JP2023505409A - 持続型の眼用薬物送達システムとしてシクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル - Google Patents

持続型の眼用薬物送達システムとしてシクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル Download PDF

Info

Publication number
JP2023505409A
JP2023505409A JP2022524724A JP2022524724A JP2023505409A JP 2023505409 A JP2023505409 A JP 2023505409A JP 2022524724 A JP2022524724 A JP 2022524724A JP 2022524724 A JP2022524724 A JP 2022524724A JP 2023505409 A JP2023505409 A JP 2023505409A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cyclosporine
formulation
aqueous ophthalmic
ophthalmic formulation
particle size
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2022524724A
Other languages
English (en)
Inventor
リアン，ボ
ペン，ハイゾウ
ズー，ジェユ
ユアン，シュドン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Iview Therapeutics Zhuhai Co Ltd
Original Assignee
Iview Therapeutics Zhuhai Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Iview Therapeutics Zhuhai Co Ltd filed Critical Iview Therapeutics Zhuhai Co Ltd
Publication of JP2023505409A publication Critical patent/JP2023505409A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/567—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in position 17 alpha, e.g. mestranol, norethandrolone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

０．０１重量％～５重量％のシクロスポリンを含む水性の眼用製剤と、このような製剤の作製方法および使用方法とに関連する。シクロスポリンは、粒子径が２０ｎｍを超えないミセルの形態で存在する。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年８月１８日に出願された米国出願第６２／８８８，５３４号に対する優先権を主張する。本明細書中、同文献の内容全体を参考のため援用する。
ドライアイ症候群（ＤＥＳ）は、乾性角結膜炎としても知られており、複数の要素および複雑な原因に起因して発生し、涙の質または量あるいは流体力学的特性の異常に繋がる。ドライアイ症候群（ＤＥＳ）は、涙膜安定性の低下、眼の不快感および／または眼表面の組織病変も伴い、重篤な眼表面免疫性炎および他の眼表面疾患の原因となる多様な疾患の一般的な用語である。ドライアイ症候群の最も一般的な症状としては、眼の炎症、疼痛および充血がある。他の一般的症状を挙げると、眼内の水様涙または粘質粘液がある。ドライアイ症候群は、多様な要素に関連し、罹患率は７．４％～３３．７％であり、そのうち、５０歳を超える女性の有病率は、男性の約２倍である。例えば、左記を参照されたい：ＪＬ Ｇａｙｔｏｎ， Ｊ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ （Ａｕｃｋｌａｎｄ， ＮＺ）， ２００９， ３： ４０５；Ｄ．Ａ． Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， ２００３， １３６（２）： ３１８ － ３２６。
涙は、油状の外層、水様の中間層、および内側の粘液層の３つの層を有する。涙の多様な成分を生成する腺に炎症がある場合またはそのような腺が十分な水、油または粘液を生成しない場合、ドライアイ症候群の原因になり得る。涙中に油分が無い場合、涙はすぐに蒸発し、水分の安定供給を維持することができなくなる。さらに一般的な症状を挙げると、ドライアイ、眼精疲労、目のかゆみ、異物の知覚、炎症の知覚、ねばねばの分泌液、風、光および他の外部刺激に対する敏感性がある。目があまりに乾いている場合、元々の涙が不十分になることがあるが、その場合も、反射的な涙分泌の刺激は可能であるため、過度の涙生成に繋がる。より重篤な患者の場合、眼が赤色に腫れ、充血、角化、角膜上皮の剥がれおよびその後の繊維の接着に繋がる。これらの損傷は、角膜病変および結膜病変の原因になり得、視力に影響を与え得る。ドライアイの初期症状としては、目を潤す涙の不足がある。ドライアイは、治療をタイムリーかつ有効に受けない場合、容易に難治性ドライアイに進行し得、角膜炎および角膜潰瘍そしてさらには失明に繋がり得る。
住居環境および業務環境におけるビデオ端末および空調設備の広範な使用に伴い、ドライアイ症候群は、世界的な流行病になっている。現在、眼表面疾患の自覚が無い場合、患者の生活の質に影響が発生し得る。テクノロジーへの信頼およびテクノロジーの使用の上昇と共に、ドライアイの発病率は、より若い世代において上昇し得、今後徐々に増えていく。
近年、ドライアイ疾患の有病率（ドライアイ疾患の危険性のある人数における患者のパーセンテージ）は、およそ５～３４％である。米国における有病率は、比較的低い（７％）。中国においては、地理的要素および他の要素に起因して、約７５００万人がドライアイ疾患に罹患している。中国における有病率は、約２１～３０％であり、年間増加率は約１０％である。高齢化と共に、この数値は、将来において有意に増加することが予測されている。
従来のドライアイ治療として、人工涙およびスマートプラグ涙塞栓形成インプラントがある。シェーグレン症候群の場合、炎症関連のドライアイ、ステロイドまたは非ステロイドの抗炎症薬剤が用いられている（例えば、コルチステロイド、テトラサイクリン、シクロスポリン）。例えば、以下を参照されたい：Ｊ． Ｍｏｈａｍｍａｄ Ａ－ｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｖｉｓ Ｒｅｓ， ２０１１， ６ （３）： １９２ － １９８。
ドライアイの病理学的機構は不明であるものの、炎症を仲介するのは、涙腺および眼球表面に影響を及ぼす有害なサイトカインおよびレセプタであると主に考えられている。ドライアイ症候群の患者における涙腺、結膜生検材料、涙流体および眼表面インプレッションサイトロジーの検査に基づいて、炎症反応マーカーの表示（例えば、炎症細胞浸潤）は、ドライアイの重症度と相関することも判明した。そのため、抗炎症薬物および免疫阻害剤は、眼表面炎症を伴うドライアイの治療に有効であり得る。
Figure 2023505409000002
シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、シクロスポリンまたはシクロスポリン（上記に示す構造）とも呼ばれ、１１個のアミノ酸からなる環状ポリペプチド化合物であり、トリコデルマポリスポルムおよびリコスポロンの代謝物から精製され、強力な免疫阻害剤として主にみなされている。ドライアイ治療におけるシクロスポリンの主要な仕組みは、涙腺房細胞および結膜杯状細胞のアポトーシスを阻害し、リンパ球のアポトーシスを促進させ、眼表面炎症を阻害することにより、ドライアイを有効に治療することである。シクロスポリンの全身投与は、血液眼関門要素によって影響を受け、眼の生物学的利用能は低く、腎損傷、中枢神経系損傷、肝損傷および高血圧などの合併症の原因になり得る。そのため、全身へのシクロスポリン適用は大きく制限される。点眼などの局所投与方法であれば、これらの毒作用および副作用を回避することができる。
シクロスポリンは、免疫阻害効果を有し、Ｔリンパ球の活性化および分化を阻害し得、カルシニューリン（ＣａＮ）／ＮＦ－ＡＴ経路に対して主に影響を与える。その主な仕組みとしては、シクロスポリンがＴ細胞中のシクロフィリンＡ（ＣｙＰＡ）と選択的に相互作用し、形成されたＣｓＡ－ＣｙＰ複合体は、ＣａＮに作用し、ＣａＮ脱リン酸化活性を不活性化させて、細胞質ＮＦ－ＡＴ核内移動を阻害し、これにより、インターロイキン２（ＩＬ－２）などの複数のサイトカイン遺伝子が阻害され、最終的にはＴ細胞の分化および活性化が阻害される。ドライアイ疾患の患者に対して０．０５％ＣｓＡ点眼による治療を６ヶ月行ったところ、結膜上皮細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ１１ａおよびＨＬＡ－ＤＲ細胞の数が有意に低減した（Ｐ＜０．０５）。例えば、以下を参照されたい：ＫＳ Ｋｕｎｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍ．， ２０００， １１８（１１）： １４８９－１４９６。動物試験から、シェーグレン型ＫＣＡによる治療を行った場合、シクロスポリンは涙腺房細胞および結膜上皮細胞のアポトーシスを阻害し、リンパ球アポトーシスを促進したことが判明している。シクロスポリン治療の後、ｐ５３タンパク免疫活性が低下し、ｂｃｌ－２のレベルが上昇した。例えば、以下を参照されたい：Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｒｎｅａ， １９９８， １７（６）： ６５４． Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．によれば、涙腺の除去によりイヌの角結膜乾燥症モデルが確立された。２％シクロスポリンの連続投与を４週間行ったところ、粘膜内ムチン濃度が有意に上昇した（Ｐ＜０．０５）。以下を参照されたい：ＣＰ Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍ． ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉ．， ２００１， ４２（３）： ６５３－６５９。結膜炎の症状が緩和された。これは、シクロスポリンは、（ドライアイのシクロスポリン治療において重要な要素であり得る）結膜杯状細胞のムチン分泌液機能の回復に対して（涙腺への影響無く）効果があることを示す。涙の流れが増加する仕組みとしては、シクロスポリンにより、感覚神経終末からの神経伝達物質、サブスタンスＰの放出が刺激され、ムスカリン性レセプタがサブスタンスＰを通じて活性化され、これにより、涙分泌液が増加する（Ａ． Ｙｏｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．， １９９９， ６８（５）： ５４１－５４６）。
米国特許第８，６２９，１１１号、第８，６４８，０４８号、第８，６８５，９３０号および第９，２４８，１９１号において、エマルション形態のシクロスポリン眼用薬品についての開示がある。シクロスポリンは非水溶解性であるため、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）０．０５％シクロスポリンが、シクロスポリンの生物学的利用能の向上のためにエマルション製剤として開発された。この製品は、アラガンから市販され、ドライアイの改善効果を得るためには、各眼に対して１日２回の投与を少なくとも６週間必要とする。ＲＥＳＴＡＴＩＳ（登録商標）（シクロスポリン０．０５％眼用エマルション）の使用後の最も一般的な悪影響としては、１７％の患者において報告されるような眼の炎症がある。他の有害反応を挙げると、結膜充血、流涙症、眼疼痛、膿、異物感、そう痒症、穿刺痛および視力障害がある（１～５％の患者）。
しかし、安全性および有効性の向上のためにシクロスポリンの生物学的利用能をさらに向上させるための尽力にもかかわらず、顕著な成功は過去１５年間得られていない。米国特許第８，９８０，８３９号において、ポリオキシル脂質または脂肪酸およびポリアルコキシル化アルコールを混合ナノミセル中に含むシクロスポリンの新規の溶液製剤についての記載がある。その結果、ＣＥＱＵＡ（登録商標）０．０９％シクロスポリン無菌眼用溶液の近年の商用化に繋がり、米国では２０１８年に承認を受けている［１１］。シクロスポリンは、非水溶性の白色粉末であるが、ナノミセルテクノロジーによりＣＥＱＵＡ（登録商標）を透明の眼用溶液として供給すると、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％シクロスポリン）と比較してより高濃度のシクロスポリン（０．０９％）を眼内に送達させることができる。これ以降、シクロスポリン用の新規の可溶化剤の発見のために、多数の研究がナノミセル製剤に費やされた。米国２０１９／００６０３９７において、ポリオキシル脂質または脂肪酸およびポリアルコキシル化アルコールからなるシクロスポリンを０．０８７～０．０９３ｗｔ％含む局所用眼用製剤の研究開発についての記載がある。ポリオキシル脂質を、ＨＣＯ－４０（ＨＣＯ－４０は、ポリオキシエチレン４０水添ヒマシ油である）、ＨＣＯ－６０、ＨＣＯ－８０およびＨＣＯ－１００からなる群から選択した。ポリアルコキシル化アルコールは、オクトキシノール４０としても知られる。生物接着性ポリマーは、カーボポール、カルボフィル、セルロース誘導体、ゴム類（例えば、キサンタンガム、カラヤ、ガウア、トラガント、アガロース）および他のポリマー（例えば、ポビドン、ポリエチレングリコール、ポロクサマー、ヒアルロン酸またはこれらの組み合わせ）からなる群から選択される。ＣＮ１０４３０２３０８、ＣＮ１０３７３５４９５、ＣＮ９９１０２８４８およびＣＮ１０５７２６４７９において、シクロスポリンの溶解度の向上のために異なるポリオキシエチレンヒマシ油系化合物と混合されたシクロスポリン製剤についての記載がある。しかし、これらの特許の場合、可溶化剤についての有意な差は無い。ＣＮ１０３０５４７９６において、Ｓｏｌｕｐｌｕｓが可溶化剤として記載されており、その形成粒子径は、約６０ｎｍであった。ＵＳ２００９／００９２６６５において、ビタミンＥＴＰＧＳを用いたナノミセル形成のための薬物送達システムについての開示がある。これらの特許においては、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油系界面活性剤が使用されているが、２０ｎｍよりも小さなシクロスポリンミセルを生成する界面活性剤は発見されていない。
薬物は、角膜上皮を浸透通過する際、その親油性および親水性に基づいて、主に経細胞経路および傍細胞経路を経由する（例えば、以下を参照されたい：Ｅ． Ｔｏｒｏｐａｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ． ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００３， ２０（１）： ９９－１０６）。親水性化合物の浸透は、傍細胞の多孔性および孔径によって影響を受ける傍細胞経路を介して行われるのに対し、中間化合物および疎水性化合物の浸透は、上皮経細胞経路および間質経路をそれぞれ通じて行われる（例えば、以下を参照されたい：Ａ． Ｅｄｗａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， ２００１， １８（１１）： １４９７－１５０８）。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、中性の親油性環状エンデカペプチドである。ＣｓＡは、封入されない場合、経細胞経路を通じて吸収される（以下を参照されたい：Ｋ． Ｋａｗａｚｕ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍ． ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉ．， １９９９， ４０（８）： １７３８－１７４４）。しかし、ミセル内に封入された場合、ミセルの親水性面により、傍細胞ルートが主要な経路となる。
難溶性薬物の角膜透過性の増加のためのナノテクノロジー利用について、多数の関連研究材料がある（例えば、以下を参照されたい：Ｆ． Ｂｏｎｇｉｏｖｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｃｒｏｍｏｌ Ｂｉｏｓｃｉ． ２０１７；１７（１２）：１０．１００２）。これらの文書全てによれば、難溶性薬物をナノ粒子の形態で調製すると、角膜中の薬物の浸透効率が有意に増加し得、生物学的利用能が増加し得る（ミセル溶液、ミクロエマルション溶液、ナノサスペンションおよびエマルションなどの調製を含む）。ナノ粒子径が小さいほど、角膜透過性が高くなり、生物学的利用能が高くなる。小型ナノ粒子径を含むミセル溶液、ミクロエマルション、ナノサスペンションおよびエマルションの調製などの要素により、より高い角膜透過性およびより高い生物学的利用能が得られる。
ミセルは、両親媒性のコロイド状構造であり、粒径は５～１００ｎｍの範囲内である（例えば、以下を参照されたい：Ｍ． Ｍｉｌｏｖａｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｎａｎｏａｒｃｈｉｔｅｃｔｏｎｉｃｓ， Ｃｈａｐｔｅｒ １４， ２０１７， ｐ．３８３－４１０）。しかし、粒子径が２０ｎｍ未満のナノミセル製剤を調製することができたという報告は未だされていない。そのため、本発明者らの目的は、新規の強力な可溶化剤または組み合わせの発見によりミセルサイズをさらに低減し、眼内のシクロスポリンの浸透を向上させることである。
アラガンによって開発されたＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）は、平均粒子径が約１６０ｎｍである眼用エマルションであり、粘膜付着性が低く、角膜保持時間が短い。そのため、生物学的利用能は低く、治療効果は理想的ではない。その上、眼にとって刺激性であり、異物知覚などの望ましくない症状の原因になり得るため、患者にとって耐えるのは容易ではない。Ｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによって開発されたＣＥＱＵＡ（登録商標）は、平均粒子径が約２５ｎｍであるミセル点眼であるが、ミセル点眼の生物接着性は、従来の点眼と同様であり、長時間の眼への付着は不可能であり、鼻涙廃液に起因する薬物損失を解消できていない。ミセル溶液は、角膜に対するシクロスポリンの透過性を増加させるものの、眼内において高速に減少するため、生物学的利用能の増加を妨げている。
これらの問題を解決するために、本発明者らは、新規に発見された可溶化剤または界面活性剤と共に、シクロスポリンを担持して極めて小型のナノミセルを形成する新規のナノ担体を開発した。これらのナノ担体は小型であるため、より高濃度のシクロスポリンを角膜および結膜細胞内へ搬送することが可能であり、薬物有効性の上昇に繋がる。驚くべきことに、いくつかの新規発見された可溶化剤または界面活性剤を多糖類ポリマーを用いてｉｎ－ｓｉｔｕゲルテクノロジーと組み合わせたところ、眼内への点眼薬滴下時においてｉｎ－ｓｉｔｕゲルが形成され、これにより、眼表面上における薬物保持時間が増加し、眼内の薬物の生物学的利用能がさらに高くなる。さらに、ｉｎ－ｓｉｔｕゲル持続型放出テクノロジーにより、眼内における局所刺激、疼痛および異物感などの有害作用がさらに低減する。
このｉｎ－ｓｉｔｕゲル送達システムは、角膜表面上の薬物の保持時間を伸ばすことができ、眼内の薬物生物学的利用能の向上が支援される。理想的には、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルシステムは、保管時においては低粘度の自由に流動する液体であるため、点眼薬の眼上における使用を繰り返し容易に行うことが可能になる。このｉｎ－ｓｉｔｕゲルシステムは、結膜嚢上への投与後、ｉｎ－ｓｉｔｕゲルを形成し、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルは、眼表面に付着する。このｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粘度は、眼内における剪断力に耐えかつ眼前方の薬物の保持時間を長期化させるのに十分である必要である。薬物放出を緩やかに行うと、生物学的利用能の向上、全身吸収の低減、薬品頻度の低減が支援され得るため、患者コンプライアンスが向上する。しかし、ｉｎ－ｓｉｔｕゲルシステムを使用すると、眼内の薬物の保持時間が増加し、薬物吸収が長期化する。非水溶性の薬物物質の場合、水溶度の低い分子の生物学的利用能を全体的に十分に達成することは困難である。そのため、本発明者らの目的は、ヒトにおける有効性向上および副作用低下のために有意な浸透向上を達成するために、シクロスポリンを有効成分として新規の可溶化剤または界面活性剤と共に含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル形成製剤を開発することであった。
ミセル界面活性剤は、低濃度で薬物分子に溶解および吸収される。界面活性剤の濃度が、分子表面が飽和してこれ以上吸収できなくなる点まで増加した場合、界面活性剤分子は、溶液中に蓄積し始める。界面活性分子の疎水部は水との親和性がより低く、疎水部間の親和力はより高いため、多くの界面活性剤分子の疎水部は、相互に引き寄せられて関連付けられ、これにより、ミセルとして知られる多分子またはイオン性の複合体が形成される。このナノミセル製剤により、シクロスポリン分子が溶解度の問題を解消することが可能になり、これにより、眼の水層を通じた浸透が可能になり、有効な親油性分子が浸透前に高速放出される事態が回避される。これらのミセルの粒子径は、通常のエマルションよりもずっと小さく、角膜内へより有効に浸透することができるため、薬物有効性が向上し、その生物学的利用能が大きく向上する。
本発明において、本発明者らは、ナノミセル送達システムを用いたｉｎ－ｓｉｔｕゲル形成シクロスポリン製剤を開発した。この新規の組成は、ナノ担体を通じた薬物の膜輸送を向上させ得、薬物安定性、溶解度を向上させつつバイオフィルムへの薬物透過性を向上させ得、ターゲット送達を可能にし得る。加えて、本発明は、ｉｎ－ｓｉｔｕゲル薬物送達システムを通じて点眼薬の付着性も向上させ得、角膜表面上の薬物保持時間をさらに向上させる。ｉｎ－ｓｉｔｕゲルおよびナノミセル送達システムの適切な組み合わせにより、単一の製剤送達テクノロジーを用いた場合の血管が解消される。シクロスポリン用の現行のナノミセルまたはエマルション薬物送達システムと比較して、ナノミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲル薬物送達システムは、有意な利点を提供する。
よって、本発明の一態様により提供されるミセルは、それぞれ水、シクロスポリンおよび可溶化剤を含み、上記ミセルの粒子径は、２０ｎｍを超えない。適切な可溶化剤の例を挙げると、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ビタミンＥポリエチレングリコールスクシナート、およびこれらの任意の組み合わせがある。上記シクロスポリンの適切な例として、シクロスポリンＡがある。このシクロスポリンは、用途に適した濃度において（例えば、０．０１重量％～５重量％の濃度において）製剤形態で得られ得る。
別の態様において、本発明により提供される水性の眼用製剤は、シクロスポリン、可溶化剤、浸透圧調節剤、ｐＨ調節剤、粘度調節剤および水を含む。粒子径が２０ｎｍを超えないミセルが、シクロスポリンおよび上記可溶化剤と共に形成され、上記製剤中に含まれる。
いくつかの実施形態において、上記水性の眼用製剤は、ゲル形成多糖類ポリマーをさらに含み、ｉｎ ｓｉｔｕａｔ上記生理的温度においてゲルがｉｎ ｓｉｔｕ形成され、上記眼内への上記製剤の滴下時において粘度が即時に上昇する。上記製剤中において、上記多糖類は、０．１重量％～０．６重量％の濃度にて含まれ得る。本発明の製剤に適した多糖類の例を挙げると、脱アセチル化ジェランガム（ＤＧＧ）、キサンタン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、またはこれらの任意の混合物がある。いくつかのさらなる実施形態において、上記多糖類は、脱アセチル化ジェランガムを含む。
さらにいくつかの他の実施形態において、本発明に適した可溶化剤は、一例として、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ビタミンＥポリエチレングリコールスクシナート、またはこれらの任意の組み合わせである。上記可溶化剤は、上記製剤中に０．０１重量％～１０重量％の濃度で含まれ得る。
いくつかの実施形態において、本発明の上記製剤中に含まれる浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、マニトール、グルコース、ソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールまたはこれらの任意の組み合わせを含む。このような浸透圧調節剤は、０．０１重量％～１０重量％の濃度において上記製剤中に含まれ得る。
本発明の製剤は、防腐剤をさらに含み得る。この防腐剤は、例えば、ブチルパラベン、塩化ベンザルコニウム、臭化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン、ソルビン酸塩、クロロブタノールまたはこれらの任意の組み合わせを含み得る。一例として、上記製剤中の上記防腐剤は、０．０１重量％～５重量％の濃度であり得る。
いくつかの実施形態において、本発明の上記製剤中に含まれる上記ｐＨ調節剤は、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、リン酸緩衝液、トロメタミン、トロメタミン塩酸緩衝液、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウムまたはこれらの任意の組み合わせを含む。上記製剤に含まれる上記ｐＨ調節剤の濃度は、０．０１重量％～５重量％であり得る。
いくつかの実施形態において、上記製剤中の上記粘度調節剤の濃度は、０．０１重量％～５重量％である。適切な粘度調節剤の例を挙げると、カルボキシルメチルセルロース、ナトリウムセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびこれらの任意の組み合わせがある。
いくつかの実施形態において、本発明の上記製剤中に含まれる上記ミセルの平均粒子径は、１０ｎｍ～２０ｎｍの範囲である。
本発明のさらに別の態様は、必要としている対象におけるドライアイ疾患の症状または病態を治療するかまたは軽減させる方法を提供する。本方法は、上記したような水性の眼用製剤またはミセルを上記対象の眼へ治療的に有効な量だけ投与することを含む。
図１は、実施例１において調製されたサンプル１の粒子径および分布を示す。 図２は、実施例１において調製されたサンプル２の粒子径および分布を示す。 図３は、実施例１において調製されたサンプル３の粒子径および分布を示す。 図４は、実施例１において調製されたサンプル４の粒子径および分布を示す。 図５は、実施例１において調製されたサンプル５の粒子径および分布を示す。 図６は、実施例１において調製されたサンプル６の粒子径および分布を示す。 図７は、実施例１において調製されたサンプル７の粒子径および分布を示す。 図８は、実施例１において調製されたサンプル８の粒子径および分布を示す。 図９は、実施例２において調製されたゲル化マトリクスＤＧＧを用いた場合の製剤サンプル１～サンプル６の粘度変化の棒グラフである。 図１０は、実施例２において調製されたゲル化マトリクスキサンタンガムを用いた場合の製剤サンプル７～サンプル１０の粘度変化の棒グラフである。 図１１は、実施例２において調製されたゲル化マトリクスカラギーナンを用いた場合の製剤サンプル１１～サンプル１４の粘度変化の棒グラフである。 図１２は、実施例２において調製されたゲル化マトリクスアルギン酸ナトリウムを用いた場合の製剤サンプル１５～サンプル１８の粘度変化の棒グラフである。 図１３は、実施例３において調製されたサンプルの粒子径および分布を示す。 図１４は、ＲＥＳＴＡＳＩＳの粒子径および分布を示す。 図１５は、ＣＥＱＵＡの粒子径および分布を示す。 図１６は、実施例３において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を示す。 図１７は、実施例４において調製されたサンプルの粒子径および分布を示す。 図１８は、実施例４において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を示す。 図１９は、実施例５において調製されたサンプルの粒子径および分布を示す。 図２０は、実施例５において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を示す。 図２１は、実施例６において調製されたサンプルの粒子径および分布を示す。 図２２は、実施例６において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を示す。 図２３は、実施例７において調製されたサンプルの粒子径および分布を示す。 図２４は、実施例７において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を示す。 図２５は、実施例８（サンプル１～３）において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ透析放出試験を示す。 実施例８（サンプル４～６）において調製されたサンプル、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）のｉｎ ｖｉｔｒｏ透析放出試験を示す。
文献中に記載のようにミセル溶液中にシクロスポリンを調製するために用いられた可溶化剤について調査したところ、これらの製剤中に形成された粒子径は全て２０ｎｍを超えていたことが判明した。ＵＳ２０１９／００６０３９７Ａ１において、ＨＣＯ（すなわち、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油）をオクトキシノール４０と組み合わせて用いてミセル溶液を形成する旨についての記載がある。本発明者らは、ＣＥＱＵＡ（登録商標）の粒子径は２２ｎｍであることを確認した。ＵＳ２００９／００９２６６５において、ビタミンＥＴＰＧＳを可溶化剤として用いて調製されたミセル溶液の粒子径は２０ｎｍよりも大きかった旨についての記載がある。ＣＮ１０３７３５４９５Ｂにおいて、ミセル溶液の調製のためのポリオキシエチレンヒマシ油の可溶化剤としての使用についての記載がある。同様に、ミセル溶液の形成する粒子径は、２０ｎｍよりも大きい。シクロスポリン可溶化剤として上記した例全てにおいて、形成された粒子径は全て、２０ｎｍを超えていた（表１を参照）。
Figure 2023505409000003
眼内におけるシクロスポリンの生物学的利用能のさらなる向上のために、本発明者らは、多数の実験を行った。その結果、いくつかの可溶化剤またはいくつかの可溶化剤の組み合わせにより、粒子径が２０ｎｍ未満のシクロスポリン含有ミセルが予期せず得られるという驚くべき発見に至った。
一態様において、１つの種類の適切な可溶化剤として、セトマクロゴール１０００シリーズがある。セトマクロゴール１０００シリーズは、ＣＨ３［ＣＨ２］ｍ［ＯＣＨ２ＣＨ３］ｎＯＨの式を有し、式中、ｎは２０～２４であり、ｍは１５～１７である。エチレンオキシド（ｎ）の量に基づくと、２ＣＡＳ番号は次のようになる：ＣＡＳ９００４－９５－９（マクロゴールセチルエーテル）；ＣＡＳ６８４３９－４９－６（マクロゴールセトステアリルエーテル）。ポリオキシル２０セトステアリルエーテルは、セトマクロゴール１０００シリーズの１つの代表的成分として、ポリオキシル２０セトステアリルエーテルは、ｐｏｌｙｃｅｔｏｌ １０００シリーズのポリオキシエチレン（２０）セチルオクタデシルエーテル（ｎ＝２０）に属する。ポリオキシル２０セトステアリルエーテルは、クリーム（Ｓｙｎａｌａｒ（登録商標））中の乳化剤として用いられており、眼用調製用の可溶化剤としての報告は無く、ミセル溶液形成のためのシクロスポリン用可溶化剤としての研究は無い。驚くべきことに、本発明者らによれば、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル（可溶化剤Ａ）を用いれば、シクロスポリンとのミセル溶液を眼用用途の臨界ミセル濃度を超えて形成することが可能であることが判明した。さらに驚くべきことに、サンプルの平均粒径は約１０ｎｍと極めて小さく、均一性および安定性も維持されることも判明した。これらのサンプルの粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）よりもずっと小さい。角膜透過性がＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）よりも高いため、生物学的利用能の向上が期待される。
別の態様において、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸が、ミクロエマルション眼用調製における乳化剤として用いられる。例えば、業務製品Ｘｅｌｐｒｏｓ（登録商標）は、０．２５％のポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸を含む。ＣＮ２０１５１０７８５００５．４において、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸を乳化剤として１．２％～３．５％の濃度で使用する旨が開示されている。別の従来技術の例において、乳化剤ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸と共に調製されたミクロエマルションの粒子径は、５０±３０ｎｍである（以下を参照されたい：Ｌ． Ｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ．， ２００９；３６５ （１－２）： １４３－１４９）。ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸を乳化剤として用いて調製されたシクロスポリンミクロエマルション溶液の粒子径は、２０ｎｍを超える。ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸については、ミセル溶液調製のための眼用調製用可溶化剤としての使用の報告は未だ無い。眼科用途の乳化剤としてのポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸最大安全用量は、０．２５％である。本発明者らの実験によれば、０．２５％ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸は乳化剤としてしか作用せず、０．０５％ＣｓＡを用いたミセル溶液の形成には至らなかったことが確認された。しかし、驚くべきことに、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸を１．０％において用いたところ、シクロスポリンを含むミセル溶液を臨界ミセル濃度を超えて形成することができた。サンプルの粒子径は１０ｎｍ～１５ｎｍの範囲内と極めて小さいため、良好な均一性および安定性が維持されたことが判明した。
別の態様において、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ（ポリエチレンカプロラクタム－ポリビニルアセテート－ポリエチレングリコールグラフトコポリマー）は、新種の可溶化剤であり、大部分は経口固形調製において用いられる。Ｓｏｌｕｐｌｕｓは、商用点眼薬においては全く使用されていない。驚くべきことに、本発明者らによれば、Ｓｏｌｕｐｌｕｓの濃度が０．９％以上にしたところ、ミセル溶液が０．０５％ＣｓＡと共に形成され、異なる濃度のＳｏｌｕｐｌｕｓにおいて形成されたミセルの粒子径は約６５ｎｍであったことが判明した。このミセル溶液に基づいて、驚くべきことに、本発明者らによれば、このミセル溶液をｉｎ－ｓｉｔｕゲルと組み合わせて形成されたミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲル点眼薬は、眼表面上におけるミセル粒子の保持時間を増加させ、生物学的利用能が向上し、溶液は安定していたことも判明した。
本発明者らの実験結果に基づいて、適切な可溶化システムは、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、およびビタミンＥポリエチレングリコールスクシナートの任意の組み合わせであることが判明した。これらの組み合わせは、シクロスポリンに対する可溶化容量も高いため、粒子径が２０ｎｍ未満のミセルを形成することが可能であったことが判明した。
上記可溶化剤またはその混合物を０．０９％シクロスポリンと共に用いて、上記可溶化剤の可溶化能力について調査した。これらの可溶化剤またはその混合物は、シクロスポリンに対して高い可溶化効果を有することも判明した。得られたミセルの粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）またはＣＥＱＵＡ（登録商標）を用いて調製されたミセルの粒子径よりもずっと小さかった。
眼内の投与形態の滞留時間を増大させるために、ｉｎ－ｓｉｔｕゲルを形成するシクロスポリンナノ粒子担体を１つ以上のイオン感応性ｉｎ－ｓｉｔｕゲル形成材料（例えば、多糖類）を用いて製剤する。イオン感応性多糖類（例えば、ジェランガム）をゲル形成マトリクスとして用いることにより、ｉｎ－ｓｉｔｕゲル局所用薬物送達プラットフォームを開発した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出プロファイルの生成のために、異なる濃度のジェランガムを用いて、２５℃（人工涙無し）および３４℃（人工涙有り）における粘度変化を決定した。ｉｎ－ｓｉｔｕゲルを形成することが可能なのは、このように最適化されたゲルマトリクスのみである。
脱アセチル化ジェランガム（「ＤＧＧ」、微生物起源の細胞外多糖類、Ｇｅｌｒｉｔｅ（登録商標）として市販中）は、興味深いｉｎ－ｓｉｔｕゲル化ポリマーであり、ヒトにおいて非常に良好に機能すると思われる。ＤＧＧは、アニオン線状多糖類であり、複数の４糖単位を含む。薬物を含むＤＧＧ溶液を眼内に滴下したところ、ＤＧＧと眼流体中の電解質（Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋など）との相互作用後にゲルがｉｎ－ｓｉｔｕ形成された。ヒトの眼の流体には大量のイオン（例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオン）が含まれるため、イオン感応性ゲルの調製は、溶液／ゲルの相変化を達成することが期待される。
本発明において、ｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスにおけるシクロスポリンナノミセルの採用が用いられ、これらの製剤は、以下の反復アプローチによりさらに最適化される。
本発明について、特定の例を用いてさらに説明する。これらの例は、本発明の範囲の例示のために記載されるものであり、本発明の範囲の制限を意図していないことが理解される。以下の例における実験方法について、特定の条件が付記されていないものの調製は、文献中に報告されているような従来の条件下においてまたは賦形剤の製造業者によって提案された条件に従って主に行った。他に明記無き限り、本発明中のパーセンテージ、比率、割合または分数は全て、重量間関係に基づいて計算した。本発明中において他に具体的規定無き限り、本明細書中において用いられる専門用語および科学用語は全て、当業者が理解する意味と同じ意味を有する。加えて、本発明中に記載のものと同様または相当する任意の方法および材料が、本発明に適用され得る。本明細書中に記載される好適な実施形態および材料は、ひとえに例示目的のためのものである。
実施例１：可溶化剤の濃度の決定
０．０５％シクロスポリンＡを含むミセル溶液のサンプルのリストを、以下の表２中に示す：
Figure 2023505409000004
粒子径および分布検出
上記製剤と共に調製されたサンプル１～８に対し、粒子径分析器を用いてミセル粒子径および分布または多分散性指数（ＰＤＩ）について試験を行った（表３）。結果を図１～図８に示す。上記のように調製および試験されたサンプル１～８中のミセルの粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）またはＣＥＱＵＡ（登録商標）よりも小さいことが確認された。
Figure 2023505409000005
実施例２：ゲル化剤の濃度の決定
０．０５％シクロスポリンＡを含む異なるｉｎ－ｓｉｔｕゲル化溶液サンプルのリストを、以下の表４～表７中に示す：
Figure 2023505409000006
Figure 2023505409000007
Figure 2023505409000008
Figure 2023505409000009
ゲル溶液の調製方法
一定量の塩化ナトリウムを高精度に秤量し、８５ｇの超純水を徐々に均等に付加した。塩化ナトリウムが完全に溶解するまで当該溶液を攪拌した後、上記したゲル化剤を連続攪拌下において徐々に均等に追加した。この溶液を９０℃の水槽内に投入し、１時間攪拌した。次に、混合物を室温まで冷却した。０．０５ｇのシクロスポリンＡを秤量し、冷却された溶液を攪拌しつつ、シクロスポリンＡを溶液に徐々に付加した。最終量である１００ｇへ水を付加した。
人工涙の調製方法
ＮａＨＣＯ３：２．１８ｇ；ＮａＣｌ：６．７８ｇ；ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ：０．０８４ｇ；ＫＣｌ：１．３８ｇ．をそれぞれ測定し、１，０００ｍＬの脱イオン水中へ溶解させた。
粘度の試験方法
２０ｍＬのサンプル溶液をサンプルシリンダーへ付加し、５分間放置した。次に、ローターを回転させて、２５℃における初期粘度値を測定した。３４℃下において（人工涙－４０：７）：２０ｍＬのサンプル溶液をサンプルシリンダーへ付加し、５分間保持した。次に、ローターを回転させて、初期粘度値を測定した。
人工涙の付加前および付加後のサンプル１～１８の粘度値それぞれの測定を粘度計を用いて行った。結果を表８～１１に示す。
Figure 2023505409000010
Figure 2023505409000011
Figure 2023505409000012
Figure 2023505409000013
表８～表１１に示すデータに基づいて、異なるゲル化マトリクスポリマーを用いたサンプルについて、人工涙の混合前および混合後の粘度変化の比較分析についてのヒストグラムチャート（図９～図１２を参照）を生成した。人工涙の付加後の２５℃における粘度値と３４℃における粘度値を比較したところ、ＤＧＧは、最適なｉｎ－ｓｉｔｕゲル特性を最大の粘度変化と共に示した。人工涙の付加後、製剤の粘度が大幅に増加し、少量のＤＧＧ；キサンタンガムおよびカラギーナンにより、より高い粘度値が達成された。アルギン酸ナトリウムも、一定のｉｎ－ｓｉｔｕゲル特性を示した。人工涙の付加後、粘度値も一定の範囲まで増加したが、粘度変化は、ジェランガムと比較して最適ではなかった。そのため、ジェランガムが、ゲル化マトリクスポリマーとして好適な選択肢である。
実施例３：本発明におけるシクロスポリンミセルのｉｎ－ｓｉｔｕゲル
０．０５％シクロスポリンＡを含むミセル眼用ゲルの製剤を以下に示す。
シクロスポリンＡ０．０５ｗｔ％、脱アセチル化ジェランガム０．２５ｗｔ％、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル１．０ｗｔ％、塩化ナトリウム０．１５ｗｔ％、マニトール３．３ｗｔ％、ヒドロキシパラベン０．０２ｗｔ％、適切な量のトロメタミン－塩酸緩衝液、および噴射水を付加して、０．０５％シクロスポリンミセルを含む１００ｇの眼用ゲルを作製した（表１２）。
Figure 2023505409000014
サンプル調製
規定量の水をビーカー内への噴射のために用意し、回転式攪拌機を用いて一定速度で攪拌した。上記規定量の脱アセチル化ジェランガムを上記水中に攪拌下において分散させた後、９０℃の水槽中へ攪拌下において１時間投入した。この溶液を取り出し、溶液が高温の間に０．４５μｍの微小多孔性フィルタ膜を通じてフィルタリングして殺菌した。溶液１：上記規定量のシクロスポリンＡを高精度に秤量し、上記規定量のポリオキシル２０セトステアリルエーテルを付加して、シクロスポリンＡを溶解させた後、適切な量の塩化ナトリウム、マニトール、ヒドロキシブチレートおよびトロメタミン塩酸緩衝液をそれぞれ付加した。次に、この溶液を０．４５μｍ微小多孔性膜を通じて送って、溶液２を得た。溶液１および溶液２を攪拌によって混合し、点眼ボトルに装填して、シクロスポリンナノミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲルを得た。
粒子径および分布の検出
上記において調製された０．０５％シクロスポリンミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粒子径および分布の測定を、粒子径分析器を用いて行った。結果を図９および表１３中に示す。
ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）の粒子径および分布の測定を粒子径分析器を用いて行った。結果を図１０および表１３に示す。
ＣＥＱＵＡ（登録商標）の粒子径および分布の測定を、粒子径分析器を用いて行った。結果を図１１および表１３に示す。
Figure 2023505409000015
表１３中の結果から、サンプル３として調製されたナノミセルの粒子径は、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）およびＣｅｑｕａ（登録商標）を用いて調製されたものよりも小さいことが分かる。
０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出試験を上記溶解方法により行い、１００ｍＬ人工涙を媒体として用いた。温度は３４±０．５℃に設定した。振盪頻度を１００ｒ／ｍｉｎとした。１ｍＬのサンプルをアンプルへ付加した後、４ｍＬの人工涙を付加し、上記アンプルを一定温度および湿度発振器内に配置した。０．５、１、２、４、８、１２、２４、４８時間後において、各溶液を２ｍＬ取り出し、新規の媒体を２ｍＬだけ付加した。サンプルを０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通じてフィルタリングし、２０μＬの濾過液を液体クロマトグラフィーシステム中へ注入して、シクロスポリンＡの内容物（量）を決定した。同じ方法を用いて、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）を用いて調製されたナノミセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出プロファイルを測定した。放出曲線を、累積薬物放出対時間のパーセンテージとしてプロットした。実施例３中のＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）およびサンプルについて、累積放出データを比較した。放出曲線を図１２および表１４に示す。
Figure 2023505409000016
図１２中に羅列されたデータから分かることとして、実施例３の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）を用いて調製された製剤と比較して放出プロファイルが有意に持続した点がある。その理由として、実施例３の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合、９０％のシクロスポリンを３０時間後までに徐々に放出したのに対し、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）双方の製剤の場合は製剤放出が高速であり、９０％のシクロスポリンが２時間以内に放出されたことが判明した点がある。実施例３の製剤の放散速度は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）の放散速度よりもずっと低速であり、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスが実際に緩効性プロファイルを示したことが判明した。
安定性調査：０．０５％シクロスポリンＡミセル眼用ゲルを調製し、複数投与用の点眼ボトル中に分割投入した。サンプルを２５℃の安定性チャンバ内に保存した。０日目、１０日目、２０日目、３０日目にサンプルを取り出した。
特性確認：特性、ｐＨ、浸透圧、粘度、内容物、粒子径
Figure 2023505409000017
実施例４：本発明におけるシクロスポリンミセルのｉｎ－ｓｉｔｕゲル
０．０５％シクロスポリンＡを含むミセル眼用ゲルの製剤を以下に示す。
シクロスポリンＡ０．０５ｗｔ％、ＤＧＧ０．３ｗｔ％、ＨＳ－１５１．０ｗｔ％、塩化カリウム０．２ｗｔ％、グリセリン０．８ｗｔ％、パラベン０．０５％、プロピルパラベン０．０１％、適切な量のリン酸緩衝液溶液および噴射水を付加して、０．０５％シクロスポリンミセルを含む眼用ゲルを１００ｇ作製した（表１６）。
Figure 2023505409000018
サンプル調製
規定量の水をビーカー中へ注入し、回転式攪拌機によって一定速度で攪拌した。規定量のＤＧＧを上記水中において攪拌下で分散させた後、９０℃の水槽内に攪拌下において１時間配置した。この溶液を取り出して、高温状態のまま０．４５μｍ微小多孔性フィルタ膜を通じてフィルタリングし、殺菌済み溶液１を得た。規定量のシクロスポリンＡを高精度に秤量し、規定量のＨＳ－１５を付加してシクロスポリンＡを溶解させ、規定量の塩化カリウム、グリセリン、パラベン、プロピルパラベンおよびリン酸緩衝液を付加した。次に、溶液を０．４５μｍ微小多孔性フィルタを通過させて、溶液２を得た。溶液１および溶液２を攪拌により混合し、点眼ボトル中に注入して、シクロスポリンミセル眼用ゲルを得た。
粒子径および分布の検出
上記の調製された０．０５％シクロスポリンミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粒子径および分布の測定を粒子径分析器を用いて行った。結果を図１３および表１７に示す。
Figure 2023505409000019
表１９中の結果から、粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）よりもずっと小さいことが分かる。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出評価：０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出について試験した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出試験を、１００ｍｌの人工涙を媒体として用いて溶解方法によって行った。温度は、３４±０．５℃に設定した。振盪頻度は１００ｒ／ｍｉｎとした。１ｍＬのサンプルをアンプルへ付加した後、４ｍＬの人工涙を付加し、アンプルを一定温度で湿度発振器内に配置した。０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後、時間後において、２ｍｌの各溶液を取り出し、２ｍＬの新規媒体を付加した。サンプルを０．４５μｍ膜フィルタを通じてフィルタリングし、２０μＬを液体クロマトグラフィーシステム中に注入して、シクロスポリンＡの内容物を決定した。放出曲線を、累積薬物放出対時間のパーセンテージとしてプロットした。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）の累積放出データを実施例４中のサンプルと比較した。放出曲線を図１４および表１８に示す。
Figure 2023505409000020
図１４に示す結果から分かるように、実施例４の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤をＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）と比較すると、実施例４の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合は放出プロファイルが有意に持続しており、９０％のシクロスポリンが３０時間後までに徐々に放出されているのに対し、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）双方の場合、製剤が高速に放出され、約９０％のシクロスポリンが２時間以内に放出されている。放散速度は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）の放散速度よりもずっと低速であるため、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスにより緩効性プロファイルが得られることが示された。
安定性調査：０．０５％シクロスポリンＡミセル眼用ゲルを調製し、複数投与用の点眼ボトル内へ分割投入した。これらのボトルを２５℃の安定性チャンバ中に保管した。０日後、１０日後、２０日後、３０日後にサンプルを取り出した。
特性確認：外観、ｐＨ、浸透圧、粘度、内容物、粒子径。実験結果を以下の表１９に示す。
Figure 2023505409000021
実施例５：シクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル
０．０５％シクロスポリンＡを含むミセル眼用ゲルの具体的処方を下記に示す。
シクロスポリンＡ０．０５ｗｔ％、脱アセチル化ジェランガム０．４ｗｔ％、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ０．９ｗｔ％、塩化カルシウム０．２ｗｔ％、プロピレングリコール０．８ｗｔ％、カリウムソルビン酸塩０．０１ｗｔ％、適切な量のホウ酸塩緩衝液、および注入用の水を付加して、０．０５％シクロスポリンミセルを含む眼用ゲル（表２０を参照）を１００ｇ作製した。
Figure 2023505409000022
サンプル調製
規定量のＳｏｌｕｐｌｕｓを２５０ｍＬビーカー中において秤量した。１０ｍＬの無水エタノールを付加して、規定量のシクロスポリンＡを溶解させた。溶液を８０℃まで加熱してエタノールを蒸発させると、無色透明の膜が得られた。２０ｍｌの脱イオン水を付加して上記膜を１５時間水和させて、溶液１を作製した。プロピレングリコール、塩化カルシウム、カリウムソルビン酸塩、脱アセチル化ジェランガムを規定量に従って秤量し、７０ｍｌの脱イオン水中に付加して、ジェランガムが完全に溶解するまで９０℃まで攪拌下において１時間加熱した。冷却後に溶液２を得た。溶液２を攪拌下において溶液１中へ徐々に付加し、最後にｐＨ調節をホウ酸塩緩衝液によって行った。脱イオン水を付加して、最終重量の１００ｇを得た。サンプルを殺菌のために０．２２μｍ微小多孔性膜フィルタを通じてフィルタリングした。
粒子径および分布の検出
上記の調製された０．０５％シクロスポリンミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粒子径および分布を粒径分析計を用いて測定した。結果を図１５および表２１に示す。
Figure 2023505409000023
表２１および図１５中の結果から、実施例５のミセル粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）よりもずっと小さいが、ＣＥＱＵＡ（登録商標）よりも大きいことが判明した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出評価：０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を生成した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出試験を溶解方法により行い、１００ｍｌの人工涙を媒体として用いた。温度は３４±０．５℃に設定した。振盪頻度は１００ｒ／ｍｉｎとした。１ｍｌのサンプルをアンプルへ付加した後、４ｍｌの人工涙を付加し、アンプルを一定温度および湿度発振器に配置した。０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後において、各溶液を２ｍＬだけ取り出し、新規媒体を２ｍｌだけ付加した。サンプルを０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通じてフィルタリングし、２０μＬを液体クロマトグラフィーシステム内に注入して、シクロスポリンＡの内容物を決定した。放出曲線を累積薬物放出対時間のパーセンテージとしてプロットした。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）および実施例５中のサンプルについて、累積放出データを比較した。放出曲線を図１６および表２２に示す。
Figure 2023505409000024
図１６中の結果から分かるように、実施例５の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤をＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）と比較すると、実施例５の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合は放出プロファイルが有意に持続しており、９０％のシクロスポリンが３０時間後までに徐々に放出されているのに対し、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）双方の場合、製剤が高速に放出され、約９０％のシクロスポリンが２時間以内に放出されている。放散速度は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）の放散速度よりもずっと低速であるため、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスにより緩効性プロファイルが得られることが示された。
安定性調査：０．０５％シクロスポリンＡミセル眼用ゲルを調製し、複数投与用の点眼ボトル内へ分割投入した。サンプルを２５℃の安定性チャンバ内に保管した。０日後、１０日後、２０日後、３０日後にサンプルを取り出した。
特性確認：外観、ｐＨ、浸透圧、粘度、内容物、粒子径
実験結果（表２３）：
Figure 2023505409000025
実施例６：本発明におけるシクロスポリンミセルのｉｎ－ｓｉｔｕゲル
０．０５％シクロスポリンＡを含むミセル眼用ゲルの製剤を以下に示す。
シクロスポリンＡ０．０５ｗｔ％、ＤＧＧ０．３ｗｔ％、ＨＳ－１５０．２５ｗｔ％、ＲＨ－４０１．０ｗｔ％、塩化ナトリウム０．２５ｗｔ％、マニトール３．３ｗｔ％、パラベン油０．０５％、プロピルパラベン０．０１ｗｔ％、適切な量のトロメタミン塩酸緩衝液溶液、および注入用水を付加して、０．０５％シクロスポリンミセルを含む眼用ゲルを１００ｇ作製した（表２４）。
Figure 2023505409000026
サンプル調製
規定量の水をビーカー中に注入し、回転式攪拌機により一定速度で攪拌した。規定量の脱アセチル化ジェランガムを上記水中において攪拌下において分散させた後、９０℃の水槽中に攪拌下において１時間配置した。この溶液を取り出し、０．４５μｍの微小多孔性フィルタ膜を通じて高温状態でフィルタリングして、殺菌された溶液１を得た。規定量のシクロスポリンＡを高精度に秤量し、規定量のＨＳ－１５およびＲＨ－４０を付加してシクロスポリンＡを溶解させ、適切な量の塩化ナトリウム、マニトール、パラベン、プロピルパラベンおよびトロメタミン塩酸塩緩衝液を付加した。次に、この溶液を０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通過させて、溶液２を得た。溶液１および溶液２を攪拌によって混合させて、シクロスポリンミセル眼用ゲルを得て、これを点眼ボトル内に装填した。
粒子径および分布の測定
上記の調製された０．０５％シクロスポリンミセルを含有するｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粒子径および分布インデックスの測定を粒子径分析器を用いて行った。結果を以下の図１７および表２５中に羅列する。
Figure 2023505409000027
表２５中の結果から分かるように、粒子径は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）のものよりもずっと小さい。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出評価：０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を生成した。
１００ｍｌの人工涙を媒体として用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出試験を溶解方法によって行った。温度は３４±０．５℃に設定した。振盪頻度は１００ｒ／ｍｉｎとした。１ｍｌのサンプルをアンプルへ付加した後、４ｍｌの人工涙を付加し、アンプルを一定温度および湿度発振器に配置した。０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、各溶液を２ｍｌだけ取り出し、２ｍｌの新規媒体を付加した。サンプルを０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通じてフィルタリングし、２０μＬを液体クロマトグラフィーシステム内に注入して、シクロスポリンＡの内容物を決定した。放出曲線を累積薬物放出対時間のパーセンテージとしてプロットした。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）および実施例５におけるサンプルについて、累積放出データを比較した。放出曲線を図１８および表２６に示す。
Figure 2023505409000028
図１８中の結果から分かるように、実施例６の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤をＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）と比較すると、実施例６の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合は放出プロファイルが有意に持続しており、９０％のシクロスポリンが３０時間後までに徐々に放出されているのに対し、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）双方の場合、製剤が高速に放出され、約９０％のシクロスポリンが２時間以内に放出されている。放散速度は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）の放散速度よりもずっと低速であるため、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスにより緩効性プロファイルが得られることが示された。
安定性調査：０．０５％シクロスポリンＡミセル眼用ゲルを調製し、複数投与用の点眼ボトル中に分割投入した。サンプルを２５℃の安定性チャンバ中に保管した。０日後、１０日後、２０日後、３０日後にサンプルを取り出した。
特性確認：外観、ｐＨ、浸透圧、粘度、内容物、粒子径。実験結果を以下の表２７中に羅列する。
Figure 2023505409000029
実施例７：本発明におけるシクロスポリンミセルのｉｎ－ｓｉｔｕゲル
０．０９％シクロスポリンＡを含むミセル眼用ゲルの製剤を以下に示す。
シクロスポリンＡ０．０９ｗｔ％、ＤＧＧ０．３ｗｔ％、ＨＳ－１５０．２５ｗｔ％、ＲＨ－４０１．０ｗｔ％、塩化ナトリウム０．２５ｗｔ％、マニトール３．３ｗｔ％、パラベ油０．０５％、プロピルパラベン０．０１ｗｔ％、適切な量のトロメタミン塩酸緩衝液溶液および噴射水を付加して、０．０５％シクロスポリンミセルを含む眼用ゲルを１００ｇ作製した（表２８）。
Figure 2023505409000030
サンプル調製
規定量の水をビーカー中に注入し、回転式攪拌機により一定速度で攪拌した。規定量の脱アセチル化ジェランガムを上記水中において攪拌下において分散させた後、９０℃の水槽中に攪拌下において１時間配置した。この溶液を取り出し、０．４５μｍの微小多孔性フィルタ膜を通じて高温状態でフィルタリングして、殺菌された溶液１を得た。規定量のシクロスポリンＡを高精度に秤量し、規定量のＨＳ－１５およびＲＨ－４０を付加してシクロスポリンＡを溶解させ、適切な量の塩化ナトリウム、マニトール、パラベン、プロピルパラベンおよびトロメタミン塩酸塩緩衝液を付加した。次に、この溶液を０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通過させて、溶液２を得た。溶液１および溶液２を攪拌によって混合させて、シクロスポリンミセル眼用ゲルを得て、これを点眼ボトル内に装填した。
粒子径および分布の測定
上記の調製された０．０９％シクロスポリンミセルｉｎ－ｓｉｔｕゲルの粒子径および分布の測定を粒子径分析器を用いて行った。結果を以下の図１９および表２９中に羅列する。
Figure 2023505409000031
表２９中の結果は、実施例７におけるナノミセルの粒子径がＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）よりも小さいことを示す。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出評価：０．０９％シクロスポリンミセル眼用ゲルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出曲線を試験した。
１００ｍｌの人工涙を媒体として用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出試験を溶解方法によって行った。温度は３４±０．５℃に設定した。振盪頻度は１００ｒ／ｍｉｎとした。１ｍｌのサンプルをアンプルへ付加した後、４ｍｌの人工涙を付加し、アンプルを一定温度および湿度発振器に配置した。０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、各溶液を２ｍｌだけ取り出し、２ｍｌの新規媒体を付加した。サンプルを０．４５μｍの微小多孔性膜フィルタを通じてフィルタリングし、２０μＬを液体クロマトグラフィーシステム内に注入して、シクロスポリンＡの内容物を決定した。放出曲線を累積薬物放出対時間のパーセンテージとしてプロットした。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）および実施例５におけるサンプルについて、累積放出データを比較した。放出曲線を図２０および表３０に示す。
Figure 2023505409000032
図２０中の結果から分かるように、実施例７の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤をＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）と比較すると、実施例７の０．０５％シクロスポリンミセル眼用ゲル形成製剤の場合は放出プロファイルが有意に持続しており、９０％のシクロスポリンが３０時間後までに徐々に放出されているのに対し、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）双方の場合、製剤が高速に放出され、約９０％のシクロスポリンが２時間以内に放出されている。放散速度は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）の放散速度よりもずっと低速であるため、このｉｎ－ｓｉｔｕゲルマトリクスにより緩効性プロファイルが得られることが示された。
安定性調査：０．０９％シクロスポリンＡミセル眼用ゲルを調製し、複数投与用の点眼ボトル中に分割投入した。サンプルを２５℃の安定性チャンバ中に保管した。０日後、１０日後、２０日後、３０日後にサンプルを取り出した。
特性確認：外観、ｐＨ、浸透圧、粘度、内容物、粒子径。結果を以下の表３１中に羅列する。
Figure 2023505409000033
実施例８：ｉｎ ｖｉｔｒｏ透析放出試験
ｉｎ ｖｉｔｒｏ透析放出試験を、サンプル１～６、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）に対して行った。サンプル１～６の製剤／組成のリストを以下の表３２中に示す。
Figure 2023505409000034
サンプル１－６、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）をそれぞれ２ｍＬだけ取り出し、１４ＫＤａ透析バッグへ付加した後、３４．５℃まで予熱された２００ｍＬの人工涙（３０％エタノールを含む）中へ投入した。サンプルを水槽シェーカー内において１００ｒｐｍにて攪拌し、５ｍｌの放出媒体を一定の時点（０．５、１、２、４、６、８、１２、１８ｈ）において取り出し、同量の放出媒体（３４．５℃に予熱）を迅速に付加した。利用可能なシクロスポリン濃度をＨＰＬＣを用いて決定した。薬物の累積放出パーセンテージを時間に対してプロットすることにより、放出曲線を得た。ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）およびサンプル１～３の累積放出データを比較した。放出曲線を表３３および図２１に示す。さらに、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）、ＣＥＱＵＡ（登録商標）およびサンプル４～６の累積放出データを比較した。放出曲線を表３３および図２２に示す。
Figure 2023505409000035
ポリオキシル２０セトステアリルエーテルを可溶化剤として用いて、シクロスポリンサンプル１（０．０３％ＣｓＡ）、サンプル２（０．０５％ＣｓＡ）およびサンプル３（０．０９％ＣｓＡ）を調製した。これらのサンプルからの薬物浸透を、図２２に示すような半透性膜を用いてＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）（０．０９％ＣｓＡ）と比較した。サンプル２（０．０５％ＣｓＡ）の累積放出は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）よりも有意に高く、サンプル３（０．０９％ＣｓＡ）の累積放出は、ＣＥＱＵＡ（登録商標）（０．０９％ＣｓＡ）よりも有意に高かった。サンプル１（０．０３％ＣｓＡ）の累積放出は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）に類似していた。これらの結果から分かることとして、半透性膜を用いた角膜浸透シミュレーション試験において、ミセル粒子径が小さいほど、シクロスポリンの角膜浸透が有意に高くなるため、同じかまたはさらに高い治療効果を達成するための眼用調製物中の薬物濃度が低くなる。これは、より小さな粒子径のナノミセル製剤の使用によりより低濃度のシクロスポリンを用いて同様の治療の効果を達成することが可能となり、本発明者らの製剤をＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）またはＣＥＱＵＡ（登録商標）（０．０９％ＣｓＡ）と同一濃度で用いてずっと高い治療効果を達成することが可能となるという驚くべき発見である。加えて、薬物濃度の低下により、薬物による眼の炎症も低減する。
ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸およびポリオキシエチレン４０ヒマシ油を可溶化剤として用いて、サンプル４（０．０３％ＣｓＡ）、サンプル５（０．０５％ＣｓＡ）およびサンプル６（０．０９％ＣｓＡ）を調製した。これらのサンプルからの薬物浸透を、図２２に示すような半透性膜を用いてＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）およびＣＥＱＵＡ（登録商標）（０．０９％ＣｓＡ）と比較した。サンプル４（０．０３％ＣｓＡ）の累積放出はＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）と類似していたものの、サンプル５（０．０５％ＣｓＡ）の累積放出は、ＲＥＳＴＡＳＩＳ（登録商標）（０．０５％ＣｓＡ）よりも有意に高く、サンプル６（０．０９％ＣｓＡ）の累積放出は、ＣＥＱＵＡ（登録商標）（０．０９％ＣｓＡ）よりも有意に高かった。これにより、ミセル粒子径の小型化により角膜内におけるシクロスポリン浸透が大幅に向上し、同じかまたはより高い治療効果の達成のための眼用調製物中の薬物の高濃度化の必要性がさらに低下することがさらに確認された。これらの利点により、薬物投与頻度の低減も支援され得る。
発明の要旨
技術的問題
問題の解決法
本発明の有利な効果

Claims (20)

  1. シクロスポリンＡ、可溶化剤、浸透圧調節剤、ｐＨ調節剤、粘度調節剤および水を含む水性の眼用製剤であって、粒子径が２０ｎｍを超えないミセルが、前記製剤中に含まれるシクロスポリンおよび前記可溶化剤と共に形成される、水性の眼用製剤。
  2. ゲル形成多糖類ポリマーをさらに含み、前記眼内への前記製剤の滴下時において、ゲルが生理的温度において一定の粘度上昇と共にｉｎ ｓｉｔｕ形成される、請求項１に記載の水性の眼用製剤。
  3. 前記製剤中のシクロスポリンの濃度は０．０１重量％～５重量％である、請求項１または２に記載の水性の眼用製剤。
  4. 前記可溶化剤は、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ビタミンＥポリエチレングリコールスクシナート、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～３のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  5. 前記製剤中の前記可溶化剤の濃度は、０．０１重量％～１０重量％である、請求項１～４のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  6. 前記多糖類は、０．１重量％～０．６重量％の濃度において前記製剤中に含まれる、請求項２～５のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  7. 前記多糖類は、脱アセチル化ジェランガム（ＤＧＧ）、キサンタン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、またはこれらの任意の混合物を含む、請求項２～６のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  8. 前記多糖類は、脱アセチル化ジェランガム（ＤＧＧ）を含む、請求項２～７のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  9. 前記浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、マニトール、グルコース、ソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～８のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  10. 前記製剤中の前記浸透圧調節剤の濃度は、０．０１重量％～１０重量％である、請求項１～９のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  11. 防腐剤をさらに含み、前記防腐剤は、ブチルパラベン、塩化ベンザルコニウム、臭化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン、ソルビン酸塩、クロロブタノール、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～１０のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  12. 前記製剤中の前腐剤の濃度は、０．０１重量％～５重量％である、請求項１０に記載の水性の眼用製剤。
  13. 前記ｐＨ調節剤は、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、リン酸緩衝液、トロメタミン、トロメタミン塩酸緩衝液、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～１２のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  14. 前記製剤中の前記ｐＨ調節剤の濃度は、０．０１重量％～５重量％である、請求項１～１３のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  15. 前記製剤中の前記粘度調節剤の濃度は、０．０１重量％～５重量％である、請求項１～１４のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  16. 前記粘度調節剤は、カルボキシルメチルセルロース、ナトリウムセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～１５のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  17. 前記ミセルの平均粒子径は、１０ｎｍ～２０ｎｍの範囲である、請求項１～１６のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤。
  18. 水、シクロスポリンＡおよび可溶化剤を含むミセルであって、前記ミセルの粒子径は、２０ｎｍを超えない、ミセル。
  19. 前記可溶化剤は、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル１５ヒドロキシステアリン酸、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ビタミンＥポリエチレングリコールスクシナート、またはこれらの任意の組み合わせを含み、シクロスポリンは、シクロスポリンＡである、請求項１８に記載のミセル。
  20. ドライアイ疾患の症状または状態を治療または軽減させることを必要とする対象におけるドライアイ疾患の症状または状態を治療または軽減させる方法であって、治療的に有効な量の、請求項１～１７のうちいずれか１項に記載の水性の眼用製剤または請求項１８もしくは１９に記載のミセルを前記対象の眼へ局所投与することを含む、方法。

JP2022524724A 2019-08-18 2020-08-18 持続型の眼用薬物送達システムとしてシクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル Withdrawn JP2023505409A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962888534P 2019-08-18 2019-08-18
PCT/CN2020/109682 WO2021032073A1 (en) 2019-08-18 2020-08-18 In-situ gel containing cyclosporine micelles as sustained ophthalmic drug delivery system

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023505409A true JP2023505409A (ja) 2023-02-09

Family

ID=74660198

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022524724A Withdrawn JP2023505409A (ja) 2019-08-18 2020-08-18 持続型の眼用薬物送達システムとしてシクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル
JP2022510968A Pending JP2022545082A (ja) 2019-08-18 2020-08-18 ジフルプレドナートを含むインサイチュゲル形成性眼科用製剤

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022510968A Pending JP2022545082A (ja) 2019-08-18 2020-08-18 ジフルプレドナートを含むインサイチュゲル形成性眼科用製剤

Country Status (5)

Country Link
US (2) US20230172946A1 (ja)
EP (2) EP4013423A4 (ja)
JP (2) JP2023505409A (ja)
CA (1) CA3148362C (ja)
WO (2) WO2021032073A1 (ja)

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5668476B2 (ja) * 2007-10-08 2015-02-12 オーリニア・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｕｒｉｎｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ． カルシニューリン阻害剤またはｍＴＯＲ阻害剤を含む眼科用組成物
JP2011521957A (ja) * 2008-05-28 2011-07-28 アルコン リサーチ， リミテッド 自己防腐エマルジョン
CN103127139B (zh) * 2011-11-30 2016-01-20 天津金耀集团有限公司 二氟泼尼酯局部外用制剂
PL2887923T3 (pl) * 2012-08-24 2023-08-14 Sun Pharmaceutical Industries Limited Preparat okulistyczny polioksylipidu lub polioksylowego kwasu tłuszczowego i leczenie chorób oczu
WO2015057764A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-23 Rebecca Bader Polysialic acid-polycaprolactone micelles for drug delivery
PT3721868T (pt) * 2015-01-26 2022-08-12 Bausch & Lomb Composição para suspensão oftálmica
US11000475B2 (en) * 2015-10-16 2021-05-11 Sun Pharma Advanced Research Company Limited Ophthalmic solution of difluprednate
CA3002384C (en) * 2015-10-25 2021-02-16 Iview Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations that form gel in situ
US11583496B2 (en) * 2016-10-12 2023-02-21 PS Therapy Inc. Drug vehicle compositions and methods of use thereof
EP4008311B1 (en) * 2016-10-12 2023-09-13 PS Therapy, Inc. Artificial tear, contact lens and drug vehicle compositions and methods of use thereof
CN110090294A (zh) * 2019-04-09 2019-08-06 嘉兴市爵拓科技有限公司 具有改善的干燥保护和保留的眼用组合物

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022545082A (ja) 2022-10-25
CA3148362A1 (en) 2021-02-25
US20230093908A1 (en) 2023-03-30
EP4013423A4 (en) 2023-08-16
WO2021032073A1 (en) 2021-02-25
EP4013443A1 (en) 2022-06-22
CA3148362C (en) 2024-02-13
US20230172946A1 (en) 2023-06-08
EP4013443A4 (en) 2023-10-04
WO2021034850A1 (en) 2021-02-25
EP4013423A1 (en) 2022-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2016200292B2 (en) Ophthalmic oil-in-water emulsions containing cyclosporine or a polyphenol
CA3032695C (en) Methods of diagnosing and treating dry eye syndrome and compositions for treating a human eye
JP6824270B2 (ja) 生物活性親油性化合物を有するｐｅｇ化脂質ナノ粒子
US20210085603A1 (en) Microemulsion for opthalmic drug delivery
EP2978409B1 (en) Ophthalmic composition, method for preparing the same, and use of the same
WO2010141591A1 (en) Omega-3 oil containing ophthalmic emulsions
JPH0899867A (ja) 眼科用ビヒクルとして有用な水中油型ナノエマルジョンおよびその調製法
WO2018212955A1 (en) Nanoemulsions with anti-inflammatiory activity
CN112516084A (zh) 含有环孢素胶束的原位凝胶作为缓释眼科药物递送***
US11622982B2 (en) Methods of diagnosing and treating dry eye syndrome and compositions for treating a human eye
KR101182115B1 (ko) 나노에멀젼 형태의 안과용 조성물
KR20180117661A (ko) 국소형 시클로스포린 함유 제형 및 그의 용도
CN111182893A (zh) 包含f6h8的眼用组合物
CN112190542B (zh) 一种用于治疗干眼症的水性原位凝胶眼用制剂
JP2024037806A (ja) ４－（７－ヒドロキシ－２－イソプロピル－４－オキソ－４ｈ－キナゾリン－３－イル）－ベンゾニトリルの製剤
EP4029493A1 (en) Nanoemulsion ophthalmic composition comprising cyclosporine and menthol, and preparation method thereof
CN113577024A (zh) 一种眼用组合物及其制备方法和应用
JP2002154989A (ja) 眼科用組成物、及び生体粘膜への薬物の滞留性向上組成物
US20210177751A1 (en) Hypotonic hydrogel formulations for enhanced transport of active agents at mucosal surfaces
KR20160096376A (ko) 히알루론산, 미네랄 오일 및 계면활성제를 포함하는 안과용 조성물
JP2023505409A (ja) 持続型の眼用薬物送達システムとしてシクロスポリンミセルを含むｉｎ－ｓｉｔｕゲル
KR20180030323A (ko) 사이클로스포린의 안구필름 제형
KR101151235B1 (ko) 나노에멀젼 형태의 안과용 조성물
CN112294761A (zh) 一种难溶性药物的眼用胶束制剂
CN115919759A (zh) 一种低聚集体眼用纳米制剂及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20220426

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20220426

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230131

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230817

A761 Written withdrawal of application

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761

Effective date: 20240130