JP2724333B2 - 腫瘍予防剤 - Google Patents
腫瘍予防剤Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な腫瘍予防剤に関し、詳しくはカンキツ
類の苦味成分であるカンキツリモノイドを有効成分とす
る腫瘍予防剤に関する。
類の苦味成分であるカンキツリモノイドを有効成分とす
る腫瘍予防剤に関する。
グルタチオン−S−トランスフェラーゼ(GST)は生
体異物を無毒化することに関係している重要な酵素群で
ある。これらの酵素は、反応性に富む発ガン物質のよう
な親電子物質とグルタチオンとの内転形成を引き起こし
て水溶性物質に変える特性があり、この水溶性物質は容
易に***される。
体異物を無毒化することに関係している重要な酵素群で
ある。これらの酵素は、反応性に富む発ガン物質のよう
な親電子物質とグルタチオンとの内転形成を引き起こし
て水溶性物質に変える特性があり、この水溶性物質は容
易に***される。
即ち、GST活性の増加は発ガン性物質の無毒化を促進
する能力を増大させるといえる。このように無毒化を行
う酵素群の活性を高めるような物質はすべて潜在的に抗
発ガン剤とすることができ、化学的に誘発されるガン
(腫瘍)の形成を阻止する。
する能力を増大させるといえる。このように無毒化を行
う酵素群の活性を高めるような物質はすべて潜在的に抗
発ガン剤とすることができ、化学的に誘発されるガン
(腫瘍)の形成を阻止する。
緑のコーヒー豆から分離されたカーベオール(Kahweo
l)やカフェストール(Cafestol)などのようにフラン
基をもつ天然化合物は化学的に誘発される腫瘍の形成を
阻害することが知られている。
l)やカフェストール(Cafestol)などのようにフラン
基をもつ天然化合物は化学的に誘発される腫瘍の形成を
阻害することが知られている。
又このフラン部分はGST活性を上昇させる誘因作用に
関係していることが、実験動物によって知られている。
カンキツより分離された37種のリモノイドの総てはこの
フラン基を有する化合物である。
関係していることが、実験動物によって知られている。
カンキツより分離された37種のリモノイドの総てはこの
フラン基を有する化合物である。
そこで本発明者らは、カンキツのリモノイドが上記カ
ーベオール、カフェストールと同等或いはそれ以上にGS
T活性誘因作用と腫瘍発生予防効果を有する化合物であ
るかどうかを見出すべく、鋭意研究を行った結果、特に
ノミリンがこの種の作用を多く有し、腫瘍予防剤として
有効であることを認め、本発明を完成するに至ったので
ある。
ーベオール、カフェストールと同等或いはそれ以上にGS
T活性誘因作用と腫瘍発生予防効果を有する化合物であ
るかどうかを見出すべく、鋭意研究を行った結果、特に
ノミリンがこの種の作用を多く有し、腫瘍予防剤として
有効であることを認め、本発明を完成するに至ったので
ある。
ここで、下記構造式(1)、(2)で示されるリモニ
ン、ノミリンはその他のリモノイドと共に、一般に食用
とされるカンキツ類、例えば、オレンジ、レモン、ライ
ム、グレープフルーツ、温州ミカン、夏ミカン、ポンカ
ン、イヨカンなどに存在する。斯かるカンキツリモノイ
ドの分子構造はフラン基が3位の位置で高度に酸化され
たトリテルペンのC−17の位置に結合している。又、カ
ンキツリモノイドは構造式(3)、(4)で示す如くグ
ルコースと結合して存在している。
ン、ノミリンはその他のリモノイドと共に、一般に食用
とされるカンキツ類、例えば、オレンジ、レモン、ライ
ム、グレープフルーツ、温州ミカン、夏ミカン、ポンカ
ン、イヨカンなどに存在する。斯かるカンキツリモノイ
ドの分子構造はフラン基が3位の位置で高度に酸化され
たトリテルペンのC−17の位置に結合している。又、カ
ンキツリモノイドは構造式(3)、(4)で示す如くグ
ルコースと結合して存在している。
〔実施例〕 以下に実施例を挙げて本発明の作用効果を詳しく説明
する。
する。
本研究はリモニンとノミリンをICR/Haネズミに投与
し、それによる酵素の誘因性と、ベンツピレンにより誘
発される胃の腫瘍発生阻害について研究した。
し、それによる酵素の誘因性と、ベンツピレンにより誘
発される胃の腫瘍発生阻害について研究した。
(実験方法) (試薬) 略号 BP:ベンツピレン CDNB:1−クロロ−2,4−ジニトロベンゼン 3−BHA:3−ターシャリーブチル−4−ヒドロキシアニ
ソール BPとCDNBはアルドリッチケミカル社より購入した。3
−BHAはシグマケミカル社のものを再結晶して精製し
た。グルタチオンはシグマケミカル社より購入した。リ
モニンとノミリンはグレープフルーツより次の方法によ
り抽出精製した。
ソール BPとCDNBはアルドリッチケミカル社より購入した。3
−BHAはシグマケミカル社のものを再結晶して精製し
た。グルタチオンはシグマケミカル社より購入した。リ
モニンとノミリンはグレープフルーツより次の方法によ
り抽出精製した。
粉砕した種子をヘキサンで十分に洗浄したのち、アセ
トンでリモノイドを抽出した。リモニンはジクロルメタ
ン混液より分別結晶化により単離した。ノミリンは、残
った母液よりアセトンで結晶単離した。各々の構造の確
認はNMRスペクトル分析により行った。
トンでリモノイドを抽出した。リモニンはジクロルメタ
ン混液より分別結晶化により単離した。ノミリンは、残
った母液よりアセトンで結晶単離した。各々の構造の確
認はNMRスペクトル分析により行った。
メスのICR/Haネズミで生後8週のもの(ハーラン・ス
プレーク・ドーリー研究所より購入)をほぼ完全な飼料
(ICN栄養化学社より購入)にて1週間飼育したのち、
試験区と対照区とに分けた。3匹を一つのグループとし
た。
プレーク・ドーリー研究所より購入)をほぼ完全な飼料
(ICN栄養化学社より購入)にて1週間飼育したのち、
試験区と対照区とに分けた。3匹を一つのグループとし
た。
試験区のネズミには綿実油だけに懸濁させたテスト化
合物を1日おきに3回投与した。最後に強制投与してか
ら24時間後、ネズミを殺し、肺、胃、約1/3の小腸粘
膜、肝臓をとり出し、酵素の調製を行った。
合物を1日おきに3回投与した。最後に強制投与してか
ら24時間後、ネズミを殺し、肺、胃、約1/3の小腸粘
膜、肝臓をとり出し、酵素の調製を行った。
各組織に1.15%の塩化カリウム溶液を加え、ブリンク
マン(Brinkman)ホモジナイザーでホモジナイズした。
100,000×gで1時間、遠心分離をおこない、上澄液を
得た。この酵素液は使用するまでの間、−80℃で凍結し
た。
マン(Brinkman)ホモジナイザーでホモジナイズした。
100,000×gで1時間、遠心分離をおこない、上澄液を
得た。この酵素液は使用するまでの間、−80℃で凍結し
た。
試料の蛋白含量はローリー(Lowry)法により測定し
た。各検体はネズミ一匹の一組織にあたる。
た。各検体はネズミ一匹の一組織にあたる。
(GST活性の測定) 上澄液のGST活性はハービッヒ(Habig)らの方法に従
い、CDNBを基質として用いた。
い、CDNBを基質として用いた。
反応速度はヒューレッドパッカードHP8450A比色計を用
いて340nmでモニターした。5ミリモルのGSHと1ミリモ
ルのCDNBの存在下、pH6.5のリン酸緩衝液中で反応を行
わせた。対照液には酵素を加えない反応液を使用した。
いて340nmでモニターした。5ミリモルのGSHと1ミリモ
ルのCDNBの存在下、pH6.5のリン酸緩衝液中で反応を行
わせた。対照液には酵素を加えない反応液を使用した。
(腫瘍の阻害) 腫瘍の阻害試験は既に発表された方法に従って行っ
た。
た。
ハーラン・スプレイク・ドーリー研究所(イリノイ
州、インジアナポリス)より購入した8週令のメスネズ
ミ(ICR/Ha)120匹を均等に6つのグループに分けた。
ネズミは実験を開始する一週間前まで、ほぼ完全な飼料
を与え、発ガン処理をおこなった3日後まで同じ飼料を
与えた。
州、インジアナポリス)より購入した8週令のメスネズ
ミ(ICR/Ha)120匹を均等に6つのグループに分けた。
ネズミは実験を開始する一週間前まで、ほぼ完全な飼料
を与え、発ガン処理をおこなった3日後まで同じ飼料を
与えた。
発ガン処理は、一週間に2回ずつ4週間にわたって一
匹のネズミに対して1mgのベンツピレン(BP)を0.2mlの
コーン油に溶かしたものを強制投与した。
匹のネズミに対して1mgのベンツピレン(BP)を0.2mlの
コーン油に溶かしたものを強制投与した。
阻害剤は発ガン処理をおこなわない日に、週3回強制
投与した。阻害剤は、発ガン処理前日に2回と、最後の
発ガン処理のあと1回余計に投与した。
投与した。阻害剤は、発ガン処理前日に2回と、最後の
発ガン処理のあと1回余計に投与した。
ベンツピレン投与が終了して3日目に試験動物を普通
のケージにもどし、実験終了まで飼育した。第1回目の
ベンツピレンを投与してから18週目にネズミを殺し、胃
を除いたあとホルマリン注射により固定した。その後、
縦に解剖して胃に発生した腫瘍の数を1mmスケールの解
剖顕微鏡でカウントした。0.5mmより大きい腫瘍は記録
して、組織生理学的に検討した。結果を表1〜4に示
す。
のケージにもどし、実験終了まで飼育した。第1回目の
ベンツピレンを投与してから18週目にネズミを殺し、胃
を除いたあとホルマリン注射により固定した。その後、
縦に解剖して胃に発生した腫瘍の数を1mmスケールの解
剖顕微鏡でカウントした。0.5mmより大きい腫瘍は記録
して、組織生理学的に検討した。結果を表1〜4に示
す。
〔統計処理〕 腫瘍を生じたネズミの数についての重要性を「Chi Sq
uare」テスト(カイ・スクエア・テスト)により解析し
た。また、ネズミ一匹あたりの腫瘍と酵素活性について
の統計処理は、スチューデント・t・テストによってお
こなった。
uare」テスト(カイ・スクエア・テスト)により解析し
た。また、ネズミ一匹あたりの腫瘍と酵素活性について
の統計処理は、スチューデント・t・テストによってお
こなった。
(結果) 表1によると、リモニンとノミリンはICR/Haネズミの
肝臓と小腸粘膜においてGST活性を誘因増加させる効果
をもつことが確かめられた。
肝臓と小腸粘膜においてGST活性を誘因増加させる効果
をもつことが確かめられた。
両方の組織において、抗ガン剤としても、又、酵素誘
因剤としても知られるBHAを対照として用いた。ネズミ
肝臓において、5mgと10mgのノミリン投与により、GST誘
因活性は対照区に比べてそれぞれ2.48倍と3.44倍増加し
た。一方、リモニンは同じ投与量でも効果がなかった。
因剤としても知られるBHAを対照として用いた。ネズミ
肝臓において、5mgと10mgのノミリン投与により、GST誘
因活性は対照区に比べてそれぞれ2.48倍と3.44倍増加し
た。一方、リモニンは同じ投与量でも効果がなかった。
小腸粘膜は誘因剤に対して非常に敏感な組織であり、
5mgと10mgのノミリンの投与により、対照区に比べてGST
活性が、それぞれ3.00倍と4.17倍増加した。リモニンは
酵素誘因剤としては余り顕著な効果が見られなかった
(対照に比べてそれぞれ1.33倍と1.36倍)。
5mgと10mgのノミリンの投与により、対照区に比べてGST
活性が、それぞれ3.00倍と4.17倍増加した。リモニンは
酵素誘因剤としては余り顕著な効果が見られなかった
(対照に比べてそれぞれ1.33倍と1.36倍)。
ICR/Haネズミにおいて、これらの化合物による酵素誘
因活性とベンツピレンにより誘発された胃の腫瘍に対す
る阻害剤としての効果は相関関係にある。
因活性とベンツピレンにより誘発された胃の腫瘍に対す
る阻害剤としての効果は相関関係にある。
表2に、ベンツピレンによってネズミの胃に誘発され
た腫瘍に対するリモニンとノミリンによる抑制効果を示
した。
た腫瘍に対するリモニンとノミリンによる抑制効果を示
した。
対照区のネズミは、100%腫瘍を生じたのに対してノ
ミリン10mgの投与により、腫瘍を生じたネズミは72%に
減少した。
ミリン10mgの投与により、腫瘍を生じたネズミは72%に
減少した。
一般に良く知られた阻害剤であるBHAを本試験でも用
いた。
いた。
10mgのノミリンおよび7.5mgのBHAを投与することによ
って生じた阻害効果は、対照区とは明らかに差が見られ
た。10mgのノミリンを投与したグループではネズミ一匹
あたりの腫瘍の数が著しく減少した。5mgのノミリンを
投与したグループでは、腫瘍を生じたネズミの数はわず
かに減少したが、対照区に比べて十分に満足のいく結果
は得られなかった。
って生じた阻害効果は、対照区とは明らかに差が見られ
た。10mgのノミリンを投与したグループではネズミ一匹
あたりの腫瘍の数が著しく減少した。5mgのノミリンを
投与したグループでは、腫瘍を生じたネズミの数はわず
かに減少したが、対照区に比べて十分に満足のいく結果
は得られなかった。
表3,表4に夫々、小腸及び肝臓におけるリモニン、ノ
ミリン以外のリモノイドを用いておこなったGST活性の
誘因結果について示した。その結果、ノミリン、イソオ
バキュノン酸とオバキュノンが強い誘因活性をもつこと
がわかった。
ミリン以外のリモノイドを用いておこなったGST活性の
誘因結果について示した。その結果、ノミリン、イソオ
バキュノン酸とオバキュノンが強い誘因活性をもつこと
がわかった。
(考察) 前述の通り化学的な発ガン物質の阻害剤が、解毒化酵
素であるGSTの活性を高めることが知られている。
素であるGSTの活性を高めることが知られている。
本研究の結果により、天然に存在するリモノイドがさ
らに関係していることが認められた。
らに関係していることが認められた。
ノミリンの酵素誘因作用、および発ガン阻害活性は、
この試験で用いたBHAの効果と同じ位に重要であること
がわかった。ノミリンの分子量はBHAより3倍も大きい
ので、ノミリンの生化学的活性は分子レベルにおいて
は、BHAよりはるかに大きい。従ってBHAのようにフェノ
ール系抗酸化剤の効果よりさらに大きいと予想される。
事実、ノミリンはカフェストールよりGST誘因効果が大
きい。
この試験で用いたBHAの効果と同じ位に重要であること
がわかった。ノミリンの分子量はBHAより3倍も大きい
ので、ノミリンの生化学的活性は分子レベルにおいて
は、BHAよりはるかに大きい。従ってBHAのようにフェノ
ール系抗酸化剤の効果よりさらに大きいと予想される。
事実、ノミリンはカフェストールよりGST誘因効果が大
きい。
これらのリモノイドを長期間、摂取することにより、
ベンツピレンによって誘発される腫瘍を防止する効果が
あることが非常に期待できる。
ベンツピレンによって誘発される腫瘍を防止する効果が
あることが非常に期待できる。
リモニンより効果的な発ガン阻害剤としてのノミリン
はカンキツ果汁中には、含量が少ない。カンキツ果汁中
のリモニンとノミリンの割合はフルーツの種類、収穫時
期、果汁製造後の貯蔵期間、および加熱処理等の要因に
よって異なるが、一般的にリモニンの濃度はノミリンの
量よりも多い。リモニンの苦味は果汁中の濃度が6ppmを
越えると感じられるようになる。従って、これら2種類
のリモノイドの消費量は一般的には少ない。
はカンキツ果汁中には、含量が少ない。カンキツ果汁中
のリモニンとノミリンの割合はフルーツの種類、収穫時
期、果汁製造後の貯蔵期間、および加熱処理等の要因に
よって異なるが、一般的にリモニンの濃度はノミリンの
量よりも多い。リモニンの苦味は果汁中の濃度が6ppmを
越えると感じられるようになる。従って、これら2種類
のリモノイドの消費量は一般的には少ない。
表5に示す如く、リモノイドはカンキツ種子の中に豊
富に存在している。一般にノミリンはリモリンに次いで
多量存在している。リモノイドは又グルコサイドとして
も多量に存在する。例えばオレンジ果汁、グレープフル
ーツ果汁、レモン果汁には平均夫々320ppm、200ppm、90
ppm含まれている。グレープフルーツ種子の中には0.8〜
1%存在する。
富に存在している。一般にノミリンはリモリンに次いで
多量存在している。リモノイドは又グルコサイドとして
も多量に存在する。例えばオレンジ果汁、グレープフル
ーツ果汁、レモン果汁には平均夫々320ppm、200ppm、90
ppm含まれている。グレープフルーツ種子の中には0.8〜
1%存在する。
斯様なリモノイドグルコサイドを加水分解するバクテ
リヤが数多く存在する。従って腸の中でこれらのグルコ
サイドが分解されリモノイドが遊離され腸壁より吸収さ
れる可能性が大きい。リモノイドグルコサイドは水溶性
であると同時に苦味も極めて弱いので抗ガン剤として応
用範囲が広くなる。
リヤが数多く存在する。従って腸の中でこれらのグルコ
サイドが分解されリモノイドが遊離され腸壁より吸収さ
れる可能性が大きい。リモノイドグルコサイドは水溶性
であると同時に苦味も極めて弱いので抗ガン剤として応
用範囲が広くなる。
構造が類似のリモノイドの予備試験によると、それら
の化合物も同様の化学的阻害物質として有効であること
がわかった。
の化合物も同様の化学的阻害物質として有効であること
がわかった。
リモノイドとリモノイド様の天然物質を組み合わせる
ことによる累積効果も有効であると容易に推察される。
ことによる累積効果も有効であると容易に推察される。
本発明化合物は、腫瘍予防剤として有用である。リモ
ノイドはグルコサイドとして比較的多量にカンキツ果汁
に含まれており、又種子、表皮は牛の飼料として大量使
用されており極めて安全性の高いものである。
ノイドはグルコサイドとして比較的多量にカンキツ果汁
に含まれており、又種子、表皮は牛の飼料として大量使
用されており極めて安全性の高いものである。
本発明化合物を腫瘍予防剤として投与する場合、散
剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などとして経口的
に投与してもよいし、また注射剤、外用剤、点滴剤とし
て非経口的に投与してもよい。又皮膚の抗ガン剤として
日焼けどめクリーム等の中に入れてもよい。リモノイド
グルコサイドはヨーグルトや健康ドリンクの中にも入れ
てもよいし、又食品添加物としても使用出来る。投与量
は症状の程度、年令などにより著しく異なるが、通常1
日当たり約1〜100mg/kg、好ましくは2〜20mg/kg、更
に好ましくは8〜10mg/kgの1日1〜数回に分けて投与
する。
剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などとして経口的
に投与してもよいし、また注射剤、外用剤、点滴剤とし
て非経口的に投与してもよい。又皮膚の抗ガン剤として
日焼けどめクリーム等の中に入れてもよい。リモノイド
グルコサイドはヨーグルトや健康ドリンクの中にも入れ
てもよいし、又食品添加物としても使用出来る。投与量
は症状の程度、年令などにより著しく異なるが、通常1
日当たり約1〜100mg/kg、好ましくは2〜20mg/kg、更
に好ましくは8〜10mg/kgの1日1〜数回に分けて投与
する。
製剤化の際は通常の製剤担体を用い、常法により製造
する。
する。
即ち、経口用固形製剤を調製する場合は、主剤に賦形
剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色
剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆
錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などとする。
剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色
剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆
錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などとする。
注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりpH調整
剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加し、常法に
より皮下、筋肉内、静脈内用注射剤とする。
剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加し、常法に
より皮下、筋肉内、静脈内用注射剤とする。
Claims (1)
- 【請求項1】カンキツリモノイドであるノミリンを有効
成分として含有することを特徴とする腫瘍予防剤。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63231668A JP2724333B2 (ja) | 1988-09-16 | 1988-09-16 | 腫瘍予防剤 |
GB8914429A GB2222769B (en) | 1988-09-16 | 1989-06-23 | Antitumor agent |
US07/372,432 US5041425A (en) | 1988-09-16 | 1989-06-23 | Antitumor agent |
DE3922666A DE3922666A1 (de) | 1988-09-16 | 1989-07-10 | Antitumor-mittel |
FR898909526A FR2636533B1 (fr) | 1988-09-16 | 1989-07-13 | Composition pharmaceutique et agent antitumoral a base de limonoides agrumes |
CH3063/89A CH678919A5 (ja) | 1988-09-16 | 1989-08-23 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63231668A JP2724333B2 (ja) | 1988-09-16 | 1988-09-16 | 腫瘍予防剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0283320A JPH0283320A (ja) | 1990-03-23 |
JP2724333B2 true JP2724333B2 (ja) | 1998-03-09 |
Family
ID=16927107
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63231668A Expired - Lifetime JP2724333B2 (ja) | 1988-09-16 | 1988-09-16 | 腫瘍予防剤 |
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---|---|
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CH (1) | CH678919A5 (ja) |
DE (1) | DE3922666A1 (ja) |
FR (1) | FR2636533B1 (ja) |
GB (1) | GB2222769B (ja) |
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JP2649461B2 (ja) * | 1991-12-25 | 1997-09-03 | トヨタ自動車株式会社 | 排ガス浄化触媒用担体構造 |
WO1994029062A1 (fr) * | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Nippon Yakin Kogyo Co., Ltd. | Support metallique de nettoyage des gaz d'echappement et procede pour sa fabrication |
JPH09110714A (ja) * | 1995-10-17 | 1997-04-28 | Wakayama Aguri Bio Kenkyu Center:Kk | リモノイド配糖体の製造方法 |
US6239114B1 (en) * | 1997-09-26 | 2001-05-29 | Kgk Synergize | Compositions and methods for treatment of neoplastic diseases with combinations of limonoids, flavonoids and tocotrienols |
US6251400B1 (en) * | 1997-09-26 | 2001-06-26 | Kgk Synergize Inc | Compositions and methods of treatment of neoplastic diseases and hypercholesterolemia with citrus limonoids and flavonoids and tocotrienols |
US7201928B1 (en) | 1999-09-21 | 2007-04-10 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Extracts of orange peel for prevention and treatment of cancer |
US20020061339A1 (en) * | 2000-09-28 | 2002-05-23 | Martin Stogniew | Compositions and methods for use of extracts of rutaceae plants |
EP1648848A4 (en) * | 2003-08-01 | 2006-11-22 | Transform Pharmaceuticals Inc | POLYMORPH OF BUTYLHYDROXYANISOL |
US7691417B2 (en) | 2004-09-02 | 2010-04-06 | Clemson University Research Foundation | Tumor and mutation suppressing plant extract |
JP5014569B2 (ja) * | 2004-09-16 | 2012-08-29 | オリザ油化株式会社 | 美肌用組成物 |
US20070117763A1 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Kgk Synergize Inc. | Compositions and methods for treatment and prevention of metabolic syndrome and its associated conditions with combinations of flavonoids, liminoids and tocotrienols |
US20100196549A1 (en) * | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Tropicana Products, Inc. | Microencapsulated citrus phytochemicals and application to sports drinks |
US20100196577A1 (en) * | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Tropicana Products, Inc. | Microencapsulated citrus phytochemicals comprising citrus limonoids and application to sports drinks |
US20100196554A1 (en) * | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Tropicana Products, Inc. | Microencapsulated citrus phytochemicals comprising citrus limonoids and application to beverages |
US9545117B2 (en) * | 2009-02-03 | 2017-01-17 | Tropicana Products, Inc. | Microencapsulated citrus phytochemicals and application to beverages |
JP2012180309A (ja) * | 2011-03-02 | 2012-09-20 | Satoshi Mochizuki | 肝障害予防剤 |
CN102617699A (zh) * | 2012-03-13 | 2012-08-01 | 湖南冠元生物科技有限公司 | 一种采用工业层析法制备诺米林单体的工艺方法 |
US9132117B2 (en) | 2013-06-17 | 2015-09-15 | Kgk Synergize, Inc | Compositions and methods for glycemic control of subjects with impaired fasting glucose |
JP5915985B2 (ja) * | 2014-11-26 | 2016-05-11 | 望月 聡 | 肝障害予防剤 |
CN104447650B (zh) * | 2014-12-22 | 2016-03-09 | 湖南城市学院 | 一种柠檬苦素类化合物、制备方法与医药用途 |
CN104628692B (zh) * | 2015-02-09 | 2016-02-10 | 庄爱华 | 柠檬苦素类化合物,其药物组合物及其制备方法和用途 |
CN105294819A (zh) * | 2015-10-20 | 2016-02-03 | 淄博夸克医药技术有限公司 | 一种用于治疗乳腺癌的新的柠檬苦素类化合物 |
CN108929202B (zh) * | 2017-05-24 | 2021-02-19 | 中国人民解放军军事医学科学院生物医学分析中心 | 2-叔丁基-4-甲氧基苯酚制备新方法及其新晶型 |
CN108642117B (zh) * | 2018-03-06 | 2020-12-15 | 北京颐方生物科技有限公司 | 一种提取柠檬苦素和诺米林的方法 |
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GB2111384A (en) * | 1981-08-03 | 1983-07-06 | Wynne David | Improvement in preventative and curative medicine |
US4479972A (en) * | 1982-06-30 | 1984-10-30 | General Foods Corporation | Flavor and mouthfeel character in foodstuffs by the addition of bitter principles |
-
1988
- 1988-09-16 JP JP63231668A patent/JP2724333B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-06-23 GB GB8914429A patent/GB2222769B/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-23 US US07/372,432 patent/US5041425A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-10 DE DE3922666A patent/DE3922666A1/de not_active Ceased
- 1989-07-13 FR FR898909526A patent/FR2636533B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-23 CH CH3063/89A patent/CH678919A5/fr not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
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Journal of Natural Products,Vol.46,No.3(1989)P.379−390 |
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---|---|
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FR2636533A1 (fr) | 1990-03-23 |
JPH0283320A (ja) | 1990-03-23 |
GB8914429D0 (en) | 1989-08-09 |
GB2222769A (en) | 1990-03-21 |
US5041425A (en) | 1991-08-20 |
DE3922666A1 (de) | 1990-03-22 |
GB2222769B (en) | 1992-01-22 |
CH678919A5 (ja) | 1991-11-29 |
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