JP5806434B1 - ノロウィルス不活化剤及びその製造方法、ノロウィルス不活化方法、ノロウィルス不活化用リゾチーム類の製造方法、ノロウィルス感染の予防薬又は治療薬、並びにノロウィルス不活化用皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
Description
2.上記1記載のノロウィルス不活化剤は、前記リゾチーム類の含有量が0.05質量%以上であることができる。
3.上記1又は2に記載のノロウィルス不活化剤は、前記リゾチーム類は、下記定義によって規定される蛍光強度が4,000以上であることができる。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度
4.上記1〜3のいずれかに記載のノロウィルス不活化剤は、前記リゾチーム類は、下記に規定される抗ノロウィルス活性が2.0以上であることができる。
抗ノロウィルス活性:ノロウィルス液と前記リゾチーム類の2質量%水溶液を等量混合して得られたノロウィルス混合液を室温で1分間放置した時の、放置前の感染価の対数から放置後の感染価の対数を引いた値
5.上記1〜4のいずれかに記載のノロウィルス不活化剤であって液剤であることができる。
6.本発明の一態様に係るノロウィルスの不活化方法は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を使用してノロウィルスを不活化する工程を含むことができる。
7.本発明の一態様に係るノロウィルス不活化用リゾチーム類の製造方法は、上記1〜5のいずれかに記載のノロウィルス不活性剤に含まれるノロウィルス不活化用リゾチーム類の製造方法であって、リゾチーム及び/又はその塩を加熱変性する工程を含む。
8.本発明の一態様に係るノロウィルス不活化剤の製造方法は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含有させる工程を含む。
9.本発明の一態様に係るノロウィルス不活化剤の製造方法は、上記8記載のノロウィルス不活化剤の製造方法であって、リゾチーム及び/又はその塩を加熱変性して加熱変性物を得る工程、並びに、該加熱変性物を含むノロウィルス不活化剤を得る工程を含む。
10.上記9に記載のノロウィルス不活化剤の製造方法であって、前記加熱変性物を得る工程は、波長660nmの光の透過率が70%超であり、pHが5.0以上7.0以下であり、かつ、リゾチーム及び/又はその塩の濃度が固形分換算で0.5質量%以上7質量%以下であるリゾチーム及び/又はその塩の水溶液を、該水溶液の波長660nmの光の透過率が70%になるまで加熱する第1の加熱工程と、前記第1の加熱工程の後に、前記水溶液の波長660nmの光の透過率が70%未満の極小値まで加熱した後、70%になるまで該水溶液を加熱する第2の加熱工程と、前記第2の加熱工程の後に、前記水溶液の波長660nmの光の透過率が70%を超える状態で該水溶液をさらに加熱する第3の加熱工程と、を含むことができる。
11.上記10に記載のノロウィルス不活化剤の製造方法であって、前記第3の加熱工程の加熱条件が、該第3の加熱工程で得られた水溶液を0.45μmのメンブレンフィルターでろ過したものとエタノールとを質量比で1:1の割合で混合したときに波長660nmの光の透過率が85%以上になるまで加熱する条件であることができる。
12.上記10又は11に記載のノロウィルス不活化剤の製造方法であって、前記第3の加熱工程の後に、前記水溶液を噴霧乾燥又は凍結乾燥させて、粉末状の前記加熱変性物を得る工程をさらに含むことができる。
13.本発明の一態様に係るノロウィルス感染の予防薬又は治療薬は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含む。
14.本発明の一態様に係るノロウィルス不活化用皮膚外用剤は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含む。
15.本発明の一態様に係るリゾチーム類は、ノロウィルスの不活化に使用される、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種である。
本発明のノロウィルス不活化剤は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種(以下、「リゾチーム類」と略して表記することもある。)を含む。リゾチーム類は、ノロウィルスの不活化に使用される。すなわち、本発明のノロウィルス不活化剤は、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物(以下、リゾチーム及び/又はその塩の変性物を「リゾチーム変性物」と略して表記することもある。)のうち1種又は2種以上を含むことができる。
本発明において、「リゾチーム」とは、N−アセチルグルコサミンとN−アセチルムラミン酸とのβ−1,4結合を加水分解する性質を有するタンパク質をいう。
1.リゾチーム(細菌型)
2.リゾチーム(ニワトリ型)
3.リゾチーム(グース型)
4.リゾチーム(ファージ型;Vタイプ)
5.リゾチーム(CH型)
前記加熱変性物を得る工程は、波長660nmの光の透過率が70%超(好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、通常100%以下)であり、pHが5.0以上7.0以下であり、かつ、リゾチーム及び/又はその塩の濃度が固形分換算で0.5質量%以上7質量%以下であるリゾチームの水溶液を、該水溶液の波長660nmの光の透過率が70%になるまで加熱する第1の加熱工程(以下、単に「第1の加熱工程」ともいう。)と、前記第1の加熱工程の後に、該水溶液の波長660nmの光の透過率が70%未満の極小値まで加熱した後、70%になるまで該水溶液を加熱する第2の加熱工程(以下、単に「第2の加熱工程」ともいう。)と、前記第2の加熱工程の後に、前記水溶液の波長660nmの光の透過率が70%を超える状態で該水溶液をさらに加熱する第3の加熱工程(以下、単に「第3の加熱工程」ともいう。)と、を含む。上記第1の加熱工程、第2の加熱工程及び第3の加熱工程により、リゾチーム変性物を得ることができる。
図1は、本実施形態に係るリゾチーム変性物の製造方法において、第1の加熱工程、第2の加熱工程及び第3の加熱工程での加熱時間と透過率との関係を模式的に表す図である。本発明者らは、リゾチームを含む水溶液を加熱する際に、波長660nmの光の透過率が加熱時間に応じて図1に示すように変化することを見出した。当該透過率の変化は、得られるリゾチーム変性物の表面疎水性の変化(主に、表面疎水性の増加)及び水溶性の変化(水溶性の低下及びこれに続く水溶性の増加)に起因すると推測される。
図1に示されるように、第1の加熱工程によって、波長660nmの光の透過率が70%超である水溶液における該光の透過率が低下して70%になることは、該水溶液の透過率が低下することを意味し、例えば、目視にて該水溶液の白濁を確認することができる。
第1の加熱工程において水溶液中で使用する、原料であるリゾチーム及び/又はその塩は、上述した<リゾチーム及び/又はその塩>の欄で例示したリゾチーム及び/又はその塩を使用することができる。低コストで入手容易である点から、原料であるリゾチーム及び/又はその塩は卵白リゾチームであるのが好ましい。
リゾチームの立体構造を確実に変化させることができ、かつ、リゾチームの凝集を防止して、ノロウィルスの不活化作用を高めることができる点で、第1の加熱工程において、水溶液中のリゾチームの濃度は1質量%以上であることが好ましく、一方、5質量%以下であることが好ましい。
リゾチーム及び/又はその塩の水溶液を構成する溶媒は水であるが、リゾチーム及び/又はその塩の水への溶解性に影響しない範囲で水と混和する有機溶媒を使用してもよい。リゾチーム及び/又はその塩の水溶液を構成する溶媒における水の割合は通常80質量%以上100質量%以下である。また、リゾチーム及び/又はその塩の水溶液を構成する溶媒が、水と混和する有機溶媒を含む場合、リゾチーム及び/又はその塩の水溶液を構成する溶媒における該有機溶媒の割合は通常1質量%以上20質量%以下である。
リゾチームの凝集を防止でき、かつ、得られるリゾチーム変性物の表面疎水性を高めることができる点で、第1の加熱工程、第2の加熱工程および第3の加熱工程において、前記水溶液のpHは5.5以上であることがより好ましく、一方、6.5以下であることがより好ましい。
第2の加熱工程において、第1の加熱工程で得られた水溶液の波長660nmの光の透過率が70%から70%未満(好ましくは60%未満、より好ましくは50%未満、通常0%以上)の極小値まで加熱した後、70%になるまで加熱することにより、第1の加熱工程で得られた水溶液の光の透過率がさらに低下し(その結果、目視にて水溶液の白濁及び/又は沈殿を確認することができる。)、その後、該透過率が増加に転じて、該白濁及び/又は沈殿が次第に消失すること(その結果、目視で次第に透明になっていくことを確認することができる。)を確認することができる。
第3の加熱工程では、前記水溶液中のリゾチームの立体構造がさらに変化し、リゾチームの水溶性を維持した状態で、リゾチームの表面疎水性がさらに高められる結果、水溶液の波長660nmの光の透過率が70%を超える値を維持することができると推測される。
本実施形態に係るノロウィルス不活化剤の製造方法(リゾチーム変性物の製造)において、高い収率を達成することができ、かつ、該水溶液を第1の加熱工程、第2の加熱工程及び第3の加熱工程でそれぞれ規定される透過率に調整できる点で、第1の加熱工程、第2の加熱工程及び第3の加熱工程における該水溶液の中心品温を70℃以上となるように加熱することが好ましく、加熱時間が短いため製造時間を短縮できる点で、80℃以上がより好ましく、90℃以上がさらに好ましい(130℃以下であってもよく、約100℃以下であってもよい)。なお、第1の加熱工程、第2の加熱工程及び第3の加熱工程における加熱時間は、加熱温度及び処理量に応じて各工程で規定する透過率を満たすように適宜決定することができる。
なお、本発明のリゾチーム変性物の製造方法において、前記第3の加熱工程の後に、前記水溶液を噴霧乾燥又は凍結乾燥させて、粉末状のリゾチーム変性物を得る工程をさらに含むことができる。
本発明において、ノロウィルス不活化作用は、後述する実施例に記載された方法(すなわち、ノロウィルスを感染させたマウス細胞)を使用した系によって評価することができる。
本発明のリゾチーム類は、表面疎水性がより高く、ノロウィルスの不活化作用により優れている点で、下記定義によって規定されるリゾチーム類(リゾチーム及び/又はその塩の変性物(以下、「リゾチーム変性物」と表記することもある。)、より具体的には、リゾチーム変性物の蛍光強度が4,000以上であることが好ましく、5,000以上であることがより好ましく、通常、10,000以下である。なお、本発明において「室温」とは、20℃以上25℃以下のことをいう。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度
前記リゾチーム類は、下記に規定される抗ノロウィルス活性が2.0以上であることが好ましい。
抗ノロウィルス活性:ノロウィルス液と前記リゾチーム類の2質量%水溶液を等量混合して得られたノロウィルス混合液を室温で1分間放置した時の、放置前の感染価の対数から放置後の感染価の対数を引いた値
前記リゾチーム類(リゾチーム変性物、より具体的には、リゾチーム加工品及び/又はその塩)は、約29KDa(KDa=103Da)の蛋白質及び/又は約36.5KDaの蛋白質を含むことができる。すなわち、本発明のノロウィルス不活化剤は、約29KDaの蛋白質及び/又は約36.5KDaの蛋白質を含むことができる。本発明のノロウィルス不活化剤ならびに前記リゾチーム類の中に約29KDaの蛋白質及び/又は約36.5KDaの蛋白質が含まれていることは、後述する実施例に示す電気泳動によって確認することができる。なお、電気泳動は、市販の電気泳動キッドを用いて行うことができる。
本発明のノロウィルス不活化剤においてリゾチーム類の好ましい含有量(固形分換算)は、当該ノロウィルス不活化剤において使用するリゾチームの種類、ノロウィルス不活化剤の剤型、使用態様等によるが、ノロウィルス不活化剤の0.05質量%以上、さらに0.1質量%以上、特に0.25質量%以上(例えば、0.05質量%以上100質量%以下)とすることができる。ここで、本発明のノロウィルス不活化剤が、リゾチーム類のうち2種以上含む場合、リゾチーム類の含有量(固形分換算)は、リゾチーム類の合計の含有量をいう。
本発明のノロウィルス不活化剤において、リゾチーム類と共に配合する配合素材は、ノロウィルス不活化剤の剤型等に応じて適宜選択することができ、例えば、水;エタノール、イソプロパノール等の炭素数5以下の低級アルコール;グリセリン、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール等の多価アルコール;グリシン、有機酸、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、デヒドロ酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、亜硫酸ナトリウム、EDTA、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化アルキルジアミノエチルグリシン、ヨードチンキ、ポピドンヨード、セチル酸化ベンザルコニウム、トリクロサン、クロルキシレノール、イソプロピルメチルフェノール、ε-ポリリシン、ラクトフェリン、ナイシン、バクテリオシン、ウド抽出物、エゴノキ抽出物、カワラヨモギ抽出物、酵素分解ハトムギ抽出物、しらこタンパク抽出物、ツヤプリシン、ペクチン分解物等の静菌剤を適宜組み合わせて使用することができる。
本発明のノロウィルス不活化剤は、必用に応じて種々の剤型をとることができ、例えば、液剤としてもよく、粉末、錠剤、カプセル等の固形剤としてもよい。
液剤とする場合、その粘度は使用方法に応じて適宜定めることができる。例えば、噴霧可能な粘度の液剤とし、トリガースプレーヤー、スクイズ容器、エアゾル容器等のスプレー容器に充填することにより、手指、食品、調理器具、住居環境、嘔吐物、***物等へ該ノロウィルス不活化剤を含む液滴を噴霧することにより、ノロウィルスの不活化を手軽に行うことができ、ノロウィルス不活化剤を含む液剤に、不活化の対象物(例えば、手指、食品、医療機器、医療器具、調理器具、住居環境)を浸すことにより、ノロウィルスの不活化を手軽に行うこともできる。また、ノロウィルス不活化剤を含む液剤を湿潤させたシートとして使用することができる。さらに、ローション、クリーム等とすることにより皮膚外用剤として使用することができ、これにより、ノロウィルスが手指に付着してもその場で不活化し、ノロウィルスが経口感染することを防止する感染予防薬として使用することができる。
本発明は、リゾチーム類を使用し、住居、食品工場、公共施設、病院等の種々の環境や状況においてノロウィルスを不活化する方法を包含する。但し、医療行為としてノロウィルスを不活化する場合は除いてもよい。
リゾチームは、従来より食品添加物として使用されており、そのリゾチームの塩も抗菌剤として使用されている。特に、塩化リゾチームは消炎剤として広く使用され、安全性が確立している。したがって、リゾチーム若しくはその塩、又はこれらの変性物は、ノロウィルスを不活化するという本発明の有効成分の特異性が損なわれない限り、使用方法に特に制限はない。
即ち、上述のノロウィルス不活化剤の剤型に応じてノロウィルス不活化剤を、ノロウィルスを不活化する対象領域へ噴霧又は塗布したり、ノロウィルスを不活化する対象物と混合したり、摂取させる等の方法をとることができる。
本発明は、ノロウィルスを不活化する有効成分としてリゾチーム類を種々の固体又は液体の担体に含有させてノロウィルス不活化剤を製造する方法を含む。特に、リゾチーム類を、低級アルコール及び多価アルコールの少なくとも1種を含有する液体と混合してノロウィルス不活化剤を製造する方法、なかでも、アルコール製剤と混合してノロウィルス不活化剤を製造する方法を含む。この場合、リゾチーム類を含有させる対象は、ノロウィルスを不活化するという本発明の有効成分の特異性が損なわれない限り特に制限はなく、例えば、リゾチーム類と上述の配合素材とを混合し、所望の剤型に調製すればよい。
本発明のノロウィルス不活化剤が有効成分とするリゾチーム類は、従来ノロウィルス不活化剤の有効成分として知られている渋シブ抽出物(カキタンニン)、及びブドウの種子等に含まれるプロアントシアニジンと比較して、ノロウィルスに対して優れた不活化作用を有し、特に、加熱変性物は1分以内という極めて短い作用時間でノロウィルスを不活化させることができる。また、リゾチームは、従前より、食品の日持ちを向上させる食品添加物として使用され、塩化リゾチームは消炎剤として使用されていることから、本発明のノロウィルス不活化剤は安全に使用することができる。さらに、渋シブ抽出物(カキタンニン)、及びブドウの種子等に含まれるプロアントシアニジンはいずれも、ポリフェノール系・色素系の物質であり、噴霧した際に食器や器具が着色する等の問題があったが、本発明のノロウィルス不活化剤は、白色であり、食器や器具を着色しないため、幅広く使用できる。
[試験例1]
[1]リゾチーム溶液の調製
ノロウィルス不活化剤として、卵白(鶏卵卵白)リゾチーム(キユーピー株式会社製)を蒸留水に溶解し、所定濃度とした後、表1に示す条件で加熱処理し、空冷したものを調製した(試験番号2〜14)。また、同様の卵白リゾチーム(非加熱リゾリーム)を水に溶解し、濾過減菌を行うことにより濃度10質量%のリゾチーム溶液を調製した(試験番号1)。各溶液のノロウィルス活性を測定した結果を表1に示す。
プラークアッセイ法により、各試験番号の感染価を次のように評価した。
(1)6ウェルプレートに、マウスマクロファージ株化細胞(RAW264.7細胞)をコンフルエントの60〜80%まで培養した。
まず、マウスマクロファージ株化細胞(RAW264.7細胞)をコンフルエントまで培養し、コンフルエントになった細胞にノロウィルス液1mLを接種し、2日間、37℃、5%CO2条件下で培養した。この場合、ノロウィルス液として、Murine norovirus strain 1(MNV−1)(Effect of Food Residues on Norovirus Survival on Stainless Steel Surfaces)を使用した。
反応後、各評価用サンプルを10x倍希釈し、希釈サンプルとした。ここで、xは整数であり、後述する(8)において目視でプラーク数をカウントできる数とする。即ち、(8)で、プラーク数が10〜100程度となるように希釈倍率を調整した。
抗ノロウィルス活性=Log10(1分間放置前のノロウィルス混合液の感染価)−Log10(1分間放置後のノロウィルス混合液の感染価)
試験例1において、リゾチームの加熱時間及びリゾチーム水溶液の濃度を変更して、表2に示す蛍光強度を有するリゾチーム変性物を得た。
本試験例では、リゾチーム変性物について電気泳動を行った。本試験例では、試験例1における加熱条件(加熱温度、加熱時間及び卵白リゾチームの濃度)を変えてリゾチーム変性物を調製した。
本試験例では、ノロウィルスとリゾチーム類との接触を、電子顕微鏡を用いて撮影した。
ノロウィルス:ノロウィルスとして、MNV-1(ワシントン大学(Washington University)のハーバート.W.ヴァージン博士(Dr.Herbert W. Virgin)より供与)を使用した。また、培地成分を除去したノロウィルス液を作製した。ノロウィルス液の作製方法は下記の通りである。
1)試験サンプルをパラフィルム上に滴下し、カーボン支持膜上に2分間接触させた。
2)1)で得られた試験サンプルを、2質量%酢酸ウラン上に2分間接触させた。
3)2)で得られた試験サンプルから余分な液体をろ紙で吸い取らせて、該試験サンプルを乾燥させた。
4)電子顕微鏡(JEOL JEM1200EX)にて80kVで電子顕微鏡写真を撮影した。
文献では、ノロウィルスの大きさ(直径)は30〜40nmとされている。図3(a)及び図4(a)および図4(b)において、「NV」はノロウィルスを意味し、丸で囲んだ個所がノロウィルスである。
ノロウィルス:35.5±1.70nm
非加熱リゾチーム:37.3±1.77nm
リゾチーム変性物(80℃×180分加熱:49.1±2.12nm)
本試験例では、ヒトノロウィルスに対するリゾチーム変性物の効果をリアルタイムPCR法を用いて検討した。なお、本試験で用いたヒトノロウィルス液は、患者の便から採取され−80℃で凍結保存されていたヒトノロウィルス原液を氷上で解凍し、それをリン緩衝生理食塩水で10倍に希釈した後、10,000rpmで20分間遠心分離し、沈殿物を除去して調製した。
ヒトノロウィルス液を試験番号13のリゾチーム溶液または蒸留水と等量混合し、1時間放置した。次いで、Takara qPCR Norovirus(GI/GII) Typing kitを用いたリアルタイムPCR法により、ヒトノロウィルス遺伝子量を測定した。
試験例1のリゾチーム変性物(試験番号9)を使用して、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。
リゾチーム変性物(試験番号9) 20%
オリーブ油 50%
ミツロウ 10%
中鎖脂肪酸トリグリセリド 10%
乳化剤 10%
――――――――――――――――――――
計 100%
試験例1のリゾチーム変性物(試験番号11)を使用して、内容物が下記の配合である、下記の配合の散剤(顆粒剤)を製した。
リゾチーム変性物(試験番号11) 10%
乳糖 60%
トウモロコシデンプン 25%
ヒプロメロース 5%
――――――――――――――――――――
計 100%
試験例1のリゾチーム変性物(試験番号13)を使用して、内容物が下記の配合である、下記の配合の錠剤を製した。
リゾチーム変性物(試験番号13) 25%
乳糖 24%
結晶セルロース 20%
トウモロコシデンプン 15%
デキストリン 10%
乳化剤 5%
二酸化ケイ素 1%
――――――――――――――――――――
計 100%
Claims (12)
- リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含むノロウィルス不活化剤であって、
前記リゾチーム類は、下記定義によって規定される蛍光強度が4,000以上である、ノロウィルス不活化剤。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度 - リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含むノロウィルス不活化剤であって、
前記リゾチーム類は、下記に規定される抗ノロウィルス活性が2.0以上である、ノロウィルス不活化剤。
抗ノロウィルス活性:ノロウィルス液と前記リゾチーム類の2質量%水溶液を等量混合して得られたノロウィルス混合液を室温で1分間放置した時の、放置前の感染価の対数から放置後の感染価の対数を引いた値 - 請求項1又は2に記載のノロウィルス不活化剤であって、
前記リゾチーム類の含有量が0.05質量%以上である、ノロウィルス不活化剤。 - 請求項1〜3のいずれかに記載のノロウィルス不活化剤であって液剤である、ノロウィルス不活化剤。
- 請求項1〜4のいずれかに記載のノロウィルス不活性剤に含まれるノロウィルス不活化用リゾチーム類の製造方法であって、リゾチーム及び/又はその塩を加熱変性する工程を含む、ノロウィルス不活化用リゾチーム類の製造方法。
- リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含有させる工程を含むノロウィルス不活化剤の製造方法であって、リゾチーム及び/又はその塩を加熱変性して加熱変性物を得る工程、並びに、該加熱変性物を含むノロウィルス不活化剤を得る工程を含む、ノロウィルス不活化剤の製造方法。
- 請求項6に記載のノロウィルス不活化剤の製造方法であって、
前記加熱変性物を得る工程は、
波長660nmの光の透過率が70%超であり、pHが5.0以上7.0以下であり、かつ、リゾチーム及び/又はその塩の濃度が固形分換算で0.5質量%以上7質量%以下であるリゾチーム及び/又はその塩の水溶液を、該水溶液の波長660nmの光の透過率が70%になるまで加熱する第1の加熱工程と、
前記第1の加熱工程の後に、前記水溶液の波長660nmの光の透過率が70%未満の極小値まで加熱した後、70%になるまで該水溶液を加熱する第2の加熱工程と、
前記第2の加熱工程の後に、前記水溶液の波長660nmの光の透過率が70%を超える状態で該水溶液をさらに加熱する第3の加熱工程と、を含む、ノロウィルス不活化剤の製造方法。 - 請求項7において、
前記第3の加熱工程の加熱条件が、該第3の加熱工程で得られた水溶液を0.45μmのメンブレンフィルターでろ過したものとエタノールとを質量比で1:1の割合で混合したときに波長660nmの光の透過率が85%以上になるまで加熱する条件である、ノロウィルス不活化剤の製造方法。 - 請求項7又は8において、
前記第3の加熱工程の後に、前記水溶液を噴霧乾燥又は凍結乾燥させて、粉末状の前記変性物を得る工程をさらに含む、ノロウィルス不活化剤の製造方法。 - リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含む、ノロウィルス感染の予防薬又は治療薬であって、
前記リゾチーム類は、下記定義によって規定される蛍光強度が4,000以上である、ノロウィルス感染の予防薬又は治療薬。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度 - リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類を含む、ノロウィルス不活化用皮膚外用剤であって、
前記リゾチーム類は、下記定義によって規定される蛍光強度が4,000以上である、ノロウィルス不活化用皮膚外用剤。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度 - ノロウィルスの不活化に使用される、リゾチーム及び/又はその塩、並びにこれらの変性物から選ばれる少なくとも1種であるリゾチーム類であって、
前記リゾチーム類は、下記定義によって規定される蛍光強度が4,000以上である、リゾチーム類。
蛍光強度:前記リゾチーム類の濃度が固形分換算で0.05質量%になり、且つリン酸塩の濃度が0.2Mとなるようにリン酸緩衝液(pH7.0)で希釈して得られる希釈液5mLに8mMの1,8−アニリノナフタレンスルホン酸のメタノール溶液25μLを添加して得られる液を30分間室温で反応させた後の該液について、励起波長390nm(励起バンド幅10nm)及び蛍光波長470nm(蛍光バンド幅10nm)の条件にて測定された蛍光強度
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