JP4520349B2 - 細胞賦活剤、及びそれを用いた皮膚外用剤 - Google Patents

Description

本発明は、細胞賦活剤及び該細胞賦活剤を含有する皮膚の老化防止作用を有する皮膚外用剤に関する。

皮膚の表皮および真皮は、表皮細胞、線維芽細胞、およびこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若年の皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、コラーゲン等の皮膚組織の相互作用により水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、皮膚は外見的にもはりや艶があってみずみずしい状態に維持される。ところが、紫外線、乾燥等の外的因子の影響や加齢により、線維芽細胞の増殖が遅くなり皮膚等の保温機能や弾力性が低下する。そして、皮膚ははりや艶を失い、肌荒れ、皺等の老化症状を呈するようになる。

上記機構による皮膚の老化を防止・改善するために、線維芽細胞の賦活や増殖促進作用を有する成分として、ビワ抽出物、α−ヒドロキシ酸、６−ベンジルアミノプリン、プリムラ・シッキメンシス抽出物等が開示されている（特許文献１〜４）。しかしながら、上記成分等の中には、化粧料などに配合した場合の安定性及び安全性の点に問題がある場合もあることから、より安定性の高い、細胞賦活効果を有する素材が望まれていた。

一方、ラン科植物から得られた水溶性の抽出物を含有する化粧料やカトレヤの植物抽出物を含有する皮膚外用剤が提案されているが、これらの抽出物の細胞賦活作用についてはなんら記載されていない（特許文献５及び６参照）。

特公平５−１２７２０６号公報 特開平５−１１２４２２号公報 特開平７−２３３０３７号公報 特許公報３５０７０５５号 特開平２−２７９６１８号公報 特開２００４−６７５４９号公報

そこで、本発明は、線維芽細胞の増殖を促進させる作用を有するとともに、安定的に配合可能な新規な細胞賦活剤を提供することを課題とする。また本発明は、線維芽細胞の増殖を促進させることによって皮膚老化防止作用を発揮し得る皮膚外用剤を提供することを課題とする。

本発明者は、鋭意検討した結果、ラン科カトレヤの抽出物が、線維芽細胞の増殖を促進させる作用を有するという知見を得、この知見に基づいてさらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。
本発明は、ラン科カトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤に関する。また本発明は、前記細胞賦活剤を含有する皮膚の老化防止作用を有する皮膚外用剤、及びさらに、グルコシルルチン、パルミチン酸レチノール、天然ビタミンＥ、酵母抽出物及びパラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシルから選ばれる少なくとも一種を含有する前記皮膚外用剤に関する。
さらに別の観点から、本発明によって、ラン科カトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の抽出物を皮膚に適用することを含む線維芽細胞の増殖を促進する方法；及びラン科カトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の抽出物を皮膚に適用することを含む皮膚の老化を防止する方法；が提供される。

本発明の細胞賦活剤、該細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤は、抗老化作用を有しており、皺に対し高い改善効果を発揮し、加齢による皮膚の皺、たるみの改善等に有効である。

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、ラン科カトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の抽出物を有効成分として含有する細胞賦活剤に関する。ラン科カトレヤは、ラン科レリオカトレヤ属に分類される、カトレヤとレリアとの交配種である。本発明では、ラン科カトレヤ（以下、単に「カトレヤ」という）の根、茎、葉、花、果実、種子等いずれの部分の抽出物も用いることができ、２箇所以上の部分から得られた抽出物を混合して用いてもよく、あるいは２箇所以上の部分から異なる溶媒により抽出された抽出物を二種以上混合して用いてもよい。中でも、花を除いた全草の抽出物を用いるのが好ましい。

前記カトレヤの抽出物は、その根、茎、葉、花、果実、種子等の１箇所又は２箇所以上を、適当な溶媒によって抽出することによって得られる。これらの部分に乾燥、細切、圧搾、又は発酵などの適宜の処理を施した後、抽出処理を施してもよい。抽出は、カトレヤを低温ないし加温下で溶媒中に所定の時間浸漬することによって実施できる。抽出溶媒としては特に限定されないが、例えば水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン等のケトン類；エチルエーテル等のエーテル類；酢酸エチル等のエステル類；等の一種又は二種以上を用いることができる。

上記方法で調製した前記カトレヤの抽出物は、そのまま細胞賦活剤の有効成分として用いることができる。また、適宜の期間そのまま放置し、熟成させた後に用いることもできる。必要ならば、効果に影響のない範囲で、さらに、濾過やイオン交換樹脂等による脱臭、脱色等の精製処理を施した後に用いることもできる。又、液体クロマトグラフィー等の分離手段を用いて、活性の高い画分のみを用いることもできる。

本発明の細胞賦活剤は、カトレヤ抽出物を有効成分として含有し、例えば、食品、医薬、皮膚外用剤（化粧料及び皮膚外用品を含む）等に配合することができる。

本発明の細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤は、線維芽細胞の賦活や増殖促進作用を有し、皮膚の老化を防止する作用を示す。前記皮膚外用剤における本発明の細胞賦活剤の含有量は、好ましくは０．００００１〜５質量％（以下単に「％」で示す）であり、より好ましくは０．００１〜０．５％である。この範囲内であれば、カトレヤ抽出物を安定に配合することができ、かつ高い抗老化効果を発揮させることができる。又、溶液状態の抽出物を使用する場合は、溶質であるカトレヤ抽出物の含有量が上記範囲内であれば、その抽出物溶液濃度は何ら限定されるものではない。
本発明の皮膚外用剤は、本発明の細胞賦活剤を常法に従い、種々の形態の基剤に配合して、製剤化することにより調製することができる。

さらに本発明に係る皮膚外用剤には、活性酸素消去剤、抗炎症剤、美白剤、他の皮膚細胞賦活剤、殺菌剤の他、油類、界面活性剤、保湿剤、紫外線吸収剤、粉体、香料、防腐剤等、一般的な外用剤及び化粧料原料を配合することができる。特に、グルコシルルチン、パルミチン酸レチノール、天然ビタミンＥ、酵母抽出物及びパラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシルから選ばれる少なくとも一種と併用することにより、皮膚の老化防止効果を格段に向上させることができる。これら併用される他の剤の配合量は、０．００００１〜５％であるのが好ましく、０．００１〜０．５％であるのがより好ましい。

本発明に係る皮膚外用剤は、液状、ゲル状、クリーム状又は粉末状の形態で提供することができる。また本発明に係る皮膚外用剤は、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏等の剤型で提供することができ、さらに化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、液状又はクリーム状或いは軟膏型のファンデーションといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料などとしても提供することができる。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
［参考例１ カトレヤ抽出物の調製］
レリオカトレヤ ドラムビート（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の全草１０ｇに、５０ｖｏｌ％含水エチルアルコール溶液１３０ｍＬを加え、加熱抽出を行った後、濃縮液を得て、更に溶媒を除去してカトレヤ抽出物を０．０２ｇ得た。

［参考例２ 大豆抽出物の製造］
大豆の種子１０ｇに、７０ｖｏｌ％含水エチルアルコール１００ｍＬを加え、室温にて３日間抽出を行った後ろ過し、更に溶媒を除去して大豆抽出物０．０５ｇを得た。

［細胞賦活作用試験例］
２４ウエルマイクロプレートに培地を適量とり、ヒト新生児由来の線維芽細胞を播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５％中にて静置した。翌日、参考例１で得たカトレヤ抽出物の最終濃度が０（対照）、２、２０、２００μｇ／ｍＬとなるように試料を添加し混和した。培養４日目に培地を交換し、再度試料を添加した。翌日、５ｍｇ／ｍＬになるように作製したＭＴＴ溶液を各ウエルにそれぞれ１００μＬずつ添加した。４時間培養したのち、培地を除去し、イソプロパノールを用いて生成したホルマザンを溶解した。マイクロプレートリーダーを用いてリファレンスを６３０ｎｍとし５７０ｎｍで吸光度を測定した。
また、比較例としてすでに細胞賦活作用のあることが知られている参考例２で得られた大豆抽出物についても同様の試験を行った。
各試料を添加して生育させた細胞数を対照の細胞数と比較し、その細胞増殖率を指標として細胞賦活効果を評価した。また、細胞数は、あらかじめ求めておいた細胞数と吸光度から検量線を作成し、その検量線から算出した。

表１の結果から、参考例１で調製したカトレヤ抽出物は、公知の細胞賦活剤である大豆抽出物と比較して、ヒト新生児由来の線維芽細胞に対してより高い細胞賦活能を有していることが認められた。

［実施例１：クリームの調製とその皺改善効果の評価］
表２に示す組成及び下記製法でクリームを調製し、下記試験方法でカトレヤ抽出物の皺改善効果を調べた。
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）、（９）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１１）を加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加え乳化した後、冷却しながら更に成分（７）、（８）、（１０）を混合してクリームを得た。
（試験方法）
被験クリーム１品につき３５〜５９才の女性２０名をパネルとし、毎日朝と夜の２回、１２週間にわたって洗顔後に被験クリームの適量を顔面に塗布した。塗布による皺改善全効果を以下の基準よって評価した。
（評価基準）
＜評価＞ ＜内 容＞
有 効 肌の皺が目立たなくなった。
やや有効 肌の皺があまり目立たなくなった。
無 効 使用前と変化なし。

表２に示した結果から、カトレヤ抽出物を配合した本発明品１のクリームは、これを皮膚に適用することにより、肌の「皺」等を改善することができ、はりのある美しい肌とすることが明らかとなった。この効果は、従来細胞賦活剤として知られている大豆抽出物と比較して格段に優れている。また、本発明品１のクリームには成分による着色・変臭等はみられず、保存安定性が良好であった。

［実施例２：クリームの調製とその皺改善効果の評価］
表３に示す組成及び下記製法でクリームを調製し、カトレヤ抽出物と各薬剤を併用した場合の皺改善効果を下記試験方法で調べた。この結果を表３に示す。
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）、（９）、（１０）、（１２）及び（１３）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１５）を加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加え乳化した後、冷却しながら更に成分（７）、（８）、（１１）及び（１４）を混合してクリームを得た。

（試験方法）
被験クリーム１品につき３５〜５９才の女性２０名をパネルとし、毎日朝と夜の２回、１２週間にわたって洗顔後に被験クリームの適量を顔面に塗布した。塗布による皺改善効果を以下の基準よって評価した。
（評価基準）
＜評価＞ ＜内 容＞
有 効 肌の皺が目立たなくなった。
やや有効 肌の皺があまり目立たなくなった。
無 効 使用前と変化なし。

表３に示した結果から、カトレヤ抽出物を配合した本発明品２のクリームは、これを皮膚に適用することにより、肌の「皺」等を改善することができ、はりのある美しい肌とすることが明らかとなった。さらに、カトレヤ抽出物とその他の薬剤を併用して配合した外用剤を皮膚に適用することにより、カトレヤ抽出物を単独で配合した外用剤を適用した場合に比べてより優れた肌の「皺」等の改善効果を発揮し、はりのある美しい肌とすることが明らかとなった。また、本発明品のクリームにはいずれも成分の沈殿等はみられず、保存安定性も良好であった。

本発明によれば、線維芽細胞の増殖を促進し得る細胞賦活剤を提供することができる。本発明の細胞賦活剤を含有する本発明の皮膚外用剤は、皮膚の線維芽細胞の増殖を促進し、皺に対し高い改善効果を発揮し、加齢による皮膚の皺、たるみの改善等に有効であり、皮膚の老化防止用化粧料として有用である。

Claims (1)

1. ラン科カトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ ｄｒｕｍｂｅａｔ）の抽出物を有効成分とする線維芽細胞賦活剤。