KR100254527B1

KR100254527B1 - 대추추출물을포함하는혈압강하용조성물

Info

Publication number: KR100254527B1
Application number: KR1019970059426A
Authority: KR
Inventors: 복성해; 정태숙; 박용복; 권용국; 이은숙; 손광희; 배기환; 최명숙; 안정아
Original assignee: 복성해; 생명공학연구소
Priority date: 1997-11-12
Filing date: 1997-11-12
Publication date: 2000-05-01
Also published as: KR19990039367A; KR100258582B1

Abstract

본 발명은 대추 추출물을 포함하는 혈압강하용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 의약용 및 식품용 조성물을 포함한다. 본 발명의 조성물은 동물체내의 혈압을 강하시키므로 고혈압 치료제 또는 건강식품의 성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

대추 추출물을 포함하는 혈압 강하용 조성물{COMPOSITION FOR DECREASING BLOOD PRESSURE COMPRISING JUJUBE EXTRACT}

본 발명은 대추 추출물을 포함하는 혈압 강하용 조성물에 관한 것이다.

심장순환기 질환은 현재 모든 사망원인의 30% 이상을 차지하고 있으며 선진국에서는 경우에 따라서 40%의 사망율에 육박하는 경우도 있다. 특히 고혈압은 심장병의 주종을 이루고 있으며 높은 사망율의 주된 원인이 되고 있다. 본 연구팀은 식용자원으로부터 고혈압 예방 효과가 있고 독성이 없는 성분을 분리하는 연구를 수행하던중 한국에서 흔히 쓰이는 약용 과일의 일종인 대추가 혈압강하에 유용한 성분을 함유하고 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 대추 추출물을 함유하는 혈압 강하용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 대추로부터 혈압강하 성분을 추출하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명에서는 대추 추출물을 활성 성분으로서 약학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 혈압 강하용 약학 조성물, 및 대추 추출물을 포함하는 혈압 강하용 식품 조성물이 제공된다.

본 발명에서는 또한, (a) 대추를 아세톤으로 추출한 후 여과하고, (b) 여액을 감압 농축한 후 헥산을 가하여 물층과 헥산층으로 분리하고, (c) 활성물질이 함유되어 있는 물층에 에틸 아세테이트를 첨가하여 물층과 에틸 아세테이트층으로 분리하고, (d) 에틸 아세테이트 층을 모은 후 감압하에 농축 건조하는 단계를 포함하는, 대추로부터 혈압 강하 활성물질을 분리하는 방법이 제공된다. 상기 단계 (a)에서는 대추를 물에 불린 후 대추 1 kg 당 1 내지 1.5 ℓ의 아세톤을 가하고 실온에서 12 내지 18 시간동안 교반한다. 여과지를 이용하여 액상을 모은 후 감압하에서 농축한다. 단계 (b)에서는 농축액에 1 내지 1.5 ℓ의 헥산을 가한 후 헥산층을 분리하여 제거함으로써 헥산층에 포함된 지방산 계열 물질을 제거할 수 있다. 일반적으로, 유기용매를 이용하여 대추를 추출할 경우, 반응 시간, 반응 온도, 대추의 성숙도 등에 따라 추출물의 조성이 변할 수 있다.

상기와 같이 얻은 대추 추출물은 쥐의 혈압을 강하시킨다. 현재까지 연구된 독성시험 결과, 대추 추출물은 1,000 mg/kg의 용량으로 쥐에게 경구투여하였을 때 독성이 거의 없는 것으로 밝혀졌다. 또한, 대추 추출물은 간을 비롯한 장기의 기능에 어떠한 부작용도 나타내지 않는다.

본 발명의 방법에 따라 대추로부터 얻어진 추출물은 흰쥐에게 0.3 내지 1.0 g/kg의 양으로 투여할 때 24시간 동안 지속적인 혈압강하 작용을 나타낸다.

혈압을 강하시키기 위하여, 대추 추출물, 이의 농축액 또는 건조 분말을 유효성분으로서 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 혈압 강하제 조성물을 제조할 수 있다. 이 약학 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁제, 유화제, 시럽제, 액제 또는 비경구 투여용 제제와 같은 단위 투여형 또는 수회 투여형 약제학적 제제로 제형화될 수 있다.

본 발명의 대추 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하제 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 대추 추출물 0.1 내지 10 g, 바람직하게는 0.5 내지 3 g의 양을 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여 방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

본 발명의 대추 추출물은 또한 혈압을 강하시키기 위한 목적으로 식품에 첨가될 수 있다. 건강보조식품용 개발을 위하여 본 발명의 대추 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 육류, 음료수, 초코렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알콜음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.

이하 본 발명을 다음과 같은 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 다음의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이것들 만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 대추로부터 혈압조절물질 추출

대추 4 kg을 4ℓ의 물에 넣어 불린 후, 6ℓ의 아세톤을 넣어 18시간 교반하였다. 여과지로 여과하여 고형분을 제거하고 액상을 감압농축한 다음 여기에 4ℓ의 헥산을 넣어서 물층과 헥산층을 분리하였다. 같은 방법으로 두 번 더 헥산층을 분리하여 헥산층에 포함된 지방산 계열물질을 제거하였다. 수거된 물층에 동량의 에틸 아세테이트를 첨가하여 물층과 에틸 아세테이트층으로 분리하고, 에틸 아세테이트층을 모은 후 감압하에 농축 건조하여 황갈색물질 7.3g을 얻었다. 이렇게 얻은 대추 추출물을 혈압조절실험에 사용하였다.

실시예 2: 대추 추출물의 혈압조절 효과 확인

선천성고혈압쥐(SHR)를 일본 찰스리버(Charles River)사로부터 구입하였고, 웅성 스프라그 다울리(Sprague-Dawley) 흰쥐는 한국화학연구소 안전성센타에서 특정병원체부재(SPF) 상태로 사육한 4주령을 분양받아 일정한 온도(22℃)와 습도(55±5%)를 유지한 일반 사육실(12시간 명, 12시간 암 주기)에서 사료와 물을 자유롭게 섭취토록하여 사육한 후 각각 12주령 및 체중 350-450g 되었을 때 실험에 사용하였다.

스프라그 다울리 흰쥐의 우측 대퇴부 피하에 100 mg 데옥시코르티코스테론 아세테이트 펠렛(deoxycorticosterone acetate pellet, Innovative Research of America, USA)을 이식시킨 후 오토클립(autoclip)으로 봉합하였다. 흰쥐에게 4주간 1% NaCl을 경구투여하여 DOCA/식염 고혈압쥐를 확립 한 후, 평균동맥압이 170 mmHg이상으로 상승된 흰쥐를 혈압강하 작용 평가에 사용하였다.

스프라그 다울리 흰쥐(350-450g)를 에테르로 마취시키고 좌복부를 세로로 1 cm 가량 절개한 다음 복부 대동맥 가까이의 신동맥을 조심스럽게 분리하여 봉합사(4/0 sterile surgical silk, Ethicon)로 신동맥을 완전히 결찰하고 바늘이 달린 봉합사로 근육층 및 피부를 봉합하였다. 결찰 6-8일 후 수축기 혈압이 180mmHg 이상인 동물을 신성 고혈압쥐(renal hypertensive rat, RHR) 모델로 실험에 사용하였다.

상기와 같이 준비된 DOCA/식염 고혈압쥐, SHR 및 RHR 흰쥐들에게 케타민 하이드로클로라이드(ketamine hydrochloride)를 125 mg/kg의 양으로 복강내 투여하여 마취시킨 다음 폴리에틸렌 튜빙(polyethylene tubing) 50(PE50)을 PE10에 연결한 카테터(catheter)에 헤파린화된 식염수 용액을 채워서 대퇴 동맥에 캐뉼라를 삽입하였다. 카테터의 다른쪽 끝은 피하를 따라 목뒤로 뽑아낸 후 고정하였다.

흰쥐를 혈압측정용 우리에서 안정시킨 후 다음날 마취에서 깨어난 동물의 대퇴 동맥에 캐뉼라를 삽입하여 목 뒤에 고정한 카테터를 이소텍 압력 변환기(Isotec pressure transducer, Hugosachs, Germany)에 연결하여 신호 처리기(Modular signal processing center, Modular, USA)를 이용하여 혈압 및 심박동수를 측정하였다. 약 1시간 동안 혈압이 안정된 것을 확인한 후 실시예 1에서 제조된 대추 추출물을 용량별로 경구 투여한 후 일정시간 간격으로 투여후 24시간까지 혈압 및 심박동수를 측정하여 그 결과를 약물 투여 전의 혈압 및 심박동수에 대한 변화율로 나타내었다.

그 결과는 표 1, 2 및 3에 나타낸 바와 같고, 대추 추출물은 0.3-1.0g/kg 의 양으로 흰쥐에게 투여시 24시간 동안 지속적인 혈압강하작용을 보였다.

DOCA 흰쥐에서 혈압 및 심박동수에 대한 대추 추출물의 영향

평균 혈압(%)
시간	대조군	0.3 g/kg 대추 추출물	1 g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00	0.00
10 분	0.30	7.70	2.50
20 분	-0.20	3.80	-4.70
30 분	0.20	-0.20	-9.50
60 분	-3.10	-11.50	-21.20
90 분	-1.30	-11.50	-22.90
2 시간	-6.00	-10.20	-25.10
4 시간	-6.60	-18.60	-29.90
6 시간	-7.20	-13.30	-30.20
22 시간	-3.20	-25.30	-14.30
24 시간	-6.40	-24.40	-18.30
기준선(mmHg)	144.00	158.00	173.00

평균 심박동수(%)
시간	대조군	0.3 g/kg 대추 추출물	1 g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00	0.00
10 분	0.00	-0.20	4.50
20 분	2.00	2.80	4.60
30 분	2.80	-1.10	4.60
60 분	-1.50	-8.90	-3.20
90 분	-2.80	-10.60	-8.20
2 시간	-4.70	-12.50	-3.60
4 시간	-1.80	-16.70	-10.10
6 시간	-5.00	-12.50	-13.80
22 시간	-11.90	-24.20	-3.60
24 시간	-12.00	-19.40	-2.70
기준선(mmHg)	184.00	298.00	290.00

SHR에서 혈압 및 심박동수에 대한 대추 추출물의 영향

평균 혈압(%)
시간	대조군	1g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00
10 분	-0.20	3.00
20 분	-1.90	-5.00
30 분	-3.20	-8.80
60 분	-2.30	-11.40
90 분	-3.00	-8.30
2 시간	-1.00	-7.60
4 시간	-0.60	-12.20
6 시간	-0.90	-13.70
22 시간		-7.30
24 시간	-0.10	-15.90
기준선(mmHg)	150.00	139.00

평균 심박동수(%)
시간	대조군	1 g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00
10 분	8.40	-0.80
20 분	7.10	-4.70
30 분	2.50	-7.20
60 분	-0.50	-11.30
90 분	1.70	-10.40
2 시간	-0.80	-6.40
4 시간	-5.00	-10.30
6 시간	-7.50	-12.70
22 시간		-11.10
24 시간	-10.10	-10.30
기준선(mmHg)	366.00	310.00

RHR에서 혈압 및 심박동수에 대한 대추 추출물의 영향

평균 혈압(%)
시간	대조군	1 g/kg 대추 추출물	3 g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00	0.00
10 분	-2.20	-2.20	-6.20
20 분	-0.60	-2.80	-6.30
30 분	-0.30	-2.10	-4.10
60 분	-1.20	-0.80	0.00
90 분	1.80	-3.00	-1.30
2 시간	3.00	-5.40	0.00
4 시간	-3.10	-6.20	-3.60
6 시간	-4.30	-8.60	0.10
22 시간	-1.50	-16.60	-11.90
24 시간	-0.20	-17.50	-10.40
기준선(mmHg)	182.00	163.00	171.00

평균 심박동수(%)
시간	대조군	1 g/kg 대추 추출물	3 g/kg 대추 추출물
0	0.00	0.00	0.00
10 분	5.90	4.30	10.00
20 분	6.50	2.80	2.50
30 분	2.00	2.30	-1.60
60 분	-0.10	0.60	1.40
90 분	0.10	5.20	8.60
2 시간	5.80	2.80	5.20
4 시간	5.10	3.20	0.00
6 시간	-2.20	-0.80	4.30
22 시간	0.80	3.40	4.60
24 시간	-5.80	-0.50	2.90
기준선(mmHg)	393.00	363.00	354.00

실시예 3: 대추 추출물의 경구독성실험

7-8 주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스로서 체중 25-29 g의 암컷 6마리와 체중 34-38 g의 숫컷 6 마리를 온도 22±1 ℃, 습도 55±5 %, 조명 12L/12D의 동물실내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1 주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료(주식회사제일제당, 마우스 및 랫드용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유섭취시켰다.

실시예 1에서 얻은 대추 추출물을 0.5% 트윈 80을 용매로 하여 100 mg/ml 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.2 ml씩 경구투여하였다. 시료는 1회 경구투여하였으며 투여 후 10 일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 10일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 10일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 헤스페리딘에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.

본 실험은 대추 추출물에 대하여 경구경로에서의 급성독성의 정도를 파악함으로써 일반약리 및 약효시험에서의 가용 약용량에 대한 정보를 제공하고 독성에 대한 기초 자료를 도출함을 목적으로 실시하여 아래와 같은 결과를 얻었다.

급성 경구독성의 경우는 대추 추출물 1,000 mg/kg의 약용량에서 10일동안 치사동물이 관찰되지 않았다. 10일 후 생존동물에 대한 부검을 실시한 바, 특별한 병변 육안 소견이 없었으며, 투여 익일부터 10일간 어떠한 체중의 감소 없이 정상적인 체중의 증가가 관찰되었다.

결론적으로, 대추 추출물은 상기의 농도로 경구투여시 독성이 관찰되지 않았다.

하기 제제예는 본 발명의 제제를 예시하는 것일 뿐 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

제 제 예

다음의 성분들을 이용하여 경질 젤라틴 캅셀을 제조하였다:

양(mg/캅셀)

활성 성분(대추 추출물) 1,000

건조 전분 160

스테아르산 마그네슘 40

총 1,200 mg

대추 추출물을 포함하는 본 발명의 조성물은 동물체내의 혈압을 강하시키므로 고혈압 치료제로서 또는 건강식품의 성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

(a) 대추를 아세톤으로 추출한 후 여과하고, (b) 여액을 감압 농축한 후 헥산을 가하여 물층과 헥산층으로 분리하고, (c) 활성물질이 함유되어 있는 물층에 에틸 아세테이트를 첨가하여 물층과 에틸 아세테이트층으로 분리하고, (d) 에틸 아세테이트 층을 모은 후 감압하에 농축 건조하는 단계를 포함하는, 대추로부터 혈압 강하 활성물질을 분리하는 방법.
활성성분으로서 유효량의 대추 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 혈압강하제 조성물.
제 2 항에 있어서,

대추 추출물의 유효량이 0.1 내지 10 g/kg 체중/일인 조성물.