JP4796914B2 - クラゲ類からのコラーゲン回収方法 - Google Patents
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Description
ステップ101(図中ではステップをSと略す。以下同じ。)では、クラゲ類をそのまま、または細断した後に、クラゲ類を所定の低温で貯蔵する工程である。
ステップ102では、低温貯蔵したクラゲ類を撹拌することにより、クラゲの体組織を液状化させ、未変性のコラーゲンを含む中性塩溶液を生成する時間を短縮する工程である。
ステップ103では、可溶化した未変性のコラーゲンを塩析法により回収する。塩析法は、コラーゲンに関しては未変性のものしか回収されず、簡易な精製も兼ねることが可能となるため、未変性のコラーゲンの回収に好適である。
低温貯蔵工程におけるミズクラゲの組織の変化を明らかにするため、以下に示す[実験1]および[実験2]を行った。なお、これらの実験におけるミズクラゲの貯蔵条件を、実験1については表1、実験2については表2に示した。
本実験の概要を図2および図3に示す。ミズクラゲ組織について、4℃貯蔵下における組織崩壊の様態を観察・撮影した。また、ほぼ完全に組織崩壊したと判断された時点(9日後)で遠心分離に供し、回収した上清に終濃度4.4MになるようNaClを加えた。生じた沈殿を蒸留水に対して透析した後、凍結乾燥しSDS-PAGE(ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動)に供した(実施例1,2)。
本実験の概要を図4に示す。ミズクラゲ1個体をミクロトーム刃を用いて6分割し、4℃貯蔵下で5日後まで観察して、それぞれ日数経過ごとに採取した試料の一部を凍結乾燥した。凍結乾燥試料はスピードカッターにて粉砕後、SDS-PAGEに供した。
組織中のコラーゲンおよびタンパク質を確認するため、マイクロテストチューブに量りとった試料にサンプルバッファー(0.5M Tris-HCl、10% SDS、グリセロール、1% BPB)を加え、80℃、3分間加熱後7.5% ゲルを用いてSDS-PAGEに供した。泳動後のゲルはコマジーブリリアントブルー(CCB-R250)により染色した。分子量マーカーとして、Sharpline(登録商標) Broad range markers(TOYOBO)を用いた。
[実験1]
ミズクラゲの外観は、1日間の貯蔵ではほとんど変化が認められなかったが、2日後より肉眼的に組織崩壊が始まっていた。3日後あたりまで両個体ともかろうじて傘部の形態を保持していたが、個体No.1については4日以降は傘部の形態がかなり崩壊していた。
ミズクラゲ組織を4℃下で5日後まで貯蔵したところ、実験1と同様に崩壊が徐々に進行する様子が観察できた。コントロール試料および1日〜5日間低温貯蔵したミズクラゲ組織の凍結乾燥物のSDS-PAGEパターンを図6に示す。Mはマーカーであり、0〜5はそれぞれの経過日数を示している。また、像の左側にマーカーの分子量(kDa)を示す。コントロールを含むすべての貯蔵実験区おいて130-150K付近に2本のコラーゲン性の成分が認められたが、これらは凍結・解凍法によって得られる部分分解コラーゲンの主要成分に一致するものである。
Claims (6)
- クラゲ類自身が有する内因性酵素を活性化してクラゲ類の分解反応を開始させ、クラゲ類が有するコラーゲンを未変性の状態で可溶化して前記未変性のコラーゲンを含む中性塩溶液を生成するために、クラゲ類を内因性酵素が活性を有し、コラーゲンが変性しない4℃以上10℃以下の温度範囲で、2日以上9日以下の間貯蔵する低温貯蔵工程と、
前記中性塩溶液から前記未変性のコラーゲンを回収する回収工程と、
を有することを特徴とするクラゲ類からのコラーゲン回収方法。 - 前記低温貯蔵したクラゲ類を撹拌する撹拌工程を、さらに含むことを特徴とする請求項1に記載のクラゲ類からのコラーゲン回収方法。
- 前記低温貯蔵工程を除く前記各工程は、
クラゲ類が有するコラーゲンが未変性状態を維持できる25℃以下で行われることを特徴とする請求項1または2に記載のクラゲ類からのコラーゲン回収方法。 - 前記低温貯蔵工程を除く前記各工程は、
クラゲ類自身が有する内因性酵素が活性を有する4℃以上25℃以下で行われることを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載のクラゲ類からのコラーゲン回収方法。 - 前記回収工程において、前記未変性のコラーゲンを塩析法により回収することを特徴とする請求項1から4のいずれかに記載のクラゲ類からのコラーゲン回収方法。
- 前記内因性酵素には、メタロプロテアーゼが含まれることを特徴とする請求項1から5のいずれかに記載のクラゲ類からのコラーゲン回収方法。
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