JP3514754B2

JP3514754B2 - 肝臓癌の治療

Info

Publication number: JP3514754B2
Application number: JP51116992A
Authority: JP
Inventors: イーボードン、アーサー; エイチコイ、デビッド; ヒュクキム、スン; モロー、ジャック−ピエール
Original assignee: ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス; アドミニストレイターズオブザトュランエデュケーショナルファンド
Priority date: 1991-05-10
Filing date: 1992-05-11
Publication date: 2004-03-31
Anticipated expiration: 2019-03-31
Also published as: JP2004002331A; DK0588873T3; JPH06507633A; ATE149840T1; IE921508A1; EP0588873B1; GR3023645T3; DE69218200T2; HK1006947A1; EP0588873A4; EP0588873A1; DE69218200D1; US6083915A; WO1992020363A1; ES2101100T3; CA2109206A1

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の背景］本発明は、肝癌すなわち肝臓癌の治療に関する。

【０００２】両生動物のペプチドボンベシン（bombesin）、pGlu
−Gln−Arg−Leu−Gly−Asn−Gln−Trp−Ala−Val−Gly
−His−Leu−Met−NH₂（アナスタシ（Anastasi）ら、エ
クスペリエンティア（Experientia）27巻、166〜167頁
（1971））は、哺乳動物のガストリン放出ペプチド（GR
P）、たとえばブタGRP、Ala−Pro−Val−Ser−Val−Gly
−Gly−Gly−Thr−Val−Leu−Ala−Lys−Met−Tyr−Pro
−Arg−Gly−Asn−His−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu
−Met−NH₂（マクドナルド（McDonald）ら、バイオケミ
カルアンドバイオフィジカルリサーチコミュニ
ケーション（Biochem.Biophys.Res.Commun.）、90巻、2
27〜233頁（1979））およびヒトGRP、Val−Pro−Leu−P
ro−Ala−Gly−Gly−Gly−Thr−Val−Leu−Thr−Lys−M
et−Tyr−Pro−Arg−Gly−Asn−His−Trp−Ala−Val−G
ly−His−Leu−Met−NH₂に密接に関連している。

【０００３】ボンベシンは、小細胞肺癌（SCLC）を含む数多くのヒ
ト癌細胞系に対する成長因子であることが見い出され、
ヒト乳癌および前立腺癌中に検出されている（ヘイブマ
ン（Haveman）ら編、リーセントリザルツインキ
ャンサーリサーチ−ペプチドホルモンズインラ
ングキャンサー（Recent Results in Cancer Researc
h−Peptide Hormones in Lung Cancer）、スプリンガー
−バーグ（Springer−Verlag）、ニューヨーク（198
6））。これら多くの癌がGRPまたはボンベシンに関連性
のあるペプチドホルモンを分泌することが知られてい
る。その結果、ボンベシンに対するアンタゴニストが、
これらの癌の治療のための薬剤として提案されてきた。

【０００４】カチッタ（Cuttitta）らは、ボンベシンに対する特異
的なモノクローナル抗体が、ヌードマウスに異種移植し
たヒト小細胞肺癌細胞系の成長を生体内で（in vivo）
阻害することを立証した（カチッタら、キャンサーサ
ーベイ（Cancer Survey）４巻、707〜727頁（198
5））。ボンベシンの***効果に応答性のある3Tマウス
線維芽細胞においてザハリイ（Zachary）とローゼング
ルト（Rozengurt）は、サブスタンスＰアンタゴニス
ト（スパンチド（Spantide））がボンベシンのアンタゴ
ニストとして作用することを認めた（ザハリイら、プロ
シーディングオブナショナルアカデミーオブ
サイエンス（Proc.Natl.Acad.Sci.）（USA）、82巻7616
〜7620頁（1985））。ハインツ−エリアン（Heinz−Eri
an）らは、ボンベシンの12番目のHisをＤ−Pheに置換し
てモルモット膵臓由来の分散腺房（acini）におけるボ
ンベシンアンタゴニスト活性を観察した（ハインツ−
エリアンら、アメリカンジャーナルオブフィジオ
ロジイ（Am.J.of Physiol.）252巻、G439〜G442頁（198
7））。リビエル（Rivier）は、分子内ジスルフィド架
橋を組込んでボンベシンの生物活性を有するＣ−末端デ
カペプチドのコンホメーションの自在性を限定すること
を意図した研究を報告した；しかしながらビエルは前記
修飾をなしたボンベシン類似体は、アンタゴニスト活性
を何ら示さないと述べた（リビエルら、コンペティティ
ブアンタゴニスツオブペプチドホルモンズ（Co
mpetitive Antagonists of Peptide Hormones）、イン
ターナショナルシンポジウムオンボンベシン−ラ
イクペプチズインヘルスアンドディジーズ
（International Symposium on Bombesin−Like Peptid
es in Health and Disease）の抄録中、ローマ、イタリ
ア（1987年10月））。

【０００５】ボンベシンは、ホルモンの放出ならびに膵、胃、腸の
分泌および腸の運動の促進を含む、胃腸管に対する直接
および間接の効果のいずれをも示す。ボンベシンによっ
て放出されるガストリンおよびコレシストキニン（Chol
ecystokinin）（CCK）は、正常の胃腸粘膜の維持もさる
ことながら、正常および腫瘍の組織の増殖の増大におい
ても役割を果たすことが示されている。ヌードマウス内
へ異種移植したヒト結腸および胃癌の成長は、ガストリ
ン投与によって促進され、そののちセクレチンを添加す
ると阻害され（タナカ（Tanaka）ら、トーカクジャー
ナルオブエクスペリメンタルメディシン（Tokaku
J.Exp.Med.）148巻、459頁（1986））、さらにガスト
リンレセプターを有するMC−26マウス結腸癌の増殖は、
ペンタガストリンによって促進され（ウィンセット（Wi
nsett）ら、サージェリイ（Surgery）99巻、302頁（198
0））、ガストリンレセプターのアンタゴニストである
プログルミドによって阻害される（ビューシャンプ（Be
auchamp）ら、アニュアルサージェリイ（Ann.Surg.）
202巻、303頁（1985））。ボンベシンは、正常ホストの
膵臓の栄養剤として働くと同時に異種移植したヒト膵臓
腫瘍の組織の成長阻害剤としても働くことが見い出され
た（アレクサンダー（Alexander）ら、パンクレアス（P
ancreas）３巻247頁（1988））。

【０００６】一般的でない省略形：シクロヘキシル−Ala＝CHxAla＝シクロヘキシルアラニ
ン

【０００７】

【化１】

【０００８】 pGlu＝ピログルタミン酸

【０００９】

【化２】

【００１０】 Nle＝ノルロイシン

【００１１】

【化３】

【００１２】 Cpa＝パラ−クロロ−フェニルアラニン Hypro＝ヒドロキシプロリン β−Nal＝β−ナフチルアラニン Sar＝サルコシン F₅−Phe＝ペンタ−フルオロ−フェニルアラニン Sta（スタチン）＝（3S,4S）−４−アミノ−３−ヒドロ
キシ−６−メチルヘプタン酸であり化学構造は：

【００１３】

【化４】

【００１４】 AHPPA＝（3S,4S）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−
フェニルペンタン酸であり化学構造は：

【００１５】

【化５】

【００１６】 ACHPA＝（3S,4S）−４−アミノ−５−シクロヘキシル−
３−ヒドロキシペンタン酸であり、化学構造は：

【００１７】

【化６】

【００１８】Ｒ＝右（Ｄ）立体配置;S＝左（Ｌ）立体配置；ならびに
ラセミ体＝ＲとＳの等量混合体１−メチル−His;3−メチル−His＝ヒスチジンの１また
は３位で窒素原子にメチル（CH₃）基：

【００１９】

【化７】

【００２０】 Met−オキシド＝メチオニンオキシド

【００２１】

【化８】

【００２２】 α−アミノ酸の同定基とは（たとえばピログルタミン
酸のばあい、下記参照）、α−カルボニル炭素原子、α
−アミノ窒素原子、または水素原子以外の、不斉α−炭
素原子に結合した原子または原子の集団をいう。例示す
ると、アラニンの同定基はCH₃、バリンの同定基は（C
H₃）₂CH、リジンの同定基はH₃N⁺（CH₂）_４、そしてフェ
ニルアラニンの同定基は（C₆H₆）CH₂である。β−また
はγ−アミノ酸の同定基は、それぞれβ−またはγ−炭
素原子に結合した同様の原子または原子集団である。明
記していないばあいには、同定基は、α、β、またはγ
アミノ酸のものでありうる。ピログルタミン酸のばあ
い、同定基は−NH−CO−CH₂−CH₂−よりなる。

【００２３】［発明の概要］本発明は、哺乳動物被検体（subject）の肝癌、すな
わち肝臓の癌を、被検体に治療上有効な量のボンベシン
類似体を含有する組成物を投与することにより治療する
方法を特色とする。「ボンベシン類似体」という語を、
下に定義する。前記治療に用いられうる１つのクラスの
ボンベシン類似体は、全部で７から10までのあいだのア
ミノ酸残基を含むペプチドであって、かつ下記一般式を
有する：

【００２４】

【化９】

【００２５】（式中、 A⁰＝Gly、またはpGLu、Nle、α−アミノ酪酸、Ala、Va
l、Gln、Asn、Leu、Ile、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、
Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、CH₃）、Trp、β−Nal、Cysのい
ずれかのＤ−もしくはＬ−異性体、または欠失してい
る； A¹＝pGlu、Nle、α−アミノ酪酸、Ala、Val、Gln、As
n、Leu、Ile、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、B
r、NO₂、OH、またはCH₃）、Asp、Glu、F₅−Phe、Trp、
β−Nal、Cys、LysのいずれかのＤ−もしくはＬ−異性
体、または欠失している； A²＝Gly、またはpGlu、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Il
e、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、O
H、またはCH₃）、Trp、β−Nal、Asp、Glu、His、１−
メチル−His、３−メチル−His、Cys、Lysのいずれかの
Ｄ−もしくはＬ−異性体、または欠失している； A³＝ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、O
H、またはCH₃）、β−Nal、またはTrpのいずれかのＤ−
またはＬ−異性体； A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、Ile、Nle、α−ア
ミノ酪酸、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、N
O₂、OH、またはCH₃）、Trp、またはβ−Nal; A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、
NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Thr、またはβ−Nal; A⁶＝Sar、GlyまたはAla、Ｎ−メチル−Ala、Val、Gln、
Asn、Leu、Ile、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、
Br、NO₂、OH、またはCH₃）、Trp、Cys、β−Nalのいず
れかのＤ−異性体、または欠失している； A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−His、His、Lys、As
p、またはGlu; A⁸＝Leu、Ile、Val、Nle、α−アミノ酪酸、Trp、Thr、
β−Nal、Lys、Asp、Glu、またはCys; A⁹＝Met、Met−オキシド、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、NO₂、
OH、またはCH₃）、Trp、β−Nal、CHxAla、Cysのいずれ
かのＬ−異性体、または欠失している； R₁およびR₂はそれぞれ独立に、Ｈ、C_1-12のアルキル、C
_7-10のフェニルアルキル、COE₁（ここでE₁はC_1-12のア
ルキル、C_3-20のアルケニル、C_3-20のアルキニル、フェ
ニル、ナフチル、またはC_7-10のフェニルアルキル）、
またはC₁〜C₁₂のアシル、かつR₁およびR₂は、類似体の
Ｎ−末端アミノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合
しており；ただし、R₁またはR₂のうちの１つがCOE₁であ
るばあいには、いま１つはＨでなければならない；また
R₃はOH、NH₂、C_1-12のアルコキシ、C_7-10のフェニルア
ルコキシ、またはC_3-20のナフチルアルコキシであっ
て、類似体のＣ−末端アミノ酸残基のα−カルボニル炭
素に結合している；ただし、A⁰が存在するばあい、A¹はpGluであってはなら
ず;A⁰またはA¹が存在するばあい、A²はpGluであっては
ならない；さらにA⁰が欠失しておりかつA¹がpGluである
とき、R₁およびR₂のうちの１つはＨでなければならな
い；さらにA⁰が欠失していてA¹がpGluでないとき、A¹は
A⁹に結合しうる、またはA⁰およびA¹が欠失しており、A²
がpGluでないばあい、A²はA⁹に結合しうる、またはA⁰、
A¹およびA²が欠失しているばあい、A³はA⁹に結合しう
る；さらに両側の末端残基がそれぞれAspまたはGlu、お
よびLysでありえないばあい、AspまたはGluの側鎖カル
ボキシル基がアミド架橋を介してLysのε−アミノ基に
結合しうる；さらにA¹またはA²のいずれかがCysであり
うるばあい、A⁸またはA⁹のいずれかとジスルフィド架橋
を介して結合しうる、A⁸またはA⁹のいずれかがCysであ
りうるばあいA¹またはA²のいずれかにジスルフィド架橋
を介して結合しうる；そしてさらにA⁰およびA¹が欠失し
ていてA⁶がＤ−Alaであるばあい、A⁸−A⁹−R₃はLeu−Me
t−NH₂であってはならない）またはそれらの薬学上許容
しうる塩。

【００２６】この開示においては、アミノ酸配列の式はポリペプチ
ド鎖の慣習的な表記法に従って、Ｎ−末端が左、Ｃ−末
端が右になっている。また、アミノ酸残基が光学的に活
性なばあい、Ｄ−体が特に示されていなければ意味して
いるのはＬ−体の立体配置である。アミノ酸残基のあい
だの線は、アミノ酸をつなぐペプチド結合をあらわす。
COE₁は、

【００２７】

【化１０】

【００２８】をあらわす。

【００２９】前記の一般式（Ａ）の好適な化合物には： A⁰＝pGlu、Gly、Ｄ−Phe、または欠失している； A¹＝pGlu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal,D−Cpa、Ｄ
−Asn、Cys、または欠失している； A²＝pGlu、Asn、Gln、His、１−メチル−His、３−メチ
ル−His、Cys、または欠失している； A³＝Trp; A⁴＝Ala; A⁵＝Val; A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−Phe、またはＤ−Ala; A⁷＝His; A⁸＝Leu、またはCys; A⁹＝Met、Leu、Ile、Nle、Phe、またはCysのいずれかの
Ｌ−異性体であるものが含まれる。

【００３０】前記一般式（Ａ）の２つのとくに好適な２つの化合物
は：Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−N
H₂ （コード名BIM−26218）およびＤ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Leu−N
H₂ （コード名BIM−26187）である。

【００３１】本発明の肝癌治療法に適した、別のクラスのボンベシ
ン類似体は、全部で７から10までのあいだのアミノ酸残
基を含むペプチドであって、かつ下記一般式を有する：

【００３２】

【化１１】

【００３３】（式中、 A⁰＝pGlu、Gly、Nle、α−アミノ酪酸、またはAla、Va
l、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸ
はＦ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ、またはCH₃）、Trp、Cys、
もしくはβ−NalのいずれかのＤ−異性体、または欠失
している； A¹＝pGlu、Nle、α−アミノ酪酸のいずれかのＤ−もし
くはＬ−異性体、またはAla、Val、Gln、Asn、Leu、Il
e、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＦ、Cl、Br、NO₂、O
H、Ｈ、またはCH₃）、F₅−Phe、Trp、Cysもしくはβ−N
alのいずれかのＤ−異性体、または欠失している； A²＝pGlu、Gly、Ala、Val、Gln、Asn、Leu、Ile、Met、
ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＦ、Cl、Br、NO₂、OH、Ｈ、ま
たはCH₃）、Trp、Cys、β−Nal、His、１−メチル−Hi
s、または３−メチル−His; A⁴＝Ala、Val、Gln、Asn、Gly、Leu、Ile、Nle、α−ア
ミノ酪酸、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＦ、Cl、Br、
NO₂、OH、Ｈ、またはCH₃）、Trp、Cys、またはβ−Nal; A⁵＝Gln、Asn、Gly、Ala、Leu、Ile、Nle、α−アミノ
酪酸、Met、Val、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＦ、Cl、B
r、OH、Ｈ、またはCH₃）、Trp、Thr、またはβ−Nal; A⁶＝Sar、GlyまたはAla、Ｎ−メチル−Ala、Val、Gln、
Asn、Leu、Ile、Met、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＦ、C
l、Br、NO₂、OH、Ｈ、またはCH₃）、Trp、Cys、もしく
はβ−NalのいずれかのＤ−異性体； A⁷＝１−メチル−His、３−メチル−His、またはHis; R₁およびR₂はそれぞれ独立に、Ｈ、C_1-12のアルキル、C
_7-10のフェニルアルキル＼COE₁（ここでE₁はC_1-20のア
ルキル、C_3-20のアルケニル、C_3-20のアルキニル、フェ
ニル、ナフチル、またはC_1-10のフェニルアルキル）、
またはC₁〜₁₂のアシルであり、ただし、R₁またはR₂のう
ちの１つがCOE₁であるばあい、いま１つはＨでなければ
ならない；さらにR₁およびR₂は、類似体のＮ−末端アミ
ノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合している；Ｗは、A⁷のα−カルボニル炭素に結合しており、下記の
基のうちの１つである：

【００３４】

【化１２】

【００３５】（式中、R₃はCHR₂₀−（CH₂）_n1（ここでR₂₀はＨまたはO
Hのいずれか；かつn1は１か０のいずれか）、または欠
失している、またZ₁はGly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、
Asp、Asn、Glu、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、
Ｆ、Cl、Br、NO₂、OHまたはCH₃）、F₅−Phe、Trp、Cy
s、Met、Pro、HyPro、シクロヘキシル−Ala、またはβ
−Nalのアミノ酸のいずれかの同定基；さらにV₁はOR₄、
または

【００３６】

【化１３】

【００３７】のいずれかである、（ここでR₄はC_1-20のアルキル、C_3-20のアルケニル、C
_3-20のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはC_7-10
のフェニルアルキルのいずれかであって、R₅、およびR₆
はそれぞれ独立に、Ｈ、C_1-12のアルキル、C_7-10のフェ
ニルアルキル、低級アシル、または、

【００３８】

【化１４】

【００３９】（ここで、R₂₂はＨ、C_1-20のアルキル、C_7-10のフェニ
ルアルキル、または低級アシルのいずれかであり）;R₅
またはR₆のうちの１つが−NHR₂₂であれば、いま１つは
Ｈである））；

【００４０】

【化１５】

【００４１】（式中、R₅はCH₂−NH、CH₂−Ｓ、CH₂−Ｏ、CO−CH₂、CH
₂−CO、またはCH₂−CH₂であり、さらにZ₂およびZ₃はそ
れぞれ独立に、Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、A
sn、Glu、Gln、β−Nal、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、
Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、またはCH₃）、F₅−Phe、Trp、Cy
s、Met、Pro、HyPro、またはCHxAlaのアミノ酸のいずれ
かの同定基であり；さらにV₂はOR₆または

【００４２】

【化１６】

【００４３】のいずれかである、（ここでR₄、R₆、R₇、およびR₈はそれぞれ独立に、Ｈ、
低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフ
チルアルキルである））；

【００４４】

【化１７】

【００４５】（式中、Z₄はGly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Asp、As
n、Glu、β−Nal、Gln、ｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、
Ｆ、Cl、Br、NO₂、OH、またはCH₃）、F₅−Phe、Trp、Cy
s、Met、Pro、またはHyProのアミノ酸のいずれかの同定
基であり；さらにR₉、R₁₀、およびR₁₁はそれぞれ独立
に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または
低級ナフチルアルキル）；または

【００４６】

【化１８】

【００４７】（式中、R₁₂およびR₁₃はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アル
キル、低級フェニルアルキル、低級ナフチルアルキルで
ある）；ただし、A⁰が存在するばあい、A¹はpGluであってはなら
ない；さらにA⁰またはA¹が存在するばあい、A²はpGluで
あってはならない；さらにA⁰が欠失していてA¹がpGluで
あるばあい、R₁およびR₂のうちの１つはＨでなければな
らない；さらにR₁₂またはR₁₃のいずれかがＨでないばあ
い、A⁷はHis、A⁶はGly、A⁵はVal、A⁴はAla、A²はHisで
あり、またR₁またはR₂のいずれかがＨでないばあい、A¹
は欠失していてはならない；さらにまた、（Ｉ）から（IV）の基に関していずれの不斉炭素原子も
Ｒ、Ｓまたはラセミ混合体でありうる）またはそれらの
薬学上許容しうる塩。

【００４８】本発明に用いられる類似体は、前記一般式（Ｂ）中に
修飾の１つを有していてもよい：すなわち、生物学的に
活性な部位のアミノ酸残基と隣接したアミノ酸残基との
あいだのペプチド結合のかわりに、非ペプチド結合（ま
たは偽ペプチド結合）；または２つの天然アミノ酸残基
のかわりに合成アミノ酸、たとえばスタチン、AHPPA、
またはACHPA、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸残
基；またはＣ−末端アミノ酸残基を欠失させて、その時
点のＣ−末端基へ置換基を付加し、類似体が誘導される
前のペプチドの天然Ｎ−末端アミノ酸残基とは異なるＮ
−末端残基を存在させることのいずれかである。スタチ
ン、AHPPA、およびACHPAは前記のごとく定義した化学構
造を有する。

【００４９】非ペプチド結合とは、２つの残基のあいだの結合に関
与している炭素原子がカルボニル炭素からメチレン炭
素、すなわち、CH₂−NHに還元されている；かまたは、
それよりは好ましさが少ないが、CO−NHがCH₂−Ｓ、CH₂
−Ｏ、CH₂−CH₂、CH₂−CO、またはCO−CH₂のいずれかに
置換されていることを意味している。この開示中、−ψ
［CH₂NH］−の表記は、非ペプチドのCH₂−NH結合を示す
のに用いられている。

【００５０】非ペプチド結合の化学の詳細な議論は、コイ（Coy）
ら（1988）テトラヘドロン（Tetrahedron）44巻、３号8
35〜841頁、ツーウェ（Tourwe）（1985）、ヤンセン
キミカアクタ（Janssen Chim.Acta）３巻３〜15頁、1
7〜18頁、およびスパトラ（Spatola）（1983）ケミスト
リーアンドバイオケミストリーオブアミノア
シッズ、ペプチズ、アンドプロテインズ（Chemistry
and Biochemistry of Amino Acids,Peptides,and Prote
ins）掲載（ビイ、ウェインシュタイン（B.Weinstei
n）、編）、マーセルデッカー（Marcel Dekker）、ニ
ューヨークおよびバーゼル、267〜357頁に示され、すべ
てをここに参考文献としてあげる。カルボニル炭素をメ
チレン炭素へと還元するペプチド結合の還元法は、コイ
ら、米国特許出願出願番号第879,348号明細書に記載さ
れており、これもここに参考文献としてあげる。ここで
用いられる「ペプチド」の語は、伝統的なペプチド、お
よび前記非ペプチド結合を含むアミノ酸配列の両方をい
う。

【００５１】本発明に用いられる類似体を作るための、天然に生ず
るペプチドの修飾の１つは、前記一般式（Ｂ）における
アミノ末端位について記載したような、分子のアミノ末
端の修飾であり；たとえば、A⁰である、またはA⁰が欠失
しているばあいA¹である、またはA⁰およびA¹がいずれも
欠失しているばあいA²であるＮ−末端アミノ酸残基が、
芳香族Ｄ−異性体、またはアルキル化されたアミノ酸残
基であってもよい。

【００５２】一組の、一般式（Ｂ）の好適な化合物には： A⁰＝Gly、Ｄ−Phe、または欠失している； A¹＝ｐ−Glu、Ｄ−Phe、Ｄ−Ala、Ｄ−β−Nal＼Ｄ−Cp
a、またはＤ−Asn; A²＝Gln、His、１−メチル−His、３−メチル−His; A⁴＝Ala; A⁵＝Val; A⁶＝Sar、Gly、Ｄ−Phe、またはＤ−Ala; A⁷＝His; さらにここで、Ｗが（Ｉ）であってR₃がCH₂またはCH₂−
CH₂であるばあい、Z₁はLeuまたはPheの同定基であり;W
が（Ｉ）であってR₃がCHOH−CH₂であるばあい、Z₁はLe
u、CHxAla、またはPheの同定基であり、R₅およびR₆はそ
れぞれＨである；またＷが（Ｉ）であるばあい、V₁はNH
R₆であってR₆はNH₂である;Wが（II）であってR₅がCH₂−
NHであるばあい、Z₂およびZ₃はそれぞれ独立に、Leuま
たはPheの同定基である;Wが（III）であるばあい、Z₄は
Leuまたはｐ−Ｘ−Phe（ここでＸはＨ、Ｆ、Cl、Br、NO
₂、OHまたはCH₃）のいずれか１つの同定基である；さら
にR₉、R₁₀およびR₁₁はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキ
ル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキ
ルである；また、Ｗが（IV）のばあい、R₁₂およびR₁₃は
それぞれＨでありR₁およびR₂はそれぞれ独立にＨ、低級
アルキル、または低級アシルであるものが含まれる。

【００５３】この中のとくに好適な２つの化合物は：Ｄ−Cpa−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ［CH
₂NH］−Phe−NH₂ （コード名 BIM−26159）、およびＤ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ［CH
₂NH］−Cpa−NH₂ （コード名 BIM−26189）である。

【００５４】一般式（Ｂ）の好適な化合物の別の一組には、A⁰が欠
失し、A²がGlnであって、ＷはR₃が欠失し、V₁がR₄がC
_1-20のアルキル、C_3-20のアルケニル、C_3-20のアルキニ
ル、フェニル、ナフチルまたはC_7-10のフェニルアルキ
ルのいずれかであるようなOR₄である（Ｉ）であるもの
が含まれる。

【００５５】この中のとくに好適な２つの化合物は、Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Ｎ−メチル−Ｄ−Ala−
His−Leu−メチルエステル、およびＤ−F₅−Phe−Gln−
Trp−Ala−Val−Ｄ−Ala−His−Leu−メチルエステルである。

【００５６】前記の一般式（Ａ）および（Ｂ）中、R₁またはR₂のい
ずれかが脂肪族、芳香族、または親油性の基であるばあ
いに、生体内での活性は長時間持続させることができ、
本発明の合成物の標的組織への輸送は促進されうる。

【００５７】本発明の治療用組成物はさらに薬学上許容しうる担体
物質、たとえばマンニトール、ラクトース、炭酸マグネ
シウム、またはペプチドがそれとのミセルを形成しうる
リン脂質を含有することが好ましい。

【００５８】ボンベシン類似体のようなペプチドは酸性pHにおいて
安定であるが、塩基性条件および／または膵臓の酵素
（トリプシン／キモトリプシン）の存在下では速やかに
分解するばあいが通例である。したがって、経口投与の
際には、このような物質は膵臓の酵素および腸内環境
（pHおよび細菌）から保護される必要がある。さらにグ
ルコースのような共輸送作用物質が、経口の生物学的利
用率のために必要であるかもしれない。

【００５９】経口投与に好適な治療用組成物の例としては、丸剤、
錠剤、カプセル剤、または液剤（liquid）が含まれる。
組成物を被検体に経口投与するばあい、充分に長時間に
わたって被検体の胃の中でペプチドを分解から保護しう
る物質でペプチドを被覆することがとくに好ましい。こ
うすることで、すべてかまたはほとんどのペプチド分子
が、完全な形で小腸内に達し、吸収されるようになる。

【００６０】また、静脈内または皮下投与のような非経口的な経路
を介して被検体に投与すべく、たとえば液剤のような好
適な剤形に治療用組成物を調製することも可能である。
他の投与の経路としては、経皮的（たとえば、局所的−
浸透増強剤（penetration enhancer）を含むかまたは含
まないクリームを用いる、または電気浸透法（iontopho
retic）による）および経粘膜的（たとえば鼻、腟、頬
または肺の）があげられる。さらに、肝の潅流による腫
瘍部位へのターゲッティングデリバリーを行なうことも
できる。

【００６１】治療用組成物は筋肉内投与に適した生物分解性の徐放
性一般製剤の形とすることもできる。最高の効力のため
には、０次（zero order）放出であることがもっとも好
ましい。治療用組成物を投与するのにツィクロマット
（Zykromat）BT1ペリストールティックポンプ（フェー
リングラボラトリーズ（Ferring Laboratories）社
製、サファーン（Suffern）、ニューヨーク）のような
埋め込み可能なまたは外付けのポンプを用いることによ
って０次放出が達成しうる。

【００６２】「治療上有効な量」、「薬学的に許容しうる塩または
コンプレックス」および「薬学的に許容しうる担体」と
いう用語は、以下にそれぞれ定義する。

【００６３】本発明の他の特徴および利点は、好適な実施態様の以
下の記載ならびに請求の範囲により明らかとなるであろ
う。

【００６４】［好適な実施態様の詳細な説明］構造本発明に用いられる治療用組成物は、一般構造、すな
わち、「発明の概要」に前掲の一般式（Ａ）または
（Ｂ）を有する。それらはすべて７から10のアミノ酸残
基を含むボンベシン類似体である。ここで用いる「ボン
ベシン類似体」という語は、天然に生ずる、構造的に関
連性のあるペプチド、すなわち、ボンベシン、ニューロ
メジンＢ、ニューロメジンＣ、リトリン、およびGRPの
全配列またはそれらの一部の配列を示すペプチドの１つ
から誘導され、それらと類似の生物学的活性を有するペ
プチドをいう。これら天然に生ずるペプチドの関連する
アミノ酸配列を下に列挙する。：

【００６５】本発明に用いられる類似体は、（１）コイらの1990年
３月30日出願の米国特許出願出願番号第502,438号明細
書、これは1989年８月21日出願の米国特許出願出願番号
第397,169号の一部継続出願であり、これは1989年７月
７日出願の米国特許出願出願番号第376,555号、および1
989年８月16日出願の米国特許出願出願番号第394,727号
の一部継続出願であり、これらは両方とも1989年３月２
日出願の米国特許出願出願番号第317,941号の一部継続
出願であり、これは1988年12月９日出願の米国特許出願
出願番号第282,328号の一部継続出願であり、次いでこ
れは1988年10月14日出願の米国特許出願出願番号第257,
998号の一部継続出願であり、次いでこれは1988年９月2
3日出願の米国特許出願出願番号第248,771号明細書の一
部継続出願であって、次いでこれは、コイらの1988年６
月16日出願の米国特許出願出願番号第207,759号の一部
継続出願であり、これはさらにコイらの1988年６月８日
出願の米国特許出願出願番号第204,171号明細書の一部
継続出願であって、これは次いでコイらの1988年３月25
日出願の米国特許出願出願番号第173,311号の一部継続
出願であり、さらにこれはコイらの1987年９月24日出願
の米国特許出願出願番号第100,571号の一部継続出願で
ある；および（２）ボードン（Bogden）らの1990年５月
９日出願の米国特許出願出願番号第520,225号明細書、
次いでこれはボードンらの1989年11月21日出願の米国特
許出願出願番号第440,039号の一部継続出願である、に
記載されている。これらの出願はすべて同一の譲受人に
譲渡されており、ここでは参考文献としてあげる。

【００６６】ボンベシン類似体は、以下の文献にも記載されてい
る：ザハリイら、プロシーディングオブナショナル
アカデミーオブサイエンス82巻、7616頁（198
5）；ハイムブルック（Heimbrook）ら、「シンセティッ
クペプチズ：アプローチズトゥバイオロジカル
プロブレムズ（“Synthetic Peptides:Approaches to B
iological Problems"）、ユーシーエルエーシ
ンポジウムオンモレキュラーアンドセルラー
バイオロジー（UCLA Symposium on Mol.and Cell.Bio
l.）新版、86巻、タムアンドカイザー（Tam and Ka
iser）編；ハインツ−エリアンら、アメリカンジャー
ナルオブフィジオロジー、G439頁（1986）；マーチ
ネツ（Martinez）ら、ジャーナルオブメディカル
ケミストリー（J.Med.Chem.）、28巻、1874頁（198
5）；ガルゴスキー（Gargosky）ら、バイオケミカル
ジャーナル（Biochem.J.）、247巻、427頁（1987）；ド
ゥブリュール（Dubreuil）ら、ドラッグデザインア
ンドデリバリー（Drug Design and Delivery）、２
巻、49頁、ハーウッドアカデミックパブリシャーズ
（Harwood Academic Publishers）、GB（1987）；ヘイ
ッキラ（Heikkila）ら、ジャーナルオブバイオロジ
カルケミストリー（J.Biol.Chem.）、262巻、16456頁
（1987）；カラニカス（Caranikas）ら、ジャーナル
オブメディカルケミストリー、25巻、1313頁（198
2）；サイード（Saeed）ら、ペプチズ（Peptides）、10
巻、597頁（1989）；ロセル（Rosell）ら、トレンズ
インファーマコロジャルサイエンス（Trends in Ph
armacological Sciences）、３巻、211頁（1982）；ラ
ンドバーグ（Lundberg）ら、プロシーディングオブ
ナショナルアカデミーオブサイエンス、80巻、11
20頁（1983）；エングバーグ（Engberg）ら、ネイチャ
ー（Nature）、293巻、222頁（1984）；ミツラヒ（Mizr
ahi）ら、ヨーロピアンジャーナルオブファーマ
コロジー（Euro.J.Pharma.）、82巻、101頁（1982）；
リーンダー（Leander）ら、ネイチャー、294巻、467頁
（1981）；ウォル（Woll）ら、バイオケミカルバイオ
フィジカルリサーチコミュニケーション、155巻、3
59頁（1988）；リビエルら、バイオケミストリー（Bioc
hem.）、17巻、1766頁（1978）；カチッタら、キャンサ
ーサーベイズ（Cancer Surveys）、４巻、707頁（198
5）；アウメラス（Aumelas）ら、インターナショナル
ジャーナルオブペプチドリサーチ（Int.J.Peptid
e Res.）、30巻、596頁（1987）；これらもすべて、こ
こでは参考文献としてあげる。

【００６７】類似体は、薬学的に許容しうるうたとえば酸付加塩の
ような塩、または亜鉛、鉄などとの金属コンプレックス
のかたちで供給しうる。酸付加塩の具体例としては、酢
酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、
アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、酒
石酸、メタンスルホン酸またはトルエンスルホン酸のよ
うな有機酸との酸付加塩、タンニン酸またはカルボキシ
メチルセルロースのような重合酸との酸付加塩、ならび
に塩酸、臭酸、硫酸またはリン酸のような無機酸との酸
付加塩があげられる。

【００６８】類似体の合成ボンベシン類似体 pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ［CH₂
NH］−Leu−NH₂の合成は下記のとおりである。他のボン
ベシン類似体は、下記合成法を適切に修飾することによ
り調製した。

【００６９】第１段階は、以下のように中間体、pGlu−Gln−Trp−
Ala−Val−Gly−His（ベンジロキシカルボニル）−Leu
−ψ［CH₂NH］−Leu−ベンズヒドリルアミン樹脂を調製
することであった。

【００７０】塩素イオン型のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン
樹脂（ベガバイオケミカルズ（Vega Biochemicals）
社）（0.97g、0.5ミリモル）を、下記の反応サイクルを
行なうようにプログラムされたベックマン（Beckman）9
90Bペプチド合成機の反応容器中に入れた：（ａ）塩化
メチレン；（ｂ）塩化メチレン中33％トリフルオロ酢酸
（TFA）（２回、それぞれ１および25分間）；（ｃ）塩
化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；
および（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

【００７１】中和した樹脂をα−ｔ−ブトキシカルボニル（「Bo
c」）−Leuおよびジイソプロピルカルボジイミド（それ
ぞれ1.5ミリモル）とともに塩化メチレン中で１時間撹
拌し、そののちえられたアミノ酸樹脂を、前記洗浄プロ
グラムの段階（ａ）から（ｆ）までのサイクルにかけ
た。ファーレンツ（Fehrentz）およびカストロ（Castr
o）、シンセシス（Synthesis）、676頁（1983）の方法
により調製したBOC−Leuアルデヒド（1.25ミリモル）を
5mlの乾燥ジメチルホルムアミド（DMF）に溶解し、樹脂
TFA塩の懸濁液に添加し、次いで100mg（２ミリモル）の
シアノボロヒドリドナトリウムを添加した（ササキ（Sa
saki）およびコイ、ペプチズ８巻、119〜121頁（198
7）；コイら、同上）。１時間撹拌したのち、樹脂混合
物はニンヒドリン反応（１分）に対して陰性であること
が見い出され、遊離のアミノ基が完全に誘導化されてい
ることが示された。

【００７２】ついで下記のアミノ酸（1.5ミリモル）をジイソプロ
ピルカルボジイミド（1.5ミリモル）の存在下で引き続
き結合させ、さらにえられたアミノ酸樹脂を前記と同じ
方法の洗浄／脱ブロッキング段階（ａ）から（ｆ）まで
のサイクルにかけた： BOC−His（ベンジロキシカルボニル）、BOC−Gly（6M過
剰のｐ−ニトロフェニルエステルとして結合）、BOC−V
al、BOC−Ala、BOC−Trp、BOC−Gln（6M過剰のｐ−ニト
ロフェニルエステルとして結合）、およびpGlu。完成し
た樹脂はメタノールで洗浄し、風乾した。

【００７３】前記樹脂（1.6g、0.5ミリモル）をアニソール（5ml）
と無水フッ化水素（35ml）と０℃にて混合し、45分間撹
拌した。過剰のフッ化水素は、乾燥窒素流下で速やかに
蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄
した。粗ペプチドを、最少容量の2M酢酸中に溶解し、セ
ファデックスＧ−25（ファルマシアファインケミカ
ルズ（Pharmacia Fine Chemicals）社製）のカラム（2.
5×100mm）にて溶出した。ついで、UV吸収および薄層ク
ロマトグラフィー（TLC）によって主成分を含むとする
画分を集めて少量にまで蒸発させ、オクタデシルシラン
−シリカ（ワットマン（Whatman）LRP−１、15〜20μｍ
メッシュサイズ）のカラム（2.5×50cm）に付した。

【００７４】ペプチドは、０〜30％アセトニトリル（0.1％トリフ
ルオロ酢酸水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出した。画
分は、TLCおよび分析高速液体クロマトグラフィー（HPL
C）により調べて、最高の純度のものがえられるように
集めた。水から溶液をくり返し凍結乾燥して白い綿毛状
粉末として60mgの生成物をえた。

【００７５】 HPLCおよびTLCにより、生成物は均質であることがわ
かった。酸加水分解物のアミノ酸分析によって、ペプチ
ドの組成を確認した。Leu−ψ［CH₂NH］−Leu結合の存
在は、高速原子衝撃質量分析によって実証した。 pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Phe−ψ［CH₂N
H］−Leu−NH₂、pGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His
−Leu−ψ［CH₂NH］−Leu−NH₂、pGlu−Gln−Arg−Leu
−Gly−Asn−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−Ｄ−Phe−Leu
−Met−NH₂、pGlu−Gln−Arg−Leu−Gly−Asn−Gln−Tr
p−Ala−Val−Gly−Ｄ−Phe−Leu−Leu−NH₂、pGlu−Gl
n−Arg−Tyr−Gly−Asn−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−Ｄ
−Phe−Leu−Met−NH₂または他のペプチドは、前記の方
法を適切に変更することにより、同様に同程度の収率で
調製された。

【００７６】Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ
［CH₂NH］−Ｄ−Phe−NH₂の固相合成は、下記のように
行なった：まず、BOC−Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His
（トシル）−Leu−ψ［CH₂NH］−Ｄ−Phe−ベンズヒド
リルアミン樹脂を合成した。

【００７７】塩素イオン型のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン
樹脂（アドバンスドケムテック（Advanced ChemTec
h）社）（1.25g、0.5ミリモル）を、下記の反応サイク
ルを行なうようにプログラムされたアドバンスドケム
テックACT200ペプチド合成機の反応容器中に入れた：
（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中33％トリフ
ルオロ酢酸（２回、それぞれ１および25分間）；（ｃ）
塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレ
ン；（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

【００７８】中和した樹脂をBOC−Ｄ−フェニルアラニンおよびジ
イソプロピルカルボジイミド（それぞれ1.5ミリモル）
とともに塩化メチレン中で１時間撹拌し、そののちえら
れたアミノ酸樹脂を、前記洗浄プログラムの段階（ａ）
から（ｇ）までのサイクルにかけた。ついでTFA処理に
よってBOC基を除去した。ファーレンツおよびカストロ
の方法（同上）により調製したBOC−Leuアルデヒド（1.
25ミリモル）を5mlの乾燥DMF中に溶解して、樹脂TFA塩
の懸濁液に添加し、次に100mg（２ミリモル）のシアノ
ボロヒドリドナトリウムを添加した。１時間撹拌したの
ち、樹脂化合物はニンヒドリン反応（１分）に対して陰
性であることが見い出され、遊離のアミノ基が完全に誘
導化されていることが示された。

【００７９】ついで下記のアミノ酸（1.5ミリモル）を引き続き同
じ方法で結合させた:BOC−His（ベンジロキシカルボニ
ル）、BOC−Gly、BOC−Val、BOC−Ala、BOC−Trp、BOC
−Gln（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下
で結合）、BOC−Ｄ−Phe（１等量のヒドロキシベンゾト
リアゾール存在下で結合）。乾燥ののちペプチド樹脂は
1.93gの重量であった。

【００８０】樹脂（1.93g、0.5ミリモル）はアニソール（5ml）と
無水フッ化水素（35ml）と０℃にて混合し、45分間撹拌
した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発
させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄し
た。粗ペプチドを最少容量の2M酢酸中に溶解し、セファ
デックスＧ−25のカラム（2.5×100mm）にて溶出した。
ついでUV吸収およびTLCにより主成分を含むとする画分
を集めて少量にまで蒸発させ、バイダック（Vydac）オ
クタデシルシラン（10〜15μＭ）のカラム（2.5×50c
m）に付した。これを15〜45％アセトニトリル（0.1％ト
リフルオロ酢酸水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出し
た。画分は、TLCおよび分析HPLCにより調べて、最高の
純度のものがえられるように集めた。水から溶液をくり
返し凍結乾燥して、白い綿毛状粉末として120mgの生成
物をえた。

【００８１】生成物はHPLCおよびTLCにより均質であることがわか
った。酸加水分解物のアミノ酸分析によってペプチドの
組成を確認した。Leu−ψ［CH₂NH］ペプチド結合の存在
は、高速原子衝撃質量分析によって実証した。

【００８２】類似体Ｄ−Cpa−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu
−ψ［CH₂NH］−Phe−NH₂（BIM−26159）は、Ｄ−Pheを
Ｄ−Cpaに置き換えることにより同様の方法で合成され
うる。

【００８３】［Ｄ−Phe¹、His⁷、desMet⁹］リトリン、Ｄ−Phe−Gl
n−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−NH₂の固相合成は、
下記のように行なった。

【００８４】ステップ（１）：塩素イオン型のベンズヒドリルアミ
ン−ポリスチレン樹脂（アドバンスドケムテック社
（0.62グラム、0.25ミリモル）を、下記の反応サイクル
を行なうようにプログラムされたACT200ペプチド合成機
の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩
化メチレン中33％トリフルオロ酢酸（２回、それぞれ１
および25分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノー
ル；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）クロロホルム中10％ト
リエチルアミン。

【００８５】中和した樹脂をBOC−Leuおよびジイソプロピルカルボ
ジイミド（それぞれ1.5ミリモル）とともに塩化メチレ
ン中で１時間撹拌し、そののちえられたアミノ酸樹脂
を、前記洗浄プログラムの段階（ａ）から（ｇ）までの
サイクルにかけた。ついで下記のアミノ酸（1.5ミリモ
ル）を引き続き同じ方法で結合させた:BOC−His（ベン
ジロキシカルボニル）、BOC−Gly、BOC−Val、BOC−Al
a、BOC−Trp、BOC−Gln（6M過剰のｐ−ニトロフェニル
エステルとして結合）、およびBOC−Ｄ−Phe（ヒドロキ
シベンゾトリアゾール中で結合）。乾燥ののちペプチド
樹脂は0.92gの重量であった。

【００８６】ステップ（２）：ついで樹脂（0.92g）をアニソール
（5ml）、ジチオスレイトール（200mg）および無水フッ
化水素（35ml）と０℃にて混合し、45分間撹拌した。過
剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、エ
ーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄した。粗ペプ
チドを最少容量の2M酢酸中に溶解し、セファデックスＧ
−25のカラム（2.5×100cm）にて溶出した。ついでUV吸
収およびTLCにより主成分を含むとする画分を集めて少
量にまで蒸発させ、バイダックオクタデシルシラン（10
〜15μＭ）のカラム（2.5×50cm）に付した。カラム
は、０〜30％アセトニトリル（0.1％トリフルオロ酢酸
水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出した。画分は、TLC
によって調べ、最高の純度のものがえられるように集め
た。水から溶液をくり返し凍結乾燥して、白い綿毛状粉
末をえた；この生成物は、HPLCおよびTLCにより均質で
あることがわかった。酸加水分解物のアミノ酸分析によ
ってペプチドの組成を確認した。

【００８７】Ｄ−β−Nal−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−
NH₂の合成は、前記と同じ方法を用いてなしとげた［ス
テップ（１）では0.62g、0.25ミリモルのベンズヒドリ
ルアミン樹脂、およびステップ（２）では0.92g］

【００８８】Ｎ−アセチル−Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−
His−Leu−NH₂の合成は、塩化メチレン中無水酢酸を用
いて最終的なBOC基の除去と樹脂のアセチル化を行なっ
たことを除いては前記と同じ方法を用い、ステップ
（１）で0.62g（0.25ミリモル）のベンズヒドリルアミ
ン樹脂を用い、ステップ（２）で0.92gの樹脂をアニソ
ールとともに混合して、なしとげた。

【００８９】［Sta⁸、desMet⁹］リトリンの合成は下記のとおりに
行なった。ペプチドが、ペプチド結合だけしか含まない
ばあい、スタチン、AHPPA、またはACHPA残基を類似体の
いずれか２つのアミノ酸と置換した。たとえば［Sta⁸、
desMet⁸］リトリンは第１にスタチンを樹脂に結合さ
せ、ついでBOC−His（ベンジロキシカルボニル）を添加
して続行することにより、同様に調製した。

【００９０】スタチンまたはBOC−スタチンは、リッチ（Rich）
ら、1978、ジャーナルオブオーガニックケミスト
リー（J.Organic Chem.）、43巻、3624頁；およびリッ
チら、1980、ジャーナルオブメディカルケミスト
リー、23巻27頁の方法にしたがって合成し、AHPPAおよ
びACHPAは、ヒューイ（Hui）ら、1987、ジャーナルオ
ブメディカルケミストリー、30巻、1287頁；シュダ
（Schuda）ら、1988、ジャーナルオブオーガニック
ケミストリー、53巻、873頁；およびリッチら、198
8、ジャーナルオブオーガニックケミストリー、5
3巻、869頁の方法にしたがって合成した。

【００９１】ペプチドpGlu−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Sta
−NH₂の固相合成は、BOC−スタチン（リッチら、ジャー
ナルオブオーガニックケミストリー1978、43巻、
3624頁の方法により調製）をまずはじめにメチルベンズ
ヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂に結合する下記の方
法を用いてなしとげた。アセチル化ののち、中間体ｐ−
Glu−Gln−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His（ベンジロキ
シカルボニル）−Sta−メチルベンズヒドリルアミン樹
脂を調製した。この調製に用いた合成法を下に詳述す
る：

【００９２】 1.メチルベンズヒドリルアミン樹脂へのBOC−スタチン
の取り込み。塩素イオン型のメチルベンズヒドリルアミン−ポリス
チレン樹脂（ベガバイオケミカルズ社）（1.0g、0.73
ミリモル）を、ベガ250Cカップラー（Coupler）ペプチ
ド合成機の反応容器中に入れた。合成機は、下記の反応
を行なうようにプログラムされた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）クロロホルム中10％トリエ
チルアミン；（ｃ）塩化メチレン；および（ｄ）ジメチ
ルホルムアミド。

【００９３】 BOC−スタチン（1.46ミリモル）、ジイソプロピルカ
ルボジイミド（２ミリモル）、およびヒドロキシベンゾ
トリアゾール水和物（1.46ミリモル）よりジメチルホル
ムアミド中０℃にて１時間で作った前合成活性エステル
とともに、中和した樹脂を18時間混合した。えられたア
ミノ酸樹脂は合成機上でジメチルホルムアミド、ついで
塩化メチレンを用いて洗浄した。この時点での樹脂混合
物はカイザー（Kaiser）ニンヒドリン試験（５分）によ
り、樹脂に84％のレベルのスタチンが取り込まれている
ことが見い出された。

【００９４】塩化メチレン中でアミノ酸−樹脂を15分間、Ｎ−アセ
チルイミダゾール（５ミリモル）と混合することによ
り、アセチル化を行なった。樹脂の遊離アミノ基の94〜
99％のレベルの誘導が、カイザーニンヒドリン試験（５
分）により示された。ついでBOC−スタチン−樹脂を塩
化メチレンで洗浄した。

【００９５】 2.残りのアミノ酸の結合ペプチド合成機は、下記の反応サイクルを行なうよう
にプログラムされた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化
メチレン中33％トリフルオロ酢酸（TFA）（２回、それ
ぞれ５および25分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）イ
ソプロピルアルコール；（ｅ）クロロホルム中10％トリ
エチルアミン；および（ｆ）塩化エチレン。

【００９６】そののち下記のアミノ酸（2.19ミリモル）が、引き続
いてジイソプロピルカルボジイミド（４ミリモル）の
み、またはジイソプロピルカルボジイミド（４ミリモ
ル）＋ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（1.47また
は0.73ミリモル）によって結合され、その結果えられた
ペプチド樹脂は合成機上でジメチルホルムアミドさらに
塩化メチレンを用いて洗浄し、ついで前記方法における
洗浄および脱ブロッキング段階の（ａ）から（ｆ）まで
のサイクルにかけた。

【００９７】 BOC−His（ベンジロキシカルボニル）（２等量のヒド
ロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）;BOC−Gly;BO
C−Val;BOC−AlaおよびBOC−Trp（１等量のヒドロキシ
ベンゾトリアゾール水和物と０℃で１時間反応させて作
られた前合成ヒドロキシベンゾトリアゾール活性エステ
ルとして係合）;BOC−GlnおよびpGlu（これも、１等量
のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物と０℃にて１時
間反応させて作られた前合成ヒドロキシベンゾトリアゾ
ールの活性エステルとして結合）。そののち、完成した
ペプチド樹脂をメタノールで洗浄し、風乾した。

【００９８】前記ペプチド樹脂（1.60g、0.73ミリモル）はつい
で、アニソール（2.5ml）、ジチオスレイトール（50m
g）、および無水フッ化水素（30ml）と０℃にて１時間
混合した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに
蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄
した。粗ペプチドを100mLの1M酢酸中に溶解し、溶液は
そののち減圧下で蒸発させた。粗ペプチドを最少容量の
メタノール／水1/1中に溶解し、10容量の酢酸エチルを
用いて分離した（triturated）。

【００９９】分離したペプチドは、オクタデシルシラン−シリカ
（ワットマンパーティシル（Partisil）10 ODS−２
M9）のカラム（内径9.4mm×50cm）に付した。ペプチ
ドは0.1％トリフルオロ酢酸水溶液中、0.1％トリフルオ
ロ酢酸／アセトニトリル（20/80）の20〜80％直線濃度
勾配にて溶出した。画分をTLCおよび分析HPLCによって
調べ、最高の純度のものがえられるように集めた。水か
ら溶液を凍結乾燥して、白い綿毛状粉末として77mgの生
成物をえた。

【０１００】ボンベシン類似体、Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−G
ly−His−Leu−Leu−NH₂（BIM−26187）の合成は下記の
とおりである。他のボンベシン類似体は下記の合成法を
適切に修飾することにより調製した。

【０１０１】１）４−メチルベンズヒドリルアミンへのBOC−Leuの取
込み。塩素イオン型の４−メチルベンズヒドリルアミン−ポ
リスチレン樹脂（バケム（Bachem）社）（0.72meq/g）
を、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされ
たACT200ペプチド合成機（アドバンスドケムテック
社）の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；
（ｂ）クロロホルム中10％トリエチルアミン；（ｃ）塩
化メチレン；および（ｄ）ジメチルホルムアミド。

【０１０２】中和した樹脂を塩化メチレン中でBOC−Leuおよびジイ
ソプロピルカルボジイミド（それぞれ３モル等量）と１
時間混合した。えられたアミノ酸樹脂はジメチルホルム
アミドを用いて合成機上で洗浄し、ジメチルホルムアミ
ド中５％無水酢酸で５分間処理した。ついで、ジメチル
ホルムアミドおよび塩化メチレンを用いて洗浄した。

【０１０３】２）残りのアミノ酸の結合ペプチド合成機は、下記の反応サイクルを行なうよう
にプログラムされた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化
メチレン中33％トリフルオロ酢酸（TFA）（２回、それ
ぞれ５および25分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）イ
ソプロピルアルコール；（ｅ）クロロホルム中10％トリ
エチルアミン；および（ｆ）塩化メチレン。

【０１０４】そののち下記のアミノ酸（３モル等量）を引き続いて
同じ方法により結合した。:BOC−Leu、BOC−His（トシ
ル）、BOC−Gly、BOC−Val、BOC−Ala、BOC−Trp、BOC
−Gln（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下
で結合）、BOC−Ｄ−Phe（１等量のヒドロキシベンゾト
リアゾール存在下で結合）。そののち完成した樹脂をメ
タノールで洗浄し、風乾した。

【０１０５】前記ペプチド樹脂（1.41g）は、アニソール（5mL）、
ジチオスレイトール（50mg）、および無水フッ化水素
（25ml）と０℃にて１時間混合した。過剰のフッ化水素
は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、残渣をエーテルを
用いて洗浄した。粗ペプチドを100mlの4M酢酸中に溶解
し、溶液はそののち減圧下で蒸発させた。粗ペプチドを
最少容量のメタノール／水中に溶解し、酢酸エチルを用
いて分離した。分離したペプチドは、オクタデシルシラ
ン−シリカ（ワットマンパーティシル10 ODS−2M9）
のカラム（内径9.4mm×50cm）に付した。ペプチドは0.1
％TFA水溶液中、0.1％TAF/アセトニトリル（50/50）の2
0〜80％直線濃度勾配にて溶出した。画分を分析HPLCに
よって調べ、適切な画分を少量にまで蒸発させて、さら
に凍結乾燥し、無色の粉末として65mgの生成物をえた。

【０１０６】［Ｄ−Cpa¹、β−Leu⁸、desMet⁹］リトリンを含む他
の化合物、またはたとえば、CHxAla⁸もしくはNle⁹を含
む化合物は前記のごとくに調製した；スタチン、AHPP
A、ACHPA、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸残基は、
BOC誘導体として結合することにより天然α−アミノ酸
残基のばあいと同じように添加した。

【０１０７】ペプチド合成用の樹脂は、ペプチドのＣ−末端の化学
構造にしたがって選択した。より詳しくは、メリフィー
ルド（Merrifield）樹脂は、開裂にともなってカルボキ
シルＣ−末端を生じるエステル結合により第１アミノ酸
に結合させた；他方メチルベンズヒドリルアミンおよび
ベンズヒドリルアミン樹脂は開裂にともなってアミドＣ
−末端を生じる２級アミン結合によって第１アミノ酸に
結合させた。

【０１０８】Ｃ−末端で修飾されたペプチドは、前記の方法を適切
に修飾することにより調製した。たとえば、Ｏ−メチル
エステル誘導体は、キャンブル（Camble）ら、「アイ
シーアイ 216140 アポテントインビボアン
タゴニストアナログオブボンベシン／ガストリン
リリーシングペプチドデライブドフロムザ
Ｃ−ターミナルシーケンスラッキングザファイ
ナルメチオニンレジデュー」（“ICI 216140 A Pot
ent In Vivo Antagonist Analogue of Bombesin/Gastri
n Releasing Peptide Derived From the C−Terminal S
equence Lacking the Final Methionine Residue"）、
ライフサイエンス（Life Science）、10〜11月1989に
記載のように合成した。これを、ここで参考文献として
あげる。

【０１０９】キャンブルらはトリメチルアセチルで修飾されたＮ−
末端およびメチルエステルで修飾されたＣ−末端を有す
るボンベシン類似体の合成を述べている。この類似体、
（CH₃）₃C−CO−His−Trp−Ala−Val−Ｄ−Ala−His−L
eu−OCH₃は前記したような固相法によって合成された。
Ｎ−末端トリメチルアセチル修飾は、ペプチドと対応す
る無水物の反応によってえることができる。Ｃ−末端メ
チルエステル修飾は、ペプチド樹脂をメタノールおよび
トリエチルアミンで処理することによりえることができ
る。

【０１１０】本発明のペプチドは、ペプチド内に２つのシステイン
残基が存在するばあいジスルフィド架橋の形成によっ
て、またはCys−Cysジスルフィド結合がなければ下記の
例に示す方法にしたがって環化されてもよい。

【０１１１】 HF開裂によりペプチド−樹脂エステルからえられた粗
ペプチド酸はDMF（0.1％〜１％濃度）中に溶解し、縮合
剤（たとえばBOP試薬、DEPC試薬、DPPA試薬、または他
のいずれの縮合剤でも）、ついで塩基（たとえば、トリ
エチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン）で室温に
て１〜３日処理した。真空で乾燥するまで溶媒を除去し
たのち、残渣を通常の方法にしたがってHPLCにより精製
した。Ｄ−Phe¹がアミド架橋を介してLeu⁹に共有結合し
た環状［Ｄ−Phe¹、Leu⁸、Leu⁹］リトリンの環化は、BO
P試薬としてベンゾトリアゾール−１−イロキシトリス
（ジメチルアミン）フォスフォニウムヘキサフルオロフ
ォスフェート、DEPC試薬として、ジエチルシアノフォス
フェートおよびDPPA試薬としてジフェニルフォスフォリ
ルアジドを用いて前記の方法にしたがってなしとげられ
た。

【０１１２】（類似体の抗肝癌活性の定量）腫瘍系統（system）：ナショナルキャンサーインスティテュート（Nati
onal Cancer Institute）のエイチプーモーリス
（H.P.Morris）博士より入手したM5123肝癌細胞を、バ
ッファロ系ラットにＮ−（２−フルオレニルフタルアミ
ド酸）の摂取により誘導し、引き続き移植して樹立し
た。免疫欠損の無胸腺マウスにM5123肝癌細胞を移植す
ると徐々に増殖する致死性の腫瘍が再現性良くえられ
た。

【０１１３】分析方法（system）：ボンベシン類似体の肝癌細胞に対する増殖抑制効果を
定量するために２つの生体内での分析方法、すなわち腎
被膜下の分析および皮下腫瘍の分析を行なった。

【０１１４】（１）腎被膜下の分析腎被膜下の分析は、固形の悪性腫瘍から調製した腫瘍
異種移植片に対する化学療法剤を検査するための迅速な
生体内での方法として考案されたものである。抗腫瘍ス
クリーニングの方法としては、ヒトおよびネズミの両者
の腫瘍が無胸腺雌性マウスの異種移植として検査される
ことができる。本分析の詳細については、ボーデン、エ
ーイー（Bogden,A.E.）らのアラピッドスクリー
ニングメソッドフォーテスティングケモセラピュ
ーティックエイジェンツアゲインストヒューマン
テューモアゼノグラフツ（a rapid screening meth
od for testing chemotherapeutic agents against hum
an tumor xenografts）（プロシーディングオブシ
ントムユースオブアサイミック（ヌード）マイス
インキャンサーリサーチ（Proc.Symp.Use of Ath
ymic（Nude）Mice in Cancer Research）231頁掲載、ハ
ウチェンズ（Houchens）ら編、グスタフフィッシャー
（Gustav Fischer）、ニューヨーク（1978））を参照さ
れたい。

【０１１５】その考案の基礎は、固形の腫瘍が不均一な細胞集団
（生合成機能、増殖能力、薬物および成長因子への感受
性、ならびに抗原もしくは受容体の発現の点で不均一）
からなっていることや上皮性／基質性の関連の複雑さが
腫瘍の増殖に影響するのみならず、他の機能的な特徴に
も影響することを考慮することにある。

【０１１６】腎被膜下移植に腫瘍断片を用いることにより、受容体
反応、細胞間接触および細胞集団の空間的な関係に必須
の細胞膜、ならびに自己分泌と傍分泌効果の安定性に必
須である腫瘍断片中の組織の両者の完全な状態が維持さ
れる。ボンベシン類似体のような、薬物または生物学的
応答調節剤に対する腫瘍の応答が、このように比較的完
全な微環境内で、クローン原性および非クローン原性の
いずれもの多細胞集団の総合的な応答（net response）
として測定される。さらに実際的には存在する細胞間環
境のアクセシビリティ（accessibility）の障壁をも提
供する。

【０１１７】さらに、移植時ならびに実験終了時にふたたび腫瘍異
種移植片の大きさをその場で（in situ）測定すること
により、試験化合物に対する腫瘍の感受性を評価するた
めの、腫瘍の大きさの変化の、きわめて単純なパラメー
タを用いることが可能となる。最初に測定することによ
り、薬効の評価のための各異種移植片そのものの基準が
えられ、すべて臨床的に重要であるパラメータである、
進行、安定化、部分的寛解および完全寛解の点で、薬物
に対する腫瘍の応答が測定できる。

【０１１８】本分析において、移植・確立されたM5123肝癌細胞か
ら調製した異種移植片を、まず免疫欠損無胸腺雌性マウ
スに移植し、ついでボンベシン類似体、BIM−26159処置
を行なった。より明確には、０日目に、32匹の無胸腺雌
性マウスにM5123ラット肝癌細胞の1mmの立方体断片を腎
被膜下に移植した。BIM−26159を用いた処置は、１日目
に開始し、注射１回あたり250、50および５μｇ、皮
下、１日２回、１〜12日（毎日）のスケジュールで行な
われた。13日目にマウスを殺し、０日目から13日間のあ
いだの腫瘍の大きさの変化を定量するために、腎臓を摘
出して腫瘍の大きさを測定した。

【０１１９】腫瘍の大きさは、オクラー（ocular）ユニット（OM
U、10 OMU＝1mm）の目盛りを付した接眼鏡（ocular）
マイクロメーターを備えた立体鏡を用いてその場で測定
した。各腫瘍につき２つの垂直な（perpendicular）直
径を測り、13日目にわたる平均腫瘍直径の差を算出し
た。

【０１２０】（２）皮下の分析腎被膜下の分析と異なり、皮下の分析においては、腫
瘍異種移植切片は腎皮膜下ではなく皮下に移植され、そ
の移植後、随時処置を開始することができる。

【０１２１】本分析では、腫瘍は無胸腺雌性マウスの右脇腹に皮下
移植され、試験化合物、BIM−26159、BIM−26187、BIM
−26189、BIM−26218、BIM−26223およびBIM−26228、
ならびにコントロールは左脇腹に皮下注射された。BIM
−26159、BIM−26187、BIM−26189の構造については前
記の「発明の概要」を参照のこと。BIM−26223およびBI
M−26228の構造は下記のとおりてある： BIM−26223: Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Phe−Leu−N
H₂ BIM−26228: Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−CHxAla−Leu−NH₂

【０１２２】移植された腫瘍の処置に対する応答を、以下のように
モニターした。腫瘍の長さおよび幅を最初に感度のよい
ヴェルニーア（Vernier）カリパスを用いて測定した。
ついで、腫瘍重量を次の方法に基づいて計算した：［長
さ（mm）×幅（mm）^２］/2ミリグラム。腫瘍の大きさま
たは重量に加えて、この分析方法では「遅延時間」のパ
ラメータ、すなわち、ある大きさに達するための腫瘍の
増殖能におよぼす初期の処置の効果、が可能である。

【０１２３】１つの実験では、32匹のマウスに、０日目にM5123肝
癌細胞異種移植片を皮下移植し、１群あたり８匹の４群
に無作為に分けた。ボンベシン類似体BIM−26159を、注
射１回あたり250、50、10μｇ、皮下、１日２回、１〜1
8日（毎日）投与した。

【０１２４】いま１つの実験では、我々は５つのボンベシン類似
体、すなわち、BIM−26187、BIM−26189、BIM−26218、
BIM−26223およびBIM−26228の活性を18日間にわたって
試験した。40匹のマウスに０日目にM5123肝癌細胞異種
移植片を皮下移植し、ついでコントロール群の10匹と各
６匹の試験群に無作為に分けた。すべての化合物を、注
射あたり100μｇ、皮下、１日２回、１〜18日（毎日）
投与した。

【０１２５】結果：図１に示すのは、無胸腺雌性マウスに移植した肝癌細
胞の増殖に対するBIM−26159の腎被膜下の分析により定
量した効果である。調べた３種の投与量すべて、すなわ
ち５、50、および250μg/注射、皮下、１日２回、１〜
９日（毎日）、においてこのボンベシン類似体は13日の
期間にわたって肝の腫瘍の成長を有意に、すなわち約20
％（すなわち［100− ％試験／コントロール
％］）減少させる効果があった。このような効果が、投
与量が注射あたり５μｇと低くても観察されることは注
目すべきである。同じ結果を表１にも示す。

【０１２６】

【表１】

【０１２７】 BIM−26159の増殖抑制効果は、皮下の分析を行なった
ばあい、より顕著であった。図２および表２の両方に示
すように、このボンベシン類似体は、種々の投与量で肝
癌細胞の成長を大いに減じた。注射あたり50μｇの投与
量、皮下、１日２回、１〜９日（毎日）、において18日
を越える期間にわたって腫瘍の成長を75％減じる効果が
あった。より低い量（10μｇ）およびより高い量（250
μｇ）で投与されたBIM−26159は、わずかに低い抗腫瘍
活性（それぞれ、72％および66％抑制）を示し、逆さベ
ル型の量反応性を呈した（図２）。同じ実験で、移植し
た腫瘍の成長を種々の時間のポイントすなわち、４日、
８日、11日、15日でもモニターした。図３に明瞭に示さ
れるように、移植した腫瘍の成長速度は、３種のすべて
の投与量でのBIM−26159による処置で、８日ののちにコ
ントロールに比して、大変遅かった。

【０１２８】

【表２】

【０１２９】５つの他のボンベシン類似体についても皮下の分析に
よって抗腫瘍活性を調べ、その結果を表３に示す。BIM
−26189、BIM−26218、BIM−26217の３つの類似体が、
移植した肝癌細胞の成長を18日の期間にわたってそれぞ
れ、44％、30％および17％減じた。他方、２つの類似
体、BIM−26223およびBIM−26228はわずかに腫瘍細胞の
成長を賦活化した。

【０１３０】

【表３】

【０１３１】用途構造式（Ａ）および（Ｂ）で示されるボンベシン類似
体は、肝臓癌の生体内治療に用いることができる。

【０１３２】投与量は治療される状態、選択される投与経路、およ
び類似体の比活性に依存し、最終的には治療にあたる医
師または獣医師が決定することになろう。ここでは、治
療にあたる医師または獣医師が決定するような活性類似
体の量を「治療上有効な量」といい、それは好ましくは
100μg/kg/日から50mg/kg/日の範囲内である。

【０１３３】類似体は、治療される状態にふさわしければいかなる
経路で投与してもよい。好ましくは、類似体は治療を受
ける被検体の血流に注射される。しかしながら、治療さ
れる状態や用いる類似体の活性に応じて、静脈内、皮
下、筋肉内、腹膜内、鼻、口、などのように経路を変え
ることは、当業者により難なく認められることであろ
う。

【０１３４】ボンベシン類似体を純粋かまたは実質上純粋な化合物
として投与することも可能であるが、薬学的製剤または
調製物として提供することが好ましい。

【０１３５】家畜用およびヒト用の使用の両方に対して、本発明の
製剤は、前記本発明のペプチド類似体を、１またはそれ
より多くの薬学的に許容しうるそれらのための担体、お
よび随意には他の治療用の成分とともに含むものであ
る。

【０１３６】担体は、製剤中の１またはそれより多くの活性成分に
適合し（さらに好ましくは、ペプチドを安定化しう
る）、および治療を受ける被検体にとって有害でないと
いう点で「許容しうる」ものでなければならない。望ま
しくは、製剤には酸化剤またはペプチドと不適合である
と知られている他の物質を含有すべきではない。たとえ
ば、環の形状のボンベシン類似体は酸化されており；そ
こで賦形剤として還元剤が存在するとシスチンの二硫黄
架橋（disulfur bridge）の開裂をひきおこしてしまう
であろう。他方、高い酸化状態にあると、システインス
ルホキシドの形成やトリプトファンの酸化を招きうる。
結論としては、注意深く賦形剤を選択することが重要だ
ということである。前に指摘したように、pHがいま一つ
の重要な因子であり、生成物をわずかに酸性の条件（pH
5から６）に緩衝化しておくことが必要である。

【０１３７】製剤は、便宜上投与単位形態で提供されてもよく、製
薬の技術においてよく知られたいかなる方法によって調
製されてもよい。すべての方法に、１またはそれより多
くの活性成分を１またはそれより多くの副成分より構成
される担体とあわせる段階が含まれる。

【０１３８】通例、活性成分を、細かく分割された固型担体と均一
にかつ完全に混和することにより、錠剤または粉末剤用
の製剤を調製し、そののち、錠剤のばあいのように必要
であれば生成物を所望の形状および大きさに成型する。

【０１３９】他方、静脈内投与に好適な製剤は、便宜上１またはそ
れより多くの活性成分の滅菌水溶液を含んでなる。好ま
しくは、該溶液は治療を受ける被検体の血液と等張であ
る。便宜的には、このような製剤は水溶液を作るために
固型の１またはそれより多くの活性成分を水に溶解し、
該溶液を滅菌に付すことにより調製するとよい。製剤
は、単回または複数回分の投与量を含む形で、たとえば
密封したアンプルまたはバイアルで提供されるとよい。

【０１４０】（その他の実施態様）前記記載事項は、本発明における特定の実施態様に限
ったものである。しかしながら、本発明の利点の一部ま
たはすべてを達成しつつ、変化や改良を本発明に加えて
もよいことは明らかであろう。このような実施態様もま
た下記の請求の範囲内にあるものである。［図面の簡単な説明］

【図１】図１は、腎皮膜下分析により、無胸腺雌性マウスに13
日間移植した肝癌に対するボンベシン類似体、BIM−261
59の成長阻害効果を示すグラフである。

【図２】図２は、皮下分析により、無胸腺雌性マウスに18日間
移植した肝癌に対するBIM−26159の成長阻害効果を示す
グラフである。

【図３】図３は、皮下分析により、無胸腺雌性マウスに移植し
た肝癌への種々の時点でのBIM−26159の成長阻害効果を
示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (73)特許権者 503107635 アドミニストレイターズオブザトュランエデュケーショナルファンドアメリカ合衆国、70112 ルイジアナ州、ニューオーリンズ、トュランアベニュー 1430、トュランユニバーシティメディカルセンター (72)発明者ボードン、アーサーイーアメリカ合衆国、01747 マサチューセッツ州、ホープデイル、ローレルウッドドライブ 212 (72)発明者コイ、デビッドエイチアメリカ合衆国、70115 ルイジアナ州、ニューオーリンズ、ペリエヤーストリート 4319 (72)発明者キム、スンヒュクアメリカ合衆国、02167 マサチューセッツ州、チェストナットヒル、ホィットネーストリート 20 (72)発明者モロー、ジャック−ピエールアメリカ合衆国、01568 マサチューセッツ州、アプトン、ウェストバロロード 159 (56)参考文献国際公開91／004040（ＷＯ，Ａ１) Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，Ｖｏｌ．160, Ｎｏ．２（1990）ｐ．169ＡＣｈｅｍｉｃａｌＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ２，ｅｄｉｔｅｄｂｙＡ．Ｃｏｌｕｍｂａｎｏ，ｅｔａｌ．（1991）ｐ．619−623 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＰｕｂＭｅｄ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】式：Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−N
H₂のボンベシン類似体またはそれらの薬学上許容しうる
塩を薬学上許容しうる担体物質と混合することを含んで
なる肝癌治療のための薬剤の製造法。
【請求項２】式：Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Leu−N
H₂のボンベシン類似体またはそれらの薬学上許容しうる
塩を薬学上許容しうる担体物質と混合することを含んで
なる肝癌治療のための薬剤の製造法。
【請求項３】式：Ｄ−Cpa−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ［CH
₂NH］−Phe−NH₂のボンベシン類似体またはそれらの薬
学上許容しうる塩を薬学上許容しうる担体物質と混合す
ることを含んでなる肝癌治療のための薬剤の製造法。
【請求項４】式：Ｄ−Phe−Gln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−ψ［CH
₂NH］−Cpa−NH₂のボンベシン類似体またはそれらの薬
学上許容しうる塩を薬学上許容しうる担体物質と混合す
ることを含んでなる肝癌治療のための薬剤の製造法。