JP2795403B2 - Immunoassay method and device - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は免疫的測定方法、さらに
詳しくは、抗原または抗体を定量的に測定するのに好適
な免疫的測定方法及びそれに用いる装置に関するもので
ある。 【０００２】 【従来の技術】従来、体液成分、たとえば、イムノグロ
ブリンＧ．Ａ．Ｍ，捕体Ｃ３，Ｃ４，ＣＲＰ，ＲＦ等の
測定方法として、多量の検体を処理する方法としてコン
ピューターを内蔵した自動分析装置を用いて行う比濁
法、ラテックス比濁法、レーザー光散乱法等の光学的測
定方法がある。 【０００３】これらの方法は、溶液中での抗原抗体反応
による光学的性質の変化を、透過光又は散乱光の変化と
してとらえ、これを、その都度予め濃度既知の標準物質
を測定することにより作成されている検量線との比較に
おいて濃度を決定する方法である。 【０００４】この自動分析装置を用いて測定を行う従来
方法の操作手順をさらに具体的に述べると以下の通りで
ある。即ち、 測定する試薬（検体）をキュベット等の容器に入
れ、自動分析装置にセットし適温（３７℃）にインキュ
ベートする。 【０００５】 標準物質を用いて検量線を作成する。 【０００６】−１ 測定項目に対応して、装置内蔵の
ＲＯＭ又はパソコンに入力されている検量線の所定の計
算式、例えば、Ｙ＝Ａｘ＋Ｂ／ｘを呼び出す。 【０００７】−２ 標準物質の測定により上記パラメ
ーターＡ及びＢの値を決定する。 −３ 上記決定したパラメーターＡ及びＢに基づき上
記計算式により検量線を完成する。 【０００８】 検体を測定し、その抗原または抗体の
濃度を上記検量線を用いて決定する。 【０００９】そして、上記従来の方法においては、一回
の連続的測定（多量の検体を測定する場合は、１日に４
００〜５００検体についての連続的測定が行われる。）
が終了し、翌日乃至一週間程度後に新たに測定を行う際
には、測定開始前にその都度検量線を新たに作成してか
ら測定することが必須とされている。 【００１０】これを、試薬メーカーとユーザーとの役割
分担について見れば、次のようになる。 【００１１】（試薬メーカー） 試薬の製造 グラフ等で検量線を作成し、この検量線に対応する
計算式、例えば、Ｙ＝Ａｘ＋Ｂ／ｘを決定する。そし
て、この計算式がユーザーに知らされる。 【００１２】（ユーザー） 検体の測定開始前に最初に濃度既知の標準物質の測
定を行い、その測定結果により、前記計算式のパラメー
ターの値を決定し前記計算式による検量線を完成する。 【００１３】 上記完成した検量線に基づき、検体の
一回の連続的測定を行う。 【００１４】 新たに測定を開始する毎に上記及び
を繰り返して検体の測定を行う。これらの従来の方法
は、キャリブレーションシステムといわれる測定方式で
あって、小数の検体の測定を行う場合や、緊急性のある
検体の測定においては、その都度検量線を作成する点が
非常に問題となるものである。また、測定開始前に、毎
回標準物質を測定して検量線を作成するため試薬の使用
量が多くなり、不経済である。 【００１５】 【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的は
前記検体の新たな測定に際し、その都度検量線を作成す
ることなく、試薬調製時に作成され記録媒体に納められ
た、検量線又はパラメーターに基づき検体測定時に、コ
ンピューターにより、測定値と比較演算して被検物の濃
度を計算する免疫的測定方法及び装置を提供することで
ある。 【００１６】また本発明の目的は非連続的な検体中の被
検物の濃度を効率的に測定する免疫的測定方法を提供す
る。 【００１７】更にまた本発明は免疫的測定方法に使用す
る新規な装置を提供する。 【００１８】本発明の更に詳しい目的は以下の説明から
自ら明らかになるであろう。 【００１９】 【課題を解決するための手段】本発明の特徴は抗原抗体
反応によって生ずる免疫複合体による濁度の変化から、
透過光の減少又は散乱光の増加信号の最大速度又は最大
加速度のときの値を基準として検量線を作成し、該検量
線を用いて被検物の濃度を測定する反復濃度測定方法に
おいて、試薬調製後の試薬保証期間内における該測定を
非連続的に実施する際の新たな測定に際し、測定開始前
にその都度濃度既知の標準物質を用いて検量線を作成す
ることなく、試薬調製時に作成され、記録媒体に納めら
れた検量線又は、検量線作成のためのパラメーターに基
づき、コンピューターによって、被検物の濃度を計算す
ることを特徴とする免疫的測定方法、及び該方法に基づ
いて使用される免疫的測定装置を提供するにある。 【００２０】すなわち、本発明は、光学的免疫測定試薬
と該試薬を調製した際に作成した、透過光の減少又は散
乱光の増加信号の最大速度又は最大加速度のときの値を
基準とした検量線又は検量線作成のためのパラメーター
の情報を記録した記録媒体とを用い、該試薬による免疫
測定時に、透過光の減少又は散乱光の増加信号を微分回
路により、微分処理して得た最大速度又は最大加速度の
ときの測定値と該媒体に記録された情報とをコンピュー
ターで演算処理することにより、被検物の濃度を決定す
ることを特徴とする免疫測定法並びに、 （ａ）光源 （ｂ）抗原抗体反応を実施し且つ光源からの光が通過す
る反応キュベット （ｃ）反応キュベットを通過した特定波長の光が受光さ
れる光検出器 （ｄ）光検出器で受光された光が電気信号に変換されて
演算処理されるコンピューター （ｅ）光検出器で受光された光で透過光量の変化速度を
求め、これをコンピューターに入力する微分回路 （ｆ）光学的免疫測定試薬の調製時に作成された検量線
又は検量線を与える情報を記録した記録媒体 （ｇ）記録媒体から検量線又は検量線作成に必要な情報
を読みとり、コンピューターに入力する入力装置 及び （ｈ）コンピューターの演算処理結果を表示するデータ
ー表示部よりなる免疫的測定装置 である。 【００２１】本発明にあっては、使用する試薬は同一ロ
ットでは、その検量線又は検量線作成のためのパラメー
ターは同じであるから、一つのロット単位で、試薬調製
時に検量線又は検量線作成のためのパラメーターが作成
される。ここで試薬調製時とは、試薬が試薬メーカーな
ど、試薬を使用して免疫測定を行う者に渡る前の段階を
意味するものであって、通常メーカーによって試薬と検
量線又は検量線作成のためのパラメーターを記録した記
録媒体とよりなるキットとして市場に供給される。 【００２２】本発明の免疫的測定方法の測定手順の一例
を、既に従来技術における自動分析装置を用いた免疫的
測定方法で述べた操作手順と対比した形で説明すると、
次の通りである。 【００２３】 測定する試薬をキュベット等の容器に
入れ、自動分析装置にセットし適温（３７℃）にインキ
ュベートする。 【００２４】 検量線を作成する。 【００２５】−１ 測定項目に対応して、装置内蔵の
ＲＯＭ又はパソコンに入力されている検量線の所定の計
算式、例えば、Ｙ＝Ａｘ＋Ｂ／ｘを呼び出す。 【００２６】−２ 試薬キットに添付された磁気媒体
などの記録媒体に記録されているパラメーター、例えば
Ａ及びＢ、の値を入力することにより検量線を完成す
る。 【００２７】 検体を測定し、抗原又は抗体の濃度を
決定する。 【００２８】そして、上記本発明の方法においては、試
薬調製後の保証期間内は、前記従来方法における如き測
定開始前にその都度濃度既知の標準血清を用いて検量線
を作成する操作は行わず、試薬調製時に作成された上記
検量線により、被検物の濃度の測定が行われることとな
る。また上記検量線の作成は前記試薬調製時に必ずしも
作成する必要はなく、前記パラメーターのみを試薬調製
時に決定しておき、このパラメーターに基づき測定時に
作成してもよい。 【００２９】本発明の最大の特徴は、前記試薬調製時に
作成された、透過光の減少又は散乱光の増加信号の最大
速度又は最大加速度のときの値を基準とした検量線又は
試薬調製時に導かれた前記測量線作成のためのパラメー
ターを記録媒体に記録し、この記録媒体を使用し被検物
の濃度測定の検量線を作成することである。 【００３０】これを試薬メーカーとユーザー側との役割
分担について見れば、次のようになる。 【００３１】（試薬メーカー） 試薬の製造 検量線の作成 濃度既知の標準物質を使用して、透過光の減少又は散乱
光の増加信号の最大速度又は最大加速度のときの値を基
準とした検量線の作成を行う。即ち、測定項目に対応し
た検量線の計算式、例えば、Ｙ＝Ａｘ＋Ｂ／ｘを作成し
コンピューターに入力する。 【００３２】また、試薬に対応するパラメーター、例え
ばＡ及びＢの決定も行う。 【００３３】 前記作成した検量線又はパラメーター
に関する情報を記録媒体に記録する。 【００３４】前記記録媒体としては、次のようなもので
ある。 【００３５】 ｉ．磁気カード；ＩＣカード：パンチカード等のカード
類 ii．磁気テープ；カセットテープ等のテープ類 iii.フロッピーディスク等のディスク類 などコンピューターに付属した入力装置で読み取り可能
な記録媒体である。 【００３６】（ユーザー） 試薬メーカーによって試薬製造時に検量線が作成さ
れていないときは、予め決定したパラメーターを入力す
ることによって、その試薬に対応した検量線を完成す
る。 【００３７】 検体を非連続的に測定し、即ち検体に
ついて、該試薬を用い、透過光の減少又は散乱光の増加
を測定し、これを微分回路により微分処理して得た最大
速度又は最大加速度のときの値を求めて、その都度新た
な検量線を作成せず、上記試薬メーカーにより予め作成
された検量線又は検量線のための計算式とパラメーター
を用いてコンピューターの演算処理により被検物の濃度
を決める。 【００３８】本発明の方法は、ノンキャリブレーション
システムといわれる方式であって、これを更に詳しく述
べれば、試薬調製時に作成される検量線の作成方法は、
溶液中での抗原抗体反応による光の透過率の減少又は散
乱の増加を測定する方法において、被検物に対する抗血
清、塩類、ポリエチレングリコールなどよりなる免疫比
濁試薬又は被検物に対する抗体又は抗原で感作されたラ
テックスよりなる測定試薬を調製した際にこの試薬と濃
度既知の被検物とを反応させ被検物と濁度の増加の関係
を１つ又は複数の直線あるいは曲線を単独又は組み合わ
せて作成することができる。上記検量線は試薬調製時に
完成させるのが最も一般的であるが、検量線を決めるた
めの上記直線あるいは曲線の式だけを予め決定しておき
直線あるいは曲線の係数となるパラメーターを別に用意
し、検体測定時に該パラメーターから検量線を完成させ
てもよい。前記の検量線又はパラメーターは、前記のよ
うに磁気カード、ＩＣカード等のカード類；フロッピー
ディスク；カセットテープ、磁気テープ等のテープ類な
どの記録媒体に記録しコンピューターの利用により濃度
既知の標準物質を用いることなく被検物濃度を計算でき
る。 【００３９】上記記録媒体に記録される情報を検量線に
するのか、或いは検量線を作成するためのパラメーター
にするのかは必要に応じて決定すればよいが、一般には
記録媒体の記録のための容量で決定される。例えばカー
ド類を記録媒体とするときは記録容量が一般に少ないの
で上記パラメーターを記録媒体に記録するのが好まし
い。記録媒体の記録容量が多いもの例えばフロッピーデ
ィスク、テープ類を使用するときは検量線を記録するの
が好ましい。 【００４０】詳しく説明すれば上記検量線は、被検物濃
度をｙとし、濁度の変化を表わす値をｘとすると、一般
的な関数の型ｙ＝ｆ（ｘ）（ここでｆ（ｘ）＝ａ1 ｘn
＋ａ2 ｘn-1 ……ａn+1 又はａ'1ｌｏｇｘ又はｅa"1x
等）で近似することができる。一般に例えば試薬製造時
に行なった被検物濃度の濁度の変化を表わす値との関係
を近似する式のパラメーター（定数項）を最小二乗法を
用いて決定する。このパラメーターを前記関数の定数と
すれば検量線を定めることが出来る。上記検量線又はパ
ラメーターと関数の型（ａ1ｘn …ａn+1 又はａ1'ｌｏ
ｇｘまたはｅa"1x 等）を記録媒体に記録する。 【００４１】上記パラメーターが記録媒体に記録されて
いるときは、濃度未知の検体を測定する前に或いは該測
定後に該パラメーターを用いて検量線を作成する必要が
ある。かかる検量線作成の操作は全てコンピューターに
より行うことができる。 【００４２】未知濃度の検体は試薬と反応させることに
よって濁度が変化する。この濁度の変化を測定すること
により、前記検量線を用いて被検物の濃度を算出出来
る。一般には前記検量線をコンピューターにインプット
し、更に上記濁度の変化量をインプットするとき、被検
物の濃度が算出出来るプログラムをコンピューターに入
力する。該プログラムは特に工夫する必要はなく通常当
該分野で利用されているものをそのまま使用すればよ
い。 【００４３】本発明で用いる試薬は使用期間内にわたっ
て安定なものを調製又は選択して使用するものであり、
免疫比濁試薬において例えば抗血清濃度３〜３３％、Ｎ
ａＣｌ ０．９％、ポリエチレングリコール（分子量
６，０００乃至２０，０００）１〜４％よりなる長期間
安定な試薬を用いる。また、ラテックス粒子に抗原又は
抗体を固定化させてなるラテックス試薬の場合、例え
ば、その平均粒子径（Ｄ）が０．１〜０．５μｍで且つ
ラテックス粒子の平均粒子径（ｄ）に対するラテックス
試薬の平均粒子径（Ｄ）の比（Ｄ／ｄ）が１．３〜３．
０の範囲でかつゼータ電位−２０ｍＶ〜１０ｍＶの範囲
でさらに吸光度が光路長１０ｍｍで０．５〜１．５の範
囲にある長期間安定なラテックス試薬を用いる。上記ラ
テックス粒子の種類は抗原抗体反応に使用されるものが
種々知られていて本発明にあってもこれらの公知のラテ
ックス粒子が特に限定されずに使用出来る。特に好適に
使用されるものを例示すると例えばポリスチレン、スチ
レン−ブタジエン共重合体、スチレン−メタクリル酸共
重合体、ポリメチルメタアクリレート、ポリグリシジル
メタクリレート、アクロイン−エチレングリコールジメ
タクリレート共重合体の様な乳化重合により得られる有
機高分子ラテックス、あるいはシリカ、シリカ−アミル
ナ、アルミナの様な無機酸化物又は該無機酸化物等にシ
ランカップリング処理等の操作で官能基を導入した無機
粒子等である。 【００４４】本発明に於いて使用する抗体又は抗原は、
特に限定的でなく、公知のものが使用できる。好適に使
用される代表的なものを例示すれば、例えば、変性ガン
マグロブリン、抗核因子、ヒトアルブミン、抗ヒトアル
ブミン抗体、イムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体、イムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）、抗ヒトＩｇ
Ａ抗体、イムノグロブリンＭ（ＩｇＭ）、抗ヒトＩｇＭ
抗体、抗ヒトＩｇＥ抗体、ストレプトリジンＯ、ストレ
プトキナーゼ、ヒアルロニダーゼ、Ｃ−反応性蛋白（Ｃ
ＲＰ）、抗ヒトＣＲＰ抗体、アルファ−フェトプロティ
ン（ＡＦＰ）、抗ＡＦＰ抗体、癌胎児性抗原（ＣＥ
Ａ）、抗ヒトＣＥＡ抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン
（ＨＣＧ）、抗ＨＣＧ抗体、抗エストロゲン抗体、抗イ
ンシュリン抗体、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢS ）、抗ＨＢ
S 抗体、梅毒トレポネマ抗原、風疹抗原、インフルエン
ザ抗原、補体Ｃ1q、抗Ｃ1q抗体、抗Ｃ5 抗体、抗Ｃ4 抗
体、抗トランスフェリン抗体、等である。 【００４５】本発明において抗原抗体反応によって生ず
る免疫複合体による濁度の変化を測定する装置は以下の
機構を有するもの等特に限定されず公知のものが使用出
来る。一般には透過光又は散乱光を測定する場合におい
ては、特定の波長が選択できる機構、試薬と検体を混合
する撹拌機構、特定の温度にセルと試薬を保温できる機
構、抗原抗体反応の生成による透過光信号又は散乱光信
号の変化を連続的に追跡できる機構、この信号の変化か
ら１次微分、２次微分の信号を出力できる回路等を有す
ることが望ましい。 【００４６】本発明の測定方法に使用する具体的な測定
装置のブロック図を第１図に示す。光源１による光束は
先ず分光素子２に照射され、ここで特定波長の光が選択
された後、あらかじめ反応試薬が封入された反応キュベ
ット３に照射される。反応キュベット３を透過した光は
光検出器５により受光されて電気的信号に変換される。 【００４７】この透過光量に基づく電気的信号は増幅器
６により増幅され、この電気的信号は微分回路７により
微分処理、すなわち透過光量の変化速度（ｄＡ／ｄｔ）
が求められ、コンピューター８により演算処理され、抗
原あるいは抗体の濃度が算出されてデータ表示部１０に
表示される。 【００４８】さらに、本発明を実施するにあたり検量線
に必要な情報を入力する入力装置９、反応キュベット３
の攪拌機構４、及び検体分注機構１１より装置は構成さ
れる。 【００４９】光源１は例えば通常のタングステンランプ
を使用することができ、反応キュベット３は例えば内径
７ｍｍの透明なガラスあるいは合成樹脂（例えばポリス
チレン）製のキュベットでよい。 【００５０】分光素子２は通常の干渉フィルターを使用
することができ、本発明に供される測定波長は抗原−抗
体反応の方式により最適なものを選ぶことができる。ま
た、光検出器５は通常のフォトセルでよく、検量線に必
要な情報を入力する入力装置９は例えば磁気カードリー
ダー、カセットテープレコーダー、ディスクドライブユ
ニット、バーコードリーダーなどが使用できる。 【００５１】そして、本発明の測定方法は、以下に説明
するモノテスト試薬を使用した測定方法において特に有
効である。すなわち、モノテスト試薬は、１検体分の試
薬を分注してあり、試薬の容器が実質的に光を通すこと
のできる透明あるいは半透明のプラスチック製例えばポ
リスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリ塩化ビニ
ル、ポリプロピレン等を材質とした或いはガラス製の試
験管及び光学測定用セルを兼用しているため、ユーザー
は試験管及び光学測定用セルを別に準備する必要がな
く、試薬は分注済であるため器具（ピペット類）も不必
要である。更に、ディスポーザブルであるため使用後は
廃棄し、試験管やセルの洗浄の必要がない。また、試薬
の充填は管理された製造工程により行われるため、分注
誤差が小さく再現性の良い成績が得られる。そして、緊
急に持ち込まれた検体に対しても必要な測定回数の試薬
を準備するだけでよく、また、試薬を取り違えることも
起こりにくい。 【００５２】上記のように、モノテスト試薬は小数の検
体の処理に非常に適しているものである。しかし、この
モノテスト試薬を用いて測定をする場合において、既に
述べた従来の測定方法による場合、ユーザーは測定日毎
に検量線を作成するため数本の標準液を測定しなければ
ならない。そして、このような測定日毎の標準液の測定
は、１日に多量の検体を処理する施設では、大きな負担
とはならないが、１日に数本の未知試料しか測定しない
ような場合には、それがかなりの負担となり、上記のモ
ノテスト試薬による測定のメリットを十分に活かすこと
ができないものである。 【００５３】これに対し、本発明の測定方法において
は、ユーザーは試薬調製後の試薬の保証期間内、例え
ば、６カ月間の内の反復的測定においては、その都度検
量線作成のために標準物質の測定を行う必要がないか
ら、モノテスト試薬による測定のメリットをフルに活か
すことが可能となるものである。 【００５４】なお、本発明の免疫的測定方法に用いるキ
ットは、上記試薬、特に好ましくはモノテスト試薬、と
上記のように試薬調製時に作成された検量線又は検量線
を完成するためのパラメーターが記録された記録媒体、
例えば前記カード類、テープ類又はフロッピーディスク
等とを適宜組み合わせることにより作成される。 【００５５】本発明の免疫的測定方法をシステマティッ
クに説明すると下記の通りである。先ず抗原抗体反応に
よって生ずる免疫複合体による濁度の変化から、透過光
の減少又は散乱光の増加信号の最大速度又は最大加速度
のときの値を基準として検量線又は検量線を作成するた
めのパラメーターを決定する検量線測定部を必要とす
る。この検量線測定部では被検物の濃度既知の試料に基
づき前記したように或いは後述する実施例で示すよう
に、被検物濃度ｙと抗原抗体反応に伴う濁度の変化を表
わす値ｘとの間の関数ｙ＝ｆ（ｘ）を決定する。同時に
上記ｆ（ｘ）に関する数式の定数（パラメーター）につ
いては一般に最小二乗法を用いて決定する。上記検量線
測定部に於いて作成する検量線又は検量線を作成するた
めのパラメーターは検体中の被検物の濃度を算出するた
めの唯一の検量線又は検量線を作成するためのパラメー
ターとなるものであるから最も重要な操作部となる。 【００５６】上記検量線測定部で作成された検量線又は
パラメーターは記録媒体に記録されて保管され、例えば
試薬メーカーからユーザーへ伝達される。上記記録媒体
は保管、伝達及び取扱いの容易性から一般には前記カー
ド類、テープ類、フロッピーディスク等を用いるのが好
適である。 【００５７】上記検量線又はパラメーターが記録された
記録媒体からこれらの情報はコンピューターを内蔵する
分析装置のコンピューターに供給され、演算部にインプ
ットされる。該情報がパラメーターである場合は、該パ
ラメーターから検量線を作成する必要がある。従って該
パラメーターを記録媒体の情報とするときは、同時にま
たは別に検量線を作成する関数式をコンピューターに予
め又は同時に入力し、コンピューターによって検量線を
作成するのが好ましい。上記演算部では検体中の被検物
の抗原抗体反応によって生ずる濁度の変化を測定する検
体測定部から伝達される濁度の変化に基づき前記検量線
を使用して被検物の濃度を算出し、アウトプットするよ
うにすればよい。該演算部で、インプット情報からアウ
トプット情報を算出するために利用するプログラムは特
に特徴的なものではなく当該分野の自動分析装置などで
利用されている公知のもの或いは公知のものを必要に応
じてアレンジしたものを使用すればよい。 【００５８】上記演算部へのインプット情報として必要
な要素の１つは検体中の被検物が試薬と抗原抗体反応を
生起するときに生ずる濁度の変化である。かかる情報は
前記添付図面で説明した検体測定部によって測定され
る。該検体測定部での操作は前記した通り、検体中の被
検物と試薬との抗原抗体反応によって生ずる濁度の変化
を光検出器でキャッチし、その情報を利用するのが一般
的である。 【００５９】上記説明から明らかなように本発明は、検
量線測定部、記録部、検体測定部及び演算部を機能的に
結びつけた免疫的測定システムとして著しく価値を有す
るものである。 【００６０】本発明を更に詳しく説明するために以下実
施例を挙げて説明するが本発明はこれらの実施例にのみ
限定されるものではない。 【００６１】 【実施例】実施例１ （１） 試薬 抗ヒトＩｇＧ抗血清（ヤギ）３２％、ポリエチレングリ
コール（分子量６，０００）１．８％、ＮａＣｌ ０．
９％を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を調製
する。 【００６２】（２） 検量線の作成 濃度既知のＩｇＧ１０μｌと（１）で作成した試薬６５
０μｌとをプラスチック性の光学セル中３７℃で反応さ
せ４５０ｎｍの吸光度を連続的に比濁分析装置で測定
し、その１次微分の最大値を測定した。 【００６３】 ＩｇＧ濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ＩｇＧ濃度 ｍＶ ２０４ ２４．５ １４２８ １８５ ４０８ ５４．５ １６３２ １９８ ６１２ ９８ ２４４８ ２４２ ８１６ １１６ ２６５２ ２６０ １０２０ １３７ ２８５６ ２６６ １２２４ １６５ ３０６３ ２７４ この結果よりＩｇＧ濃度をｙ、１次微分値をｘとしｘ，
ｙの関係が近似的にｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2
＋ａ4 ｘ＋ａ5 という関係の型で表わすと最小二乗法に
よる計算の結果 ａ1 ＝−２．９３×１０-7 ａ4 ＝９．２０ ａ2 ＝２．８９×１０-4 ａ5 ＝２．０６ ａ3 ＝−０．０５ が得られた。このａ1 〜ａ5 を磁気カードに磁気カード
書き込み装置を用いて書き込んだ。 【００６４】（３） 未知試料の測定 前記（２）で用いた比濁分析装置に連結されたコンピュ
ーターに接続された磁気カード読み取り装置により前記
磁気カードからａ1 〜ａ5 をコンピューターに入力し、
Ｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋ａ4 ｘ＋ａ5 を計
算するプログラムを完成させる。次いで、濃度未知試料
を前記（２）の方法と同様な方法で測定し、得られた信
号ｘを前記コンピューターに入力し濃度を計算すると以
下の通りである。 【００６５】 上記結果から、開始月と６ケ月後における測定濃度は実
質的に同一と考えてよく、試薬調製時に作成した検量線
で十分信頼性のある測定が可能であることが判る。 【００６６】実施例２ （１） 試薬 抗ヒトＩｇＡ抗血清（ヤギ）２０％、ポリエチレングリ
コール（分子量２０，０００）２％、ＮａＣｌ ０．９
％を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を調製す
る。これを、円筒状の攪拌子を含む光路長７ｍｍのポリ
スチレン製光学セルに４００μｌ分注し、接着剤付きア
ルミ箔で密栓することによりモノテスト試薬を調製し
た。 【００６７】（２） 検量線の作成 濃度既知のＩｇＡ１０μｌと上記モノテスト試薬を装置
測光部（第１図）中で攪拌しつつ混合し、３７℃で反応
させ４５０ｎｍの吸光度を連続的に測定し、その１次微
分の最大値を得た。 【００６８】 ＩｇＡ濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ＩｇＡ濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ４２．２ １８．８ ３０２．４ ２４８．０ ８６．４ ８３．６ ３４５．６ ２７５．４ １２９．６ １２９．０ ３８８．８ ３１６．６ １７２．８ １６５．０ ４３２．０ ３４４．２ ２１６．０ ２０６．３ ４７５．２ ３７１．１ ２５９．２ ２３８．７ ５１８．４ ４０６．６ この結果よりＩｇＡ濃度をｙ、１次微分値をｘとしｘ，
ｙの関係が近似的にｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2
＋ａ4 ｘ＋ａ5 という関係の型で表わすと、最小二乗法
による計算の結果 ａ1 ＝１．６９×１０-12 ａ4 ＝１．２４×１０-2 ａ2 ＝−１．９８×１０-8 ａ5 ＝１９．２ ａ3 ＝７．８５×１０-5 が得られた。 【００６９】このｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋
ａ4 ｘ＋ａ5 をフロッピーディスクにディスクドライブ
装置を用いて書き込んだ。 【００７０】（３） 未知試料の測定 前記フロッピーディスクから前記（２）で用いた比濁分
析装置に接続されたコンピューターに内蔵されているデ
ィスクドライブ装置により検量線ｙ＝ａ1 ｘ4＋ａ2 ｘ3
＋ａ3 ｘ2 ＋ａ4 ｘ＋ａ5 を読み取る。 【００７１】次いで、濃度未知試料を前記（２）の方法
と同様に測定し、得られた信号ｘを前記コンピューター
に入力し濃度を計算すると以下の通りである。 【００７２】 上記結果から、開始月と６ケ月後における測定濃度は実
質的に同一と考えてよく、試薬調製時に作成した検量線
で十分信頼性のある測定が可能であることが判る。 【００７３】実施例３ （１） 試薬 抗ヒトＩｇＭ抗血清（ヤギ）８％、ポリエチレングリコ
ール（分子量２０，０００）２．３％、ＮａＣｌ ０．
９％を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を調製
する。 【００７４】（２） 検量線の作成 濃度既知のＩｇＭ２０μｌと前記（１）で作成した試薬
４００μｌとをプラスチック性の光学セル中３７℃で反
応させ４５０ｎｍの吸光度を連続的に比濁分析装置で測
定し、１次微分の最大値を得た。 【００７５】 ＩｇＭ濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ＩｇＭ濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ２６．２ ７．７ １５７．２ ６３．３ ５２．４ １５．８ １８３．４ ７１．７ ７８．６ ２６．４ ２０９．６ ８１．８ １０４．８ ３８．４ ２３５．８ ９１．２ １３１．０ ５０．３ ２６２．０ １０８．６ この結果よりＩｇＭ濃度をｙ、１次微分値をｘとしｘ，
ｙの関係が近似的にｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2
＋ａ4 ｘ＋ａ5 という関係の型で表わすと、最小二乗法
による計算の結果、次の通りであった。 【００７６】 ａ1 ＝−４．８８×１０-10 ａ4 ＝０．４４１ ａ2 ＝１．０８×１０-6 ａ5 ＝−１．３５ ａ3 ＝−７．８１×１０-4 このａ1 〜ａ5 をカセットテープに書き込み装置（カセ
ットテープレコーダー）を用いて書き込んだ。 【００７７】（３） 未知試料の測定 前記（２）で用いた比濁分析装置に連結したコンピュー
ターに接続されたカセットテープの読み取り装置により
前記カセットテープからａ1 〜ａ5 をコンピューターに
入力し、ｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋ａ4 ｘ＋
ａ5 を計算するプログラムを完成させる。次いで、濃度
未知試料を前記（２）の方法に基づいて測定し、得られ
た信号ｘを前記コンピューターで濃度を計算すると以下
の通りである。 【００７８】上記結果から、開始月と６ケ月後における測定濃度は実
質的に同一と考えてよく、試薬調製時に作成した検量線
で十分信頼性のある測定が可能であることが判る。 【００７９】実施例４ （１） 試薬 抗ヒトＣ３抗血清（ヤギ）１５％、ポリエチレングリコ
ール（分子量２０，０００）１．７％、ＮａＣｌ ０．
９％を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を調製
する。 【００８０】（２） 検量線の作成 濃度既知のＣ３ ２０μｌと（１）で作成した試薬４０
０μｌとをプラスチック性の光学セル中３７℃で反応さ
せ４５０ｎｍの吸光度を連続的に比濁分析装置で測定
し、その１次微分の最大値を得た。 【００８１】 Ｃ３濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ Ｃ３濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ １７．１ １８．０ １７０．５ １９６．５ ３４．１ ４５．２ ２０４．６ ２４１．２ ６８．２ ９５．３ ２３８．７ ２８０．７ １０２．３ １３０．４ ２７２．８ ２８１．３ １３６．４ １７２．９ ３０６．９ ３１６ この結果よりＣ３濃度をｙ、１次微分値をｘとしｘ，ｙ
の関係が近似的にｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋
ａ4 ｘ＋ａ5 という関係の型で表わすと、最小二乗法に
よる計算の結果 ａ1 ＝３．００×１０-12 ａ4 ＝５．１３×１０-2 ａ2 ＝−１．５９×１０-8 ａ5 ＝３．１１ ａ3 ＝３．４８×１０-5 が得られた。 【００８２】このａ1 〜ａ5 を磁気カードに磁気カード
書き込み装置を用いて書き込んだ。 （３） 未知試料の測定 前記（２）で用いた比濁分析装置に連結したコンピュー
ターに接続された磁気カード読み取り装置により前記磁
気カードからａ1 〜ａ5 をコンピューターに入力し、ｙ
＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋ａ4 ｘ＋ａ5 を計算
するプログラムを完成させる。次いで、濃度未知試料を
前記（２）の方法に基づいて測定し、得られた信号ｘを
前記コンピューターで濃度を計算すると以下の通りであ
る。 【００８３】 上記結果から、開始月と６ケ月後における測定濃度は実
質的に同一と考えてよく、試薬調製時に作成した検量線
で十分信頼性のある測定が可能であることが判る。 【００８４】実施例５ （１） 試薬 抗ヒトＣ４抗血清（ヤギ）６％、ポリエチレングリコー
ル（分子量２０，０００）１．６％、ＮａＣｌ ０．９
％を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を調製す
る。 【００８５】（２） 検量線の作成 濃度既知のＣ４ ２０μｌと前記（１）で作成した試薬
４００μｌとを３７℃でガラス製の光学セル中で反応さ
せ、これに光線を照射しその散乱光を連続的に比濁分析
装置で測定し、その１次微分の最大値を得た。 【００８６】 Ｃ４濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ Ｃ４濃度ｍｇ／ｄｌ ｍＶ ３．４ ６．１ ３３．５ ４３．４ ６．７ ８．７ ４０．２ ５４．５ １３．５ １６．５ ４６．９ ６２．２ ２０．１ ２６．５ ５３．７ ６９．６ ２６．８ ３４．７ ６０．７ ７８．６ この結果よりＣ４濃度をｙ、１次微分値をｘとしｘ，ｙ
の関係が近似的にｙ＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋
ａ4 ｘ＋ａ5 という関係の型で表わすと、最小二乗法に
よる計算の結果 ａ1 ＝−７．７６×１０-11 ａ4 ＝９．１７×１０-2 ａ2 ＝１．３６×１０-7 ａ5 ＝−０．７０７ ａ3 ＝−７．７８×１０-5 が得られた。 【００８７】このａ1 〜ａ5 を磁気カードに磁気カード
書き込み装置を用いて書き込んだ。 （３） 未知試料の測定 前記磁気カードから前記（２）で用いた装置に内蔵され
た磁気カード読み取り装置によりａ1 〜ａ5 を同様に装
置に内蔵されたコンピューターのメモリーに入力し、ｙ
＝ａ1 ｘ4 ＋ａ2 ｘ3 ＋ａ3 ｘ2 ＋ａ4 ｘ＋ａ5 を計算
するプログラムを完成させる。次いで、濃度未知試料を
前記（２）の方法に基づいて測定し、得られた信号ｘを
前記コンピューターで濃度を計算すると以下の通りであ
る。 【００８８】 上記結果から、開始月と６ケ月後における測定濃度は実
質的に同一と考えてよく、試薬調製時に作成した検量線
で十分信頼性のある測定が可能であることが判る。 【００８９】 【発明の効果】本発明により、従来の比濁法の実施にお
いて、必要とされていた、測定開始前にその都度、濃度
既知の標準物質を用いて検量線を作成することなく、試
薬の保証期間内において未知試料の測定を反復的に行な
うことができ、測定時の検量線作成のための操作の煩雑
性が解消され、また、試薬の節約がもたらされた。さら
に、本発明は検体数の少ない測定、特に、モノテスト試
薬を使用する測定においてきわめて有効である。Description: BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an immunoassay method,
Specifically, suitable for quantitative measurement of antigen or antibody
Immunoassay method and device used for it
is there. [0002] Conventionally, body fluid components such as immunoglobulin
Brin G. A. M, catchers C3, C4, CRP, RF, etc.
As a measurement method, a method for treating a large amount of
Turbidity using an automatic analyzer with a built-in computer
Method, latex nephelometry, laser light scattering, etc.
There is a setting method. [0003] These methods use an antigen-antibody reaction in a solution.
Changes in optical properties due to changes in transmitted or scattered light
Each time, use this as a reference material with a known concentration in advance.
For comparison with the calibration curve created by measuring
This is a method of determining the concentration. [0004] Conventionally, measurement is performed using this automatic analyzer.
The operation procedure of the method is described more specifically as follows.
is there. That is, the reagent (specimen) to be measured is placed in a container such as a cuvette.
And set it in the automatic analyzer and incubate at the appropriate temperature (37 ° C).
Beate. [0005] A calibration curve is created using a standard substance. [0006] -1 corresponding to the measurement items,
Predetermined calibration curve input to ROM or PC
A formula, for example, Y = Ax + B / x is called. [0007] -2 The above parameters are determined by measuring the standard material.
Determine the values of data A and B. -3 based on the parameters A and B determined above
Complete the calibration curve using the above formula. [0008] A sample is measured and its antigen or antibody
The concentration is determined using the above calibration curve. In the above-mentioned conventional method, once
Continuous measurement (when measuring a large amount of sample, 4 times a day)
Continuous measurement is performed on 00 to 500 samples. )
When a new measurement is performed the next day or about one week after
Before starting measurement, make a new calibration curve each time.
It is mandatory to measure from this. [0010] The role of reagent manufacturer and user
Looking at the sharing, it is as follows. (Reagent maker) Reagent manufacture A calibration curve is created with a graph or the like, and the
A calculation formula, for example, Y = Ax + B / x is determined. Soshi
The user is informed of this formula. (User) Before starting measurement of a sample, measurement of a standard substance having a known concentration is first performed.
Parameter and calculate the parameters of the above formula based on the measurement results.
The calibration value is determined and the calibration curve based on the above formula is completed. [0013] Based on the completed calibration curve,
Take one continuous measurement. Each time a new measurement is started,
Is repeated to measure the sample. These conventional methods
Is a measurement method called a calibration system.
Therefore, when measuring a small number of samples,
When measuring samples, the point that a calibration curve is
It is very problematic. Before starting measurement,
Use reagents to measure standard material and create calibration curve
It is expensive and uneconomical. [0015] Therefore, the object of the present invention is to
Create a calibration curve each time a new measurement of the sample is made.
Without having to be prepared and stored on a storage medium during reagent preparation.
When measuring a sample based on a calibration curve or parameters,
The computer calculates and compares the measured value with the measured value.
By providing an immunoassay method and apparatus for calculating the degree
is there. It is another object of the present invention to provide a non-continuous sample
Provides an immunoassay method for efficiently measuring the concentration of a specimen
You. Furthermore, the present invention is used for an immunoassay.
To provide new devices. A more detailed object of the present invention will be described below.
Will reveal itself. Means for Solving the Problems The feature of the present invention is that of an antigen-antibody
From the change in turbidity due to the immune complex caused by the reaction,
Decrease in transmitted light or increase in scattered light Maximum speed or maximum signal
A calibration curve is created based on the value at the time of acceleration, and
Concentration measurement method for measuring the concentration of analytes using X-rays
The measurement within the reagent warranty period after reagent preparation
Before starting a new measurement when performing a discontinuous measurement
In each case, prepare a calibration curve using standard substances with known concentrations.
Created during reagent preparation and stored on a recording medium
Calibration curve or parameters for creating a calibration curve.
The computer then calculates the concentration of the analyte.
And an immunoassay method based on the method.
The present invention provides an immunoassay device used in That is, the present invention provides an optical immunoassay reagent.
And reduction or scatter of transmitted light created when the reagent was prepared.
The value at the maximum speed or maximum acceleration of the increase signal of scattered light
Standard calibration curve or parameters for creating calibration curve
Immunization with the reagent using a recording medium on which the information of
During measurement, the differential signal of the transmitted light decrease or scattered light increase signal
Depending on the road, the maximum speed or maximum acceleration
Measurement values and the information recorded on the medium.
To determine the concentration of the analyte
And (a) a light source; (b) performing an antigen-antibody reaction and passing light from the light source.
The reaction cuvette (c) receives light of a specific wavelength that has passed through the reaction cuvette.
(D) The light received by the photodetector is converted into an electric signal.
Computer (e) to be processed The change speed of the amount of transmitted light by the light received by the photodetector
Finding and inputting this to a computer Differentiation circuit (f) Calibration curve created during preparation of optical immunoassay reagent
Or a recording medium on which information giving a calibration curve is recorded (g) Information necessary for preparing a calibration curve or a calibration curve from a recording medium
An input device for reading and inputting the data to a computer, and (h) data for displaying a result of the arithmetic processing of the computer
-An immunoassay device comprising a display unit. In the present invention, the reagents used are the same
In the plot, the calibration curve or parameters for preparing the calibration curve
Since the parameters are the same, the reagent
Sometimes a calibration curve or parameters for creating a calibration curve are created
Is done. Here, when a reagent is prepared,
Before going to the person performing the immunoassay using the reagent.
Means, usually by the manufacturer and reagent
Record the parameters for creating a calibration curve or calibration curve.
It is supplied to the market as a kit consisting of recording media. One example of the measurement procedure of the immunoassay according to the present invention
Have already been used in the prior art
In contrast to the operation procedure described in the measurement method,
It is as follows. The reagent to be measured is placed in a container such as a cuvette.
Put in the automatic analyzer, set the ink to the appropriate temperature (37 ° C)
Lab. Create a calibration curve. -1 According to the measurement items, the built-in device
Predetermined calibration curve input to ROM or PC
A formula, for example, Y = Ax + B / x is called. -2 Magnetic medium attached to reagent kit
Parameters recorded on a recording medium such as
Complete the calibration curve by inputting the values of A and B.
You. The sample is measured, and the concentration of the antigen or antibody is determined.
decide. In the method of the present invention,
During the warranty period after drug preparation, measurement as in the above-mentioned conventional method
Calibration curve using standard serum with known concentration before starting
Is not performed.
The concentration curve of the analyte is measured by the calibration curve.
You. In addition, the preparation of the above calibration curve is not always necessary when the reagent is prepared.
It is not necessary to create it, just prepare the above parameters
At the time of measurement, based on this parameter when measuring
May be created. The most important feature of the present invention is that
The maximum of the generated signal of decreasing transmitted light or increasing scattered light
Calibration curve based on speed or maximum acceleration value or
Parameters for creating the survey line derived during reagent preparation
Is recorded on a recording medium, and the test object is
Is to prepare a calibration curve for the concentration measurement. This is the role of the reagent manufacturer and the user.
Looking at the sharing, it is as follows. (Reagent maker) Manufacture of reagents Preparation of calibration curve Reduction or scattering of transmitted light using standard substance of known concentration
Based on the value at the maximum speed or maximum acceleration of the light increase signal.
Create a standard calibration curve. That is, corresponding to the measurement item
Formula for the calibration curve, for example, Y = Ax + B / x
Input to computer. Further, parameters corresponding to the reagents, for example,
A and B are also determined. The prepared calibration curve or parameter
Is recorded on a recording medium. The recording medium is as follows.
is there. I. Magnetic cards; IC cards: cards such as punch cards
Class ii. Magnetic tapes; tapes such as cassette tapes iii. Disks such as floppy disks can be read by an input device attached to the computer
Recording medium. (User) A calibration curve was created by the reagent manufacturer during reagent production.
If not, enter the predetermined parameters.
Complete the calibration curve for that reagent.
You. The sample is measured discontinuously, that is,
Then, using the reagent, decrease transmitted light or increase scattered light.
Is measured and differentiated by a differentiating circuit.
Find the value at the speed or the maximum acceleration, and
Pre-created by the above reagent manufacturer without creating a standard calibration curve
Calibration curve or formulas and parameters for the calibration curve
Of the analyte by computer processing using
Decide. The method of the present invention uses a non-calibration
This is called a system and is described in more detail.
In other words, the method of creating the calibration curve created during reagent preparation is
Reduction or scattering of light transmittance due to antigen-antibody reaction in solution
In a method of measuring increased disturbance, an anti-blood
Immune ratio consisting of Qing, salt, polyethylene glycol, etc.
LA sensitized with antibodies or antigens to turbidity reagents or analytes
When preparing a measurement reagent consisting of
The relationship between the analyte and the increase in turbidity caused by reacting with the analyte of known degree
One or more straight or curved lines
Can be created. The above calibration curve is used during reagent preparation.
It is most common to complete it, but to determine the calibration curve
Only the straight line or curve equation for
Separate parameters for linear or curved coefficients
And complete the calibration curve from the parameters when measuring the sample.
You may. The calibration curve or parameter is
Cards such as magnetic cards and IC cards; floppy
Discs: tapes such as cassette tapes and magnetic tapes
Which recording medium to record and the density by using a computer
Analyte concentration can be calculated without using known standards
You. The information recorded on the recording medium is converted to a calibration curve.
Or parameters to create a calibration curve
May be determined as necessary, but in general,
It is determined by the recording capacity of the recording medium. For example, car
When using storage media as recording media, the recording capacity is generally small.
It is preferable to record the above parameters on a recording medium with
No. A storage medium with a large storage capacity, such as a floppy disk
When using discs and tapes, record the calibration curve.
Is preferred. In more detail, the above calibration curve is obtained by
Assuming that the degree is y and the value representing the change in turbidity is x,
Function type y = f (x) (where f (x) = a1 xn
+ A2 xn-1 ... an + 1 or a'1 logx or ea "1x
Etc.). Generally, for example, when manufacturing reagents
Between the concentration of the test substance and the value representing the change in turbidity
The parameter (constant term) of the expression that approximates
Determine using This parameter is
Then a calibration curve can be determined. The above calibration curve or
Parameters and function types (a1 xn ... an + 1 or a1'lo
gx or ea "1x etc.) is recorded on the recording medium.
The sample before or after measuring the sample of unknown concentration.
After calibration, it is necessary to create a calibration curve using the parameters.
is there. All such calibration curve creation operations are performed by a computer.
More can be done. A sample of unknown concentration is allowed to react with a reagent.
Therefore, the turbidity changes. Measuring this change in turbidity
By using the calibration curve, the concentration of the analyte can be calculated.
You. Generally, the calibration curve is input to a computer.
When inputting the above turbidity change,
Enter a program that can calculate the concentration of a substance into a computer.
Power. The program does not require special contrivance,
What is used in the field can be used as it is
No. The reagent used in the present invention is used during the period of use.
Prepared or selected to be stable and used.
In an immunoturbidimetric reagent, for example, an antiserum concentration of 3-33%, N
aCl 0.9%, polyethylene glycol (molecular weight
6,000 to 20,000) 1 to 4% long term
Use stable reagents. In addition, the antigen or latex particles
For latex reagents with immobilized antibodies, for example
If the average particle diameter (D) is 0.1 to 0.5 μm and
Latex to average particle diameter (d) of latex particles
The ratio (D / d) of the average particle diameter (D) of the reagent is 1.3 to 3.
0 and zeta potential -20 mV to 10 mV
And the absorbance is in the range of 0.5 to 1.5 at an optical path length of 10 mm.
Use the long-term stable latex reagent in the box. The above la
The types of tex particles used for antigen-antibody reactions
Various types of known lattes are known even in the present invention.
Particles can be used without particular limitation. Especially suitable
Examples of the materials used include polystyrene and steel.
Len-butadiene copolymer, styrene-methacrylic acid copolymer
Polymer, polymethyl methacrylate, polyglycidyl
Methacrylate, acroin-ethylene glycol dime
Emulsion polymerization such as tacrylate copolymer
Polymer latex, or silica, silica-amyl
Inorganic oxides such as alumina and alumina, or inorganic oxides
Inorganic with functional group introduced by operation such as run coupling treatment
Particles. The antibody or antigen used in the present invention comprises:
There is no particular limitation, and known ones can be used. Suitable for use
For example, a typical example used is a modified cancer
Maglobulin, antinuclear factor, human albumin, anti-human albumin
Bumin antibody, immunoglobulin G (IgG), anti-human I
gG antibody, immunoglobulin A (IgA), anti-human Ig
A antibody, immunoglobulin M (IgM), anti-human IgM
Antibody, anti-human IgE antibody, streptolysin O, strain
Putkinase, hyaluronidase, C-reactive protein (C
RP), anti-human CRP antibody, alpha-fetoprotein
(AFP), anti-AFP antibody, carcinoembryonic antigen (CE
A), anti-human CEA antibody, human chorionic gonadotropin
(HCG), anti-HCG antibody, anti-estrogen antibody, anti-a
Insulin antibody, hepatitis B surface antigen (HBS), anti-HB
S antibody, Treponema pallidum antigen, Rubella antigen, Influenza
The antigen, complement C1q, anti-C1q antibody, anti-C5 antibody, anti-C4 antibody
Body, anti-transferrin antibody, and the like. In the present invention, the protein is not produced by the antigen-antibody reaction.
The following equipment measures the change in turbidity due to immune complexes.
There is no particular limitation, such as those with a mechanism.
come. Generally, when measuring transmitted or scattered light
For selecting a specific wavelength, mixing reagents and samples
Stirring mechanism that keeps cells and reagents at a specific temperature
Structure, transmitted light signal or scattered light signal due to generation of antigen-antibody reaction
A mechanism that can continuously track changes in the signal, whether this signal changes
Has a circuit that can output first and second derivative signals
Is desirable. Specific Measurement Used in the Measurement Method of the Present Invention
A block diagram of the device is shown in FIG. The luminous flux from the light source 1 is
First, the light is applied to the spectroscopic element 2, where light of a specific wavelength is selected.
After the reaction is completed, the reaction
The light is irradiated to the cut 3. The light transmitted through the reaction cuvette 3 is
The light is received by the photodetector 5 and converted into an electric signal. The electric signal based on the amount of transmitted light is amplified by an amplifier.
The electric signal is amplified by a differentiating circuit 7.
Differentiation processing, that is, change rate of transmitted light amount (dA / dt)
Is calculated by the computer 8, and the
The original or antibody concentration is calculated and displayed on the data display section 10.
Is displayed. In carrying out the present invention, a calibration curve
Device 9 for inputting necessary information for the reaction, reaction cuvette 3
The apparatus is constituted by the stirring mechanism 4 and the sample dispensing mechanism 11 of FIG.
It is. The light source 1 is, for example, a normal tungsten lamp
The reaction cuvette 3 has, for example, an inner diameter
7mm transparent glass or synthetic resin (for example, police
A cuvette made of (ethylene) may be used. The spectroscopic element 2 uses a normal interference filter.
The measurement wavelength provided in the present invention is antigen-antibody.
The most suitable one can be selected depending on the type of body reaction. Ma
In addition, the photodetector 5 may be a normal photocell, which is necessary for the calibration curve.
The input device 9 for inputting necessary information is, for example, a magnetic card reader.
Recorder, cassette tape recorder, disk drive unit
Knits, barcode readers, etc. can be used. The measuring method of the present invention is described below.
Especially useful in measurement methods using monotest reagents
It is effective. That is, the monotest reagent is used for one sample.
Dispensed drug and the reagent container is substantially transparent
Transparent or translucent plastic
Polystyrene, polymethyl methacrylate, polyvinyl chloride
Or glass or polypropylene
Since the test tube and optical measurement cell are also used,
Does not require separate preparation of test tubes and optical measurement cells.
Since reagents have been dispensed, instruments (pipettes) are not necessary.
It is important. Furthermore, after use because it is disposable
Discard, no need to clean test tubes or cells. Also, reagent
Filling is performed by a controlled manufacturing process,
A result with small errors and good reproducibility can be obtained. And tight
Reagents required for the number of measurements required for suddenly brought samples
You only need to prepare the reagents,
Less likely. As mentioned above, monotest reagents are used for
It is very suitable for body treatment. But this
When performing measurements using Monotest reagents,
With the conventional measurement method described, the user must
Several standard solutions must be measured in order to create a standard curve
No. And measurement of the standard solution every such measurement day
Is a heavy burden in facilities that process large amounts of specimens a day.
Does not measure, but measures only a few unknown samples per day
In such a case, it becomes a considerable burden and
Making full use of the advantages of measurement with Notest reagent
Is something that cannot be done. On the other hand, in the measuring method of the present invention,
Is within the warranty period of the reagent after reagent preparation, for example
For example, for repeated measurements within 6 months,
Is it necessary to measure the reference material to create a dose curve?
The full benefits of monotest reagents
It is possible to do it. The key used in the immunoassay of the present invention.
The kit comprises the above reagents, particularly preferably monotest reagents,
Calibration curve or calibration curve created during reagent preparation as described above
A recording medium on which parameters for completing
For example, the cards, tapes or floppy disk
And the like are appropriately combined. The immunoassay of the present invention is systematically
The explanation is as follows. First, the antigen-antibody reaction
The change in turbidity caused by the immune complex
Decrease or increase of scattered light Maximum signal speed or maximum acceleration
To create a calibration curve or a calibration curve based on the values at
Requires a calibration curve measurement unit to determine parameters for
You. This calibration curve measurement unit is based on a sample whose analyte concentration is known.
As described above or as shown in the embodiments described later.
Table 2 shows the change in turbidity due to the analyte concentration y and the antigen-antibody reaction.
Determine the function y = f (x) between the given value x. at the same time
Regarding the constants (parameters) of the above mathematical expression related to f (x)
Generally, it is determined using the least squares method. The above calibration curve
To create a calibration curve or calibration curve to be created in the measurement section
Parameters to calculate the concentration of the analyte in the sample.
Parameters for creating a single calibration curve or
It is the most important operation unit because it is the main unit. The calibration curve created by the calibration curve measuring section or
The parameters are recorded and stored on a recording medium, for example,
It is transmitted from the reagent manufacturer to the user. The above recording medium
Is generally used for storage, transmission and handling.
Hardware, tapes, floppy disks, etc.
Suitable. The above calibration curve or parameters were recorded.
This information from the recording medium is built into the computer
The data is supplied to the computer of the analyzer and
Is set. If the information is a parameter, the parameter
It is necessary to create a calibration curve from the parameters. Therefore
When using the parameters as information on the recording medium,
Alternatively, a function formula for creating a calibration curve is stored in a computer.
Or at the same time, and use a computer to
It is preferable to create one. In the above calculation unit, the test object in the sample
To measure changes in turbidity caused by antigen-antibody reactions
The calibration curve based on the change in turbidity transmitted from the body measurement unit
Use to calculate the concentration of the analyte and output
You can do it. In the arithmetic unit, the input information is
The program used to calculate the output information is
It is not characteristic to
If necessary, use well-known or well-known
Whatever is arranged may be used. Required as input information to the arithmetic unit
One of the important factors is that the analyte in the sample
The change in turbidity that occurs when it occurs. Such information is
Measured by the sample measurement unit described in the accompanying drawings
You. As described above, the operation in the sample measurement section is performed in the sample
Change in turbidity caused by antigen-antibody reaction between specimen and reagent
It is common to catch light with a photodetector and use the information
It is a target. As is clear from the above description, the present invention has
Functionally measures the dose measuring unit, recording unit, sample measuring unit and calculation unit
Significant value as a linked immunoassay system
Things. In order to explain the present invention in more detail, the following
The present invention will be described by way of examples only.
It is not limited. EXAMPLES Example 1 (1) Reagent anti-human IgG antiserum (goat) 32%, polyethylene glycol
1.8% Cole (molecular weight 6,000), 0.1% NaCl.
Prepare 10 mM phosphate buffer (pH 7.2) containing 9%
I do. (2) Preparation of calibration curve 10 μl of IgG of known concentration and reagent 65 prepared in (1)
0 μl in a plastic optical cell at 37 ° C.
Absorbance at 450nm continuously measured with a turbidimeter
Then, the maximum value of the first derivative was measured. IgG concentration mg / dl mV IgG concentration mV 204 24.5 1428 185 408 54.5 1632 198 612 98 2448 242 816 116 2652 260 1020 137 2856 266 1224 165 3063 G When the differential value is x, x,
The relation of y is approximately y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2
+ A4 x + a5 The least squares method
As a result of this calculation, a1=-2.93.times.10@-7 a4 = 9.20 a2=2.89.times.10@-4 a5 = 2.06 a3 = -0.05 was obtained. These a1 to a5 are replaced with magnetic cards
Written using a writing device. (3) Measurement of unknown sample A computer connected to the turbidimetric analyzer used in (2) above
The magnetic card reader connected to the
Input a1 to a5 from the magnetic card to the computer,
Y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2 + a4 x + a5
Complete the program to calculate. Next, the sample whose concentration is unknown
Is measured by the same method as in the above (2), and the obtained signal
Entering the signal x into the computer and calculating the concentration
It is as follows. [0065] From the above results, the measured concentrations at the start month and 6 months later are not
Calibration curve created during reagent preparation
It can be seen that a sufficiently reliable measurement is possible. Example 2 (1) Reagent anti-human IgA antiserum (goat) 20%, polyethylene glycol
Cole (molecular weight 20,000) 2%, NaCl 0.9
Prepare 10 mM phosphate buffer (pH 7.2)
You. This is converted to a 7 mm optical path length poly including a cylindrical stirrer.
Dispense 400 μl into a styrene optical cell and
Prepare monotest reagent by sealing with lumi foil.
Was. (2) Preparation of Calibration Curve 10 μl of IgA of known concentration and the above monotest reagent were
Mix while stirring in the photometer (Fig. 1) and react at 37 ° C
And continuously measure the absorbance at 450 nm.
Got the maximum of minutes. IgA concentration mg / dl mV IgA concentration mg / dl mV 42.2 18.8 302.4 248.0 86.4 83.6 345.6 275.4 129.6 129.0 388.8 316. 6 172.8 165.0 432.0 344.2 216.0 206.3 475.2 371.1 259.2 238.7 518.4 406.6 From these results, the IgA concentration is expressed as y and the first derivative is expressed as y. x and x,
The relation of y is approximately y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2
+ A4 x + a5 The least squares method
A1 = 1.69 × 10−12 a4 = 1.24 × 10−2 a2 = −1.98 × 10−8 a5 = 19.2 a3 = 7.85 × 10−5 . This y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2 +
a4 x + a5 to floppy disk drive
Written using the device. (3) Measurement of unknown sample The turbidity used in (2) above was measured from the floppy disk.
Data stored in a computer connected to the analyzer.
Calibration curve y = a1 x4 + a2 x3 by disk drive device
Read + a3 x2 + a4 x + a5. Next, the sample of unknown concentration was prepared by the method of the above (2).
The signal x obtained was measured in the same manner as
Is calculated as follows. [0072] From the above results, the measured concentrations at the start month and 6 months later are not
Calibration curve created during reagent preparation
It can be seen that a sufficiently reliable measurement is possible. Example 3 (1) Reagent anti-human IgM antiserum (goat) 8%, polyethylene glyco
2.3% (molecular weight 20,000), NaCl 0.
Prepare 10 mM phosphate buffer (pH 7.2) containing 9%
I do. (2) Preparation of calibration curve 20 μl of known concentration of IgM and reagent prepared in the above (1)
400 µl at 37 ° C in a plastic optical cell
And continuously measure the absorbance at 450 nm with a turbidimeter.
And the maximum value of the first derivative was obtained. IgM concentration mg / dl mV IgM concentration mg / dl mV 26.2 7.7 157.2 63.3 52.4 15.8 183.4 71.7 78.6 26.4 209.6 81.6. 8 104.8 38.4 235.8 91.2 131.0 50.3 262.0 108.6 From this result, the IgM concentration is represented by y, the first derivative is represented by x, and x,
The relation of y is approximately y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2
+ A4 x + a5 The least squares method
As a result of the calculation according to, the result was as follows. A1 = −4.88 × 10−10 a4 = 0.441 a2 = 1.08 × 10−6 a5 = −1.35 a3 = −7.81 × 10−4 These a1 to a5 are cassette tapes. Writing device (case
Using a tape recorder. (3) Measurement of unknown sample A computer connected to the turbidimetric analyzer used in (2) above
By a cassette tape reader connected to the
A1 to a5 from the cassette tape to computer
Enter y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2 + a4 x +
Complete the program to calculate a5. Then the concentration
An unknown sample is measured based on the method (2) above and obtained.
When the concentration of the signal x calculated by the computer is
It is as follows. [0078] From the above results, the measured concentrations at the start month and 6 months later are not
Calibration curve created during reagent preparation
It can be seen that a sufficiently reliable measurement is possible. Example 4 (1) Reagent anti-human C3 antiserum (goat) 15%, polyethylene glyco
(Molecular weight 20,000) 1.7%, NaCl 0.
Prepare 10 mM phosphate buffer (pH 7.2) containing 9%
I do. (2) Preparation of calibration curve 20 μl of C3 of known concentration and the reagent 40 prepared in (1)
0 μl in a plastic optical cell at 37 ° C.
Absorbance at 450nm continuously measured with a turbidimeter
Then, the maximum value of the first derivative was obtained. C3 concentration mg / dl mV C3 concentration mg / dl mV 17.1 18.0 170.5 196.5 34.1 45.2 204.6 241.2 68.2 95.3 238.7 280. 7 102.3 130.4 272.8 281.3 136.4 172.9 306.9 316 From this result, the C3 concentration is y, and the first derivative is x, x, y
Is approximately y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2 +
In terms of the relationship type a4 x + a5, the least squares method
As a result of the calculation, a1 = 3.00 × 10−12 a4 = 5.13 × 10−2 a2 = −1.59 × 10−8 a5 = 3.11 a3 = 3.48 × 10−5 . These a1 to a5 are replaced with a magnetic card
Written using a writing device. (3) Measurement of unknown sample A computer connected to the turbidimeter used in (2) above
The magnetic card reader connected to the
Input a1 to a5 from the ki card to the computer, and
= A1 x4 + a2 x3 + a3 x2 + a4 x + a5
Complete the program you want to do. Next, the sample whose concentration is unknown
The signal x obtained by measurement based on the method (2) is obtained.
The concentration calculated by the computer is as follows:
You. [0083] From the above results, the measured concentrations at the start month and 6 months later are not
Calibration curve created during reagent preparation
It can be seen that a sufficiently reliable measurement is possible. Example 5 (1) Reagent anti-human C4 antiserum (goat) 6%, polyethylene glycol
(Molecular weight 20,000) 1.6%, NaCl 0.9
Prepare 10 mM phosphate buffer (pH 7.2)
You. (2) Preparation of calibration curve 20 μl of C4 of known concentration and the reagent prepared in the above (1)
400 μl was reacted at 37 ° C. in a glass optical cell.
And irradiate it with light, and continuously analyze the scattered light by turbidimetry.
It was measured with an instrument and the maximum value of the first derivative was obtained. C4 concentration mg / dl mV C4 concentration mg / dl mV 3.4 6.1 33.5 43.4 6.7 8.7 40.2 54.5 13.5 16.5 46.9 62. 2 20.1 26.5 53.7 69.6 26.8 34.7 60.7 78.6 From this result, the C4 concentration is y, and the first derivative is x, x, y
Is approximately y = a1 x4 + a2 x3 + a3 x2 +
In terms of the relationship type a4 x + a5, the least squares method
As a result of the calculation, a1=-7.76.times.10@-11 a4=9.17.times.10@-2 a2=1.36.times.10@-7 a5 = -0.707 a3=-7.78.times.10@-5 Was done. These a1 to a5 are replaced with a magnetic card
Written using a writing device. (3) Measurement of unknown sample from the magnetic card built into the device used in (2) above
A1 to a5 are similarly mounted by the magnetic card reader.
Input to the computer's built-in memory
= A1 x4 + a2 x3 + a3 x2 + a4 x + a5
Complete the program you want to do. Next, the sample whose concentration is unknown
The signal x obtained by measurement based on the method (2) is obtained.
The concentration calculated by the computer is as follows:
You. [0088] From the above results, the measured concentrations at the start month and 6 months later are not
Calibration curve created during reagent preparation
It can be seen that a sufficiently reliable measurement is possible. According to the present invention, the conventional turbidimetry can be carried out.
Before the start of the measurement.
Without preparing a calibration curve using known standards,
Repeat measurements of unknown samples within the drug warranty period.
Operation for creating a calibration curve during measurement
Performance and reagent savings. Further
In addition, the present invention relates to measurement with a small number of samples,
It is extremely effective in measurement using drugs.

【図面の簡単な説明】 【図１】本発明の測定方法を実施する装置のブロック図
である。 【符号の説明】 １ 光源 ２ 分光素子 ３ 反応キュベット（又はセル） ４ 攪拌機構 ５ 光検出器 ６ 増幅器 ７ 微分回路 ８ コンピューター ９ 入力装置 １０ データー表示部 １１ 検体分注機構BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a block diagram of an apparatus for performing a measurement method according to the present invention. [Description of Signs] 1 Light source 2 Spectroscopic element 3 Reaction cuvette (or cell) 4 Stirring mechanism 5 Photodetector 6 Amplifier 7 Differentiator 8 Computer 9 Input device 10 Data display unit 11 Sample dispensing mechanism

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 三谷 勝男 神奈川県藤沢市鵠沼神明２−12−21 合議体 審判長 市川 信郷 審判官 志村 博 審判官 小松 徹三 (56)参考文献 特開 昭59−10850（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−154161（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−211663（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−8984（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−154438（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−151342（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−109837（ＪＰ，Ａ) 実開 昭56−38859（ＪＰ，Ｕ)   ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page    (72) Inventor Katsuo Mitani               2-12-21 Shinmei Kugenuma, Fujisawa City, Kanagawa Prefecture     Panel     Referee Nobugo Ichikawa     Judge Hiroshi Shimura     Referee Tetsuzo Komatsu                (56) References JP-A-59-10850 (JP, A)                 JP-A-60-154161 (JP, A)                 JP-A-58-211663 (JP, A)                 JP-A-51-8984 (JP, A)                 JP-A-55-154438 (JP, A)                 JP-A-56-151342 (JP, A)                 JP-A-58-109837 (JP, A)                 Shokai Sho 56-38859 (JP, U)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】 １．光学的免疫測定試薬と該試薬を調製した際に作成し
た、透過光の減少又は散乱光の増加信号の最大速度又は
最大加速度のときの値を基準とした検量線又は検量線作
成のためのパラメーターの情報を記録した記録媒体とを
用い、該試薬による免疫測定時に、透過光の減少又は散
乱光の増加信号を微分回路により、微分処理して得た最
大速度又は最大加速度のときの測定値と該媒体に記録さ
れた情報とをコンピューターで演算処理することによ
り、被検物の濃度を決定することを特徴とする免疫測定
法。 ２．（ａ）光源 （ｂ）抗原抗体反応を実施し且つ光源からの光が通過す
る反応キュベット （ｃ）反応キュベットを通過した特定波長の光が受光さ
れる光検出器 （ｄ）光検出器で受光された光が電気信号に変換されて
演算処理されるコンピューター （ｅ）光検出器で受光された光で透過光量の変化速度を
求め、これをコンピューターに入力する微分回路 （ｆ）光学的免疫測定試薬の調製時に作成された検量線
又は検量線を与える情報を記録させた記録媒体 （ｇ）記録媒体から検量線又は検量線作成に必要な情報
を読みとり、コンピューターに入力する入力装置 及び （ｈ）コンピューターの演算処理結果を表示するデータ
ー表示部 よりなる免疫的測定装置(57) [Claims] Optical immunoassay reagents and parameters for preparing a calibration curve or a calibration curve based on the value at the time of the maximum speed or maximum acceleration of the signal of decrease of transmitted light or increase of scattered light created when preparing the reagent. Using a recording medium recording the information of the above, at the time of immunoassay with the reagent, the measured value at the time of the maximum velocity or the maximum acceleration obtained by differentiating the signal of decrease of transmitted light or increase of scattered light by a differentiating circuit. An immunoassay method, wherein the concentration of a test substance is determined by arithmetically processing information recorded on the medium with a computer. 2. (A) a light source (b) a reaction cuvette in which an antigen-antibody reaction is performed and light from the light source passes through (c) a light detector that receives light of a specific wavelength that has passed through the reaction cuvette (d) light received by a light detector (E) a computer in which the converted light is converted into an electric signal and subjected to arithmetic processing (e) a change rate of the amount of transmitted light is obtained from the light received by the photodetector, and the obtained change rate is input to the computer; (G) a calibration curve prepared at the time of preparation of the reagent or a recording medium on which information giving the calibration curve is recorded; (g) an input device which reads information necessary for preparing the calibration curve or the calibration curve from the recording medium, and inputs the information to a computer; An immunoassay device consisting of a data display that displays the results of computer processing