JP2919889B2 - 治療用ペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 この発明は、例えば良性又は悪性の組織増殖の治療及
び消化管の病気に有用な治療用ペプチドに関する。

両生類ペプチドボンベシン、pGlu−Gln−Arg−Leu−G
ly−Asn−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−N
H₂（Anastaiら、Experientia、27巻、166−167頁（197
1））は、哺乳類のガストリン放出ペプチド（GRP）、例
えば、ブタGRP、H₂N−Ala−Pro−Val−Ser−Val−Gly−
Gly−Gly−Thr−Val−Leu−Ala−Lys−Met−Tyr−Pro−
Arg−Gly−Asn−His−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−
Met−（NH₂）（McDonaldら、Biochem.Biophys.Res.Comm
un.、90巻、227−233頁（1979））及びヒトGRP、H₂N−V
al−Pro−Leu−Pro−Ala−Gly−Gly−Gly−Thr−Val−L
eu−Thr−Lys−Met−Tyr−Pro−Arg−Gly−Asn−His−T
rp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−（NH₂）に密接に
関係している。ボンベシンは、小細胞肺ガン（SCLC）を
含む多くのヒトガン細胞系統にとって成長因子であるこ
とが見出され、ヒト乳ガン及び前立腺ガンにおいて検出
された（Havemanら編、Recent Results in Cancer Rese
arch-Peptide Hormones in Lung Cancer、Springer−Ve
rlag、New York:1986）。これらのガンの多くはGRP又は
ボンベシンに関係するペプチドホルモンを分泌すること
が知られている。従って、ボンベシンに対する拮抗物質
がこれらのガンの治療のための薬剤として提出された。

Cuttittaらは、ボンベシンに特異的なモノクローナル
交代がヌードマウスに異種移植されたヒト小細胞肺ガン
細胞系統の成長をイン・ビボで阻害することを示した
（Cuttittaら、Cancer Survey、４巻、707−727頁（198
5））。ボンベシンの有糸***への影響に応答性の3T3マ
ウス繊維芽細胞において、ZacharyとRozengurtは、拮抗
物質Ｐ（Spantide）がボンベシン拮抗物質として作用す
ることを観察した（Proc.Natl.Acad.Sci.（USA）、82
巻、7616−7620頁（1985））。Heinz−Erianらは、ボン
ベシンの12位のHisをＤ−Pheで置換し、テンジクネズミ
膵臓由来の分散腺房（dispersed acini）におけるボン
ベシン拮抗活性を観察した（Heinz−Erianら、Am.J.of
Physiol.、252巻、G439−G442頁（1987））。Rivier
は、分子内にジスルフィド架橋を取り入れることにより
ボンベシンデカペプチドの生物活性を有するＣ−末端の
コンホメーションの自由度を制限することに向けられた
仕事を報告した。しかしながら、Rivierは、この修飾を
施したボンベシン類似体はなんらの拮抗作用も示さなか
ったと述べた（Rivierら、“Competitive Antagonist o
f Peptide Hormons"、Abstracts of the International
Symposium on Bombesin−Like Peptides in Health an
d Disease、Rome、Italy（1987年10月））。

省略形（未発表）： Nle＝H₂N−CH−COOH（ノルロイシン） (CH₂)₃−CH₃ Pal＝３−ピリジルアラニン β−leu＝β−ホモロイシン γ−leu＝γ−ホモロイシン Ｄ−Cpa＝Ｄ−ｐ−クロロフェニルアラニン HyPro＝ヒドロキシプロリン Nal＝ナフチルアラニン Sar＝サルコシン Sta（スタチン）＝ （3s,4s）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチル
ヘプタノン酸 下記の化学構造を有する： AHPPA＝ （3s,4s）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニ
ルペンタノン酸 ACHPA＝ （3s,4s）−４−アミノ−５−シクロヘキシル−３−ヒ
ドロキシペンタノン酸 Ｒ＝右（Ｄ）配置;S＝左（Ｌ）配置； ラセミ化合物＝Ｒ及びＳの等量混合物 １−メチル−His;3−メチル−His＝ヒスチジンの１又は
３位の窒素に付いたメチル（CH₃）基： 発明の要約 天然の生物学的に活性な両生類のボンベシン又は哺乳
類のガストリン放出ペプチド（GRP）の類似体であっ
て、標的細胞上のレセプターへのペプチドの結合の原因
となる活性部位及び結合部位を有し、天然のボンベシン
又はGRPの活性部位におけるペプチド結合の開裂がイン
・ビボでの生物活性に不必要であり、その類似体が下記
の修飾：（ａ）活性部位内の残基の削除又は活性部位外
の残基の修飾、又は（ｂ）活性部以内の一つ又は二つの
残基の合成アミノ酸による置換、の内の一つを有する線
状のペプチド（即ち非環状）。

この類似体は、レセプターに結合することにより天然
のペプチドの競合的阻害剤として作用することが出来、
この修飾の一つにより天然のペプチドのイン・ビボでの
生物活性を示さなくなる。

拮抗物質を増強させる修飾の位置選定は、天然のペプ
チドの活性部位の位置によって決定した。例えば、非ペ
プチド結合を二つの残基の間に導入すること、又は二つ
の天然のアミノ酸を合成のβ−又はγ−アミノ酸で置換
すること、或はＣ−末端の残基を削除すること（“de
s"）が拮抗活性を生じさせ又は増大させるために有用で
ある線状ペプチドは、その活性がアミノ酸鎖の二つのＣ
−末端残基と関係している線状ペプチドである。従っ
て、この発明のペプチドがその類似体である天然のペプ
チドの活性部位は、好ましくは、このペプチドのカルボ
キシ末端側半分の内の少なくとも一つのアミノ酸を含
み、この発明の線状ペプチドはそのアミノ酸をそのカル
ボキシ末端側半分に含む。同様に、活性部位が天然のペ
プチドのアミノ末端部分に位置する場合は、この発明の
対応する類似体はそのアミノ末端部位に修飾を有する。

好ましい具体例において、この活性部位は、天然の生
物活性を有するペプチドのカルボキシ末端側半分に位置
する少なくとも一つのアミノ酸残基を含み、そのアミノ
酸残基はこの線状ペプチドのカルボキシ末端側半分に位
置する。

他の好ましい具体例において、この活性部位は、天然
の生物活性を有するペプチドのアミノ末端側半分に位置
する少なくとも一つのアミノ酸残基を含み、そのアミノ
酸残基はこの線状ペプチドのアミノ末端側半分に位置す
る。

修飾はレセプター結合領域に含まれる領域に、又は非
結合領域に導入し得る。好ましくは、この発明の類似体
は天然のペプチドと25％の相同性を有し、最も好ましく
は50％の相同性を有する。

この発明の類似耐は、以下に与えられる一般式で与え
られる修飾の一つを有することが出来る；活性部位の及
び隣接する二つのアミノ酸の間のペプチド結合の代わり
の非ペプチド結合；或は一つか二つの天然のアミノ酸の
代わりのスタチン又はAHPPA又はACHPA残基、又はβ−又
はγ−アミノ酸；或は実際のＣ−末端基上の置換基の付
加又はそれからこの類似体が誘導されるペプチドの天然
のＮ−末端アミノ酸ではないＮ−末端残基の存在を伴っ
ての又は伴わないＣ−末端アミノ酸の削除。（スタチ
ン、AHPPA、及びACHPAは上に定義した化学構造を有す
る。ここでスタチンを用いる場合は、AHPPA又はACHPAも
又用いて良い。） 非ペプチド結合により、二つの残基間の結合に参加し
ている炭素原子はカルボニル炭素からメチレン炭素（即
ちCH₂−NH）に還元される；又は、より好ましくはない
が、この炭素原子に結合している残基はそのアミノ基の
代わりに硫黄原子又はメチレン炭素を有する（即ちCH₂
−Ｓ又はCO−CH₂）ということが意味される（非ペプチ
ド結合の化学の詳細な記述はCoyら、（1988）、Tetrahe
dron、44巻、3:835−841頁にあり、ここに参照して組み
入れる。） 天然のペプチドの他の拮抗物質を作るための一つの修
飾は、その分子のアミノ末端の修飾であるが、それは電
子供与基であり得て、例えば、以下の一般式においてア
ミノ末端位置に記される様な窒素含有アミノ酸であり；
例えば、Ｎ−末端アミノ酸であるが、それは、A⁰である
か、又はA⁰が削除された場合はA¹であり、又はA⁰とA¹が
削除された場合はA²であり、それは芳香族のＤ−異性体
であるか又はアルキル化アミノ酸であって良い。（ここ
に、“D"はアミノ酸の配置として示されているのではな
く、Ｌ型を意図している。）他の修飾はＣ−末端残基の
修飾であるが、それは下記の任意の“W"基であって良
い。

この発明は７〜９アミノ酸残基を含む治療用ペプチド
を含み、そのペプチドが下記のカルボキシ末端がMetで
終了している天然のペプチド：（ａ）リトリン；（ｂ）
ニューロメジン；（ｃ）哺乳類のガストリン放出ペプチ
ドのカルボキシ末端領域の10アミノ酸；及び（ｄ）両生
類のボンベシンのカルボキシ末端領域の10アミノ酸、の
内の一つの類似体であり、この治療用ペプチドが式： ｛式中 A⁰＝Gly、Nle、α−アミノ酪酸または、Ala、Val、Gl
n、Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、
Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ
−NalのいずれかのＤ−異性体或は削除されるもの、 A¹＝pGlu、Nle若しくはα−アミノ酪酸のＤ−ないしＬ
−異性体または、Ala、Val、Gln、Asn、Ile、Met、ｐ−
Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH
₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−異性体或
は削除されるもの、 A²＝pGlu、Gly、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、
ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈまた
はCH₃）、Trp、Cys、β−Nal、His、１−メチル−Hisま
たは３−メチル−His、 A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、Ile、Nle、α−ア
ミノ酪酸、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、
NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cysまたはβ−Nal、 A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、B
r、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Thrまたはβ−Nal、 A⁶＝Sar、Gly或は、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ
またはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−
異性体或、 A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−HisまたはHis;但
し、A⁰の存在時、A¹はpGluではあり得ず、A⁰ないしA¹の
存在時、A²はpGluではあり得ず、A⁰が削除され、A¹がpG
luであるとき、R₁はＨで、R₂はpGluのイミン環を形成す
るGluの部分でなければならず、更にＷが次式： ［式中R₃はCHR₁₄(CH₂)_n1（ここでR₁₄はＨまたはOHのい
ずれかであり、_n1は１または０のいずれかである）また
は削除され、Z₁はアミノ酸、Gly、Ala、シクロヘキシル
−Ala、Val、Leu、Ile、Ser,Asp、Asn、Glu、Gln、ｐ−
Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OHまたはCH
₃）、Trp、Cys、Met、Pro、HyProまたはイソプロピル、
シクロヘキシルメチル、β−nal β−ナフチルメチル若
しくはフェニルメチルのいずれか一つを示す基であり、
ＶはOR₄またはNR₆−R₅（ここでR₄はC_1-20アルキル、C
_3-20アルケニル、C_3-12アルキニル、フェニル、ナフチ
ルまたはC_7-10フェニルアルキルのいずれかであり、R₅
及びR₆の各々は個々にＨ、C_1-12アルキル、C_{7 〜 10}フェ
ニルアルキル、低級アシルまたはNH−R₁₅（R₁₅はＨ、C
_1-12アルキル、C_7-10フェニルアルキルまたは低級アシ
ルのいずれかである）のいずれかであるが、R₅ないしR₆
のいずれか一方がNHR₁₅であるとき、他方はＨであ
る）］であり得、但しいずれかの不整炭素原子はＲ、Ｓ
またはラセミ混合物であり得、更にまた、R₁及びR₂の各
々は個々にＨ、C_1-12アルキル、C_7-10フェニルアルキ
ル、COE₁、（ここでE₁はC_1-20アルキル、C_3-20アルケニ
ル、C_3-20アルキニル、フェニル、ナフチルまたはC_7-10
フェニルアルキルである）または低級アシルであり、R₁
及びR₂はペプチドのＮ−末端アミノ酸に結合し、更にま
た、R₁ないしR₂の一方がCOE₁であるとき他方はＨでなけ
ればならない｝ を有する前記の治療用ペプチド或はその、製薬上受容さ
れる塩を含む。

好ましくは、この治療用ペプチドはこの式を有し、式
中、 A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または削除され、 A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal、Ｄ−Cp
a、Ｄ−Asn、 A²＝Gln、His、１−メチル−His又は３−メチル−His、 A⁴＝Ala、 A⁵＝Val、 A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−PheまたはＤ−Ala、 A⁷＝His、 但し、R₃がCH₂−CH₂であるとき、Z₁はLeuまたはPheを示
す基であり、またR₃がCH₂であるとき、Z₁はβ−Leuまた
はLeuを示す基であり、或はまたR₃がCHOH−CH₂であると
き、Z₁はLeuを示す基またはイソプロピル、シクロヘキ
シルメチル、β−ナフチルメチル若しくはフェニルメチ
ルであり、但し、ＶはNR₆−R₅であり、かつ、R₅及びR₆
の各々は個々にＨである。

好ましくは、このペプチドは、この一般式のものであ
り、式中、ＶはNHR₆であり、R₆はNH₂である。

最も好ましくは、この治療用ペプチドは下記のアミノ
酸式を有する： この発明は又、８個〜10個のアミノ酸残基を含む治療
用ペプチドにして、カルボキシ末端がMet残基で終端し
ている下記の天然のペプチドすなわち、（ａ）リトリ
ン、（ｂ）ニューロメジン、（ｃ）哺乳類ガストリン放
出ペプチドの10アミノ酸カルボキシ末端領域及び（ｄ）
両生類ボンベシンの10アミノ酸カルボキシ末端領域のう
ちの一つの類似体であり、而して次式： ｛式中 A⁰＝Gly、Nle、α−アミノ酪酸または、Ala、Val、Gl
n、Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、
Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ
−NalいずれかのＤ−異性体或は削除されるもの、 A¹＝pGlu、Nle若しくはα−アミノ酪酸のＤ−ないしＬ
−異性体または、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ
またはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−
異性体或は削除されるもの A²＝pGlu、Gly、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、
ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈまた
はCH₃）、Trp、Cys、β−Nal、His、１−メチル−Hisま
たは３−メチル−His A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、Ile、Nle、α−ア
ミノ酪酸、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、
NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cysまたはβ−Nal、 A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、B
r、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Thrまたはβ−Nal、 A⁶＝Sar、Glyまたは、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、
Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、
ＨまたはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−Nal、のいずれか
のＤ−異性体、 A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−HisまたはHis、但
し、A⁰の存在時、A¹はpGluではあり得ず、A⁰ないしA¹の
存在時、A²はpGluではあり得ず、A⁰が削除され且つA¹が
pGluであるとき、R₁はＨで、R₂はpGluのイミン環を形成
するGluの部分でなければならず、更にＷは次式： ［式中R₄はCH₂−NH、CH₂−Ｓ、CO−CH₂またはCH₂−CH₂
であり、Z₁及びZ₂の各々は個々にアミノ酸Gly、Ala、Va
l、Leu、Ile、Ser、Asp、Asn、Glu、Gln、β−Nal、ｐ
−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、また
はCH₃）、Trp、Cys、Met、Pro、HyPro、シクロヘキシル
−Alaまたはシクロヘキシルメチルであり、但しR₄がCH₂
−NHであり且つZ₂がアミノ酸Gly、Ala、Val、Leu、Il
e、Ser、Asp、Asn、Glu、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ
＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Cys、
Met、Pro、HyProまたはシクロヘキシルメチルのいずれ
か一つを示す基であるとき、Z₁はアミノ酸Ser、Asp、Gl
u、Cys、Pro、HyProまたはシクロヘキシルメチルのいず
れか一つを示す基であり、またR₄がCH₂−NHであり且つZ
₁がアミノ酸Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、As
n、Glu、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、B
r、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Cys、Met、Pro、また
はHyProのいずれか一つを示す基であるとき、Z₂はアミ
ノ酸Ser、Asp、Glu、Cys、Pro、HyProまたはシクロヘキ
シルメチルのいずれか一つを示す基であり、ＶはOR₅ま
たはNR₇−R₆（ここでR₅、R₆及びR₇の各々は個々にＨ、
低級アルキル、低級フェニルアルキルまたは低級ナフチ
ルアルキルである）］であり得、但しいずれかの不整炭
素原子はＲ、Ｓまたはラセミ混合物であり得、更にま
た、R₁及びR₂の各々は個々にＨ、C_1-12アルキル、C_7-10
フェニルアルキル、COE₁（ここでE₁はC_1-20アルキル、C
_3-20アルケニル、C_3-20アルキニル、フェニル、ナフチ
ルまたはC_7-10フェニルアルキルである）または低級ア
シルであり、R₁及びR₂はペプチドのＮ−末端アミノ酸に
結合し、更にまた、R₁ないしR₂の一方がCOE₁であると
き、他方はＨでなければならない）｝ を有する前記の治療用ペプチド或はその、製薬上受容さ
れる塩を含む。

好ましくは、この治療用ペプチドはこの式を有し、式
中、 A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または削除され、 A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal、Ｄ−Cp
aまたはＤ−Asn、 A²＝Gln、His、１−メチル−His又は３−メチル−His、 A⁴＝Ala、 A⁵＝Val、 A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−PheまたはＤ−Ala、 A⁷＝His、 ここで、R₄がCH₂−NHであるとき、Z₁はシクロヘキシル
メチルであるか或は、LeuまたはPheを示す基であり、ま
たZ₂はMet、LeuまたはPheを示す基である。

最も好ましくは、この治療用ペプチドはA¹位置にＤ−
β−Nalを含み、ここでZ₁及びZ₂の各々が個々にLeuまた
はPheである。

そのようなペプチドの例は、 である。

更に、この治療用ペプチドは、R₄がCH₂−NHであり、Z
₂に結合した炭素原子がＲ配置のものを含んで良い。そ
のようなペプチドの例は、 である。

更に、このペプチドは、A⁰またはA¹がＤアミノ酸であ
り、ＶがOR₄であるものを含んで良く、そのようなペプ
チドの例としては、治療用ペプチド のようなメチルエステル誘導体がある。

この発明は又、７個〜９個のアミノ酸残基を含む治療
用ペプチドにして、カルボキシ末端がMet残基で終端し
ている下記の天然のペプチドすなわち、（ａ）リトリ
ン、（ｂ）ニューロメジン、（ｃ）哺乳類ガストリン放
出ペプチドの10アミノ酸カルボキシ末端領域及び（ｄ）
両生類ボンベシンの10アミノ酸カルボキシ末端領域のう
ちの一つの類似体であり、而して次式： ｛式中 A⁰＝Gly、Nle、α−アミノ酪酸または、Ala、Val、Gl
n、Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、
Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ
−NalいずれかのＤ−異性体或は削除されるもの、 A¹＝pGlu、Nle若しくはα−アミノ酪酸のＤ−ないしＬ
−異性体または、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ
またはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−
異性体或は削除されるもの、 A²＝pGlu、Gly、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、
ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈまた
はCH₃）、Trp、Cys、β−Nal、His、１−メチル−Hisま
たは３−メチル−His、 A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、Ile、Nle、α−ア
ミノ酪酸、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、
NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cysまたはβ−Nal、 A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、B
r、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Thrまたはβ−Nal、 A⁶＝Sar、Gly或は、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ
またはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−
異性体或、 A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−HisまたはHis;但
し、A⁰の存在時、A¹はpGluではあり得ず、A⁰ないしA¹の
存在時、A²はpGluではあり得ず、A⁰が削除され、A¹がpG
luであるとき、R₁はＨで、R₂はpGluのイミン環を形成す
るGluの部分でなければならず、更にＷは次式： ［式中、 Z₁は、アミノ酸Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、A
sn、Glu、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、B
r、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Cys、Met、ProまたはH
yProのいずれか一つを示す基であり、R₉及びR₁₀及びR₁₁
の各々は個々にＨ、低級アルキル、低級フェニルアルキ
ルまたは低級ナフチルアルキルである］であり得、但し
いずれかの不整炭素原子はＲ、Ｓまたはラセミ混合物で
あり得、更にまた、R₁及びR₂の各々は個々にＨ、C_1-12
アルキル、C_7-10フェニルアルキル、COE₁（ここでE₁はC
_1-20アルキル、C_3-20アルケニル、C_3-20アルキニル、フ
ェニル、ナフチルまたはC_7-10フェニルアルキルであ
る）または低級アシルであり、R₁及びR₂はペプチドのＮ
−末端アミノ酸に結合し、更にまた、R₁ないしR₂の一方
がCOE₁であるとき、他方はＨでなければならない｝ を有する前記の治療用ペプチド或はその、製薬上受容さ
れる塩を含む。

好ましくは、このペプチドは、 A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または削除され、 A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal、Ｄ−Cp
aまたはＤ−Asn、 A²＝Gln、His、１−メチル−His又は３−メチル−His、 A⁴＝Ala、 A⁵＝Val、 A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−PheまたはＤ−Ala、 A⁷＝His、 但し、Z₁は、アミノ酸LeuまたはＤないしL p−Ｘ−Phe
（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、またはCH₃）の
いずれか一つを示す基であり、R₉、R₁₀及びR₁₁の各々は
個々にＨ、低級アルキル、低級フェニルアルキルまたは
低級ナフチルアルキルであるものを含む。

最も好ましくは、このペプチドは、Z₁がLeuであり、R
₉がＨであり、R₁₀及びR₁₁の各々が低級アルキルである
ものを含む。そのようなペプチドの例は、 である。

この発明は又、６個〜８個のアミノ酸残基を含む治療
用ペプチドにして、カルボキシ末端がMet残基で終端し
ている下記の天然のペプチドすなわち、（ａ）リトリ
ン、（ｂ）ニューロメジン、（ｃ）哺乳類ガストリン放
出ペプチドの10個のアミノ酸カルボキシ末端領域及び
（ｄ）両生類ボンベシンの10個のアミノ酸カルボキシ末
端領域のうちの一つの類似体であり、而して次式： ｛式中 A⁰＝Gly、Nle、α−アミノ酪酸または、Ala、Val、Gl
n、Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、
Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ
−NalいずれかのＤ−異性体或は削除されるもの、 A¹＝pGlu、Nle若しくはα−アミノ酪酸のＤ−ないしＬ
−異性体または、Ala、Val、Gln、Asn、Ile、Met、ｐ−
Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH
₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−異性体或
は削除されるもの、 A²＝pGlu、Gly、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、
ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈまた
はCH₃）、Trp、Cys、β−Nal、His、１−メチル−Hisま
たは３−メチル−His、
A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、
Ile、Nle、α−アミノ酪酸、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここで
Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Cysま
たはβ−Nal、 A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、B
r、OH、ＨまたはCH₃）、Trp、Thrまたはβ−Nal、 A⁶＝Sar、Gly或は、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ
またはCH₃）、Trp、Cys若しくはβ−NalいずれかのＤ−
異性体或、 A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−HisまたはHis;但
し、▲Ａ^０▼の存在時、▲Ａ^１▼はpGluではあり得ず、
▲Ａ^０▼ないし▲Ａ^１▼の存在時、▲Ａ^２▼はpGluでは
あり得ず、▲Ａ^０▼が削除され、▲Ａ^１▼がpGluである
とき、▲Ｒ_１▼はＨで、▲Ｒ_２▼はpGluのイミン環を形
成するGluの部分でなければならず、更にＷは次式： NR₁₃−R₁₂（ここでR₁₂及びR₁₃の各々は個々にＨ、低級
アルキル、低級フェニルアルキルまたは低級ナフチルア
ルキルである）であり得、但しいずれかの不整炭素原子
はＲ、Ｓまたはラセミ混合物であり得、更にまた、R₁及
びR₂の各々は個々にＨ、C_1-12アルキル、C_7-10フェニル
アルキル、COE₁（ここでE₁はC_1-20アルキル、C_3-20アル
ケニル、C_3-20アルキニル、フェニル、ナフチルまたはC
_7-10フェニルアルキルである）または低級アシルであ
り、R₁及びR₂はペプチドのＮ−末端アミノ酸に結合し、
更にまた、R₁ないしR₂の一方がCOE₁であるとき、他方は
Ｈでなければならない｝を有する前記の治療用ペプチド
或はその、製薬上受容される塩を含む。

好ましくは、この治療用ペプチドは、 A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または削除され、 A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal、Ｄ−Cp
aまたはＤ−Asn、 A²＝Gln、His、１−メチル−His又は３−メチル−His、 A⁴＝Ala、 A⁵＝Val、 A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−PheまたはＤ−Ala、 A⁷＝His、 ここでR₁₂及びR₁₃の各々はＨであり、R₁及びR₂の各々は
個々にＨ、低級アルキル、または低級アシルであるもの
を含む。

好ましくは、ここで、N₁₂又はN₁₃のいずれかがＨ以外
であり、A⁷がHisであり、A⁶がGlyであり、A⁵がValであ
り、A⁴がAlaであり、及びA²がHisであり、かつ、R₁又は
R₂のいずれかがＨ以外であり、A¹が削除されていてはな
らない。

発明は、また、下記式のボンベシン治療用ペプチドを
含む： 発明は、また、下記式のアミノ酸を含有する有効なボ
ンベシン拮抗性ペプチドを含む： 式中、 A¹＝pGlu、Ｄ或はＬ、もしくは削除され； A²＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、β−ナフチルアラニンもしくは削除
され； A³＝Arg、Ｄ−Arg Lys D−Lysもしくは削除され； A⁴＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、β−ナフチルアラニンもしくは削除
され； A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、Ｄ−Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝
Ｆ、Cl、Br、OH或はCH₃）、Trp、β−ナフチルアラニ
ン、Ｄ−Alaもしくは削除され； A⁶＝Gln、Asn、Gly、Ala、Ｄ−Ala、Ｎ−Ac−Ｄ−Ala、
Leu、Ile、Nle、α−アミノ酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−
Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、OH或はCH₃）、Trp、ｐ−Gl
u、β−ナフチルアラニン、Ｄ−Alaもしくは削除され； A⁷＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、Ｄ−Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝
Ｆ、Cl、Br、OH或はCH₃）、Trp、Lys、His、或はβ−ナ
フチルアラニン； A⁸＝Trp或はMet; A⁹＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、或はβ−ナフチルアラニン、Ｄ或は
L; A¹⁰＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、Thr、或はβ−ナフチルアラニン； A¹¹＝Gly、Phe、Ｄ或はL; A¹²＝His、Phe、Ｄ或はｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH、CH₃）、Ｄ或はL; A¹³＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、或はβ−ナフチルアラニン； A¹⁴＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、Phe、ｐ−Ｘ−Phe（Ｘ＝Ｆ、Cl、Br、
OH或はCH₃）、Trp、或はβ−ナフチルアラニン； 但し、 各々のR₁、R₂、R₃、及びR₄は、独立に下記であり:H、
C_1-12アルキル、C_7-10フェニルアルキル、COE₁（ここ
で、E₁はC_1-20アルキル、C_3-20アルケニル、C_3-20アル
キニル、フェニル、ナフチル、或はC_7-10フェニルアル
キルである）、或はCOOE₂（ここで、E₂はC_1-10アルキル
或はC_7-10フェニルアルキルである）、R₁及びR₂は、
A¹、A²、A³、A⁴、A⁵、A⁶、或はA⁷になることができるペ
プチドのＮ−末端アミノ酸に結合され、更に、R₁或はR₂
の内の一つがCOE₁或はCOOE₂である時、他方はＨでなけ
ればならず、かつR₃或はR₄の内の一つがCOE₁或はCOOE₂
である時、他方はＨでなければならないことを条件と
し、かつ更に、A¹＝pGluである時、R₁はＨでなければな
らずかつR₂はpGluにおけるイミン環を形成するGluの部
分でなければならないことを条件とし；A⁷、A⁸、A⁹、A
¹¹、A¹²及びA¹³残基の各々について、独立に、その残基
と隣接するアミノ酸残基のアルファアミノ基の窒素原子
との間のアミド結合に関与する炭素原子はカルボニル炭
素になることができ或は還元されてメチレン炭素になる
ことができ、但し、かかる炭素原子の少なくとも一つは
還元されてメチレン炭素にならなければならない、 ここでペプチドは更に下記を含む： A⁵＝Cys; A⁶＝Cys或はこの位置について記載されるアミノ酸の内
のいずれかのＤ−異性体； A⁷＝pGlu、Cys、１−メチル−His、或は３−メチル−Hi
s; A⁹＝Cys; A¹¹＝Sar、もしくはAla、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Me
t、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH或はC
H₃）、Trp、Cys、或はβ−Nalの内のいずれかのＤ−異
性体； A¹²＝１−メチル−His、或は３−メチル−His; 及び、ここでA¹⁴は削除することができる。

この治療用ペプチドは下記式のものが最も好ましい： Ｄ−ｐ−Cl−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu
ψ［CH₂NH］Phe−NH₂ 本明細書中に記載する式の治療用ペプチドのアミノ酸
配列は、天然酸ペプチドのアミノ酸配列と少なくとも25
％相同であるのが好ましく、この相同性は少なくとも50
％であるのが最も好ましい。

（ペプチド結合が還元された非ペプチド結合を、本明
細書中、［CH₂NH］」或は「Ψ」の記号で表わす。） 発明の拮抗薬は、組織の悪性或は良性増殖を含む疾
患、例えばボンベシンと関連する或はGRPと関連する物
質がオートクリン或はパラクリン有糸***因子として作
用するすべての形の癌、例えば胃腸管の癌、膵臓癌、結
腸癌、肺癌、特に小細胞サブタイプ、或は乳癌を治療す
るのに、もしくは動脈硬化並びに胃及び膵臓の分泌及び
運動性に関係する胃腸組織の障害を治療するのに、例え
ばアミラーゼ分泌の抑止を引き起こすのに、もしくは食
欲制御するのに有用である。

上に挙げた一般式において、R₁−R₁₃或はR₁₅の内のい
ずれか一つが芳香族、脂肪親和性基であるとき、インビ
ボ活性は長く続くことができ、かつ発明の化合物の標的
組織への送達を促進させることができる。

α−アミノ酸の識別基は、不斉α−炭素原子に結合し
た、α−カルボニル炭素原子と異なる原子或は原子群、
α−アミノ窒素原子、或はＨ原子である。例によって示
すと、アラニンの識別基はCH₃であり、バリンの識別基
は(CH₃)₂CHであり、リシンの識別基はH₃N⁺(CH₂)₄であ
り、フェニルアラニンの識別基は(C₆H₆)CH₂である。β
−或はγ−アミノ酸の識別基は、β−或はγ−炭素原子
にそれぞれ結合した類似の原子或は原子群である。アミ
ノ酸の識別基が特定されない場合、該基はα、β或はγ
にすることができる。

発明のその他の特徴及び利点は、下記の発明の好まし
い実施態様の記述及び請求の範囲から明らかになるもの
と思う。

好ましい実施態様の記述 初めに、簡単に図面を説明する。

図面 第１図はNCI−H69異種移植についての腫瘍成長カーブ
のグラフである。

第２図は天然産ペプチドであって、発明のペプチドは
それらの内の類似物であるものの一連のアミノ酸配列で
ある。

第３図はボンベシン類似物Ｄ−Phe⁶BN（６−13）メチ
ルエステルの注入がボンベシン刺激された膵臓アミラー
ゼアセイに与える影響を示すグラフである。

今、発明の好ましい実施態様の構造、合成及び用法に
ついて説明する。

構造 発明のペプチドは、スタチン置換された類似物及びβ
−leu、例えばsta⁸−desLeu⁸−Met⁹リトリンの他は、全
て示された位置の内の少なくとも一つにおいて非ペプチ
ド結合を有する。非ペプチド結合とは、２つの残基の間
の結合に関与する炭素原子がカルボニル炭素から還元さ
れてメチレン炭素になることを意味する。この非ペプチ
ド結合を生じるペプチド結合還元法は、本出願と同じ譲
受人に譲渡されたコイ（Coy）等の米国特許出願第879,3
48号に記載されており、同米国特許出願を本明細書中に
援用する。リトリン拮抗薬の０、１、２及び９位におけ
るアミノ酸の内のいずれか一つがペプチドから削除され
てもよく、ペプチドは依然拮抗薬として活性である。

発明のペプチドは、製薬的に容認し得る塩の形で供す
ることができる。好ましい塩の例は下記との塩である：
治療上容認し得る有機酸、例えば酢酸、乳酸、マレイン
酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、
安息香酸、サリチル酸、メタンスルフォン酸、トルエン
スルフォン酸或はパモン（pamoic）酸，並びにポリマー
酸、例えばタンニン酸或はカルボキシメチルセルロー
ス、及び無機酸、例えばヒドロハリック（hydrohalic）
酸、例えば塩酸、硫酸或はリン酸。

リトリン類似物の合成 リトリン拮抗薬： pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−LeuΨ［CH₂NH］
Leu−NH₂ の合成は下記の通りである。ボンベシン、リトリン、ニ
ューロメジン或はGRPの他の拮抗薬は、下記の合成法の
適当な変法を行うことによって調製することができる。

第一工程は、下記の通りの中間体： pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His（ベンジルオキシ
カルボニル）−LeuΨ［CH₂NH］Leu−ベンズヒドリルア
ミン樹脂の調製である。

クロリドイオン形のベンズヒドリルアミン−ポリスチ
レン樹脂（ベガ バイオケミカルス、インコーポレイテ
ィド）（0.97g、0.5mモル）を、下記の反応サイクルを
行うようにプログラムしたベックマン 990Bペプチドシ
ンセサイザーの反応容器の中に入れる：（ａ）塩化メチ
レン；（ｂ）塩化メチレン中33％トリフルオロ酢酸（TF
A）（各々１分及び25分間、２度）；（ｃ）塩化メチレ
ン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；及び
（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

中和した樹脂を、塩化メチレン中でアルファ−ｔ−ブ
トキシカルボニル（Boc）−ロイシン及びジイソプロピ
ルカルボジイミド（各々1.5mモル）と共に１時間攪拌
し、生成したアミノ酸樹脂を、次いで上記の洗浄プログ
ラムで工程（ａ）から工程（ｆ）に循環させる。フェー
レンツ（Fehrentz）及びカストロ（Castro）、シンセシ
ス、676頁（1983）の方法によって製造したBoc−ロイシ
ンアルデヒド（1.25mモル）を乾燥ジメチルホルムアミ
ド（DMF）5mlに溶解し、樹脂TFA塩懸濁液に加えた後
に、ナトリウムシアノボロヒドリド（ササキ及びコイ、
ペプチド、８巻、119−121頁（1987）；コイ等、上記）
100mg（2mモル）を加える。１時間攪拌した後に、樹脂
混合物はニンヒドリン反応（１分）に陰性であることが
判明し、遊離アミノ基の完全な誘導体合成を示す。

次いで、下記のアミノ酸（1.5mモル）を、ジイソプロ
ピルカルボジイミド（1.5mモル）の存在において逐次に
結合させ、生成したアミノ酸樹脂を上記と同じ手順で洗
浄／脱ブロッキング工程（ａ）〜（ｆ）に循環させる:B
oc−His（ベンジルオキシカルボニル）、Boc−Gly、Boc
−Val、Boc−Ala、Boc−Trp、Boc−Gln（ｐ−ニトロフ
ェニルエステルの6M過剰として結合させる）及びpGlu。
完了された樹脂を、メタノールで洗浄しかつ風乾する。

上記の樹脂（1.6g、0.5mモル）に、アニソール（5m
l）及び無水弗化水素（35ml）を０℃で混合し、かつ45
分間攪拌する。過剰の弗化水素を乾燥窒素流下で急速に
蒸発させ、遊離ペプチドを沈殿させかつエーテルで洗浄
する。粗ペプチドを2M酢酸の最少容積に溶解し、セファ
デクス（Sephadex）Ｇ−25（ファーマシア ファイン
ケミカルス、インコーポレイティド）のカラム（2.5×1
00mm）で溶離する。次いで、紫外線吸収及び薄層クロマ
トグラフィー（TLC）による主成分を含有するフラクシ
ョンをプールし、蒸発させて少容積にし、オクタデシル
シラン−シリカ（ワットマンLRP−1,15−20μｍメッシ
ュサイズ）のカラム（2.5×50cm）に掛ける。

ペプチドを、水中0.1％トリフルオロ酢酸における０
〜30％アセトニトリルの線状勾配で溶離する。フラクシ
ョンをTLC及び分析用高性能液体クロマトグラフィー（H
PLC）によって調べかつプールして最大純度にする。水
から溶液を繰り返し凍結乾燥させて白色のふわふわした
粉末としての生成物60mgを得る。

生成物はHPLS及びTLCによって均質であることが判明
する。酸加水分解物のアミノ酸分析はペプチドの組成を
確認する。LeuΨ［CH₂NH］Leu結合の存在は、高速原子
衝撃マススペクトロメトリーによって立証される。

pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−PheΨ［CH₂NH］
Leu−NH₂ 及び pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−LeuΨ［CH₂NH］
Leu−NH₂或はその他のペプチドは、上記の手順を適当に
変更することによって類似の様式で同様の収率で製造さ
れる。

Ｄ−Phe¹、Leu⁸Ψ［CH₂NH］Ｄ−Phe⁹−リトリン、Ｄ
−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−LeuΨ［CH₂N
H］−Ｄ−Phe−NH₂の固相合成は、下記の通りに行っ
た： Boc−Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His（トシ
ル）−LeuΨ［CH₂NH］−Ｄ−Phe−ベンズヒドリルアミ
ン樹脂を初めに合成した。

クロリドイオン形のベンズヒドリルアミン−ポリスチ
レン樹脂（アドバンスト ケムテク、インコーボレイテ
ィド）（1.25g、0.5mモル）を、上記の工程（ａ）〜
（ｆ）と記載する反応サイクルを行うようにプログラム
したアドバンスト ケクテク ACT200ペプチドシンセサ
イザーの反応容器の中に入れる。

中和した樹脂を、塩化メチレン中でBoc−Ｄ−フェニ
ルアラニン及びジイソプロピルカルボジイミド（各々1.
5mモル）と共に１時間攪拌し、生成したアミノ酸樹脂
を、次いで上記の洗浄プログラムで工程（ａ）〜（ｇ）
に循環させる。次いで、Boc基をTFA処理によって取り去
る。フェーレンツ及びカストロ（１）の方法によって製
造したBoc−ロイシンアルデヒド（1.25mモル）を乾燥DM
F5mlに溶解し、樹脂TFA塩懸濁液に加えた後に、ナトリ
ウムシアノボロヒドリド（２、３）100mg（2mモル）を
加える。１時間攪拌した後に、反応混合物はニンヒドリ
ン反応（１分）に陰性であることが判明し、遊離アミノ
基の完全な誘導体合成を示す。

次いで、下記のアミノ酸（1.5mモル）を同じ手順によ
って逐次に結合させる:Boc−His（ベンジルオキシカル
ボニル）、Boc−Gly、Boc−Val、Boc−Ala、Boc−Trp、
Boc−Gln（ヒドロキシベンゾトリアゾール１当量の存在
において結合させる）、Boc−Ｄ−Phe（ヒドロキシベン
ゾトリアゾール１当量の存在において結合させる）。ペ
プチド樹脂は、乾燥した後に、重さ1.93gであった。

樹脂（1.93g、0.5mモル）に、アニソール（5ml）及び
無水弗化水素（35ml）を０℃で混合し、かつ45分間攪拌
する。過剰の弗化水素を乾燥窒素流下で急速に蒸発さ
せ、遊離ペプチドを沈殿させかつエーテルで洗浄する。
粗ペプチドを2M酢酸の最少容積に溶解し、セファデクス
Ｇ−25のカラム（2.5×100mm）で溶離する。次いで、紫
外線吸収及び薄層クロマトグラフィーによる主成分を含
有するフラクションをプールし、蒸発させて少容積に
し、ビダク（Vydac）オクタデシルシラン（15−20μ
Ｍ）のカラム（2.5×50cm）に掛ける。これを、水中0.1
％トリフルオロ酢酸における15〜45％アセトニトリルの
線状勾配で溶離する。フラクションを薄層クロマトグラ
フィー及び分析用高性能液体クロマトグラフィーによっ
て調べかつプールして最大純度にする。水から溶液を繰
り返し凍結乾燥させて白色のふわふわした粉末としての
生成物120mgを得る。

他のペプチド、例えばＤ−ｐ−Cl−Phe−Gln−Trp−A
la−Val−Gly−His−LeuΨ［CH₂NH］−Ｄ−Phe−NH
₂は、本質的に同じ手順を用いて合成することができ
る。

Leu⁸Ψ［CH₂NH］−Ｄ−Phe⁹−リトリンの合成、 Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−LeuΨ［CH₂N
H］−Ｄ−Phe−NH₂の固相合成は、下記の通りに行っ
た： Boc−Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His（トシ
ル）−LeuΨ［CH₂NH］−Ｄ−Phe−ベンズヒドリルアミ
ン樹脂を初めに合成した。

クロリドイオン形のベンズヒドリルアミン−ポリスチ
レン樹脂（アドバンスト ケムテク、インコーポレイテ
ィド）（1.25g、0.5mモル）を、下記の反応サイクルを
行うようにプログラムしたアドバンスト ケムテク AC
T200ペプチドシンセサイザーの反応容器の中に入れる：
（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中33％トリフ
ルオロ酢酸（各々１分及び25分間、２度）；（ｃ）塩化
メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；及
び（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

中和した樹脂を、塩化メチレン中でBoc−Ｄ−フェニ
ルアラニン及びジイソプロピルカルボジイミド（各々1.
5mモル）と共に１時間攪拌し、生成したアミノ酸樹脂
を、次いで上記の洗浄プログラムで工程（ａ）〜（ｇ）
に循環させる。次いで、Boc基をTFA処理によって取り去
る。フェーレンツ及びカストロ（１）の方法によって製
造したBoc−ロイシンアルデヒド（1.25mモル）を乾燥DM
F5mlに溶解し、樹脂TFA塩懸濁液に加えた後に、ナトリ
ウムシアノボロヒドリド（２、３）100mg（2mモル）を
加える。１時間攪拌した後に、樹脂混合物はニンヒドリ
ン反応（１分）に陰性であることが判明し、遊離アミノ
基の完全な誘導体合成を示す。

次いで、下記のアミノ酸（1.5mモル）を同じ手順によ
って逐次に結合させる:Boc−His（ベンジルオキシカル
ボニル）、Boc−Gly、Boc−Val、Boc−Ala、Boc−Trp、
Boc−Gln（ヒドロキシベンゾトリアゾール１当量の存在
において結合させる）、Boc−Ｄ−Phe（ヒドロキシベン
ゾトリアゾール１当量の存在において結合させる）。ペ
プチド樹脂は、乾燥した後に、重さ1.93gであった。

樹脂（1.93g、0.5mモル）に、アニソール（5ml）及び
無水弗化水素（35ml）を０℃で混合し、かつ45分間攪拌
する。過剰の弗化水素を乾燥窒素流下で急速に蒸発さ
せ、遊離ペプチドを沈殿させかつエーテルで洗浄する。
粗ペプチドを2M酢酸の最少容積に溶解し、セファデクス
Ｇ−25のカラム（2.5×100mm）で溶離する。次いで、紫
外線吸収及び薄層クロマトグラフィーによる主成分を含
有するフラクションをプールし、蒸発させて少容積に
し、ビダク オクタデシルシラン（10−15μＭ）のカラ
ム（2.5×50cm）に掛ける。これを、水中0.1％トリフル
オロ酢酸における15〜45％アセトニトリルの線状勾配で
溶離する。フラクションを薄層クロマトグラフィー及び
分析用高性能液体クロマトグラフィーによって調べかつ
プールして最大純度にする。水から溶液を繰り返し凍結
乾燥させて白色のふわふわした粉末としての生成物120m
gを得る。

生成物はhplc及びtlcによって均質であることが判明
する。酸加水分解物のアミノ酸分析はオクタペプチドの
組成を確認する。LeuΨ［CH₂NH］ペプチド結合の存在
は、高速原子衝撃マススペクトロメトリーによって立証
される。

Ｄ−Phe¹−Des−Met⁹リトリンの合成 Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−NH₂の
固相合成は、下記の通りにして行った。

工程（１）：クロリドイオン形のベンズヒドリルアミ
ン−ポリスチレン樹脂（アドバンスト ケムテク、イン
コーポレイティド）（0.62g、0.25mモル）を，下記の反
応サイクルを行うようにプログラムしたACT200ペプチド
シンセサイザーの反応容器の中に入れる：（ａ）塩化メ
チレン；（ｂ）塩化メチレン中33％トリフルオロ酢酸
（各々１分及び25分間、２度）；（ｃ）塩化メチレン；
（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）クロロ
ホルム中10％トリエチルアミン。

中和した樹脂を、塩化メチレン中でBoc−ロイシン及
びジイソプロピルカルボジイミド（各々1.5mモル）と共
に１時間攪拌し、生成したアミノ酸樹脂を、次いで上記
の洗浄プログラムで工程（ａ）〜（ｇ）に循環させる。
次いで、下記のアミノ酸（1.5mモル）を同じ手順によっ
て逐次に結合させる:Boc−His（ベンジルオキシカルボ
ニル）、Boc−Gly、Boc−Val、Boc−Ala、Boc−Trp、Bo
c−Gln（ｐ−ニトロフェニルエステルの6M過剰として結
合させる）及びpGlu（ヒドロキシベンゾトリアゾールの
存在において結合させる）。ペプチド樹脂は、乾燥した
後に、重さ0.92gであった。

工程（２）：次いで、樹脂（0.92g）に、アニソール
（5ml）、ジチオトレイトール（200mg）及び無水弗化水
素（35ml）を０℃で混合し、かつ45分間攪拌する。過剰
の弗化水素を乾燥窒素流下で急速に蒸発させ、遊離ペプ
チドを沈殿させかつエーテルで洗浄する。粗ペプチドを
2M酢酸の最少容積に溶解し、セファデクスＧ−25のカラ
ム（2.5×100mm）で溶離する。次いで、紫外線吸収及び
薄層クロマトグラフィーによる主成分を含有するフラク
ションをプールし、蒸発させて少容積にし、ビダク オ
クタデシルシラン（10−15マイクロＭ）のカラム（2.5
×50cm）に掛ける。カラムを、水中0.1％トリフルオロ
酢酸における０〜30％アセトニトリルの線状勾配で溶離
する。フラクションを薄層クロマトグラフィーによって
調べかつプールして最大純度にする。水から溶液を繰り
返し凍結乾燥させて白色のふわふわした粉末を得る；こ
の生成物はhplc及びtlcによって均質であることが判明
する。酸加水分解物のアミノ酸分析はペプチドの組成を
確認する。

Ｄ−Nal−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−NH₂
の合成は、上記と同じ手順（工程（１）においてベンズ
ヒドリルアミン樹脂0.62g、0.25mモル、及び工程（２）
において0.92g）を用いて達成された。

Ｎ−アセチル−Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−
His−Leu−NH₂の合成は、上記と同じ手順を用い、工程
（１）においてベンズヒドリルアミン樹脂0.62g（0.25m
モル）を用い、工程（２）において樹脂0.92gにアニソ
ールを混合し、但し、最終のBoc基を取り去りかつ樹脂
を塩化メチレン中の無水酢酸でアセチル化して、達成さ
れた。

Sta⁸−Des−Met⁹リトリンの合成 スタチン、AHPPA、或はACHPA残基を、ペプチド（ペプ
チドはペプチド結合のみを含有する）のいずれか２つの
アミノ酸に変えて置換することができる。例えば、sta⁸
−des−Met⁹リトリンを、初めにスタチンを樹脂に結合
させ、次いで続けてBoc−His（ベンジルオキシカルボニ
ル）の添加を行うことによって、同様の様式で調製し
た。スタチン或はBoc−スタチンは下記の方法に従って
合成することができる：リッチ（Rich）等、1978、J.Or
ganic Chem.43、3624;及びリッチ等、1980、J.Med.Che
m,23、27。AHPPA及びACHPAは下記の方法に従って合成す
ることができる：ヒューイ（Hui）等、1987、J.Med.Che
m.30、1287;シューダ（Schuda）等、1988、J.Org.Chem.
53、873;及びリッチ等、1988、J.Org.Chem.53、869。

ペプチドBIM−26120、pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gl
y−His−Sta−NH₂の固相合成は、下記の手順（初めにア
ルファ−ｔ−ブトキシカルボニルスタチン（リッチ等、
J.Org.Chem.1978、43、3624の手順によって調製）をメ
チルベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂に結合さ
せる）を用いることによって達成された。アセチル化し
た後に、中間体ｐ−Glu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−Hi
s（ベンジルオキシカルボニル）−Sta−メチルベンズヒ
ドリルアミン樹脂が作られる。この調製について用いた
合成手順を詳細に下記する。： 1.アルファ−ｔ−ブトキシカルボニルスタチンのメチル
ベンズヒドリルアミン樹脂への加入。

クロリドイオン形のベンズヒドリルアミン−ポリスチ
レン樹脂（ベガ バイオケミカルス、インコーポレイテ
ィド）（1.0g、0.73mモル）を、ベガ250cカプラ−ペプ
チドシンセサイザーの反応容器の中に入れる。シンセサ
イザーは下記の反応を行うようにプログラムした：
（ａ）塩化メチレン；（ｂ）クロロホルム中10％トリエ
チルアミン；（ｃ）塩化メチレン；及び（ｄ）ジメチル
ホルムアミド。

中和した樹脂に、アルファ−ｔ−ブトキシカルボニル
スタチン（1.46mモル）、ジイソプロピルカルボジイミ
ド（2mモル）及びヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
（1.46mモル）をジメチルホルムアミド中で０℃におい
て１時間反応させて作った予備形成した活性エステルを
18時間混合する。生成したアミノ酸樹脂を、シンセサイ
ザーにおいてジメチルホルムアミド、次いで塩化メチレ
ンで洗浄する。樹脂混合物は、この点において、カイザ
ーニンヒドリン試験（５分）によって、樹脂へのスタチ
ン加入レベル84％を有するのが認められた。

アセチル化は、アミノ酸樹脂に、塩化メチレン中でＮ
−アセチルイミダゾール（5mモル）を15分間混合するこ
とによって行った。樹脂の遊離アミノ基の94〜99％レベ
ルへの誘導化は、カイザーニンヒドリン試験（５分）に
よって示された。次いで、Boc−スタチン−樹脂を塩化
メチレンで洗浄する。

2.残留アミノ酸のカップリング。

ペプチドシンセサイザーを下記の反応サイクルを行う
ようにプログラムする：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩
化メチレン中33％トリフルオロ酢酸（TFA）；（各々５
分及び25分間、２度）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）イ
ソプロピルアルコール；（ｅ）クロロホルム中10％トリ
エチルアミン；及び（ｆ）塩化メチレン。

次いで、下記のアミノ酸（2.19mモル）を、ジイソプ
ロピルカルボジイミド（4mモル）単独或はジイソプロピ
ルカルボジイミド（4mモル）＋ヒドロキシベンゾトリア
ゾール水和物（1.46或は0.73mモル）によって逐次に結
合させ、生成したペプチド樹脂を、シンセサイザーにお
いてジメチルホルムアミド、次いで塩化メチレンで洗浄
し、次いで、洗浄及び脱ブロッキング工程（ａ）〜
（ｆ）に上述した手順で循環させる。

Boc−His（ベンジルオキシカルボニル）（ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール２当量の存在において結合させ）;B
oc−Gly;Boc−Val;Boc−Ala及びBoc−Trp（ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール水和物１当量と０℃において１時間
反応させて作った予備形成したヒドロキシベンゾトリア
ゾール活性エステルとして結合させる）;Boc−−Gln及
びpGlu（また、ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物１
当量と０℃において１時間反応させて作ったヒドロキシ
ベンゾトリアゾールの予備形成した活性エステルとして
結合させる）。完了したペプチド樹脂を、次いでメタノ
ールで洗浄しかつ風乾する。

上述したペプチド樹脂（1.60g、0.73mモル）に、アニ
ソール（2.5mL）、ジチオエリトレイトール（50mg）及
び無水弗化水素（30mL）を０℃で１時間混合する。過剰
の弗化水素を乾燥窒素流下で急速に蒸発させ、遊離ペプ
チドを沈殿させかつエーテルで洗浄する。粗ペプチドを
1M酢酸mLに溶解し、次いで、溶液を減圧下で蒸発させ
る。粗ペプチドをメタノール／水1/1の最少容積に溶解
しかつ酢酸エチル10容積で粉砕する。

粉砕したペプチドを、オクタデシルシラン−シリカ
（ワットマンPartisil 10 ODS−2 M 9）のカラム（内直
径9.4mm×50cm）に掛ける。ペプチドを、水中0.1％トリ
フルオロ酢酸における0.1％トリフルオロ酢酸／アセト
ニトリル20/80 20〜80％の線状勾配で溶離する。フラク
ションをTLC及び分析用高性能液体クロマトグラフィー
（HPLC）によって調べかつプールして最大純度にする。
水から溶液を繰り返し凍結乾燥させて白色のふわふわし
た粉末としての生成物77mgを得る。

Ｄ−Cpa¹、β−leu⁸、desMet⁹リトリンを含む他の化
合物は、上記の通りにして調製しかつ下記の試験プログ
ラムで作用薬或は拮抗薬としての有効性を試験すること
ができる。

フェース１−ペプチド刺激された3T3の［³H］チミジン
取込みアッセイ 細胞培養 Swiss3T3細胞のストック培養を、10％牛胎児
血清を補給したダルベッコの改質イーグル培地（DMEM）
中で、37℃の10％CO₂/90％空気の加湿した雰囲気におい
て増殖させる。実験用に、細胞を24ウエルクラスタート
レイに接種し、培地を最後に変えた後４日して用いる。
細胞は、チミジン取込みアッセイの24時間前に、血清フ
リーのDMEMに変えることによって、細胞サイクルのG1/G
0フェースにおいて停止する。

DNA合成のアッセイ 細胞をDMEM（−血清）の1mlアリコ
ートで２回洗浄し、次いで下記でインキュベートする:D
MEM（−血清）、0.5μＭ［メチル−³H］チミジン（20Ci
/mモル、ニューイングランドニュークリア）、ボンベシ
ン（3nM）及び初期に最終容積1.0ml中の４つの濃度の試
験化合物（１、10、100、1000nM）。37℃において28時
間した後に、酸不溶性プールへの［メチル−³H］チミジ
ン加入を下記の通りにしてアッセイする。細胞をアイス
コールド0.9％NaCl（1mlアリコート）で２回洗浄し、か
つ５％トリクロロ酢酸（TCA）で30分（４℃）インキュ
ベートすることによって、酸可溶性放射能を除く。次い
で、培養を95％エタノールで１回（1ml）洗浄し、0.1N
NaOHで30分インキュベート（1ml）することによって可
溶性にする。可溶性にした物質を、ScintA（Packard）1
0mlを収容するバイアルに移し、液体シンチレーション
スペクトロメトリーによって放射能を求める。

フェース２−ボンベシン刺激された小細胞癌（SCLC）の
［³H］チミジン取込みアッセイ 細胞培養 ヒト細胞癌細胞ライン（NCI−H69）（アメリ
カン タイプ カルチャー アソーシエーションから得
られる）の培養を、10％牛胎児血清を補給したRPMI1640
培地中に、37℃の10％CO₂/90％空気において維持する。
アッセイの24時間前に、細胞を血清フリーの培地で洗浄
し、24ウェルクラスタートレイに接種する。

DNA合成のアッセイ ボンベシン（1nM）、0.5μＭ［メ
チル−³H］チミジン（20Ci/mモル、ニューイングランド
ニュークリア）、及び４つの濃度の試験化合物（１、1
0、100、1000nM）を培養に加えて最終容積0.5mlにす
る。細胞を37℃で28時間インキュベートした後に、GF/B
グラスファイバーフィルターに捕集し、DNAをアイスコ
ールドTCAで沈殿させる。DNAの酸不溶性フラクションへ
の［³H］チミジン加入は、液体シンチレーションスペク
トロメトリーによって求める。

フェース３−ペプチド誘導化膵炎 雄のスプラグ−ドーリーラット（250g）をこれらの実
験用に用いる。ボンベシン注射15分前に、試験化合物或
は0.9％NaClを皮下投与する。ボンベシン注射は、投与
量10μg/kgで皮下に与え、血液サンプルを、１時間30
分、３時間及び６時間において得る。プラズマアミラー
ゼ濃度を、Pantrakアミラーゼ試験によって求める。

フェース４−ボンベシンレセプタに結合する［¹²⁵I］ガ
ストリン放出ペプチド（GRP）のインビトロ抑制 種々の組織（ラット脳、ラット膵臓、ラット下垂体前
葉製剤、SCLC、3T3細胞）からの膜を、0.1％ウシ血清ア
ルブミン及び0.1mg/mlバシトラシンを含有する50mMトリ
スHCl中で均質化した後に、フレッシュ緩衝液に中間再
懸濁して２回遠心分離（39,000×ｇ×15分、４℃）する
ことによって調製する。アッセイするために、アリコー
ト（0.8ml）を、0.5nM［¹²⁵I］GRP（2000Ci/mモル、ア
マーシャム コーポレーション）及び最終容積0.5ml中
の種々の濃度の試験化合物でインキュベートする。４℃
において30分インキュベートした後に、0.3％水性ポリ
エチレンイミンに浸漬しておいて非特異性結合のレベル
を減少させておいたワットマンGF/Cフィルターに通して
急速ろ過することによって、結合性反応を停止させる。
フィルター及びチューブをアイスコールド緩衝液の4ml
アリコートで３回洗浄し、フィルターに捕捉された放射
能をガンマスペクトロメトリーでカウントする。特異性
結合は、結合した全［¹²⁵I］GRP−1000nMボンベシンの
存在において結合したものと定義される。

フェース５−ガストリン放出の抑制 麻酔したラットの胃に、幽門カニューレ挿入によっ
て、15分の期間にわたって捕集したサリーンを満たし、
試験ペプチドを大腿静脈の中に０〜150分の期間注入す
る。

フェース６−インビトロ抗腫瘍活性 各々の動物の右側腹部に、５つの融合性75cm²組織培
養フラスコの相当物を移植して、NCI−H69小細胞肺癌細
胞をインビトロ培養から移植した。インビトロNCI−H69
細胞は細胞集合体の懸濁として増殖する。従って、細胞
凝集を物理的或は化学的手段によって分離させようと試
みなかった。腫瘍寸法は、２つの直径の平均、すなわ
ち、（長さ及び幅/2）mmとして計算した。

試験ペプチドのアッセイの結果 ボンベシン或はGRPであって、各々は非ペプチド結合
或はスタチン、AHPPA,或はACHPA残基を含有するものの
多数の類似物を、合成しかつ上述したフェース１−６ア
ッセイの内の一つ或はそれ以上で試験することができ
る。フェース１及び２試験の結果を本明細書に添付する
表１に挙げる。表１は、非ペプチド類似物についての式
及び3T3線維芽細胞ボンベシンレセプタに結合した［¹²⁵
I］GRPのインビトロ抑制の結果、並びに培養された3T3
細胞によるボンベシン刺激された［³H］チミジン取込み
を示す。（3T3GRPレセプタ及びチミジン取込みデータは
IC50（nM）で表わす。） 表１は、また、他の一つの天然産ペプチドであるニュ
ーロメジンＣ（それのＣ−末端の７つのアミノ酸はボン
ベシン及びGRPのアミノ酸と同様である）の非ペプチド
含有類似物についての結果を示す。（表１において、
「リトリン」は９残分ペプチド類似物或はその誘導体を
示し、「ニューロメジンＣ」は10残分ペプチド類似物或
は誘導体を示す。） 表１において、非ペプチド結合の位置は記号Ψ［CH₂N
H］の位置によって示す。すなわち、Ψ［CH₂NH］は常
に、そのペプチドにおいて、非ペプチド結合によってＮ
−末端のアミノ酸に結合されるアミノ酸の前に示す。ア
ミノ酸が「構造」で特定されない場合、非ペプチド結合
は後記として挙げる数によって表わされる２つのペプチ
ドを結合する。

表１において、リトリン類似物における非ペプチド結
合の好ましい配置はA⁸−A⁹位であるのを認めることがで
きる。最も活性な類似物（低GRPレセプタIC50値で示す
通りである）の内の２つはBIM−26100（Phe⁸Ψ［CH₂N
H］Leu⁹）及びBIM−26101（Leu⁸Ψ［CH₂NH］Leu⁹）であ
る。

加えて、表１に示す通りに、BIM−26113（Ｄ−Phe¹、
Leu⁸Ψ［CH₂NH］Leu⁹）及びBIM−26114（Ｄ−Nal¹、Leu
⁸Ψ［CH₂NH］Leu⁹）は、3T3GRPレセプタ結合及びチミジ
ン取込みアッセイにおいて活性である。最も顕著には、
疎水性相互作用を形成することができるアミノ及びカル
ボキシ末端芳香族残基を含有するBIM−26136（Ｄ−Na
l¹、Leu⁸Ψ［CH₂NH］Leu⁹）は、最も効力のある類似物
である。最後に、スタチン或はβ−ロイシンがリトリン
のA⁸及びA⁹残基に代わる場合、生成する類似物BIM−261
20及びBIM−26182もまた効力のある拮抗薬である。

表１は、また、A⁹−A¹⁰残基の間に非ペプチド結合を
含有するニューロメジンＣ類似物、例えば、BIM−2609
2、26095、26106及び26107が、3T3GRPレセプタ及びチミ
ジン取込みアッセイにおいて試験する際の拮抗薬になる
ことを示す。

表１は、また、ニューロメジンＣの類似物、例えば、
BIM−26108についてのネガティブな結果を挙げる。この
ように、本明細書中に挙げる非ペプチド配置ガイドライ
ンは、有用な拮抗薬を選ぶために上述したルーチンアッ
セイに関して用いるべきである。

ボンベシン及びボンベシン類似物は、インターロイキ
ン−２（IL−２）の作用を抑制するのが認められた（Fi
nk等、1988、Klin、Wochenschr、66、Suppl.13、27
3）。IL−２はＴリンパ球を増殖させるので、リトリン
拮抗薬はボンベシン或はその類似物のIL−２への抑制作
用を妨げることが可能である。LI−２刺激されたリンパ
球は、小細胞肺癌細胞をインビトロで有効に崩壊するこ
とができる。ボンベシン拮抗薬は腫瘍性組織に対して直
接の反増殖性作用を有するが、また、小細胞肺癌につい
て崩壊活性を有するリンパ球の増殖に有利になり得る。

これらの観察は、本発明者等がフェース６に記載する
SCLC腫瘍細胞ラインのインビボ増殖に対するBIM−26100
の作用を評価するのを促した。５〜６週令の20の胸腺欠
損の雌に、０日にNCI−H69ヒトSCLCを移植し、個々に識
別し、次いで無作為化して下記のビヒクル対照及び試験
グループにした： （s.c.＝皮下;inj.＝注射した;b.i.d.＝１日２回;QDI−
28＝１−28日に毎日治療） NCI−H69異種移植の成長及びボンベシン拮抗薬BIM−2
6100 （pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly（His−PheΨ［CH₂N
H］Leu−NH₂ の腫瘍成長抑制活性を、第１図に腫瘍成長カーブとし
て、かつ表IIに相対的な腫瘍寸法として示す。BIM−261
00を腫瘍の回りに皮下注入として投与して、腫瘍生長を
相当に抑制した。BIM−26100の抗腫瘍活性の有効性は、
NCI−H69腫瘍細胞の大きな接種物（すなわち、動物当り
５つの融合性の75cm²細胞培養フラスコの相当物）及び
凝集した細胞の状態を見れば、明らかである。融合フラ
スコにおいて、NCI−H69凝集は肉眼で見ることができか
つ同時に転移性腫瘍コロニーに類似している。かかる多
くの腫瘍コロニーが動物当り移植された。BIM−26100の
投与量は、化合物の入手可能性に基ずいて任意に選択し
たものであり、最適なものではない。治療中の体重増加
（−腫瘍重量）によって示される通りに（表III）,BIM
−26100を一層多い投与量で投与してよい。これは、BIM
−26100は局部的或は全身的毒性が全く無くかつ抗腫瘍
作用を有する抗成長因子として治療上有用であることを
示す。

第３図はボンベシン拮抗薬 の、ラットにおけるボンベシン刺激されたアミラーゼ分
泌に与える効果を示す。結果は、この類似物が効力のあ
る拮抗薬であることを示す。類似物5nMは、巨剤注入し
た後150分間、ボンベシン0.5nMによって刺激されたアミ
ラーゼの分泌を抑制することができる。

用途 発明のペプチドは、動物、特にヒトに、従来の様式の
内の一つで（例えば、経口で、腸管外に、経皮的に、或
は軽粘膜的に）、生分解性の生適合し得るポリマーを用
いた持続される放出製剤で、或はミセル、ゲル及びリポ
ソームを用いたオンサイト送達によって（例えば、肺へ
の抗癌ボンベシンの場合）、投与することができる。

発明のボンベシン拮抗薬は、ボンベシン放出物質がオ
ートクリン或はパラクリン有糸***性剤として作用する
全ての形の癌、特に小細胞肺癌を治療するのに適してい
る。また、ペプチドは、胃酸分泌及びGI道の運動性障害
の抑制、外分泌膵臓腺癌の症状軽減及び／又は治療、並
びに悪液質患者の食欲回復に用いることができる。ペプ
チドはヒト患者に対し、投与量0.5μg/kg/日〜5mg/kg/
日で投与することができる。いくつかの形の癌、例えば
小細胞肺癌の場合、病気を治す治療のための好ましい投
与量は250mg/患者／日である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 37/02 38/04 37/24 38/22 37/43 (31)優先権主張番号 ３１７，９４１ (32)優先日 1989年３月２日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ３７６，５５５ (32)優先日 1989年７月７日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ３９７，１６９ (32)優先日 1989年８月21日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 モロー，ジャックピエール アメリカ合衆国 01568 マサチューセ ッツ，アプトン，ウェストボロ ストリ ート 159 (72)発明者 テイラー，ジョン イー. アメリカ合衆国 01568 マサチューセ ッツ，アプトン，フィスク ヒル ロー ド 74 (72)発明者 キム，スン ヒュク アメリカ合衆国 02167 マサチューセ ッツ，チェスナット ヒル，ホイットニ ー ストリート 20 (56)参考文献 特表 平２−502016（ＪＰ，Ａ) 米国特許4331611（ＵＳ，Ａ) 米国特許4207311（ＵＳ，Ａ) 米国特許4613586（ＵＳ，Ａ) Ｃｏｙ，Ｄ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂ ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｊ，15，Ａｐｌ. 1988，Ｖｏｌ．263，Ｎｏ．11，ｐ5056 −5060 Ｗｏｌｌ，Ｐ．Ｊ，ｅｔ．ａｌ．，Ｂ ｉｌｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ ｓ．Ｃｏｍｍ．，30． Ａｕｇ．1988, Ｖｏｌ．155，Ｎｏ．１，Ｐ359−365 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07K A61K ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】９個〜10個のアミノ酸残基よりなる治療用
   ペプチドであって、次式： ｛式中 A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または削除され、 A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal、Ｄ−Cp
   aまたはＤ−Asn、 A²＝Gln、His、ｌ−メチル−His又は３−メチル−His、 A⁴＝Ala、 A⁵＝Val、 A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−PheまたはＤ−Ala、 A⁷＝His、 但しA⁰の存在時、A¹はpGluではあり得ず、A⁰が削除され
   且つA¹がpGluであるとき、R₁はＨで、R₂はpGluのイミン
   環を形成するGluの部分でなければならず、更にＷは次
   式： ［式中R₄はCH₂−NHであり、Z₁及びZ₂の各々は個々にア
   ミノ酸Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、Asn、Gl
   u、Gln、β−Nal、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、C
   l、Br、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Cys、Met、Pro、H
   yPro、シクロヘキシル−Ala、またはシクロヘキシルメ
   チルであり、但しR₄がCH₂−NHであり且つZ₂がアミノ酸G
   ly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、Asn、Glu、Gln、
   ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、ま
   たはCH₃）、Trp、Cys、Met、Pro、HyProまたはシクロヘ
   キシルメチルのいずれか一つを示す基であるとき、Z₁は
   アミノ酸Ser、Asp、Glu、Cys、Pro、HyProまたはシクロ
   ヘキシルメチルのいずれか一つを示す基であり、またR₄
   がCH₂−NHであり且つZ₁がアミノ酸Gly、Ala、Val、Le
   u、Ile、Ser、Asp、Asn、Glu、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここ
   でＸ＝Ｈ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、C
   ys、Met、ProまたはHyProのいずれか一つを示す基であ
   るとき、Z₂はアミノ酸Ser、Asp、Glu、Cys、Pro、HyPro
   またはシクロヘキシルメチルのいずれか一つを示す基で
   あり、ＶはOR₅またはNR₇−R₆（ここでR₈、R₅、R₆及びR₇
   の各々は個々にＨ、低級アルキル、低級フェニルアルキ
   ルまたは低級ナフチルアルキルである）］であり得、但
   しいずれかの不整炭素原子はＲ、Ｓまたはラセミ混合物
   であり得、更にまた、R₁及びR₂の各々は個々にＨ、C
   _1-12アルキル、C_7-10フェニルアルキル、COE₁（ここでE
   ₁はC_1-20アルキル、C_3-20アルケニル、C_3-20アルキニ
   ル、フェニル、ナフチルまたはC_7-10フェニルアルキル
   である）または低級アシルであり、R₁及びR₂はペプチド
   のＮ−末端アミノ酸に結合し、更にまた、R₁ないしR₂の
   一方がCOE₁であるとき他方はＨでなければならず、更
   に、Z₁がシクロヘキシルメチルであるか又はLeu若しく
   はPheを示す基であり、或はZ₂がMet、LeuまたはPheを示
   す基である｝を有する治療用ペプチド。
2. 【請求項２】A¹がＤ−β−Nalであり、Z₁及びZ₂の各々
   が個々にLeuまたはPheである、請求項１に記載の治療用
   ペプチド。
3. 【請求項３】式： を有する請求項２に記載の治療用ペプチド。
4. 【請求項４】式： を有する請求項２に記載の治療用ペプチド。
5. 【請求項５】Z₂に結合した炭素原子がＲ配置のものであ
   る、請求項１に記載の治療用ペプチド。
6. 【請求項６】式： を有する請求項５に記載の治療用ペプチド。
7. 【請求項７】A⁰またはA¹がＤアミノ酸であり、ＶがOR₄
   である、請求項１に記載の治療用ペプチド。