

人源化或CDR移植的抗体将有(免疫球蛋白重链和/或轻链的)至少一个或两个，但通常所有三个受体CDR被供体CDR置换。抗体可以被非人CDR的至少一部分置换，或者仅一些CDR可以被非人CDR置换。仅需要替换与抗原结合所需的CDR数目。优选地，供体将是啮齿动物抗体，例如大鼠或小鼠抗体，而受体将是人构架或人共有构架。通常，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”，而提供构架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方案中，供体免疫球蛋白是非人的(例如啮齿动物)。受体构架是天然存在的(例如人)构架或共有构架，或与其具有约85％或更高，优选90％、95％、99％或更高的同一性的序列。

如本文所用，术语“共有序列”是指在相关序列家族中由最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker，From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft，Weinheim，Germany 1987))。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置都被该家族中该位置最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸频率均等地出现，则任何一个都可以包括在共有序列中。“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。

抗体分子可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207；Oi等人，1986,BioTechniques 4:214以及Queen等人，US 5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容通过引用并入本文)。

人源化或CDR移植的抗体分子可以通过CDR移植或CDR置换来产生，其中免疫球蛋白链的一个、两个或全部CDR可以被置换。参见，例如，美国专利5,225,539；Jones等人，1986Nature 321:552-525；Verhoeyan等人，1988 Science 239:1534；Beidler等人，1988J.Immunol.141:4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容通过引用明确并入本文。Winter描述了可用于制备本发明的人源化抗体的CDR移植方法(1987年3月26日提交的英国专利申请GB 2188638A；Winter US 5,225,539)，其内容通过引用明确并入本文。

人源化抗体分子也在本发明的范围内，其中已置换、删除或添加特定氨基酸。从供体选择氨基酸的标准描述于US 5,585,089，例如，US 5,585,089的第12-16栏，例如，US 5,585,089的第12-16栏中，其内容通过引用并入本文。用于使抗体人源化的其他技术描述于1992年12月23日公开的Padlan等人，EP 519596 A1。

抗体分子可以是单链抗体。可以对单链抗体(scFV)进行工程化(例如，参见Colcher,D.等人，(1999)Ann N Y Acad Sci 880:263-80；以及Reiter,Y.(1996)ClinCancer Res 2:245-52)。可以将单链抗体二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。

在其他实施方案中，抗体分子具有重链恒定区，所述重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(例如，人的)重链恒定区。在另一个实施方案中，抗体分子具有选自例如κ或λ的(例如，人的)轻链恒定区的轻链恒定区。恒定区可以被改变，例如突变，以修饰抗体的性质(例如，增加或减少以下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中，该抗体具有：效应子功能；并可以修复补体。在其他实施方案中，抗体不会：募集效应细胞；或修复补体。在另一个实施方案中，抗体具有降低的结合Fc受体的能力或没有结合Fc受体的能力。例如，它是不支持与Fc受体的结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如，其具有诱变或缺失的Fc受体结合区。

改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。功能改变(例如对效应子配体(例如细胞上的FcR或补体的C1成分)的亲和力改变)的抗体，可以通过用不同的残基替换抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如EP 388,151 A1，美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用并入本文)。可以描述相似类型的改变，如果其应用于鼠或其他物种，免疫球蛋白将减少或消除这些功能。

抗体分子可以被衍生或连接至另一功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生的”抗体分子是已被修饰的一种抗体分子。衍生方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体例如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体的衍生形式和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以被功能性地连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测试剂、细胞毒剂、药物试剂，和/或可介导抗体或抗体部分与另一种分子结合的蛋白质或肽(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)。

一种类型的衍生抗体分子是通过交联两种或更多种抗体(相同或不同类型，例如以产生双特异性抗体)而产生的。合适的交联剂包括异双功能的交联剂，具有两个被适当的间隔基隔开的不同的反应性基团(例如，间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)，或同双功能的交联剂(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。此类接头可从Pierce ChemicalCompany,Rockford,Ill获得。

多特异性或多功能抗体分子

全文描述了本文定义的多特异性和多功能分子的示例性结构。在以下文献中进一步描述了示例性结构：Weidle U等人，(2013)The Intriguing Options of MultispecificAntibody Formats for Treatment of Cancer,Cancer Genomics&Proteomics 10:1-18(2013)；以及Spiess C等人(2015)Alternative molecular formats and therapeuticapplications for bispecific antibodies,Molecular Immunology 67:95-106；其全部内容通过引用并入本文。

在实施方案中，多特异性抗体分子可包含超过一个的抗原结合位点，其中不同的位点对不同的抗原具有特异性。在实施方案中，多特异性抗体分子可以结合同一抗原上的超过一个(例如，两个或更多个)的表位。在实施方案中，多特异性抗体分子包含对靶细胞(例如包含对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的淋巴细胞(例如T细胞))具有特异性的抗原结合位点和对免疫效应细胞具有特异性的不同抗原结合位点。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体分子可分为五个不同的结构组：(i)双特异性免疫球蛋白G(BsIgG)；(ii)附加有额外的抗原结合部分的IgG；(iii)双特异性抗体片段；(iv)双特异性融合蛋白；以及(v)双特异性抗体缀合物。

BsIgG是对每种抗原为单价的形式。示例性的BsIgG形式包括但不限于crossMab、DAF(二合一)、DAF(四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼结构的常见LC、杵臼结构组装体、电荷对、Fab臂交换、SEEDbody、triomab、LUZ-Y、Fcab、κλ抗体、正交Fab。参见Spiess等人，Mol.Immunol.67(2015):95-106。示例性的BsIgG包括卡妥索单抗(catumaxomab)(Fresenius Biotech，Trion Pharma，Neopharm)，其包含抗CD3臂和抗EpCAM臂；以及厄马索单抗(ertumaxomab)(Neovii Biotech，Fresenius Biotech)，其靶向CD3和HER2。在一些实施方案中，BsIgG包含经工程化用于异源二聚化的重链。例如，可以使用“杵臼结构”策略、SEED平台、常见的重链(例如，在kλ抗体中)和使用异源二聚体Fc区来将重链工程化以进行异源二聚化。参见Spiess等人，Mol.Immunol.67(2015):95-106。用来避免BsIgG中同源二聚体的重链配对的策略包括杵臼结构、Duobody、azymetric、电荷对、HA-TF、SEEDbody和差异A蛋白亲和力。参见前一文献。BsIgG可以通过在不同宿主细胞中分别表达组分抗体并随后纯化/组装成BsIgG来产生。BsIgG也可以通过在单个宿主细胞中表达组分抗体来产生。可以使用亲和色谱法纯化BsIgG，例如使用A蛋白和连续的pH洗脱。

附加有额外的抗原结合部分的IgG是双特异性抗体分子的另一种形式。例如，可以通过在单特异性IgG上(例如在重链或轻链的N-末端或C-末端)附加额外的抗原结合单元，将单特异性IgG工程化为具有双特异性。示例性的额外的抗原结合单元包括单域抗体(例如，可变重链或可变轻链)、工程化的蛋白支架和成对的抗体可变域(例如，单链可变片段或可变片段)。参见前一文献。附加的IgG形式的实例包括双可变域IgG(DVD-Ig)、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、zybody和DVI-IgG(四合一)。参见Spiess等人，Mol.Immunol.67(2015):95-106。IgG-scFv的实例是MM-141(Merrimack Pharmaceuticals)，其结合IGF-1R和HER3。DVD-Ig的实例包括结合IL-1α和IL-1β的ABT-981(AbbVie)；以及结合TNF和IL-17A的ABT-122(AbbVie)。

双特异性抗体片段(BsAb)是缺乏一些或全部抗体恒定域的双特异性抗体分子的形式。例如，一些BsAb缺乏Fc区。在实施方案中，双特异性抗体片段包括通过肽接头连接的重链和轻链区，所述肽接头允许BsAb在单个宿主细胞中有效表达。示例性的双特异性抗体片段包括但不限于纳米抗体、纳米抗体-HAS、BiTE、双抗体、DART、TandAb、sc双抗体、sc双抗体-CH3、双抗体-CH3、三抗体(triple body)、微抗体、微体、TriBi微体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab’)2、F(ab’)2-scFv2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、sc双抗体-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc和细胞内抗体。参见前一文献。例如，BiTE形式包括串联scFv，其中组分scFv与T细胞上的CD3和癌细胞上的表面抗原结合。

双特异性融合蛋白包括与其他蛋白连接的抗体片段，例如，以增加额外的特异性和/或功能。双特异性融合蛋白的一个实例是immTAC，其包含与识别HLA呈递肽的亲和力成熟的T细胞受体连接的抗CD3 scFv。在实施方案中，对接锁定(dock-and-lock，DNL)方法可用于产生具有更高价态的双特异性抗体分子。而且，与白蛋白结合蛋白或人血清白蛋白的融合体可以延长抗体片段的血清半衰期。参见前一文献。

在实施方案中，化学缀合，例如抗体和/或抗体片段的化学缀合，可用于产生BsAb分子。参见前一文献。示例性的双特异性抗体缀合物包括CovX体形式，其中低分子量药物在每个Fab臂或抗体或其片段中位点特异性地缀合至单个反应性赖氨酸。在实施方案中，缀合改善了低分子量药物的血清半衰期。示例性的CovX体是CVX-241(NCT01004822)，其包含缀合至两个抑制VEGF或Ang2的短肽的抗体。参见前一文献。

可以通过在宿主***中重组表达例如至少一种或多种组分来产生抗体分子。示例性的宿主***包括真核细胞(例如哺乳动物细胞，例如CHO细胞，或昆虫细胞，例如SF9或S2细胞)和原核细胞(例如，大肠杆菌)。双特异性抗体分子可以通过组分在不同宿主细胞中的单独表达以及随后的纯化/组装来产生。或者，可以通过在单个宿主细胞中表达组分来产生抗体分子。双特异性抗体分子的纯化可以通过各种方法进行，例如亲和色谱法，例如，使用A蛋白和连续的pH洗脱。在其他实施方案中，亲和标签可以用于纯化，例如含组氨酸的标签、myc标签或链霉亲和素标签。

CDR移植的支架

在实施方案中，抗体分子是CDR移植的支架结构域。在实施方案中，支架结构域基于纤连蛋白结构域，例如纤连蛋白III型结构域。纤连蛋白III型(Fn3)结构域的整体折叠与最小的功能性抗体片段(抗体重链的可变域)的折叠紧密相关。Fn3的末尾有三个环；BC、DE和FG环的位置大致对应于抗体的VH域的CDR1、2和3的位置。Fn3没有二硫键；因此，与抗体及其片段不同，Fn3在还原条件下是稳定的(参见，例如，WO 98/56915；WO 01/64942；WO 00/34784)。可以修饰(例如，使用本文所述的CDR或高变环)或改变Fn3结构域，例如，以选择与本文所述的抗原/标志物/细胞结合的结构域。

在实施方案中，支架结构域，例如折叠结构域，是基于抗体，例如通过从单克隆抗体的重链可变域中删除三条β链而产生的“微抗体”支架(参见，例如，Tramontano等人，1994，J Mol.Recognit.7:9；和Martin等人，1994,EMBO J.13:5303-5309)。“微抗体”可用于呈现两个高变环。在实施方案中，支架结构域是V样结构域(参见，例如，Coia等人，WO 99/45110)或是衍生自tendamistatin的结构域，tendamistatin是由两个二硫键保持在一起的74残基的六链β片层夹心结构(例如参见McConnell和Hoess,1995,J Mol.Biol.250:460)。例如，可以修饰或改变(例如，使用CDR或高变环)tendamistatin的环，例如以选择与本文所述的标志物/抗原/细胞结合的结构域。另一个示例性的支架结构域是衍生自CTLA-4的胞外域的β-夹心结构(参见，例如，WO 00/60070)。

其他示例性的支架结构域包括但不限于T细胞受体；MHC蛋白；胞外域(例如纤连蛋白III型重复序列，EGF重复序列)；蛋白酶抑制剂(例如Kunitz域、大肠杆菌素、BPTI等)；TPR重复序列；三叶(trifoil)结构；锌指结构域；DNA结合蛋白；特别是单体DNA结合蛋白；RNA结合蛋白；酶，例如蛋白酶(特别是灭活的蛋白酶)，RNA酶；蛋白伴侣分子，例如硫氧还蛋白和热休克蛋白；以及细胞内信号传导域(例如SH2和SH3域)。参见，例如，US 20040009530和US7,501,121，其通过引用并入本文。

在实施方案中，例如通过以下标准中的一个或多个来评估和选择支架结构域：(1)氨基酸序列，(2)几个同源结构域的序列，(3)3维结构，和/或(4)在pH、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在实施方案中，支架结构域是小的、稳定的蛋白质结构域，例如少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。该结构域可以包括一个或多个二硫键或可以螯合金属，例如锌。

基于抗体的融合体

可以产生包含附着于抗体N或C末端的另外结合实体的多种形式。这些与单链或二硫键稳定化的Fv或Fab的融合体导致产生对每种抗原具有二价结合特异性的四价分子。scFv和scFab与IgG的结合可产生可识别三种或更多种不同抗原的分子。

抗体-Fab融合体

抗体-Fab融合体是双特异性抗体，其包含与抗体重链的C末端融合的针对第一靶标的传统抗体和针对第二靶标的Fab。通常，抗体和Fab将具有共同的轻链。抗体融合体可以通过以下方式产生：(1)将靶标融合体的DNA序列工程化，以及(2)将靶标DNA转染到合适的宿主细胞中以表达融合蛋白。如Coloma，J.等人(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可以通过CH3结构域的C末端与scFv的N末端之间的(Gly)-Ser接头连接。

抗体-scFv融合体

抗体-scFv融合体是双特异性抗体，其包含与抗体重链的C末端融合的传统抗体和具有独特特异性的scFv。scFv可以直接通过scFv重链或通过接头肽融合至C末端。抗体融合体可以通过以下方式产生：(1)将靶标融合体的DNA序列工程化，以及(2)将靶标DNA转染到合适的宿主细胞中以表达融合蛋白。如Coloma，J.等人(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可以通过CH3结构域的C末端与scFv的N末端之间的(Gly)-Ser接头连接。

可变域免疫球蛋白DVD

一种相关的形式是双重可变域免疫球蛋白(DVD)，其通过较短的接头序列由在V结构域N末端的第二个特异性位置的VH和VL域组成。

其他示例性的多特异性抗体形式包括，例如在以下专利中描述的那些：US20160114057A1、US20130243775A1、US20140051833、US20130022601、US20150017187A1、US20120201746A1、US20150133638A1、US20130266568A1、US20160145340A1、WO2015127158A1、US20150203591A1、US20140322221A1、US20130303396A1、US20110293613、US20130017200A1、US20160102135A1、WO2015197598A2、WO2015197582A1、US9359437、US20150018529、WO2016115274A1、WO2016087416A1、US20080069820A1、US9145588B、US7919257和US20150232560A1。采用完整抗体-Fab/scFab形式的示例性的多特异性分子包括在以下专利中描述的那些：US9382323B2、US20140072581A1、US20140308285A1、US20130165638A1、US20130267686A1、US20140377269A1、US7741446B2和WO1995009917A1。采用结构域交换形式的示例性的多特异性分子包括在以下专利中描述的那些：US20150315296A1、WO2016087650A1、US20160075785A1、WO2016016299A1、US20160130347A1、US20150166670、US8703132B2、US20100316645、US8227577B2、US20130078249。

含Fc的实体(微抗体)

含Fc的实体(也称为微抗体)可以通过将scFv与恒定重链结构域3的C末端(CH3-scFv)和/或与具有不同特异性的抗体的铰链区(scFv-铰链-Fc)融合而产生。也可以制备具有与IgG的CH3结构域的C末端融合的二硫键稳定化的可变域(无肽接头)的三价实体。

含Fc的多特异性分子

在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括免疫球蛋白恒定区(例如，Fc区)。示例性的Fc区可以选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区；更特别地，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。

在一些实施方案中，改变免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，例如使其突变，以增加或减少以下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。

在其他实施方案中，第一免疫球蛋白链恒定区和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，第一Fc区和第二Fc区)的界面被改变(例如使其突变)，以例如相对于非工程化界面(例如天然存在的界面)增加或减少二聚化。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化可以通过为第一Fc区和第二Fc区的Fc界面提供以下一种或多种来增强：成对的突起-腔(“杵臼结构”)、静电相互作用或链交换，以使得例如相对于非工程化界面，异源多聚体与同源多聚体的比例更大。

在一些实施方案中，多特异性分子包括在选自例如人IgG1的Fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409的一个或多个中的位置的成对的氨基酸置换。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)可以包括选自以下的成对的氨基酸置换：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于腔或臼)和T366W(例如，对应于突起或杵)。

在其他实施方案中，多功能分子包括半衰期延长剂，例如人血清白蛋白，或针对人血清白蛋白的抗体分子。

异源二聚化的抗体分子及其制备方法

已经公开了产生多特异性抗体的各种方法来解决不正确的重链配对的问题。示例性方法描述如下。示例性的多特异性抗体形式和制备所述多特异性抗体的方法也公开于例如Speiss等人，Molecular Immunology 67(2015)95–106；和Klein等人，mAbs 4:6，653–663；2012年11月/12月中；其每一个的全部内容通过引用并入本文。

异源二聚化的双特异性抗体基于天然IgG结构，其中两个结合臂识别不同的抗原。通过强制重链异源二聚化，并结合将轻链(例如共有轻链)错配最小化的技术，来产生能够实现确定的单价(和同时)抗原结合的IgG衍生形式。强制重链异源二聚化可以使用例如杵-臼结构或链交换工程化结构域(SEED)获得。

杵臼结构

杵臼结构在US 5,731,116、US 7,476,724和Ridgway，J.等人(1996)Prot.Engineering 9(7):617-621中描述，一般说来涉及：(1)使一种或两种抗体的CH3结构域突变以促进异源二聚化；和(2)在促进异源二聚化的条件下将突变的抗体组合。“杵”或“突起”通常是通过将亲本抗体中的小氨基酸替换为较大的氨基酸(例如T366Y或T366W)来生成的；“臼”或“腔”是通过将亲本抗体中的较大残基替换为较小氨基酸(例如，Y407T、T366S、L368A和/或Y407V)来生成的。

对于包括Fc结构域的双特异性抗体，可以利用将特定突变引入重链的恒定区来促进Fc部分的正确异源二聚化。在Klein等人，(mAbs(2012)4:6,1-11)中综述了几种这样的技术，其内容通过引用整体并入本文。这些技术包括“杵臼结构”(KiH)法，该方法涉及将庞大的残基引入一条抗体重链的一个CH3结构域中。该庞大的残基配合到配对重链的另一个CH3结构域中的互补“臼”中，从而促进重链的正确配对(参见，例如，US7642228)。

示例性的KiH突变包括“杵”重链中的S354C、T366W和“臼”重链中的Y349C、T366S、L368A、Y407V。表1提供了其他示例性的KiH突变，以及另外的可选的稳定化Fc半胱氨酸突变。

表1.示例性的Fc KiH突变和可选的半胱氨酸突变

Igawa和Tsunoda提供了其他Fc突变，他们确定了一条链的CH3域中的3个带负电荷的残基，其与另一条链的CH3域中的3个带正电荷的残基配对。这些特定的带电荷残基对为：E356-K439、E357-K370、D399-K409，反之亦然。通过单独地或与新发现的二硫桥结合地在链A中引入以下三个突变中的至少两个：E356K、E357K和D399K，以及在链B中引入以下三个突变中的至少两个：K370E、K409D、K439E，能够促进非常有效的异源二聚化，同时抑制同源二聚化(Martens T等人，A novel one-armed antic-Met antibody inhibits glioblastomagrowth in vivo.Clin Cancer Res 2006；12:6144-52；PMID:17062691)。Xencor基于结构计算和序列信息的组合定义了41个变体对，随后筛选了最大异源二聚化，定义了链A上的S364H、F405A(HA)和链B上的Y349T、T394F(TF)的组合(Moore GL等人，A novel bispecificantibody format enables simultaneous bivalent and monovalent co-engagement ofdistinct target antigens.MAbs 2011；3:546-57；PMID：22123055)。

促进多特异性抗体异源二聚化的其他示例性的Fc突变包括在以下参考文献中描述的那些，其各自内容通过引用并入本文：WO2016071377A1、US20140079689A1、US20160194389A1、US20160257763、WO2016071376A2、WO2015107026A1、WO2015107025A1、WO2015107015A1、US20150353636A1、US20140199294A1、US7750128B2、US20160229915A1、US20150344570A1、US8003774A1、US20150337049A1、US20150175707A1、US20140242075A1、US20130195849A1、US20120149876A1、US20140200331A1、US9309311B2、US8586713、US20140037621A1、US20130178605A1、US20140363426A1、US20140051835A1和US20110054151A1。

稳定化半胱氨酸突变也已经与KiH和其他促进Fc异源二聚化的变体组合使用，参见例如US7183076。其他示例性半胱氨酸修饰包括，例如在US20140348839A1、US7855275B2和US9000130B2公开的那些。

链交换工程化结构域(SEED)

通过设计链交换工程化结构域(SEED)C(H)3异源二聚体来支持双特异性和不对称融合蛋白设计的异源二聚体Fc平台是已知的。人IgG和IgA C(H)3结构域的这些衍生物可形成互补的人SEED C(H)3异源二聚体，其由人IgA和IgG C(H)3序列的交替区段组成。当在哺乳动物细胞中表达时，所得的一对SEED C(H)3结构域优先缔合形成异源二聚体。SEEDbody(Sb)融合蛋白由[IgG1铰链]-C(H)2-[SEED C(H)3]组成，可以与一个或多个融合伴侣遗传连接(例如，参见Davis JH等人，SEEDbodies:fusion proteins based on strandexchange engineered domain(SEED)CH3 heterodimers in an Fc analogue platformfor asymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies.Protein EngDes Sel 2010；23:195-202；PMID：20299542和US8871912。其每一个的内容通过引用并入本文)。

Duobody

产生具有正确重链配对的双特异性抗体的“Duobody”技术是已知的。DuoBody技术涉及三个基本步骤，用于在生产后的交换反应中生成稳定的双特异性人IgG1抗体。第一步，使用标准的哺乳动物重组细胞系分别生产两个IgG1，每个IgG1在第三恒定(CH3)结构域中包含单个匹配的突变。随后，根据用于回收和纯化的标准方法来纯化这些IgG1抗体。在生产和(生产后的)纯化后，两个抗体在定制的实验室条件下重组，从而以非常高的产率(通常>95％)产生双特异性抗体产品(参见例如Labrijn等人，PNAS 2013；110(13)：5145-5150和Labrijn等人，Nature Protocols 2014；9(10):2450-63，其各自的内容通过引用并入本文)。

静电相互作用

公开了采用带电荷的氨基酸，使用CH3氨基酸变化而制备多特异性抗体的方法，使得同源二聚体的形成在静电上是不利的。EP1870459和WO 2009089004描述了在宿主细胞中共表达不同抗体结构域时有利于异源二聚体形成的其他策略。在这些方法中，用带电荷的氨基酸替换两个CH3结构域中组成重链恒定域3(CH3)、CH3-CH3界面的一个或多个残基，使得同源二聚体形成在静电上是不利的并且异源二聚化在静电上是有利的。在以下参考文献中描述了使用静电相互作用制备多特异性分子的其他方法，每个参考文献的内容通过引用并入本文，包括US20100015133、US8592562B2、US9200060B2、US20140154254A1和US9358286A1。

共有轻链

需要避免轻链错配以产生双特异性IgG的均质制剂。其实现方式之一是通过使用共有轻链原理，即将共享一个轻链但仍具有不同特异性的两种结合物组合。增强由单体混合物形成期望的双特异性抗体的示例性方法是通过提供共有的可变轻链来与双特异性抗体的每个异聚可变重链区相互作用。产生具有共同轻链的双特异性抗体的组合物和方法公开于例如US7183076B2、US20110177073A1、EP2847231A1、WO2016079081A1和EP3055329A1中，其各自的内容通过引用并入本文。

CrossMab

减少轻链错配的另一种选择是CrossMab技术，它通过交换一半双特异性抗体的Fab中的CH1和CL结构域来避免非特异性L链错配。这样的交错变体保留了结合特异性和亲和力，但是使两个臂如此不同，以至于防止了L链错配。CrossMab技术(如前述Klein等人中所概述)涉及重链和轻链之间的域互换，以促进正确配对的形成。简而言之，为了通过使用两个不同的轻链-重链对来构建可以结合两种抗原的双特异性IgG样CrossMab抗体，采用了两步式修饰过程。首先，使用异源二聚化方法(例如，杵臼(KiH)技术)将二聚化界面工程化到每个重链的C末端，以确保仅有效地形成了来自一个抗体(例如，抗体A)和第二抗体(例如抗体B)的两条不同重链的异源二聚体。接下来，交换一种抗体(抗体A)的恒定重链1结构域(CH1)和恒定轻链结构域(CL)，同时使可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域保持如一。CH1和CL结构域的交换确保修饰的抗体(抗体A)轻链仅能与修饰的抗体(抗体A)重链有效地二聚化，而未修饰的抗体(抗体B)轻链仅能与未修饰的抗体(抗体B)的重链有效地二聚化；因此仅有效地形成期望的双特异性CrossMab(参见例如Cain,C.SciBX 4(28)；doi：10.1038/scibx.2011.783，其内容通过引用并入本文)。

共有重链

增强由单体混合物形成期望的双特异性抗体的示例性方法是通过提供共有的可变重链来与双特异性抗体的每个异聚可变轻链区相互作用。产生具有共有重链的双特异性抗体的组合物和方法公开于例如US20120184716、US20130317200和US20160264685A1中，其各自的内容通过引用并入本文。

氨基酸修饰

产生具有正确的轻链配对的多特异性抗体的替代组合物和方法包括各种氨基酸修饰。例如，Zymeworks描述了在CH1和/或CL结构域中具有一个或多个氨基酸修饰，在VH和/或VL域中具有一个或多个氨基酸修饰，或其组合的杂二聚体，这些修饰是轻链和重链之间的界面的一部分，并在每条重链和所期望的轻链之间建立优先配对，使得当异源二聚体对的两条重链和两条轻链在细胞中共表达时，第一异源二聚体的重链优先与一条轻链而不是彼此配对(例如，参见WO2015181805)。其他示例性方法记载于WO2016026943(Argen-X)、US20150211001、US20140072581A1、US20160039947A1和US20150368352中。

λ/κ形式

包括λ轻链多肽和κ轻链多肽的多特异性分子(例如，多特异性抗体分子)可用于允许异源二聚化。产生包含λ轻链多肽和κ轻链多肽的双特异性抗体分子的方法公开于2017年9月22日提交的PCT/US 17/53053，其通过引用整体并入本文。

在实施方案中，多特异性分子包括多特异性抗体分子，例如，具有两种结合特异性的抗体分子，例如，双特异性抗体分子。多特异性抗体分子包括：

对第一表位具有特异性的λ轻链多肽1(LLCP1)；

对第一表位具有特异性的重链多肽1(HCP1)；

对第二表位具有特异性的κ轻链多肽2(KLCP2)；以及

对第二表位具有特异性的重链多肽2(HCP2)。

如本文所用，术语“λ轻链多肽1(LLCP1)”是指包含足够的轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区结合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1的复合。在一个实施方案中，LLCP1包含CH1区的全部或片段。在一个实施方案中，LLCP1包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或来自其中的足以介导其表位的特异性结合以及与HCP1的复合的序列。LLCP1与其HCP1一起对第一表位提供特异性(而KLCP2与其HCP2一起对第二表位提供特异性)。如本文其他地方所述，LLCP1对HCP1的亲和力高于对HCP2的亲和力。

如本文所用，术语“κ轻链多肽2(KLCP2)”是指包含足够的轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区结合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP2的复合。在一些实施方案中，KLCP2包含CH1区的全部或片段。在一个实施方案中，KLCP2包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或来自其中的足以介导其表位的特异性结合以及与HCP2的复合的序列。KLCP2与其HCP2一起为第二表位提供特异性(而LLCP1及其HCP1为第一表位提供特异性)。

如本文所用，术语“重链多肽1(HCP1)”是指包含足够的重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1结合时可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1的复合。在一些实施方案中，HCP1包含CH1区的全部或片段。在一个实施方案中，HCP1包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在一个实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或来自其中的足以实现以下各项的序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与LLCP1的复合，(ii)如本文所述优先与LLCP1而非KLCP2复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP2而非另一HCP1分子复合。HCP1与其LLCP1一起提供对第一表位的特异性(而KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性)。

如本文所用，术语“重链多肽2(HCP2)”是指包含足够的重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1结合时可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1的复合。在一些实施方案中，HCP2包含CH1区的全部或片段。在一些实施方案中，HCP2包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在一个实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或来自其中的足以实现以下各项的序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与KLCP2的复合，(ii)如本文所述优先与KLCP2而非LLCP1复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP1而非另一HCP2分子复合。HCP2与其KLCP2一起提供了对第二表位的特异性(而LLCP1与其HCP1一起提供了对第一表位的特异性)。

在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：LLCP1对HCP1的亲和力高于对HCP2的亲和力；并且/或者KLCP2对HCP2的亲和力高于对HCP1的亲和力。

在实施方案中，LLCP1对HCP1的亲和力充分大于其对HCP2的亲和力，使得在预选条件下，例如在水性缓冲液中(例如在pH 7下)、在盐水中(例如在pH 7下)，或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP1复合或接合的LLCP1。

在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：HCP1对HCP2的亲和力大于对HCP1第二分子的亲和力；并且/或者HCP2对HCP1的亲和力大于对HCP2第二分子的亲和力。

在实施方案中，HCP1对HCP2的亲和力充分大于其对第二HCP1分子的亲和力，使得在预选条件下，例如在水性缓冲液中(例如在pH 7下)、在盐水中(例如在pH 7下)，或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP2复合或接合的HCP1。

在另一方面，本文公开了用于制备或产生多特异性抗体分子的方法。该方法包括在(i)-(iv)缔合的条件下：

(i)提供第一重链多肽(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；

(ii)提供第二重链多肽(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；

(iii)提供优先与第一重链多肽(例如，第一VH)缔合的λ链多肽(例如λ轻可变区(VLλ)、λ轻恒定链(VLλ)或两者)；和

(iv)提供优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ链多肽(例如κ轻可变区(VLκ)、κ轻恒定链(VLκ)或两者)。

在实施方案中，第一重链和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。

在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)引入单个细胞，例如单个哺乳动物细胞，例如CHO细胞中。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。

在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)引入不同的细胞，例如不同的哺乳动物细胞，例如两个或更多个CHO细胞中。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。

在一个实施方案中，该方法进一步包括例如使用λ特异性和/或κ特异性纯化，例如亲和色谱，纯化细胞表达的抗体分子。

在实施方案中，该方法进一步包括评估细胞表达的多特异性抗体分子。例如，纯化的细胞表达的多特异性抗体分子可以通过本领域已知的技术(包括质谱法)进行分析。在一个实施方案中，将纯化的细胞表达的抗体分子裂解，例如用木瓜蛋白酶消化以产生Fab部分，并使用质谱法进行评估。

在实施方案中，该方法以高产率，例如至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％，产生正确配对的κ/λ多特异性(例如双特异性)抗体分子。

在其他实施方案中，多特异性(例如双特异性)抗体分子包括：(i)第一重链多肽(HCP1)(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP1与第一表位结合；

(ii)第二重链多肽(HCP2)(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP2与第二表位结合；

(iii)优先与第一重链多肽(例如第一VH)缔合的λ轻链多肽(LLCP1)(例如，λ轻可变区(VL1)、λ轻恒定链(VL1)或两者)，例如，其中LLCP1与第一表位结合；以及

(iv)优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ轻链多肽(KLCP2)(例如，κ轻可变区(VLk)、κ轻恒定链(VLk)或两者)，例如其中KLCP2与第二表位结合。

在实施方案中，第一重链多肽和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。在实施方案中，多特异性抗体分子具有第一结合特异性和第二结合特异性，所述第一结合特异性包括杂合的VL1-CL1，其异源二聚化至与Fc恒定CH2-CH3结构域连接的第一重链可变区(具有杵修饰)，而所述第二结合特异性包括杂合的VLk-CLk，其异源二聚化至与Fc恒定CH2-CH3结构域连接的第二重链可变区(具有臼修饰)。

TCRβV抗原结合域

免疫***的多样性使得能够对多种病原体提供保护。由于种系基因组的大小受到限制，多样性不仅可以通过V(D)J重组的过程来实现，而且可以通过核苷酸的连接(V-D和D-J区段之间的连接)缺失和伪随机非模板核苷酸的添加来实现。TCRβ基因经过基因排列产生多样性。

由于例如在功能性基因区段中经常出现7种失活多态性以及涵盖2个Vβ基因区段的大的与***/缺失相关的多态性，TCR Vβ的所有组成成分因个人和群体而异。

本公开内容尤其提供了抗体分子及其片段，其结合(例如特异性结合)至人TCRβV链(TCRβV)，例如TCRβV基因家族(也称为组)，例如TCRβV亚家族(也称为亚组)，例如，如本文所述。TCRβV家族和亚家族是本领域已知的，例如，如Yassai等人，(2009)Immunogenetics61(7)pp:493-502；Wei S.和Concannon P.(1994)Human Immunology 41(3)pp:201-206所述。本文所述的抗体可以是重组抗体，例如重组非鼠抗体，例如重组人或人源化抗体。

在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV，例如TCRβV家族，例如基因家族或其变体结合的抗TCRβV抗体分子。在一些实施方案中，TCRBV基因家族包含例如如本文例如图3、表8A或表8B中所述的一个或多个亚家族。在一些实施方案中，TCRβV基因家族包括：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族、TCRβV29亚家族、TCRβV1亚家族、TCRβV17亚家族、TCRβV21亚家族、TCRβV23亚家族或TCRβV26亚家族。

在一些实施方案中，TCRβV6亚家族也称为TCRβV13.1。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包括：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*02或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-9*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-8*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*02或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-2*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-3*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6，例如TCRβV6-5*01，被SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2识别，例如结合。在一些实施方案中，TCRβV6，例如TCRβV6-5*01，被SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10识别，例如结合。在一些实施方案中，TCRβV6被SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:11识别，例如结合。

在一些实施方案中，TCRβV10亚家族也称为TCRβV12。在一些实施方案中，TCRβV10亚家族包括：TCRβV10-1*01、TCRβV10-1*02、TCRβV10-3*01或TCRβV10-2*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV12亚家族也称为TCRβV8.1。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包括：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV12被SEQ ID NO:15和/或SEQ ID NO:16识别，例如结合。在一些实施方案中，TCRβV12被SEQ ID NO:23-25中的任何一个和/或SEQ ID NO:26-30中的任何一个识别，例如结合。

在一些实施方案中，TCRβV5亚家族选自：TCRβV5-5*01、TCRβV5-6*01、TCRβV5-4*01、TCRβV5-8*01、TCRβV5-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV7亚家族包括TCRβV7-7*01、TCRβV7-6*01、TCRβV7-8*02、TCRβV7-4*01、TCRβV7-2*02、TCRβV7-2*03、TCRβV7-2*01、TCRβV7-3*01、TCRβV7-9*03或TCRβV7-9*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV11亚家族包括：TCRβV11-1*01、TCRβV11-2*01或TCRβV11-3*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV14亚家族包括TCRβV14*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV16亚家族包括TCRβV16*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV18亚家族包括TCRβV18*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV9亚家族包括TCRβV9*01或TCRβV9*02或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV13亚家族包括TCRβV13*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV4亚家族包括TCRβV4-2*01、TCRβV4-3*01或TCRβV4-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV3亚家族包括TCRβV3-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV2亚家族包括TCRβV2*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV15亚家族包括TCRβV15*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV30亚家族包括TCRβV30*01或TCRβV30*02或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV19亚家族包括TCRβV19*01或TCRβV19*02或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV27亚家族包括TCRβV27*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV28亚家族包括TCRβV28*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV24亚家族包括TCRβV24-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV20亚家族包括TCRβV20-1*01或TCRβV20-1*02或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV25亚家族包括TCRβV25-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV29亚家族包括TCRβV29-1*01或其变体。

表8A：TCRβV亚家族和亚家族成员列表

表8B：其他TCRβV亚家族

亚家族
	TCRβV1
TCRβV17
	TCRβV21
TCRβV23
	TCRβV26

抗TCRβV抗体

本文公开了发现一类新颖的抗体，即本文公开的抗TCRβV抗体分子，其尽管具有低序列相似性(例如，识别不同TCRβV亚家族的不同抗体分子之间的序列同一性低)，但仍识别TCRβV蛋白上的结构保守区(例如域)，并具有相似的功能(例如，相似的细胞因子谱)。因此，本文公开的抗TCRβV抗体分子具有结构-功能关系。

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRβV抗体分子不识别(例如不结合至)TCRβV：TCRα复合物的界面。

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRβV抗体分子不识别(例如不结合至)TCRβV蛋白的恒定区。结合到TCRBV区的恒定区的示例性抗体是Viney等人，(Hybridoma.1992年12月；11(6):701-13)中所述的JOVI.1。

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRβV抗体分子不识别(例如不结合至)TCRβV蛋白的一个或多个(例如全部)互补决定区(例如CDR1、CDR2和/或CDR3)。

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRβV抗体分子结合(例如特异性结合)至TCRβV区。在一些实施方案中，本文公开的抗TCRβV抗体分子的结合导致的细胞因子谱不同于与除TCRβV区以外的受体或分子结合的T细胞衔接物(“非TCRβV-结合T细胞衔接物”)的细胞因子谱。在一些实施方案中，非TCRβV结合T细胞衔接物包括与CD3分子(例如，CD3ε(CD3e)分子)或TCR阿尔法(TCRα)分子结合的抗体。在一些实施方案中，非TCRβV结合T细胞衔接物是OKT3抗体或SP34-2抗体。

在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV，例如TCRβV基因家族，例如TCRβV亚家族中的一个或多个，例如，如本文例如在图3、表8A或表8B中所述的那些结合的抗TCRβV抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子与选自以下的一个或多个TCRβV亚家族结合：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族、TCRβV29亚家族、TCRβV1亚家族、TCRβV17亚家族、TCRβV21亚家族、TCRβV23亚家族或TCRβV26亚家族或其变体。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子与TCRβV6亚家族结合，所述TCRβV6亚家族包括：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*02或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-9*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-8*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*02或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-2*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-3*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-1*01或其变体。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子与TCRβV10亚家族结合，所述TCRβV10亚家族包括：TCRβV10-1*01、TCRβV10-1*02、TCRβV10-3*01或TCRβV10-2*01或其变体。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子与TCRβV12亚家族结合，所述TCRβV12亚家族包括：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01或其变体。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子与TCRβV5亚家族结合，所述TCRβV5亚家族包括：TCRβV5-5*01、TCRβV5-6*01、TCRβV5-4*01、TCRβV5-8*01、TCRβV5-1*01或其变体。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子不结合TCRβV12，或以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV12。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV12。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至除TCRβV12以外的TCRβV区(例如，如本文所述的TCRβV区，例如，TCRβV6亚家族(例如，TCRβV6-5*01))。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子不结合TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01，或以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的鼠抗体C或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的鼠抗体C或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的鼠抗体C或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至除TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01以外的TCRβV区(例如，如本文所述的TCRβV区，例如，TCRβV6亚家族(例如，TCRβV6-5*01))。

抗TCRβV6抗体

因此，在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV6(例如，TCRβV6亚家族)结合的抗TCRβV抗体分子，所述TCRβV6亚家族包括：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-4*02或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-9*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-8*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-5*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*02或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-6*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-2*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-3*01或其变体。在一些实施方案中，TCRβV6包括TCRβV6-1*01或其变体。

在一些实施方案中，TCRβV6-5*01由SEQ ID NO:43的核酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的序列编码。

SEQ ID NO:43

ATGAGCATCGGCCTCCTGTGCTGTGCAGCCTTGTCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTGGTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCAGGTCCTGAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGTGCCCAGGATATGAACCATGAATACATGTCCTGGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAGGCTGATTCATTACTCAGTTGGTGCTGGTATCACTGACCAAGGAGAAGTCCCCAATGGCTACAATGTCTCCAGATCAACCACAGAGGATTTCCCGCTCAGGCTGCTGTCGGCTGCTCCCTCCCAGACATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTACTC

在一些实施方案中，TCRβV6-5*01包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的氨基酸序列。

SEQ ID NO:44

MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGYNVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSY

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是非鼠抗体分子，例如人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是人抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是人源化抗体分子。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是分离的或重组的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的至少一个、两个、三个或四个可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的至少一个或两个重链可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子包含具有SEQ ID NO:231或3290的共有序列的重链可变区(VH)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的至少一个或两个轻链可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子包含具有SEQ ID NO:230或3289的共有序列的轻链可变区(VL)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区。在又一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表3A中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表3A中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的重链可变区(VH)的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自包含表1A所示氨基酸序列或由表1A所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表1A中所示的氨基酸序列，或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列)的轻链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自包含表1A所示氨基酸序列或由表1A所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表1A中所示的氨基酸序列，或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自包含表1A所示氨基酸序列或由表1A所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表1A中所示的氨基酸序列，或由表1A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个CDR，或密切相关的CDR，例如相同CDR或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表1A所列的Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Kabat等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表1A所列的Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Kabat等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据表1A所列的Kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Kabat等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Kabat等人的所有六个CDR(例如，根据表1A所列的Kabat定义的所有六个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Kabat等人的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的所有六个CDR。在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括至少一个、两个或三个具有与本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体)的相应高变环相同的规范结构的高变环，例如与本文所述抗体的重链和/或轻链可变域的至少环1和/或环2具有相同的规范结构。高变环规范结构的描述参见，例如Chothia等人，(1992)J.Mol.Biol.227:799-817；Tomlinson等人，(1992)J.Mol.Biol.227:776-798。这些结构可以通过查看这些参考文献中描述的表来确定。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的根据Chothia等人所述的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表1A所列的Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Chothia等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的根据Chothia等人所述的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表1A所列的Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Chothia等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Chothia等人所述的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据表1A所列的Chothia定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Chothia等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括来自本文所述抗体(例如选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或表1A中所述的抗体，或由表1A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Chothia等人所述的所有六个CDR(例如，根据表1A所列的Chothia定义的所有六个CDR)；或相对于表1A中所示的根据Chothia等人的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的所有六个CDR。在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括根据Kabat等人、Chothia等人定义或如表1A所述的CDR或高变环的组合。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子可包含根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。

在一些实施方案中，如表1A列出的组合的CDR是包括Kabat CDR和Chothia CDR的CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括CDR或高变环的组合，其被标识为表1A中的组合的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子可包含根据表1A中所述的“组合的”CDR的CDR或高变环的任何组合。

在一个实施方案中，例如在包含可变区、CDR(例如组合的CDR、Chothia CDR或Kabat CDR)或本文在例如表1A中提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子，或包含抗体的抗原结合片段(例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段)的抗体分子。在某些实施方案中，抗体分子包括多特异性分子，例如双特异性分子，例如，如本文所述的。

在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括：

(i)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)的一个、两个或全部，和/或

(ii)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)的一个、两个或全部。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括SEQ ID NO:2的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:1的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括SEQ ID NO:10的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括SEQ ID NO:11的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括：

(i)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO：7的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO：8的LC CDR3氨基酸序列；和/或

(ii)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO：3的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO：4的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO：5的HC CDR3氨基酸序列。

在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子的轻链或重链可变构架(例如包括至少FR1、FR2、FR3和任选FR4的区域)可以选自：

(a)轻链或重链可变构架，包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(b)轻链或重链可变构架，包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(c)非人构架(例如，啮齿动物构架)；或(d)已被修饰的非人构架，例如去除抗原或细胞毒性决定簇，例如去免疫或部分人源化的非人构架。在一个实施方案中，轻链或重链可变构架区(特别是FR1、FR2和/或FR3)包括与人种系基因的VL或VH区段的构架相同或至少70％、75％、80％、85％、87％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同的轻链或重链可变构架序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其相对于A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的氨基酸序列，例如整个可变区(例如图1A所示的区域)中的FR区的氨基酸序列，或在SEQID NO:9中的的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个改变(例如氨基酸置换或缺失)。

备选地，或与本文所述的重链置换组合，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子轻链可变域，其包含相对于A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的氨基酸序列，例如整个可变区(例如图1B所示)中的FR区的氨基酸序列，或在SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个氨基酸改变(例如氨基酸置换或缺失)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括如图1A所示的一个、两个、三个或四个重链构架区，或与其基本上相同的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括如图1B所示的一个、两个、三个或四个轻链构架区，或与其基本上相同的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1B所示的A-H.1或A-H.2的轻链构架区1。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1B所示的A-H.1或A-H.2的轻链构架区2。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1B所示的A-H.1或A-H.2的轻链构架区3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1B所示的A-H.1或A-H.2的轻链构架区4。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在位置10处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR1在位置10处包含苯丙氨酸，例如丝氨酸至苯丙氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区2(FR2)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR2在位置36处包含组氨酸，例如根据Kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换。在一些实施方案中，FR2在位置46处包含丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR3在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区1(FR1)，其在位置10处包含苯丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置10处的置换，例如丝氨酸至苯丙氨酸置换；(b)构架区2(FR2)，其在位置36处包含组氨酸，例如根据Kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换，以及在位置46处包含丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换；和(c)构架区3(FR3)，其在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换，例如，如SEQ ID NO:10的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区2(FR2)，其在位置36处包含组氨酸，例如根据Kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸置换，以及在位置46处包含丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换；和(b)构架区3(FR3)，其在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据Kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换，例如，如SEQ ID NO:11的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；(b)构架区2(FR2)，其包括根据Kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；以及(c)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1A所示的A-H.1或A-H.2的重链构架区1。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1A所示的A-H.1或A-H.2的重链构架区2。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1A所示的A-H.1或A-H.2的重链构架区3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括例如如图1A所示的A-H.1或A-H.2的重链构架区4。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR3在位置73处包含苏氨酸，例如根据Kabat编号在位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换。在一些实施方案中，FR3在位置94处包含甘氨酸，例如根据Kabat编号在位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系重链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区在位置73处包含苏氨酸，例如根据Kabat编号在位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换，以及在位置94处包含甘氨酸，例如根据Kabat编号在位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换，例如，如SEQ ID NO:10的氨基酸序列所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括A-H.1或A-H.2的重链构架区1-4，例如SEQ ID NO:9或如图1A和图1B所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括A-H.1的轻链构架区1-4，例如SEQ ID NO:10或如图1A和图1B所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括A-H.2的轻链构架区1-4，例如SEQ ID NO:11或如图1A和图1B所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括A-H.1的重链构架区1-4(例如SEQ ID NO:9)；和A-H.1的轻链构架区1-4(例如SEQID NO:10)，或如图1A和1B所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括A-H.2的重链构架区1-4(例如SEQ ID NO:9)；和A-H.2的轻链构架区1-4(例如SEQID NO:11)，或如图1A和1B所示。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子的重链或轻链可变域或两者包含氨基酸序列，其与本文公开的氨基酸基本相同，例如与本文所述抗体(例如，选自A-H.1至A-H.68中的任一项(例如A-H.1、A-H.2或A-H.68)的抗体，或如表1A所述的抗体，或由表1A的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同；或与本文所述抗体的可变区相差至少1或5个残基，但相差少于40、30、20或10个残基。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包含至少一个、两个、三个或四个抗原结合区(例如，可变区)，该抗原结合区具有表1A所列的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表1A中所示序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基)。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，包括由具有表1A所列的核苷酸序列或与其基本相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表1A中所示序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸)的核酸编码的VH和/或VL域。

VH域，所述VH域包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列、与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或

VL域，所述VL域包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列、与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VL域，所述VL域包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列、与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:11的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是完整的抗体或其片段(例如，Fab、F(ab’)₂、Fv或单链Fv片段(scFv))。在实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是单克隆抗体或具有单一特异性的抗体。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子，也可以是人源化的、嵌合的、骆驼的、鲨鱼的或体外产生的抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是人源化抗体分子。抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条，优选两条完整的重链，以及至少一条，优选两条完整的轻链)或可以包含抗原结合片段(例如Fab、F(ab’)₂、Fv、单链Fv片段、单域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子为多特异性分子，例如双特异性分子的形式，例如如本文所述。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区的重链恒定区(Fc)。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1或IgG2(例如人IgG1或IgG2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人IgG1。在一些实施方案中，Fc区包括Fc区变体，例如如本文所述。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子，具有选自例如κ或λ，优选κ(例如人κ)的轻链恒定区的轻链恒定区。在一个实施方案中，恒定区被改变，例如使其突变，以修饰抗TCRβV抗体分子例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子的性质(例如增加或减少以下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。例如，相对于例如人IgG1，恒定区在位置296(M至Y)、298(S至T)、300(T至E)、477(H至K)和478(N至F)处发生突变，以改变Fc受体结合(例如突变位置对应于SEQ ID NO:212或214的位置132(M至Y)、134(S至T)、136(T至E)、313(H至K)和314(N至F)；或SEQ ID NO:215、216、217或218的位置135(M至Y)、137(S至T)、139(T至E)、316(H至K)和317(N至F))。

抗体A-H.1包含含有SEQ ID NO:3278氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:72氨基酸序列的轻链。抗体A-H.2包含含有SEQ ID NO:3278氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:3279氨基酸序列的轻链。抗体A-H.68包含SEQ ID NO:1337的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。

其他示例性人源化抗TCRB V6抗体在表1A中提供。在一些实施方案中，抗TCRβV6抗体是抗体A，例如人源化抗体A(抗体A-H)，如表1A中提供。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表1A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表1A中提供的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体A包含表1A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。

表1A：结合至TCRVB 6例如TCRVB 6-5的鼠、嵌合和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAb抗体A和人源化mAb抗体A-H克隆A-H.1至A-H.68。显示了重链和轻链CDR的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子包含表1A所述抗体的VH和/或VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如抗TCRβV6-5*01)抗体分子包含表1A所述抗体的VH和VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

亲和力成熟的人源化抗体A-H VL序列的比对(按照出现的顺序，分别为SEQ IDNOS 3377-3389)

a5-VL

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c1d2d4-VL

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h3-VL

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f5-VL

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e4b6g3c6h2c2d1a6c3a3e6d6g2-VL

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e3-VL

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d5-VL

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c4f4f2a2a1-VL

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b5h4a4-VL

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b1-VL

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b4e1f3-VL

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a5-VL

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c1d2d4-VL

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h3-VL

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f5-VL

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e4b6g3c6h2c2d1a6c3a3e6d6g2-VL

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e3-VL

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d5-VL

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d3f1g1-VL

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c4f4f2a2a1-VL

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b5h4a4-VL

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b2c5b3e2g4h6-VL

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b1-VL

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b4e1f3-VL

RFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQFKSYPLTFGQGTKLEIK 107

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共有VL:SEQ ID NO:230

DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNV G/E/A/D N/D R/K VAW Y/HQQKPGKAPKALIYSSSHRY K/S GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQFKSYPLTFGQGTKLEIK

共有VL:SEQ ID NO:3289

DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVX₁X₂X₃VAWX₄QQKPGKAPKALIYSSSHRYX₅ GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQFKSYPLTFGQGTKLEIK，其中X1为G、E、A或D；X2为N或D；X3为R或K；X4为Y或H；且X5为K或S

亲和力成熟的人源化抗体A-H VH序列的比对(按照出现的顺序，分别为SEQ IDNOS 3390-3436)

********************************************.***.:*

****************************************.***************

共有VH:SEQ ID NO:231

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG H/T/G/Y D/T/S F H/R/D/K/T L/D/K/T/N W/F/T/I/Y/G YIHWVRQAPGQGLEWMG R/W V/I/F F/S/Y A/P GSG N/S T/V/Y/I K/R YNEKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA G/V S Y/I YS Y/A D/G VLDYWGQGTTVTVSS

共有VH:SEQ ID NO:3290

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGX₁X₂FX₃X₄X₅YIHWVRQAPGQGLEWMGX₆X₇X₈X₉GSGX₁₀X₁₁X₁ ₂YNEKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAX₁₃SX₁₄YSX₁₅X₁₆VLDYWGQGTTVTVSS，其中：X1为H或T或G或Y；X2为D或T或S；X3为H或R或D或K或T；X4为L或D或K或T或N；X5为W或F或T或I或Y或G；X6为R或W；X7为V或I或F；X8为F或S或Y；X9为A或P；X10为N或S；X11为T或V或Y或I；X12为K或R；X13为G或V；X14为Y或I；X15为Y或A；且X16为D或G

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRVb抗体具有抗原结合域，该抗原结合域具有含有SEQ ID NO:230共有序列的VL，其中位置30是G、E、A或D；位置31是N或D；位置32是R或K；位置36是Y或H；并且/或者位置56是K或S。

在一些实施方案中，本文公开的抗TCRVb抗体具有抗原结合域，该抗原结合域具有含有SEQ ID NO:231共有序列的VH，其中：位置27是H或T或G或Y；位置28是D或T或S；位置30是H或R或D或K或T；位置31是L或D或K或T或N；位置32是W或F或T或I或Y或G；位置49是R或W；位置50是V或I或F；位置51是F或S或Y；位置52是A或P；位置56是N或S；位置57是T或V或Y或I；位置58是K或R；位置97为G或V；位置99是Y或I；位置102是Y或A；并且/或者位置103是D或G。

抗TCRβV12抗体

因此，在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV12，例如，TCRβV12亚家族结合的抗TCRβV抗体分子，所述TCRβV12亚家族包括：TCRβV12-4*01，TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包括TCRβV12-4*01。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包括TCRβV12-3*01。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是非鼠抗体分子，例如人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是人抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是人源化抗体分子。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是分离的或重组的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的至少一个、两个、三个或四个可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的至少一个或两个重链可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的至少一个或两个轻链可变区。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表3A中列出的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包括κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表3A中列出的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包括来自包含表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表2A中所述抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包括来自包含表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包括来自包含表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(或所有CDR)。在一个实施方案中，相对于表2A中所示的氨基酸序列，或由表2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个CDR，或密切相关的CDR，例如相同CDR或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如如表2A中所述选择的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Kabat等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Kabat等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Kabat等人的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据表2A所列的Kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Kabat等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Kabat等人的所有六个CDR(例如，根据表2A所列的Kabat定义的所有六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Kabat等人的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的所有六个CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括至少一个、两个或三个具有与本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体)的相应高变环相同的规范结构的高变环，例如与本文所述抗体的重链和/或轻链可变域的至少环1和/或环2具有相同的规范结构。高变环规范结构的描述参见，例如Chothia等人，(1992)J.Mol.Biol.227:799-817；Tomlinson等人，(1992)J.Mol.Biol.227:776-798。这些结构可以通过查看这些参考文献中描述的表来确定。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述选择的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的根据Chothia等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Chothia等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的根据Chothia等人的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Chothia等人的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Chothia等人的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据表2A所列的Chothia定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Chothia等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据Chothia等人的所有六个CDR(例如，根据表2A所列的Kabat定义的所有六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据Chothia等人的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的所有六个CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述选择的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区的根据组合的CDR的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的组合的CDR定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据组合的CDR的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的轻链可变区的根据组合的CDR的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据表2A所列的组合的CDR定义的至少一个、两个或三个CDR)；或相对于表2A中所示的根据组合的CDR的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个或三个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据组合的CDR的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据表2A所列的组合的CDR定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据组合的CDR的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表2A中所述的抗体，或由表2A中的核苷酸序列编码的抗体；或与前述序列中任何序列基本相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同))的重链可变区和轻链可变区的根据组合的CDR的所有六个CDR(例如，根据表2A所列的组合的CDR定义的所有六个CDR)；或相对于表2A中所示的根据组合的CDR的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换)的所有六个CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子可以包括本文所述的任何CDR。

在一些实施方案中，表1A中所列出的组合的CDR为包括Kabat CDR和Chothia CDR的CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括CDR或高变环的组合，其被标识为表1A中的组合的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，可以包含CDR或高变环的任何组合，如表1A中所述的“组合的”CDR。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括根据Kabat等人和Chothia等人定义的或如表1A所述的CDR或高变环的组合。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，可以包含根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。

在一个实施方案中，例如在包含可变区、CDR(例如组合的CDR、Chothia CDR或Kabat CDR)或本文在例如表2A中提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子，或包含抗体的抗原结合片段(例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段)的抗体分子。在某些实施方案中，抗体分子包括多特异性分子，例如双特异性分子，例如，如本文所述的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括：

在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子的轻链或重链可变构架(例如包括至少FR1、FR2、FR3和任选FR4的区域)可以选自：(a)轻链或重链可变构架，包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(b)轻链或重链可变构架，包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(c)非人构架(例如，啮齿动物构架)；或(d)已被修饰的非人构架，例如去除抗原或细胞毒性决定簇，例如去免疫或部分人源化的非人构架。在一个实施方案中，轻链或重链可变构架区(特别是FR1、FR2和/或FR3)包括与人种系基因的VL或VH区段的构架相同或至少70％、75％、80％、85％、87％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同的轻链或重链可变构架序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含重链可变域，其相对于表2A所述氨基酸序列，例如整个可变区(例如图2A和2B所示)中的FR区的氨基酸序列，或在SEQ ID NO:23-25中的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个改变(例如氨基酸置换或缺失)。

备选地，或与本文所述的重链置换组合，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包含轻链可变域，其相对于本文所述抗体的氨基酸序列，例如整个可变区(例如图2A和2B所示)中的FR区的氨基酸序列，或在SEQ ID NO:26-30中的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个氨基酸改变(例如氨基酸置换或缺失)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括如图2A所示的一个、两个、三个或四个重链构架区，或与其基本上相同的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括如图2B所示的一个、两个、三个或四个轻链构架区，或与其基本上相同的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2B所示的轻链构架区1。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2B所示的轻链构架区2。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2B所示的轻链构架区3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2B所示的轻链构架区4。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在本文公开的一个或多个(例如所有)位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR1在位置1处包含天冬氨酸，例如根据Kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换。在一些实施方案中，FR1在位置2处包含天冬酰胺，例如根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，FR1在位置4处包含亮氨酸，例如根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；和根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；和根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(FR1)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括改变，例如根据Kabat编号在本文公开的一个或多个(例如所有)位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，FR3在位置66处包含甘氨酸，例如根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换。在一些实施方案中，FR3在位置69处包含天冬酰胺，例如根据Kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，FR3在位置71处包含酪氨酸，例如根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；和根据Kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(FR3)，所述构架区包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；根据Kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，所述轻链包含构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换；以及构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ IDNO:26的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换，以及根据Kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换；和(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:27的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换；和(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:28的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换；以及(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换；根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据Kabat编号在位置71处的置换，例如丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:29的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号在位置2处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；以及(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号在位置66处的置换，例如丝氨酸至甘氨酸置换；根据Kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换；和根据Kabat编号在位置71处的置换，例如丙氨酸至酪氨酸置换，例如如SEQ ID NO:29的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包含：(a)构架区1(FR1)，其包括根据Kabat编号的在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；和(b)构架区3(FR3)，其包括根据Kabat编号的在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2A所示的重链构架区1。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2A所示的重链构架区2。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2A所示的重链构架区3。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2A所示的重链构架区4。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2A所示的重链构架区1-4，例如SEQ ID NO:20-23。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括例如如图2B所示的轻链构架区1-4，例如SEQ ID NO:26-30。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包括重链构架区1-4，例如SEQ ID NO:23-25；和轻链构架区1-4,例如SEQ ID NO:26-30，或图2A和2B所示的那些。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子的重链或轻链可变域或两者包含氨基酸序列，其与本文公开的氨基酸基本相同，例如与本文所述抗体(例如，表2A所述的抗体，或由表2A的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同；或与本文所述抗体的可变区相差至少1或5个残基，但相差少于40、30、20或10个残基。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子包含至少一个、两个、三个或四个具有表2A所列的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表2A中所示序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基)的抗原结合区(例如，可变区)。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子，包括由具有表2A所列的核苷酸序列或与其基本相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表2A中所示序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸)的核酸编码的VH和/或VL域。

VH域，所述VH域包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQID NO:25的氨基酸序列、与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或

VL域，所述VL域包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VH域，所述VH域包含：SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

VL域，所述VL域包含：SEQ ID NO:26的氨基酸序列、与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VL域，所述VL域包含：SEQ ID NO:27的氨基酸序列、与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VL域，所述VL域包含：SEQ ID NO:28的氨基酸序列、与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VL域，所述VL域包含：SEQ ID NO:29的氨基酸序列、与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VL域，所述VL域包含：SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。

VH域，所述VH域包含：SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

VH域，所述VH域包含：SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是完整的抗体或其片段(例如，Fab、F(ab’)₂、Fv或单链Fv片段(scFv))。在实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子是单克隆抗体或具有单一特异性的抗体。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子也可以是人源化的、嵌合的、骆驼的、鲨鱼的或体外产生的抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子是人源化抗体分子。抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条，优选两条完整的重链，以及至少一条，优选两条完整的轻链)或可以包含抗原结合片段(例如Fab、F(ab’)₂、Fv、单链Fv片段、单域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子为多特异性分子，例如双特异性分子的形式，例如，如本文所述的。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区的重链恒定区(Fc)。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1或IgG2(例如人IgG1或IgG2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人IgG1。

在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子，例如抗TCRβV12抗体分子具有选自例如κ或λ，优选κ(例如人κ)的轻链恒定区的轻链恒定区。在一个实施方案中，恒定区被改变，例如使其突变，以修饰抗TCRβV抗体分子例如抗TCRβV12抗体分子的性质(例如增加或减少以下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。例如，恒定区在位置296(M至Y)、298(S至T)、300(T至E)、477(H至K)和478(N至F)处发生突变，以改变Fc受体结合(例如突变位置对应于SEQ ID NO：212或214的位置132(M至Y)、134(S至T)、136(T至E)、313(H至K)和314(N至F)；或SEQ ID NO：215、216、217或218的位置135(M至Y)、137(S至T)、139(T至E)、316(H至K)和317(N至F))。

抗体B-H.1包含含有SEQ ID NO:3280氨基酸序列的第一链和含有SEQ ID NO:3281氨基酸序列的第二链。

其他示例性人源化抗TCRB V12抗体在表2A中提供。在一些实施方案中，抗TCRβV12抗体是抗体B，例如人源化抗体B(抗体B-H)，如表2A中提供。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表2A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表2A中提供的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体B包含表2A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少95％同一性的序列。

表2A：结合至TCRVB 12例如TCRVB 12-3或TCRVB 12-4的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAb抗体B和人源化mAb抗体B-H.1至B-H.6。显示了重链和轻链CDR的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。

表3A.人IgG重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列

抗TCRβV5抗体

因此，在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV5结合的抗TCRβV抗体分子。在一些实施方案中，TCRβV5亚家族包括TCRβV5-5*01、TCRβV5-6*01、TCRβV5-4*01、TCRβV5-8*01、TCRβV5-1*01或其变体。

本公开内容的示例性抗TCRβV5抗体提供在表10A中。在一些实施方案中，抗TCRβV5是如表10A中提供的抗体C，例如，人源化抗体C(抗体C-H)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表10A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表10A中提供的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体C包含表10A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少95％同一性的序列。

表10A：抗TCRβV5抗体的氨基酸序列

结合至TCRVB 5例如TCRVB 5-5或TCRVB 5-6的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链CDR的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。

本公开内容的示例性抗TCRβV5抗体提供在表11A中。在一些实施方案中，抗TCRβV5是如表11A中提供的抗体E，例如，人源化抗体E(抗体E-H)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表11A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表11A中提供的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体E包含表11A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少95％同一性的序列。

在一些实施方案中，抗体E包含重链和/或轻链，所述重链包含SEQ ID NO:3284的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:3285的氨基酸序列，或与其具有至少95％同一性的序列。

表11A:抗TCRβV5抗体的氨基酸序列

在一些实施方案中，抗TCRβV5抗体分子包含表10A中所述抗体的VH和/或VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV5抗体分子包含表10A中所述抗体的VH和VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV5抗体分子包含表11A中所述抗体的VH和/或VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV5抗体分子包含表11A中所述抗体的VH和VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

抗TCRβV10抗体

因此，在一方面，本公开内容提供了与人TCRβV10亚家族成员结合的抗TCRβV抗体分子。在一些实施方案中，TCRβV10亚家族也称为TCRβV12。在一些实施方案中，TCRβV10亚家族包括：TCRβV10-1*01、TCRβV10-1*02、TCRβV10-3*01或TCRβV10-2*01或其变体。

本公开内容的示例性抗TCRβV10抗体提供在表12A中。在一些实施方案中，抗TCRβV10是如表12A中提供的抗体D，例如，人源化抗体D(抗体D-H)。在一些实施方案中，抗体D包含表12A中提供的一个或多个(例如，三个)轻链CDR和/或表12A中提供的一个或多个(例如，三个)重链CDR，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体D包含表12A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少95％同一性的序列。

表12A：抗TCRβV10抗体的氨基酸序列

结合至TCRBV 10例如TCRBV 10-1、TCRBV 10-2或TCRBV 10-3的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链CDR的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV10抗体分子包含表12A中所述抗体的VH或VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

在一些实施方案中，抗TCRβV10抗体分子包含表12A中所述抗体的VH和VL，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。

其他抗TCRVβ抗体

本公开内容的其他示例性抗TCRβV抗体提供在表13A中。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体是如表13A中提供的人源化抗体。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表13A中提供的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表13A中提供的HCCDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体包含表13A中提供的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，或与其具有至少95％同一性的序列。

表13A：其他抗TCRβV抗体的氨基酸序列

公开了与各种TCRVB家族结合的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链CDR的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。表中公开的抗体包括MPB2D5、CAS1.1.3、IMMU222、REA1062、JOVI-3和IMMU546。MPB2D5结合人TCRβV 20-1(TCRβV2，根据旧命名法)。CAS1.1.3结合人TCRβV 27(TCRβV14，根据旧命名法)。IMMU 222结合人TCRβV 6-5、TCRβV 6-6或TCRβV 6-9(TCRβV13.1，根据旧命名法)。REA1062结合人TCRβV 5-1。JOVI-3结合人TCRβV 28(TCRβV3.1，根据旧命名法)。IMMU546结合人TCRβV 2。

细胞因子分子和细胞因子抑制剂分子

细胞因子通常是例如通过信号转导途径影响细胞活性的多肽。因此，多特异性或多功能多肽的细胞因子是有用的，并且可以与受体介导的信号传导相关，该信号传导从细胞膜外传递信号以调节细胞内的应答。细胞因子是蛋白质信号传导化合物，其为免疫应答的介质。它们控制许多不同的细胞功能，包括增殖、分化和细胞存活/凋亡；细胞因子也参与多种病理生理过程，包括病毒感染和自身免疫性疾病。细胞因子在先天免疫***(单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)和适应性免疫***(T细胞和B细胞)的各种细胞的不同刺激下合成。细胞因子可分为两组：促炎的和抗炎的。包括IFNγ、IL-1、IL-6和TNF-α在内的促炎细胞因子主要来源于先天免疫细胞和Th1细胞。包括IL-10、IL-4、IL-13和IL-5在内的抗炎细胞因子由Th2免疫细胞合成。

本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其包括例如经工程化以包含一种或多种细胞因子分子，例如免疫调节性(例如促炎性)细胞因子及其变体，例如其功能变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子分子是白介素或其变体，例如其功能变体。在一些实施方案中，白介素是促炎白介素。在一些实施方案中，白介素选自白介素-2(IL-2)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)、白介素7(IL-7)或干扰素γ。在一些实施方案中，细胞因子分子是促炎细胞因子。

在某些实施方案中，细胞因子是单链细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子是多链细胞因子(例如，细胞因子包含2个或更多个(例如2个)多肽链。示例性的多链细胞因子是IL-12。

有用的细胞因子的实例包括但不限于GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α和TNFβ。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是选自以下的细胞因子：GM-CSF、IL-2、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-α、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β和TGF-β。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是选自IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IFN-α和IFN-γ的细胞因子。在某些实施方案中，使细胞因子突变以去除N-和/或O-糖基化位点。消除糖基化增加了重组生产中可获得的产物的均质性。

在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是IL-2。在具体的实施方案中，IL-2细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：激活的T淋巴细胞的增殖、激活的T淋巴细胞的分化、细胞毒性T细胞(CTL)活性、激活的B细胞的增殖、激活的B细胞的分化、天然杀伤(NK)细胞的增殖、NK细胞的分化、由激活的T细胞或NK细胞的细胞因子分泌，以及NK/淋巴细胞激活的杀伤细胞(LAK)抗肿瘤细胞毒性。在另一个特定的实施方案中，IL-2细胞因子是对IL-2受体的α-亚基具有降低的结合亲和力的突变体IL-2细胞因子。α-亚基(也称为CD 25)与β-亚基和γ-亚基(分别称为CD 122和CD132)一起形成异三聚体的高亲和力IL-2受体，而仅由β-亚基和γ-亚基组成的二聚体受体称为中等亲和力IL-2受体。如在PCT专利申请号PCT/EP2012/051991中描述的(其通过引用整体并入本文)，与IL-2受体的α-亚基的结合减少的突变体IL-2多肽，与野生型IL-2多肽相比，具有降低的在调节性T细胞中诱导IL-2信号传导的能力，在T细胞中诱导更少的激活诱导的细胞死亡(AICD)，并且在体内具有降低的毒性特征。这种具有降低的毒性的细胞因子的使用在本发明的多特异性或多功能多肽中特别有利，该多肽由于存在Fc结构域而具有较长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能多肽的突变体IL-2细胞因子包含至少一种氨基酸突变，其与未突变的IL-2细胞因子相比，降低或消除了突变体IL-2细胞因子对IL-2受体的α-亚基(CD25)的亲和力，但保留突变体IL-2细胞因子对中等亲和力IL-2受体(由IL-2受体的β和γ亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸突变是氨基酸置换。在一个具体的实施方案中，突变体IL-2细胞因子在选自对应于人IL-2的残基42、45和72的位置的一个、两个或三个位置上包含一个、两个或三个氨基酸置换。在更具体的实施方案中，突变体IL-2细胞因子在对应于人IL-2的残基42、45和72的位置上包含三个氨基酸置换。在甚至更具体的实施方案中，突变体IL-2细胞因子是人IL-2，其包含氨基酸置换F42A、Y45A和L72G。在一个实施方案中，突变体IL-2细胞因子在与人IL-2的位置3相对应的位置处另外包含氨基酸突变，这消除了IL-2的O-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是通过丙氨酸残基代替苏氨酸残基的氨基酸置换。可用于本发明的特定的突变体IL-2细胞因子在对应于人IL-2的残基3、42、45和72的位置处包含四个氨基酸置换。特定的氨基酸置换是T3A、F42A、Y45A和L72G。如PCT专利申请号PCT/EP2012/051991和所附实施例所示，所述四重突变体IL-2多肽(IL-2 qm)与CD25没有可检测的结合，在T细胞中诱导凋亡的能力降低，在T.sub.reg细胞中诱导IL-2信号传导的能力降低，以及体内毒性特征降低。但是，它保留了激活效应细胞中IL-2信号传导，诱导效应细胞增殖以及由NK细胞产生IFN-γ作为次级细胞因子的能力。

根据上述实施方案中任一项的IL-2或突变体IL-2细胞因子可包含提供进一步的优势例如增加的表达或稳定性的其他突变。例如，位置125处的半胱氨酸可以用中性氨基酸例如丙氨酸代替，以避免形成二硫键桥接的IL-2二聚体。因此，在某些实施方案中，本发明的多特异性或多功能多肽的IL-2或突变体IL-2细胞因子在对应于人IL-2的残基125的位置处包含另外的氨基酸突变。在一个实施方案中，所述另外的氨基酸突变是氨基酸置换C125A。

在一个具体的实施方案中，多特异性或多功能多肽的IL-2细胞因子包含SEQ IDNO:7227的多肽序列[APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT]。在另一个具体的实施方案中，多特异性或多功能多肽的IL-2细胞因子包含SEQ ID NO:7228的多肽序列[APASSSTKKTQLQLEHLLLD LQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT]。

在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是IL-12。在具体的实施方案中，所述IL-12细胞因子是单链IL-12细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链IL-12细胞因子包含SEQ ID NO:7229的多肽序列[IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS]。在一个实施方案中，IL-12细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：NK细胞的增殖、NK细胞的分化、T细胞的增殖和T细胞的分化。

在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是IL-10。在具体的实施方案中，所述IL-10细胞因子是单链IL-10细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链IL-10细胞因子包含SEQ ID NO:7230的多肽序列[SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRNGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN]。在另一个具体的实施方案中，IF-10细胞因子是单体IF-10细胞因子。在更具体的实施方案中，单体IF-10细胞因子包含SEQ ID NO:7231的多肽序列[SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENGGGSGGKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN]。在一个实施方案中，IL-10细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：抑制细胞因子分泌、抑制抗原呈递细胞的抗原呈递、减少氧自由基释放和抑制T细胞增殖。根据本发明的多特异性或多功能多肽，其中细胞因子是IL-10，特别适用于下调炎症，例如用于治疗炎性疾病。

在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是IL-15。在具体的实施方案中，所述IL-15细胞因子是对IL-15受体的α-亚基具有降低的结合亲和力的突变体IL-15细胞因子。不希望受到理论的束缚，与野生型IL-15多肽相比，与IL-15受体的α-亚基的结合减少的突变体IL-15多肽具有降低的与整个身体的成纤维细胞结合的能力，从而导致改善其药代动力学和毒性特征。使用毒性降低的细胞因子，如所述的突变体IL-2和突变体IL-15效应子部分，在根据本发明的多特异性或多功能多肽中特别有利，该多肽由于存在Fc结构域而具有较长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能多肽的突变体IL-15细胞因子包含至少一种氨基酸突变，与未突变的IL-15细胞因子相比，其降低或消除了突变体IL-15细胞因子对IL-15受体的α-亚基的亲和力，但保留突变体IL-15细胞因子对中等亲和力IL-15/IL-2受体(由IL-15/IL-2受体的β-亚基和γ-亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，氨基酸突变是氨基酸置换。在具体的实施方案中，突变体IL-15细胞因子在对应于人IL-15的残基53的位置处包含氨基酸置换。在更具体的实施方案中，突变体IL-15细胞因子是包含氨基酸置换E53A的人IL-15。在一个实施方案中，突变体IL-15细胞因子在对应于人IL-15的位置79的位置处另外包含氨基酸突变，其消除了IL-15的N-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是用丙氨酸残基代替天冬酰胺残基的氨基酸置换。在甚至更具体的实施方案中，IL-15细胞因子包含SEQ ID NO:7232[NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLASGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGAVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS]的多肽序列。在一个实施方案中，IF-15细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：激活的T淋巴细胞的增殖、激活的T淋巴细胞的分化、细胞毒性T细胞(CTL)活性、激活的B细胞的增殖、激活的B细胞的分化、天然杀伤(NK)细胞的增殖、NK细胞的分化、由激活的T细胞或NK细胞的细胞因子分泌，以及NK/淋巴细胞激活的杀伤细胞(FAK)抗肿瘤细胞毒性。

可用作多特异性或多功能多肽中的效应子部分的突变体细胞因子分子可以使用本领域熟知的遗传或化学方法通过缺失、置换、***或修饰来制备。遗传方法可包括编码DNA序列的位点特异性诱变、PCR、基因合成等。正确的核苷酸改变可以例如通过测序来验证。置换或***可涉及天然以及非天然氨基酸残基。氨基酸修饰包括众所周知的化学修饰方法，例如添加或去除糖基化位点或碳水化合物附着等。

在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是GM-CSF。在具体的实施方案中，GM-CSF细胞因子可以在粒细胞、单核细胞或树突细胞中引起增殖和/或分化。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是IFN-α。在具体的实施方案中，IFN-α细胞因子可以引起选自以下的一种或多种细胞应答：抑制病毒感染的细胞中的病毒复制，以及上调主要组织相容性复合体I(MHC I)的表达。在另一个具体的实施方案中，IFN-α细胞因子可以抑制肿瘤细胞的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是IFNγ。在具体的实施方案中，IFNγ细胞因子可以引起选自以下的一种或多种细胞应答：增加的巨噬细胞活性、增加的MHC分子表达和增加的NK细胞活性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是IL-7。在具体的实施方案中，IL-7细胞因子可引起T和/或B淋巴细胞的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是IL-8。在具体的实施方案中，IL-8细胞因子可以引起嗜中性粒细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能的细胞因子，特别是单链细胞因子多肽是MIP-1α。在具体的实施方案中，MIP-1α细胞因子可引起单核细胞和T淋巴细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是MIR-1β。在具体的实施方案中，MIR-1β细胞因子可引起单核细胞和T淋巴细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是TGF-β。在具体的实施方案中，TGF-β细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：单核细胞的趋化性、巨噬细胞的趋化性、激活的巨噬细胞中IL-1表达的上调，和激活的B细胞中IgA表达的上调。

在一个实施方案中，本发明的多特异性或多功能多肽以比对照细胞因子大至少约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍的解离常数(K_D)结合细胞因子受体。在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽以比对应的包括两个或更多个效应子部分的多特异性或多功能多肽高至少2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的K_D结合细胞因子受体。在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽以比对应的包含两种或更多种细胞因子的多特异性或多功能多肽大10倍的解离常数K_D与细胞因子受体结合。

在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括细胞因子分子。在实施方案中，细胞因子分子包括细胞因子的全长、片段或变体；细胞因子受体结构域，例如，细胞因子受体二聚结构域；或细胞因子受体的激动剂，例如针对细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。

在一些实施方案中，细胞因子分子选自IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-7、IL-21或干扰素γ，或其片段或变体，或任何上述细胞因子的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可以进一步包括细胞因子受体二聚结构域。

在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如针对选自IL-15Ra或IL-21R的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。

在一个实施方案中，细胞因子分子是IL-15，例如人IL-15，例如，包含氨基酸序列：NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:7017)，其片段，或与其基本相同(例如与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7017的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在一些实施方案中，细胞因子分子包含受体二聚结构域，例如IL15Rα二聚结构域。在一个实施方案中，IL15Rα二聚结构域包含氨基酸序列：MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVL(SEQ ID NO:7018)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7018的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如IL-15)和受体二聚结构域(例如IL15Rα二聚结构域)例如通过接头(例如Gly-Ser接头，例如，包含氨基酸序列SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(SEQ ID NO:7019)的接头)共价连接。在其他实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如IL-15)和受体二聚结构域(例如IL15Rα二聚结构域)没有共价连接，例如是非共价缔合的。

在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-2，例如人IL-2，例如，包含氨基酸序列：APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:7020)，其片段，或与其基本相同(例如与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7020的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-18，例如人IL-18，例如，包含氨基酸序列：YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:7021)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQID NO:7021的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-21，例如人IL-21，例如，包含氨基酸序列：QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:7022)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7022的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，细胞因子分子是干扰素γ，例如人干扰素γ，例如，包含氨基酸序列：

QDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRG(SEQ IDNO:7023)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7023的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

TGF-β抑制剂

本公开内容尤其进一步提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能分子，其包含，例如，被工程化为含有，一种或多种细胞因子抑制剂分子，例如，免疫调节性(例如促炎性)细胞因子的抑制剂，及其变体，例如，功能变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子抑制剂分子是TGF-β抑制剂。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂结合至并且抑制TGF-β，例如，降低TGF-β的活性。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1(例如，降低其活性)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β2(例如，降低其活性)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β3(例如，降低其活性)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1和TGF-β3(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3(例如，降低其活性)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGF-β受体的能够抑制TGF-β(例如，降低其活性)的部分(例如，TGF-β受体的胞外域)，或其功能片段或变体。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外域或其功能变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外域或其功能变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外域或其功能变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外域或其功能变体)和TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外域或其功能变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外域或其功能变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外域或其功能变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外域或其功能变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外域或其功能变体)。

可用作TGF-β抑制剂的示例性TGF-β受体多肽已公开在US8993524、US9676863、US8658135、US20150056199、US20070184052和WO2017037634中，其全部通过引用而整体地并入本文中。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7257的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7258的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7259的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7266的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7267的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7260的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7261的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7262的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7263的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7264的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7265的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7268的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7269的胞外域或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:7270的氨基酸序列或与其基本相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。

在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含不超过一个TGF-β受体胞外域。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含(例如经由接头)连接在一起的两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)TGF-β受体胞外域。

表16.TGF-β多肽或TGF-β受体多肽的示例性氨基酸序列

免疫细胞衔接物

本文公开的多特异性或多功能分子的免疫细胞衔接物可以介导与免疫细胞例如免疫效应细胞的结合和/或活化。在一些实施方案中，免疫细胞选自T细胞、NK细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞衔接物，或其组合。在一些实施方案中，免疫细胞衔接物选自T细胞衔接物、NK细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物中的一个、两个、三个或全部，或其组合。免疫细胞衔接物可以是免疫***的激动剂。在一些实施方案中，免疫细胞衔接物可以是抗体分子、配体分子(例如，进一步包含免疫球蛋白恒定区，例如Fc区的配体)、小分子、核苷酸分子。

天然杀伤细胞衔接物

天然杀伤(NK)细胞以独立于抗体的方式识别和破坏肿瘤和病毒感染的细胞。NK细胞的调节是通过激活和抑制NK细胞表面的受体来介导的。激活受体的一个家族是天然细胞毒性受体(NCR)，其包括NKp30、NKp44和NKp46。例如，NCR可以通过识别癌细胞上的硫酸乙酰肝素来启动肿瘤靶向。NKG2D是一种受体，可在激活的杀伤(NK)细胞上提供刺激性和共刺激性先天免疫应答，从而导致细胞毒活性。DNAM1是参与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞介导的细胞间粘附、淋巴细胞信号传导、细胞毒性和淋巴因子分泌的受体。DAP10(也称为HCST)是一种跨膜衔接蛋白，可与KLRK1缔合形成淋巴样和髓样细胞中的激活受体KLRK1-HCST；该受体在触发针对表达细胞表面配体(例如MHC I类链相关的MICA和MICB)和U(任选地L1)6-结合蛋白(ULBP)的靶细胞的细胞毒性中起主要作用；KLRK1-HCST受体在针对肿瘤的免疫监视中起作用，并且是肿瘤细胞的细胞溶解所必需的；实际上，不表达KLRK1配体的黑色素瘤细胞逃脱了NK细胞介导的免疫监视。CD16是IgG Fc区的受体，它结合复合或聚集的IgG以及单体IgG，从而介导抗体依赖性的细胞毒性(ADCC)和其他抗体依赖性应答，例如吞噬作用。不希望受限于理论，结合、招募和/或激活如以上公开的那些受体(例如，NKp30、NKp36、NKG2D或CD16)的NK细胞衔接物被认为可以使免疫***活性靶向靶细胞(例如，包含TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的细胞)，例如，促进靶细胞的细胞死亡或溶解。

本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双，三，四特异性)或多功能分子，其被工程化为包含一个或多个介导与NK细胞结合和/或激活NK细胞的NK细胞衔接物。因此，在一些实施方案中，NK细胞衔接物选自结合(例如激活)以下项的抗原结合域或配体：NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例如，CD16a、CD16b或两者)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(也称为SLAMF4或2B4)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2E或CD160。

在一些实施方案中，NK细胞衔接物是与NKp30(例如，NKp30在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域并且包含表7-10中公开的任何CDR氨基酸序列、构架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞衔接物是与NKp30(例如，NKp30在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域并且包含美国专利号6,979,546、美国专利号9,447,185、PCT申请号WO2015121383A1、PCT申请号WO2016110468A1、PCT申请号WO2004056392A1或美国申请公开号US20070231322A1中公开的任何CDR氨基酸序列、构架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列，其序列通过引用并入本文。在一些实施方案中，NK细胞衔接物的结合，例如，与NKp30结合的抗原结合域与NK细胞的结合激活NK细胞。与NKp30(例如，NKp30在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域可被称为靶向NKp30、NK细胞或两者。

在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括表7、表18或表8中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括表7、表18或表8中公开的一个或多个构架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括表9中公开的VH和/VL或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，可将表9中公开的任何VH域与表9中公开的任何VL域配对以形成与NKp30结合的抗原结合域。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括表10中公开的氨基酸序列或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。

在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括VH，所述VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，以及VL，所述VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。

在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和6002的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7313、7385和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、7315、7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、6002、6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008、6009、6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7385、7315、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318、6009、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7298或7300-7304的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)并且/或者VL包含选自SEQ ID NO:7299或7305-7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7305的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6121或6123-6128的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)并且/或者VL包含选自SEQ ID NO:7294或6137-6141的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6122或6129-6134的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)并且/或者VL包含选自SEQ ID NO:6136或6142-6147的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7295和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7297和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:6122和6136的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。

在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括SEQ ID NO:7310的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括SEQ ID NO:7311的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合域包括SEQ ID NO:6187、6188、6189或6190的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6003的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6066的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6003的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6066的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6010的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6073的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6010的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6073的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6014的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6014的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6077的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6077的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6018的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6018的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6081的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6081的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6022的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6022的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6085的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6085的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6026的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6026的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6089的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6089的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6030的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6030的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6093的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6093的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6035的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6035的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6039的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6039的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6097的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6097的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6043的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6043的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6101的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6101的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6047的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6047的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6105的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6105的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6051的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6051的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6109的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6109的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6055的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6055的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6113的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6113的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6059的重链构架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6059的VHFWR1氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列(或相对于其具有不超过1、2、3、4、5或6个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6117的轻链构架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6117的VLFWR1氨基酸序列(或具有不超过1、2或3个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列(或具有不超过1个突变，例如，置换、添加或缺失的序列)和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQID NO:6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6149具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQID NO:6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6152具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VL，所述VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括VH，所述VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。

在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合域包括scFv。在一些实施方案中，scFv包含选自SEQ ID NO:6187-6190的氨基酸序列，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。

表7.NKp30靶向抗原结合域的示例性重链CDR和FWR

表18.NKp30靶向抗原结合域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)

表8.NKp30靶向抗原结合域的示例性轻链CDR和FWR

表9.NKp30靶向抗原结合域的示例性可变区

表10.示例性的NKp30靶向抗原结合域/抗体分子

在一些实施方案中，NK细胞衔接物是与NKp46(例如，NKp46在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、构架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞衔接物的结合，例如，与NKp46结合的抗原结合域与NK细胞的结合激活NK细胞。与NKp46(例如，NKp46在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域可被称为靶向NKp46、NK细胞或两者。

在一些实施方案中，NK细胞衔接物是与NKG2D(例如，NKG2D在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、构架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞衔接物的结合，例如，与NKG2D结合的抗原结合域与NK细胞的结合激活NK细胞。与NKG2D(例如，NKG2D在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域可被称为靶向NKG2D、NK细胞或两者。

在一些实施方案中，NK细胞衔接物是与CD16(例如，CD16在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、构架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞衔接物的结合，例如，与CD16结合的抗原结合域与NK细胞的结合激活NK细胞。与CD16(例如，CD16在NK细胞的表面存在，例如，表达或展示)结合的抗原结合域可被称为靶向CD16、NK细胞或两者。

表15.NKp46、NKG2D或CD16靶向抗原结合域的示例性可变区

在一个实施方案中，NK细胞衔接物是NKp30的配体，例如B7-6，例如，包含以下氨基酸序列：

DLKVEMMAGGTQITPLNDNVTIFCNIFYSQPLNITSMGITWFWKSLTFDKEVKVFEFFGDHQEAFRPGAIVSPWRLKSGDASLRLPGIQLEEAGEYRCEVVVTPLKAQGTVQLEVVASPASRLLLDQVGMKENEDKYMCESSGFYPEAINITWEKQTQKFPHPIEISEDVITGPTIKNMDGTFNVTSCLKLNSSQEDPGTVYQCVVRHASLHTPLRSNFTLTAARHSLSETEKTDNFS(SEQ ID NO:7233)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7233的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是NKp44或NKp46的配体，即病毒HA。病毒血凝素(HA)是病毒表面的糖蛋白。HA蛋白允许病毒通过唾液酸糖部分与细胞膜结合，唾液酸糖部分有助于病毒膜与细胞膜融合(参见例如，Eur J Immunol.2001年9月；31(9):2680-9“Recognition of viral hemagglutinins by NKp44 but not by NKp30”；以及Nature.2001年2月22日；409(6823):1055-60“Recognition of haemagglutinins onvirus-infected cells by NKp46 activates lysis by human NK cells”，其各自的内容均通过引用并入本文)。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是选自MICA、MICB或ULBP1的NKG2D配体，例如，其中：

(i)MICA包含氨基酸序列：

EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHW(SEQ ID NO:7234)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7234的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列；

(ii)MICB包含氨基酸序列：

AEPHSLRYNLMVLSQDESVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKVLVLQSQRTD(SEQ IDNO:7235)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7235的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列；或者

(iii)ULBP1包含氨基酸序列：

GWVDTHCLCYDFIITPKSRPEPQWCEVQGLVDERPFLHYDCVNHKAKAFASLGKKVNVTKTWEEQTETLRDVVDFLKGQLLDIQVENLIPIEPLTLQARMSCEHEAHGHGRGSWQFLFNGQKFLLFDSNNRKWTALHPGAKKMTEKWEKNRDVTMFFQKISLGDCKMWLEEFLMYWEQMLDPTKPPSLAPG(SEQ ID NO:7236)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7236的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是选自NECTIN2或NECL5的DNAM1配体，例如，其中：

(i)NECTIN2包含氨基酸序列：

QDVRVQVLPEVRGQLGGTVELPCHLLPPVPGLYISLVTWQRPDAPANHQNVAAFHPKMGPSFPSPKPGSERLSFVSAKQSTGQDTEAELQDATLALHGLTVEDEGNYTCEFATFPKGSVRGMTWLRVIAKPKNQAEAQKVTFSQDPTTVALCISKEGRPPARISWLSSLDWEAKETQVSGTLAGTVTVTSRFTLVPSGRADGVTVTCKVEHESFEEPALIPVTLSVRYPPEVSISGYDDNWYLGRTDATLSCDVRSNPEPTGYDWSTTSGTFPTSAVAQGSQLVIHAVDSLFNTTFVCTVTNAVGMGRAEQVIFVRETPNTAGAGATGG(SEQ ID NO:7237)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7237的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列；或者

(ii)NECL5包含氨基酸序列：

WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7238的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是DAP10的配体，该配体是NKG2D的衔接子(参见例如Proc Natl Acad Sci U S A.2005年5月24日；102(21):7641-7646；和Blood，2011年9月15日，第118卷第11期，其各自的全部内容通过引用并入本文。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CD 16的配体，该配体是CD16a/b配体，例如，进一步包含抗体Fc区的CD16a/b配体(参见，例如，Front Immunol.2013；4:76讨论了抗体如何使用Fc通过CD16触发NK细胞，其全部内容并入本文)。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CRTAM的配体，即NECL2，例如其中NECL2包含氨基酸序列：

QNLFTKDVTVIEGEVATISCQVNKSDDSVIQLLNPNRQTIYFRDFRPLKDSRFQLLNFSSSELKVSLTNVSISDEGRYFCQLYTDPPQESYTTITVLVPPRNLMIDIQKDTAVEGEEIEVNCTAMASKPATTIRWFKGNTELKGKSEVEEWSDMYTVTSQLMLKVHKEDDGVPVICQVEHPAVTGNLQTQRYLEVQYKPQVHIQMTYPLQGLTREGDALELTCEAIGKPQPVMVTWVRVDDEMPQHAVLSGPNLFINNLNKTDNGTYRCEASNIVGKAHSDYMLYVYDPPTTIPPPTTTTTTTTTTTTTILTIITDSRAGEEGSIRAVDH(SEQ ID NO:7239)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7239的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CD27的配体，即CD70，例如，其中CD70包含氨基酸序列：

QRFAQAQQQLPLESLGWDVAELQLNHTGPQQDPRLYWQGGPALGRSFLHGPELDKGQLRIHRDGIYMVHIQVTLAICSSTTASRHHPTTLAVGICSPASRSISLLRLSFHQGCTIASQRLTPLARGDTLCTNLTGTLLPSRNTDETFFGVQWVRP(SEQ ID NO:7240)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7240的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是PSGL1的配体，即L-选择蛋白(CD62L)，例如，其中L-选择蛋白包含氨基酸序列：

WTYHYSEKPMNWQRARRFCRDNYTDLVAIQNKAEIEYLEKTLPFSRSYYWIGIRKIGGIWTWVGTNKSLTEEAENWGDGEPNNKKNKEDCVEIYIKRNKDAGKWNDDACHKLKAALCYTASCQPWSCSGHGECVEIINNYTCNCDVGYYGPQCQFVIQCEPLEAPELGTMDCTHPLGNFSFSSQCAFSCSEGTNLTGIEETTCGPFGNWSSPEPTCQVIQCEPLSAPDLGIMNCSHPLASFSFTSACTFICSEGTELIGKKKTICESSGIWSNPSPICQKLDKSFSMIKEGDYN(SEQ ID NO:7241)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQID NO:7241的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CD96的配体，即NECL5，例如其中NECL5包含氨基酸序列：

WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7239的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CD 100(SEMA4D)的配体，即CD72，其中CD72包含氨基酸序列：

RYLQVSQQLQQTNRVLEVTNSSLRQQLRLKITQLGQSAEDLQGSRRELAQSQEALQVEQRAHQAAEGQLQACQADRQKTKETLQSEEQQRRALEQKLSNMENRLKPFFTCGSADTCCPSGWIMHQKSCFYISLTSKNWQESQKQCETLSSKLATFSEIYPQSHSYYFLNSLLPNGGSGNSYWTGLSSNKDWKLTDDTQRTRTYAQSSKCNKVHKTWSWWTLESESCRSSLPYICEMTAFRFPD(SEQ ID NO:7242)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7242的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是NKp80的配体，即CLEC2B(AICL)，例如其中CLEC2B(AICL)包含氨基酸序列：

KLTRDSQSLCPYDWIGFQNKCYYFSKEEGDWNSSKYNCSTQHADLTIIDNIEEMNFLRRYKCSSDHWIGLKMAKNRTGQWVDGATFTKSFGMRGSEGCAYLSDDGAATARCYTERKWICRKRIH(SEQ ID NO:7243)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7243的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，NK细胞衔接物是CD244的配体，即CD48，例如，其中CD48包含氨基酸序列：

QGHLVHMTVVSGSNVTLNISESLPENYKQLTWFYTFDQKIVEWDSRKSKYFESKFKGRVRLDPQSGALYISKVQKEDNSTYIMRVLKKTGNEQEWKIKLQVLDPVPKPVIKIEKIEDMDDNCYLKLSCVIPGESVNYTWYGDKRPFPKELQNSVLETTLMPHNYSRCYTCQVSNSVSSKNGTVCLSPPCTLARS(SEQ ID NO:7244)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于SEQ ID NO:7244的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在一些实施方案中，NK细胞衔接物是病毒血凝素(HA)，HA是在流感病毒表面上发现的糖蛋白。它负责使病毒与膜上带有唾液酸的细胞，例如上呼吸道中的细胞或红细胞结合。HA具有至少18种不同的抗原。这些亚型被命名为H1至H18。NCR可以识别病毒蛋白。已经证明NKp46能够与流感的HA和副粘病毒(包括仙台病毒和新城疫病毒)的HA-NA相互作用。除了NKp46，NKp44也可以在功能上与不同流感亚型的HA相互作用。

死亡受体信号衔接物

死亡受体，例如，死亡受体4和5(DR4和DR5，也分别称为TRAIL-R1和TRAIL-R2)，是在正常人组织中广泛表达的三聚体I型跨膜蛋白。死亡受体的激活导致诱导细胞死亡的细胞内信号传导。TNF-相关的凋亡诱导配体(TRAIL)(也称为Apo2L)是三聚体蛋白，其结合死亡受体，并激活它们的诱导细胞死亡的信号传导(Amarante-Mendes和Griffith.PharmacolTher.2015年11月；155:117-31)。

本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能分子，其被工程化为包含一种或多种死亡受体信号衔接物，所述死亡受体信号衔接物在靶细胞(例如，包含TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的T细胞)上介导与死亡受体的结合和/或死亡受体信号传导的激活。因此，在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含一个或多个TRAIL多肽或其片段(TRAIL分子)、一个或多个死亡受体或其片段(死亡受体分子)或与死亡受体特异性结合的一个或多个抗原结合域(例如，并且激活死亡受体信号传导)。不希望受限于理论，可激活靶细胞上的死亡受体信号传导的死亡受体信号衔接物被认为可以诱导靶细胞(例如，靶疾病细胞(例如，包含TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的T细胞))的死亡。

死亡受体信号衔接物可以包含来自或衍生于本领域技术人员已知的TRAIL和死亡受体变化形式的TRAIL分子和/或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含人的TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含小鼠的TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含哺乳动物的TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含(例如，相对于野生型的TRAIL分子或死亡受体分子)截短的TRAIL分子或死亡受体分子。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含截短的TRAIL分子，其包含至少与人TRAIL的氨基酸95-281对应的残基，例如，包含与人TRAIL的氨基酸95-281对应的残基的截短的TRAIL分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含截短的TRAIL分子，其包含人TRAIL的95-281的残基。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含截短的TRAIL分子，其包含至少与人TRAIL的氨基酸122-281对应的残基，例如，包含与人TRAIL的氨基酸122-281对应的残基的截短的TRAIL分子。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含截短的TRAIL分子，其包含人TRAIL的122-281的残基。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含一个、两个或三个TRAIL分子(例如，死亡受体信号衔接物分别是单体的、二聚体的或三聚体的TRAIL分子)。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含一个、两个或三个死亡受体分子(例如，死亡受体信号衔接物分别是单体的、二聚体的或三聚体的死亡受体分子)。在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含与死亡受体(例如，一个或多个死亡受体，例如，相同或不同的死亡受体)特异性结合的一个、两个或三个抗原结合域。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含选自表11的氨基酸序列(或与选自表11的序列具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6157的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6157具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6158的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6158具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6159的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6159具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6160的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6160具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6161的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6161具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6162的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6162具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6163的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6163具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6164的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6164具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物包含SEQ ID NO:6165的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6165具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。

在一些实施方案中，死亡受体信号衔接物被包含在相同的多肽链上作为本公开内容的多功能分子的另一组分，例如，死亡受体信号衔接物与优先地与淋巴细胞(例如，T细胞)上的TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)结合的第一抗原结合域的重链和/或轻链、免疫细胞衔接物、细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子被包含在相同的多肽链上，例如，作为融合蛋白。在一些实施方案中，多功能分子包含融合蛋白，所述融合蛋白包含死亡受体信号衔接物以及优先地与TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)结合的第一抗原结合域的轻链。在一些实施方案中，多功能分子包含融合蛋白，所述融合蛋白包含死亡受体信号衔接物以及选择性靶向表达TCRBV抗原(例如，对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原)的淋巴细胞的第一抗原结合域的轻链。

表11.示例性死亡受体信号衔接物

T细胞衔接物

本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其被工程化以包含介导与T细胞结合和/或激活的一个或多个T细胞衔接物。因此，在一些实施方案中，T细胞衔接物选自与以下一种或多种结合(并且例如在一些实施方案中进行激活)的抗原结合域或配体：CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226。在其他实施方案中，T细胞衔接物选自与以下一种或多种结合但不进行激活的抗原结合域或配体：CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226。

B细胞、巨噬细胞和树突细胞衔接物

宽泛地说，B细胞(也称为B淋巴细胞)是淋巴细胞亚型的一种白细胞。它们通过分泌抗体在适应性免疫***的体液免疫成分中起作用。此外，B细胞呈递抗原(它们也被分类为专业抗原呈递细胞(APC))并分泌细胞因子。巨噬细胞是一种白细胞，通过吞噬作用吞噬并消化细胞碎片、异物、微生物、癌细胞。除吞噬作用外，它们在非特异性防御(先天免疫)中起重要作用，并通过募集其他免疫细胞(如淋巴细胞)来帮助启动特异性防御机制(适应性免疫)。例如，它们作为T细胞的抗原呈递者很重要。除了增加炎症和刺激免疫***外，巨噬细胞还起重要的抗炎作用，并且可以通过释放细胞因子来降低免疫应答。树突细胞(DC)是抗原呈递细胞，作用于处理抗原物质并将其在细胞表面呈递给免疫***的T细胞。

本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其包括例如经工程化以包含一种或多种介导与B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的结合和/或激活的B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物。

因此，在一些实施方案中，免疫细胞衔接物包括选自以下的一种或多种的B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物：CD40配体(CD40L)或CD70配体；与CD40或CD70结合的抗体分子；针对OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体的激动剂(例如，如本文所述，例如TLR4，例如组成型活性TLR4(caTLR4)，或TLR9激动剂)；41BB；CD2；CD47；或STING激动剂，或其组合。

在一些实施方案中，B细胞衔接物是CD40L、OX40L或CD70配体，或与OX40，CD40或CD70结合的抗体分子。

在一些实施方案中，巨噬细胞衔接物是CD2激动剂。在一些实施方案中，巨噬细胞衔接物是与以下结合的抗原结合域：CD40L或与CD40结合的抗原结合域或配体、Toll样受体(TLR)激动剂(例如，如本文所述)，例如TLR9或TLR4(例如caTLR4(组成型活性TLR4))、CD47或STING激动剂。在一些实施方案中，STING激动剂是环二核苷酸，例如环二GMP(cdGMP)或环二AMP(cdAMP)。在一些实施方案中，STING激动剂是生物素化的。

在一些实施方案中，树突细胞衔接物是CD2激动剂。在一些实施方案中，树突细胞衔接物是与以下一种或多种结合的配体、受体激动剂或抗体分子：OX40L、41BB、TLR激动剂(例如，如本文所述)(例如TLR9激动剂、TLR4(例如caTLR4(组成型活性TLR4))、CD47或STING激动剂。在一些实施方案中，STING激动剂是环二核苷酸，例如环二GMP(cdGMP)或环二AMP(cdAMP)。在一些实施方案中，STING激动剂是生物素化的。

在其他实施方案中，免疫细胞衔接物介导与B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一个或多个的结合或激活。示例性的B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物可以选自以下一种或多种：CD40配体(CD40L)或CD70配体；与CD40或CD70结合的抗体分子；针对OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体激动剂(例如TLR4，例如组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；41BB激动剂；CD2；CD47；或STING激动剂，或其组合。

在一些实施方案中，B细胞衔接物选自CD40L、OX40L或CD70配体或与OX40、CD40或CD70结合的抗体分子中的一种或多种。

在其他实施方案中，巨噬细胞衔接物选自以下一种或多种：CD2激动剂；CD40L；OX40L；与OX40、CD40或CD70结合的抗体分子；Toll样受体激动剂或其片段(例如TLR4，例如组成型活性TLR4(caTLR4))；CD47激动剂；或STING激动剂。

在其他实施方案中，树突细胞衔接物选自以下一种或多种：CD2激动剂、OX40抗体、OX40L、41BB激动剂、Toll样受体激动剂或其片段(例如TLR4，例如组成型活性TLR4(caTLR4))、CD47激动剂或STING激动剂。

在一个实施方案中，OX40L包含氨基酸序列：

QVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL(SEQ ID NO:7245)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7245的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，CD40L包含氨基酸序列：

MQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQ ID NO:7246)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQID NO:7246的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

在其他实施方案中，STING激动剂包含环二核苷酸，例如环二GMP(cdGMP)、环二AMP(cdAMP)或其组合，任选地具有2',5'或3',5'磷酸酯键。

在一个实施方案中，免疫细胞衔接物包括41BB配体，例如，其包含氨基酸序列：

ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:7247)，其片段，或与其基本相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对SEQ ID NO:7247的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过5、10或15个改变(例如，置换、缺失或***，例如保守置换))的氨基酸序列。

Toll样受体

Toll样受体(TLR)是进化保守的受体，是果蝇属Toll蛋白的同源物，可识别被称为病原体相关微生物模式(PAMP)(仅由微生物病原体表达)或与危险相关的分子模式(DAMP)(从坏死或垂死细胞释放的内源性分子)的高度保守的结构基序。PAMP包括各种细菌细胞壁组分，例如脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和脂肽，以及鞭毛蛋白、细菌DNA和病毒双链RNA。DAMP包括细胞内蛋白(例如热激蛋白)以及来自细胞外基质的蛋白质片段。相应的PAMP或DAMP对TLR的刺激会引发信号级联反应，从而导致转录因子(例如AP-1、NF-κB和干扰素调节因子(IRF))的激活。TLR发出的信号导致多种细胞反应，包括干扰素(IFN)、促炎性细胞因子和效应细胞因子的产生，它们指导适应性免疫应答。TLR与多种炎症和免疫疾病有关，并在癌症中起作用(Rakoff-Nahoum S.和Medzhitov R.,2009.Toll-like receptors and cancer,Nat Revs Cancer 9:57-63)。

TLR是I型跨膜蛋白，其特征在于含有富含亮氨酸的重复序列(LRR)的胞外域和含有称为Toll/IL-1受体(TIR)结构域的保守区域的胞质尾区。已鉴定出十个人类TLR和十二个鼠TLR，人类中为TLR1至TLR10，小鼠中为TLR1至TLR9、TLR11、TLR12和TLR13，TLR10的同源物是假基因。TLR2对于识别***中的多种PAMP，包括细菌脂蛋白、脂甘露聚糖和脂磷壁酸至关重要。TLR3与病毒衍生的双链RNA有关。TLR4主要被脂多糖激活。TLR5检测细菌鞭毛蛋白，而对未甲基化的CpG DNA的应答则需要TLR9。最后，TLR7和TLR8识别小的合成抗病毒分子，据报道单链RNA是其天然配体。据报道，TLR11识别来自尿道致病性大肠杆菌和鼠弓形虫的抑制蛋白样蛋白质。TLR彼此异源二聚化的能力显然可以扩展TLR的全部特异性。例如，对二酰化脂蛋白的应答需要TLR2和TLR6的二聚体，而TLR2和TLR1相互作用以识别三酰化脂蛋白。TLR的特异性还受到各种衔接子和辅助分子的影响，例如MD-2和CD 14，它们响应于LPS而与TLR4形成复合物。

TLR信号传导由至少两个不同的途径组成：导致炎症细胞因子产生的MyD88依赖性途径，以及与IFN-β刺激和树突细胞成熟相关的MyD88非依赖性途径。除TLR3以外，MyD88依赖性途径是除TLR3以外的所有TLR共有的(Adachi O.等人,1998.Targeted disruption ofthe MyD88 gene results in loss of IL-1-and IL-18-mediated function,Immunity.9(1):143-50)。通过PAMP或DAMP激活后，TLR异源或同源二聚化通过胞质TIR结构域诱导衔接蛋白的募集。各个TLR通过使用不同的衔接分子诱导不同的信号传导响应。TLR4和TLR2信号传导需要衔接子TIRAP/Mal，该衔接子参与MyD 88依赖性途径。TLR3以MyD88非依赖性方式通过衔接子TRIF/TICAM-1触发对双链RNA的应答的IFN-β产生。TRAM/TIC AM-2是参与MyD88非依赖性途径的另一个衔接分子，其功能被限制于TLR4途径。

TLR3、TLR7、TLR8和TLR9识别病毒核酸并诱导I型IFN。根据激活的TLR，导致I型IFN诱导的信号传导机制不同。它们涉及干扰素调节因子IRF——已知在抗病毒防御、细胞生长和免疫调节中起关键作用的转录因子亚家族。三个IRF(IRF3、IRF5和IRF7)充当病毒介导的TLR信号传导的直接转导物。TLR3和TLR4激活IRF3和IRF7，而TLR7和TLR8激活IRF5和IRF7(Doyle S.等人，2002.IRF3 mediates TLR3/TLR4-specific antiviral gene program，Immunity.17(3):251-63)。此外，已显示由TLR9配体CpG-A刺激的I型IFN产生是由PI(3)K和mTOR介导的(Costa-Mattioli M.和Sonenberg N.2008.RAPping production of type Iinterferon in pDCs through mTOR，Nature Immunol.9:1097-1099)

TLR-9

TLR9识别DNA分子中未甲基化的CpG序列。与细菌基因组或病毒DNA相比，CpG位点在脊椎动物基因组上相对较少(约1％)。TLR9由免疫***的许多细胞表达，例如B淋巴细胞、单核细胞、天然杀伤(NK)细胞和浆细胞样树突细胞。TLR9在内体区室中细胞内表达，并通过与富含CpG基序的DNA结合来提醒免疫***有病毒和细菌感染。TLR9信号导致激活引发促炎症反应的细胞，从而导致产生细胞因子，如I型干扰素和IL-12。

TLR激动剂

TLR激动剂可以激动一种或多种TLR，例如人TLR-1、2、3、4、5、6、7、8、9或10中的一种或多种。在一些实施方案中，本文所述的辅助剂是TLR激动剂。在一些实施方案中，TLR激动剂特异性地激动人TLR-9。在一些实施方案中，TLR-9激动剂是CpG部分。如本文所用，CpG部分是线性的二核苷酸，具有序列：5’—C—磷酸盐—G—3’，即，仅被一个磷酸盐分开的胞嘧啶和鸟嘌呤。

在一些实施方案中，CpG部分包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个CpG二核苷酸。在一些实施方案中，CpG部分由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个CpG二核苷酸组成。在一些实施方案中，CpG部分具有1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、10-20、10-30、10-40或10-50个CpG二核苷酸。

在一些实施方案中，TLR-9激动剂是合成的ODN(寡脱氧核苷酸)。CpG ODN是短的合成的单链DNA分子，在特定的序列环境中包含未甲基化的CpG二核苷酸(CpG基序)。与基因组细菌DNA中发现的天然磷酸二酯(PO)骨架相反，CpG ODN具有部分或完全硫代磷酸酯(PS)骨架。CpG ODN主要分为三类：A、B和C类，它们的免疫刺激活性不同。CpG-ODN的特征是PO中心含CpG回文基序和PS修饰的3’多聚鸟苷酸(poly-G)串(string)。它们诱导pDC产生大量IFN-α，但是是TLR9依赖性NF-κB信号传导和促炎性细胞因子(例如IL-6)产生的较弱刺激物。CpG-B ODN包含具有一个或多个CpG二核苷酸的完整PS骨架。它们强烈激活B细胞和TLR9依赖性NF-κB信号传导，但微弱刺激IFN-α分泌。CpG-C ODN结合了A类和B类的特征。它们包含完整的PS骨架和含CpG的回文基序。C类CpG ODN诱导pDC产生大量的IFN-α并刺激B细胞。

接头

本文公开的多特异性或多功能分子可以进一步包括接头，例如，在以下一种或多种之间的接头：抗原结合域与细胞因子分子、抗原结合域与免疫细胞衔接物、抗原结合域与基质修饰部分、细胞因子分子与免疫细胞衔接物、细胞因子分子与基质修饰部分、免疫细胞衔接物与基质修饰部分、抗原结合域与免疫球蛋白链恒定区、细胞因子分子与免疫球蛋白链恒定区、免疫细胞衔接物与免疫球蛋白链恒定区，或基质修饰部分与免疫球蛋白链恒定区。在实施方案中，接头选自：可裂解的接头、不可裂解的接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头，或其组合。

在一个实施方案中，多特异性分子可包括一个、两个、三个或四个接头，例如肽接头。在一个实施方案中，肽接头包括Gly和Ser。在一些实施方案中，肽接头选自GGGGS(SEQID NO:7248)；GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7249)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7250)；和DVPSGPGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7251)。在一些实施方案中，肽接头是接头的A(EAAAK)nA(SEQ ID NO:7291)家族(例如，如Protein Eng.(2001)14(8):529-532)所述)。这些是刚性螺旋接头，n范围为2-5。在一些实施方案中，肽接头选自AEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:7252)；AEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:7253)；AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:77)；和AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:78)。

核酸

还公开了编码前述多特异性或多功能分子的核酸。

在某些实施方案中，本发明的特征在于核酸，其包含编码如本文所述的抗体分子的重链和轻链可变区和CDR或高变环的核苷酸序列。例如，本发明的特征在于分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子的抗体分子的重链和轻链可变区的第一核酸和第二核酸。核酸可包含如本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本相同(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的序列)或与本文表中所示的序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。

在某些实施方案中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区具有如本文表中所列的氨基酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换的序列)。在其他实施方案中，核酸可包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，所述轻链可变区具有如本文表中所列的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换)的序列。在又一个实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区和轻链可变区具有本文表中所列的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换的序列)。

在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区具有如本文表中所列的核苷酸序列，与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的严格条件下杂交的序列)。在另一个实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，所述轻链可变区具有如本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的严格条件下杂交的序列)。在另一个实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区和轻链可变区具有本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的严格条件下杂交的序列)。

在某些实施方案中，核酸可以包含编码本文公开的细胞因子分子、免疫细胞衔接物或基质修饰部分的核苷酸序列。

在另一方面，本申请的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于同一宿主细胞或不同的宿主细胞中的单个载体或不同载体中，如下文更详细地描述。

载体

本文还提供了载体，其包含编码本文所述的多特异性或多功能分子的核苷酸序列。在一个实施方案中，载体包含编码本文所述的多特异性或多功能分子的核苷酸。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工合成染色体(YAC)。

可以采用许多载体***。例如，一类载体利用来自动物病毒的DNA元件，所述动物病毒例如牛***瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(Rous肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用来自RNA病毒(例如西门利克森林病毒、东方马脑炎病毒和黄病毒)的RNA元件。

另外，可以通过引入一种或多种允许选择转染的宿主细胞的标记来选择DNA被稳定整合到其染色体中的细胞。例如，标记可以向营养缺陷宿主提供质子移变、杀生物剂抗性(例如抗生素)或对重金属如铜的抗性等。可选择的标记基因可以直接连接到要表达的DNA序列，或可以通过共转化引入相同的细胞。mRNA的最佳合成可能还需要其他元件。这些元件可能包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。

一旦准备好用于表达的表达载体或包含DNA序列的构建体，就可以将表达载体转染或引入合适的宿主细胞中。可以采用多种技术来实现这一点，例如，原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，将细胞在培养基中生长并筛选适当的活性。

用于培养所得转染细胞和用于回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且基于本说明书，可以根据所使用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。

细胞

另一方面，本申请的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的单个载体或不同载体中。宿主细胞可以是真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞，例如，大肠杆菌。例如，哺乳动物细胞可以是培养的细胞或细胞系。示例性的哺乳动物细胞包括淋巴细胞细胞系(例如，NSO)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS细胞、***和来自转基因动物的细胞，例如，乳腺上皮细胞。

本发明还提供了包含编码本文所述抗体分子的核酸的宿主细胞。

在一个实施方案中，对宿主细胞进行遗传工程化以包含编码抗体分子的核酸。

在一个实施方案中，通过使用表达盒对宿主细胞进行遗传工程化。短语“表达盒”是指核苷酸序列，其能够影响基因在与此类序列相容的宿主中的表达。这样的盒可以包括启动子，具有或没有内含子的可读框以及终止信号。也可以使用对影响表达所必需或有帮助的其他因素，例如可诱导的启动子。

本发明还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。

该细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞、HeLa细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。

用途和联合疗法

本文所述的方法包括通过使用本文所述的多特异性分子(例如，使用本文所述的药物组合物)来治疗受试者中的免疫病况或病症例如自身免疫性疾病。还提供了减轻或缓解受试者中的自身免疫性病症例如自身免疫性疾病的症状的方法，以及矫正或减轻TCR偏性(例如，重新建立平衡的TCR库或与无自身免疫性疾病的个人更相似的TCR库)的方法。

在一个实施方案中，免疫病况或病症选自Churg-Strauss综合征、结节病、***性红斑狼疮(SLE)、1型糖尿病、自身免疫性肝炎(例如，1型或2型)、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、多发性硬化、Guillain-Barre综合征和AMAN(轴突&神经元神经病)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(CIDP)、横贯性脊髓炎、Tolosa-Hunt综合征(THS)、德维克病(视神经脊髓炎)、副肿瘤性小脑变性(PCD)、Lambert-Eaton综合征、银屑病、硬皮病、CREST(钙质沉着症、雷诺现象、食道运动障碍、指端硬化和毛细血管扩张)综合征、疱疹样皮炎、皮肌炎、大疱性类天疱疮、瘢痕性类天疱疮/良性粘膜类天疱疮、妊娠性类天疱疮、类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎、复发性多软骨炎、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、血管炎、川崎病、肉芽肿并多血管炎(GPA)、白塞病(血管炎)、大动脉炎、结节性多动脉炎、显微镜下多血管炎(MPA)、白细胞破裂性血管炎、Cogan综合征、葡萄膜炎、周边葡萄膜炎(睫状体平坦部炎)、巩膜炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、克罗恩病、溃疡性结肠炎(UC)、德雷斯勒综合征、风湿热、Evans综合征、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、溶血性贫血、血小板减少性紫癜(TTP)、多肌炎、幼年型肌炎(JM)(包括幼年型皮肌炎(JDM)和幼年型多肌炎(JPM))、Sjogren综合征、眼瘢痕性类天疱疮，或桥本甲状腺炎。

在一些实施方案中，免疫病况或病症例如自身免疫性疾病是糖尿病(例如，1型糖尿病)。

在实施方案中，以适合于待治疗或预防的疾病的方式施用多特异性分子(或药物组合物)。施用的量和频率取决于患者的病情、患者疾病的类型和严重性等因素。适当的剂量可以通过临床试验确定。例如，当指示“有效量”或“治疗量”时，医师可以通过考虑免疫病症严重性/特征的个体差异、感染或转移的程度、受试者的年龄、体重和状况来确定要施用的药物组合物(或多特异性分子)的精确量。在实施方案中，本文描述的药物组合物可以以10⁴至10⁹个细胞/kg体重的剂量施用，例如10⁵至10⁶个细胞/kg体重，包括在这些范围内的所有整数值。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以以这些剂量多次施用。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以使用在免疫疗法中所述的输注技术来施用(参见例如Rosenberg等人，New Eng.J.of Med.319:1676,1988)。

在实施方案中，将多特异性分子或药物组合物在肠胃外施用给受试者。在实施方案中，将细胞经静脉内、皮下、肿瘤内、结节内、肌内、皮内或腹膜内施用给受试者。在一些实施方案中，将细胞直接施用(例如注射)到肿瘤或***中。在实施方案中，细胞以输注(例如，如Rosenberg等人，New Eng.J.of Med.319:1676,1988)或静脉推注的形式施用。在实施方案中，细胞以以可注射的储库型长效制剂形式施用。

在实施方案中，受试者是哺乳动物。在实施方案中，受试者是人、猴、猪、狗、猫、牛、绵羊、山羊、兔、大鼠或小鼠。在实施方案中，受试者是人。在实施方案中，受试者是儿科受试者，例如小于18岁，例如小于17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1岁或更小的年龄。在实施方案中，受试者是成年人，例如，至少18岁，例如，至少19、20、21、22、23、24、25、25-30、30-35、35-40、40-50、50-60、60-70、70-80或80-90岁。

联合疗法

本文公开的多特异性或多功能分子可以与第二治疗剂或程序结合使用。

在实施方案中，在受试者被诊断出患有自身免疫性病症之后，施用/执行多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序。在实施方案中，同时或并行施用/执行多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序。例如，当开始第二治疗的递送时仍在进行一种治疗的递送，例如，在治疗的施用上存在重叠。在其他实施方案中，顺序地施用/执行多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序。例如，一种治疗的递送在另一治疗的递送开始之前停止。

在实施方案中，联合疗法可以比单独使用任一药剂的单一疗法产生更有效的治疗。在实施方案中，第一治疗和第二治疗的联合比单独的第一治疗或第二治疗更有效(例如，导致症状和/或包含对应于偏性TCRBV克隆型的TCRBV抗原的T细胞的更大减少)。在实施方案中，与作为单一疗法施用时通常达到相似效果所需的第一或第二治疗剂量相比，联合疗法允许使用更低剂量的第一治疗或第二治疗。在实施方案中，联合疗法具有部分加和作用、完全加和作用或大于加和作用。

在一个实施方案中，多特异性或多功能分子与疗法例如本领域已知的自身免疫性疾病疗法联合施用。多特异性或多功能分子与该疗法的施用可以是顺序的(有或无重叠)或同时的。多特异性或多功能分子的施用在疗程期间可以是连续的或间断的。

免疫检查点抑制剂

在其他实施方案中，本文所述的方法包括将免疫检查点抑制剂与多特异性或多功能分子联合使用。该方法可用于体内治疗方案。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制检查点分子。示例性的检查点分子包括但不限于CTLA4、PD1、PD-L1、PD-L2、TIM3、LAG3、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、BTLA、KIR、MHC I类、MHC II类、GAL9、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1和A2aR。参见，例如，Pardoll.Nat.Rev.Cancer 12.4(2012):252-64，通过引用并入本文。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1抑制剂，例如抗PD-1抗体，例如纳武利尤单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)或匹地利珠单抗(Pidilizumab)。纳武利尤单抗(也称为MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558)是特异性抑制PD1的完全人IgG4单克隆抗体。参见，例如，US 8,008,449和WO2006/121168。派姆单抗(也称为帕博利珠单抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或

Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。参见，例如Hamid,O.等人，(2013)New EnglandJournal of Medicine 369(2):134–44、US 8,354,509和WO2009/114335。匹地利珠单抗(也称为CT-011或Cure Tech)是与PD1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。参见，例如，WO2009/101611。在一个实施方案中，PD-1的抑制剂是具有与纳武利尤单抗、派姆单抗或匹地利珠单抗的序列基本相同或相似的序列(例如，与其至少85％、90％、95％或更加相同的序列)的抗体分子。另外的抗PD1抗体，例如AMP 514(Ampl免疫)，在例如US 8,609,089、US 2010028330和/或US 20120114649中描述。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是免疫粘附素，例如包含与恒定区(例如，免疫球蛋白的Fc区)融合的PD-1配体(例如PD-L1或PD-L2)的细胞外/PD-1结合部分的免疫粘附素。在实施方案中，PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg，例如，在WO2011/066342和WO2010/027827中所述)，一种阻断B7-H1与PD-1之间的相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1抑制剂，例如抗体分子。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是MSB0010718C(也称为A09-246-2；Merck Serono)，其是与PD-L1结合的单克隆抗体。例如在WO2013/079174中描述了示例性的人源化抗PD-L1抗体。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体，例如YW243.55.S70。YW243.55.S70抗体描述于例如WO 2010/077634中。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是MDX-1105(也称为BMS-936559)，其描述于例如WO2007/005874中。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是MDPL3280(Genentech/Roche)，其是针对PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。参见例如美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906。在一个实施方案中，PD-L1的抑制剂是具有与YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的序列基本相同或相似的序列(例如，与其至少85％、90％、95％或更加相同的序列)的抗体分子。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L2抑制剂，例如AMP-224(其是阻断PD1和B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体)。参见例如WO2010/027827和WO2011/066342。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG-3抑制剂，例如抗LAG-3抗体分子。在实施方案中，抗LAG-3抗体是BMS-986016(也称为BMS986016；Bristol-Myers Squibb)。BMS-986016和其他人源化抗LAG-3抗体描述于例如US 2011/0150892、WO2010/019570和WO2014/008218中。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM-3抑制剂，例如抗TIM3抗体分子，例如描述于美国专利号8,552,156、WO 2011/155607、EP 2581113和美国公开号2014/044728中。

在实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂，例如抗CTLA-4抗体分子。示例性的抗CTLA4抗体包括曲美木单抗(来自辉瑞的IgG2单克隆抗体，以前称为提昔单抗(ticilimumab)，CP-675,206)；和伊匹木单抗(也称为MDX-010，CAS号477202-00-9)。其他示例性的抗CTLA-4抗体描述于例如美国专利号5,811,097中。

援引并入

本文提及的所有出版物和专利均通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利均被特别地和单独地指出通过引用并入。

实施例

实施例1：对亚美尼亚仓鼠进行免疫接种以产生抗NKp30抗体

简而言之，用完全弗氏佐剂中的人NKp30蛋白的胞外域对亚美尼亚仓鼠进行免疫接种，并在第14天和第28天用不完全弗氏佐剂(IFA)中的NKp30加强两次。在第56天施予在IFA中的再次加强，并在三天后收获动物。收集脾脏并与P3X63Ag8.653鼠骨髓瘤细胞系融合。以0.9x10^5个细胞/孔将125ul置于96孔板中并饲喂125μl的I-20+2ME+HAT(IMDM(4g/L葡萄糖))，其中补充有20％胎牛血清、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、50U青霉素、50μg链霉素和50μM 2-ME，不存在或存在HAT或HT以用于选择，并且在第7、11天和此后所需的时间饲喂杂交瘤克隆因子(最终1％)。在融合后大约2周(细胞汇合约50％)，收集上清液并测定结合。

实施例2：NKp30 mAb的杂交瘤筛选

筛选前用BG160(hNKp30细胞抗原)转染Expi293细胞18小时。筛选当天，将转染的细胞稀释至0.05x10^⁶/mL，并添加抗亚美尼亚仓鼠Fc Alexa Fluor 488至终浓度为0.4ug/mL。将50uL(2,500个细胞)该混合物添加到384孔板的每个孔中。使用相同密度带有二抗的未转染293细胞作为阴性对照。将5uL杂交瘤上清液添加到细胞混合物中，并将板在37℃下温育1小时。然后将板在Mirrorball上成像。鉴定阳性克隆并通过连续稀释来亚克隆以获得克隆选择的杂交瘤。使用相同方案再次确认后，收获杂交瘤细胞并回收相应的重链和轻链序列。将DNA亚克隆到pcDNA3.4中以用于随后表达相应抗体并进行进一步验证。

实施例3：NKp30抗体与NK92细胞的结合

用含有0.5％BSA和0.1％叠氮化钠(染色缓冲液)的PBS洗涤NK-92细胞，并以200,000个细胞/孔添加到96孔V型底的板中。将仓鼠NKp30抗体以2.0倍连续稀释添加到细胞，并在室温下温育1小时。将板用染色缓冲液洗涤两次。以1:100的稀释度(1.4mg/ml的原液)添加与AF647缀合的抗仓鼠Fc的二抗(Jackson，127-605-160)，并在4℃下与细胞温育30分钟，然后用染色缓冲液洗涤。随后将细胞在室温下用4％多聚甲醛固定10分钟。在CytoFLEX LS(Beckman Coulter)上读取该板。将数据计算为AF747阳性群体的百分比(图4)。

实施例4：使用NK92细胞系测量NKp30抗体活性的生物测定

将NKp30抗体在PBS中进行三倍连续稀释，并于2-8℃下在平底96孔板中温育过夜。将板在PBS中洗涤两次，并将40,000个NK-92细胞添加至含有IL-2的生长培养基中。在收集上清液之前，将板在37℃、5％CO2的加湿培养箱中温育16-24小时。按照MSD测定说明书测量上清液中的IFNγ水平(图5)。将从与仓鼠同种型IgG一起温育的细胞收集的上清液用作阴性对照，并将来自与NKp30单克隆抗体(R&D,clone 210847)一起温育的细胞的上清液用作阳性对照。使用仓鼠抗NKp30 mAB生成数据。

实施例5：人源化抗NKp30抗体的生成和表征

选择一系列仓鼠抗NKp30抗体。这些抗体显示与人NKp30和食蟹猴NKp30结合并诱导NK-90细胞产生IFNγ(数据未显示)。示例性的仓鼠抗NKp30抗体15E1、9G1、15H6、9D9、3A12和12D10的VH和VL序列公开于表9。基于15E1、9G1和15H6的示例性人源化抗NKp30抗体的VH和VL序列也公开于表9。这些抗体的Kabat CDR公开于表18和表8。

选择两个基于15E1的人源化构建体。第一构建体BJM0407是Fab，包含含有SEQ IDNO:7302的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:7305的氨基酸序列的λ轻链可变区。其对应的scFv构建体BJM0859包含SEQ ID NO:7310的氨基酸序列。第二构建体BJM0411是Fab，包含含有SEQ ID NO:7302的氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:7309的氨基酸序列的κ轻链可变区。其对应的scFv构建体BJM0860包含SEQ ID NO:7311的氨基酸序列。BJM0407和BJM0411显示出相当的生物物理特性，例如对NKp30的结合亲和力和热稳定性。scFv构建体BJM0859和BJM0860也显示出相当的生物物理特性。

等同方案

本领域技术人员将认识到，或仅通过常规实验便能够确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等同方案。这些等同方案旨在由以下权利要求书涵盖。

Claims

1.一种多功能分子，包含：

以及

(ii)以下各项中的一种、两种或全部：

(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；和

(c)死亡受体信号衔接物。

2.一种多功能分子，包含：

(i)结合至例如选择性结合至T细胞受体可变β(TCRBV)例如TCRBV抗原的第一抗原结合域，和

3.根据权利要求2所述的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包括抗NKp30抗体分子。

4.根据权利要求2所述的多功能分子，其中所述NK细胞衔接物包括抗NKp46抗体分子。

5.一种多功能分子，包含：

(ii)死亡受体信号衔接物。

6.一种多功能分子，包含：

(ii)细胞因子抑制剂分子。

7.一种编码根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子的核酸分子。

8.一种载体，例如，表达载体，包含根据权利要求7所述的核酸分子。

9.一种宿主细胞，包含根据权利要求7所述的核酸分子或根据权利要求8所述的载体。

10.一种制备，例如产生根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子或抗体分子的方法，包括在合适的条件下，例如，在适合于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件下培养根据权利要求9所述的宿主细胞。

11.一种药物组合物，包含根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。

12.一种治疗TCR偏性的方法，包括向有需要的受试者施用根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述TCR偏性的量施用。

13.一种治疗自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括向有需要的受试者施用根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述自身免疫性疾病的量施用。

14.一种治疗TCR偏性的方法，包括：

响应于确定受试者具有TCR偏性，向有需要的受试者施用根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述TCR偏性的量施用。

15.一种治疗自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括：

响应于确定受试者患有自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)，向有需要的受试者施用根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子，其中所述多功能分子以有效治疗所述自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的量施用。

16.一种使用根据权利要求1-6中的任一项所述的多功能分子来鉴别需要治疗癌症的受试者的方法，包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，其中：

响应于确定所述受试者具有TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病，将所述受试者鉴别为使用包含与所述TCRBV抗原结合的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者，以及任选地，鉴别为不是使用包含不与所述TCRBV抗原结合(例如，与不同的TCRBV抗原结合)的抗原结合域的多功能分子来治疗的候选者。

17.一种评价需要治疗TCR偏性(例如，偏性TCRBV克隆型)和/或与所述偏性相关的自身免疫性疾病的受试者的方法，包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得关于以下的信息)受试者是否具有TCR偏性。

18.一种治疗有需要的受试者中的自身免疫性疾病(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的方法，包括向所述受试者施用有效量例如治疗有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)，从而治疗所述病症。

19.一种耗尽患有自身免疫性病症(例如，与TCR偏性相关的自身免疫性疾病)的受试者中的T细胞群的方法，包括使所述T细胞群与有效量的与T细胞受体β可变区(TCRβV)结合(例如，特异性结合)的抗体分子(“抗TCRβV抗体分子”)接触。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述接触发生在体内或在体外。

21.根据权利要求18-20中的任一项所述的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子：

(i)不是美国专利5,861,155中公开的抗体分子；

(iii)以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性与TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01结合；或

22.根据权利要求18-21中的任一项所述的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含Fc区，例如，具有效应子功能例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)的Fc区。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含例如相比于野生型Fc区具有增强的效应子功能的Fc区。

24.根据权利要求18-23中的任一项所述的方法，其中所述抗TCRβV抗体分子包含人IgG1区或人IgG4区。