JP6021941B2 - 遺伝子組換えした酵母菌細胞 - Google Patents
遺伝子組換えした酵母菌細胞 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6021941B2 JP6021941B2 JP2014550670A JP2014550670A JP6021941B2 JP 6021941 B2 JP6021941 B2 JP 6021941B2 JP 2014550670 A JP2014550670 A JP 2014550670A JP 2014550670 A JP2014550670 A JP 2014550670A JP 6021941 B2 JP6021941 B2 JP 6021941B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- coa
- synthase
- acetyl
- yeast cell
- acs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/16—Butanols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0008—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/93—Ligases (6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/007—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons containing one or more isoprene units, i.e. terpenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
- C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
- C12Y101/01002—Alcohol dehydrogenase (NADP+) (1.1.1.2), i.e. aldehyde reductase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
- C12Y102/01—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.2.1)
- C12Y102/01004—Aldehyde dehydrogenase (NADP+) (1.2.1.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
- C12Y203/01—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
- C12Y203/01009—Acetyl-CoA C-acetyltransferase (2.3.1.9)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y602/00—Ligases forming carbon-sulfur bonds (6.2)
- C12Y602/01—Acid-Thiol Ligases (6.2.1)
- C12Y602/01001—Acetate-CoA ligase (6.2.1.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
操作された宿主細胞(いわゆる細胞工場)における広範囲の産業的に関心のある天然生成物の生合成は、これらの天然源の実現されていない商業上の可能性を開発することができる。従って、安価な源の炭素をいわゆる前駆代謝物質に効率的に変換することができ、そしてさらに関心のある生成物に変換する、プラットフォーム細胞工場を開発することに大きく関心がある。これらの鍵となる代謝の1つは、イソプレノイド(フレーバー及びフレグランス、バイオディーゼル、抗マラリア薬及び抗ガン薬、抗体、ゴム、栄養補助食品、食品成分及びビタミンとして主に使用される)、ポリケチド(抗体、抗ガン薬及び免疫抑制剤)、脂質(例えば栄養補助食品、医薬品及びバイオディーゼル)、ポリヒドロキシアルカノエート、及び1−ブタノールを含む広範囲の産業上関心のある生成物の製造のための前駆体として使用されるアセチル−CoAである(図1)。
第一の一態様において、本発明は、アルコールデヒドロゲナーゼ及びアセトアセチル−CoAシンターゼをさらに過剰発現させることを特徴とする、アルデヒドデヒドロゲナーゼ及びアセチル−CoAシンターゼ(ACS)の過剰発現によって改質させた酵母菌細胞を提供する。
本発明の酵母菌細胞は、増加させたレベルのアセチル−CoA及びアセトアセチル−CoAを製造し、従って増加させたレベルのそれらに由来する有用な生成物、例えばテルペノイド、1−ブタノール及びポリヒドロキシ酪酸の製造を可能にする、驚くべき利点を有する。
本発明を、次の実施例の方法によってさらに詳細に記載する。
酵母菌株及び培地
サッカロミセス・セレビシエ株CEN.PK113−11C(MATa SUC2 MAL2−8c ura3−52 his3−Δ1、P. Koetter, University of Frankfurt, Germanyによって提供された)を、バックグラウンド株として使用した。この研究において使用した全ての酵母菌株を表1において要約する。
ALD6、ACSSE、ADH2及びERG10酵母菌発現プラスミド
グルコースを基礎とする培養において遺伝子発現を提供するために、全ての酵母菌発現プラスミドは、構成性プロモーターPTEF1及びPPGK1を有するpSP−G1及びpSP−G2を基礎とする(Yeast 2010、27:955)(この研究において使用したプラスミドのリストについて表2を参照)。
α−サンタレン及びtHMG1酵母菌発現ベクターの構築
(+)−α−サンタレン発現ベクターを構築するために、サンタレンシンターゼ(Sts)cDNA(配列番号:46)を、プライマー19及び20を使用して、プラスミドCont2B−27−pET101(WO 2009109597号、GenBank受託番号:HQ452480)からPCRによって増幅し、NotI/PacIで切断し、そしてNotI/PacIを制限したベクターpSP−G1(Yeast 2010, 27:954)中に連結した。続いて、tHMG1を、鋳型としてS.セレビシエCEN.PK113−5DのゲノムDNA並びにプライマー31及び32を使用してPCR増幅し、BamHI/NheIで切断し、そしてBamHI及びNheIでの制限後に同様のベクター中に連結した(Nature 2006, 440:940)。これは、発現プラスミドpICK01の形成をもたらした(図4)。
ポリヒドロキシ酪酸経路発現ベクターの構築
ポリヒドロキシ酪酸生合成経路を、多コピー型プラスミドを使用することによってS.セレビシエ株CEN.PK113−11C中に導入した。PHBの生合成経路は、3種の酵素、phaAによってコードされるβ−ケトチオラーゼ、phaBによってコードされるアセトアセチル−CoAレダクターゼ、及びphaC遺伝子によってコードされるPHAシンターゼを含む。phaA(配列番号:53)、phaB(配列番号:54)及びphaC(配列番号:55)を合成し、そしてラルストニア・ユートロファH16からの元来のpha遺伝子の配列に基づくDNA2.0によってS.セレビシエにおける発現のためにコドンを最適化した。phaA及びphaBを、それぞれPGK1及びTEF1プロモーターの下流のpSP−GM2プラスミドのSacI/SpeI及びSalI/BamHI部位中にクローニングして、pSP−GM2−phaABを得た。phaCを、TEF1プロモーターの下流のpSP−GM2のXhoI/KpnI部位中にクローニングした。phaC、TEF1プロモーター及びCYC1ターミネーターのフラグメントを、プライマー13及び14を使用して増幅し、そしてMfeI部位でpSP−GM2−phaABに連結して、プラスミドpPHB−phaを得た(図4)。
ブタノール経路発現ベクターの構築
2つのプラスミドを使用して、ブタノール経路遺伝子を発現させた。ブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシブチリル−CoAデヒドロゲナーゼ、クロトナーゼ及びトランスエノイル−CoAレダクターゼをコードする4つの遺伝子を、1つのプラスミドから発現させた一方で、チオラーゼ遺伝子(ERG10)を、他のプラスミドから発現させた。
cit2及びmls1の欠失
遺伝子欠失を、クローニングしていないPCRを基礎とする対立遺伝子置換法を使用して実施した(Genome Res. 1997, 7: 1174)。cit2(配列番号:44)の欠失のために、cit2オープンリーディングフレームの5’及び3’領域を、次のオリゴヌクレオチド:CIT2−UP−フォワード、CIT2−UP−リバース、CIT2−DOWN−フォワード、CIT2−DOWN−リバース(遺伝子欠失のために使用したプライマーのリストについて表4を参照)を使用して、PCRによってゲノムCEN.PK 113−5Dから個々に増幅させた。KanMX発現モジュールを、オリゴヌクレオチド:KanMX−UP−フォワード、KanMX−UP−リバース、KanMX−DOWN−フォワード、KanMX−DOWN−リバースを使用して、プラスミドpUG6(Guldener et al.、1996)から2つのオーバーラップ部位中で増幅させた。
α−サンタレン、1−ブタノール及びPHB製造のために遺伝子操作した酵母菌株の構築
全ての酵母菌株の形質転換を、標準酢酸リチウム法(Nucleic Acids Res.1992, 20: 1425)によって実施した。それぞれの形質転換からの3〜10個のコロニーを、最良に製造した形質転換体の選別のためにスクリーニングした。
α−サンタレン、1−ブタノール及びPHBの製造、精製、及び定量分析のための方法
前記の種々からの株α−サンタレン、1−ブタノール及びPHB製造を試験するために、20mL培養液を、100mlの未調整フラスコ中で、600nm(OD600)での最終工学密度0.02をもたらす前培養の量を接種することによって開始した。その株を、30℃で180r.p.m.のオービタルシェイクで、次の組成物を有する限定最少培地中で成長させた:7.5g/L(NH4)2SO4;14.4g/L KH2PO4;0.5g/L MgSO4.7H2O;2ml/L微量金属溶液(1リットルあたり、pH4.0:EDTA(ナトリウム塩)、15.0g;ZnSO4・7H2O、0.45g;MnCl2・2H2O、1g;CoCl2・6H2O、0.3g;CuSO4・5H2O、0.3g;Na2MoO4・2H2O、0.4g;CaCl2・2H2O、0.45g;FeSO4・7H2O、0.3g;H3BO3、0.1g及びKI、0.10g)。最少培地のpHを、2M NaOHを添加することによって6.5に調整し、そして炭素源溶液とは別々にオートクレーブした。グルコースを、濃度20g/Lで添加した。ビタミン溶液(1リットルあたり、pH6.5:ビオチン、0.05g;p−アミノ安息香酸、0.2g;ニコチン酸、1g;Ca−パントテン酸塩、1g;ピリドキシン−HCl、1g;チアミン−HCl、1g及びミオイノシトール、25g)を、濾過滅菌し、そして1ml/Lの濃度でオートクレーブ後に培地に無菌で添加した。前培養液を製造するために、限定培地(前記したもの)の5mLを含む培養管に、関心のある株の単コロニーを接種した。これらの接種材料を、30℃で220r.p.m.のオービタルシェイクで、1〜2のOD600まで培養した。
アセチル−CoAプラットフォーム株の評価
アセチル−CoAプラットフォーム株、セスキテルペンを自然に生じるα−サンタレン及びα−サンタレンの生合成前駆体を評価するために、ビャクダン油の重要な化成成分を評価した。図4Aにおいて示されているように、サンタレンは、セスキテルペンのための生物学的前駆体、ファルネシルジホスフェート(FPP)からの単独の酵素的工程において直接誘導される。FPP製造を増加するために、酵母菌内因性メバロン酸経路を、3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−補酵素Aレダクターゼ1(tHMG1)(J Biol Chem 1999, 274:316171)の過剰発現によって調整解除して、酵母菌(Nature 2006, 440:940)におけるイソプレノイド製造の向上をもたらしたことを証明した。酵母菌における植物遺伝子を発現することにおける困難性を克服するために、α−サンタレンシンターゼをコードするSts cDNAは、S.セレビシエにおける高レベルの発現のために最適化したコドンであった。参考株として、トランスジェニック酵母菌株SCYC040(表1)を、tHMG1及びStsを含むプラスミドpICK01で形質転換した。撹拌フラスコ培養液中で、2.08mg/Lのα−サンタレンを、成長の48時間後に製造した(図5A)。ALD6、ACSSE、ADH2及びERG10を発現するプラスミドpIYC08でpICK01を同時発現することによって、α−サンタレン製造を、3.65mg/L(図5A、株SCYC042)まで増加させた。CIT2欠失とプラスミドpIYC08での同時発現との組合せは、4.98mg/Lのα−サンタレンを製造することができる株SCYC045をもたらした(図5A)。さらに、プラスミドpIYC08を、株SCYC046をもたらすMLS1欠失で同時発現した場合に、α−サンタレン製造は、さらに、参考株と比較して4倍の向上を示す、8.29mg/L(図5A)まで増加した。さらに最新のストラテジーを評価するため、及びACSSE及びALD6(Metab Eng 2007, 9: 160)の過剰発現に対する以前に発表された研究とそれを比較するために、これらの2つの遺伝子を、プラスミドpICK01(図6、株SCIYC41)で同時発現させた。結果は、ADH2及びERG10のさらなる過剰発現が、α−サンタレンの最終価(図6、株SCIYC42)における及びブロックストラテジーと共に、25%の増加を導き、α−サンタレン製造における2〜4倍の増加を得た(図6A)ことを示した。
Claims (13)
- アルデヒドデヒドロゲナーゼ及びアセチル−CoAシンターゼ(ACS)の過剰発現によって改質された酵母菌細胞であって、アルコールデヒドロゲナーゼ及びアセトアセチル−CoAシンターゼがさらに過剰発現され、かつペルオキシソームクエン酸シンターゼをコードする遺伝子又はサイトゾルリンゴ酸シンターゼをコードする遺伝子が、酵母菌細胞ゲノムから欠失され、かつ前記アルコールデヒドロゲナーゼがADH2であることを特徴とする、前記酵母菌細胞。
- 前記酵母菌細胞が、サッカロミセス・セレビシエ細胞であることを特徴とする、請求項1に記載の酵母菌細胞。
- 前記アルデヒドデヒドロゲナーゼがALD6であり、前記アセトアセチル−CoAシンターゼがERG10であり、前記ペルオキシソームクエン酸シンターゼがCIT2であり、かつ前記サイトゾルリンゴ酸シンターゼがMLS1であることを特徴とする、請求項2に記載の酵母菌細胞。
- 前記ACSが、アセチル化による阻害から酵素を防ぐ点突然変異を含むことを特徴とする、請求項1から3までのいずれか1項に記載の酵母菌細胞。
- 前記ACSが、サルモネラ・エンテリカからの変異体L641Pであることを特徴とする、請求項4に記載の酵母菌細胞。
- アルデヒドデヒドロゲナーゼ及びアセチル−CoAシンターゼ(ACS)を過剰発現することを含む改質した酵母菌細胞を製造するための方法であって、該方法が、さらに、アルコールデヒドロゲナーゼ及びアセトアセチル−CoAシンターゼを過剰発現することを含み、前記方法が、さらに、ペルオキシソームクエン酸シンターゼをコードする遺伝子又はサイトゾルリンゴ酸シンターゼをコードする遺伝子を、酵母菌細胞ゲノムから欠失させることを含み、かつ前記アルコールデヒドロゲナーゼがADH2であることを特徴とする、前記方法。
- 前記酵母菌細胞が、サッカロミセス・セレビシエ細胞であることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 前記アルデヒドデヒドロゲナーゼがALD6であり、前記アセトアセチル−CoAシンターゼがERG10であり、前記ペルオキシソームクエン酸シンターゼがCIT2であり、かつ前記サイトゾルリンゴ酸シンターゼがMLS1であることを特徴とする、請求項7に記載の方法。
- 前記ACSが、請求項4又は5において定義されたものであることを特徴とする、請求項6から8までのいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1から5までのいずれか1項に記載の酵母菌細胞を培養することを含む、増大させたレベルのアセチル−CoAに由来する生成物を製造するための方法であって、かかる生成物を、該生成物を製造するために良い条件下で製造することができる、前記方法。
- 前記生成物が、アセトアセチル−CoAに由来することを特徴とする、請求項10に記載の方法。
- 前記生成物が、テルペノイド及び1−ブタノールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 前記テルペノイドがα−サンタレンであることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP12150341.1 | 2012-01-06 | ||
EP12150341 | 2012-01-06 | ||
PCT/EP2012/075814 WO2013102554A1 (en) | 2012-01-06 | 2012-12-17 | Genetically engineered yeast cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015506681A JP2015506681A (ja) | 2015-03-05 |
JP6021941B2 true JP6021941B2 (ja) | 2016-11-09 |
Family
ID=47358477
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014550670A Expired - Fee Related JP6021941B2 (ja) | 2012-01-06 | 2012-12-17 | 遺伝子組換えした酵母菌細胞 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9670494B2 (ja) |
EP (1) | EP2800818B1 (ja) |
JP (1) | JP6021941B2 (ja) |
CN (1) | CN104039973B (ja) |
BR (1) | BR112014016683A8 (ja) |
MX (1) | MX2014008181A (ja) |
RU (1) | RU2014127528A (ja) |
WO (1) | WO2013102554A1 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112016021857B1 (pt) | 2014-03-28 | 2024-03-12 | Danisco Us Inc | Célula de levedura recombinante e método para produzir etanol a partir de glicose |
KR101664814B1 (ko) * | 2015-10-30 | 2016-10-11 | 전북대학교산학협력단 | 재조합 벡터, 상기 벡터를 포함하는 재조합 효모 및 상기 재조합 효모를 이용한 알데하이드 디하이드로지네이즈 6의 제조방법 |
JP2019165636A (ja) * | 2016-08-12 | 2019-10-03 | Agc株式会社 | 形質転換体および3−ヒドロキシプロピオン酸の製造方法 |
JP7129990B2 (ja) * | 2016-11-04 | 2022-09-02 | 中国科学院天津工業生物技術研究所 | 組換え酵母及びその使用 |
CA3054423A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | Hyasynth Biologicals Inc. | Method and cell line for production of phytocannabinoids and phytocannabinoid analogues in yeast |
AU2018346531A1 (en) * | 2017-10-04 | 2020-03-19 | Lanzatech, Inc. | Production of polyhydroxybutyrate in Wood-Ljungdahl microorganisms |
CN110468091B (zh) * | 2018-05-09 | 2023-07-11 | 深圳艾格鑫科技有限公司 | 微生物及其用途 |
CN111434773B (zh) * | 2019-01-15 | 2021-06-18 | 天津大学 | 一种高产檀香油的重组酵母菌及其构建方法与应用 |
CN109913380B (zh) * | 2019-03-25 | 2021-12-10 | 南京工业大学 | 生产(-)-α-红没药醇的重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用 |
CN110484572B (zh) * | 2019-08-30 | 2021-04-06 | 浙江工业大学 | 一种提高酿酒酵母橙花叔醇产量的方法 |
CN110585179B (zh) * | 2019-10-12 | 2022-11-22 | 郑州大学第一附属医院 | Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途 |
CN111235046A (zh) * | 2020-02-05 | 2020-06-05 | 天津大学 | 异源合成α-檀香烯的重组解脂耶氏酵母及其构建方法 |
JP2023520900A (ja) * | 2020-04-08 | 2023-05-22 | ケブンハウン ユニヴェルスィテイト | ゲラニル二リン酸誘導化合物の産生 |
CN113122563B (zh) * | 2021-04-22 | 2023-12-08 | 洛阳华荣生物技术有限公司 | 构建r-3-氨基丁酸生产菌的方法 |
CN114181964B (zh) * | 2021-11-02 | 2023-06-09 | 云南大学 | 一种表达盒组合、重组载体和重组酿酒酵母及其应用 |
CN114507613B (zh) * | 2022-01-26 | 2024-02-02 | 浙江大学杭州国际科创中心 | 一种发酵生产α-檀香烯的酵母工程菌及其应用 |
WO2023167867A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Isp Investments Llc | Sclareol or sclareolide for improving scalp conditions and hair growth |
CN114774297B (zh) * | 2022-03-25 | 2023-09-12 | 湖北工业大学 | 产t-杜松醇的重组酿酒酵母及其应用 |
CN116064266B (zh) * | 2022-11-01 | 2024-06-14 | 四川大学 | 盐胁迫抗性增强的重组酿酒酵母菌及其构建方法与应用 |
CN117604006B (zh) * | 2023-10-24 | 2024-05-17 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种橡胶树Hedycaryol合成酶基因及其用途 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4168870B2 (ja) * | 2003-08-14 | 2008-10-22 | トヨタ自動車株式会社 | プレニルアルコールの製造方法 |
US20090053797A1 (en) * | 2005-08-19 | 2009-02-26 | Yoichiro Shiba | Genetically modified host cells and use of same for producing isoprenoid compounds |
JP2009538601A (ja) * | 2006-05-26 | 2009-11-12 | アミリス バイオテクノロジーズ, インコーポレイテッド | イソプレノイドの産生 |
EP2121949B1 (en) * | 2006-12-21 | 2013-05-08 | GEVO, Inc. | Butanol production by metabolically engineered yeast |
CN101978062B (zh) | 2008-03-06 | 2014-04-02 | 弗门尼舍有限公司 | 用于生产α-檀香萜的方法 |
EP2519628A2 (en) | 2009-12-29 | 2012-11-07 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Alcohol dehydrogenases (adh) useful for fermentive production of lower alkyl alcohols |
WO2011146833A1 (en) * | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Evolva Inc. | Method of producing isoprenoid compounds in yeast |
AU2012272856A1 (en) * | 2011-06-22 | 2013-05-02 | Genomatica, Inc. | Microorganisms for producing 1,4-butanediol and methods related thereto |
-
2012
- 2012-12-17 WO PCT/EP2012/075814 patent/WO2013102554A1/en active Application Filing
- 2012-12-17 CN CN201280066169.6A patent/CN104039973B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-17 US US14/370,959 patent/US9670494B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-17 MX MX2014008181A patent/MX2014008181A/es unknown
- 2012-12-17 BR BR112014016683A patent/BR112014016683A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-12-17 JP JP2014550670A patent/JP6021941B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-17 EP EP12801747.2A patent/EP2800818B1/en not_active Not-in-force
- 2012-12-17 RU RU2014127528A patent/RU2014127528A/ru unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112014016683A2 (pt) | 2017-06-13 |
MX2014008181A (es) | 2014-09-26 |
US20150079646A1 (en) | 2015-03-19 |
CN104039973B (zh) | 2017-08-11 |
CN104039973A (zh) | 2014-09-10 |
BR112014016683A8 (pt) | 2017-07-04 |
EP2800818B1 (en) | 2017-07-26 |
WO2013102554A1 (en) | 2013-07-11 |
JP2015506681A (ja) | 2015-03-05 |
RU2014127528A (ru) | 2016-01-27 |
US9670494B2 (en) | 2017-06-06 |
EP2800818A1 (en) | 2014-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6021941B2 (ja) | 遺伝子組換えした酵母菌細胞 | |
Chen et al. | Establishing a platform cell factory through engineering of yeast acetyl-CoA metabolism | |
Chen et al. | Coupled incremental precursor and co-factor supply improves 3-hydroxypropionic acid production in Saccharomyces cerevisiae | |
US9169496B2 (en) | Method for the enzymatic production of butadiene | |
JP2021166530A (ja) | エネルギー発生発酵経路を含む遺伝子操作細菌 | |
Foo et al. | Whole‐cell biocatalytic and de novo production of alkanes from free fatty acids in Saccharomyces cerevisiae | |
EP2505656A1 (en) | Method of producing 3-hydroxypropionic acid using malonic semialdehyde reducing pathway | |
US10626423B2 (en) | Methods and microorganisms for the production of 1,3-butanediol | |
Qin et al. | Rewiring central carbon metabolism ensures increased provision of acetyl-CoA and NADPH required for 3-OH-propionic acid production | |
EP2121949A2 (en) | Butanol production by metabolically engineered yeast | |
WO2018069418A2 (en) | Production of citronellal and citronellol in recombinant hosts | |
US11332723B2 (en) | Engineered microorganisms for production of commodity chemicals and cellular biomass | |
WO2019190945A1 (en) | Biosynthesis of olivetolic acid | |
US9476067B2 (en) | Shuttle vector capable of transforming multiple genera of cyanobacteria | |
WO2014207113A1 (en) | Yeasts engineered for the production of valuable chemicals from sugars | |
Lu et al. | Efficient biosynthesis of 3-hydroxypropionic acid from ethanol in metabolically engineered Escherichia coli | |
Crépin et al. | Alka (e) ne synthesis in Cupriavidus necator boosted by the expression of endogenous and heterologous ferredoxin–ferredoxin reductase systems | |
WO2014207087A1 (en) | Production of advanced fuels and of chemicals by yeasts on the basis of second generation feedstocks | |
JP2017524356A (ja) | 特定の脂肪酸の製造 | |
Ghosh | Systems and synthetic biology for the microbial production of biofuels | |
WO2021193666A1 (ja) | 改良型鉄代謝工学による新規キシロース代謝系を介した有用物質の製造方法 | |
Li et al. | Sustainable bio-manufacturing of D-arabitol through combinatorial engineering of Zygosaccharomyces rouxii, bioprocess optimization and downstream separation | |
Lane | Bioconversion of xylose into high-value products by engineered saccharomyces cerevisiae | |
Lian | Improving advanced biofuels production in Saccharomyces cerevisiae via protein engineering and synthetic biology approaches | |
Cardenas et al. | Metabolic engineering of Saccharomyces cerevisiae for the production of triacetic acid |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150115 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160118 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160617 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160905 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161004 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6021941 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |