JPH0283320A - 腫瘍予防剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な腫瘍予防剤に関し、詳しくはカンキツ類
の苦味成分であるカンキツリモノイドを有効成分とする
腫瘍予防剤に関する。

〔従来の技術とその課題〕

グルタチオン−３−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）は生
体異物を無毒化することに関係している重要な酵素群で
ある。これらの酵素は、反応性に富む発ガン物質のよう
な親電子物質とグルタチオンとの内転形成を引き起こし
て水溶性物質に変える特性があり、この水溶性物質は容
易に***される。

即ち、ＧＳＴ活性の増加は発ガン性物質の無毒化を促進
する能力を増大させるといえる。このように無毒化を行
う酵素群の活性を高めるような物質はすべて潜在的に誘
発ガン剤とすることができ、化学的に誘発されるガン（
腫瘍）の形成を阻止する。

緑のコーヒー豆から分離されたカーベオール（Ｋａｈｗ
ｅｏｌ）やカフニストール（（：ａｆｅｓｔｏｌ）など
のように７ラン基をもつ天然化合物は化学的に誘発され
る腫瘍の形成を阻害することが知られている。

又このフラン部分はＧＳＴ活性を上昇させる誘因作用に
関係していることが、実験動物によって知られている。

カンキツより分離された３７種のりモノイドの総てはこ
の７ラン基を有する化合物である。

〔課題を解決するための手段〕

そこで本発明者らは、カンキツのりモノイドが上記カー
ベオール、カフニストールと同等或いはそれ以上にＧＳ
Ｔ活性誘因作用と腫瘍発生予防効果を有する化合物であ
るかどうかを見出すべく、鋭意研究を行った結果、特に
ノミリンがこの種の作用を多く有し、腫瘍予防剤として
有効であることを認め、本発明を完成するに至ったので
ある。

ここで、下記構造式（１）、（２）で示されるリモニン
、ノミリンはその他のりモノイドと共に、一般に食用と
されるカンキツ類、例えば、オレンジ、レモン、ライム
、グレープフルーツ、温州ミカン、夏ミカン、ポンカン
、イヨカンなどに存在する。斯かるカンキツリモノイド
の分子構造はフラン基が３位の位置で高度に酸化された
トリテルペンのＣ−１７の位置に結合している。

又、カンキツリモノイドは構造式（３）、（４）で示す
如くグルコースと結合して存在している。

リモニン１７ ノミ リ　ン１７−０ β β グルコピラノシド グルコピラノシド 〔実方缶例〕 以下に実施例を挙げて本発明の作用効果を詳しく説明す
る。

本研究はリモニンとノミリンをＩｃＲ／Ｈａ不ズミに投
与し、それによる酵素の誘因性と、ペンツピレンにより
誘発される胃の腫瘍発生阻害について研究した。

（実験方法） （試薬） 略号 ＢＰ：ベンツピレン ＣＤＮＢ　：　１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン
３、−ＢＨ八：３−ターシャリ−ブチル−４−ヒドロキ
シアニソール ＢＰとＣＤ　Ｎ　Ｂはアルドリッチケミカル社より購入
した。３−Ｂ）ＩＡはシグマケミカル社のものを再結晶
して精製した。グルタチオンはシグマケミカル社より購
入した。リモニンとノミリンはグレープフルーツより次
の方法により抽出精製した。

粉砕した種子をヘキサンで十分に洗浄したのち、アセト
ンでリモノイドを抽出した。リモニンはジクロルメタン
混液より分別結晶化により単離した。ノミリンは、残っ
た母液よりアセトンで結晶単離した。各々の構造の確認
はＮＭＲスペクトル分析により行った。

〔酵素液の調製〕

メスのＩＣＲ／Ｈａネズミで生後８週のもの（バーラン
・スプレーク・ドーリ−研究所より購入）をほぼ完全な
飼料（ＩｃＮ栄養化学社より購入）にて１週間飼育した
のち、試験区と対照区とに分けた。３匹を一つのグルー
プとした。

試験区のネズミには綿実油だけに懸濁させたテスト化合
物を１日おきに３回投与した。最後に強制投与してから
２４時間後、ネズミを殺し、肺、胃、約１７３の小腸粘
膜、肝臓をとり出し、酵素の調製を行った。

各組織に１．１５％の塩化カリウム溶液を加え、ブリン
クマン（Ｂｒ　＋ｎｋｍａｎ）ホモジナイザーでホモジ
ナイズした。１００．０００　ｘｇで１時間、遠心分離
をおこない、上澄液を得た。この酵素液は使用するまで
の間、−８０℃で凍結した。

試料の蛋白含量はロー’Ｊ−（Ｌｏｗｒｙ）法により測
定した。各検体はネズミー匹の一組織にあたる。

（ＧＳＴ活性の測定） 上澄液のＧＳＴ活性はハービッヒ（）Ｉａｂｉｇ）　　
らの方法に従い、ＣＤＮＢを基質として用いた。

反応速度はヒユーレッドパラカード１ｌＰ８４５０Ａ比
色計を用いて３４０ｎｍでモニターした。５ミリモルの
ＧＳＨと１ミリモルのＣＤＮＢの存在下、ｐＨ６，５の
リン酸緩衝液中で反応を行わせた。対照液には酵素を加
えない反応液を使用した。

（腫瘍の阻害） 腫瘍の阻害試験は既に発表された方法に従って行った。

バーラン・スブレイク・ドーリ−研究所（イリノイ州、
インジアナポリス）より購入した８週令のメスネズミ（
ＩＣＲ／Ｈａ）　１２０匹を均等に６つのグループに分
けた。ネズミは実験を開始する一週間前まで、はぼ完全
な飼料を与え、発ガン処理をおこなった３日後まで同じ
飼料を与えた。

発ガン処理は、−週間に２回ずつ４週間にわたって一匹
のネズミに対して１ｍｇのペンツピレン（ＢＰ）を０．
２ｍｌのコーン油に溶かしたものを強制投与した。

阻害剤は発ガン処理をおこなわない日に、週３回強制投
与した。阻害剤は、発ガン処理前日に２回と、最後の発
ガン処理のあと１回余計に投与した。

ペンツピレン投与が終了して３日目に試験動物を普通の
ケージにもどし、実験終了まで飼育した。第１回目のペ
ンツピレンを投与してから１８８日目ネズミを殺し、胃
を除いたあとホルマリン注射により固定した。その後、
縦に解剖して胃に発生した腫瘍の数を１ｍｍスケールの
解剖顕微鏡でカウントした。０．５ｍｍより大きい腫瘍
は記録して、組織生理学的に検討した。結果を表１〜４
に示す。

〔統計処理〕

腫瘍を生じたネズミの数についての重要性をｒｃｈｉ　
５ｑｕａｒｅ」テスト　（カイ・スクエア・テスト）に
より解析した。また、ネズミー匹あたりの腫瘍と酵素活
性についての統計処理は、スチューデント・ｔ　・テス
トによっておこなった。

（結果） 表１によると、リモニンとノミリンはＩＣＲ／Ｈａネズ
ネズ肝臓と小腸粘膜においてＧＳＴ活性を誘因増加させ
る効果をもつことが確かめられた。

両方の組織において、抗ガン剤としても、又、酵素誘因
剤としても知られるＢＨＡを対照として用いた。ネズミ
肝臓において、５ｍｇと１０ｍｇのノミリン投与により
、ＧＳＴ誘因活性は対照区に比べてそれぞれ２．４８倍
と３．４４倍増加した。一方、リモニンは同じ投与量で
も効果がなかった。

小腸粘膜は誘因剤に対して非常に敏感な組織であり、５
ｍｇと１０ｍｇのノミリンの投与により、対照区に比べ
てＧＳＴ活性が、それぞれ３．００倍と４．１７倍増加
した。リモニンは酵素誘因剤とじては余り顕著な効果が
見られなかった（対照に比べてそれぞれ１．３３倍と１
．３６倍）。

ＩＣＲ／Ｈａネズネズおいて、これらの化合物による酵
素誘因活性とペンツピレンにより誘発された胃の腫瘍に
対する阻害剤としての効果は相関関係にある。

表２に、ペンツピレンによってネズミの胃に誘発された
腫瘍に対するリモニンとノミリンによる抑制効果を示し
た。

対照区のネズミは、１００％腫瘍を生じたのに対してノ
ミリン１０ｍｇの投与により、腫瘍を生じたネズミは７
２％に減少した。

一般に良く知られた阻害剤であるＢＨＡを本試験でも用
いた。

１０ｍｇのノミリンおよび７．５ｍｇのＢ）ＩＡを投与
することによって生じた阻害効果は、対照区とは明らか
に差が見られた。ｔｏｍｇのノミリンを投与したグルー
プではネズミー匹あたりの腫瘍の数が著しく減少した。

５ｍｇのノミリンを投与したグループでは、腫瘍を生じ
たネズミの数はわずかに減少したが、対照区に比べて十
分に満足のいく結果は得られなかった。

表３１表４に夫々、小腸及び肝臓におけるリモニン、ノ
ミリン以外のりモノイドを用いておこなったＧＳＴ活性
の誘因効果について示した。

その結果、ノミリン、インオバキュノン酸とオバキュノ
ンが強い誘因活性をもつことがわかった。

（考察） 前述の通り化学的な発ガン物質の阻害剤が、解毒化酵素
であるＧＳＴの活性を高めることが知られている。

本研究の結果により、天然に存在するりモノイドがさら
に関係していることが認められた。

ノミリンの酵素誘因作用、および発ガン阻害活性は、こ
の試験で用いたＢＨＡの効果と同じ位に重要であること
がわかった。ノミリンの分子量はＢＨＡより３倍も大き
いので、ノミリンの生化学的活性は分子レベルにおいて
は、ＢＨＡよりはるかに大きい。従ってＢＨＡのように
フェノール系抗酸化剤の効果よりさらに大きいと予想さ
れる。事実、ノミリンはカフニストールよりＧＳＴ誘因
効果が大きい。

これらのりモノイドを長期間、摂取することにより、ペ
ンツピレンによって誘発される腫瘍を防止する効果があ
ることが非常に期待できる。

リモニンより効果的な発ガン阻害剤としてのノミリンは
カンキツ果汁中には、含量が少ない。

カンキツ果汁中のリモニンとノミリンの割合はグループ
の種類、収゛穫時期、果汁製造後の貯輩期間、および加
熱処理等の要因によって異なるが、一般的にリモニンの
濃度はノミリンの量よりも多い。リモニンの苦味は果汁
中の濃度が６ｐｐｍを越えると感じられるようになる。

従って、これら２種類のりモノイドの消費量は一般的に
は少ない。

表５に示す如く、リモノイドはカンキツ種子の中に豊富
に存在している。一般にノミリンはリモリンに次いで多
量存在している。リモノイドは又グルコサイドとしても
多量に存在する。

例えばオレンジ果汁、グレープフルーツ果汁、レモン果
汁には平均夫々３２０ｐｐｒｎ、２００ｐＩ）ｍ、９０
ｐｐｍ含まれている。グレープフルーツ種子の中には０
．８〜１％存在する。

斯様なりモノイドグルコサイドを加水分解するバクテリ
ヤが数多く存在する。従って腸の中でこれらのグルコサ
イドが分解されリモノイドが遊離され腸壁より吸収され
る可能性が大きい。

リモノイドグルコサイドは水溶性であると同時に苦味も
極めて弱いので抗ガン剤として応用範囲が広くなる。

構造が類似のりモノイドの予備試験によると、それらの
化合物も同様の化学的阻害物質として有効であることが
わかった。

リモノイドとりモノイド様の天然物質を組み合わせるこ
とによる累積効果も有効であると容易に推察される。

本発明化合物は、腫瘍予防剤として有用である。リモノ
イドはグルコサイドとして比較的多量にカンキツ果汁に
含まれており、又種子、表皮は牛の飼料として大量使用
されており極めて安全性の高いものである。

本発明化合物を腫瘍予防剤として投与する場合、散剤、
頚粒剤、カプセル剤、シロップ剤などとして経口的に投
与してもよいし、また注射剤、外用剤、点滴剤として非
経口的に投与してもよい。又皮膚の抗ガン剤として日焼
けどめクリーム等の中に入れてもよい。リモノイドグル
コサイドはヨーグルトや健康ドリンクの中にも入れても
よいし、又食品添加物としても使用出来る。投与量は症
状の程度、年令などにより著しく異なるが、通常１日当
たり約１〜１００ｍｇ／ｋｇ。

好ましくは２〜２０ｍｇ／ｋｇ　、更に好ましくは８〜
１０ｍｇ／ｋｇを１日１〜数回に分けて投与する。

製剤化の際は通常の製剤担体を用い、常法により製造す
る。

即ち、経口用固形製剤を調製する場合は、主剤に賦形剤
、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、
矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤
、頚粒剤、散剤、カプセル剤などとする。

注射剤を調製する場合には、生薬に必要によりｐＨ調整
剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加し、常法に
より皮下、筋肉内、静脈内用注射剤とする。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　カンキツリモノイドを有効成分として含有すること
   を特徴とする腫瘍予防剤。 ２　カンキツリモノイドがノミリンである請求項１記載
   の腫瘍予防剤。