JP3941184B2 - 光学活性１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び光学活性３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法 - Google Patents
光学活性１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び光学活性３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法 Download PDFInfo
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に関し、詳しくは微生物を利用した（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの効率的な製造法及び該化合物の加水分解による（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオール、及び（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールは、種々の医薬品、農薬等に利用される光学活性化合物あるいはこれらの合成中間体の合成原料として有用である。
【０００３】
光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールを化学合成により製造する方法については多数の例が報告されている。しかし、いずれの方法も合成工程が複雑であり、収率及び光学純度や原料のコストに問題があるため工業的製法とするには難しい点が多い。
生物学的製法としては、ラセミ体の３−クロロ−１，２−プロパンジオールを光学分割する方法（Ｓ体：特公平４−７３９９９号公報、特開平３−５３８８６号公報、特開平５−４９４８５号公報、Ｒ体：特開昭６２−１２２５９７号公報、特開昭６３−２５１０９８号公報、特開平３−１９１７９４号公報、特開昭６２−６９９９３号公報、特開平３−５３８８６号公報）が知られている。しかし、これらはラセミ体の原料を光学分割する手法であるために取得できる光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの原料に対するモル収率は５０％以下になり経済的に有利な製造法とはなり得ない。
【０００４】
また、プロキラルな化合物である１，３−ジクロロ−２−プロパノールから、生物学的製法により光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールを得る方法（Ｓ体：特開平５−６８５８７、Ｒ体：特開平２−２９１２８０、特開平５−２１９９６５）及びラセミ体の（Ｒ，Ｓ）−エピクロロヒドリンに立体特異的なエポキシ開環活性を有する微生物を作用させて（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する方法（特開平２−２８３２９５、特開平５−２１９９６５）についての報告がある。しかし、これらの方法で得られる光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの光学純度は低く、さらに改良の余地がある。
しかも、３−クロロ−１，２−プロパンジオールはその性質として、水溶性大でありなおかつ高沸点しかも溶媒との分離性が悪いため、水溶液中からの高度な精製は困難を極める。公知の製造方法はこの点でも問題のあるものが多かった。
【０００５】
光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造方法については、（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールについて報告がある。これはラセミ体の１，２−ジアセトキシ−３−クロロプロパンをリパーゼを用いた立体特異的なエステル結合の加水分解反応により（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造する例（Ｉｒｉｕｃｈｉｊｉｍａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８２），４６，１１５３−５７，Ｐｏｐｐｅ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：ａｓｙｍｍｅｔｒｙ（１９９３），４，２２１１−１７）であるが、これらはラセミ体の原料を光学分割する手法であるために取得できる（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールの原料に対するモル収率は５０％以下になり経済的に有利な製造法とはなり得ない。また、（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造に関する報告はない。
【０００６】
一方、微生物の菌体または酵素を用いて対応するカルボニル化合物から不斉還元により光学活性な第二アルコールを得る多数の方法が知られている（Ｌｅｖｅｎｅ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．ＩＩ（１９４３），５４５、Ｇｕｅｔｔｅ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｆｒ．（１９７２），４２１７、Ｍａｎｚｏｃｃｈｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９８７），１００７−１００９、Ｍａｎｚｏｃｃｈｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８８），５３，４４０５−０７、Ｓａｔｏ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．（１９８９），３０，３７０１−０２、宇高正徳ら，有機合成化学協会誌（１９９１），４９，６４７−６５６、Ｔａｎｉｋａｇａ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９８７），３８９−９０、特開平６−２２５７７７号公報）。しかしながら、後述する参考例からも明らかなように、微生物の菌体や酵素による反応は基質の構造に大きく左右されるものであり、基質として１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用いて光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造した例は全く知られていない。更にはこれを加水分解し、光学活性な３−クロロ−１，２−プロパノールを製造した例は知られていない。
本発明は、上記観点からなされたものであり、簡便かつ安価な方法で光学純度の高い１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する方法を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行ったところ、微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させることにより光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールが効率的に得られることを見出し、更には得られた光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酸性条件かアルカリ条件に曝す、またはリパーゼ処理を行うことにより光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールが得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明の要旨は、下記式（Ｉ）：
【０００８】
【化８】
【０００９】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基を立体特異的に還元する能力を有する微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を、前記式（Ｉ）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させて、そのカルボニル基を立体特異的に還元することを特徴とする、下記式（ＩＩ）：
【００１０】
【化９】
【００１１】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または下記式（ＩＩＩ）：
【００１２】
【化１０】
【００１３】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造法に存する。
更に本発明は（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールをアルカリ処理、又はリパーゼ処理等により加水分解することを特徴とする下記式（ＩＶ）：
【００１４】
【化１１】
【００１５】
で示される（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法、及び（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールをアルカリ処理、又はリパーゼ処理等により加水分解することを特徴とする下記式（Ｖ）：
【００１６】
【化１２】
【００１７】
で示される（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に存する。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の製造方法では、原料として上記式（Ｉ）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用い、これに微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を作用させて、上記式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で示される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造し、更にはそれぞれリパーゼ処理、酸処理、又はアルカリ処理等により加水分解して上記式（ＩＶ）または（Ｖ）で示される（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオール、または（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する。
本発明の原料として用いられる１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンは一般式（Ｉ）：
【００１９】
【化１３】
【００２０】
で示されるが、置換基Ｒの好ましいアシル基としてはアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、及びピバロイル基などのアルカノイル基、ホルミル基、シクロヘキサンカルボニル基などの脂環式アシル基、並びにベンゾイル基、及びトルオイル基などの芳香族アシル基から選ばれる基があげられる。これらアシル基の内、さらに好ましい置換基としてはアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、及びベンゾイル基から選ばれる基があげられる。
【００２１】
本発明の光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造方法に用いる微生物としては、１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）する能力を有するものであればいずれを用いてもよいが、好ましい属としては例えば、キャンディダ属、シテロマイセス属、サッカロマイコペシス属、ゲオトリカム属、オーレオバシディウム属、ホルタエア属、ロドトルラ属、ピキア属、デバリオマイセス属、ロイコスピリディウム属、クルイヴェロマイセス属、メトシュニコヴィア属、ウィケルハミア属、アンブロジオザイマ属、ステリグマトマイセス属、フィロバシディウム属、クロエケラ属、トリコスポロノイデス属、フェオココマイセス属、チゴサッカロマイセス属、ハンセニアスポラ属、サッカロマイセス属、ロドコッカス属、ノカルディア属、ゴルドナ属、バークホルデリア属、アルスロバクター属、エンテロバクター属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、オーレオバクテリウム属、エルウィニア属、ミクロコッカス属、キサントモナス属、及び、シュードモナス属などを挙げることができる。これらの中でも、ゲオトリカム属、オーレオバシディウム属、ホルタエア属、ロドトルラ属、ピキア属またはハンセニアスポラ属に属する微生物がより好ましい。
【００２２】
また、好ましい種としては例えば、キャンディダ・サケ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）、キャンディダ・エチェルシ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ）、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、シテロマイセス・マトリテンシス（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ）、サッカロマイコペシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）、ゲオトリカム・フラグランス（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｆｒａｇｒａｎｓ）、オーレオバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌａｎｓ）、ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、ロドトルラ・ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｒａｍｉｎｕｔａ）、キャンディダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、キャンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、キャンディダ・ギレルモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、キャンディダ・マルトーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａlｔｏｓａ）、キャンディダ・ヴァリダ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖａｌｉｄａ）、キャンディダ・ボイディニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）、キャンディダ・ゼイラノイデス（Ｃａｎｄｉｄａ ｚｅｙｌａｎｏｉｄｅｓ）、キャンディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）、ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ファリノーサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・シフェリ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ）、ピキア・カプスラータ（Ｐｉｃｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔａ）、デバリオマイセス・ハンセニ（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、ロイコスポリディウム・スコッティ（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｃｏｔｔｉｉ）、クルイヴェロマイセス・マルキシアヌス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、メトシュニコヴィア・プルケリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉａｍａ）、メトシュニコヴィア・ロイカウフィ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）、ウィケルハミア・フルオレッセンス（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）,アンブロジオザイマ・プラティポディス（Ａｍｂｒｏｚｉｏｚｙｍａ ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ）、ステリグマトマイセス・エルビエ（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｍｙｃｅｓ ｅｌｖｉａｅ）、フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）、クロエケラ・アピキュラタ（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ａｐｉｃｕｌａｔａ）、クロエケラ・コルティス（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ｃｏｒｔｉｓ）、トリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎｏｉｄｅｓ ｍｅｇａｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）、フェオココマイセス・ニグリカンス（Ｐｈａeｏｃｏｃｃｏｍｙｃｅｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・エキシグス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ）、チゴサッカロマイセス・バイリ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ）、ハンセニアスポラ・ギレルモンディ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉ）、ハンセニアスポラ・ウバラム（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｕｖａｒｕｍ）、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）、ロドコッカス・ロドクラス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）,ロドコッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、ロドコッカス・エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）、ノカルディア・グロベルラ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｇｌｏｂｅｒｕｌａ）、ゴルドナ・テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、アルスロバクター・パラフィネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐａｒａｆｆｉｎｅｕｓ）、アルスロバクター・アトロシアネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ａｔｒｏｃｙａｎｅｕｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・タイロラエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｔａyｌｏｒａｅ）、ブレビバクテリウム・ブタニカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔａｎｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）、ブレビバクテリウム・スタティオノイス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔａｔｉｏｎｏｉｓ）、コリネバクテリウム・ヒドロカルボクラスタム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃｌａｓｔｕｍ）、コリネバクテリウム・フラベセンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、コリネバクテリウム・ホアギ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏａｇｉｉ）、オーレオバクテリウム・バルケリ（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂａｒｋｅｒｉ）、エルウィニア・ラポンチシ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）、ミクロコッカス・ロセウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）、キサントモナス・マルトフィラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）、及びシュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）などを挙げることができる。
【００２３】
上記の微生物の具体的な菌株としては、
キャンディダ・サケ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）ＩＦＯ０４３５、
キャンディダ・エチェルシ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ）ＩＦＯ１５９２、
キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＩＡＭ４１４７、
キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＩＦＯ１６４７、
キャンディダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）ＩＦＯ０７６１、
キャンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１８５６、
キャンディダ・ギレルモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）ＩＦＯ０５６６、
キャンディダ・マルトーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＩＦＯ１９７７、
キャンディダ・ヴァリダ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖａｌｉｄａ）ＩＦＯ１０３１８、
キャンディダ・ボイディニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）ＩＦＯ１０２４０、
キャンディダ・ゼイラノイデス（Ｃａｎｄｉｄａ ｚｅｙｌａｎｏｉｄｅｓ）ＣＢＳ６４０８、
キャンディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）ＩＦＯ０５９１、
シテロマイセス・マトリテンシス（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ）ＩＦＯ０９５４、
サッカロマイコペシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）ＩＦＯ１７４４、
ゲオトリカム・フラグランス（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｆｒａｇｒａｎｓ）ＩＡＭ１２７０３、
オーレオバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌａｎｓ）ＩＭＩ０６２４５６、
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５、
ロドトルラ・ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｒａ ｍｉｎｕｔａ）ＩＦＯ０３８７、
ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）ＩＦＯ０１１８、
ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）ＩＦＯ０８６４、
ピキア・ファリノーサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ）ＩＦＯ１７４１、
ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＩＦＯ１０１３、
ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）ＮＲＲＬ Ｙ−８１６２、
ピキア・シフェリ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ）ＩＦＯ０７９３、
ピキア・カプスラータ（Ｐｉｃｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔａ）ＩＦＯ０９８４、
デバリオマイセス・ハンセニ（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ）ＩＦＯ００３４、
ロイコスポリディウム・スコッティ（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｃｏｔｔｉｉ）ＩＦＯ１２１２、
クルイヴェロマイセス・マルキシアヌス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）ＡＴＣＣ１００２２、
クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＩＦＯ１０５０、
クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＩＦＯ１７８０、
メトシュニコヴィア・プルケリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉａｍａ）ＩＦＯ０８６３、
メトシュニコヴィア・ロイカウフィ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）ＩＦＯ１６７９、
ウィケルハミア・フルオレッセンス（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１１１６、
アンブロジオザイマ・プラティポディス（Ａｍｂｒｏｚｉｏｚｙｍａ ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ）ＩＦＯ１４７１、
ステリグマトマイセス・エルビアエ（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｍｙｃｅｓ ｅｌｖｉａｅ）ＩＦＯ１８４３、
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１８５、
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１１９、
クロエケラ・アピキュラタ（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ａｐｉｃｕｌａｔａ）ＩＦＯ０１５１、
クロエケラ・コルティス（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ｃｏｒｔｉｓ）ＩＦＯ０６３１、
トリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎｏｉｄｅｓ ｍｅｇａｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）ＣＢＳ５６７．８５、
フェオココマイセス・ニグリカンス（Ｐｈａｅｏｃｏｃｃｏｍｙｃｅｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）ＣＢＳ６５２．７６、
ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）ＩＦＯ０８７０、
サッカロマイセス・エキシグス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ）ＩＦＯ１１７０、
チゴサッカロマイセス・バイリ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ）ＩＦＯ１６１１、
ハンセニアスポラ・ギレルモンディ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉ）ＩＦＯ１４１１、
ハンセニアスポラ・ウバラム（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｕｖａｒｕｍ）ＩＦＯ１７５５、
ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＩＦＯ１２６２８、
ロドコッカス・ロドクラス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）ＡＴＣＣ１７０４１、
ロドコッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）ＡＴＣＣ７６９８、
ロドコッカス・エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＩＦＯ１３１６４、
ノカルディア・グロベルラ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｇｌｏｂｅｒｕｌａ）ＡＴＣＣ１５９０３、
ゴルドナ・テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）ＡＴＣＣ２５５９４、
バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）ＡＴＣＣ２５４１６、
アルスロバクター・パラフィネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆｆｉｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ１５５９０、
アルスロバクター・アトロシアネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ａｔｒｏｃｙａｎｅｕｓ）ＪＣＭ１３２９、
エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）ＩＦＯ１３５３４、
エンテロバクター・タイロラエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｔａｙｌｏｒａｅ）ＪＣＭ３９４３、
ブレビバクテリウム・ブタニカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔａｎｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ２１１９６、
ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ２１５３３、
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）ＪＣＭ１３０５、
ブレビバクテリウム・スタティオノイス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔａｔｉｏｎｏｉｓ）ＩＦＯ１２１４４、
コリネバクテリウム・ヒドロカルボクラスタム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃｌａｓｔｕｍ）ＡＴＣＣ１５９６０、
コリネバクテリウム・フラベセンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）ＪＣＭ１３１７、
コリネバクテリウム・ホアギ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏａｇｉｉ）ＪＣＭ１３１９、
オーレオバクテリウム・バルケリ（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂａｒｋｅｒｉ）ＪＣＭ１３４３、
エルウィニア・ラポンチシ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）ＭＡＦＦ０３−０１３３１、
ミクロコッカス・ロセウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）ＩＦＯ３７６４、
キサントモナス・マルトフィラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ１３６３７、
及び、シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）ＩＦＯ１３５８３、
の菌株を挙げることができる。上記微生物は、野生株、ＵＶ照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、亜硝酸処理、アクリジン処理等による変異株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
【００２４】
また、上記の菌株は全て公知の菌株であり、それぞれ、（財）発酵研究所（ＩＦＯ）、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、インターナショナルマイコロジカルインスティテュート（ＩＭＩ）、農業生物資源研究所（ＭＡＦＦ）、理化学研究所微生物系統保存施設（ＪＣＭ）、セントラルビューローフォーシュメルカルチャーズ（ＣＢＳ）、及びアグリカルチュラルリサーチサービスカルチャーコレクション（ＮＲＲＬ）及び微生物微細藻類総合センター（ＩＡＭ）から容易に入手することができる。
【００２５】
本発明の製造方法においては、上述した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）する能力を有する微生物の１種もしくは２種以上が、菌体及び／又はそれらの調製物のかたちで用いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知の手法により処理したもの、すなわち、アセトン処理したもの、凍結乾燥処理したもの、又は菌体を物理的もしくは酵素的に破砕したもの等の調製物を用いることができる。また、これらの菌体又は調製物から、上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）して式（ＩＩ）、もしくは式（ＩＩＩ）で表される光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールへ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いることも可能である。さらには、この様にして得られた菌体、調製物、酵素画分等をポリアクリルアミドゲル、アルギン酸ゲル、カラギーナンゲル等の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そこで、本明細書において「菌体及び／又はそれらの調製物」の用語は、上述の菌体、調製物、酵素画分、及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００２６】
以下に、本発明の光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び、光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造方法について具体的に説明する。
本発明の製造方法では、原料として上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用い、これに上記記載の微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を作用させ、上記式（ＩＩ）、または式（ＩＩＩ）で表される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造する。
【００２７】
本発明の製造方法において微生物は、通常、培養して用いられるが、この培養については常法通り行うことができる。培養に使用する培地としては、グルコース、シュークロース、グリセリン、クエン酸等の炭素源、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等の無機窒素源、酵母エキス、ペプトン、尿素、肉エキス、コーンスティープリカー等の有機窒素源、マグネシウム、カリウム等の無機塩類、リン酸等を適宜組み合わせて含有したものを用いればよい。また、これらの成分以外にも、反応活性を促進するための物質として、無機塩類、微量金属類、アミノ酸類、あるいはビタミン類を添加することも可能である。培養は、培地のｐＨを３〜１０の範囲に調整し、好気条件下に、温度１０〜４５℃、ｐＨ３−１０の適当な範囲に制御しつつ、１〜１０日の範囲で活性が最大になるまで行うことが好ましい。
【００２８】
本発明においては、この様に培養して得られる微生物の菌体及び／又はその調製物と上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンとを水性媒体中で接触させて反応させ、反応生成物として上記式（ＩＩ）で表される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または上記式（ＩＩＩ）で示される（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを得る。ここで用いられる水性媒体としては、水、緩衝液または培養液等が挙げられるが、この水性媒体には、水溶性有機溶媒または脂溶性有機溶媒を適宜含有させることも可能である。また、反応に際して、反応液にグルコース、シュークロース、フルクトース、エタノール、メタノール、及び酢酸等の炭素源をエネルギー源として添加することにより収量が向上したり、立体選択性が反対になることがある。
【００２９】
反応液に添加する１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンの量は通常その反応液中の濃度が０．０１〜５０重量％となる程度の量であり、添加された１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンは反応液中で水性媒体に必ずしも完全に溶解していなくてもよい。また、反応に基質阻害が起こる場合には、反応が進むにつれて消費される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを消費された量だけ連続的にあるいは間歇的に添加していくことにより生成物の蓄積量をより向上させることが可能である。反応液に添加する微生物の菌体及び／又はその調製物の量は、菌体を添加する場合は反応液にその菌体濃度が０．０１〜２０重量％程度となるように添加し、酵素のような調製物を用いる場合には、酵素の比活性を求め、添加したときに上記菌体濃度に相当する酵素濃度になるような量を添加する。この反応における好ましい反応条件は、反応温度が氷点〜７０℃、好ましくは１０〜４０℃、ｐＨが２〜１１、好ましくは５〜８、反応時間が１〜１００時間程度である。
【００３０】
上記反応により反応生成物として（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールが得られるが、反応液から目的生成物である（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールや（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを単離する方法としては、遠心分離もしくは膜分離等にて菌体及び／又はその調製物を除去した後、反応液よりクロロホルム、酢酸エチル等の有機溶媒で（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールや（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを抽出し、蒸留、カラムクロマトグラフィ等の公知の方法を利用して単離する等の方法を挙げることができる。
【００３１】
本発明の光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造方法において、加水分解される光学活性な１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールは上記の方法により微生物還元の反応液より単離されたものでも、反応液に含まれるものでもよい。なお、加水分解方法としては、希硫酸等の酸による加水分解、アルコールや水性媒体中における水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウム等の塩基による加水分解、またはリパーゼによる加水分解等の公知の方法が挙げられる。酸による加水分解では、希硫酸、希塩酸等を用いることが好ましく、温度は０−１００℃、好ましくは２０−７０℃で数時間攪拌する。塩基による加水分解では、溶媒としては水性媒体（水性媒体としては前記のものが挙げられる）、または、メタノール等のアルコールが用いられ、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、または、炭酸カリウム等の塩基性物質を添加することにより、温度０−１００℃、好ましくは０−５０℃で数時間攪拌することが好ましい。
【００３２】
リパーゼによる加水分解では、水、緩衝液、または非水溶性有機溶媒と水性媒体の混合系等の溶媒系が用いられる。リパーゼは酵素そのもの、または公知の方法で固定化したもの両方とも使用できる。反応が進むにつれてｐＨが変動するので、これを制御することにより反応性をあげることも可能である。温度は０−６０℃で、０ー１００時間攪拌し、反応を行う。
各反応終了後、必要により遠心操作、または膜分離等公知の方法により、酵素、または固定化酵素を反応液より分離したり、酸または塩基により中和操作等を行った後、カラムクロマトグラフィー、溶媒抽出等公知の方法を用いて、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを精製する。
【００３３】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野における通常の変更をすることができる。
【００３４】
【実施例１】
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１１９ をグルコース２．０％、酵母エキス１．０％、ペプトン１．０％を含む培地（ｐＨ６．５）１００ｍＬに植菌し、３０℃で２４時間好気培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、１００ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液に懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体をグルコース２．０ｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン０．５ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１００ｍＬに懸濁し、室温で４時間攪拌しつつ反応させた。途中、反応経過２時間後、さらに０．５ｇの１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノンを添加し反応を進めた。反応終了後、遠心分離により除菌し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析したところ、保持時間９．１６分に主な反応生成物と思われるピークを確認した。
【００３５】
【表１】
高速液体クロマトグラフィー分析条件１
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II−ＨＧ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
展開液：水／アセトニトリル＝８０／２０（０．１ｍＬ／Ｌ トリフルオロ酢酸含有）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ．
カラム温度：室温
検出：示差屈折計
【００３６】
これを単離すべく、上述反応液上清を酢酸エチル３００ｍＬと混合し溶媒抽出操作を行った。分離した酢酸エチル層に少量の無水硫酸ナトリウムを添加し脱水後濾過し、減圧濃縮を行った。得られた油状成分は０．４０ｇであり、さらにＫｉｅｓｇｅｌ１００（メルク社製シリカゲル）を用いたカラムクロマトグラフィーを行った結果、上記高速液体クロマトグラフィ（分析条件１）の保持時間９．１６分の成分に一致する標品を０．２２ｇ得た。これをＮＭＲにより分析したところ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，５００ＭＨｚ：δ（ｐ．ｐ．ｍ．）＝２．０５（ｓ，３Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，６．０Ｈｚ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），４．０２（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｍ，２Ｈ）であり、本生成物が１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールであることを確認した。本標品５０ｍｇを２．０ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に溶かし、キトパールリパーゼＣＶ（富士紡績（株）社製）を１０ｍｇ添加して室温にて攪拌反応させたところ、反応は定量的に進行した。１２時間後、薄層クロマトグラフィーにより残存基質がなく、３−クロロ−１，２−プロパンジオールと同じＲｆ値を示すスポットが存在するのを確認した。遠心操作によりリパーゼを除去し、上清２．０ｍＬから酢酸エチル２．０ｍＬにより３度抽出した。合計６ｍＬの酢酸エチル溶液を濃縮し、残存物をイソプロパノールに溶解後、高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により本反応生成物が３−クロロ−１，２−プロパンジオールであることを確認した。さらに、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により、本化合物の立体及び光学純度を測定したところ、Ｒ体８５．２％ｅ．ｅ．（保持時間は（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールが１９．３分、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールが１７．６分である。）であることが判明した。
【００３７】
【表２】
高速液体クロマトグラフィー分析条件２
カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
展開液：ヘキサン／イソプロピルアルコール＝９／１
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ．
カラム温度：室温
検出：示差屈折計
【００３８】
【実施例２】
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５をサッカロース２．０％、酵母エキス２．０％、を含む培地（ｐＨ５．５）２００ｍＬに植菌し、２７℃で４５時間好気培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、２００ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体をグルコース４．０ｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン１．０ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２００ｍＬに懸濁し、室温で５時間攪拌しつつ反応させた。反応終了後、遠心分離により除菌し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析したところ、保持時間９．１６分に主な反応生成物と思われるピークがあり、１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールのパターンと一致した。これを単離すべく、上述反応液上清を酢酸エチル３５０ｍＬと混合し溶媒抽出操作を行った。分離した酢酸エチル層に少量の無水硫酸ナトリウムを添加し脱水後濾過し、減圧濃縮を行った。得られた油状成分は０．６８ｇであった。さらに本標品に７ｍＬの１Ｍ硫酸を添加し６０℃で１時間攪拌し反応させた。これを粉末炭酸水素ナトリウムで中和し、濃縮後４０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。本酢酸エチル溶液を濃縮したところ、残存物は０．４２ｇであった。これをイソプロパノールに溶解後、高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により本反応生成物が３−クロロ−１，２−プロパンジオールであり、全反応工程のモル収率が５７．７％であることを確認した。さらに、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により、本化合物の立体及び光学純度を測定したところ、Ｓ体９３．８％ｅ．ｅ．であることが判明した。
【００３９】
【実施例３】
第１表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコ−ス２．０％、酵母エキス１．０％、ペプトン２．０％を含み、ｐＨ６．５とした培地２０ｍｌに植菌し、３０℃で２４〜４８時間好気的に振盪培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、１０ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）で集菌体を懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）２．０ｍＬ、グルコース４０ｍｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン２０ｍｇに懸濁し、室温で攪拌しつつ２時間反応させた。
【００４０】
反応終了後、各反応液から遠心分離により菌体を除去し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析し反応収率を求めた。さらにこの反応液上清に酢酸エチル５ｍＬを添加して、生成した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酢酸エチル層に抽出した。濃縮後、残存物を０．５ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液に溶解し、キトパールリパーゼＣＶを５ｍｇ添加し、室温で一晩反応させた。薄層クロマトグラフィーで反応終了を確認し遠心操作で酵素を除去した後、３ｍＬの酢酸エチルに反応生成物を抽出した。この酢酸エチル溶液を濃縮後、残存物をイソプロパノールに溶解して、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により光学純度測定を行うと共に絶対配置を求めた。得られた結果を第１表に示す。
【００４１】
【表３】
【００４２】
【実施例４】
第２表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコース１．０％、酵母エキス１．０％、ポリペプトン０．５％、リン酸水素２カリウム０．３％、リン酸２水素カリウム０．１％を含み、ｐＨ７．０とした培地５ｍＬに植菌し、３０℃で４６〜７２時間好気的に振盪培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、５ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）で集菌体を懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）５．０ｍＬ、グルコース１００ｍｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン２５ｍｇに懸濁し、室温で攪拌しつつ４時間反応させた。
【００４３】
反応終了後、各反応液から遠心分離により菌体を除去し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析し反応収率を求めた。さらにこの反応液上清に酢酸エチル８ｍＬを添加して、生成した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酢酸エチル層に抽出した。濃縮後、残存物を０．５ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液に溶解し、キトパールリパーゼＣＶを５ｍｇ添加し、室温で一晩反応させた。薄層クロマトグラフィーで反応終了を確認し遠心操作で酵素を除去した後、３ｍＬの酢酸エチルに反応生成物を抽出した。この酢酸エチル溶液を濃縮後、残存物をイソプロパノールに溶解して、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により光学純度測定を行うと共に絶対配置を求めた。得られた結果を第２表に示す。
【００４４】
【表４】
【００４５】
【実施例５】
第３表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコ−ス０．５％、酵母エキス１．０％、ニュートリエントブロス０．５％、リン酸水素２カリウム０．３％、リン酸２水素カリウム０．１％、硫酸鉄（ＩＩ）７水塩５０ｐｐｍ、塩化マンガン６水塩１０ｐｐｍ、塩化コバルト６水塩１０ｐｐｍ、及びモリブデン酸アンモニウム４水塩１０ｐｐｍを含み、ｐＨ７．０とした培地２０ｍｌに植菌し、３０℃で２４〜４８時間好気的に振盪培養した。培養終了後、実施例３に記載の方法により、２時間反応させた。
反応終了後、実施例３に記載の方法により反応収率、光学純度測定、及び絶対配置を求めた。得られた結果を第３表に示す。
【００４６】
【表５】
【００４７】
【参考例】
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５を実施例２に記載の方法に従い培養して集菌した。その菌体をグルコース４．０ｇ、及び１−アセトキシ−２−プロパノン（特開平６−２２５７７７号公報に記載の基質）１．０ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２００ｍＬに懸濁し、室温で５時間攪拌しつつ反応させた。しかし、薄層クロマトグラフィー（シリカゲル６０ Ｆ２５４ （ＭＥＲＣＫ社製）、展開液：酢酸エチル／酢酸＝７０／１、染色：１０％ リンモリブデン酸ナトリウム エタノール溶液）において、１−アセトキシ−２−プロパノール（Ｒｆ０．７０）、またはプロパンジオール（Ｒｆ０．３５）を検出することはできなかった。
【００４８】
【発明の効果】
本発明の製造方法によれば、特定の微生物を１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させることにより光学活性な（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを効率的に製造することが可能であり、またさらにそれら加水分解することにより光学活性な（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを効率的に製造することが可能であり、工業的に極めて有利である。
【発明の属する技術分野】
本発明は（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に関し、詳しくは微生物を利用した（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの効率的な製造法及び該化合物の加水分解による（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオール、及び（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールは、種々の医薬品、農薬等に利用される光学活性化合物あるいはこれらの合成中間体の合成原料として有用である。
【０００３】
光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールを化学合成により製造する方法については多数の例が報告されている。しかし、いずれの方法も合成工程が複雑であり、収率及び光学純度や原料のコストに問題があるため工業的製法とするには難しい点が多い。
生物学的製法としては、ラセミ体の３−クロロ−１，２−プロパンジオールを光学分割する方法（Ｓ体：特公平４−７３９９９号公報、特開平３−５３８８６号公報、特開平５−４９４８５号公報、Ｒ体：特開昭６２−１２２５９７号公報、特開昭６３−２５１０９８号公報、特開平３−１９１７９４号公報、特開昭６２−６９９９３号公報、特開平３−５３８８６号公報）が知られている。しかし、これらはラセミ体の原料を光学分割する手法であるために取得できる光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの原料に対するモル収率は５０％以下になり経済的に有利な製造法とはなり得ない。
【０００４】
また、プロキラルな化合物である１，３−ジクロロ−２−プロパノールから、生物学的製法により光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールを得る方法（Ｓ体：特開平５−６８５８７、Ｒ体：特開平２−２９１２８０、特開平５−２１９９６５）及びラセミ体の（Ｒ，Ｓ）−エピクロロヒドリンに立体特異的なエポキシ開環活性を有する微生物を作用させて（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する方法（特開平２−２８３２９５、特開平５−２１９９６５）についての報告がある。しかし、これらの方法で得られる光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの光学純度は低く、さらに改良の余地がある。
しかも、３−クロロ−１，２−プロパンジオールはその性質として、水溶性大でありなおかつ高沸点しかも溶媒との分離性が悪いため、水溶液中からの高度な精製は困難を極める。公知の製造方法はこの点でも問題のあるものが多かった。
【０００５】
光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造方法については、（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールについて報告がある。これはラセミ体の１，２−ジアセトキシ−３−クロロプロパンをリパーゼを用いた立体特異的なエステル結合の加水分解反応により（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造する例（Ｉｒｉｕｃｈｉｊｉｍａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８２），４６，１１５３−５７，Ｐｏｐｐｅ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：ａｓｙｍｍｅｔｒｙ（１９９３），４，２２１１−１７）であるが、これらはラセミ体の原料を光学分割する手法であるために取得できる（Ｒ）−１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールの原料に対するモル収率は５０％以下になり経済的に有利な製造法とはなり得ない。また、（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造に関する報告はない。
【０００６】
一方、微生物の菌体または酵素を用いて対応するカルボニル化合物から不斉還元により光学活性な第二アルコールを得る多数の方法が知られている（Ｌｅｖｅｎｅ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．ＩＩ（１９４３），５４５、Ｇｕｅｔｔｅ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｆｒ．（１９７２），４２１７、Ｍａｎｚｏｃｃｈｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９８７），１００７−１００９、Ｍａｎｚｏｃｃｈｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８８），５３，４４０５−０７、Ｓａｔｏ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．（１９８９），３０，３７０１−０２、宇高正徳ら，有機合成化学協会誌（１９９１），４９，６４７−６５６、Ｔａｎｉｋａｇａ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９８７），３８９−９０、特開平６−２２５７７７号公報）。しかしながら、後述する参考例からも明らかなように、微生物の菌体や酵素による反応は基質の構造に大きく左右されるものであり、基質として１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用いて光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造した例は全く知られていない。更にはこれを加水分解し、光学活性な３−クロロ−１，２−プロパノールを製造した例は知られていない。
本発明は、上記観点からなされたものであり、簡便かつ安価な方法で光学純度の高い１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する方法を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行ったところ、微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させることにより光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールが効率的に得られることを見出し、更には得られた光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酸性条件かアルカリ条件に曝す、またはリパーゼ処理を行うことにより光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールが得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明の要旨は、下記式（Ｉ）：
【０００８】
【化８】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基を立体特異的に還元する能力を有する微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を、前記式（Ｉ）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させて、そのカルボニル基を立体特異的に還元することを特徴とする、下記式（ＩＩ）：
【００１０】
【化９】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または下記式（ＩＩＩ）：
【００１２】
【化１０】
（式中、Ｒはアシル基を示す。）で示される（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造法に存する。
更に本発明は（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールをアルカリ処理、又はリパーゼ処理等により加水分解することを特徴とする下記式（ＩＶ）：
【００１４】
【化１１】
で示される（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法、及び（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールをアルカリ処理、又はリパーゼ処理等により加水分解することを特徴とする下記式（Ｖ）：
【００１６】
【化１２】
で示される（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造法に存する。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の製造方法では、原料として上記式（Ｉ）で示される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用い、これに微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を作用させて、上記式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で示される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造し、更にはそれぞれリパーゼ処理、酸処理、又はアルカリ処理等により加水分解して上記式（ＩＶ）または（Ｖ）で示される（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオール、または（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを製造する。
本発明の原料として用いられる１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンは一般式（Ｉ）：
【００１９】
【化１３】
で示されるが、置換基Ｒの好ましいアシル基としてはアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、及びピバロイル基などのアルカノイル基、ホルミル基、シクロヘキサンカルボニル基などの脂環式アシル基、並びにベンゾイル基、及びトルオイル基などの芳香族アシル基から選ばれる基があげられる。これらアシル基の内、さらに好ましい置換基としてはアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、及びベンゾイル基から選ばれる基があげられる。
【００２１】
本発明の光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールの製造方法に用いる微生物としては、１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）する能力を有するものであればいずれを用いてもよいが、好ましい属としては例えば、キャンディダ属、シテロマイセス属、サッカロマイコペシス属、ゲオトリカム属、オーレオバシディウム属、ホルタエア属、ロドトルラ属、ピキア属、デバリオマイセス属、ロイコスピリディウム属、クルイヴェロマイセス属、メトシュニコヴィア属、ウィケルハミア属、アンブロジオザイマ属、ステリグマトマイセス属、フィロバシディウム属、クロエケラ属、トリコスポロノイデス属、フェオココマイセス属、チゴサッカロマイセス属、ハンセニアスポラ属、サッカロマイセス属、ロドコッカス属、ノカルディア属、ゴルドナ属、バークホルデリア属、アルスロバクター属、エンテロバクター属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、オーレオバクテリウム属、エルウィニア属、ミクロコッカス属、キサントモナス属、及び、シュードモナス属などを挙げることができる。これらの中でも、ゲオトリカム属、オーレオバシディウム属、ホルタエア属、ロドトルラ属、ピキア属またはハンセニアスポラ属に属する微生物がより好ましい。
【００２２】
また、好ましい種としては例えば、キャンディダ・サケ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）、キャンディダ・エチェルシ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ）、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、シテロマイセス・マトリテンシス（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ）、サッカロマイコペシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）、ゲオトリカム・フラグランス（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｆｒａｇｒａｎｓ）、オーレオバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌａｎｓ）、ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、ロドトルラ・ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｒａｍｉｎｕｔａ）、キャンディダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、キャンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、キャンディダ・ギレルモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、キャンディダ・マルトーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａlｔｏｓａ）、キャンディダ・ヴァリダ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖａｌｉｄａ）、キャンディダ・ボイディニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）、キャンディダ・ゼイラノイデス（Ｃａｎｄｉｄａ ｚｅｙｌａｎｏｉｄｅｓ）、キャンディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）、ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ファリノーサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・シフェリ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ）、ピキア・カプスラータ（Ｐｉｃｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔａ）、デバリオマイセス・ハンセニ（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、ロイコスポリディウム・スコッティ（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｃｏｔｔｉｉ）、クルイヴェロマイセス・マルキシアヌス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、メトシュニコヴィア・プルケリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉａｍａ）、メトシュニコヴィア・ロイカウフィ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）、ウィケルハミア・フルオレッセンス（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）,アンブロジオザイマ・プラティポディス（Ａｍｂｒｏｚｉｏｚｙｍａ ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ）、ステリグマトマイセス・エルビエ（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｍｙｃｅｓ ｅｌｖｉａｅ）、フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）、クロエケラ・アピキュラタ（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ａｐｉｃｕｌａｔａ）、クロエケラ・コルティス（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ｃｏｒｔｉｓ）、トリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎｏｉｄｅｓ ｍｅｇａｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）、フェオココマイセス・ニグリカンス（Ｐｈａeｏｃｏｃｃｏｍｙｃｅｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）、サッカロマイセス・エキシグス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ）、チゴサッカロマイセス・バイリ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ）、ハンセニアスポラ・ギレルモンディ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉ）、ハンセニアスポラ・ウバラム（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｕｖａｒｕｍ）、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）、ロドコッカス・ロドクラス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）,ロドコッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、ロドコッカス・エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）、ノカルディア・グロベルラ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｇｌｏｂｅｒｕｌａ）、ゴルドナ・テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、アルスロバクター・パラフィネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐａｒａｆｆｉｎｅｕｓ）、アルスロバクター・アトロシアネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ａｔｒｏｃｙａｎｅｕｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・タイロラエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｔａyｌｏｒａｅ）、ブレビバクテリウム・ブタニカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔａｎｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）、ブレビバクテリウム・スタティオノイス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔａｔｉｏｎｏｉｓ）、コリネバクテリウム・ヒドロカルボクラスタム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃｌａｓｔｕｍ）、コリネバクテリウム・フラベセンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、コリネバクテリウム・ホアギ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏａｇｉｉ）、オーレオバクテリウム・バルケリ（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂａｒｋｅｒｉ）、エルウィニア・ラポンチシ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）、ミクロコッカス・ロセウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）、キサントモナス・マルトフィラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）、及びシュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）などを挙げることができる。
【００２３】
上記の微生物の具体的な菌株としては、
キャンディダ・サケ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ）ＩＦＯ０４３５、
キャンディダ・エチェルシ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ）ＩＦＯ１５９２、
キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＩＡＭ４１４７、
キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＩＦＯ１６４７、
キャンディダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）ＩＦＯ０７６１、
キャンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１８５６、
キャンディダ・ギレルモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）ＩＦＯ０５６６、
キャンディダ・マルトーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＩＦＯ１９７７、
キャンディダ・ヴァリダ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖａｌｉｄａ）ＩＦＯ１０３１８、
キャンディダ・ボイディニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）ＩＦＯ１０２４０、
キャンディダ・ゼイラノイデス（Ｃａｎｄｉｄａ ｚｅｙｌａｎｏｉｄｅｓ）ＣＢＳ６４０８、
キャンディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）ＩＦＯ０５９１、
シテロマイセス・マトリテンシス（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ）ＩＦＯ０９５４、
サッカロマイコペシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）ＩＦＯ１７４４、
ゲオトリカム・フラグランス（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｆｒａｇｒａｎｓ）ＩＡＭ１２７０３、
オーレオバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌａｎｓ）ＩＭＩ０６２４５６、
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５、
ロドトルラ・ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｒａ ｍｉｎｕｔａ）ＩＦＯ０３８７、
ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）ＩＦＯ０１１８、
ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）ＩＦＯ０８６４、
ピキア・ファリノーサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ）ＩＦＯ１７４１、
ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＩＦＯ１０１３、
ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）ＮＲＲＬ Ｙ−８１６２、
ピキア・シフェリ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ）ＩＦＯ０７９３、
ピキア・カプスラータ（Ｐｉｃｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔａ）ＩＦＯ０９８４、
デバリオマイセス・ハンセニ（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ）ＩＦＯ００３４、
ロイコスポリディウム・スコッティ（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｃｏｔｔｉｉ）ＩＦＯ１２１２、
クルイヴェロマイセス・マルキシアヌス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）ＡＴＣＣ１００２２、
クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＩＦＯ１０５０、
クルイヴェロマイセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＩＦＯ１７８０、
メトシュニコヴィア・プルケリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉａｍａ）ＩＦＯ０８６３、
メトシュニコヴィア・ロイカウフィ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）ＩＦＯ１６７９、
ウィケルハミア・フルオレッセンス（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１１１６、
アンブロジオザイマ・プラティポディス（Ａｍｂｒｏｚｉｏｚｙｍａ ｐｌａｔｙｐｏｄｉｓ）ＩＦＯ１４７１、
ステリグマトマイセス・エルビアエ（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｍｙｃｅｓ ｅｌｖｉａｅ）ＩＦＯ１８４３、
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１８５、
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１１９、
クロエケラ・アピキュラタ（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ａｐｉｃｕｌａｔａ）ＩＦＯ０１５１、
クロエケラ・コルティス（Ｋｌｏｅｋｅｒａ ｃｏｒｔｉｓ）ＩＦＯ０６３１、
トリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎｏｉｄｅｓ ｍｅｇａｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）ＣＢＳ５６７．８５、
フェオココマイセス・ニグリカンス（Ｐｈａｅｏｃｏｃｃｏｍｙｃｅｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）ＣＢＳ６５２．７６、
ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）ＩＦＯ０８７０、
サッカロマイセス・エキシグス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ）ＩＦＯ１１７０、
チゴサッカロマイセス・バイリ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ）ＩＦＯ１６１１、
ハンセニアスポラ・ギレルモンディ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉ）ＩＦＯ１４１１、
ハンセニアスポラ・ウバラム（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ ｕｖａｒｕｍ）ＩＦＯ１７５５、
ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＩＦＯ１２６２８、
ロドコッカス・ロドクラス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）ＡＴＣＣ１７０４１、
ロドコッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）ＡＴＣＣ７６９８、
ロドコッカス・エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＩＦＯ１３１６４、
ノカルディア・グロベルラ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｇｌｏｂｅｒｕｌａ）ＡＴＣＣ１５９０３、
ゴルドナ・テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）ＡＴＣＣ２５５９４、
バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）ＡＴＣＣ２５４１６、
アルスロバクター・パラフィネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆｆｉｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ１５５９０、
アルスロバクター・アトロシアネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ａｔｒｏｃｙａｎｅｕｓ）ＪＣＭ１３２９、
エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）ＩＦＯ１３５３４、
エンテロバクター・タイロラエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｔａｙｌｏｒａｅ）ＪＣＭ３９４３、
ブレビバクテリウム・ブタニカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔａｎｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ２１１９６、
ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ２１５３３、
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）ＪＣＭ１３０５、
ブレビバクテリウム・スタティオノイス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔａｔｉｏｎｏｉｓ）ＩＦＯ１２１４４、
コリネバクテリウム・ヒドロカルボクラスタム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃｌａｓｔｕｍ）ＡＴＣＣ１５９６０、
コリネバクテリウム・フラベセンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）ＪＣＭ１３１７、
コリネバクテリウム・ホアギ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏａｇｉｉ）ＪＣＭ１３１９、
オーレオバクテリウム・バルケリ（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂａｒｋｅｒｉ）ＪＣＭ１３４３、
エルウィニア・ラポンチシ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）ＭＡＦＦ０３−０１３３１、
ミクロコッカス・ロセウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）ＩＦＯ３７６４、
キサントモナス・マルトフィラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ１３６３７、
及び、シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）ＩＦＯ１３５８３、
の菌株を挙げることができる。上記微生物は、野生株、ＵＶ照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、亜硝酸処理、アクリジン処理等による変異株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
【００２４】
また、上記の菌株は全て公知の菌株であり、それぞれ、（財）発酵研究所（ＩＦＯ）、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、インターナショナルマイコロジカルインスティテュート（ＩＭＩ）、農業生物資源研究所（ＭＡＦＦ）、理化学研究所微生物系統保存施設（ＪＣＭ）、セントラルビューローフォーシュメルカルチャーズ（ＣＢＳ）、及びアグリカルチュラルリサーチサービスカルチャーコレクション（ＮＲＲＬ）及び微生物微細藻類総合センター（ＩＡＭ）から容易に入手することができる。
【００２５】
本発明の製造方法においては、上述した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）する能力を有する微生物の１種もしくは２種以上が、菌体及び／又はそれらの調製物のかたちで用いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知の手法により処理したもの、すなわち、アセトン処理したもの、凍結乾燥処理したもの、又は菌体を物理的もしくは酵素的に破砕したもの等の調製物を用いることができる。また、これらの菌体又は調製物から、上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンのカルボニル基に作用してこれを立体特異的に還元（不斉還元）して式（ＩＩ）、もしくは式（ＩＩＩ）で表される光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールへ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いることも可能である。さらには、この様にして得られた菌体、調製物、酵素画分等をポリアクリルアミドゲル、アルギン酸ゲル、カラギーナンゲル等の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そこで、本明細書において「菌体及び／又はそれらの調製物」の用語は、上述の菌体、調製物、酵素画分、及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００２６】
以下に、本発明の光学活性な１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、及び、光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造方法について具体的に説明する。
本発明の製造方法では、原料として上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを用い、これに上記記載の微生物の菌体及び／又はそれらの調製物を作用させ、上記式（ＩＩ）、または式（ＩＩＩ）で表される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを製造する。
【００２７】
本発明の製造方法において微生物は、通常、培養して用いられるが、この培養については常法通り行うことができる。培養に使用する培地としては、グルコース、シュークロース、グリセリン、クエン酸等の炭素源、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等の無機窒素源、酵母エキス、ペプトン、尿素、肉エキス、コーンスティープリカー等の有機窒素源、マグネシウム、カリウム等の無機塩類、リン酸等を適宜組み合わせて含有したものを用いればよい。また、これらの成分以外にも、反応活性を促進するための物質として、無機塩類、微量金属類、アミノ酸類、あるいはビタミン類を添加することも可能である。培養は、培地のｐＨを３〜１０の範囲に調整し、好気条件下に、温度１０〜４５℃、ｐＨ３−１０の適当な範囲に制御しつつ、１〜１０日の範囲で活性が最大になるまで行うことが好ましい。
【００２８】
本発明においては、この様に培養して得られる微生物の菌体及び／又はその調製物と上記式（Ｉ）で表される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンとを水性媒体中で接触させて反応させ、反応生成物として上記式（ＩＩ）で表される（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または上記式（ＩＩＩ）で示される（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを得る。ここで用いられる水性媒体としては、水、緩衝液または培養液等が挙げられるが、この水性媒体には、水溶性有機溶媒または脂溶性有機溶媒を適宜含有させることも可能である。また、反応に際して、反応液にグルコース、シュークロース、フルクトース、エタノール、メタノール、及び酢酸等の炭素源をエネルギー源として添加することにより収量が向上したり、立体選択性が反対になることがある。
【００２９】
反応液に添加する１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンの量は通常その反応液中の濃度が０．０１〜５０重量％となる程度の量であり、添加された１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンは反応液中で水性媒体に必ずしも完全に溶解していなくてもよい。また、反応に基質阻害が起こる場合には、反応が進むにつれて消費される１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンを消費された量だけ連続的にあるいは間歇的に添加していくことにより生成物の蓄積量をより向上させることが可能である。反応液に添加する微生物の菌体及び／又はその調製物の量は、菌体を添加する場合は反応液にその菌体濃度が０．０１〜２０重量％程度となるように添加し、酵素のような調製物を用いる場合には、酵素の比活性を求め、添加したときに上記菌体濃度に相当する酵素濃度になるような量を添加する。この反応における好ましい反応条件は、反応温度が氷点〜７０℃、好ましくは１０〜４０℃、ｐＨが２〜１１、好ましくは５〜８、反応時間が１〜１００時間程度である。
【００３０】
上記反応により反応生成物として（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノール、または（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールが得られるが、反応液から目的生成物である（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールや（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを単離する方法としては、遠心分離もしくは膜分離等にて菌体及び／又はその調製物を除去した後、反応液よりクロロホルム、酢酸エチル等の有機溶媒で（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールや（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを抽出し、蒸留、カラムクロマトグラフィ等の公知の方法を利用して単離する等の方法を挙げることができる。
【００３１】
本発明の光学活性な３−クロロ−１，２−プロパンジオールの製造方法において、加水分解される光学活性な１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールは上記の方法により微生物還元の反応液より単離されたものでも、反応液に含まれるものでもよい。なお、加水分解方法としては、希硫酸等の酸による加水分解、アルコールや水性媒体中における水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウム等の塩基による加水分解、またはリパーゼによる加水分解等の公知の方法が挙げられる。酸による加水分解では、希硫酸、希塩酸等を用いることが好ましく、温度は０−１００℃、好ましくは２０−７０℃で数時間攪拌する。塩基による加水分解では、溶媒としては水性媒体（水性媒体としては前記のものが挙げられる）、または、メタノール等のアルコールが用いられ、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、または、炭酸カリウム等の塩基性物質を添加することにより、温度０−１００℃、好ましくは０−５０℃で数時間攪拌することが好ましい。
【００３２】
リパーゼによる加水分解では、水、緩衝液、または非水溶性有機溶媒と水性媒体の混合系等の溶媒系が用いられる。リパーゼは酵素そのもの、または公知の方法で固定化したもの両方とも使用できる。反応が進むにつれてｐＨが変動するので、これを制御することにより反応性をあげることも可能である。温度は０−６０℃で、０ー１００時間攪拌し、反応を行う。
各反応終了後、必要により遠心操作、または膜分離等公知の方法により、酵素、または固定化酵素を反応液より分離したり、酸または塩基により中和操作等を行った後、カラムクロマトグラフィー、溶媒抽出等公知の方法を用いて、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを精製する。
【００３３】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野における通常の変更をすることができる。
【００３４】
【実施例１】
フィロバシディウム・カプスリゲナム（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃａｐｓｕｌｉｇｅｎｕｍ）ＩＦＯ１１１９ をグルコース２．０％、酵母エキス１．０％、ペプトン１．０％を含む培地（ｐＨ６．５）１００ｍＬに植菌し、３０℃で２４時間好気培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、１００ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液に懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体をグルコース２．０ｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン０．５ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）１００ｍＬに懸濁し、室温で４時間攪拌しつつ反応させた。途中、反応経過２時間後、さらに０．５ｇの１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノンを添加し反応を進めた。反応終了後、遠心分離により除菌し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析したところ、保持時間９．１６分に主な反応生成物と思われるピークを確認した。
【００３５】
【表１】
高速液体クロマトグラフィー分析条件１
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II−ＨＧ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
展開液：水／アセトニトリル＝８０／２０（０．１ｍＬ／Ｌ トリフルオロ酢酸含有）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ．
カラム温度：室温
検出：示差屈折計
【００３６】
これを単離すべく、上述反応液上清を酢酸エチル３００ｍＬと混合し溶媒抽出操作を行った。分離した酢酸エチル層に少量の無水硫酸ナトリウムを添加し脱水後濾過し、減圧濃縮を行った。得られた油状成分は０．４０ｇであり、さらにＫｉｅｓｇｅｌ１００（メルク社製シリカゲル）を用いたカラムクロマトグラフィーを行った結果、上記高速液体クロマトグラフィ（分析条件１）の保持時間９．１６分の成分に一致する標品を０．２２ｇ得た。これをＮＭＲにより分析したところ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，５００ＭＨｚ：δ（ｐ．ｐ．ｍ．）＝２．０５（ｓ，３Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，６．０Ｈｚ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），４．０２（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｍ，２Ｈ）であり、本生成物が１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールであることを確認した。本標品５０ｍｇを２．０ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に溶かし、キトパールリパーゼＣＶ（富士紡績（株）社製）を１０ｍｇ添加して室温にて攪拌反応させたところ、反応は定量的に進行した。１２時間後、薄層クロマトグラフィーにより残存基質がなく、３−クロロ−１，２−プロパンジオールと同じＲｆ値を示すスポットが存在するのを確認した。遠心操作によりリパーゼを除去し、上清２．０ｍＬから酢酸エチル２．０ｍＬにより３度抽出した。合計６ｍＬの酢酸エチル溶液を濃縮し、残存物をイソプロパノールに溶解後、高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により本反応生成物が３−クロロ−１，２−プロパンジオールであることを確認した。さらに、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により、本化合物の立体及び光学純度を測定したところ、Ｒ体８５．２％ｅ．ｅ．（保持時間は（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールが１９．３分、（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールが１７．６分である。）であることが判明した。
【００３７】
【表２】
高速液体クロマトグラフィー分析条件２
カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
展開液：ヘキサン／イソプロピルアルコール＝９／１
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ．
カラム温度：室温
検出：示差屈折計
【００３８】
【実施例２】
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５をサッカロース２．０％、酵母エキス２．０％、を含む培地（ｐＨ５．５）２００ｍＬに植菌し、２７℃で４５時間好気培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、２００ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体をグルコース４．０ｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン１．０ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２００ｍＬに懸濁し、室温で５時間攪拌しつつ反応させた。反応終了後、遠心分離により除菌し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析したところ、保持時間９．１６分に主な反応生成物と思われるピークがあり、１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールのパターンと一致した。これを単離すべく、上述反応液上清を酢酸エチル３５０ｍＬと混合し溶媒抽出操作を行った。分離した酢酸エチル層に少量の無水硫酸ナトリウムを添加し脱水後濾過し、減圧濃縮を行った。得られた油状成分は０．６８ｇであった。さらに本標品に７ｍＬの１Ｍ硫酸を添加し６０℃で１時間攪拌し反応させた。これを粉末炭酸水素ナトリウムで中和し、濃縮後４０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。本酢酸エチル溶液を濃縮したところ、残存物は０．４２ｇであった。これをイソプロパノールに溶解後、高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により本反応生成物が３−クロロ−１，２−プロパンジオールであり、全反応工程のモル収率が５７．７％であることを確認した。さらに、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により、本化合物の立体及び光学純度を測定したところ、Ｓ体９３．８％ｅ．ｅ．であることが判明した。
【００３９】
【実施例３】
第１表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコ−ス２．０％、酵母エキス１．０％、ペプトン２．０％を含み、ｐＨ６．５とした培地２０ｍｌに植菌し、３０℃で２４〜４８時間好気的に振盪培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、１０ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）で集菌体を懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）２．０ｍＬ、グルコース４０ｍｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン２０ｍｇに懸濁し、室温で攪拌しつつ２時間反応させた。
【００４０】
反応終了後、各反応液から遠心分離により菌体を除去し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析し反応収率を求めた。さらにこの反応液上清に酢酸エチル５ｍＬを添加して、生成した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酢酸エチル層に抽出した。濃縮後、残存物を０．５ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液に溶解し、キトパールリパーゼＣＶを５ｍｇ添加し、室温で一晩反応させた。薄層クロマトグラフィーで反応終了を確認し遠心操作で酵素を除去した後、３ｍＬの酢酸エチルに反応生成物を抽出した。この酢酸エチル溶液を濃縮後、残存物をイソプロパノールに溶解して、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により光学純度測定を行うと共に絶対配置を求めた。得られた結果を第１表に示す。
【００４１】
【表３】
【実施例４】
第２表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコース１．０％、酵母エキス１．０％、ポリペプトン０．５％、リン酸水素２カリウム０．３％、リン酸２水素カリウム０．１％を含み、ｐＨ７．０とした培地５ｍＬに植菌し、３０℃で４６〜７２時間好気的に振盪培養した。培養終了後、遠心操作により菌体を集め、５ｍＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）で集菌体を懸濁し、再度遠心操作により菌体を集めた。その菌体を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）５．０ｍＬ、グルコース１００ｍｇ、及び１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノン２５ｍｇに懸濁し、室温で攪拌しつつ４時間反応させた。
【００４３】
反応終了後、各反応液から遠心分離により菌体を除去し、この反応液上清を高速液体クロマトグラフィー（分析条件１）により分析し反応収率を求めた。さらにこの反応液上清に酢酸エチル８ｍＬを添加して、生成した１−アセトキシ−３−クロロ−２−プロパノールを酢酸エチル層に抽出した。濃縮後、残存物を０．５ｍＬの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液に溶解し、キトパールリパーゼＣＶを５ｍｇ添加し、室温で一晩反応させた。薄層クロマトグラフィーで反応終了を確認し遠心操作で酵素を除去した後、３ｍＬの酢酸エチルに反応生成物を抽出した。この酢酸エチル溶液を濃縮後、残存物をイソプロパノールに溶解して、高速液体クロマトグラフィー（分析条件２）により光学純度測定を行うと共に絶対配置を求めた。得られた結果を第２表に示す。
【００４４】
【表４】
【実施例５】
第３表に示す各種微生物の菌体をそれぞれ、グルコ−ス０．５％、酵母エキス１．０％、ニュートリエントブロス０．５％、リン酸水素２カリウム０．３％、リン酸２水素カリウム０．１％、硫酸鉄（ＩＩ）７水塩５０ｐｐｍ、塩化マンガン６水塩１０ｐｐｍ、塩化コバルト６水塩１０ｐｐｍ、及びモリブデン酸アンモニウム４水塩１０ｐｐｍを含み、ｐＨ７．０とした培地２０ｍｌに植菌し、３０℃で２４〜４８時間好気的に振盪培養した。培養終了後、実施例３に記載の方法により、２時間反応させた。
反応終了後、実施例３に記載の方法により反応収率、光学純度測定、及び絶対配置を求めた。得られた結果を第３表に示す。
【００４６】
【表５】
【参考例】
ホルタエア・ウェルネッキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）ＩＦＯ４８７５を実施例２に記載の方法に従い培養して集菌した。その菌体をグルコース４．０ｇ、及び１−アセトキシ−２−プロパノン（特開平６−２２５７７７号公報に記載の基質）１．０ｇを含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２００ｍＬに懸濁し、室温で５時間攪拌しつつ反応させた。しかし、薄層クロマトグラフィー（シリカゲル６０ Ｆ２５４ （ＭＥＲＣＫ社製）、展開液：酢酸エチル／酢酸＝７０／１、染色：１０％ リンモリブデン酸ナトリウム エタノール溶液）において、１−アセトキシ−２−プロパノール（Ｒｆ０．７０）、またはプロパンジオール（Ｒｆ０．３５）を検出することはできなかった。
【００４８】
【発明の効果】
本発明の製造方法によれば、特定の微生物を１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノンに作用させることにより光学活性な（Ｓ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールまたは（Ｒ）−１−アシロキシ−３−クロロ−２−プロパノールを効率的に製造することが可能であり、またさらにそれら加水分解することにより光学活性な（Ｓ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールまたは（Ｒ）−３−クロロ−１，２−プロパンジオールを効率的に製造することが可能であり、工業的に極めて有利である。
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- 式（Ｉ）：
- 請求項１記載の方法により製造した式（ＩＩ）：
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