JP2769311B2 - ヒト乳癌細胞に対するモノクローナル抗体 - Google Patents
ヒト乳癌細胞に対するモノクローナル抗体Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】この発明は免疫学並びに癌の
診断及び治療に有用なモノクローナル抗−ヒト乳癌抗体
に関する。 【0002】 【従来の技術】1970年代半ば以来、ヒト乳癌関連抗
原と反応するネズミモノクローナル抗体の多数の報告が
存在する。これらの報告された研究においては、ネズミ
がヒト−乳脂肪球蛋白質(milk fat globule protein)
、乳癌セルライン、又は乳癌膜抽出物で免疫感作及び
追加免疫された。免疫脾細胞がマウス骨髄腫細胞と融合
され、そしてハイブリドーマが、***又は乳癌抗原に対
する培地の幾らかの特異性に基いて選択された。 【0003】Taylor-Papadimitriou, J.等、インターナ
ショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー(Int. J. Ca
ncer)(1981)28:17−21;Yuan, D.等、J
NCI(1982)68:719−728;Ciocca, D.
R. 等、キャンサー・リサーチ(Cancer Res.)42:4
256−4258。これらの先行技術の抗体の正常組織
反応性はこの発明の抗体の正常組織反応性と異る。 【0004】多くの先行研究者は、 "イムノトキシン"
を製造するための細胞毒性剤と抗体との連結を報告し又
は示唆した。最近の関心は、細菌又は植物由来の毒素の
酵素的活性部分(A鎖)にヘテロ2官能剤を介して結合
したモノクローナル抗体のイムノトキシンに集中してい
る。Neville, D. M.及びYoule, R. J.、イムノロジカル
・レビュー(Immunol Rev.)(1982)62:75−
91;Ross, W. C. J.等、ヨーロピアン・ジャーナル・
オブ・バイオケミストリー(European J. Biochem.)
(1980)104;Vitteta, E. S.イムノロジカル・
レビュー(Immunol Rev.)(1982)61:158−
183;Rosa, V.等、キャンサー・リサーチ(Cancer R
es.)(1982)42:457−464;Trowbridge,
I. W. 及びDomingo, D. J.、ネイチュアー(Nature) (C
omd)(1981)294:171−173。 【0005】 【発明の概要】本発明は、乳癌組織に存在し、454C
11(ATCC No.HB8484),452F2
(ATCC No.HB10811),520C9(A
TCCNo.HB8696)及び741F8(ATCC
No.HB10807)から成る群から選択されたハ
イブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体と特
異的に結合する210kDのモノマー蛋白質に特異的に
結合する標識されたモノクローナル抗体又はその断片を
含んで成る乳癌細胞検出剤;並びに乳癌組織に存在し、
454C11(ATCC No.HB8484),45
2F2(ATCCNo.HB10811),520C9
(ATCC No.HB8696)及び741F8(A
TCC No.HB10807)から成る群から選択さ
れたハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗
体と特異的に結合する210kDのモノマー蛋白質に特
異的に結合するモノクローナル抗体又はその断片を含ん
で成るイムノトキシンを含む殺乳癌剤に関する。 【0006】 【具体的な説明】この明細書において使用する場合、 "
モノクローナル抗体" は均一な抗体集団を有する抗体組
成物を意味する。抗体の起原又はそれが作られる方法に
関しては限定されないことが意図される。例示されるモ
ノクローナル抗−ヒト乳癌抗体に関してこの明細書にお
いて使用される "機能的に同等" なる語は、(a)例示
されたモノクローナル抗体を交差ブロックし;(b)ヒ
ト乳癌細胞に選択的に結合し;(c)G又はMアイソタ
イプを有し;(d)免疫沈澱又はサンドイッチイムノア
ッセイにより決定される場合同じ抗原に結合し;そして
(e)リシンA鎖に結合された場合MCF−7,CAM
A−1,SKBR−3、又はBT−20細胞の少なくと
も1つに対して約10nMより小さいTCID50%を示
すモノクローナル抗体を意味する。 【0007】この発明のモノクローナル抗体生産性ハイ
ブリドーマに関してこの明細書において使用される場
合、 "子孫" なる語は、世代又は核型の同一性とは無関
係に、親により生産されるモノクローナル抗−ヒト−乳
癌抗体を生産する、親ハイブリドーマのすべての誘導
体、結果物及び子を包含することが意図される。 【0008】モノクローナル抗体製造 この発明のハイブリドーマを調製するために使用される
抗体生産性融合パートナーは、マウス等ヒト以外の動物
を生ヒト乳癌細胞又はそれから調製される膜抽出物によ
り免疫感作することにより生じる。動物に免疫原量の細
胞又は抽出物を腹腔内接種し、そして次に同様の量の免
疫源により追加免疫する。最終追加免疫の数日後、免疫
された該動物から脾臓を集め、そして融合において使用
するため、これから細胞懸濁液を調製する。 【0009】Buck, D. W. 等、イン・ビトロ(In Vitr
o)(1982)18:377−381により改変され
たKohler, B 及びMilstein, G 、ネイチュアー(Natur
e)(1975)256:495−497の一般的体細
胞ハイブリダイゼーション技法を用いて、脾細胞とネズ
ミ腫瘍パートナーとからハイブリドーマを調製する。入
手可能なネズミ骨髄腫ライン、例えばサルク・インステ
ィテュート、セルディビジョンセンター、サンジェゴ、
カリホルニア、USAをハイブリダイゼーションにおい
て使用することができる。 【0010】基本的には、ポリエチレングリコールのご
とき融合剤を用いて腫瘍細胞と脾細胞とを融合せしめる
ことを含む。融合の後、融合媒体から細胞を分離し、そ
して選択的増殖培地、例えばHAT培地に増殖せしめる
ことによりハイブリダイズしていない親細胞を除去す
る。所望によりハイブリドーマを拡げ、そして抗原とし
て免疫剤(乳癌細胞又は膜抽出物)を用いて常用のイム
ノアッセイ法(例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イ
ムノアッセイ、又は蛍光イムノアッセイ)により、抗−
ヒト乳癌活性について上清を測定する。陽性クローンを
さらに特徴付けてこれらがこの発明の抗体の基準に合致
するか否かを決定する。 【0011】このような抗体を生産するハイブリドーマ
を、公知の方法を用いてイン−ビトロ又はイン−ビボで
増殖せしめることができる。モノクローナル抗体は、所
望により、常用の免疫グロブリン精製法、例えば硫酸ア
ンモニウム沈澱、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフ
ィー、及び限外濾過により、場合に応じて培地又は体液
から単離することができる。 【0012】モノクローナル抗体選択/特徴付け モノクローナル抗体の重要な特徴付けは(1)これらの
免疫グロブリンクラス、(2)ヒト乳癌細胞に対するこ
れらの選択性及びこれらが結合するヒト乳癌細胞の範
囲、及び(3)効果的な抗−ヒト乳癌イムノトキシンを
製造する場合のその有用性である。 【0013】与えられた抗体の選択性及び範囲は、
(1)ヒト乳癌組織及び細胞並びに(2)***及び他の
由来の正常なヒト組織又は細胞のパネルに対してそれを
試験することにより決定される。請求の範囲に記載され
ている抗体の選択において、約22000個の増殖ハイ
ブリドーマ培養物をまず、免疫乳癌膜又はセルライン、
8種類の正常組織膜のパネル、線維芽細胞セルライン及
び乳癌腫瘍凍結切片に対してスクリーニングした。 【0014】新生物材料と反応するが正常な材料と反応
しないクローンをこの最初のスクリーニングにおいて同
定し、そしてアイソタイプの決定並びに選択性及び範囲
についての追加のスクリーニングにより選択した。追加
のスクリーニングは、16個の正常組織切片、5種類の
正常血球型、11個の非***新生物切片、21個の乳癌
切片及び14個の乳癌セルラインを用いる。抗体が約1
/3未満の正常組織及び血球タイプと強く結合すれば、
それらが乳癌に選択的に結合すると認められた。127
の抗体を精製し、そして追加のスクリーニングにおいて
試験した。 【0015】許容し得る選択性及び範囲を示す抗体を、
カップリング剤としてN−サクシニミジル−3−(2−
ピリジルジチオ)プロピオネート(SPDP)又はイミ
ノチオラン(IT)を用いてリシンA鎖に複合体化し
た。この複合体を24時間組織培養測定においてMCF
−7,CAMA−1,SKBR−3、及びBT−20細
胞に対して試験した。 【0016】16種類の抗体が、これらの乳癌系の少な
くとも1つに対して許容し得るイムノトキシン活性(1
0nMより小さいTCID50%)を示した。この16種
類の内の7種類が同じ210,000ダルトンの抗原を
認識し、7種類の内の6種類がおそらく同じエピトープ
を認識するが親和性において異ることが見出された。こ
れらの抗体の一層詳細な特徴付けが下記の例において与
えられる。 【0017】免疫化学物質 最も重要なこの発明のモノクローナル抗体の免疫化学的
誘導体はイムノトキシン(抗体と細胞性毒素との複合
体)及びラベルされた(例えば、放射性ラベルされた、
酵素ラベルされた、又はフルオロクロームラベルされ
た)誘導体(この誘導体中でラベルはラベルされた抗体
を含有する免疫複合体を同定するための手段を提供す
る)である。 【0018】イムノトキシンの細胞毒成分は、細胞毒性
剤、細菌もしくは植物起原の酵素的に活性な毒素、又は
これらの毒素の酵素的に活性な断片( "A鎖" )であ
る。酵素的に活性な毒素及びその断片が好ましく、そし
てジフテリア毒素の非結合性活性断片であるジフテリア
A鎖、エキソトキシンA鎖〔シュードモナス・アエルギ
ノーサ(Pseudomonas aeruginosa)から〕、リシンA
鎖、アブリンA鎖、モデッシンA鎖、アルファーサルシ
ン、アレウリテス・フォルディー(Aleurites fordii)
蛋白質、ジアンチン蛋白質、フィトラッカ・アメリカナ
(Phytolacca americana)蛋白質(PAPI,PAPII
及びPAP−S)、モモルディカ・カランチァ(momord
ica charantia)阻害剤、クルシン(curcin)、クロチン
(crotin)、サポナリア・オフィシナリス(saponaria
officinalis )阻害剤、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリ
ン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictoci
n)、フェノマイシン、及びエノマイシンにより例示さ
れる。 【0019】リシンA鎖、ジフテリア毒素の非結合性活
性断片、アルビンA鎖、及びPAPIIが好ましい。モノ
クローナル抗体とこれらの細胞毒性成分との複合体は種
々の2官能蛋白質カップリング剤を用いて調製すること
ができる。このような試薬の例はSPDP,IT、イミ
ドエステルの2官能誘導体、例えばジメチルアジピミデ
ート・HCl、活性エステル、例えばジサクシニミジル
スベレート、アルデヒド、例えばグルタルデヒド、ビス
−アジド化合物、例えばビス(p−アジドベンゾイル)
ヘキサンジアミン、ビス−ジアゾニウム誘導体、例えば
ビス−(p−ジアゾニウムベンゾイル)−エチレンジア
ミン、ジイソシアネート、例えばトルエン2,6−ジイ
ソシアネート、及びビス−活性弗素化合物、例えば1,
5−ジフルオロ−2,4−ジニトロベンゼンである。 【0020】診断の目的でヒト乳癌細胞をイン−ビトロ
で殺すために使用する場合、典型的には複合体が約10
nM以上の濃度において細胞培養培地に加えられる。イン
−ビトロで使用するための適用の剤形及び方法は臨界的
ではない。培地又は灌流媒体との相溶性剤が一般に使用
されよう。細胞毒性を常用技法により読み取ることによ
って乳癌の存在又は程度を決定することができる。 【0021】療法のためにイン−ビボで使用される場
合、イムノトキシンは療法的有効量(すなわち、患者の
腫瘍負担を除去し又は軽減する量)において患者に投与
される。これらは一般に、非経腸的に、好ましくは静脈
内に投与される。投与量及び投与方法は癌の性質(一次
癌又は転移癌)及びその集団、特定のイムノトキシンの
特徴、例えばその治療係数、患者、並びに患者の病歴に
依存するであろう。投与されるイムノトキシンの量は典
型的には約0.1〜約10mg/kg患者体重であろう。 【0022】非経腸的投与のためには、イムノトキシン
は医薬として許容される非経腸担体と共に単位投与注射
形(溶液、懸濁液、乳濁液)として製剤化されるであろ
う。これらの担体は本来的に非毒性でありそして非療法
的である。このような担体の例は水、塩溶液、リンゲル
溶液、グルコース溶液、及び5%ヒト血清アルブミンで
ある。 【0023】非水性担体、例えば不揮発油及びオレイン
酸エチルを使用することもできる。担体としてリポゾー
ムを使用することもできる。担体は微量の添加剤、例え
ば等張性及び化学的安定性を増強するための物質、例え
ば緩衝剤及び防腐剤を含有することができる。イムノト
キシンは、典型的にはこれらの担体中に約1mg/ml〜1
0mg/mlの濃度で製剤化される。 【0024】乳癌を処置するための細胞毒性放射性医薬
は、高線エネルギー移動(LET)放射性同位元素(例
えば、Y,Pr)を抗体に結合することによって製造さ
れる。この明細書において使用される "細胞毒性成分"
なる語はこのような同位元素を包含することが意図され
る。 【0025】抗体のラベルされた部分を作るために使用
されるラベルは、直接検出され得る成分、例えば蛍光色
素及び放射性ラベル、並びに検出されるために誘導体化
されなければならない成分、例えば酵素を包含する。こ
のようなラベルの例は32P,125I, 3H,14C、フル
オレッセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導
体、ダンシル、ウンベリフェロン、レシフェロン、2,
3−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシュパ
ーオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、リゾチー
ム、及びグルコース−6−ホスフェートデヒドロゲナー
ゼである。 【0026】抗体を、これらのラベルにより公知の方法
で標識することができる。例えば、カップリング剤、例
えばアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミド、イミ
デート、サクシンイミド、ビス−ジアゾ化ベンザジン及
びこれらに類似するものを使用して抗体を上記の蛍光ラ
ベル、化学発光ラベル、及び酵素ラベルにより標識する
ことができる。 【0027】抗体及びラベルされた抗体をイムノイメー
ジング法又はイムノアッセイ法において使用して、患者
における乳癌の存在を検出し、又はそれを有することが
すでに診断されている患者におけるそのような癌の状態
をモニターすることができる。癌の状態をモニターする
場合、定量的イムノアッセイ法を用いなければならな
い。 【0028】このようなモニターにおいては測定は定期
的に行われ、そしてその結果を比較して患者の腫瘍負荷
が増加したか減少したかが決定される。使用することが
できる一般的測定技法には直接測定及び間接測定が含ま
れる。直接測定は患者からの組織サンプル又は細胞をラ
ベルされた抗体と共にインキュベートすることを含む。
サンプルが乳癌細胞を含むなら、ラベルされた抗体はそ
れらの細胞に結合するであろう。 【0029】組織又は細胞を洗浄して未結合ラベル化抗
体を除去した後、組織サンプルをラベルされた免疫複合
体の存在について読み取る。間接測定においては、組織
又は細胞サンプルをラベルされていないモノクローナル
抗体と共にインキュベートする。次に、該モノクローナ
ル抗体に対するラベル化抗体(例えば、ラベルされた抗
ネズミ抗体)で処理し、洗浄し、そしてラベルされた三
次元複合体の存在について読み取る。 【0030】診断的用途のためには、抗体は典型的には
キットの形で分配される。これらのキットは典型的に
は、適当な容器中ラベル化又は非ラベル化形の抗体、イ
ンキュベーション又は洗浄のための試験、キットが間接
測定形であればラベルされていない抗ネズミ抗体、並び
にラベルの性質に依存して基質及び誘導体化剤を含んで
成る。ヒト乳癌抗原対照及び指示書も含めることができ
る。次の例により、この発明の代表的モノクローナル抗
体の調製、特徴及び使用を詳細に記載する。これらの例
は、この発明に限定を加えることをなんら意図するもの
ではない。 【0031】免疫感作 新しく外科摘出したヒト乳癌組織及び種々の正常組織を
用いて、ホモジナイズ及び非連続的シュークロースグラ
ジェント遠心により膜抽出物を調製した。ヒト乳癌セル
ラインをブレスト・キャンサー・タスク・フォース(Br
east Cancer Task Force)、アメリカン・タイプ、カル
チュアー・コレクション(ATCC)、及びメモリアル
・スローン・ケッタリングの Jargen Fogh博士から得
た。 【0032】ブレスト・キャンサー・タスク・フォー
ス、ATCC、及びFogh博士により推奨されるようにし
て細胞を維持しそして継代した。免疫感作のため、10
0μg(Lowry 測定) の蛋白質を含有する膜抽出物又は
一千万個の生乳癌細胞を5週令のBalb/cマウスに
腹腔内投与した。マウスを1箇月間隔で同様に2回追加
免疫した。最後の追加免疫の3日後、細胞融合のため脾
臓を摘出した。 【0033】ハイブリドーマ法 ネズミ骨髄腫系Sp−2/0−Ag14を用いてBuck,
D. W. 等の方法により体細胞ハイブリドを調製した。す
べてのハイブリドーマセルラインは限界稀釈法によりク
ローン化した。融合の半分は乳癌膜抽出物により免疫感
作したマウスからの脾細胞を用い、そして半分は乳癌セ
ルラインにより免疫感作したマウスからの脾細胞を用い
た。これらの融合から83424個のウエルが設けら
れ、この内22,459個がハイブリドーマの増殖を示
した。 【0034】スクリーニング法 ハイブリドーマ上清を、免疫感作用乳癌膜抽出物を用い
る固相エンザイムリンクドイムノソルベントアッセイ
(ELISA)により又は免疫感作用乳癌セルラインを
用いる間接イムノフルオレッセンスアッセイにより、反
応性抗体について測定した。固相膜ELISAのため、
40μlの0.1mg/ml乳癌膜蛋白質をポリ塩化ビニル
(PVC)ミクロタイターウエルに4℃にて12時間置
いた。 【0035】抽出物を吸引し、そして1%ウシ血清アル
ブミン(BSA)を含有するリン酸緩衝化塩溶液(PB
S)によりウエルを洗浄した。次に、ウエルを1:10
稀釈のハイブリダーマ上清45μlと共にインキュベー
トした。稀釈剤は、25mMの緩衝剤、10%ウシ血清及
び0.1%ナトリウムアジドから成る媒体であった。室
温にて30分間置いた後、ウエルを再度洗浄し、そして
1:200稀釈のパーオキシダーゼ接合ヤギ抗−マウス
IgGと共にインキュベートした。 【0036】稀釈剤はPBSであった。次にウエルをP
BSで洗浄し、そして0.1Mクエン酸ナトリウム緩衝
液(pH4.2)中2,2−アジノ−ジ(3−エチルベン
ズチアゾリンスルホン酸200μlと反応せしめた。ミ
クロエリサリーダー上で405nmにおける光学濃度を測
定した。各実験において、陽性対象である抗−β2ミク
ログロブリン5μg/mlを正常ヒト腎臓膜と反応せしめ
た。これは1.0±0.1(標準偏差)の光学濃度を与
えた。バックグラウンドは、マウスモノクローナル抗体
を含まない媒体を用いて0±0.1光学濃度単位(O.D)
であった。乳癌膜抽出物に対して0.7O.D より大きな
反応をもたらすウエルを保持した。 【0037】間接イムノフルオレセンスセルラインアッ
セイのため、免疫感作用セルラインの10万個の乳癌細
胞を、1セットの8チャンバースライドの各チャンバー
に入れた。同様にして、セルラインCC95からの10
万個の線維芽細胞をチャンバーを有するスライドウエル
中で一夜インキュベートした。1%BSAを含有するP
BSにより細胞を洗浄した。 【0038】乳癌及び線維芽細胞の両者のウエルを、
1:10稀釈のハイブリドーマ上清と共に4℃にて30
分間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、そして
1:50稀釈のフルオレッセインイソチオシアナート
(FITC)−接合ヤギF(ab′)2 抗−マウスIg
と共に4℃にて30分間インキュベートした。細胞を3
回洗浄し、PBS中1.5%ホルムアルデヒド中で固定
し、チャンバーを取り出し、そしてPBS中ですすい
だ。 【0039】次に、スライドを、ポリビニルアルコー
ル、グリセリン、緩衝剤及び防腐剤を含有する組成物中
に配置し、そして蛍光顕微鏡により試験した。乳癌細胞
への強い蛍光結合を示すが線維芽細胞への蛍光結合を示
さないハイブリドーマウエルを保持した。5156個の
ハイブリドーマウエルが最初のスクリーニングにおいて
乳癌反応性を示した。 【0040】次に、5156個の陽性ウエルからの上清
を、8種類の正常組織(肝臓、肺、結腸、胃、腎臓、扁
桃腺、脾臓及び膵臓)膜抽出物を用いる固相ELISA
において試験した。0.3より大きなELISA−O.
D.をもたらすすべてのウエルを廃棄した。1101個
の上清が正常組織抽出物と反応しないことが見出され
た。 【0041】1101個のハイブリドーマ上清をヒト乳
癌組織の凍結切断に対して試験した。6ミクロンの切片
をスライドに付着させ、4℃にてアセトン中で10分間
固定し、室温にて10分間乾燥し、PBSで洗浄し、ウ
マ血清でブロックし、そして200μlの未稀釈のハイ
ブリドーマ上清と共に室温にて20分間インキュベート
した。 【0042】スライドをPBSで洗浄し、そして最後に
37℃にて20分間、1:50稀釈のパーオキシダーゼ
接合ラビット抗マウスIgと共にインキュベートし、P
BSで再び洗浄し、そして最後に37℃にて7.5分間
0.01%過酸化水素を含有する0.05MTris緩衝液
(pH7.2)中0.5mg/lジアミノベンジジンと共に
インキュベートした。スライドをヘマトキシリンで染色
し、脱水し、そして35.9%メチル/n−ブチルメタ
クリレートコポリマー、7.1%ブチルベンジルフタレ
ート及び0.3%2,6−ジtertブチル−p−クレゾー
ルを含有する媒体中においた。124ウエルが乳癌選択
的結合をもたらし、そしてクローン化された。 【0043】精製及びクラス決定 モノクローナル乳癌選択的抗体の免疫グロブリンクラス
及びサブクラスを決定した。次に、さらに、2〜3×1
06 ハイブリドーマ細胞を0.2μCi35Sメチオニン
を含有するメチオニン不含培地中で4時間増殖せしめる
ことにより抗体を内部的にラベルした。 【0044】35S−ラベル抗体を固定されたスタフィロ
コッカスA細胞と、又はラビット抗−マウス免疫グロブ
リンによりプレコートされたスタフィロコッカスA細胞
を固定するために使用される組成物と免疫沈澱せしめ、
そしてこの免疫沈澱をSDS−PAGEにより分析して
抗体ライト及びヘビー鎖の移動度、余分の鎖の欠落、並
びにスタフィロコッカスプロテインAと結合する各抗体
の能力を決定した。 【0045】抗体をイン−ビトロで拡張した。Balb
/c又はF1(C57B/6×Balb/c)マウスに
0.5mlのプリスタンを腹腔内(ip)注入し、そして
10〜14日後PBS中100万個の対数期ハイブリド
ーマ細胞を接種した、腹水を−70℃に貯蔵し、そして
解凍し、そしてさらに精製する前に0.8ミクロンフィ
ルターユニットを通して濾過した。 【0046】スタフィロコッカスプロテインAと結合す
るIgG抗体を、アガロース、デキストラン及び/又は
アクリルアミドを含有するプロテインA−クロマトグラ
フ樹脂上での、pH段階グラジエント溶出を用いるアフィ
ニティークロマトグラフィーにより精製した。プロテイ
ンAを結合しなかったIgG抗体を、0℃にて40%飽
和に硫酸アンモニウムを加えることにより沈澱せしめ
た。 【0047】沈澱をPBS中に再溶解し、20mMTris
(pH7.2)に透析し、そしてジエチルアミノエチルセ
ルロース(DEAE)の1.6×50cmカラム上で、
1.5lの0〜600mMNaClグラジエントにより4
℃にて1ml/分の流速で溶出することによりクロマトグ
ラフ処理した。各場合において、カラム画分をSDS−
PAGEによりモニターし、最純抗体画分を一緒にし、
1〜3mg/mlに濃縮し、PBS/0.02%NaN3 に
透析し、そして4℃に貯蔵した。 【0048】IgM抗体を、アガロース、デキストラン
及び/又はアクリルアミドを含有するクロマトグラフ樹
脂の2.6×40cmカラム上でのゲル濾過により、室
温、1ml/分の流速にてPBS/0.01%ナトリウム
アジドで溶出することにより精製した。 【0049】選択性決定 乳癌に対するこれらの選択性を評価するため、精製され
た抗体を、16個の正常組織の切片に対する免疫パーオ
キシダーゼ切片により、及び5個の血球型に対する免疫
蛍光細胞ソーティングにより試験した。イムノパーオキ
シダーゼ染色は上記のようにして行ったが、但しハイブ
リドーマ上清の代りに、1〜40μg/mlの範囲で、P
BS中の精製抗体の既知の稀釈を用いた。 【0050】純粋な抗体をまず力価検定し、乳癌切断に
対して強いイムノパーオキシダーゼ染色をもたらす最小
濃度を見出し、そして次に正常組織試験のためにその濃
度で使用した。末梢血細胞(血小板、リンパ球、赤血
球、顆粒球、及び単球)を、多形核白血球から単球を分
離する媒体を用いて遠心により調製した。細胞を、上記
のようにして決定した最適濃度において、4℃にて30
分間抗体と反応せしめ、洗浄し、1:50稀釈の蛍光イ
ソチオシアナート−複合ヤギ抗−マウスIgと4℃にて
30分間反応せしめ、再び洗浄し、そしてセルソーター
中で試験した。 【0051】洗浄緩衝液及び稀釈剤は1%ゼラチン及び
0.02%ナトリウムアジドを含むPBSであった。セ
ルソーターは、76ミクロンのノズル、及び1ワットの
488nmアルゴンイオンレーザーを装着していた。焦点
を合わせるため、光学レール装置上に8mmの共焦レンズ
を使用した。他の使用フィルターは515nm干渉フィル
ター及び515nm吸収フィルター(散乱レーザー光のた
め)及び前方角光散乱のため中間濃度1.5フィルター
であった。フルオレッセイン蛍光の対数対前方角光散乱
の概略プロットをサンプル分析のために使用した。 【0052】本発明のハイブリドーマにより生産される
抗体の結合挙動を下記の表1に報告する。表 1 正常組織切片への抗体の結合 組 織 抗 体 膵 臓 食 道 肺 腎 臓 結 腸 胃 脳 扁桃腺 33F8 0 2E 0 1T 0 0 0 1Ly 113F1 2Ac 2E 0 0 0 2G 0 1E 245E7 1L 0 1A,M 0 0 2L 0 1E 2G3 2Ac 2E 1A 2T 0 1L 0 1E 260F9 1Ac 2E 0 1T 0 1G 0 2E 280D11 0 1E 0 2T,2B 1L 2L 0 0 266B2 1Ac,1D 2E 0 1T 0 0 0 2E 454C11 1D 1-2E 0 1T 0 0 0 1E 317G5 1Ac,I 0 0 2T 1G 0 0 0 520C9 0 0 0 1T 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 0 0 1G 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 1T 0 0 0 0 761B10 0 0 0 1T 0 0 0 0 【0053】抗 体 肝 臓 心 臓 卵 巣 皮 膚 乳 房 骨 子 宮 膀 胱 33F8 0 0 0 1W 0 1Mk 1L 1E 113F1 0 0 0 0 0 0 0 1E 245E7 0 0 0 2S 2L 0 2L 1E 2G3 0 0 0 0 2E 0 2L 2E 260F9 2D 0 0 2E,2H 2E 0 1L 2E 280D11 2D 0 0 1E,1H 2L 2Gr 2G 0 266B2 0 0 0 2E,2W 1E 0 0 1E 454C11 1D 0 0 1E,H 1E 0 1G 1E 317G5 2D 0 0 0 0 0 1G 0 520C9 0 0 0 0 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 1S 0 0 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 0 0 【0054】染色強度:2=強;1=弱;0=陰性。 A=中隔細胞;Ac=腺房;B=ボーマンのう;D=
管;E=表皮;G=腺;Gr=顆粒球;H=毛包;I=
島;L=管腔士尖端細胞質;Ly=リンパ球;M=マク
ロファージ;Mk=メガコニオサイト;My=ミエリ
ン;S=皮脂;St=間質;T=細管;U=糸球体;W
=汗腺。 血小板、赤血球、リンパ球、単球又は顆粒球に対する結
合は存在せず、但し280D11は顆粒球と弱く結合す
る。いずれの抗体も線維芽細胞と結合しない。 【0055】範囲決定 いかなる範囲の乳癌が各抗体によって認識されるかを決
定するため、乳癌選択的抗体を、27個の異る乳癌の凍
結切片に対するイムノパーオキシダーゼ染色により試験
した。切片染色のために使用された乳癌はすべて浸潤腺
管内癌であり、従って、抗体結合と乳癌の組識学的タイ
プの関連はなされ得なかった。さらに、抗体結合と結節
状態又はエストロゲン受容体状態との間の関連も、提供
者の情報が得られる12の癌について見出されなかっ
た。抗体は、転移乳癌及び原発性乳癌のウエルと同様に
反応した。請求の範囲に記載されている抗体についての
これらの試験の結果を下記の表2に報告する。 【0056】表 2 乳癌組織切片に対する抗体の結合* 乳 癌 抗 体 LA KA JA IA HA GA E EA TA UA RA SA O 2G3 1 2 1 2 2 2 ND 2 2 2 2 2 2 33F8 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 113F1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 245E7 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 260F9 0 1 0 1 0 1 ND 1 2 0 0 0 1 280D11 2 2 0 1 2 1 ND 1 1 0 1 0 1 266B2 1 2 0 1 0 1 ND 0 2 1 1 0 1 454C11 1 2 0 2 1 1 ND 2 1 1 0 0 ND 317G5 1 ND 0 0 1 ND ND 0 0 0 1 1 ND 520C9 0 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 452F2 0 2 0 2 0 0 ND 1 0 1 0 0 ND 369F10 2 2 2 2 0 1 ND 1 0 1 1 2 2 736G9 2 ND 0 2 0 ND ND 1 0 1 0 0 ND 741F8 0 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 0 758G5 1 ND 0 0 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 761B10 1 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 【0057】抗 体 R MA BA NA FA LMA LME MBA Z YA KB OB 2G3 2 1 2 2 2 2 2 2 2 33F8 0 0 0 0 0 0 0 0 ND 113F1 0 0 0 0 0 0 0 0 ND 245E7 2 2 2 2 2 2 2 2 ND 260F9 0 0 1 1 1 0 1 1 0 280D11 1 1 1 0 1 1 1 1 1 266B2 0 1 1 2 1 0 1 1 1 454C11 0 2 0 0 1 0 1 1 ND 317G5 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 1 1 520C9 0 2 0 1 0 0 0 0 0 452F2 0 1 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 2 2 2 2 2 2 1 736G9 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 2 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 761B10 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 【0058】*染色強度:2=強;1=弱;0=陰性;
ND=決定せず。 抗体をさらに、14の乳癌セルラインに対するセルライ
ン免疫螢光測定により、乳癌認識の範囲について評価し
た。下記の表3は、請求の範囲に記載されている抗体に
ついてこれらの試験の結果を報告する。 【0059】表 3 乳癌セルラインに対する抗体の結合* セルライン 抗 体 SKBr3 BT483 MCF7 BT20 ZR751 MDAMB231 CAMA1 2G3 + + + + + + + 33F8 + + + + + − + 113F1 + + + + + + + 245E7 + + + + + + + 260F9 + + + + + + + 280D11 + + + + + − + 266B2 + + + + + + + 454C11 + + + + + + + 317G5 + + + + + − + 520C9 + + − − − NT + 452F2 + + − − + NT + 369F10 − + − − − − + 736G9 + + − NT NT NT + 741F8 + + − NT NT NT + 758G5 + + − NT NT NT − 761B10 + + − NT NT NT − 【0060】抗 体 ALAB BT549 BT474 T47D MDAMB157 MDAMB330 ZR7530 2G3 + + + + + − + 33F8 + + + − + + − 113F1 − − + + + + − 245E7 + + + + + − + 260F9 + − + + + + + 280D11 − + + + + − + 266B2 − − + + − + + 454C11 + − NT − NT NT + 317G5 + − NT + + − + 520C9 NT − NT − NT NT + 452F2 + − NT − NT NT + 369F10 − − NT − NT NT − 736G9 NT − NT + NT NT + 741F8 NT − NT + NT NT + 758G5 NT − NT − NT NT + 761B10 NT − − NT + NT + 【0061】*セルライン結合:+=陽性;−=陰性;
NT=試験せず。 最後に、抗体を11の非***性癌に対するイムノパーオ
キシダーゼ染色により試験した。請求の範囲に記載され
ている抗体についての結果を下記の表4に報告する。 【0062】表 4 癌に対する抗体の結合* 癌 抗 体 結 腸 肺 前立線 膵 臓 子 宮 リンパ腫 2G3 2 0 2 0 2 0 33F8 0 1 0 0 1 0 113F1 0 2 0 2 1 2 245E7 0 2 2 2 2 2 260F9 0 0 1 1 1 0 266B2 0 1 1 1 1 0 280D11 0 0 1 1 1 2 454C11 0 0 1 1 2 0 317G5 1 1 0 0 1 0 520C9 0 1 1 1 1 0 452F2 0 0 0 0 0 0 369F10 0 1 1 1 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 758G5 0 1 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 0 【0063】抗 体 胃 膀 胱 食 道 黒色腫 卵 巣 2G3 2 0 0 2 2 33F8 0 0 0 0 1 113F1 2 0 1 0 0 245E7 0 0 0 0 2 260F9 0 0 1 0 2 266B2 1 0 1 0 1 280D11 0 0 0 0 2 454C11 0 0 0 0 1 317G5 0 0 0 0 0 520C9 0 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 0 2 736G9 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 *染色強度:2=強;1=弱;0=陰性。各タイプの1種類の癌のみを試験した 。 【0064】細胞毒性の評価 Carlsson, J.等、バイオケミカル・ジャーナル(Bioche
m. J.)(1978)173:723−737に記載され
ているようにしてSPDPにより、又はイミノチオラン
(IT)により処理されたリシン毒素A鎖(RTA)
に、請求の範囲に記載されている抗体を複合体化せしめ
た。 【0065】SPDP複合体形成 SPDP(エタノール中20mM)を20倍モル過剰にお
いて抗体に加え、そして室温にて30分間インキュベー
トした後、未反応SPDPをPBSに対する透析により
除去した。誘導体化の程度を、ジチオスレイトール(D
TT)による還元の後343nmにおいてピリジン−2−
チオンの放出を測定することにより決定した。抗体に依
存して3〜8個のリジンアミノ酸基(抗体分子当り)が
ピリジル−ジスルフィド誘導体に転換された。 【0066】SPDPで処理された抗体をRTAと複合
体化した。複合体形成の直前にRTAを50mM DTT
で還元し、次にアガロース、デキストラン及び/又はア
クリルアミドを含有するクロマトグラフ樹脂のカラム上
で脱塩して蛋白質からDTTを除去した。還元されたR
TAを3〜5倍モル過剰のピリジルジスルフィド抗体に
加えた。典型的な反応混合物(1ml)は7μM抗体及び
30μM RTAから成る。 【0067】反応を4℃にて一夜進行させた。抗体への
RTAの複合体形成の程度を、ピリジン−2−チオンの
方法を測定することにより分光光度計により決定した。
平均して、複合体は抗体分子当り2〜3個のRTA分子
を含有する。このことは非還元SDS−PAGEゲル
(7.5%)により確認され、このゲルはさらに、典型
的な複合体調製物が10%〜30%の遊離抗体を含有す
ることを示した。 【0068】複合体混合物をHPLCサイズ排除カラム
上でクロマトグラフ処理して残留未反応RTAから複合
体を分離した。カラムを0.1M硫酸ナトリウム/0.
02Mリン酸ナトリウム(pH6.8)中で平衡化した。
複合体混合物(0.7ml)を注入し、次に1ml/分の流
速でクロマトグラフ処理した(室温)。0.5mlの画分
を集め、そしてピーク複合体画分をプールし、そして細
胞毒性試験の前に濾過除菌した。 【0069】イミノチオラン複合体 0.1Mリン酸ナトリウム、0.001M EDTA
(pH8.0)(以後P−EDTA緩衝液と称する)を約
30mg/mlの抗体を室温にて約15分間にわたり1mM
5,5′−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)(DT
NB)と反応せしめ、そして次に氷浴中で0℃に冷却す
る。この溶液に、2.5IT分子/抗体分子とするのに
十分なITを加え、そして得られた溶液を0〜5℃にて
約24時間貯蔵する。次に、これを0〜5℃にて300
倍過剰容積のP−EDTA緩衝液に対して透析する。 【0070】1mM DTTを含有するP−EDTA中に
正常に貯蔵されたRTAを限外濾過して10〜15mg/
mlの濃度とし、そして0〜5℃にて300倍過剰容積の
P−EDTAに対して透析する。十分なRTAを誘導体
化された抗体に加えて、1.0〜1.2のRTA上遊離
チオール/誘導体化抗体上ブロックされたチオールとす
る。この混合物を室温にて2時間インキュベートする。 【0071】カップリング反応混合物を、固体支持体に
留められた青色色素を基礎とするクロマトグラフ樹脂の
カラムに適用し、次にこの混合物を室温にてP−EDT
Aにより溶出する。カラムの大きさを、出発抗体mg当り
約2mlのベッドボリウムを含むようにする。未複合体化
抗体の最初のピークがカラムから溶出した後、溶離液を
1M NaCl含有P−EDTAに切り換える。 【0072】この緩衝液において、免疫複合体及び未反
応RTAが非常にシャープなピークとして溶出する。こ
れをプールし、そして10倍過剰容積の0.15Mリン
酸ナトリウム(pH7.1)(以後、Pi緩衝液と称す
る)に対して0〜5℃にて透析する。透析された蛋白質
を0〜5℃にてゲルのカラムに適用し、そし6cm/時の
流速にて緩衝液により溶出する。 【0073】カラムの大きさを、少なくとも25mlのベ
ッドボリウム/mlの適用蛋白質を含むようにする。免疫
複合体は単一ピークとして排除容積のわずかに後に溶出
し、これはこれに続く2量体化及び単量体RTAのピー
クからベースライン分離される。一緒にした免疫複合体
ピークを35psi にて限外濾過し、5.0mg/mlの最終
濃度としそして濾過除菌する。細胞毒性試験 【0074】この細胞毒性試験において使用された試験
ヒト乳癌系はMCF−7,CAMA−1,SKBR−
3、及びBT−20であった。ヒト線維芽細胞セルライ
ンCC95及びWI−38を陰性対照として使用した。
1mlの培地中40000個の試験細胞を、1セットの8
mlガラスバイアルに加え、そして次に複合体稀釈物(1
00μg/mlのBSA含有PBS中)を加えた。37℃
にて22時間インキュベートした後、培地を吸引し、単
層をPBSで洗浄し、そして35Sメチオニンを補充した
メチオニン不含培地を加えた。 【0075】バイアルをさらに37℃にて2時間インキ
ュベートし、培地を除去し、そして細胞を、1mg/mlの
メチオニンを含有する10%トリクロロ酢酸2mlにより
2回洗浄した。細胞を乾燥し、シンチレーション溶液を
加え、そしてシンチレーションカウンター中で放射能を
測定した。細胞毒性を、対照(未処理)蛋白質合成の5
0%をもたらす複合体の組織培養阻害量(TCID50
%)として表示した。これらの細胞毒性試験の結果を下
記の表5中に報告する。 【0076】表 5 乳癌イムノトキシンの細胞毒性〔TCID50%(nM)〕 RTA複合体 アイソタイプ MCF-7 CAMA-1 SKBR-3 BT-20 CC95 WI-38 260F9 G1 0.1 0.4 0.06 9 >50 >50 317G5 G1 0.4 5 10 2 >50 >50 113F1 G3 0.5 0.6 10 6 >50 >50 2G3 G1 0.8 1 >50 15 >50 ND 266B2 G1 1 5 0.5 10 >50 ND 280D11 G1 1 1 0.9 >40 >50 >50 245E7 G1 6 8 8 4 >50 >50 454C11 G2a 6 >20 0.3 30 >50 >50 33F8 G1 10 ND ND ND - ND -ND 369F10 M 10 ND ND ND ND ND 520C9 G1 >50 >50 10 >50 452F2 G1 20 10 736G9 G1 >50 >50 1.3 >50 741F8 G1 >80 >80 >80 758G5 G1 >50 0.3 761B10 G1 >50 1.0 ND=決定されず。 【0077】複合体のイン−ビボ試験 245E7,280D11、及び260F9とRTAと
の複合体を、カップリング剤としてイミノチオラン又は
SPDPを用いて上記のようにして製造した。XM−1
ヒト乳癌細胞に対するこれらの複合体のイン−ビボ効果
を下記のようにして評価した。 【0078】雌性無胸腺Balb/c−nu/nuマウ
ス(20〜24g)を用いた。中心壊死の兆候を有しな
い600〜800mm3 の腫瘍から1.0mm3 の断片を得
た。マウスに0.05mlの懸濁液を中外側穿刺により腋
領域にs.c移植した。移植の7日又は14日後、マウ
スの重量を測定し、そしてその腫瘍負荷をキャリパスを
用いて移植片を測定することにより評価した。 【0079】対照マウスQ2D×6の尾静脈に複合体を
i.v.注射して特定の複合体の最大許容投与量を決定
した。これらの結果に基いて、腫瘍担持マウスに複合体
を投与するための投与量方法を選択した。腫瘍担持マウ
ス群及び対照マウス群に、前記選択された投与量・方法
に従って複合体を注射した。動物反応、副作用、及び死
亡率を腫瘍体積及び動物体重の測定と共に毎日モニター
した。試験期間の終りにおける腫瘍体積の変化を、試験
期間にわたる測定の全体の平均に基いて算出した。これ
らの試験の結果を下記の表6に報告する。 【0080】表 6 複 合 体 LD50(μg/m) 投与量/スケジュール 245E7-SPDP-RTA 410 125μg iv/qod×6 245E7-IT-RTA 350 200μg iv/qod×5 280D11-IT-RTA 350 200μg iv/qod×5 200μg iv/qod×4 260F9-IT-RTA 400 200μg iv/qod×5 100μg iv/qod×3−4 245E7-IT-RTA 200μg iv/qod×5+280D11-IT-RTA(カクテル) 【0081】 腫 瘍 齢/体積 % MX1− FBW 複 合 体 (6〜10マウス/群) 腫瘍増殖阻害 IBW 245E7-SPDP-RTA 18d(300-400) 74.8(D14)3動物のみ 1.15 245E7-IT-RTA 14d(100-200) 62.5(D14)P<0.05 0.93 280D11-IT-RTA 14d(100-200) 70.0(D13)P<0.01 (1) 0.99 6d(25-50) 80.0(D14)P<0.02 0.97 260F9-IT-RTA 14d(100-200) 20.3(D14) NS(2) 1.02 14d(100-200) 17.6(D14) NS(3) 1.01 245E7-IT-RTA 14d(100-300) 70.0(D14)P<0.01 1.00 +280D11-IT-RTA(カクテル) 80.0(D10)P<0.001 0.91 (1)退化60.5%(D6)P<0.001 0.84 (2)50.8%(D11)P<0.05 0.98 (3)44.8%(D11)P<0.1 0.87 NS=有意差なし D=処理開始後の日数 【0082】抗体親和性及び抗原濃度 請求の範囲に記載されている抗体の幾つかをヨード化
し、そしてMCF−7又はBT−20細胞への結合につ
いて試験した。抗体をクロラミンTを用いて 125Iによ
り約10μCi/μgの比活性にラベルした。免疫放射
化学的純度を決定するため、0.5mlのウシ胎児血清中
100,000cpm の2種類のラベル化抗体を標的細胞
の5つのアリコートに0℃にて15分間順次吸着せしめ
(一般にアリコート当り4,000,000MCF−7
乳癌細胞)、そして各吸着後の上清液中の残りの放射能
を測定した。会合定数を測定するため、既知濃度のラベ
ル化及び非ラベル化モノクローナル抗体をウシ胎児血清
中標的細胞と共に氷中で15分間インキュベートした。 【0083】次に、細胞/抗体混合物のアリコートをガ
ンマーカウンター中で計数し、又はミクロフォルドフィ
ルタープレート(V&Pサイエンティフィック)を通し
て濾過しそしてそのフィルターをカウントした。フィル
ター上の液中に残留する未結合抗体を考慮するため、同
じ濃度の抗体を含有するがしかし細胞を含有しない対照
を並行して処理した。会合定数及び標的当たりの抗原コ
ピー数を、親和性試験結果から計算し、そして下記の表
7に報告する。 【0084】表 7 抗 体 n Ka nKa 2G3 3.7e6 9.1e6 3.4e13 113F1 2.3e6 1.1e9 2.5e15 260F9 3.1e5 5.6e7 1.7e13 266B2 8.0e4 2.7e8 2.2e13 280D11 3.9e5 8.8e6 3.4e12 317G5 3.2e6 1.6e6 5.1e12 452F2 2.5e5 6.8e6 1.7e12 454C11 3.9e5 4.8e7 1.9e13 520C90 5.0e5 8.2e6 4.1e12 n=MCF−7細胞当り抗原コピー数; Ka=MCF−7に対する会合定数。 nKaはnとKaとの積であり、そして細胞当り結合抗
体に対する抗体濃度に関連する。 【0085】抗体に対する免疫沈澱試験は、それらの内
の7つ(454C11,452F2,520C9,73
6G9,741F8,758G5、及び761B10)
は癌性***組織に見出される共通の単量体の約210,
000ダルトン蛋白質に結合することを示した。7種類
の内の6種類(452F2,520C9,736G9,
741F8,758G5、及び761B10)は21
0,000ダルトン蛋白質上の同じエピトープを認識す
ると信じられる。相対的アフィニティー研究は、これら
6種類の内520C9が最高の会合定数を示すことを示
した。 【0086】請求の範囲に記載されているモノクローナ
ル抗体を生産するハイブリドーマのサンプルはアメリカ
ン・タイプ・カルチュアー・コレクション(ATC
C)、12301パークラウイドライブ、ロックビル、
メリーランド20852−1776、米国に寄託され
た。210,000ダルトン蛋白質上の同じエピトープ
を認識する抗体を生産する6種類のハイブリドーマの内
520C9のみが寄託された。寄託されなかった5種類
は520C9と機能的に同等であると考えられる。これ
らのATCC受託番号及び寄託日は次の通りである。 【0087】 ハイブリドーマ/抗体名称 寄託日 受託番号 260F9 1984年1月27日 HB 8488 113F1 1984年1月27日 HB 8490 2G3 1984年1月27日 HB 8491 280D11 1984年1月27日 HB 8487 266B2 1984年1月27日 HB 8486 245E7 1984年1月27日 HB 8489 454C11 1984年1月27日 HB 8484 33F8 1985年1月9日 HB 8697 317G5 1984年1月27日 HB 8485 520C9 1985年1月8日 HB 8696 369F10 1984年12月13日 HB 8682 *260F9−1C9 1984年11月7日 HB 8662 317G5(CTCC 0055) 1984年12月28日 HB 8691 788G6(CTCC 0056) 1984年12月28日 HB 8692 *このクローンは260F9の子孫であり、そして260F9より良好な抗 体生産株であることが見出された。 これらの寄託はブタペスト条約のもとで行われたものであり、そしてその規定 に従って維持され他人に対して接近可能にされる。
診断及び治療に有用なモノクローナル抗−ヒト乳癌抗体
に関する。 【0002】 【従来の技術】1970年代半ば以来、ヒト乳癌関連抗
原と反応するネズミモノクローナル抗体の多数の報告が
存在する。これらの報告された研究においては、ネズミ
がヒト−乳脂肪球蛋白質(milk fat globule protein)
、乳癌セルライン、又は乳癌膜抽出物で免疫感作及び
追加免疫された。免疫脾細胞がマウス骨髄腫細胞と融合
され、そしてハイブリドーマが、***又は乳癌抗原に対
する培地の幾らかの特異性に基いて選択された。 【0003】Taylor-Papadimitriou, J.等、インターナ
ショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー(Int. J. Ca
ncer)(1981)28:17−21;Yuan, D.等、J
NCI(1982)68:719−728;Ciocca, D.
R. 等、キャンサー・リサーチ(Cancer Res.)42:4
256−4258。これらの先行技術の抗体の正常組織
反応性はこの発明の抗体の正常組織反応性と異る。 【0004】多くの先行研究者は、 "イムノトキシン"
を製造するための細胞毒性剤と抗体との連結を報告し又
は示唆した。最近の関心は、細菌又は植物由来の毒素の
酵素的活性部分(A鎖)にヘテロ2官能剤を介して結合
したモノクローナル抗体のイムノトキシンに集中してい
る。Neville, D. M.及びYoule, R. J.、イムノロジカル
・レビュー(Immunol Rev.)(1982)62:75−
91;Ross, W. C. J.等、ヨーロピアン・ジャーナル・
オブ・バイオケミストリー(European J. Biochem.)
(1980)104;Vitteta, E. S.イムノロジカル・
レビュー(Immunol Rev.)(1982)61:158−
183;Rosa, V.等、キャンサー・リサーチ(Cancer R
es.)(1982)42:457−464;Trowbridge,
I. W. 及びDomingo, D. J.、ネイチュアー(Nature) (C
omd)(1981)294:171−173。 【0005】 【発明の概要】本発明は、乳癌組織に存在し、454C
11(ATCC No.HB8484),452F2
(ATCC No.HB10811),520C9(A
TCCNo.HB8696)及び741F8(ATCC
No.HB10807)から成る群から選択されたハ
イブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体と特
異的に結合する210kDのモノマー蛋白質に特異的に
結合する標識されたモノクローナル抗体又はその断片を
含んで成る乳癌細胞検出剤;並びに乳癌組織に存在し、
454C11(ATCC No.HB8484),45
2F2(ATCCNo.HB10811),520C9
(ATCC No.HB8696)及び741F8(A
TCC No.HB10807)から成る群から選択さ
れたハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗
体と特異的に結合する210kDのモノマー蛋白質に特
異的に結合するモノクローナル抗体又はその断片を含ん
で成るイムノトキシンを含む殺乳癌剤に関する。 【0006】 【具体的な説明】この明細書において使用する場合、 "
モノクローナル抗体" は均一な抗体集団を有する抗体組
成物を意味する。抗体の起原又はそれが作られる方法に
関しては限定されないことが意図される。例示されるモ
ノクローナル抗−ヒト乳癌抗体に関してこの明細書にお
いて使用される "機能的に同等" なる語は、(a)例示
されたモノクローナル抗体を交差ブロックし;(b)ヒ
ト乳癌細胞に選択的に結合し;(c)G又はMアイソタ
イプを有し;(d)免疫沈澱又はサンドイッチイムノア
ッセイにより決定される場合同じ抗原に結合し;そして
(e)リシンA鎖に結合された場合MCF−7,CAM
A−1,SKBR−3、又はBT−20細胞の少なくと
も1つに対して約10nMより小さいTCID50%を示
すモノクローナル抗体を意味する。 【0007】この発明のモノクローナル抗体生産性ハイ
ブリドーマに関してこの明細書において使用される場
合、 "子孫" なる語は、世代又は核型の同一性とは無関
係に、親により生産されるモノクローナル抗−ヒト−乳
癌抗体を生産する、親ハイブリドーマのすべての誘導
体、結果物及び子を包含することが意図される。 【0008】モノクローナル抗体製造 この発明のハイブリドーマを調製するために使用される
抗体生産性融合パートナーは、マウス等ヒト以外の動物
を生ヒト乳癌細胞又はそれから調製される膜抽出物によ
り免疫感作することにより生じる。動物に免疫原量の細
胞又は抽出物を腹腔内接種し、そして次に同様の量の免
疫源により追加免疫する。最終追加免疫の数日後、免疫
された該動物から脾臓を集め、そして融合において使用
するため、これから細胞懸濁液を調製する。 【0009】Buck, D. W. 等、イン・ビトロ(In Vitr
o)(1982)18:377−381により改変され
たKohler, B 及びMilstein, G 、ネイチュアー(Natur
e)(1975)256:495−497の一般的体細
胞ハイブリダイゼーション技法を用いて、脾細胞とネズ
ミ腫瘍パートナーとからハイブリドーマを調製する。入
手可能なネズミ骨髄腫ライン、例えばサルク・インステ
ィテュート、セルディビジョンセンター、サンジェゴ、
カリホルニア、USAをハイブリダイゼーションにおい
て使用することができる。 【0010】基本的には、ポリエチレングリコールのご
とき融合剤を用いて腫瘍細胞と脾細胞とを融合せしめる
ことを含む。融合の後、融合媒体から細胞を分離し、そ
して選択的増殖培地、例えばHAT培地に増殖せしめる
ことによりハイブリダイズしていない親細胞を除去す
る。所望によりハイブリドーマを拡げ、そして抗原とし
て免疫剤(乳癌細胞又は膜抽出物)を用いて常用のイム
ノアッセイ法(例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イ
ムノアッセイ、又は蛍光イムノアッセイ)により、抗−
ヒト乳癌活性について上清を測定する。陽性クローンを
さらに特徴付けてこれらがこの発明の抗体の基準に合致
するか否かを決定する。 【0011】このような抗体を生産するハイブリドーマ
を、公知の方法を用いてイン−ビトロ又はイン−ビボで
増殖せしめることができる。モノクローナル抗体は、所
望により、常用の免疫グロブリン精製法、例えば硫酸ア
ンモニウム沈澱、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフ
ィー、及び限外濾過により、場合に応じて培地又は体液
から単離することができる。 【0012】モノクローナル抗体選択/特徴付け モノクローナル抗体の重要な特徴付けは(1)これらの
免疫グロブリンクラス、(2)ヒト乳癌細胞に対するこ
れらの選択性及びこれらが結合するヒト乳癌細胞の範
囲、及び(3)効果的な抗−ヒト乳癌イムノトキシンを
製造する場合のその有用性である。 【0013】与えられた抗体の選択性及び範囲は、
(1)ヒト乳癌組織及び細胞並びに(2)***及び他の
由来の正常なヒト組織又は細胞のパネルに対してそれを
試験することにより決定される。請求の範囲に記載され
ている抗体の選択において、約22000個の増殖ハイ
ブリドーマ培養物をまず、免疫乳癌膜又はセルライン、
8種類の正常組織膜のパネル、線維芽細胞セルライン及
び乳癌腫瘍凍結切片に対してスクリーニングした。 【0014】新生物材料と反応するが正常な材料と反応
しないクローンをこの最初のスクリーニングにおいて同
定し、そしてアイソタイプの決定並びに選択性及び範囲
についての追加のスクリーニングにより選択した。追加
のスクリーニングは、16個の正常組織切片、5種類の
正常血球型、11個の非***新生物切片、21個の乳癌
切片及び14個の乳癌セルラインを用いる。抗体が約1
/3未満の正常組織及び血球タイプと強く結合すれば、
それらが乳癌に選択的に結合すると認められた。127
の抗体を精製し、そして追加のスクリーニングにおいて
試験した。 【0015】許容し得る選択性及び範囲を示す抗体を、
カップリング剤としてN−サクシニミジル−3−(2−
ピリジルジチオ)プロピオネート(SPDP)又はイミ
ノチオラン(IT)を用いてリシンA鎖に複合体化し
た。この複合体を24時間組織培養測定においてMCF
−7,CAMA−1,SKBR−3、及びBT−20細
胞に対して試験した。 【0016】16種類の抗体が、これらの乳癌系の少な
くとも1つに対して許容し得るイムノトキシン活性(1
0nMより小さいTCID50%)を示した。この16種
類の内の7種類が同じ210,000ダルトンの抗原を
認識し、7種類の内の6種類がおそらく同じエピトープ
を認識するが親和性において異ることが見出された。こ
れらの抗体の一層詳細な特徴付けが下記の例において与
えられる。 【0017】免疫化学物質 最も重要なこの発明のモノクローナル抗体の免疫化学的
誘導体はイムノトキシン(抗体と細胞性毒素との複合
体)及びラベルされた(例えば、放射性ラベルされた、
酵素ラベルされた、又はフルオロクロームラベルされ
た)誘導体(この誘導体中でラベルはラベルされた抗体
を含有する免疫複合体を同定するための手段を提供す
る)である。 【0018】イムノトキシンの細胞毒成分は、細胞毒性
剤、細菌もしくは植物起原の酵素的に活性な毒素、又は
これらの毒素の酵素的に活性な断片( "A鎖" )であ
る。酵素的に活性な毒素及びその断片が好ましく、そし
てジフテリア毒素の非結合性活性断片であるジフテリア
A鎖、エキソトキシンA鎖〔シュードモナス・アエルギ
ノーサ(Pseudomonas aeruginosa)から〕、リシンA
鎖、アブリンA鎖、モデッシンA鎖、アルファーサルシ
ン、アレウリテス・フォルディー(Aleurites fordii)
蛋白質、ジアンチン蛋白質、フィトラッカ・アメリカナ
(Phytolacca americana)蛋白質(PAPI,PAPII
及びPAP−S)、モモルディカ・カランチァ(momord
ica charantia)阻害剤、クルシン(curcin)、クロチン
(crotin)、サポナリア・オフィシナリス(saponaria
officinalis )阻害剤、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリ
ン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictoci
n)、フェノマイシン、及びエノマイシンにより例示さ
れる。 【0019】リシンA鎖、ジフテリア毒素の非結合性活
性断片、アルビンA鎖、及びPAPIIが好ましい。モノ
クローナル抗体とこれらの細胞毒性成分との複合体は種
々の2官能蛋白質カップリング剤を用いて調製すること
ができる。このような試薬の例はSPDP,IT、イミ
ドエステルの2官能誘導体、例えばジメチルアジピミデ
ート・HCl、活性エステル、例えばジサクシニミジル
スベレート、アルデヒド、例えばグルタルデヒド、ビス
−アジド化合物、例えばビス(p−アジドベンゾイル)
ヘキサンジアミン、ビス−ジアゾニウム誘導体、例えば
ビス−(p−ジアゾニウムベンゾイル)−エチレンジア
ミン、ジイソシアネート、例えばトルエン2,6−ジイ
ソシアネート、及びビス−活性弗素化合物、例えば1,
5−ジフルオロ−2,4−ジニトロベンゼンである。 【0020】診断の目的でヒト乳癌細胞をイン−ビトロ
で殺すために使用する場合、典型的には複合体が約10
nM以上の濃度において細胞培養培地に加えられる。イン
−ビトロで使用するための適用の剤形及び方法は臨界的
ではない。培地又は灌流媒体との相溶性剤が一般に使用
されよう。細胞毒性を常用技法により読み取ることによ
って乳癌の存在又は程度を決定することができる。 【0021】療法のためにイン−ビボで使用される場
合、イムノトキシンは療法的有効量(すなわち、患者の
腫瘍負担を除去し又は軽減する量)において患者に投与
される。これらは一般に、非経腸的に、好ましくは静脈
内に投与される。投与量及び投与方法は癌の性質(一次
癌又は転移癌)及びその集団、特定のイムノトキシンの
特徴、例えばその治療係数、患者、並びに患者の病歴に
依存するであろう。投与されるイムノトキシンの量は典
型的には約0.1〜約10mg/kg患者体重であろう。 【0022】非経腸的投与のためには、イムノトキシン
は医薬として許容される非経腸担体と共に単位投与注射
形(溶液、懸濁液、乳濁液)として製剤化されるであろ
う。これらの担体は本来的に非毒性でありそして非療法
的である。このような担体の例は水、塩溶液、リンゲル
溶液、グルコース溶液、及び5%ヒト血清アルブミンで
ある。 【0023】非水性担体、例えば不揮発油及びオレイン
酸エチルを使用することもできる。担体としてリポゾー
ムを使用することもできる。担体は微量の添加剤、例え
ば等張性及び化学的安定性を増強するための物質、例え
ば緩衝剤及び防腐剤を含有することができる。イムノト
キシンは、典型的にはこれらの担体中に約1mg/ml〜1
0mg/mlの濃度で製剤化される。 【0024】乳癌を処置するための細胞毒性放射性医薬
は、高線エネルギー移動(LET)放射性同位元素(例
えば、Y,Pr)を抗体に結合することによって製造さ
れる。この明細書において使用される "細胞毒性成分"
なる語はこのような同位元素を包含することが意図され
る。 【0025】抗体のラベルされた部分を作るために使用
されるラベルは、直接検出され得る成分、例えば蛍光色
素及び放射性ラベル、並びに検出されるために誘導体化
されなければならない成分、例えば酵素を包含する。こ
のようなラベルの例は32P,125I, 3H,14C、フル
オレッセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導
体、ダンシル、ウンベリフェロン、レシフェロン、2,
3−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシュパ
ーオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、リゾチー
ム、及びグルコース−6−ホスフェートデヒドロゲナー
ゼである。 【0026】抗体を、これらのラベルにより公知の方法
で標識することができる。例えば、カップリング剤、例
えばアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミド、イミ
デート、サクシンイミド、ビス−ジアゾ化ベンザジン及
びこれらに類似するものを使用して抗体を上記の蛍光ラ
ベル、化学発光ラベル、及び酵素ラベルにより標識する
ことができる。 【0027】抗体及びラベルされた抗体をイムノイメー
ジング法又はイムノアッセイ法において使用して、患者
における乳癌の存在を検出し、又はそれを有することが
すでに診断されている患者におけるそのような癌の状態
をモニターすることができる。癌の状態をモニターする
場合、定量的イムノアッセイ法を用いなければならな
い。 【0028】このようなモニターにおいては測定は定期
的に行われ、そしてその結果を比較して患者の腫瘍負荷
が増加したか減少したかが決定される。使用することが
できる一般的測定技法には直接測定及び間接測定が含ま
れる。直接測定は患者からの組織サンプル又は細胞をラ
ベルされた抗体と共にインキュベートすることを含む。
サンプルが乳癌細胞を含むなら、ラベルされた抗体はそ
れらの細胞に結合するであろう。 【0029】組織又は細胞を洗浄して未結合ラベル化抗
体を除去した後、組織サンプルをラベルされた免疫複合
体の存在について読み取る。間接測定においては、組織
又は細胞サンプルをラベルされていないモノクローナル
抗体と共にインキュベートする。次に、該モノクローナ
ル抗体に対するラベル化抗体(例えば、ラベルされた抗
ネズミ抗体)で処理し、洗浄し、そしてラベルされた三
次元複合体の存在について読み取る。 【0030】診断的用途のためには、抗体は典型的には
キットの形で分配される。これらのキットは典型的に
は、適当な容器中ラベル化又は非ラベル化形の抗体、イ
ンキュベーション又は洗浄のための試験、キットが間接
測定形であればラベルされていない抗ネズミ抗体、並び
にラベルの性質に依存して基質及び誘導体化剤を含んで
成る。ヒト乳癌抗原対照及び指示書も含めることができ
る。次の例により、この発明の代表的モノクローナル抗
体の調製、特徴及び使用を詳細に記載する。これらの例
は、この発明に限定を加えることをなんら意図するもの
ではない。 【0031】免疫感作 新しく外科摘出したヒト乳癌組織及び種々の正常組織を
用いて、ホモジナイズ及び非連続的シュークロースグラ
ジェント遠心により膜抽出物を調製した。ヒト乳癌セル
ラインをブレスト・キャンサー・タスク・フォース(Br
east Cancer Task Force)、アメリカン・タイプ、カル
チュアー・コレクション(ATCC)、及びメモリアル
・スローン・ケッタリングの Jargen Fogh博士から得
た。 【0032】ブレスト・キャンサー・タスク・フォー
ス、ATCC、及びFogh博士により推奨されるようにし
て細胞を維持しそして継代した。免疫感作のため、10
0μg(Lowry 測定) の蛋白質を含有する膜抽出物又は
一千万個の生乳癌細胞を5週令のBalb/cマウスに
腹腔内投与した。マウスを1箇月間隔で同様に2回追加
免疫した。最後の追加免疫の3日後、細胞融合のため脾
臓を摘出した。 【0033】ハイブリドーマ法 ネズミ骨髄腫系Sp−2/0−Ag14を用いてBuck,
D. W. 等の方法により体細胞ハイブリドを調製した。す
べてのハイブリドーマセルラインは限界稀釈法によりク
ローン化した。融合の半分は乳癌膜抽出物により免疫感
作したマウスからの脾細胞を用い、そして半分は乳癌セ
ルラインにより免疫感作したマウスからの脾細胞を用い
た。これらの融合から83424個のウエルが設けら
れ、この内22,459個がハイブリドーマの増殖を示
した。 【0034】スクリーニング法 ハイブリドーマ上清を、免疫感作用乳癌膜抽出物を用い
る固相エンザイムリンクドイムノソルベントアッセイ
(ELISA)により又は免疫感作用乳癌セルラインを
用いる間接イムノフルオレッセンスアッセイにより、反
応性抗体について測定した。固相膜ELISAのため、
40μlの0.1mg/ml乳癌膜蛋白質をポリ塩化ビニル
(PVC)ミクロタイターウエルに4℃にて12時間置
いた。 【0035】抽出物を吸引し、そして1%ウシ血清アル
ブミン(BSA)を含有するリン酸緩衝化塩溶液(PB
S)によりウエルを洗浄した。次に、ウエルを1:10
稀釈のハイブリダーマ上清45μlと共にインキュベー
トした。稀釈剤は、25mMの緩衝剤、10%ウシ血清及
び0.1%ナトリウムアジドから成る媒体であった。室
温にて30分間置いた後、ウエルを再度洗浄し、そして
1:200稀釈のパーオキシダーゼ接合ヤギ抗−マウス
IgGと共にインキュベートした。 【0036】稀釈剤はPBSであった。次にウエルをP
BSで洗浄し、そして0.1Mクエン酸ナトリウム緩衝
液(pH4.2)中2,2−アジノ−ジ(3−エチルベン
ズチアゾリンスルホン酸200μlと反応せしめた。ミ
クロエリサリーダー上で405nmにおける光学濃度を測
定した。各実験において、陽性対象である抗−β2ミク
ログロブリン5μg/mlを正常ヒト腎臓膜と反応せしめ
た。これは1.0±0.1(標準偏差)の光学濃度を与
えた。バックグラウンドは、マウスモノクローナル抗体
を含まない媒体を用いて0±0.1光学濃度単位(O.D)
であった。乳癌膜抽出物に対して0.7O.D より大きな
反応をもたらすウエルを保持した。 【0037】間接イムノフルオレセンスセルラインアッ
セイのため、免疫感作用セルラインの10万個の乳癌細
胞を、1セットの8チャンバースライドの各チャンバー
に入れた。同様にして、セルラインCC95からの10
万個の線維芽細胞をチャンバーを有するスライドウエル
中で一夜インキュベートした。1%BSAを含有するP
BSにより細胞を洗浄した。 【0038】乳癌及び線維芽細胞の両者のウエルを、
1:10稀釈のハイブリドーマ上清と共に4℃にて30
分間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、そして
1:50稀釈のフルオレッセインイソチオシアナート
(FITC)−接合ヤギF(ab′)2 抗−マウスIg
と共に4℃にて30分間インキュベートした。細胞を3
回洗浄し、PBS中1.5%ホルムアルデヒド中で固定
し、チャンバーを取り出し、そしてPBS中ですすい
だ。 【0039】次に、スライドを、ポリビニルアルコー
ル、グリセリン、緩衝剤及び防腐剤を含有する組成物中
に配置し、そして蛍光顕微鏡により試験した。乳癌細胞
への強い蛍光結合を示すが線維芽細胞への蛍光結合を示
さないハイブリドーマウエルを保持した。5156個の
ハイブリドーマウエルが最初のスクリーニングにおいて
乳癌反応性を示した。 【0040】次に、5156個の陽性ウエルからの上清
を、8種類の正常組織(肝臓、肺、結腸、胃、腎臓、扁
桃腺、脾臓及び膵臓)膜抽出物を用いる固相ELISA
において試験した。0.3より大きなELISA−O.
D.をもたらすすべてのウエルを廃棄した。1101個
の上清が正常組織抽出物と反応しないことが見出され
た。 【0041】1101個のハイブリドーマ上清をヒト乳
癌組織の凍結切断に対して試験した。6ミクロンの切片
をスライドに付着させ、4℃にてアセトン中で10分間
固定し、室温にて10分間乾燥し、PBSで洗浄し、ウ
マ血清でブロックし、そして200μlの未稀釈のハイ
ブリドーマ上清と共に室温にて20分間インキュベート
した。 【0042】スライドをPBSで洗浄し、そして最後に
37℃にて20分間、1:50稀釈のパーオキシダーゼ
接合ラビット抗マウスIgと共にインキュベートし、P
BSで再び洗浄し、そして最後に37℃にて7.5分間
0.01%過酸化水素を含有する0.05MTris緩衝液
(pH7.2)中0.5mg/lジアミノベンジジンと共に
インキュベートした。スライドをヘマトキシリンで染色
し、脱水し、そして35.9%メチル/n−ブチルメタ
クリレートコポリマー、7.1%ブチルベンジルフタレ
ート及び0.3%2,6−ジtertブチル−p−クレゾー
ルを含有する媒体中においた。124ウエルが乳癌選択
的結合をもたらし、そしてクローン化された。 【0043】精製及びクラス決定 モノクローナル乳癌選択的抗体の免疫グロブリンクラス
及びサブクラスを決定した。次に、さらに、2〜3×1
06 ハイブリドーマ細胞を0.2μCi35Sメチオニン
を含有するメチオニン不含培地中で4時間増殖せしめる
ことにより抗体を内部的にラベルした。 【0044】35S−ラベル抗体を固定されたスタフィロ
コッカスA細胞と、又はラビット抗−マウス免疫グロブ
リンによりプレコートされたスタフィロコッカスA細胞
を固定するために使用される組成物と免疫沈澱せしめ、
そしてこの免疫沈澱をSDS−PAGEにより分析して
抗体ライト及びヘビー鎖の移動度、余分の鎖の欠落、並
びにスタフィロコッカスプロテインAと結合する各抗体
の能力を決定した。 【0045】抗体をイン−ビトロで拡張した。Balb
/c又はF1(C57B/6×Balb/c)マウスに
0.5mlのプリスタンを腹腔内(ip)注入し、そして
10〜14日後PBS中100万個の対数期ハイブリド
ーマ細胞を接種した、腹水を−70℃に貯蔵し、そして
解凍し、そしてさらに精製する前に0.8ミクロンフィ
ルターユニットを通して濾過した。 【0046】スタフィロコッカスプロテインAと結合す
るIgG抗体を、アガロース、デキストラン及び/又は
アクリルアミドを含有するプロテインA−クロマトグラ
フ樹脂上での、pH段階グラジエント溶出を用いるアフィ
ニティークロマトグラフィーにより精製した。プロテイ
ンAを結合しなかったIgG抗体を、0℃にて40%飽
和に硫酸アンモニウムを加えることにより沈澱せしめ
た。 【0047】沈澱をPBS中に再溶解し、20mMTris
(pH7.2)に透析し、そしてジエチルアミノエチルセ
ルロース(DEAE)の1.6×50cmカラム上で、
1.5lの0〜600mMNaClグラジエントにより4
℃にて1ml/分の流速で溶出することによりクロマトグ
ラフ処理した。各場合において、カラム画分をSDS−
PAGEによりモニターし、最純抗体画分を一緒にし、
1〜3mg/mlに濃縮し、PBS/0.02%NaN3 に
透析し、そして4℃に貯蔵した。 【0048】IgM抗体を、アガロース、デキストラン
及び/又はアクリルアミドを含有するクロマトグラフ樹
脂の2.6×40cmカラム上でのゲル濾過により、室
温、1ml/分の流速にてPBS/0.01%ナトリウム
アジドで溶出することにより精製した。 【0049】選択性決定 乳癌に対するこれらの選択性を評価するため、精製され
た抗体を、16個の正常組織の切片に対する免疫パーオ
キシダーゼ切片により、及び5個の血球型に対する免疫
蛍光細胞ソーティングにより試験した。イムノパーオキ
シダーゼ染色は上記のようにして行ったが、但しハイブ
リドーマ上清の代りに、1〜40μg/mlの範囲で、P
BS中の精製抗体の既知の稀釈を用いた。 【0050】純粋な抗体をまず力価検定し、乳癌切断に
対して強いイムノパーオキシダーゼ染色をもたらす最小
濃度を見出し、そして次に正常組織試験のためにその濃
度で使用した。末梢血細胞(血小板、リンパ球、赤血
球、顆粒球、及び単球)を、多形核白血球から単球を分
離する媒体を用いて遠心により調製した。細胞を、上記
のようにして決定した最適濃度において、4℃にて30
分間抗体と反応せしめ、洗浄し、1:50稀釈の蛍光イ
ソチオシアナート−複合ヤギ抗−マウスIgと4℃にて
30分間反応せしめ、再び洗浄し、そしてセルソーター
中で試験した。 【0051】洗浄緩衝液及び稀釈剤は1%ゼラチン及び
0.02%ナトリウムアジドを含むPBSであった。セ
ルソーターは、76ミクロンのノズル、及び1ワットの
488nmアルゴンイオンレーザーを装着していた。焦点
を合わせるため、光学レール装置上に8mmの共焦レンズ
を使用した。他の使用フィルターは515nm干渉フィル
ター及び515nm吸収フィルター(散乱レーザー光のた
め)及び前方角光散乱のため中間濃度1.5フィルター
であった。フルオレッセイン蛍光の対数対前方角光散乱
の概略プロットをサンプル分析のために使用した。 【0052】本発明のハイブリドーマにより生産される
抗体の結合挙動を下記の表1に報告する。表 1 正常組織切片への抗体の結合 組 織 抗 体 膵 臓 食 道 肺 腎 臓 結 腸 胃 脳 扁桃腺 33F8 0 2E 0 1T 0 0 0 1Ly 113F1 2Ac 2E 0 0 0 2G 0 1E 245E7 1L 0 1A,M 0 0 2L 0 1E 2G3 2Ac 2E 1A 2T 0 1L 0 1E 260F9 1Ac 2E 0 1T 0 1G 0 2E 280D11 0 1E 0 2T,2B 1L 2L 0 0 266B2 1Ac,1D 2E 0 1T 0 0 0 2E 454C11 1D 1-2E 0 1T 0 0 0 1E 317G5 1Ac,I 0 0 2T 1G 0 0 0 520C9 0 0 0 1T 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 0 0 1G 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 1T 0 0 0 0 761B10 0 0 0 1T 0 0 0 0 【0053】抗 体 肝 臓 心 臓 卵 巣 皮 膚 乳 房 骨 子 宮 膀 胱 33F8 0 0 0 1W 0 1Mk 1L 1E 113F1 0 0 0 0 0 0 0 1E 245E7 0 0 0 2S 2L 0 2L 1E 2G3 0 0 0 0 2E 0 2L 2E 260F9 2D 0 0 2E,2H 2E 0 1L 2E 280D11 2D 0 0 1E,1H 2L 2Gr 2G 0 266B2 0 0 0 2E,2W 1E 0 0 1E 454C11 1D 0 0 1E,H 1E 0 1G 1E 317G5 2D 0 0 0 0 0 1G 0 520C9 0 0 0 0 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 1S 0 0 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 0 0 【0054】染色強度:2=強;1=弱;0=陰性。 A=中隔細胞;Ac=腺房;B=ボーマンのう;D=
管;E=表皮;G=腺;Gr=顆粒球;H=毛包;I=
島;L=管腔士尖端細胞質;Ly=リンパ球;M=マク
ロファージ;Mk=メガコニオサイト;My=ミエリ
ン;S=皮脂;St=間質;T=細管;U=糸球体;W
=汗腺。 血小板、赤血球、リンパ球、単球又は顆粒球に対する結
合は存在せず、但し280D11は顆粒球と弱く結合す
る。いずれの抗体も線維芽細胞と結合しない。 【0055】範囲決定 いかなる範囲の乳癌が各抗体によって認識されるかを決
定するため、乳癌選択的抗体を、27個の異る乳癌の凍
結切片に対するイムノパーオキシダーゼ染色により試験
した。切片染色のために使用された乳癌はすべて浸潤腺
管内癌であり、従って、抗体結合と乳癌の組識学的タイ
プの関連はなされ得なかった。さらに、抗体結合と結節
状態又はエストロゲン受容体状態との間の関連も、提供
者の情報が得られる12の癌について見出されなかっ
た。抗体は、転移乳癌及び原発性乳癌のウエルと同様に
反応した。請求の範囲に記載されている抗体についての
これらの試験の結果を下記の表2に報告する。 【0056】表 2 乳癌組織切片に対する抗体の結合* 乳 癌 抗 体 LA KA JA IA HA GA E EA TA UA RA SA O 2G3 1 2 1 2 2 2 ND 2 2 2 2 2 2 33F8 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 113F1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 245E7 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 260F9 0 1 0 1 0 1 ND 1 2 0 0 0 1 280D11 2 2 0 1 2 1 ND 1 1 0 1 0 1 266B2 1 2 0 1 0 1 ND 0 2 1 1 0 1 454C11 1 2 0 2 1 1 ND 2 1 1 0 0 ND 317G5 1 ND 0 0 1 ND ND 0 0 0 1 1 ND 520C9 0 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 452F2 0 2 0 2 0 0 ND 1 0 1 0 0 ND 369F10 2 2 2 2 0 1 ND 1 0 1 1 2 2 736G9 2 ND 0 2 0 ND ND 1 0 1 0 0 ND 741F8 0 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 0 758G5 1 ND 0 0 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 761B10 1 ND 0 2 0 ND ND 2 0 1 0 0 ND 【0057】抗 体 R MA BA NA FA LMA LME MBA Z YA KB OB 2G3 2 1 2 2 2 2 2 2 2 33F8 0 0 0 0 0 0 0 0 ND 113F1 0 0 0 0 0 0 0 0 ND 245E7 2 2 2 2 2 2 2 2 ND 260F9 0 0 1 1 1 0 1 1 0 280D11 1 1 1 0 1 1 1 1 1 266B2 0 1 1 2 1 0 1 1 1 454C11 0 2 0 0 1 0 1 1 ND 317G5 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 1 1 520C9 0 2 0 1 0 0 0 0 0 452F2 0 1 0 0 0 0 0 0 0 369F10 0 0 2 2 2 2 2 2 1 736G9 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 741F8 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 758G5 0 2 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 761B10 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 【0058】*染色強度:2=強;1=弱;0=陰性;
ND=決定せず。 抗体をさらに、14の乳癌セルラインに対するセルライ
ン免疫螢光測定により、乳癌認識の範囲について評価し
た。下記の表3は、請求の範囲に記載されている抗体に
ついてこれらの試験の結果を報告する。 【0059】表 3 乳癌セルラインに対する抗体の結合* セルライン 抗 体 SKBr3 BT483 MCF7 BT20 ZR751 MDAMB231 CAMA1 2G3 + + + + + + + 33F8 + + + + + − + 113F1 + + + + + + + 245E7 + + + + + + + 260F9 + + + + + + + 280D11 + + + + + − + 266B2 + + + + + + + 454C11 + + + + + + + 317G5 + + + + + − + 520C9 + + − − − NT + 452F2 + + − − + NT + 369F10 − + − − − − + 736G9 + + − NT NT NT + 741F8 + + − NT NT NT + 758G5 + + − NT NT NT − 761B10 + + − NT NT NT − 【0060】抗 体 ALAB BT549 BT474 T47D MDAMB157 MDAMB330 ZR7530 2G3 + + + + + − + 33F8 + + + − + + − 113F1 − − + + + + − 245E7 + + + + + − + 260F9 + − + + + + + 280D11 − + + + + − + 266B2 − − + + − + + 454C11 + − NT − NT NT + 317G5 + − NT + + − + 520C9 NT − NT − NT NT + 452F2 + − NT − NT NT + 369F10 − − NT − NT NT − 736G9 NT − NT + NT NT + 741F8 NT − NT + NT NT + 758G5 NT − NT − NT NT + 761B10 NT − − NT + NT + 【0061】*セルライン結合:+=陽性;−=陰性;
NT=試験せず。 最後に、抗体を11の非***性癌に対するイムノパーオ
キシダーゼ染色により試験した。請求の範囲に記載され
ている抗体についての結果を下記の表4に報告する。 【0062】表 4 癌に対する抗体の結合* 癌 抗 体 結 腸 肺 前立線 膵 臓 子 宮 リンパ腫 2G3 2 0 2 0 2 0 33F8 0 1 0 0 1 0 113F1 0 2 0 2 1 2 245E7 0 2 2 2 2 2 260F9 0 0 1 1 1 0 266B2 0 1 1 1 1 0 280D11 0 0 1 1 1 2 454C11 0 0 1 1 2 0 317G5 1 1 0 0 1 0 520C9 0 1 1 1 1 0 452F2 0 0 0 0 0 0 369F10 0 1 1 1 0 0 736G9 0 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 0 758G5 0 1 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 0 【0063】抗 体 胃 膀 胱 食 道 黒色腫 卵 巣 2G3 2 0 0 2 2 33F8 0 0 0 0 1 113F1 2 0 1 0 0 245E7 0 0 0 0 2 260F9 0 0 1 0 2 266B2 1 0 1 0 1 280D11 0 0 0 0 2 454C11 0 0 0 0 1 317G5 0 0 0 0 0 520C9 0 0 0 0 0 452F2 0 0 0 0 0 369F10 0 0 0 0 2 736G9 0 0 0 0 0 741F8 0 0 0 0 0 758G5 0 0 0 0 0 761B10 0 0 0 0 0 *染色強度:2=強;1=弱;0=陰性。各タイプの1種類の癌のみを試験した 。 【0064】細胞毒性の評価 Carlsson, J.等、バイオケミカル・ジャーナル(Bioche
m. J.)(1978)173:723−737に記載され
ているようにしてSPDPにより、又はイミノチオラン
(IT)により処理されたリシン毒素A鎖(RTA)
に、請求の範囲に記載されている抗体を複合体化せしめ
た。 【0065】SPDP複合体形成 SPDP(エタノール中20mM)を20倍モル過剰にお
いて抗体に加え、そして室温にて30分間インキュベー
トした後、未反応SPDPをPBSに対する透析により
除去した。誘導体化の程度を、ジチオスレイトール(D
TT)による還元の後343nmにおいてピリジン−2−
チオンの放出を測定することにより決定した。抗体に依
存して3〜8個のリジンアミノ酸基(抗体分子当り)が
ピリジル−ジスルフィド誘導体に転換された。 【0066】SPDPで処理された抗体をRTAと複合
体化した。複合体形成の直前にRTAを50mM DTT
で還元し、次にアガロース、デキストラン及び/又はア
クリルアミドを含有するクロマトグラフ樹脂のカラム上
で脱塩して蛋白質からDTTを除去した。還元されたR
TAを3〜5倍モル過剰のピリジルジスルフィド抗体に
加えた。典型的な反応混合物(1ml)は7μM抗体及び
30μM RTAから成る。 【0067】反応を4℃にて一夜進行させた。抗体への
RTAの複合体形成の程度を、ピリジン−2−チオンの
方法を測定することにより分光光度計により決定した。
平均して、複合体は抗体分子当り2〜3個のRTA分子
を含有する。このことは非還元SDS−PAGEゲル
(7.5%)により確認され、このゲルはさらに、典型
的な複合体調製物が10%〜30%の遊離抗体を含有す
ることを示した。 【0068】複合体混合物をHPLCサイズ排除カラム
上でクロマトグラフ処理して残留未反応RTAから複合
体を分離した。カラムを0.1M硫酸ナトリウム/0.
02Mリン酸ナトリウム(pH6.8)中で平衡化した。
複合体混合物(0.7ml)を注入し、次に1ml/分の流
速でクロマトグラフ処理した(室温)。0.5mlの画分
を集め、そしてピーク複合体画分をプールし、そして細
胞毒性試験の前に濾過除菌した。 【0069】イミノチオラン複合体 0.1Mリン酸ナトリウム、0.001M EDTA
(pH8.0)(以後P−EDTA緩衝液と称する)を約
30mg/mlの抗体を室温にて約15分間にわたり1mM
5,5′−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)(DT
NB)と反応せしめ、そして次に氷浴中で0℃に冷却す
る。この溶液に、2.5IT分子/抗体分子とするのに
十分なITを加え、そして得られた溶液を0〜5℃にて
約24時間貯蔵する。次に、これを0〜5℃にて300
倍過剰容積のP−EDTA緩衝液に対して透析する。 【0070】1mM DTTを含有するP−EDTA中に
正常に貯蔵されたRTAを限外濾過して10〜15mg/
mlの濃度とし、そして0〜5℃にて300倍過剰容積の
P−EDTAに対して透析する。十分なRTAを誘導体
化された抗体に加えて、1.0〜1.2のRTA上遊離
チオール/誘導体化抗体上ブロックされたチオールとす
る。この混合物を室温にて2時間インキュベートする。 【0071】カップリング反応混合物を、固体支持体に
留められた青色色素を基礎とするクロマトグラフ樹脂の
カラムに適用し、次にこの混合物を室温にてP−EDT
Aにより溶出する。カラムの大きさを、出発抗体mg当り
約2mlのベッドボリウムを含むようにする。未複合体化
抗体の最初のピークがカラムから溶出した後、溶離液を
1M NaCl含有P−EDTAに切り換える。 【0072】この緩衝液において、免疫複合体及び未反
応RTAが非常にシャープなピークとして溶出する。こ
れをプールし、そして10倍過剰容積の0.15Mリン
酸ナトリウム(pH7.1)(以後、Pi緩衝液と称す
る)に対して0〜5℃にて透析する。透析された蛋白質
を0〜5℃にてゲルのカラムに適用し、そし6cm/時の
流速にて緩衝液により溶出する。 【0073】カラムの大きさを、少なくとも25mlのベ
ッドボリウム/mlの適用蛋白質を含むようにする。免疫
複合体は単一ピークとして排除容積のわずかに後に溶出
し、これはこれに続く2量体化及び単量体RTAのピー
クからベースライン分離される。一緒にした免疫複合体
ピークを35psi にて限外濾過し、5.0mg/mlの最終
濃度としそして濾過除菌する。細胞毒性試験 【0074】この細胞毒性試験において使用された試験
ヒト乳癌系はMCF−7,CAMA−1,SKBR−
3、及びBT−20であった。ヒト線維芽細胞セルライ
ンCC95及びWI−38を陰性対照として使用した。
1mlの培地中40000個の試験細胞を、1セットの8
mlガラスバイアルに加え、そして次に複合体稀釈物(1
00μg/mlのBSA含有PBS中)を加えた。37℃
にて22時間インキュベートした後、培地を吸引し、単
層をPBSで洗浄し、そして35Sメチオニンを補充した
メチオニン不含培地を加えた。 【0075】バイアルをさらに37℃にて2時間インキ
ュベートし、培地を除去し、そして細胞を、1mg/mlの
メチオニンを含有する10%トリクロロ酢酸2mlにより
2回洗浄した。細胞を乾燥し、シンチレーション溶液を
加え、そしてシンチレーションカウンター中で放射能を
測定した。細胞毒性を、対照(未処理)蛋白質合成の5
0%をもたらす複合体の組織培養阻害量(TCID50
%)として表示した。これらの細胞毒性試験の結果を下
記の表5中に報告する。 【0076】表 5 乳癌イムノトキシンの細胞毒性〔TCID50%(nM)〕 RTA複合体 アイソタイプ MCF-7 CAMA-1 SKBR-3 BT-20 CC95 WI-38 260F9 G1 0.1 0.4 0.06 9 >50 >50 317G5 G1 0.4 5 10 2 >50 >50 113F1 G3 0.5 0.6 10 6 >50 >50 2G3 G1 0.8 1 >50 15 >50 ND 266B2 G1 1 5 0.5 10 >50 ND 280D11 G1 1 1 0.9 >40 >50 >50 245E7 G1 6 8 8 4 >50 >50 454C11 G2a 6 >20 0.3 30 >50 >50 33F8 G1 10 ND ND ND - ND -ND 369F10 M 10 ND ND ND ND ND 520C9 G1 >50 >50 10 >50 452F2 G1 20 10 736G9 G1 >50 >50 1.3 >50 741F8 G1 >80 >80 >80 758G5 G1 >50 0.3 761B10 G1 >50 1.0 ND=決定されず。 【0077】複合体のイン−ビボ試験 245E7,280D11、及び260F9とRTAと
の複合体を、カップリング剤としてイミノチオラン又は
SPDPを用いて上記のようにして製造した。XM−1
ヒト乳癌細胞に対するこれらの複合体のイン−ビボ効果
を下記のようにして評価した。 【0078】雌性無胸腺Balb/c−nu/nuマウ
ス(20〜24g)を用いた。中心壊死の兆候を有しな
い600〜800mm3 の腫瘍から1.0mm3 の断片を得
た。マウスに0.05mlの懸濁液を中外側穿刺により腋
領域にs.c移植した。移植の7日又は14日後、マウ
スの重量を測定し、そしてその腫瘍負荷をキャリパスを
用いて移植片を測定することにより評価した。 【0079】対照マウスQ2D×6の尾静脈に複合体を
i.v.注射して特定の複合体の最大許容投与量を決定
した。これらの結果に基いて、腫瘍担持マウスに複合体
を投与するための投与量方法を選択した。腫瘍担持マウ
ス群及び対照マウス群に、前記選択された投与量・方法
に従って複合体を注射した。動物反応、副作用、及び死
亡率を腫瘍体積及び動物体重の測定と共に毎日モニター
した。試験期間の終りにおける腫瘍体積の変化を、試験
期間にわたる測定の全体の平均に基いて算出した。これ
らの試験の結果を下記の表6に報告する。 【0080】表 6 複 合 体 LD50(μg/m) 投与量/スケジュール 245E7-SPDP-RTA 410 125μg iv/qod×6 245E7-IT-RTA 350 200μg iv/qod×5 280D11-IT-RTA 350 200μg iv/qod×5 200μg iv/qod×4 260F9-IT-RTA 400 200μg iv/qod×5 100μg iv/qod×3−4 245E7-IT-RTA 200μg iv/qod×5+280D11-IT-RTA(カクテル) 【0081】 腫 瘍 齢/体積 % MX1− FBW 複 合 体 (6〜10マウス/群) 腫瘍増殖阻害 IBW 245E7-SPDP-RTA 18d(300-400) 74.8(D14)3動物のみ 1.15 245E7-IT-RTA 14d(100-200) 62.5(D14)P<0.05 0.93 280D11-IT-RTA 14d(100-200) 70.0(D13)P<0.01 (1) 0.99 6d(25-50) 80.0(D14)P<0.02 0.97 260F9-IT-RTA 14d(100-200) 20.3(D14) NS(2) 1.02 14d(100-200) 17.6(D14) NS(3) 1.01 245E7-IT-RTA 14d(100-300) 70.0(D14)P<0.01 1.00 +280D11-IT-RTA(カクテル) 80.0(D10)P<0.001 0.91 (1)退化60.5%(D6)P<0.001 0.84 (2)50.8%(D11)P<0.05 0.98 (3)44.8%(D11)P<0.1 0.87 NS=有意差なし D=処理開始後の日数 【0082】抗体親和性及び抗原濃度 請求の範囲に記載されている抗体の幾つかをヨード化
し、そしてMCF−7又はBT−20細胞への結合につ
いて試験した。抗体をクロラミンTを用いて 125Iによ
り約10μCi/μgの比活性にラベルした。免疫放射
化学的純度を決定するため、0.5mlのウシ胎児血清中
100,000cpm の2種類のラベル化抗体を標的細胞
の5つのアリコートに0℃にて15分間順次吸着せしめ
(一般にアリコート当り4,000,000MCF−7
乳癌細胞)、そして各吸着後の上清液中の残りの放射能
を測定した。会合定数を測定するため、既知濃度のラベ
ル化及び非ラベル化モノクローナル抗体をウシ胎児血清
中標的細胞と共に氷中で15分間インキュベートした。 【0083】次に、細胞/抗体混合物のアリコートをガ
ンマーカウンター中で計数し、又はミクロフォルドフィ
ルタープレート(V&Pサイエンティフィック)を通し
て濾過しそしてそのフィルターをカウントした。フィル
ター上の液中に残留する未結合抗体を考慮するため、同
じ濃度の抗体を含有するがしかし細胞を含有しない対照
を並行して処理した。会合定数及び標的当たりの抗原コ
ピー数を、親和性試験結果から計算し、そして下記の表
7に報告する。 【0084】表 7 抗 体 n Ka nKa 2G3 3.7e6 9.1e6 3.4e13 113F1 2.3e6 1.1e9 2.5e15 260F9 3.1e5 5.6e7 1.7e13 266B2 8.0e4 2.7e8 2.2e13 280D11 3.9e5 8.8e6 3.4e12 317G5 3.2e6 1.6e6 5.1e12 452F2 2.5e5 6.8e6 1.7e12 454C11 3.9e5 4.8e7 1.9e13 520C90 5.0e5 8.2e6 4.1e12 n=MCF−7細胞当り抗原コピー数; Ka=MCF−7に対する会合定数。 nKaはnとKaとの積であり、そして細胞当り結合抗
体に対する抗体濃度に関連する。 【0085】抗体に対する免疫沈澱試験は、それらの内
の7つ(454C11,452F2,520C9,73
6G9,741F8,758G5、及び761B10)
は癌性***組織に見出される共通の単量体の約210,
000ダルトン蛋白質に結合することを示した。7種類
の内の6種類(452F2,520C9,736G9,
741F8,758G5、及び761B10)は21
0,000ダルトン蛋白質上の同じエピトープを認識す
ると信じられる。相対的アフィニティー研究は、これら
6種類の内520C9が最高の会合定数を示すことを示
した。 【0086】請求の範囲に記載されているモノクローナ
ル抗体を生産するハイブリドーマのサンプルはアメリカ
ン・タイプ・カルチュアー・コレクション(ATC
C)、12301パークラウイドライブ、ロックビル、
メリーランド20852−1776、米国に寄託され
た。210,000ダルトン蛋白質上の同じエピトープ
を認識する抗体を生産する6種類のハイブリドーマの内
520C9のみが寄託された。寄託されなかった5種類
は520C9と機能的に同等であると考えられる。これ
らのATCC受託番号及び寄託日は次の通りである。 【0087】 ハイブリドーマ/抗体名称 寄託日 受託番号 260F9 1984年1月27日 HB 8488 113F1 1984年1月27日 HB 8490 2G3 1984年1月27日 HB 8491 280D11 1984年1月27日 HB 8487 266B2 1984年1月27日 HB 8486 245E7 1984年1月27日 HB 8489 454C11 1984年1月27日 HB 8484 33F8 1985年1月9日 HB 8697 317G5 1984年1月27日 HB 8485 520C9 1985年1月8日 HB 8696 369F10 1984年12月13日 HB 8682 *260F9−1C9 1984年11月7日 HB 8662 317G5(CTCC 0055) 1984年12月28日 HB 8691 788G6(CTCC 0056) 1984年12月28日 HB 8692 *このクローンは260F9の子孫であり、そして260F9より良好な抗 体生産株であることが見出された。 これらの寄託はブタペスト条約のもとで行われたものであり、そしてその規定 に従って維持され他人に対して接近可能にされる。
─────────────────────────────────────────────────────
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(51)Int.Cl.6 識別記号 FI
// C12N 15/02 C12N 15/00 C
(C12P 21/08
C12R 1:91)
(72)発明者 ビョーン,マイケル ジェイ.
アメリカ合衆国,カリフォルニア
94547,ハーキュリーズ,オリーブ コ
ート 109
(56)参考文献 CANCER RESEARCH,
43,P.1295−1300(1983)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 1.乳癌組織に存在し、454C11(ATCC N
o.HB8484),452F2(ATCC No.H
B10811),520C9(ATCC No.HB8
696)及び741F8(ATCC No.HB108
07)から成る群から選択されたハイブリドーマにより
分泌されるモノクローナル抗体と特異的に結合する21
0kDのモノマー蛋白質に特異的に結合する標識された
モノクローナル抗体又は該モノマー蛋白質に特異的に結
合するその断片を含んで成る乳癌細胞検出剤。 2.前記モノクローナル抗体が、454C11(ATC
C No.HB8484),452F2(ATCC N
o.HB10811),520C9(ATCC No.
HB8696)及び741F8(ATCC No.HB
10807)から成る群から選択されたハイブリドーマ
により分泌されるものである、請求項1に記載の乳癌細
胞検出剤。 3.前記モノクローナル抗体が約4.8×107の会合
定数を有するものである、請求項1に記載の乳癌細胞検
出剤。 4.乳癌組織に存在し、454C11(ATCC N
o.HB8484),452F2(ATCC No.H
B10811),520C9(ATCC No.HB8
696)及び741F8(ATCC No.HB108
07)から成る群から選択されたハイブリドーマにより
分泌されるモノクローナル抗体と特異的に結合する21
0kDのモノマー蛋白質に特異的に結合するモノクロー
ナル抗体又は該モノマー蛋白質に特異的に結合するその
断片を含んで成るイムノトキシンを含む殺乳癌剤。 5.前記モノクローナル抗体が、454C11(ATC
C No.HB8484),452F2(ATCC N
o.HB10811),520C9(ATCC No.
HB8696)及び741F8(ATCC No.HB
10807)から成る群から選択されたハイブリドーマ
により分泌されるものである、請求項4に記載の殺乳癌
剤。 6.前記モノクローナル抗体が約4.8×107の会合
定数を有するものである、請求項4に記載の殺乳癌剤。
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US6294172B1 (en) | 1983-08-12 | 2001-09-25 | Dade Behring Marburg Gmbh | Monoclonal antibodies with specificity for membrane-associated antigens |
US5169774A (en) * | 1984-02-08 | 1992-12-08 | Cetus Oncology Corporation | Monoclonal anti-human breast cancer antibodies |
US6054561A (en) * | 1984-02-08 | 2000-04-25 | Chiron Corporation | Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens |
US5032521A (en) * | 1984-12-05 | 1991-07-16 | The Salk Institute For Biological Studies | Monoclonal antibody specific for a mammary tumor cell surface antigen |
US4938948A (en) * | 1985-10-07 | 1990-07-03 | Cetus Corporation | Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies |
JPS6296500A (ja) * | 1985-10-07 | 1987-05-02 | シータス オンコロジー コーポレイション | 抗−ヒト乳癌モノクロ−ナル抗体 |
AU601379B2 (en) * | 1985-11-07 | 1990-09-13 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The | Antigen indicative of human breast cancer and assays based thereon |
CA1289880C (en) * | 1985-12-06 | 1991-10-01 | Jeffrey L. Winkelhake | Anti-human ovarian cancer immunotoxins and methods of use thereof |
US4940670A (en) * | 1986-01-24 | 1990-07-10 | Rhodes Buck A | Method for compounding and testing patient specific monoclonal antibodies and monoclonal antibody fragments for in vivo use |
US4803169A (en) * | 1986-02-05 | 1989-02-07 | Cetus Corporation | Assay for human breast cancer |
US7838216B1 (en) * | 1986-03-05 | 2010-11-23 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Human gene related to but distinct from EGF receptor gene |
US5401638A (en) * | 1986-06-04 | 1995-03-28 | Oncogene Science, Inc. | Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans |
US6861511B1 (en) | 1986-06-04 | 2005-03-01 | Bayer Corporation | Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans |
US4894227A (en) * | 1986-08-01 | 1990-01-16 | Cetus Corporation | Composition of immunotoxins with interleukin-2 |
US6004761A (en) * | 1986-11-19 | 1999-12-21 | Sanofi | Method for detecting cancer using monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
AU613590B2 (en) * | 1986-11-19 | 1991-08-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hybridomas producing monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
US5182192A (en) * | 1987-03-27 | 1993-01-26 | The Wistar Institute | Monoclonal antibodies against glycolipid antigens, methods of producing these antibodies, and use therefor |
US4971792A (en) * | 1987-03-27 | 1990-11-20 | The Wistar Institute | Monoclonal antibodies against glycolipid antigens |
US5013645A (en) * | 1987-04-14 | 1991-05-07 | Abbott Laboratories | Immunological methods and materials for detection of tumor associated antigens |
US4863726A (en) * | 1987-05-29 | 1989-09-05 | Cetus Corporation | Combination therapy using immunotoxins with interleukin-2 |
JP3040121B2 (ja) * | 1988-01-12 | 2000-05-08 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法 |
US5720937A (en) * | 1988-01-12 | 1998-02-24 | Genentech, Inc. | In vivo tumor detection assay |
AU3049189A (en) * | 1988-02-08 | 1989-08-25 | John Muir Cancer & Aging Institute | Monoclonal antibody specific to a novel mucin-like glycoprotein surface antigen on human carcinoma cells |
JPH05506351A (ja) * | 1988-05-20 | 1993-09-22 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ ミシガン | ヒト***細胞成長インヒビターに対する抗体ならびにその製造方法および使用 |
IE62463B1 (en) * | 1988-07-07 | 1995-02-08 | Res Dev Foundation | Immunoconjugates for cancer diagnosis and therapy |
US6007817A (en) | 1988-10-11 | 1999-12-28 | University Of Southern California | Vasopermeability enhancing immunoconjugates |
IL91933A (en) * | 1988-10-11 | 1994-12-29 | Univ Southern California | Their immuno-bracelet and isophiles which are beneficial in increasing vascular permeability or blood supply to tumor or otherwise damaged tissue |
US5242824A (en) * | 1988-12-22 | 1993-09-07 | Oncogen | Monoclonal antibody to human carcinomas |
US5134075A (en) * | 1989-02-17 | 1992-07-28 | Oncogen Limited Partnership | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
DE3909799A1 (de) | 1989-03-24 | 1990-09-27 | Behringwerke Ag | Monoklonale antikoerper (mak) gegen tumorassoziierte antigene, ihre herstellung und verwendung |
US5171665A (en) * | 1989-04-17 | 1992-12-15 | Oncogen | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
US6750329B1 (en) * | 1989-05-05 | 2004-06-15 | Research Development Foundation | Antibody delivery system for biological response modifiers |
IL94872A (en) * | 1989-06-30 | 1995-03-30 | Oncogen | Monoclonal or chimeric antibodies that react with human carcinoma, recombinant proteins that contain their anti-binding site, pharmaceutical preparations and kits that contain the |
US5980896A (en) * | 1989-06-30 | 1999-11-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies reactive with human carcinomas |
US6020145A (en) * | 1989-06-30 | 2000-02-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96 |
US6884418B1 (en) * | 1989-08-04 | 2005-04-26 | Berlex Laboratories, Inc. | Use of ligand-mimicking agents and anti-neoplastic drugs in cancer therapy |
US7282345B1 (en) | 1989-08-04 | 2007-10-16 | Schering Ag | C-erbB-2 external domain: GP75 |
IL97776A (en) * | 1990-04-19 | 2000-10-31 | Res Dev Foundation | Composition comprising a conjugate of a ZME antibody and a biological response modifier |
DE4014510A1 (de) * | 1990-05-07 | 1991-11-14 | Kernforschungsz Karlsruhe | Variante cd44-oberflaechenproteine, diese kodierende c-dna-sequenzen, antikoerper gegen diese proteine sowie ihre verwendung in der diagnostik und therapie |
EP0460607A3 (en) * | 1990-06-05 | 1992-04-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Novel monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
US5948647A (en) * | 1990-10-29 | 1999-09-07 | Chiron Corporation | Nucleic acids encoding antigen-binding sites specific for cancer antigens |
US5811267A (en) * | 1990-10-29 | 1998-09-22 | Chiron Corporation | Isolated nucleic acid molecules encoding antigen binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens |
US5849877A (en) * | 1990-10-29 | 1998-12-15 | Chiron Corporation | Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens |
US6800738B1 (en) | 1991-06-14 | 2004-10-05 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
JP4124480B2 (ja) | 1991-06-14 | 2008-07-23 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫グロブリン変異体 |
AU654563B2 (en) * | 1991-07-24 | 1994-11-10 | Imperial Chemical Industries Plc | Proteins |
US5366866A (en) * | 1991-07-25 | 1994-11-22 | Duke University | Method of diagnosing ovarian and endometrial cancer with monoclonal antibodies OXA and OXB |
US20070031931A1 (en) * | 1992-02-06 | 2007-02-08 | Chiron Corporation | Biosynthetic binding proteins for immuno-targeting |
ATE503496T1 (de) * | 1992-02-06 | 2011-04-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Biosynthetisches bindeprotein für tumormarker |
AU4025193A (en) * | 1992-04-08 | 1993-11-18 | Cetus Oncology Corporation | Humanized C-erbB-2 specific antibodies |
US5376531A (en) * | 1992-09-03 | 1994-12-27 | Northwestern University | Method of detecting cancer |
US5728821A (en) * | 1994-08-04 | 1998-03-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Mutant BR96 antibodies reactive with human carcinomas |
US5792456A (en) * | 1994-08-04 | 1998-08-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Mutant BR96 antibodies reactive with human carcinomas |
US20030086922A1 (en) * | 1994-12-02 | 2003-05-08 | David B. Ring | Method of promoting an immune response with a bispecific antibody |
US6410690B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-06-25 | Medarex, Inc. | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies |
US6685940B2 (en) | 1995-07-27 | 2004-02-03 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
KR100485240B1 (ko) * | 1996-01-11 | 2006-10-24 | 테크니클론 인크. | 감소된순양전하를갖는항체 |
WO1998014577A2 (en) * | 1996-10-03 | 1998-04-09 | Biotherapies, Inc. | Nucleotide and protein sequence of mammastatin and methods of use |
US6500937B1 (en) | 1996-10-03 | 2002-12-31 | University Of Michigan | Nucleotide sequence encoding a mammary cell growth inhibitor |
US7371376B1 (en) * | 1996-10-18 | 2008-05-13 | Genentech, Inc. | Anti-ErbB2 antibodies |
ZA9811162B (en) * | 1997-12-12 | 2000-06-07 | Genentech Inc | Treatment with anti-ERBB2 antibodies. |
CA2222993A1 (en) * | 1998-02-04 | 1999-08-04 | The Ontario Cancer Institute | A method for using a ribosome-inactivating protein complex as a structural template and a molecular search engine in the design, construction and screening of combinatorial protein libraries |
KR100960211B1 (ko) * | 1998-05-06 | 2010-05-27 | 제넨테크, 인크. | 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법 |
US6770445B1 (en) | 1999-02-26 | 2004-08-03 | Pacific Northwest Research Institute | Methods and compositions for diagnosing carcinomas |
US7745159B2 (en) * | 1999-02-26 | 2010-06-29 | Nathalie B Scholler | Methods and compositions for diagnosing carcinomas |
US7041292B1 (en) | 1999-06-25 | 2006-05-09 | Genentech, Inc. | Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies |
AU779209B2 (en) * | 1999-06-25 | 2005-01-13 | Genentech Inc. | Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies |
US6949245B1 (en) * | 1999-06-25 | 2005-09-27 | Genentech, Inc. | Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies |
US20030086924A1 (en) * | 1999-06-25 | 2003-05-08 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-ErbB2 antibodies |
US20040013667A1 (en) * | 1999-06-25 | 2004-01-22 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-ErbB2 antibodies |
IL148114A0 (en) | 1999-08-27 | 2002-09-12 | Genentech Inc | DOSAGES FOR TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
US6794494B1 (en) * | 2003-04-14 | 2004-09-21 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
US20010051147A1 (en) * | 2000-03-27 | 2001-12-13 | Van De Winkel Jan G.J. | Methods for immunostimulation using binding agents for the Fc receptor of immunoglobulin A |
WO2001083781A2 (en) * | 2000-04-28 | 2001-11-08 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | 14094, a novel human trypsin family member and uses thereof |
CN102698265A (zh) * | 2000-05-19 | 2012-10-03 | 杰南技术公司 | 用于提高对ErbB 拮抗剂癌症治疗的有效应答可能性的基因检测试验 |
US20030212263A1 (en) * | 2000-06-19 | 2003-11-13 | The University Of Michigan | Mammastatin sequence variant C |
FR2811323B1 (fr) * | 2000-07-07 | 2006-10-06 | Fuma Tech Gmbh | Materiau hybride, utilisation dudit materiau hybride et procede de sa fabrication |
US6984522B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
WO2002020617A1 (en) * | 2000-09-01 | 2002-03-14 | International Bioimmune Systems, Inc. | The identification and development of specific monoclonal antibodies to squamous cell carcinoma |
US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
ZA200305980B (en) * | 2001-02-12 | 2007-01-31 | Res Dev Foundation | Modified proteins, designer toxins, and methods of making thereof |
CA2441042A1 (en) * | 2001-03-15 | 2002-09-26 | International Bioimmune Systems, Inc. | Monoclonal antibody therapy for pancreas cancer |
AU2002327310B2 (en) * | 2001-07-17 | 2006-09-28 | Research Development Foundation | Therapeutic agents comprising pro-apoptotic proteins |
US6997863B2 (en) * | 2001-07-25 | 2006-02-14 | Triton Biosystems, Inc. | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
US7951061B2 (en) * | 2001-07-25 | 2011-05-31 | Allan Foreman | Devices for targeted delivery of thermotherapy, and methods related thereto |
US7731648B2 (en) * | 2001-07-25 | 2010-06-08 | Aduro Biotech | Magnetic nanoscale particle compositions, and therapeutic methods related thereto |
US7074175B2 (en) | 2001-07-25 | 2006-07-11 | Erik Schroeder Handy | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
EP2383290B1 (en) | 2001-08-23 | 2019-05-08 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotropin (tsh) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
US7270960B2 (en) | 2001-08-29 | 2007-09-18 | Pacific Northwest Research Institute | Diagnosis of ovarian carcinomas |
US20040126762A1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-07-01 | Morris David W. | Novel compositions and methods in cancer |
US20040166490A1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-08-26 | Morris David W. | Novel therapeutic targets in cancer |
US20060040262A1 (en) * | 2002-12-27 | 2006-02-23 | Morris David W | Novel compositions and methods in cancer |
US20040197778A1 (en) * | 2002-12-26 | 2004-10-07 | Sagres Discovery, Inc. | Novel compositions and methods in cancer |
US20040180344A1 (en) * | 2003-03-14 | 2004-09-16 | Morris David W. | Novel therapeutic targets in cancer |
US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
US20090042291A1 (en) * | 2002-03-01 | 2009-02-12 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
US7662925B2 (en) * | 2002-03-01 | 2010-02-16 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants and methods for their generation |
JP2005520543A (ja) * | 2002-03-21 | 2005-07-14 | サイグレス ディスカバリー, インコーポレイテッド | 癌における新規組成物および方法 |
US20040013691A1 (en) * | 2002-06-12 | 2004-01-22 | Rosenblum Michael G. | Immunotoxin as a therapeutic agent and uses thereof |
US7659241B2 (en) | 2002-07-31 | 2010-02-09 | Seattle Genetics, Inc. | Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease |
ATE541857T1 (de) | 2002-09-27 | 2012-02-15 | Xencor Inc | Optimierte fc-varianten und herstellungsverfahren dafür |
AU2003295798B2 (en) * | 2002-11-21 | 2009-09-10 | Genentech, Inc. | Therapy of non-malignant diseases or disorders with anti-ErbB2 antibodies |
US20070218071A1 (en) * | 2003-09-15 | 2007-09-20 | Morris David W | Novel therapeutic targets in cancer |
JP2007524362A (ja) | 2003-02-14 | 2007-08-30 | サイグレス ディスカバリー, インコーポレイテッド | 癌における治療gpcr標的 |
US7767387B2 (en) * | 2003-06-13 | 2010-08-03 | Sagres Discovery, Inc. | Therapeutic targets in cancer |
US20040170982A1 (en) * | 2003-02-14 | 2004-09-02 | Morris David W. | Novel therapeutic targets in cancer |
US8388955B2 (en) * | 2003-03-03 | 2013-03-05 | Xencor, Inc. | Fc variants |
US20090010920A1 (en) * | 2003-03-03 | 2009-01-08 | Xencor, Inc. | Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb |
US9714282B2 (en) | 2003-09-26 | 2017-07-25 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants and methods for their generation |
US8101720B2 (en) * | 2004-10-21 | 2012-01-24 | Xencor, Inc. | Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions |
US20070281896A1 (en) * | 2003-09-30 | 2007-12-06 | Morris David W | Novel compositions and methods in cancer |
US7498298B2 (en) | 2003-11-06 | 2009-03-03 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
CA2554729A1 (en) * | 2004-01-27 | 2005-08-11 | University Of Southern California | Polymer-bound antibody cancer therapeutic agent |
CA2567520A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Genentech, Inc. | Maytansinoid-antibody conjugates |
NZ551335A (en) | 2004-06-18 | 2010-03-26 | Ambrx Inc | Antibodies and fragments thereof comprising an non naturally encoded amino acid coupled to a linker |
CN101014619B (zh) | 2004-07-15 | 2010-11-03 | 赞科股份有限公司 | 优化的Fc变体 |
US20060024677A1 (en) | 2004-07-20 | 2006-02-02 | Morris David W | Novel therapeutic targets in cancer |
BRPI0514259A (pt) * | 2004-08-11 | 2008-06-03 | Trubion Pharmaceuticals Inc | proteìna de fusão de domìnio de ligação |
US8546543B2 (en) | 2004-11-12 | 2013-10-01 | Xencor, Inc. | Fc variants that extend antibody half-life |
JP2008519863A (ja) * | 2004-11-12 | 2008-06-12 | シアトル ジェネティクス インコーポレイティッド | N末端にアミノ安息香酸単位を有するオーリスタチン |
US20070135620A1 (en) * | 2004-11-12 | 2007-06-14 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
US8367805B2 (en) | 2004-11-12 | 2013-02-05 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
JP4652414B2 (ja) | 2004-11-12 | 2011-03-16 | ゼンコー・インコーポレイテッド | FcRnとの変化した結合を有するFc変異体 |
US8802820B2 (en) | 2004-11-12 | 2014-08-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
US20060171919A1 (en) * | 2005-02-01 | 2006-08-03 | Research Development Foundation | Targeted polypeptides |
AU2006235276A1 (en) | 2005-04-07 | 2006-10-19 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | CACNA1E in cancer diagnosis, detection and treatment |
EP1871911A2 (en) | 2005-04-07 | 2008-01-02 | Chiron Corporation | Cancer-related genes (prlr) |
US8871720B2 (en) * | 2005-07-07 | 2014-10-28 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus |
JP5171621B2 (ja) | 2005-07-07 | 2013-03-27 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | フェニルアラニン側鎖修飾をc末端に有するモノメチルバリン化合物 |
US20090215992A1 (en) * | 2005-08-19 | 2009-08-27 | Chengbin Wu | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
EP2500357A3 (en) | 2005-08-19 | 2012-10-24 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
AU2006283532B2 (en) | 2005-08-19 | 2012-04-26 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobin and uses thereof |
CN101253199B (zh) | 2005-08-30 | 2019-06-14 | 迈阿密大学 | 免疫调节肿瘤坏死因子受体25(tnfr25)的激动剂、拮抗剂和免疫毒素 |
ES2493465T3 (es) * | 2005-09-26 | 2014-09-11 | Molecular Templates, Inc. | Biblioteca a partir de toxinas mutantes y procesos de utilización de la misma |
AU2006299429B2 (en) | 2005-10-03 | 2012-02-23 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized Fc receptor binding properties |
US7750116B1 (en) | 2006-02-18 | 2010-07-06 | Seattle Genetics, Inc. | Antibody drug conjugate metabolites |
EP1913958B1 (en) | 2006-08-03 | 2009-12-23 | Sanofi-Aventis | Antitumor compositions containing acetylcyclopropyl docetaxel and trastuzumab |
JP2010526108A (ja) * | 2007-05-07 | 2010-07-29 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 癌性疾患修飾抗体 |
CN101802012B (zh) | 2007-07-16 | 2014-08-06 | 健泰科生物技术公司 | 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法 |
US9845355B2 (en) | 2007-07-16 | 2017-12-19 | Genentech, Inc. | Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
PT2215117E (pt) * | 2007-10-30 | 2015-04-01 | Genentech Inc | Purificação de anticorpo por cromatografia de troca de catiões |
HUE044466T2 (hu) | 2007-12-26 | 2019-10-28 | Xencor Inc | Megváltozott FcRn-kötõdési képességû Fc variánsok |
IL287292B (en) | 2008-01-31 | 2022-09-01 | Genentech Inc | and fusion antibody-drug-cd79b engineered antibodies cysteine- |
KR20210131473A (ko) | 2008-03-18 | 2021-11-02 | 제넨테크, 인크. | 항-her2 항체-약물 접합체와 화학요법제의 병용물, 및 사용 방법 |
US20100260668A1 (en) * | 2008-04-29 | 2010-10-14 | Abbott Laboratories | Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof |
CN102076355B (zh) | 2008-04-29 | 2014-05-07 | Abbvie公司 | 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
KR20110016958A (ko) | 2008-06-03 | 2011-02-18 | 아보트 러보러터리즈 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
RU2010153578A (ru) * | 2008-06-03 | 2012-07-20 | Эбботт Лэборетриз (Us) | Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение |
CN102149825B (zh) * | 2008-07-08 | 2015-07-22 | Abbvie公司 | ***素e2双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
EP2362783A2 (en) * | 2008-10-31 | 2011-09-07 | Biogen Idec MA Inc. | Light targeting molecules and uses thereof |
CN102300879A (zh) * | 2008-12-04 | 2011-12-28 | 雅培制药有限公司 | 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
US8835610B2 (en) | 2009-03-05 | 2014-09-16 | Abbvie Inc. | IL-17 binding proteins |
TW201109438A (en) * | 2009-07-29 | 2011-03-16 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
RU2012112550A (ru) * | 2009-09-01 | 2013-10-10 | Эбботт Лэборетриз | Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение |
US9493578B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-15 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
AR078161A1 (es) | 2009-09-11 | 2011-10-19 | Hoffmann La Roche | Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento. |
AR078651A1 (es) | 2009-10-15 | 2011-11-23 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
UY32979A (es) * | 2009-10-28 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
US20110189178A1 (en) * | 2010-02-04 | 2011-08-04 | Xencor, Inc. | Immunoprotection of Therapeutic Moieties Using Enhanced Fc Regions |
WO2011097527A2 (en) | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Xencor, Inc. | Immunoprotection of therapeutic moieties using enhanced fc regions |
MX341925B (es) | 2010-03-29 | 2016-09-07 | Zymeworks Inc | Anticuerpos con funcion efectora suprimida o mejorada. |
EP2552967A4 (en) | 2010-04-02 | 2014-10-08 | Amunix Operating Inc | BINDING FUSION PROTEINS, BINDING FUSION PROTEIN MEDICINAL CONJUGATES, XTEN MEDICAMENT CONJUGATES, AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE |
EP2571532B1 (en) | 2010-05-14 | 2017-05-03 | Abbvie Inc. | Il-1 binding proteins |
WO2012006500A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
AU2011283694B2 (en) | 2010-07-29 | 2017-04-13 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points |
MX341579B (es) | 2010-08-03 | 2016-08-25 | Abbvie Inc * | Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas. |
TW201211252A (en) | 2010-08-26 | 2012-03-16 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
RU2627171C2 (ru) | 2010-12-21 | 2017-08-03 | Эббви Инк. | Il-1 альфа и бета биспецифические иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение |
WO2019071023A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Yale University | COMPOSITIONS AND METHODS FOR MAKING POLYPEPTIDES CONTAINING SELENOCYSTEINE |
WO2013009868A1 (en) | 2011-07-11 | 2013-01-17 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
WO2013022855A1 (en) | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering |
AU2012323287B2 (en) | 2011-10-10 | 2018-02-01 | Xencor, Inc. | A method for purifying antibodies |
US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
EP2771360A1 (en) | 2011-10-24 | 2014-09-03 | AbbVie Inc. | Immunobinders directed against sclerostin |
JP2015508994A (ja) | 2011-12-30 | 2015-03-26 | アッヴィ・インコーポレイテッド | Il−13および/またはil−17に対する二重可変ドメイン免疫グロブリン |
JP6181089B2 (ja) | 2012-03-08 | 2017-08-16 | ハロザイム インコーポレイテッド | 条件依存活性抗上皮細胞増殖因子受容体抗体およびその使用方法 |
US9738724B2 (en) | 2012-06-08 | 2017-08-22 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
WO2014011955A2 (en) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Abbvie, Inc. | Il-1 binding proteins |
PL2890402T3 (pl) | 2012-08-31 | 2019-08-30 | Sutro Biopharma, Inc. | Modyfikowane aminokwasy zawierające grupę azydkową |
AU2013337775B2 (en) | 2012-11-01 | 2017-03-30 | Abbvie Inc. | Anti-VEGF/DLL4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
JP2016513069A (ja) | 2012-11-01 | 2016-05-12 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 安定な二重可変ドメイン免疫グロブリンタンパク質製剤 |
JP6133431B2 (ja) | 2012-11-24 | 2017-05-24 | ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー.,エルティディ.Hangzhou Dac Biotech Co.,Ltd. | 親水性連結体及び薬物分子と細胞結合分子との共役反応における親水性連結体の使用 |
TW201512219A (zh) | 2013-03-15 | 2015-04-01 | Abbvie Inc | 針對IL-1β及/或IL-17之雙特異性結合蛋白 |
EP2970436B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-09-05 | AbbVie Biotherapeutics Inc. | Fc variants |
EP3019522B1 (en) | 2013-07-10 | 2017-12-13 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
WO2015035044A2 (en) | 2013-09-04 | 2015-03-12 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Fc VARIANTS WITH IMPROVED ANTIBODY-DEPENDENT CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY |
US9840493B2 (en) | 2013-10-11 | 2017-12-12 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use |
WO2015127685A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Charged linkers and their uses for conjugation |
US20160082120A1 (en) | 2014-09-23 | 2016-03-24 | Genentech, Inc. | METHODS OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES |
US10093733B2 (en) | 2014-12-11 | 2018-10-09 | Abbvie Inc. | LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins |
TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
WO2015151081A2 (en) | 2015-07-12 | 2015-10-08 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd | Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
US11713358B2 (en) | 2015-08-28 | 2023-08-01 | Amunix Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same |
UA125378C2 (uk) | 2016-03-14 | 2022-03-02 | Універшітетет І Осло | МОДИФІКОВАНІ ІМУНОГЛОБУЛІНИ ЗІ ЗМІНЕНИМ ЗВ'ЯЗУВАННЯМ FcRn |
WO2017218698A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same |
AU2016429272A1 (en) | 2016-11-14 | 2019-05-02 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers |
US20210186880A1 (en) | 2018-08-03 | 2021-06-24 | Brown University | Oral formulations with increased uptake |
US20210340277A1 (en) | 2018-10-11 | 2021-11-04 | The Scripps Research Institute | Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates |
US20220242871A1 (en) | 2019-06-10 | 2022-08-04 | Sutro Biopharma, Inc. | 5H-PYRROLO[3,2-d]PYRIMIDINE-2,4-DIAMINO COMPOUNDS AND ANTIBODY CONJUGATES THEREOF |
EP3983410A1 (en) | 2019-06-17 | 2022-04-20 | Sutro Biopharma, Inc. | 1-(4-(aminomethyl)benzyl)-2-butyl-2h-pyrazolo[3,4-c]quinolin-4-amine derivatives and related compounds as toll-like receptor (tlr) 7/8 agonists, as well as antibody drug conjugates thereof for use in cancer therapy and diagnosis |
WO2021178597A1 (en) | 2020-03-03 | 2021-09-10 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use |
BR112022021625A2 (pt) | 2020-04-26 | 2022-12-06 | Biocytogen Pharmaceuticals Beijing Co Ltd | Imunoglobulinas modificadas |
WO2022103983A2 (en) | 2020-11-11 | 2022-05-19 | Sutro Biopharma, Inc. | Fluorenylmethyloxycarbonyl and fluorenylmethylaminocarbonyl compounds, protein conjugates thereof, and methods for their use |
WO2023010060A2 (en) | 2021-07-27 | 2023-02-02 | Novab, Inc. | Engineered vlrb antibodies with immune effector functions |
WO2023164487A1 (en) | 2022-02-22 | 2023-08-31 | Brown University | Compositions and methods to achieve systemic uptake of particles following oral or mucosal administration |
US20240091365A1 (en) | 2022-06-27 | 2024-03-21 | Sutro Biopharma, Inc. | Beta-glucuronide linker-payloads, protein conjugates thereof, and methods thereof |
WO2024015229A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Sutro Biopharma, Inc. | Protease/enzyme cleavable linker-payloads and protein conjugates |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4172124A (en) * | 1978-04-28 | 1979-10-23 | The Wistar Institute | Method of producing tumor antibodies |
FR2437213A1 (fr) * | 1978-09-28 | 1980-04-25 | Cm Ind | Produits cytotoxiques formes par liaison covalente de la chaine a de la ricine avec un anticorps et leur procede de preparation |
EP0044167A3 (en) * | 1980-07-14 | 1982-04-21 | The Regents Of The University Of California | Antibody targeted cytotoxic agent |
US4359457A (en) * | 1980-09-30 | 1982-11-16 | Neville Jr David M | Anti Thy 1.2 monoclonal antibody-ricin hybrid utilized as a tumor suppressant |
JPS5843926A (ja) * | 1981-09-08 | 1983-03-14 | Suntory Ltd | 選択性制癌剤 |
US4522918A (en) * | 1981-12-15 | 1985-06-11 | Jeffery Schlom | Process for producing monoclonal antibodies reactive with human breast cancer |
GB2131830A (en) * | 1982-12-10 | 1984-06-27 | Ludwig Inst Cancer Res | Monoclonal antibody for use against breast cancer |
CA1215331A (en) * | 1983-03-04 | 1986-12-16 | Tsann M. Chu | Monoclonal antibodies to human breast carcinoma cells and their use in diagnosis and therapy |
AU601379B2 (en) * | 1985-11-07 | 1990-09-13 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The | Antigen indicative of human breast cancer and assays based thereon |
-
1985
- 1985-01-11 US US06/690,750 patent/US4753894A/en not_active Expired - Lifetime
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- 1985-10-08 DK DK460385A patent/DK167194B1/da active Protection Beyond IP Right Term
-
1992
- 1992-04-15 JP JP4095607A patent/JP2502000B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-04-15 JP JP4095610A patent/JP2546570B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-04-03 JP JP8081684A patent/JP2769311B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2001
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- 2001-02-28 NO NO2001004C patent/NO2001004I1/no unknown
- 2001-02-28 LU LU90734C patent/LU90734I2/en unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CANCER RESEARCH,43,P.1295−1300(1983) |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0153114B1 (en) | 1989-07-19 |
JPH05184360A (ja) | 1993-07-27 |
EP0153114A2 (en) | 1985-08-28 |
LU90734I2 (en) | 2001-04-30 |
NO164306B (no) | 1990-06-11 |
NZ211070A (en) | 1989-02-24 |
WO1985003523A1 (en) | 1985-08-15 |
NO853961L (no) | 1985-10-07 |
NL300040I1 (nl) | 2001-05-01 |
DK460385A (da) | 1985-10-08 |
FI853884A0 (fi) | 1985-10-07 |
JPH0646958B2 (ja) | 1994-06-22 |
JPS61500789A (ja) | 1986-04-24 |
FI853884L (fi) | 1985-10-07 |
DK460385D0 (da) | 1985-10-08 |
EP0153114A3 (en) | 1985-10-09 |
US4753894A (en) | 1988-06-28 |
IE850300L (en) | 1985-08-08 |
JP2546570B2 (ja) | 1996-10-23 |
JP2502000B2 (ja) | 1996-05-29 |
JPH05279400A (ja) | 1993-10-26 |
DE10199017I1 (de) | 2001-05-23 |
ATE44769T1 (de) | 1989-08-15 |
DK167194B1 (da) | 1993-09-13 |
IL74271A0 (en) | 1985-05-31 |
IE58974B1 (en) | 1993-12-15 |
IL74271A (en) | 1988-11-30 |
JPH08295700A (ja) | 1996-11-12 |
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DE3571648C5 (de) | 2006-05-11 |
NO2001004I1 (no) | 2001-04-09 |
NL300040I2 (nl) | 2004-01-05 |
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