JP3166094B2 - クマリン誘導体及びそれらの用途 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、１２−リポキシゲナー
ゼを選択的に阻害する新規なクマリン誘導体及びこれら
の化合物を有効成分として含有する医薬に関するもので
あり、更に詳しくは、本発明は、１２−リポキシゲナー
ゼ経路における１２−リポキシゲナーゼの活性を選択的
に阻害する作用を有する新規なクマリン誘導体、及び当
該化合物を有効成分として含有する動脈硬化、血管攣縮
等の循環器系各種疾患の予防、治療、ある種の癌（ルイ
ス肺癌等）の転移の予防等を目的とした薬剤として有用
な１２−リポキシゲナーゼを選択的に阻害する医薬、に
関するものである。本明細書において、ＩＣ₅₀値は、あ
る物質が５−リポキシゲナーゼ又は１２−リポキシゲナ
ーゼ活性を５０％阻害するのに必要なモル濃度である。

【０００２】

【従来の技術】アラキドン酸カスケードには、５−リポ
キシゲナーゼ経路と呼ばれる代謝経路が存在し、アラキ
ドン酸は、５−リポキシゲナーゼの作用により５−ヒド
ロペルオキシエイコサテトラエン酸（以下５−ＨＰＥＴ
Ｅと記載することがある）に変換されること等が知られ
ている（室田誠逸編，「プロスタグランディンと病
態」，東京化学同人，１９８４年）。

【０００３】この化合物を中間体として、各種ロイコト
リエン類が生合成されることが知られており（室田誠逸
編，「プロスタグランディンと病態」，東京化学同人，
１９８４年）、それらのロイコトリエン類のうち、例え
ば、ロイコトリエンＢ₄ は、強力な白血球遊走作用を有
し、炎症のメディエーターであること、また、ロイコト
リエンＣ₄ 及びＤ₄ は、喘息のメディエーターであるこ
と等が知られている（室田誠逸編，「プロスタグランデ
ィンと病態」，東京化学同人，１９８４年）。

【０００４】従って、これらのロイコトリエン類の生合
成系の初発酵素である５−リポキシゲナーゼを有効に阻
害し得る薬剤があれば、ロイコトリエン類の過剰産生に
起因する種々の疾患（例えば、アレルギー性疾患、気管
支喘息、浮腫、各種炎症性疾患等）の予防、治療効果を
期待し得るとの観点から、５−リポキシゲナーゼに対し
て阻害作用を有する薬物の探索が広範に行われている。

【０００５】一方、アラキドン酸カスケードには、１２
−リポキシゲナーゼ経路と呼ばれる代謝経路が存在す
る。１２−リポキシゲナーゼは、血小板等に多く存在す
る酵素であり、アラキドン酸に作用して１２−ヒドロペ
ルオキシエイコサテトラエン酸（以下１２−ＨＰＥＴＥ
と記載することがある）を生成させ、この化合物は、還
元されて１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（以下
１２−ＨＥＴＥと記載することがある）となる。

【０００６】この１２−リポキシゲナーゼ経路における
代謝産物の生理的意義については、５−リポキシゲナー
ゼ経路におけるそれと比較して、従来、明確にされてい
なかったが、最近、その主要代謝産物である１２−ＨＰ
ＥＴＥ及び１２−ＨＥＴＥを中心として、当該代謝産物
の種々の生理活性が明らかにされている。

【０００７】それらの生理活性を例示すれば、次のとお
りである。すなわち、１２−リポキシゲナーゼの代謝産
物は、血小板の凝集、粘着等の機能調節、及び血管平滑
筋細胞の遊走を促進して動脈硬化に関与している可能性
が指摘されており（現代医療，第２１巻，第１１号，第
３１０９〜３１１３頁，１９８９年）、また、くも膜下
出血後の血管攣縮の発生に１２−ＨＰＥＴＥが何らかの
イニシエーターとなっている可能性が示唆されており
（現代医療，第２１巻，第１１号，第３１２７〜３１３
０頁，１９８９年）、更に、１２−ＨＥＴＥがある種の
癌細胞の血管内皮細胞への粘着、転移を促進することが
示されている（現代医療，第２２巻，増刊，第５６〜５
７頁，１９９０年）。

【０００８】以上のような事実から、１２−リポキシゲ
ナーゼを阻害する物質が、動脈硬化、血管攣縮等の循環
器系各種疾患の予防、治療、又はある種の癌の転移の予
防を目的とした薬物として有効に使用し得るものと期待
されている。

【０００９】１２−リポキシゲナーゼに対して阻害作用
を有する物質としては、天然フラボノイドの１種である
バイカレンが知られている［バイオケミカル・アンド・
バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(B
iochemical and BiophysicalResearch Communication
s)，第１０５巻，第３号，第１０９０〜１０９５頁，１
９８２年］。その他、ヒドロキサム酸誘導体（特開平１
−２１６９６１号公報、特開平２−７５２号公報、特開
平２−１９６７６７号公報等）、コーヒー酸誘導体（特
開平１−２７５５５２号公報、特開平２−２３５８５２
号公報等）等が知られている。

【００１０】一方、クマリン誘導体に関しては、一般
に、当該化合物は、化学的に合成又は天然界から分離、
精製されているが、リポキシゲナーゼ阻害作用に言及し
た従来技術としては、例えば、次の１）の事項が知られ
ている。 １）エスクレチン（６，７−ジヒドロキシクマリン）
［ビオキミカ・エト・ビオフィジカ・アクタ（Biochimi
ca et Biophysica Acta)，第７５３巻，第１号，第１３
０〜１３２頁，１９８３年］に関する知見が知られてお
り、肥満細胞腫細胞の５−リポキシゲナーゼ及び１２−
リポキシゲナーゼに対する当該化合物のＩＣ ₅₀値は、各
々４×１０^-6Ｍ及び２．５×１０^-6Ｍであることが報告
されている。

【００１１】しかしながら、後述するように、当該化合
物の示すこのＩＣ₅₀値は、本発明の化合物のそれに比べ
てかなり大きい値であり、１２−リポキシゲナーゼに対
する選択性もあるとは言い難い。実際、本発明者らが行
った比較実験においても、エスクレチンの１２−リポキ
シゲナーゼ阻害作用は、本発明の化合物に比べてかなり
弱く、また５−リポキシゲナーゼ阻害作用との選択性も
みられないことが判明した。

【００１２】また、本発明の化合物に近似したクマリン
誘導体として、例えば、次の２）〜１０）の化合物が知
られている。 ２）６，７−ジヒドロキシ−３−フェニルクマリン［ジ
ャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサイエティー・シー
・オーガニック・ケミストリー（Journal of theChemic
al Society. C. Organic Chemistry），第１６巻，第２
０６９〜２０７０頁，１９６９年、及びツァーナル・プ
リクラドノイ・スペクトロスコピイ（Zhurnal Prikladn
oi Spektroskopii），第８巻，第６号，第１０６３〜１
０６６頁，１９６８年］

【００１３】３）７，８−ジヒドロキシ−３−フェニル
クマリン［カレント・サイエンス（Current Science)，
第３５巻，第２２号，第５５７〜５５９頁，１９６６
年、ツァーナル・プリクラドノイ・スペクトロスコピイ
（Zhurnal Prikladnoi Spektroskopii），第８巻，第６
号，第１０６３〜１０６６頁，１９６８年、プロシーデ
ィングス・オブ・ザ・インディアン・アカデミー・オブ
・サイエンシズ・セクションＡ（Proceedings of the I
ndian Academy of Sciences. Section A），第５６巻，
第７１〜８５頁，１９６２年、プロシーディングス・オ
ブ・ザ・インディアン・アカデミー・オブ・サイエンシ
ズ・セクション・エー（Proceedings of theIndian Aca
demy of Sciences. Section A），第５９巻，第３号，
第１８５〜１８９頁，１９６４年、及びジャーナル・オ
ブ・オーガニック・ケミストリー（Journal of Organic
Chemistry），第１９巻，第１５４８〜１５５２頁，１
９５４年］

【００１４】４）６，７−ジヒドロキシ−３−（フラン
−２−イル）クマリン、及び７，８−ジヒドロキシ−３
−（フラン−２−イル）クマリン［ツァーナル・プリク
ラドノイ・スペクトロスコピイ（Zhurnal Prikladnoi S
pektroskopii），第８巻，第６号，第１０６３〜１０６
６頁，１９６８年］

【００１５】５）６，７−ジヒドロキシ−３−（３−ニ
トロフェニル）クマリン［ジャーナル・オブ・ザ・ケミ
カル・ソサイエティー・シー・オーガニック・ケミスト
リー（Journal of the Chemical Society. C. Organic
Chemistry)，第１６巻，第２０６９〜２０７０頁，１９
６９年］

【００１６】６）７，８−ジヒドロキシ−４−メチル−
３−（４−ニトロフェニル）クマリン［アナレス・デ・
ラ・ソシエテ・サイエンティフィケ・デ・ブルクセレス
・シリーズ１（Annales de la Societe Scientifique d
e Bruxelles. Series 1)，第８４巻，第３号，第３８３
〜３８８頁，１９７１年］

【００１７】７）６，７−ジヒドロキシ−４−メチル−
３−フェニルクマリン［ファーマコ・イル・パヴィア・
エディツィオーネ・サイエンティフィカ（Farmaco,Il(P
avia),Edizione Scientifica），第１２巻，第６９１〜
６９４頁，１９５７年、及びアッティ・デラ・アカデミ
ア・ナツィオナレ・デイ・リンセイ・レンディコンティ
・クラッセ・ディ・サイエンツェ・フィッシェ・マテマ
ティケ・エ・ナツラリ（Atti della accademia naziona
le dei Lincei. Rendiconti, Classe di scienzefisich
e, matematiche e naturali），第１０巻，第２３０〜
２３５頁，１９５１年］

【００１８】８）６，７−ジヒドロキシ−３，４−ジフ
ェニルクマリン［パブリカツィオーニ・デル・セントロ
・ディ・スツディオ・パー・ラ・シトゲネティカ・ベゲ
タレ・デル・コンシグリオ・ナツィオナーレ・デレ・リ
サーチ（Pubblicazioni del centro di studio per la
citogenetica vegetale del consiglio nazionale dell
e ricerche），第１８２号，第３５０〜３８７頁，１９
５５年、及びアッティ・デラ・アカデミア・ナツィオナ
レ・デイ・リンセイ・レンディコンティ・クラッセ・デ
ィ・サイエンツェ・フィッシェ・マテマティケ・エ・ナ
ツラリ（Atti della accademia nazionale dei Lincei.
Rendiconti, Classe di scienze fisiche, matematich
e e naturali），第１６巻，第６４５〜６４９頁，１９
５４年］

【００１９】９）６，７−ジヒドロキシ−３−（ピリジ
ン−３−イル）クマリン［ジャーナル・オブ・ザ・ケミ
カル・ソサイエティー・シー・オーガニック・ケミスト
リー（Journal of the Chemical Society. C. Organic
Chemistry)，第１６巻，第２０６９〜２０７０頁，１９
６９年］

【００２０】１０）７，８−ジヒドロキシ−４−フェニ
ルクマリン（米国特許第２，８０９，２０１号明細書）

【００２１】しかしながら、これらの化合物が１２−リ
ポキシゲナーゼ阻害活性を有することのみならず、５−
リポキシゲナーゼ阻害活性を有することは、従来全く知
られていない。

【００２２】また、クマリン誘導体ではないが、本発明
の化合物に比較的近似しており、かつ１２−リポキシゲ
ナーゼ又は５−リポキシゲナーゼ阻害活性に言及されて
いるものとして、前述のバイカレンを含めて次の１１）
〜１３）のような化合物が知られている。 １１）バイカレン（５，６，７−トリヒドロキシフラボ
ン）［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リ
サーチ・コミュニケーションズ(Biochemical andBiophy
sical Research Communications)，第１０５巻，第３
号，第１０９０〜０９５頁，１９８２年］

【００２３】１２）４′，６，７−トリヒドロキシイソ
フラバン［プロスタグランジンズ（Prostaglandins），
第２８巻，第６号，第７８３〜８０４頁，１９８４年］

【００２４】１３）４′，７，８−トリヒドロキシイソ
フラバン、及び６，７−ジヒドロキシ−３′，４′−ジ
メトキシイソフラバン［インターナショナル・ジャーナ
ル・オブ・ティッシュー・リアクションズ（Internatio
nal Journal of Tissue Reactions)，第１１巻，第３
号，第１０７〜１１２頁，１９８９年］

【００２５】このうち、前記１２）に記載の化合物につ
いては、当該化合物がヒト末梢血白血球において５−リ
ポキシゲナーゼ代謝産物の生成を１０μＭの濃度で完全
に抑制したが、一方血小板においては、１２−リポキシ
ゲナーゼ代謝産物の生成を、同一濃度でわずかに２５％
しか抑制しなかったことから、当該化合物は５−リポキ
シゲナーゼに選択的であることが知られている［プロス
タグランジンズ（Prostaglandins）第２８巻，第６号，
第７８３〜８０４頁，１９８４年］。また、前記１３）
記載の化合物については、当該化合物のヒト腹膜マクロ
ファージにおける５−リポキシゲナーゼ阻害作用がＩＣ
₅₀値で１〜２μＭであったのに対し、当該化合物の１２
−リポキシゲナーゼ阻害作用はＩＣ₅₀値で１６〜２０μ
Ｍであったことが報告されている［インターナショナル
・ジャーナル・オブ・ティッシュー・リアクションズ
（International Journal of Tissue Reactions)，第１
１巻，第３号，第１０７〜１１２頁，１９８９年］。

【００２６】本発明の化合物は、後述するようにＩＣ₅₀
値で１０^-9乃至１０^-8モルのオーダーと、極めて強力な
１２−リポキシゲナーゼ阻害作用を有する。一方、５−
リポキシゲナーゼに対するＩＣ₅₀値は１２−リポキシゲ
ナーゼに対するそれに比べて７〜２０倍大きく、１２−
リポキシゲナーゼ選択的な阻害作用を有している。本発
明の化合物がこのような作用を有していることは、従来
の知見からは到底想到し得ないことである。

【００２７】

【発明が解決しようとする課題】ところで、１２−リポ
キシゲナーゼは、５−リポキシゲナーゼの近縁酵素であ
り、いずれかの酵素を阻害する物質は、他方も阻害する
可能性がある。事実、５−リポキシゲナーゼ阻害活性を
有することが報告されている物質であって、１２−リポ
キシゲナーゼに対しても阻害活性を示すものが知られて
おり、大部分のヒドロキサム酸誘導体がその例である。

【００２８】このような阻害活性の選択性に関しては、
その利用目的にもよるが、前記循環器系疾患、癌の転移
等のように主として１２−リポキシゲナーゼ代謝産物に
起因すると考えられている疾病の予防、治療には、１２
−リポキシゲナーゼを強力、かつ選択的に阻害するよう
な物質が望ましい。

【００２９】このような状況から、本発明者らは、天然
フラボノイドの１種であるバイカレンが比較的強い１２
−リポキシゲナーゼ阻害活性、及び比較的高い選択性を
有していることに着目し、この化合物を先導化合物とし
て使用し、その部分構造の改変又は修飾を行うことによ
り、強力、かつ高い選択性を有する１２−リポキシゲナ
ーゼ阻害化合物を創出することに成功し、既に特許出願
した（特願平５−１０８７６６号。以下先願と記載する
ことがある）。

【００３０】先願の発明は、次のとおりである。次の化
７の一般式

【００３１】

【化７】

【００３２】［ただし、式中Ｒ¹ は、水素原子又は低級
アルキル基を示し、Ｒ² 及びＲ³ は、水素原子又は水酸
基を示し（ただしＲ² とＲ³ とが同時に水素原子である
ことはない）、Ａｒは次の化８、化９又は化１０の一般
式

【００３３】

【化８】

【００３４】

【化９】

【００３５】

【化１０】

【００３６】で示される基であり、式中Ｒ⁴ は、水素原
子、低級アルキル基、低級アルコキシ基、ハロゲン原
子、トリフルオロメチル基、シアノ基又はニトロ基を示
す。］で示されるクマリン誘導体。

【００３７】先願出願後、本発明者らは、他の化合物に
ついても鋭意検討を行った結果、先願とは異なるクマリ
ン誘導体が、公知のバイカレンと同等又はそれ以上の阻
害活性を有し、かつ選択性に優れていることを見出し、
本発明を完成した。

【００３８】本発明の目的は、１２−リポキシゲナーゼ
を強力、かつ高い選択性をもって阻害し得る化合物を提
供することである。

【００３９】本発明の他の目的は、１２−リポキシゲナ
ーゼの代謝産物によってもたらされる動脈硬化、血管攣
縮等の循環器系各種疾患の予防、治療、及びある種の癌
の転移の予防等を目的とした薬剤として有用であり、ま
た、低毒性であり、かつ副作用の少ない１２−リポキシ
ゲナーゼを選択的に阻害する医薬を提供することであ
る。

【００４０】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明の第１の発明は、次の化１１の一般式

【００４１】

【化１１】

【００４２】［ただし、式中Ｒ² 及びＲ³ は、水素原子
又は水酸基を示し（ただし、Ｒ² とＲ³ とが同時に水素
原子であることはない）、Ａｒは、次の化１２又は化１
３の一般式

【００４３】

【化１２】

【００４４】

【化１３】

【００４５】で示される基であり、式中Ｘは、酸素原
子、硫黄原子を示す。］で示されるクマリン誘導体、で
ある。

【００４６】前記課題を解決する本発明の第２の発明
は、次の化１４の一般式

【００４７】

【化１４】 ［ただし、式中Ｒ² 及びＲ³ は、水素原子又は水酸基を
示し（ただし、Ｒ² とＲ³ とが同時に水素原子であるこ
とはない）、Ａｒは、次の化１５又は化１６の一般式

【００４８】

【化１５】

【００４９】

【化１６】

【００５０】で示される基であり、式中Ｘは、酸素原
子、硫黄原子を示す。］で示されるクマリン誘導体から
なる群より選択される化合物、又はそれらの混合物を有
効成分として含有する医薬、である。

【００５１】次に本発明について詳述する。本発明の化
合物の製造法を例示すれば、次のとおりである。すなわ
ち、本発明の化合物は、化１７の化学式に示される工程
により合成することができる。

【００５２】

【化１７】

【００５３】（前記化学式において、Ｒ⁵ 及びＲ⁶ は、
水素原子又はメトキシ基を示し、Ｒ⁷及びＲ⁸ は水素原
子又は水酸基を示す）。すなわち、サリチルアルデヒド
誘導体のメチルエーテル（ア）と、所望のアリールアセ
トニトリル（イ）とをクネーベナーゲル縮合させること
により、α，β−ジアリールアクリロニトリル誘導体
（ウ）を得た後、これを例えば塩化ピリジニウム等を用
いて脱メチル化し、中間に生成しているイミン（エ）を
塩酸等の酸で処理し、加水分解し、本発明の化合物
（オ）を得ることができる（工程Ａ）。

【００５４】また、次の化１８及び化１９の化学式

【００５５】

【化１８】

【００５６】

【化１９】

【００５７】（前記化学式において、Ｒ⁷ 及びＲ⁸ は水
素原子又は水酸基を示し、Ｒ⁹ 及びＲ¹⁰は、水素原子又
はアセトキシ基を示す）に示される工程により製造する
こともできる。

【００５８】アセチルサリチルアルデヒド誘導体（キ）
と所望のアリール酢酸（ク）とを、パーキン反応として
知られている反応条件下で縮合させる。すなわち、無水
酢酸中でトリエチルアミン等の塩基の存在下に通常１２
０℃前後で、１時間乃至数時間穏やかに加熱還流させる
ことにより、化合物（ケ）を得ることができる（工程
Ｂ）。

【００５９】アセチルサリチルアルデヒド誘導体（キ）
は、対応するサリチルアルデヒド誘導体（カ）を、無水
酢酸、又は塩化アセチル等のアセチル化剤を用いてアセ
チル化することによって得ることができるが、サリチル
アルデヒド誘導体（カ）を氷冷、又は室温下に、無水酢
酸中でトリエチルアミン等の塩基存在下にアセチル化
し、生成したアセチルサリチルアルデヒド誘導体（キ）
を単離することなく、そのまま前記のパーキン反応条件
へ移行させることにより、化合物（カ）から化合物
（ケ）へ直接導くこともできる。この場合、もう一方の
原料であるアリール酢酸（ク）は、パーキン反応条件へ
の移行時に添加してもよいが、化合物（カ）のアセチル
化の段階、すなわち最初から共存させておいてもよい。
また、前記の反応は、トリエチルアミン等の塩基の代わ
りに、アリール酢酸のアルカリ金属塩等を用いることも
できる。

【００６０】このようにして得た化合物（ケ）は、酸性
条件下に加水分解（あるいはエステル交換）して、本発
明の化合物（オ）へ導くことができる。例えば、エタノ
ールと塩酸との混合液中で、３０分間乃至数時間加熱還
流することにより目的が達成される（工程Ｃ）。

【００６１】以上のようにして得られた本発明の化合物
を、再結晶、クロマトグラフィー等の公知の精製方法に
より精製することができる。

【００６２】本発明の化合物は、１２−リポキシゲナー
ゼ活性の選択的な阻害作用を有しているので、生体内に
おける１２−ＨＰＥＴＥ、１２−ＨＥＴＥ等の１２−リ
ポキシゲナーゼ代謝産物の生成を抑制する作用を有し、
当該化合物を有効成分として代謝産物に起因する動脈硬
化、血管攣縮等の循環器系各種疾患の治療薬、又は予防
薬として、更に、ある種の癌（ルイス肺癌等）の転移の
予防等を目的とした薬剤として有効に利用することがで
きる。

【００６３】本発明の化合物は、そのまま、又は薬学的
に許容される公知の担体、賦形剤等と混合し、錠剤、カ
プセル剤、注射剤、顆粒剤、坐剤等の適宜の形態の医薬
として用いることができる。本発明の化合物を有効成分
とする医薬は、経口的に、又は注射、吸入、塗布等によ
り非経口的に投与することができる。本発明の化合物を
有効成分とする医薬の投与量は、治療対象、症状、年
齢、治療期間等により異なるが、好適には、通常１回に
つき約０．１ｍｇから５０ｍｇを１日１〜３回程度投与
する。

【００６４】次に試験例を示して本発明を更に詳述す
る。 試験例 この試験は、本発明の化合物の１２−リポキシゲナーゼ
及び５−リポキシゲナーゼの阻害作用を調べるために行
った。 １．試料の調製 １）被検試料 実施例１〜４と同一の方法により被検試料を調製した。
尚、対照として次の化２０の化学式

【００６５】

【化２０】

【００６６】で示される公知のバイカレン（和光純薬工
業社製）及び次の化２１の化学式

【００６７】

【化２１】

【００６８】で示される公知のエスクレチン（東京化成
社製）を用いた。

【００６９】２）１２−リポキシゲナーゼ酵素液の調製 エーテル麻酔下で、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ雄性
ラットの腹大動脈から、約１０分の１容の３．８％（重
量。以下同じ）クエン酸ソーダ溶液の入った注射筒にて
採血し、室温、１８０ｇで１５分間遠心し、多血小板血
漿を分離し、４℃、１，８００ｇで１０分間遠心し、得
られた沈渣を洗浄用緩衝液（１５４ｍＭ塩化ナトリウ
ム、２ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭトリス塩酸バッファ
ー：ｐＨ７．４）で洗浄し、血小板を得た。得られた血
小板を、採血量の２０分の１容の再浮遊緩衝液（１５４
ｍＭ塩化ナトリウム、５．５ｍＭグルコースを含む５０
ｍＭトリス塩酸バッファー：ｐＨ７．４）に懸濁し、超
音波破砕し、１００，０００ｇで３０分間遠心し、上清
を分離し、酵素液を調製した。

【００７０】３）５−リポキシゲナーゼ酵素液の調製 ラット好塩基性白血病細胞（Ｒａｔ Ｂａｓｏｐｈｉｌ
ｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｃｅｌｌ：ＲＢＬ−１．ＡＴ
ＣＣ ＣＲＬ１３７８）を、１０％牛新生仔血清を含む
ダルベッコ改変イーグル培地で常法により培養し、１５
４ｍＭ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．４、以下ＴＢＳと記載する）で２回洗浄し、
細胞を１ｍｌ当たり４×１０⁷ 個の割合で同一の緩衝液
に浮遊させ、超音波で細胞を破砕し、１０，０００ｇで
１０分間遠心して上清を分離し、酵素液を調製した。

【００７１】２．試験方法 １）１２−リポキシゲナーゼ酵素活性の測定方法 前記再浮遊緩衝液で酵素活性を約２ｍＵ／ｍｌに調製し
た酵素液３００μｌに、３ｍＭインドメタシンエタノー
ル溶液１μｌ、３００ｍＭ還元型グルタチオン溶液１μ
ｌ及び各種濃度の被検物質エタノール溶液３μｌを添加
し、３７℃で５分間保持し、次いで２．５ｍＭアラキド
ン酸エタノール溶液３μｌを添加し、３７℃で５分間保
持して反応させた後、６００μｌのメタノールを添加し
て反応を停止させた。反応液を１０，０００ｇで５分間
遠心し、上清の１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸
をＣ−１８カラムを用いた逆相高速液体クロマトグラフ
ィーで分離し、ジエンを２３４ｎｍの吸収で定量し、酵
素活性を測定した。

【００７２】２）５−リポキシゲナーゼ酵素活性の測定
方法 前記酵素液（４０ｍＵ／ｍｌ相当）１５μｌに、ＴＢＳ
１８５μｌ、２ｍＭアデノシン三リン酸ＴＢＳ５０μ
ｌ、１２ｍＭ塩化カルシウムＴＢＳ５０μｌ、３ｍＭイ
ンドメタン１μｌ、３００ｍＭ還元型グルタチオン水溶
液１μｌ及び各種濃度の被検物質のエタノール溶液３μ
ｌを添加し、３７℃で５分間保持し、次いで２．５ｍＭ
アラキドン酸エタノール溶液３μｌを添加し、３７℃で
２分間保持して反応させた後、６００μｌのメタノール
を添加して反応を停止させた。反応液を１０，０００ｇ
で５分間遠心し、上清の５−ヒドロキシエイコサテトラ
エン酸をＣ−１８カラムを用いた逆相高速液体クロマト
グラフィーで分離し、２３４ｎｍの吸収で定量し、酵素
活性を測定した。

【００７３】３）酵素活性の測定 被検物質として、実施例１〜４と同一の方法で製造した
本発明の化合物、バイカレン及びエスクレチンの各種濃
度における酵素活性を前記の方法により測定し、各被検
物質の測定値から、１２−リポキシゲナーゼ及び５−リ
ポキシゲナーゼに対するＩＣ₅₀値を求めた。

【００７４】３．試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなように、本発明の化合物は、１２−リポキシゲ
ナーゼに対して極めて強力な阻害作用が認められ、ＩＣ
₅₀値は、ほぼ１０^-9モル乃至１０^-8モル前半のオーダー
であり、公知のバイカレンのそれ（４．２×１０^-8モ
ル）に比して小さい値を示した。一方、本発明の化合物
は、５−リポキシゲナーゼに対しても阻害作用を有する
が、そのＩＣ₅₀値は、１２−リポキシゲナーゼに対する
それよりも約７〜２０倍の値であった。従って、本発明
の化合物は、１２−リポキシゲナーゼに対して選択的に
阻害作用を有することが判明した。

【００７５】

【表１】

【００７６】次に本発明の化合物の製造例について実施
例を示して本発明を更に詳述するが、本発明は、以下の
実施例に限定されるものではない。尚、以下の実施例に
おいて製造した本発明の化合物の核磁気共鳴スペクトル
及び赤外線吸収スペクトルの測定値を表２に示した。ま
た、核磁気共鳴スペクトル［ ¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨ
ｚ）］は、テトラメチルシランを内部標準として重メチ
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）溶媒中で、赤外線吸
収スペクトルは、ＫＢｒ錠剤法で、それぞれ測定した。

【００７７】

【表２】

【００７８】

【実施例】

実施例１ ナフタレン−２−酢酸（東京化成社製）９３１ｍｇ
（５．００ｍｍｏｌ）及び２，３，４−トリヒドロキシ
ベンズアルデヒド（アルドリッチ社製）７７１ｍｇ
（５．００ｍｍｏｌ）を無水酢酸（和光純薬工業社製）
１０ｍｌに懸濁し、氷冷下でトリエチルアミン（国産化
学社製）５ｍｌを添加し、氷冷下で１時間攪拌した。次
いでこの反応混合物を１２０℃の油浴上で５時間加熱環
流し、のち空冷し、反応混合物を１００ｍｌの１Ｎ塩酸
中に添加して攪拌し、析出物を瀘取し、十分水洗し、エ
タノール（国産化学社製）で３回、のちヘキサン（国産
化学社製）で２回洗浄し、乾燥し、クリーム色の結晶化
合物７，８−ジアセトキシ−３−（ナフタレン−２−イ
ル）クマリン１．５２ｇ（収率７８．４％）を得た。

【００７９】前記７，８−ジアセトキシ−３−（ナフタ
レン−２−イル）クマリン３８８ｍｇ（１．００ｍｍｏ
ｌ）、エタノール（国産化学社製）８ｍｌ、濃塩酸１ｍ
ｌ及び水１ｍｌの混合物を４時間加熱環流し、のち空冷
し、反応混合物を１００ｍｌの水に添加し、析出物を瀘
取し、十分水洗し、乾燥した。得られた反応生成物をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー［溶出液は酢酸エチ
ル（国産化学社製）：ヘキサン（国産化学社製）の比が
１：５〜３：１を用いた］により精製し、次の化２２の
化学式

【００８０】

【化２２】

【００８１】で示される黄色結晶化合物１０４５ｍｇ
（収率８６．２％）を得た。得られた化合物の融点は、
２５５〜２５６℃であった。

【００８２】実施例２ ナフタレン−２−アセトニトリル（アルドリッチ社製）
８３６ｍｇ（５．００ｍｍｏｌ）と２，４，５−トリメ
トキシベンズアルデヒド（ランカスター社製）９８１ｍ
ｇ（５．００ｍｍｏｌ）のエタノール（国産化学社製）
１５ｍｌ混合物を加熱溶解し、２０％水酸化ナトリウム
水溶液２滴を添加し、放冷下で１夜攪拌し、析出した結
晶を瀘取し、エタノール（国産化学社製）、ヘキサン
（国産化学社製）で順次洗浄し、乾燥し、黄色結晶化合
物α−（ナフタレン−２−イル）−β−（２，４，５−
トリメトキシフェニル）アクリロニトリル１．４８ｇ
（収率８５．９％）を得た。

【００８３】前記α−（ナフタレン−２−イル）−β−
（２，４，５−トリメトキシフェニル）アクリロニトリ
ル６９１ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）及び塩化ピリジニウ
ム（和光純薬工業社製）３．５ｇ（３０ｍｍｏｌ）の混
合物を、予め２２０℃に加熱した油浴上で溶融混合し、
１時間攪拌し、のち空冷し、固化した反応混合物に１０
％塩酸２０ｍｌを添加して粉砕し、３０分間攪拌し、析
出物を瀘取し、十分水洗し、乾燥した。得られた反応生
成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶出液は
酢酸エチル（国産化学社製）を用いた］により精製し、
次の化２３の化学式

【００８４】

【化２３】

【００８５】で示される黄色結晶化合物４３１ｍｇ（収
率７０．８％）を得た。得られた化合物の融点は、２８
８〜２８９℃であった。

【００８６】実施例３ チアナフテン−３−アセトニトリル（ランカスター社
製）６９３ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）と２，３，４−ト
リメトキシベンズアルデヒド（東京化成社製）７８５ｍ
ｇ（４．００ｍｍｏｌ）のエタノール（国産化学社製）
５ｍｌ混合物を加熱溶解し、２０％水酸化ナトリウム水
溶液２滴を添加し、放冷下で１夜攪拌し、反応混合物を
１００ｍｌの１Ｎ塩酸中に添加し、酢酸エチルで２回抽
出し、重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、のち無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去し、褐色油状
化合物α−（チアナフテン−３−イル）−β−（２，
３，４−トリメトキシフェニル）アクリロニトリル１．
４１ｇ（収率定量的）を得た。

【００８７】α−（ナフタレン−２−イル）−β−
（２，４，５−トリメトキシフェニル）アクリロニトリ
ルの代わりに、前記α−（チアナフテン−３−イル）−
β−（２，３，４−トリメトキシフェニル）アクリロニ
トリル７０３ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）を用いたことを
除き、実施例２と同一の方法により、次の化２４の化学
式

【００８８】

【化２４】

【００８９】で示される黄土色結晶化合物３４３ｍｇ
（収率５５．３％）を得た。得られた化合物は、明瞭な
融点を示さず、１４０℃近辺で黒色化して分解した
（尚、本化合物の核磁気共鳴スペクトル及び赤外線吸収
スペクトルの測定値を表２に示した。）。

【００９０】実施例４ ２，３，４−トリメトキシベンズアルデヒドの代りに、
２，４，５−トリメトキシベンズアルデヒド（ランカス
ター社製）７８５ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）を用いたこ
とを除き、実施例３と同一の方法により、黄色結晶化合
物α−（チアナフテン−３−イル）−β−（２，４，５
−トリメトキシフェニル）アクリロニトリル５７９ｍｇ
（収率４１．２％）を得た。ただし、実施例３の場合と
異なり、反応系の中に目的物が結晶として析出したの
で、以下の処理は、実施例２と同一の方法によった。

【００９１】α−（ナフタレン−２−イル）−β−
（２，４，５−トリメトキシフェニル）アクリロニトリ
ルの代りに、前記α−（チアナフテン−３−イル）−β
−（２，４，５−トリメトキシフェニル）アクリロニト
リル４２２ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）を用いたこと及び
塩化ピリジニウム（和光純薬工業社製）２．１ｇ（１８
ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例２と同一の方法
により、次の化２５の化学式

【００９２】

【化２５】

【００９３】で示される緑黄色結晶化合物１２７ｍｇ
（収率３４．１％）を得た。得られた化合物は、明瞭な
融点を示さず、２２０℃近辺で着色して分解した（尚、
本化合物の核磁気共鳴スペクトル及び赤外線吸収スペク
トルの測定値を表２に示した。）。

【００９４】実施例５ １錠当たり次の割合の組成からなる混合物を調製し、常
法により錠剤機で打錠し、本発明の１２−リポキシゲナ
ーゼを選択的に阻害する医薬を製造した。 実施例２で得た化合物 ２０．０（ｍｇ） 乳糖（岩城製薬社製） ４０．０ トウモロコシ澱粉（吉田製薬社製） １５．０ ステアリン酸マグネシウム（太平化学社製） ０．４ カルボキシメチルセルロースカルシウム （ニチリン化学工業社製） ２０．０

【００９５】実施例６ １カプセル当たり次の割合の組成からなる混合物を調製
し、常法によりゼラチン・カプセルに充填し、本発明の
１２−リポキシゲナーゼを選択的に阻害する医薬を製造
した。 実施例２で得た化合物 ２０．０（ｍｇ） 乳糖（岩城製薬社製） ４０．０ 微粉末セルロース（日本ソーダ社製） ３０．０ ステアリン酸マグネシウム（太平化学社製） ３．０

【００９６】

【発明の効果】以上詳述したとおり、本発明は、クマリ
ン誘導体、及びこれらの化合物を有効成分として含有す
る医薬に係るものであり、本発明によって奏せられる効
果は、次のとおりである。 １）本発明の化合物は、１２−リポキシゲナーゼを強
力、かつ高い選択性をもって阻害する作用を有する。 ２）本発明の前記化合物を有効成分とする医薬は、動脈
硬化、血管攣縮等の循環器系各種疾患の予防、治療、及
びある種の癌の転移の予防に有効である。 ３）本発明の化合物は、低毒性であり、副作用が少な
く、１２−リポキシゲナーゼを選択的に阻害する医薬の
有効成分として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 35/04 Ａ６１Ｐ 35/04 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 407/04 Ｃ０７Ｄ 407/04 409/04 409/04 (72)発明者 森 繁広 神奈川県座間市東原５丁目１番15号407 さがみ野さくら (72)発明者 森内 尚子 神奈川県横浜市港南区日野南１丁目20番 ７号 (56)参考文献 特開 昭61−15834（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 311/06 - 311/20 A61K 31/00 - 31/80 C07D 407/04 C07D 409/04 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の化１の一般式 【化１】 ［ただし、式中Ｒ² 及びＲ³ は、水素原子又は水酸基を
   示し（ただし、Ｒ² とＲ³ とが同時に水素原子であるこ
   とはない）、Ａｒは、次の化２又は化３の一般式 【化２】 【化３】 で示される基であり、式中Ｘは、酸素原子又は硫黄原子
   を示す。］で示されるクマリン誘導体。
2. 【請求項２】 次の化４の一般式 【化４】 ［ただし、式中Ｒ² 及びＲ³ は、水素原子又は水酸基を
   示し（ただし、Ｒ² とＲ³ とが同時に水素原子であるこ
   とはない）、Ａｒは、次の化５又は化６の一般式 【化５】 【化６】 で示される基であり、式中Ｘは、酸素原子又は硫黄原子
   を示す。］で示されるクマリン誘導体からなる群より選
   択される化合物又はそれらの混合物を有効成分として含
   有する１２−リポキシゲナーゼ阻害剤。
3. 【請求項３】 請求項２記載の化４の一般式［ただし、
   式中Ｒ ² 及びＲ ³ は、水素原子又は水酸基を示し（ただ
   し、Ｒ ² とＲ ³ とが同時に水素原子であるこ とはな
   い）、Ａｒは、請求項２記載の化５又は化６の一般式で
   示される基であり、式中Ｘは、酸素原子又は硫黄原子を
   示す。］で示されるクマリン誘導体からなる群より選択
   される化合物又はそれらの混合物を有効成分として含有
   し、１２−リポキシゲナーゼ活性の選択的阻害作用を有
   する、１２−リポキシゲナーゼ阻害用医薬。