JP2022538673A

JP2022538673A - アフリカ豚熱ワクチン

Info

Publication number: JP2022538673A
Application number: JP2021578242A
Authority: JP
Inventors: アヴナーフィンガー; アヴィズラチャ; オフェルコーエン; アナトズヴィ
Original assignee: Phibro Animal Health Corp
Current assignee: Phibro Animal Health Corp
Priority date: 2019-06-28
Filing date: 2020-06-26
Publication date: 2022-09-05
Also published as: AU2020304652A1; EP3990012A1; CA3145228A1; US20220105170A1; MX2021015465A; WO2020264312A1; BR112021026439A2; CN113454102A; KR20220031028A

Abstract

アフリカ豚熱ウイルス（ＡＳＦＶ）に対して免疫原性であると予測されるペプチド、及び該ペプチドを含むワクチン組成物が本明細書に開示されている。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、配列番号２～２２７３に記載のアミノ酸配列を含む１つ以上のペプチドを含むか、またはそれらからなる。他の実施形態では、該組成物は、１つ以上の該ペプチドを含む、ウイルスベクター、または宿主細胞、またはそれらの組み合わせを含む。他の実施形態では、該組成物は、１つ以上の該ペプチドを含む核酸分子を含む。開示される組成物は、担体、アジュバント、追加の治療薬、またはそれらの組み合わせなどであるがこれらに限定されない、１つ以上の追加の成分を含むことができる。該組成物を含む容器及びキットについて記載される。該組成物の使用は、動物に免疫応答を誘導するため、またはＡＳＦＶに対して動物を免疫化するために、動物へ投与することを含むことができる。投与は、筋肉内または鼻腔内投与など、本明細書に記載の様々な方法のうちの１つ以上を使用して達成することができる。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１９年６月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／８６８，４８３号、及び２０１９年１１月２７日に出願された同第６２／９４１，３８１号の先の出願日の優先権を主張するものである。仮出願第６２／８６８，４８３号及び同第６２／９４１，３８１号は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、アフリカ豚熱ウイルス（ＡＳＦＶ）に関連するペプチドもしくはペプチドの混合物を含む、または１つ以上のそのようなペプチドを含む１つ以上のベクターを含む組成物の実施形態、ならびにＡＳＦＶに対する免疫応答を誘発するため、及び／またはウイルス感染に関連する症状を和らげるもしくは阻害するために、そのような組成物（複数可）を投与するための方法の実施形態に関する。

共同研究契約の当事者
ＰｈｉｂｒｏＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈＨｏｌｄｉｎｇｓ，Ｉｎｃ．及びＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｓｒａｅｌＬｔｄ．は、本出願で開示及び特許請求される主題が作成された日以前に共同研究契約を締結しており、そのような主題は共同研究契約の範囲内で行われた活動の結果として作成された。

アフリカ豚熱ウイルス（ＡＳＦＶ）によって引き起こされるアフリカ豚熱（ＡＳＦ）は、感染率及び死亡率が高いこともあり、家畜ブタに影響を与える最も深刻なウイルス性疾患の１つである。ＡＳＦＶ感染は、通常、家畜ブタ類において死亡率が１００％に近い急性出血性疾患を引き起こす。ウイルスは、摂取、接触、またはＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ属のダニを介して伝染する可能性がある。
ＡＳＦＶは、１９２０年代にケニアで最初に確認され、アフリカで風土病的流行状態にあり、野生の豚種がウイルスのリザーバーとして機能している。１９５０年代に、ＡＳＦＶはスペイン、ポルトガル、イタリア、及びフランスを含むヨーロッパ全体に拡散したが、１９９０年代半ばまでには、イタリアのサルデーニャ島を除いて、これらの国々から根絶された。しかし、この疾患は２００７年にジョージア州に持ち込まれ、その後、東欧及びロシアに拡散した。このウイルスは世界中に拡散し続けており、現在３７の国または地域で報告されている。２０１８年には、ハンガリー、ブルガリア、ベルギー、及び中国を含む少なくとも４ヶ国が、初めてのＡＳＦＶのアウトブレイクを国際獣疫事務局（ＯＩＥ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｉｅ．ｉｎｔ／）に報告した。
中国での最初のＡＳＦの症例は、２０１８年８月３日に報告された。２０１９年１月１９日までに、中国各地の２３の省または地域で、少なくとも１００件のＡＳＦの症例が発生した。ＡＳＦは中国全土に拡散し続けており、世界のブタ類頭数の５０％以上を占める中国国内の家畜ブタ類頭数が深刻に脅かされている。ＡＳＦＶは、Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ科の唯一のメンバーであり、直鎖状の二本鎖ＤＮＡゲノムを持つ。ＡＳＦは現在、リアルタイムＰＣＲによるウイルス遺伝子の検出と部分ゲノム配列解析によって中国では診断される。現在、ＡＳＦを予防する効果的なワクチンはなく、したがって、この疾患は養豚産業及び世界の食料安全保障の両方に大きな脅威をもたらしている。

本開示の特定の実施形態は、ＡＳＦＶに関連する免疫原性ペプチド（複数可）、及び配列番号２～２２７３から選択される１つ以上のそのようなペプチドを含む組成物に関する。特定の実施形態では、ペプチドは、ＡＳＦＶ株，Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱによって発現される。組成物は、配列番号２～２２７３から選択される１つ以上のペプチドをコードする、核酸分子、宿主細胞、及び／またはベクター、例えばウイルスベクターもしくは細菌ベクターを含み得る。
本開示のいくつかの実施形態は、１つ以上の配列番号２～２２７３の免疫原性ペプチド、１つ以上の構築物（例えば、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０のアミノ酸配列）、１つ以上のドメイン（実施例３に記載のように、本明細書では「ホットスポット」とも呼ばれる；例えば、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のアミノ酸配列）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）に関する。組成物は、１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含むかまたはコードする１つ以上のベクター、及び／または細胞、及び／または核酸分子を含み得る。
開示されたペプチド、構築物、組成物、単離された核酸、ベクター、及び／または宿主細胞を使用するための方法の実施形態も提供される。例えば、１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、及び／または宿主細胞は、例えば、経口投与、筋肉内投与、局所投与、及び／または粘膜投与によって、動物、例えば有蹄類、さらにより具体的にはブタ類に投与され、免疫応答を刺激し、動物において免疫を誘導し、及び／またはウイルス感染、例えばＡＳＦに関連するウイルス感染に関連する少なくとも１つの症状を軽減もしくは改善し得る。そのような方法は、成体及び／または幼若動物を治療または予防的にワクチン接種するために使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバント、追加の治療薬、またはそれらの組み合わせを含み得る。追加の治療法には、ＡＳＦの病状を軽減または緩和する化合物もしくは組成物、または他の組成物、例えば、ブタ類に一般的な他の感染症、特にＡＳＦによって悪化する可能性のある感染症または病状に対するワクチンが含まれ得る。

特定の実施形態は、ペプチドの１つ以上のアミノ酸が別の１つ以上のアミノ酸で置換されている、またはペプチド中のアミノ酸が挿入もしくは欠失されている、またはそれらの組み合わせである配列番号２～２２７３の１つ以上のペプチドを、得られたペプチド（複数可）が、免疫応答を誘導する、及び／またはＡＳＦＶに関連する１つ以上の症状を改善することができるという条件で、そのペプチドを含む。ペプチドは、組換え技術を使用する化学合成及び／または細胞内合成を含む、任意の適切な技術によって生成することができる。いくつかの実施形態は、５～少なくとも５０アミノ酸長、例えば、６～４０、８～３０、１０～２０、または８～１１アミノ酸長の１つ以上のペプチドを含む。開示された免疫原性ペプチド（複数可）は、例えば、ペプチドコンフォメーションの安定化、酵素分解に対するペプチド安定性の改善、ｉｎｖｉｖｏでのペプチド安定性の改善、またはそれらの組み合わせの目的で修飾され得る。そのような修飾には、例えば、グリコシル化、ＰＥＧ化、脂質化、環化、アセチル化、アミド化、コンジュゲーション、Ｄ－アミノ酸取り込み、類似の修飾、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。
いくつかの開示された実施形態は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドのアミノ酸配列をコードする１つ以上の単離された核酸分子、または１つ以上の核酸分子のヌクレオチドの一部もしくはいずれかを他のヌクレオチドで置換した結果として生じるもの、または１つ以上のそのようなヌクレオチドの挿入もしくは欠失の結果として生じるものに関するが、得られたペプチドが免疫応答を誘導する、及び／またはＡＳＦに関連する１つ以上の症状を改善することができるという条件で、それらに関する。いくつかの実施形態は、配列番号２～２２７３の少なくとも１つのペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む組成物に関する。１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドをコードする核酸分子は、追加の構成要素、例えば、発現制御配列、選択関連配列、複数のクローニング部位、類似の配列、またはそれらの組み合わせなどをコードすることもできる。
本明細書に開示されるペプチドは、例えば、推定免疫原性ペプチドの高密度クラスターを同定することができる、及び／または予測されるＭＨＣ結合親和性に基づいて潜在的に免疫原性ペプチドを同定することができる予測アルゴリズムなどの様々なバイオインフォマティクスアプローチを使用して同定することができ、そして同定した。開示されたペプチドの免疫原性は、例えば、ＥＬＩＳＡ及び／またはＥＬＩＳｐｏｔアッセイを含む、ｉｎｖｉｔｒｏもしくはｉｎｖｉｖｏでの免疫応答を測定するための様々な方法を使用して、及び／またはワクチン接種後のチャレンジされたブタ類における症状発症を観察するための様々な方法を使用して、検証することができる。そのような方法は当業者に知られており、本発明は特定のアッセイを使用することに限定されない。

複数の種類及びバージョンのベクター、核酸分子、及び宿主細胞が、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の構築物（例えば、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０のアミノ酸配列）、１つ以上のドメイン（実施例３に記載のように、本明細書では「ホットスポット」とも呼ばれる；例えば、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のアミノ酸配列）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）をコードする、及び／または発現する。いくつかの実施形態では、１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする１つ以上の核酸分子は、動物に投与するための、ウイルスベクター、宿主細胞、及び／またはより大きな核酸構築物、例えばプラスミドに組み込まれる。ベクター、核酸分子、及び宿主細胞を産生する方法は、当技術分野の通常の当業者に知られており、本開示は、特定のベクター、核酸分子、もしくは宿主細胞の産生方法を使用すること、または特定のベクター、核酸分子、もしくは細胞型に限定されない。
動物、例えば有蹄動物を含む哺乳動物、特定の実施形態ではブタ類への投与のための、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長のＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上のベクター、及び／または宿主細胞、及び／または核酸分子を含む組成物もまた開示される。いくつかの実施形態では、１つ以上の組成物は、ＡＳＦＶに対する免疫応答を誘発するために、及び／またはＡＳＦＶに対して対象を免疫化するために使用され得る。組成物は、溶液または懸濁液、例えばＰＢＳ、水、有機溶媒、または懸濁助剤、または別の許容可能な担体中にあり得る。組成物は、動物に直接投与するために、乾燥形態、錠剤形態、または粉末形態、例えば凍結乾燥であり得る、あるいは、例えば、ＰＢＳ、水、有機溶媒、または別の許容可能な担体で再構成することができる。組成物はまた、ゲルまたはシロップ形態であり得る。
開示された免疫原性組成物は、他の薬剤を含み得る。いくつかの実施形態は、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする治療有効量のＤＮＡ構築物、または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする治療有効量のベクター、または１つ以上のペプチドを含む治療有効量の細胞と共に、１つ以上の追加成分を含む医薬組成物に関する。追加の成分には、１つ以上のアジュバント、担体、及び／または他の治療薬、例えば、ＡＳＦの症状、またはＡＳＦによって悪化する病状もしくは感染症を軽減もしくは緩和する他のワクチン及び／または化合物もしくは組成物などが含まれ得るが、これらに限定されない。

組成物は、１つ以上の化学的方法、組換え技術、及び／または酵素反応を使用して免疫原性ポリマーを形成するために重合によって組み合わされた配列番号２～２２７３の２つ以上のペプチドを含み得る。配列番号２～２２７３による免疫原性ポリマー中のペプチドは、直接隣接していてもよく、または他の配列によって分離されていてもよい。組成物は、１つ以上の化学的方法、組換え技術、及び／または酵素反応を使用して免疫原性ポリマーを形成するために重合によって組み合わされた２つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を含み得る。免疫原性ポリマー中のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質は、直接隣接していてもよく、または他の配列によって分離されていてもよい。
シナモン抽出物、シナモン抽出物の１つ以上の画分、及び／またはシナモン抽出物の１つ以上の沈殿物を含む、シナモン由来の組成物も提供される。特定の実施形態は、シナモン樹皮（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ種）の水性抽出物に関するが、他の極性溶媒も使用してもよい。有用な抽出組成物は、任意の適切なプロセスによって作製することができる。特定の実施形態は、水溶液の形成に関するものであり、次いでこれを遠心分離し、抗ウイルス活性画分を含む上清を収集することができる。溶液の沈殿物はまた、蒸発によって、または例えば、塩、例えば塩化物塩などの沈殿助剤を添加することによって、形成され得る。
特定の実施形態は、有効量のシナモン抽出物、シナモン抽出物の１つ以上の画分、及び／またはシナモン抽出物の１つ以上の沈殿物を、医薬品または栄養補助組成物に適した担体と共に含む、感染症の治療のための医薬組成物または栄養補助組成物に関する。このような組成物はまた、本明細書に開示される１つ以上の免疫原性ペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上のペプチド、ベクター、宿主細胞、及び／または核酸分子を含むことができる。このような組成物はまた、少なくとも１つの追加の治療または栄養補助成分などの他の成分を含むことができる。そのように形成された化合物及び／または組成物は、抗ウイルス活性を有し、経口、経鼻、非経口、皮下、及び／または筋肉内などの当業者によって理解される任意の適切な方法によって投与することができる。

ＡＳＦを有する可能性がある、またはＡＳＦを有するリスクがある対象、例えば、動物、特にブタ類を、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質と共に、及び／または本明細書に開示された１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上の核酸、ベクター、宿主細胞、または組成物、またはそれらの組み合わせと共に、治療する方法の実施形態もまた提供される。動物は、当業者に知られている１つ以上の方法によって、そのような組成物を投与され得る。例示的な投与方法には、局所、経口、皮下、経皮、髄腔内、筋肉内、静脈内、腹腔内、及び同様の投与経路、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、組成物は、単回用量または複数回用量（例えば、ブースター）として投与され得る。異なる投与は、１つ以上の異なる組成物、組成物の組み合わせ、またはそれらの量を含み得る。例えば、第２の投与は、投与された第１の組成物と同じ、または異なる組成物で行うことができる。

対象に投与される用量は、経時的に対象に有効な治療的反応を誘導するため、またはＡＳＦＶ感染を阻害するために十分でなければならない。有効な治療的反応には、１回以上の用量、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の用量、より典型的には２～４回の用量を、同じまたは異なる時期に必要とし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチド、ベクター、核酸分子、または宿主細胞、またはそれらの組み合わせを含む１つ以上の組成物を動物に投与して、ＡＳＦＶに対する免疫応答を生成し、及び／またはＡＳＦＶに対して動物を免疫化することができる。用量は、対象ごとに異なっていてもよく、または同じであってもよい。適切な用量は、日常的な実験を使用して当業者によって決定することができる。
また、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質、または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質、またはそれらの組み合わせを含む１つ以上の核酸、ベクター、宿主細胞、または組成物を動物に投与し、動物において免疫応答を誘発または刺激するための方法の実施形態も提供される。一実施形態では、本方法は、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を発現するウイルスベクターを含む組成物を使用して、動物をＡＳＦＶに対してワクチン接種または免疫化することを含む。他の実施形態では、動物は、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を発現するウイルスベクターを含む１つ以上の組成物を投与され、続いて、弱毒化生ＡＳＦＶを含むワクチンを投与される。免疫応答が誘発または刺激されたかどうかを決定する方法は、当業者に知られている。いくつかの実施形態では、免疫応答は、病気の軽減（症状の軽減または改善など）、ウイルス力価の低下、死亡率の低下、またはそれらの組み合わせが観察された場合に達成される。
特定の開示された実施形態は、中和されたウイルス組成物、特に、ウイルスがシナモン抽出物との接触によって中和される中和されたＡＦＳＶウイルスに関する。中和されたウイルス組成物は、対象にワクチン接種するために使用することができる。例えば、この方法は、シナモン抽出物で中和されたＡＦＳＶウイルス組成物を提供すること、及び該組成物を対象にワクチン接種することを含み得る。対象は、有蹄動物などの哺乳動物であり得、さらにより具体的にはブタ類であり得る。
また、１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質、または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上の核酸、ベクター、宿主細胞、または組成物、またはそれらの組み合わせを含む容器も提供される。容器は再利用可能または使い捨てであり得る。１つ以上のそのような容器を含むキットも提供される。キット内の１つ以上の容器は、１つ以上の追加の成分を含むことができる。いくつかの例では、キットはまた、動物への１つ以上の組成物、または１つ以上の追加の成分、またはそれらの組み合わせの投与を可能にする１つ以上のデバイス（複数可）を含む。
本発明の前述及び他の目的、特徴、及び利点は、添付の図を参照して進む以下の詳細な説明からより明らかになるであろう。

ＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＭＫ１２８９９５．１）の完全なゲノムを、ヨークシャー、ランドレース、及びデュロックのブタ類品種系統の既知のＳＬＡクラスＩ対立遺伝子に関連するＣＤ８＋エピトープについてスクリーニングした。候補ペプチドは、４つの基準に従って評価した：（１）ＳＬＡクラスＩ分子に対するペプチドの予測される結合親和性；（２）陽性応答物を濃縮する方法としての推定エピトープの高密度クラスター内の位置；（３）ＳＬＡ対立遺伝子のカバー率及び高頻度に存在する対立遺伝子の優先順位付け；（４）ソースタンパク質の性質（免疫原を優先する）。２１２，３９４の推定ペプチドのうち２，２７２をさらに評価するために選択した。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して、２，２７２個のペプチドをさらにスクリーニングした。Ｅｌｉｓｐｏｔの結果の提供－陽性プールの分離－２Ｓ、３Ｓ、５Ｓ、７Ｓ、１０Ｓ、１４Ｓ、６Ｈ、７Ｈと表記される８頭のブタ類のリンパ球を使用して実施されたＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用してスクリーニングされたペプチドのプール（プールあたり約８～９ペプチド）に関する。合計２３８の「陽性」プール（スポットの数がしきい値に達した、または超えたプール）から３３のプールが選択された。３３の陽性プールには２６７個のペプチドが含まれ、これにフルスクリーンで陽性と判定された９個の個別のペプチドを加えて（合計２７６個のペプチド）、さらに試験を行った。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して個別に評価されたプールスクリーン（図２）で同定された２７６個のペプチドに関するＥｌｉｓｐｏｔの結果（陽性プール分離）を提供する。コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を陽性対照として使用し、陰性対照（培地のみ）を許容しきい値及び厳密しきい値を算出するために使用した（「培地の平均」は培地のみのウェル内のスポットの平均数を示し、ブタ類のプレートごとに個別に計算され、「ＳＴＤＥＶ＿Ｐ」は、母集団全体に基づく標準偏差を示す）。試験した２７６個のペプチドのうち、２０１個は、これらのＥＬＩＳｐｏｔアッセイで計算された許容しきい値（付録ＩＶ）に達した、または超えており、２０１個のペプチドのうち１２５は、厳密しきい値（付録ＶＩＩＩ）に達した、または超えた。厳密しきい値に達した、または超えた１２５個のペプチドのうち、少なくとも２０のスポットがカウントされた７７個のペプチドが特定された（付録Ｖ）。図３に記載の７７個のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質内のそれらの位置にマッピングされた（付録Ｖ－ＶＩ）。７７個のペプチドのうち４４個が、７つのＡＳＦＶタンパク質内にクラスター化された（付録ＶＩＩ）。配列番号６１９、６２１、６３３、６３６、６３９、６４０、６４５、６５１、６５２、６５３、及び６６２のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質Ａ２３８Ｌ、ＩκＢ様タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１１．１）にマッピングされた。配列番号４９６、４９７、５２７、５２９、５４１、及び５４４のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質Ａ２２４Ｌ（ＩＡＰ様タンパク質ｐ２７；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００４．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。配列番号３７７、４００、４０４、４３５、４４７、４４９、４５５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、及び４６７のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質ＭＧＦ＿５０５－７Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００１．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。配列番号５５３、５５４、５６１、５７８、５８４、及び５８９のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質ＭＧＦ＿３６０－１５Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１０．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。配列番号１２４８、１２５３、及び１２８０のペプチドは、ＡＳＦＶジンクフィンガータンパク質Ｂ３８５Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０５２．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。配列番号４６８、４６９、及び４７８のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質ＭＧＦ＿５０５－９Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００２．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。配列番号６７及び６９のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質ＭＧＦ＿１１０－３Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３３９６３．１）にマッピングされた（付録ＶＩＩ）。図１１～３４は、２２℃（図１１～２１）または３７℃（図２２～３４）のいずれかでＥ．ｃｏｌｉにおいて発現した５４の構築物のそれぞれについて、クマシーブルー染色ゲル及びウエスタンブロッティングの結果を、各構築物の予想される分子量及び特定の１つ以上のタグと共に示す。１～５４と標識された構築物の配列は、配列番号２３１０～２３３０に提供されている。各構築物には検出目的でＨｉｓタグが含まれていたが、特定の構築物には、ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、またはＭＢＰなどの少なくとも１つの追加の融合タンパク質も含まれていた。図１１、１４、１７、１８、２１、２２、２５、２７、３０、及び３３において、表の３列目に「Ｈｉｓ」のみが示されている場合、構築物にはＨｉｓタグが含まれているが、融合タンパク質は含まない（融合タンパク質を含むものとして示されている構築物は、Ｈｉｓタグも含む）。タンパク質を収集し、次いで、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用して分離した。クマシーブルー染色ゲル及びウエスタンブロットに示されているように、「Ｍ」はバンド分子量を表すマーカーレーンを示し、「Ｓ」は細胞培養上清から収集されたタンパク質を表し、「Ｐ」は細胞ペレットから収集されたタンパク質を表す。［図１１］列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図１１に列挙された構築物（構築物１～１４）の発現分析結果は、図１２のクマシーブルー染色ゲル及び図１３のウエスタンブロットに示されている。２２℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物１～１４の１つを発現した（図１１）。図１２のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物１～１４（図１１）の相対的発現レベルが示されている。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図１４に列挙された構築物（構築物１５～２８）の発現分析結果は、図１５のクマシーブルー染色ゲル及び図１６のウエスタンブロットに示されている。２２℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物１５～２８の１つを発現した（図１４）。図１５のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物１５～２８（図１４）の相対的発現レベルが示されている。クマシーブルー染色ゲル及び対応するウエスタンブロットの表及び画像を示す。表（下）は、列１の各構築物（構築物２９～３２）に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する。クマシーブルー染色ゲル（左）は、２２℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉの細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示す。ウエスタンブロット（右）は、抗Ｈｉｓ抗体を用いて検出された構築物２９～３２の相対的発現レベルを示す。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図１８に列挙された構築物（構築物３３～４７）の発現分析結果は、図１９のクマシーブルー染色ゲル及び図２０のウエスタンブロットに示されている。２２℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物３３～４７の１つを発現した（図１８）。図１９のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物３３～４７（図１８）の相対的発現レベルが示されている。クマシーブルー染色ゲル及び対応するウエスタンブロットの表及び画像を示す。表（下）は、列１の各構築物（構築物４８～５４）に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する。クマシーブルー染色ゲル（左）は、２２℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉの細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示す。ウエスタンブロット（右）は、抗Ｈｉｓ抗体を用いて検出された構築物４８～５４の相対的発現レベルを示す。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図２２に列挙された構築物（構築物５～１４）の発現分析結果は、図２３のクマシーブルー染色ゲル及び図２４のウエスタンブロットに示されている。３７℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物５～１４の１つを発現した（図２２）。図２３のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物５～１４（図２２）の相対的発現レベルが示されている。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図２５に列挙された構築物（構築物１５～２４）の発現分析結果は、図２６のウエスタンブロットに示されている。ウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物１５～２４（図２５）の相対的発現レベルが示されている。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図２７に列挙された構築物（構築物２５～３７）の発現分析結果は、図２８のクマシーブルー染色ゲル及び図２９のウエスタンブロットに示されている。３７℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物２５～３７の１つを発現した（図２７）。図２８のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物２５～３７（図２７）の相対的発現レベルが示されている。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図３０に列挙された構築物（構築物１～４、３８～３９、及び４１～４８）の発現分析結果は、図３１のクマシーブルー染色ゲル及び図３２のウエスタンブロットに示されている。３７℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示すクマシーブルー染色ゲルの画像を提供する。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物１～４、３８～３９、及び４１～４８の１つを発現した（図３０）。図３１のクマシーブルー染色ゲルに対応するウエスタンブロットの画像を示す。抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物１～４、３８～３９、及び４１～４８（図３０）の相対的発現レベルが示されている。列１の各構築物に関連する予想分子量（ｋＤａ単位）（列２）と、タグ及び／または融合タンパク質（列３）を提供する表を示す。図３０に列挙された構築物（構築物４９～５４）の発現分析結果は、図３４のクマシーブルー染色ゲル及びウエスタンブロットに示されている。クマシーブルー染色ゲル及び対応するウエスタンブロットの画像を示す。クマシーブルー染色ゲル（左）は、３７℃で増殖させたＥ．ｃｏｌｉ培養物の細胞ペレット（Ｐ）または上清（Ｓ）から収集されたタンパク質を示す。Ｅ．ｃｏｌｉ培養物は、それぞれ構築物４９～５４の１つを発現した（図３３）。ウエスタンブロット（右）は、抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出された、構築物４９～５４の相対的発現レベルを示す。

配列表
添付の配列表に列挙されている核酸配列とアミノ酸配列は、米国特許法施行規則第１．８２２条で規定されている、アミノ酸については標準的な３文字コードを用い、ヌクレオチド塩基については標準文字略号を使用して示される。各核酸配列の一本鎖のみが示されているが、示されている鎖を参照することによって、相補鎖が含まれるものと理解される。配列表は、２０２０年１月２３日に０．６８ＭＢで作成されたＡＳＣＩＩテキストファイルとして送信され、参照により本明細書に組み込まれる。

配列番号１は、ＡＳＦＶ株Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱのゲノム核酸配列である。
配列番号２～２２７３は、ＡＳＦＶに関連するペプチド、特にＡＳＦＶに対する免疫応答を刺激する免疫原性ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号２２７４～２２９１は、付録ＶＩの１８個のペプチドをコードすることができる例示的なＤＮＡ配列である。配列番号２２７４の核酸は、配列番号６７のペプチドをコードすることができる。配列番号２２７５の核酸は、配列番号６９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２７６の核酸は、配列番号７０のペプチドをコードすることができる。配列番号２２７７の核酸は、配列番号２７９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２７８の核酸は、配列番号４３５のペプチドをコードすることができる。配列番号２２７９の核酸は、配列番号４６１のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８０の核酸は、配列番号４６９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８１の核酸は、配列番号４７８のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８２の核酸は、配列番号４８６のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８３の核酸は、配列番号５４７のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８４の核酸は、配列番号５４８のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８５の核酸は、配列番号５４９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８６の核酸は、配列番号５６１のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８７の核酸は、配列番号５８９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８８の核酸は、配列番号６３９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２８９の核酸は、配列番号６５２のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９０の核酸は、配列番号６５３のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９１の核酸は、配列番号１２５３のペプチドをコードすることができる。各例示的なＤＮＡ配列において、文字「Ｒ」はアデニンまたはグアニンを表し、「Ｋ」はグアニンまたはチミンを表し、「Ｈ」はアデニン、シトシン、またはチミンを表し、「Ｄ」はアデニン、グアニン、またはチミンを表し、「Ｙ」はシトシンまたはチミンを表し、「Ｓ」はシトシンまたはグアニンを表し、Ｂはシトシン、グアニン、またはチミンを表し、「Ｎ」はアデニン、グアニン、シトシン、またはチミンを表し、「Ｍ」はアデニンまたはシトシンを表し、「Ｗ」はアデニンまたはチミンを表し、「Ｖ」はアデニン、シトシン、またはグアニンを表す。

配列番号２２９２～２３０９は、付録ＶＩの１８個のペプチドをコードすることができる例示的なＲＮＡ配列である。配列番号２２９２の核酸は、配列番号６７のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９３の核酸は、配列番号６９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９４の核酸は、配列番号７０のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９５の核酸は、配列番号２７９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９６の核酸は、配列番号４３５のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９７の核酸は、配列番号４６１のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９８の核酸は、配列番号４６９のペプチドをコードすることができる。配列番号２２９９の核酸は、配列番号４７８のペプチドをコードすることができる。配列番号２３００の核酸は、配列番号４８６のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０１の核酸は、配列番号５４７のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０２の核酸は、配列番号５４８のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０３の核酸は、配列番号５４９のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０４の核酸は、配列番号５６１のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０５の核酸は、配列番号５８９のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０６の核酸は、配列番号６３９のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０７の核酸は、配列番号６５２のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０８の核酸は、配列番号６５３のペプチドをコードすることができる。配列番号２３０９の核酸は、配列番号１２５３のペプチドをコードすることができる。各例示的なＤＮＡ配列において、文字「Ｒ」はアデニンまたはグアニンを表し、「Ｋ」はグアニンまたはウラシルを表し、「Ｈ」はアデニン、シトシン、またはウラシルに対応し、「Ｄ」はアデニン、グアニン、またはウラシルを表し、「Ｙ」はシトシンまたはウラシルを表し、「Ｓ」はシトシンまたはグアニンを表し、Ｂはシトシン、グアニン、またはウラシルを表し、「Ｎ」はアデニン、グアニン、シトシン、またはウラシルを表し、「Ｍ」はアデニンまたはシトシンを表し、「Ｗ」はアデニンまたはウラシルを表し、「Ｖ」はアデニン、シトシン、またはグアニンを表す。
配列番号２３１０～２３３０は、例えば、１つ以上のプラスミドベクター（ｐＨＬＴ、ｐＳｕｍｏ、及び／またはｐＭＢＰなど）またはウイルスベクター（仮性狂犬病ウイルスベクターなど）または類似のものを使用して宿主細胞において発現することができる構築物である。したがって、配列番号２３１０～２３３０の各構築物は、ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、またはＭＢＰなどのＮ末端融合タンパク質をさらに含み得る。配列番号２３１０～２３３０の１つ以上の構築物に付着させることができる例示的な融合タンパク質配列は、配列番号２３３６～２３３８に提供される。さらに、各構築物は、構築物のＮ末端（構築物が融合タンパク質を含まない場合）または構築物に付着した融合タンパク質のＮ末端のいずれかに接続されたＮ末端ＨｉｓタグなどのＨｉｓタグを含み得る。構築物は、Ｃ末端リンカー（ＧＳＳＧ）及びＨｉＢｉＴタグ（ＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ）をさらに含むこともできる。各構築物について、ドメイン（ＡＳＦＶタンパク質内のペプチドクラスター化の領域、実施例３に記載されるように「ホットスポット」とも呼ばれ、配列番号２３３１～２３３５として個別に提供される）、完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（配列番号２３２３～２３２９に提供される）、及び／または配列番号２～２２７３のペプチドは、それらが構築物配列に現れる順序で提供される。

配列番号２３１０は、ドメイン１０．１及び１．１を含み、構築物１及び２に対応する。
配列番号２３１１は、ドメイン３．１及び１１．１を含み、構築物３及び４に対応する。
配列番号２３１２は、ドメイン１０．１、３．１ｄ、１１．１、及び１．１を含み、構築物５及び６に対応する。
配列番号１２１３は、ドメイン１０．１、３．１ｄ、１．１、及び１１．１を含み、構築物７及び８に対応する。
配列番号２３１４は、ドメイン１０．１、配列番号７０、４７８、４６９、及び４８６のペプチド、ドメイン３．１ｄ、配列番号５４７、５４８、５４９、１２５３、及び２７９のペプチド、ならびにドメイン１．１、１１．１を含み、構築物９、１０、及び５５に対応する。
配列番号２３１５は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、６５２、４８６、１２５３、７０、４６９、及び５４９のペプチドを含み、構築物１１～１４に対応する。
配列番号２３１６は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、６５２、４８６、１２５３、７０、４６９、及び５４９のペプチドを、個々のペプチド配列を分離するスペーサー（ＧＰＧＰＧ）と共に含み、構築物１５～１８に対応する。
配列番号２３１７は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、６５２、４８６、１２５３、７０、４６９、及び５４９のペプチドを、個々のペプチド配列を分離するスペーサー（ＡＡＹ）と共に含み、構築物１９～２２に対応する。
配列番号２３１８は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、４８６、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、１２５３、７０、６５２、４６９、及び５４９のペプチドを含み、構築物２３～２６に対応する。
配列番号２３１９は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、４８６、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、１２５３、７０、６５２、４６９、及び５４９のペプチドを、個々のペプチド配列を分離するスペーサー（ＧＰＧＰＧ）と共に含み、構築物２７～３０に対応する。

配列番号２３２０は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、４８６、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、１２５３、７０、６５２、４６９、及び５４９のペプチドを、個々のペプチド配列を分離するスペーサー（ＧＰＧＰＧ）と共に含み、構築物３１～３４に対応する。
配列番号２３２１は、配列番号４７８、２７９、６５２、１２５３、４６９、３６３、４６２、３７７、４００、１８７、４０４、４６１、４６３、４９６、５８９、７０、４８６、３２、２７８、１２８、４３５、６５３、４５６、４９２、５６１、５４８、４６８、６７、４４７、５４９、４４９、６９、６３９、５４７、４５５、４６７、１０１、及び４５７のペプチドを含み、構築物３５～３７に対応する。
配列番号２３２２は、配列番号４７８、２７９、６５２、１２５３、４６９、３６３、４６２、３７７、４００、１８７、４０４、４６１、４６３、４９６、５８９、７０、４８６、３２、２７８、１２８、４３５、６５３、４５６、４９２、５６１、５４８、４６８、６７、４４７、５４９、４４９、６９、６３９、５４７、４５５、４６７、１０１、４５７、６４０、６４５、６７０、５５３、７１１、６６２、６２１、６３３、６５１、５４１、５８４、５２９、４９７、５４４、５２７、６３６、５７８、６１９、５５４、１１５６、１２４８、１２８０、１２８８、１４４０、２０２１、２２０４、１５６１、１４３７、１１０６、１５８４、１５５６、１５６０、７４３、１５３１、２１１２、及び１０４９のペプチドを、ペプチド１０１及び４５７を分離するスペーサー（ＧＰＧＰＧ）と、ペプチド６１９及び５５４を分離するスペーサー（ＡＡＹ）と共に含み、構築物３８～４０に対応する。
配列番号２３２３は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３３９６３．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４１及び４８に対応する。
配列番号２３２４は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００１．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４２及び４９に対応する。
配列番号２３２５は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００２．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４３及び５０に対応する。
配列番号２３２６は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００４．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４４及び５１に対応する。
配列番号２３２７は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１０．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４５及び５２に対応する。
配列番号２３２８は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１１．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４６及び５３に対応する。
配列番号２３２９は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０５２．１のＡＳＦＶタンパク質を含み、構築物４７及び５４に対応する。

配列番号２３３０は、配列番号６３９、５４８、６５３、５８９、６７、６９、５６１、４６１、２７９、５４７、４３５、４７８、６５２、４８６、１２５３、７０、４６９、及び５４９のペプチドを、ペプチド６５３及び５８９、６５２及び４８６、ならびに１２５３及び７０間のＧＰＧＰＧスペーサー配列と、６９及び５６、２７９及び５４７ペプチド配列間のＡＡＹスペーサー配列と共に含む構築物５６である。
配列番号２３３１はドメイン１．１である。
配列番号２３３２はドメイン３．１である。
配列番号２３３３はドメイン３．１ｄである。
配列番号２３３４はドメイン１０．０である。
配列番号２３３５はドメイン１１．１である。
配列番号２３３６は、例示的なＳｕｍｏ融合タンパク質である。
配列番号２３３７は、例示的なＭＢＰ融合タンパク質である。
配列番号２３３８はＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＥ２ｐのリポイルドメインであり、ＨＬＴ融合タンパク質の全部または一部に含まれる。
配列番号２３３９は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３３９６３．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号２３４０は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００１．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４１は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００２．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４２は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４００４．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４３は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１０．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４４は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０１１．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４５は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹＷ３４０５２．１のＡＳＦＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列である。

ワクチン接種によるブタ類の防御免疫の誘導に関連するＡＳＦＶ細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープの同定は、Ｔ細胞集団の不均一性と、ブタ白血球抗原（ＳＬＡ）クラスＩ抗原結合特異性の違いにより部分的に困難である。しかし、ブタ類におけるＡＳＦの蔓延及び影響を軽減するために、有効なワクチンが必要とされている。
ＡＳＦＶゲノムには、保存された中央領域（ＣＣＲ）と、左右両方の可変領域が含まれ、それぞれに異なる数の５つの多重遺伝子ファミリー（ＭＧＦ）遺伝子が含まれる。ＣＣＲ遺伝子産物は、ウイルスの複製とアセンブリ、及び免疫回避と宿主細胞機能の調節に関与する。ＡＳＦＶゲノム間のばらつきは、主にＭＧＦメンバーの喪失または獲得に起因する。
ブタ類は、毒性の低いＡＳＦＶ分離株に感染しても生き延びることができ、慢性的に感染する可能性がある。生き残った動物は、該ウイルスの関連する分離株による攻撃に耐性があり、家畜ブタ類がＡＳＦＶに対する防御免疫を発達させることができることを示している。無症候性の非毒性ＡＳＦＶ感染中、ブタ類ではナチュラルキラー細胞の活性が増加し、この細胞型がＡＳＦＶ免疫に関与していることを示唆している。さらに、ＡＳＦＶ免疫ブタ類のＣＤ８＋リンパ球の枯渇は、関連する毒性ウイルスに対する防御免疫を無効にする。このことは、ＡＳＦＶ特異的抗体の存在だけでは、ＡＳＦＶ感染から防御するには不十分であり、ＣＤ８＋リンパ球サブセットがＡＳＦＶ防御免疫において重要な役割を果たしていることを示唆している。

本開示は、免疫原性ペプチド、及びそのようなペプチドを含む組成物に関する。開示されたペプチドは、ＡＳＦＶに対する免疫応答を誘発または刺激する、免疫原性ペプチド組成物、及び／または核酸ベースワクチン、ウイルスもしくは細菌ベクターベースワクチン、または宿主細胞ベースワクチン、及び／またはそれらの組み合わせを形成するために使用される。そのような免疫原性組成物は、追加の治療薬、例えばＡＳＦの症状を軽減もしくは緩和することを目的とした化合物もしくは組成物、または他の組成物、例えばブタ類に一般的な他の感染症に対するワクチンと組み合わせて動物に投与することができる。
Ｉ．略語
ＡＳＦアフリカ豚熱
ＡＳＦＶアフリカ豚熱ウイルス
ＣＣＩＤ⁵⁰ 細胞培養感染用量５０％
ＣＣＲ保護された中央地域
ＣＴＬ細胞傷害性Ｔリンパ球
ｄｐｖ（最初の）ワクチン接種後の日数
ＥＬＩＳＡ酵素結合免疫吸着アッセイ
ＥＬＩＳｐｏｔ酵素結合免疫吸着スポットアッセイ
ＩＮＦ－γ インターフェロンガンマ
ＭＤＡ母体由来の移行抗体
ＭＧＦマルチ遺伝子ファミリー
ＭＨＣ主要組織適合遺伝子複合体
ＭＳ質量分析
ＰＢＭＣ末梢血マクロファージ細胞
ＰＣＲポリメラーゼ連鎖反応
ｑＰＣＲ定量的ポリメラーゼ連鎖反応
ＳＬＡブタ白血球抗原
ＩＩ．用語及び定義
特に明記しない限り、専門用語は、当業者によって理解されるであろう従来の使用法に従って使用される。分子生物学の一般的な用語の定義は、Ｌｅｗｉｎ’ｓＧｅｎｅｓＸ，ｅｄ．Ｋｒｅｂｓｅｔａｌ，ＪｏｎｅｓａｎｄＢａｒｔｌｅｔｔＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２００９（ＩＳＢＮ０７６３７６６３２１）；Ｋｅｎｄｒｅｗｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ＴｈｅＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９４（ＩＳＢＮ０６３２０２１８２９）；ＲｏｂｅｒｔＡ．Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＡＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９５（ＩＳＢＮ０４７１１８６３４１）；及びＧｅｏｒｇｅＰ．Ｒｅｄｅｉ，ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉｃＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，ＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｎｄＩｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００８（ＩＳＢＮ：１４０２０６７５３４）に見出され得る。

以下の用語及び略語の説明は、本開示をよりよく説明し、当業者が本開示を実施するように導くために提供されている。本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」を意味し、単数形「ａ」または「ａｎ」または「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、１つまたは複数を指す。「または」という用語は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、述べられた代替要素の単一の要素または２つ以上の要素の組み合わせを指す。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。本明細書に記載のＧｅｎＢａｎｋ受託番号に関連する全ての配列は、本出願の優先日現在、参照によりその全体が組み込まれている。矛盾する場合には、用語の説明を含む本明細書が優先される。
本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料を使用して本開示を実施または試験することができるが、適切な方法及び材料を以下に説明する。材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定的であることは意図されない。本開示の他の特徴は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から当業者に明らかになるであろう。
特に指示されない限り、明細書または特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量、パーセンテージ、温度、時間などを表す全ての数値は、「約」という用語によって変更されるものとして理解されるべきである。したがって、暗示的にまたは明示的に特に指示されない限り、記載された数値パラメータは、求められる所望の特性及び／または標準的な試験条件／方法の下での検出限界に依存し得る近似値である。実施形態を議論された先行技術から直接的かつ明示的に区別する場合、「約」という単語が引用されない限り、実施形態の番号は概算ではない。

開示された配列表中のアミノ酸残基は、保存的に置換され得るか、または同様の特性及び特徴を有する別の残基によって置換され得る。通常、保存的置換は、得られるペプチドの活性にほとんどまたはまったく影響を与えない。１つの非限定的な例では、組成物の１つのペプチド中のチロシン残基は、トリプトファン残基で置換されている。ペプチドは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む化学置換によって生成することができ、または、例えば、ＰＣＲまたは部位特異的変異誘発などの標準手順を使用してそのペプチドをコードする核酸配列を操作することによって生成することができる。以下の表１は、本開示の範囲内にある明示的に開示されたペプチド配列の保存的アミノ酸置換を提供する。

本開示の様々な実施形態の検討を容易にするために、特定の用語の以下の説明が提供される：
アジュバント：本明細書で使用される「アジュバント」という用語は、例えば、動物の免疫系、例えば哺乳動物の免疫系による抗原（例えば、ＡＳＦＶ抗原）に対する免疫応答を増強することによって、開示された免疫原性組成物の有効性を増強する任意の物質またはビヒクルを意味する。アジュバントを使用して、本明細書に開示される組成物（複数可）を、例えばＡＳＦＶワクチン組成物の一部として、形成することができる。本明細書に開示される組成物のいくつかの実施形態に含まれるアジュバントには、アルミニウム塩、例えばリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム；様々な種類の油、例えば植物油、鉱油、またはシナモン油（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第２００６／０２７５５１５号「Ａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍａｎａｔｕｒａｌｃｉｎｎａｍｏｎｅｘｔｒａｃｔ」を参照のこと）；水中油型アジュバント、例えばＥｍｕｌｓｉｇｅｎ（登録商標）、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ（登録商標）－Ｄ、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ（登録商標）－ＤＬ９０、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ（登録商標）－Ｐ、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ（登録商標）－ＢＣＬ、Ｅｍｕｌｓｉｍｕｎｅ（登録商標）、またはＴＳ６；Ａｍｐｈｉｇｅｎ（登録商標）；プルロニックポリオール；サポニン系アジュバント、例えばサポニン、ＱｕｉｌＡ、及びＱＳ－２１；非イオン性ブロックコポリマー；マイクロ流動化エマルジョン、例えばＭＦ５９；油中水型アジュバント、例えばＩＳＡ７２０、ＩＳＡ７１ＶＧ、ＩＳＡ３５、ＩＳＡ５１、またはＩＳＡ５０Ｖ；水中油中水型アジュバント、例えばＩＳＡ２０６またはＩＳＡ２０１（例えばＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ２０１ＶＧ）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ポリラクチドグリコリド（ＰＬＧＡ）；Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド系アジュバント、例えばＲ８４８（レシキモド）；カルボマー系アジュバント、例えば９３４Ｐまたは９７１Ｐを含むもの；ポリマー系アジュバント、例えばＣａｒｂｉｇｅｎ（商標）またはＰｏｌｙｇｅｎ（商標）；免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）；リポソーム；多糖類；誘導体化された多糖類；オリゴヌクレオチド；サイトカイン；細菌誘導体、例えばトレハロース－６，６－ジベヘネート（ＴＤＢ）または環状ジグアニル酸一リン酸（ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ）；ウイルス誘導体、例えばポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））；またはそれらの組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。
「粘膜アジュバント化された」または「粘膜アジュバント」は、粘膜と相互作用することができ、免疫応答を刺激し得るアジュバントまたは他の化合物、例えば、ポリマーを指す。粘膜アジュバントに関する追加情報は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０，２７９，０３１号によって提供される。粘膜には、視（眼）膜、口腔膜、鼻咽頭膜、肛門膜、または膣膜が含まれる。刺激され得る免疫応答には、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。そのようなアジュバントを含む組成物は、動物の粘膜に適用され得る。粘膜アジュバントは、粘膜に（一般に非共有結合的に）付着し得るという点で、「粘膜付着性」である可能性がある。粘膜付着性を有する特定のアジュバントには、Ｃａｒｂｏｍｅｒ及びＣａｒｂｏｐｏｌなどのポリアクリル酸を含むものなどのポリマーを含むアジュバント、または水中油型アジュバントが含まれるが、これらに限定されない。さらに、ナノ粒子を含むアジュバントを鼻腔内投与に使用することができる。当業者は、粘膜付着性アジュバントが上記のアジュバントのいずれか１つまたは組み合わせを含み得ることを理解している。

投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）、投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）、または投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）：本明細書で使用する場合、組成物（例えば、免疫原性組成物）を動物に投与することは、組成物を動物に適用、与える、または接触させることを意味する。投与は、例えば、局所、経口、皮下、経皮、髄腔内、筋肉内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、及び同様の経路、またはそれらの組み合わせなどの様々な経路によって達成することができる。
本明細書で使用される場合、組成物を粘膜に投与することは、例えば、噴霧及び／または滴下などにより、組成物を動物の口、鼻腔、または眼に直接配置することによって、組成物を動物に直接投与することを含む。組成物を粘膜的に投与することはまた、動物が摂取するための組成物を提供するなど、動物が組成物をそれ自体に投与するように組成物を提供することを含む。組成物を提供する例示的な方法には、組成物を動物に噴霧すること、及び／または組成物を皮膚に局所的に適用すること、または動物が食べる形態で組成物を提供することが含まれるが、これらに限定されない。当業者は、噴霧液滴がブタ類の口、鼻腔、及び／または眼に直接入る可能性があるため、噴霧も直接投与を容易にし得ることを理解するであろう。組成物を動物に投与する別の例示的な方法は、例えば、組成物の液体製剤の注射によるなどの筋肉内投与によるものである。
開示された組成物は、例えば、皮内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、または静脈内経路、またはそれらの組み合わせなどによる非経口投与用に処方され得る。組成物の非経口製剤の例には、注射できる懸濁液、注射できる溶液、エマルジョン、及び注射用の許容可能なビヒクルに溶解または懸濁できる乾燥製品が含まれるが、これらに限定されない。さらに、組成物の徐放性非経口製剤は、調製もしくは投与され得るか、またはその両方である。そのような投与に適した材料には、アルコールまたはアルコールの混合物（ｍｉｘｔｕｒｅｏｒａｌｃｏｈｏｌｓ）、例えば、Ｃ₁－Ｃ₁₀アルコール、例えば、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、及び／またはデカノール；ポリオール、例えば、ポリエチレングリコール；滅菌水；グルコース溶液；生理食塩水；水性ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、デキストロース、デキストロース液、塩化ナトリウム液、リンゲル液、またはラクトリンゲル液、またはそれらの組み合わせなどであるが、これらに限定されない；非水性ビヒクル、例えばオレイン酸エチル、ピーナッツ油、コーン油、綿実油、ゴマ油、またはミリスチン酸イソプロピル、またはそれらの組み合わせなどであるが、これらに限定されない；レシピエントの血液内で製剤を等張性にする静菌薬、緩衝剤、抗酸化剤、または溶質、またはそれらの組み合わせを含むことができる水性及び非水性の等張性滅菌注射液；ならびに無菌であり得、可溶化剤、安定剤、増粘剤、懸濁剤、及び防腐剤、またはそれらの組み合わせを含むことができる非水性及び水性懸濁液が含まれる。組成物の製剤は、ボトル、アンプル、シリンジ、チューブ、カプセル、及びバイアルなどの単位用量または複数回用量の容器で提供することができる。

アフリカ豚熱（ＡＳＦ）：「アフリカ豚熱」はＡＳＦＶによって引き起こされ、通常は出血熱として現れる。ＡＳＦは、世界中の家畜ブタ類及び野生ブタ類の両方に影響を及ぼす伝染性が高く死に至る病であり、家畜ブタ類の死亡率は１００％に近い。
アフリカ豚熱ウイルス（ＡＳＦＶ）：「アフリカ豚熱ウイルス」は、ブタ類においてＡＳＦを引き起こすウイルスである。ウイルスは、摂取、接触、またはＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ属のダニを介して伝染する可能性がある。ＡＳＦＶは、Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ科の唯一のメンバーであり、直鎖状の二本鎖ＤＮＡゲノムを持つ。特定の実施形態では、ＡＳＦＶゲノムは、１７０～１９３ｋｂｐであり、１５１～１６７個の遺伝子をコードする。ＡＳＦＶゲノムには、約１２５ｋｂｐの保存された中央領域（ＣＣＲ）と、左右両方の可変領域が含まれ、それぞれに異なる数の５つの多重遺伝子ファミリー（ＭＧＦ）遺伝子が含まれる。ＣＣＲ遺伝子産物は、ウイルスの複製とアセンブリ、及び免疫回避と宿主細胞機能の調節に関与する。ＡＳＦＶゲノム間のばらつきは、主にＭＧＦメンバーの喪失または獲得に起因する。
ＡＳＦＶの複数の株が同定されており、ＡＳＦＶの核酸配列は公開されている。例えば、Ｋｅｎ０６．Ｂｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＭ１１１２９５．１；本出願の優先日現在ＧｅｎＢａｎｋに存在するものとして参照により組み込まれる）として同定されたＡＳＦＶ株は、例示的なＡＳＦＶゲノム配列を提供する。

動物：「動物」とは、生きている多細胞脊椎生物、例えば哺乳動物及び鳥類を含むカテゴリーを指す。哺乳動物という用語には、ヒト、及び有蹄動物、特にブタ類などの非ヒト哺乳動物の両方が含まれる。「ブタ類」（本明細書では「豚／ブタ」とも呼ばれる）には、Ｓｕｓ属のメンバー、例えばＳｕｓｓｃｒｏｆａ、例えばＳｕｓｓｃｒｏｆａｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ、例えばヨークシャー、デュロック、及び／またはランドレースのブタ類品種系統が含まれる。
抗体：「抗体」は、Ｂリンパ球によって産生される免疫グロブリン分子である。抗体は、特定の抗原（免疫原）によってヒトまたは他の動物において誘発される。抗体は、何らかの実証可能な方法で抗原と特異的に反応することを特徴とする。「抗体応答を誘発する」とは、抗体の産生を誘導する抗原または他の分子の能力を指す。
抗原：「抗原」とは、動物に注射または吸収される組成物を含む、動物における抗体の産生またはＴ細胞応答を刺激することができる化合物、組成物、または物質を指す。
本技術での使用に適したウイルス抗原には、不活化（または死滅）ウイルス、及び／またはウイルスから単離、精製、または誘導され得るウイルスペプチド（複数可）またはタンパク質（複数可）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質などの基質上で増殖するウイルスに由来することができるか、またはそれらは組換えで由来もしくは発現され得るか、またはそれらは合成され得る。典型的には、ウイルス抗原は、ライフサイクルの少なくとも１つの段階の間にウイルスの表面に露出するエピトープを含むが、これらに限定されない。ウイルス抗原は、複数の血清型または分離株間で保存され得る。ウイルス抗原には、本明細書に開示される１つ以上のウイルスに由来する抗原が含まれる。

弱毒化（ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ）、弱毒化（ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ）：「弱毒化」ウイルスは、病気を引き起こす可能性がある弱毒化されていない形態のウイルスと比較して弱い、及び／または毒性が低いウイルスである。弱毒化ウイルスは、免疫応答及び／または免疫を刺激し得るが、病気を引き起こすことはできない。培養物及び／またはレシピエントにおける弱毒化ウイルスの複製は、弱毒化ウイルスが由来する株（複数可）の複製と同じであるか、類似しているか、または異なっていてもよい。弱毒化は、単一のステップ及び／または複数のステップを含む１つ以上の方法を使用してウイルスを改変することによって達成され得る。例えば、弱毒化突然変異及び／または遺伝子再集合などの弱毒化遺伝子改変は、部位特異的変異誘発、化学的方法、照射、及び／または組換え技術を介して、ウイルスゲノムのコード領域及び／または非コード領域に導入され得る。そのような方法は当業者によく知られている。他の方法で病気を引き起こすウイルスの弱毒化形態は、継代などの培養技術によって同定されることもあり、及び／またはヒトの介入によって誘導、作成、または引き起こされないウイルスゲノムの遺伝的差異に起因することもある。弱毒化ウイルスが、弱毒化ウイルスが由来する株（複数可）と比較して、類似のまたは低下した抗原性を維持するかどうかを決定する方法もまた、当業者によく知られている。そのような方法は、例えば化学的選別、及び／または、例えばプローブハイブリダイゼーションまたはＰＣＲなどによる核酸スクリーニングを含み得る。例えば、本明細書に開示される特定の実施形態のウイルスベクターなどの弱毒化ウイルスを使用して、レシピエント、例えば動物、例えばブタ類において、免疫応答を刺激し、及び／または免疫を誘導することができる。

シナモン：「シナモン」という用語は、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ属の１つ以上のメンバーに由来する生成物（複数可）、例えばシナモン抽出物、シナモン抽出物の画分、及び／またはシナモン抽出物の沈殿物などを指す。そのようなメンバーには、例えば、Ｃ．ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ、Ｃ．ｃａｓｓｉａ（Ｃ．ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ）、Ｃ．ｃａｍｐｈｏｒａ、Ｃ．ｂｕｒｍａｎｎｉｉ、Ｃ．ｖｅｒｕｍ、Ｃ．ｌｏｕｒｅｉｒｏｉ、Ｃ．ｃｉｔｒｉｏｄｏｒｕｍ、Ｃ．ｄｕｂｉｕｍ、Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｃ．ｋａｎｅｈｉｒａｅ、Ｃ．ｖｉｒｅｎｓ、Ｃ．ｔａｍａｌａ、Ｃ．ｐａｒｔｈｅｎｏｘｙｌｏｎ、Ｃ．ｍｅｒｃａｄｏｉ、Ｃ．ｇｌａｕｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃ．ｍａｌａｂａｔｒｕｍ、Ｃ．ｃａｍｂｏｄｉａｎｕｍ、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ属の任意の他のメンバー、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。通常、１つ以上の生成物は、１つ以上の適切な抽出、画分、及び／または沈殿法及び／または同様の方法によって、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ属の１つ以上のメンバーの樹皮及び／または葉に由来する。
組み合わせ：組み合わせは、少なくとも１つの成分の有効期間が少なくとも１つの他の成分の有効期間とオーバーラップするように投与される２つ以上の成分を含む。成分は組成物であり得る。いくつかの実施形態では、投与される全ての成分の有効期間は互いにオーバーラップしている。３つの成分を含む組み合わせの例示的な実施形態では、投与される第１の成分の有効期間は、第２及び第３の成分の有効期間とオーバーラップし得るが、第２の成分の有効期間は、独立して、第３の成分の有効期間とオーバーラップしても、オーバーラップしなくてもよい。４つの成分を含む組み合わせの例示的な実施形態では、投与される第１の成分の有効期間は、第２、第３、及び第４の成分の有効期間とオーバーラップし、第２の成分の有効期間は、第１及び第４の成分の有効期間とオーバーラップするが、第３の成分の有効期間とはオーバーラップせず、第４の成分の有効期間は、第２及び第３の成分の有効期間とのみオーバーラップする。組み合わせは、成分を含む組成物、２つ以上の個々の成分を含む組成物、または１つ以上の成分と別の別個の成分（または複数の成分）を含む組成物、または残りの成分（複数可）を含む組成物（複数可）であり得る。いくつかの実施形態では、２つ以上の成分は、実質的に同時にまたは任意の順序で連続して投与される２つ以上の異なる成分、２つ以上の異なる時間に投与される同じ成分、またはそれらの組み合わせを含み得る。

十分な条件：「十分な条件」という用語は、所望の活性を可能にする、例えば、２つの核酸分子間の特異的結合もしくはハイブリダイゼーションを可能にする、または核酸の増幅及び／または検出を可能にする、任意の環境を指す。そのような環境には、特定のインキュベーション条件（時間及び／または温度など）、または例えば溶液（例えば、緩衝剤（複数可）、塩（複数可）、金属イオン（複数可）、界面活性剤（複数可）、ヌクレオチド（複数可）、酵素（複数可）など）中の特定の因子の存在及び／または濃度が含まれ得るが、これらに限定されない。
有効量：「有効量」または「治療有効量」または「免疫刺激量」という用語は、所望の生物学的結果を誘発するのに十分である薬剤（例えば、本明細書で単独で、組み合わせて、または潜在的に他の治療薬（複数可）と組み合わせて提供される１つ以上の実施形態）の量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、もしくは原因の改善もしくは緩和、または生物系の任意の他の所望の変化であり得る。この量は、処置される病状、病状の進行段階、ならびに適用される製剤の種類及び濃度と共に変化し得る。いくつかの実施形態では、免疫刺激性組成物の有効量は、対象に投与された場合、検出可能な免疫応答を引き起こすのに十分な量である。そのような応答は、例えば、免疫刺激性組成物において提供される１つ以上のエピトープに特異的な抗体の生成を含み得る。あるいは、応答は、免疫刺激性組成物において提供される１つ以上のエピトープに対するＴヘルパーまたはＣＴＬベースの応答を含み得る。これらの３つの応答は全て、ナイーブ細胞またはメモリー細胞から発生する可能性がある。他の実施形態では、免疫刺激性組成物の「防御有効量」は、対象に投与された場合、対象に防御免疫を付与するのに十分な量である。任意の所与の場合における適切な量は、当業者には容易に明らかになるか、または日常的な実験、例えばワクチン接種及び抗体応答の観察またはワクチン接種後のチャレンジなどによって決定することができ、ワクチン接種された動物は、同様にチャレンジされた非ワクチン接種動物よりもパフォーマンスが良好である。
コードする：「コードする」とは、ヌクレオチドの定義された配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）もしくはアミノ酸の定義された配列及びそれらから生じる生物学的特性のいずれかを有する、生物学的プロセスにおいて他のポリマー及び巨大分子を合成するためのテンプレートとして機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド内のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子によって生成されたｍＲＮＡの転写及び翻訳が、例えば、細胞または他の生物系において、タンパク質を生成することができる場合、タンパク質をコードする。遺伝子またはｃＤＮＡの、コード鎖（そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常、配列表に提供される）及び非コード鎖（転写のテンプレートとして使用される）の両方が、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードしていると呼ぶことができる。特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質及びＲＮＡをコードするヌクレオチド配列には、イントロン、エクソン、またはその両方が含まれ得る。

エピトープ：「エピトープ」は抗原決定基である。これらは、抗原性のある、すなわち免疫応答を誘発する分子上の化学基またはペプチド配列である。Ｔ細胞エピトープは抗原提示細胞の表面に提示され、そこでＭＨＣ分子に結合する。マクロファージ、樹状細胞、及びＢ細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩペプチドの提示に特化しているが、ほとんどの有核体細胞はＭＨＣクラスＩペプチドを提示する。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、通常、８～１１アミノ酸長のペプチドであるのに対し、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、１３～１７アミノ酸長のより長いペプチドを提示する。抗体は、配列番号２～２２７３から選択される１つ以上の免疫原性ペプチドなどのペプチド上の特定の抗原性エピトープに特異的に結合する。いくつかの例では、開示されたペプチドはエピトープである。

発現：「発現」は、核酸配列の転写及び／または翻訳を指す。例えば、遺伝子は、そのＤＮＡがＲＮＡまたはＲＮＡフラグメントに転写されるときに発現され得、いくつかの例では、それは、ｍＲＮＡを形成するために処理される。遺伝子はまた、そのｍＲＮＡがタンパク質またはタンパク質フラグメントなどのアミノ酸配列に翻訳されるときに発現され得る。特定の例では、異種遺伝子は、ＲＮＡに転写されるときに発現される。別の特定の例では、異種遺伝子は、そのＲＮＡがアミノ酸配列に翻訳されるときに発現される。発現の調節は、転写、翻訳、ＲＮＡ輸送及びプロセシング、ｍＲＮＡなどの中間分子の分解、または特定のタンパク質分子が生成された後の特定のタンパク質分子の活性化、不活性化、区画化、もしくは分解の制御によるものを含むことができる。
発現制御配列：「発現制御配列」は、それらが作動可能に連結されている異種核酸配列の発現を調節する核酸配列である。発現制御配列は、核酸配列の転写及び必要に応じて翻訳を制御及び調節する場合、核酸配列に作動可能に連結される。したがって、発現制御配列は、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、タンパク質をコードする遺伝子の前の開始コドン（ＡＴＧ）、イントロンのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの適切な翻訳を可能にするその遺伝子の正しいリーディングフレームの維持、及び停止コドンを含み得る。「制御配列」という用語は、最低でも、その存在が発現に影響を与え得る構成要素を含み、その存在が有利である追加の構成要素（例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列）も含み得ることが意図される。発現制御配列は、プロモーターを含むことができる。
発現ベクター：「発現ベクター」は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターである。発現ベクターは、発現に十分な要素を含む；発現のための他の要素は、宿主細胞によって、またはｉｎｖｉｔｒｏ発現系において供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込んだ、コスミド、プラスミド（例えば、裸の、またはリポソームに含まれる）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの当技術分野で知られている全てのものが含まれる。

宿主細胞：「宿主細胞」とは、ベクターを増殖させ、そのＤＮＡを発現させることができる細胞（複数可）を指す。細胞は、真核性または原核性であり得る。細胞は、哺乳動物、例えばブタ類細胞であり得る。「宿主細胞」はまた、対象の宿主細胞の任意の子孫を含む。複製中に突然変異が起こる可能性があるため、全ての子孫が親細胞と同一であり得る、または同一でない場合があることが理解される。そのような子孫は、「宿主細胞」という用語が使用される場合に含まれると理解される。
免疫応答：「免疫応答」とは、抗原ペプチドなどの刺激に対する、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、または多形核球などの免疫系の細胞の応答である。免疫応答は、例えば、インターフェロンまたはサイトカインを分泌する上皮細胞を含む、宿主防御応答に関与する体の任意の細胞を含み得る。免疫応答には、自然免疫応答または炎症が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、防御免疫応答は、対象を感染から保護する（感染を予防するか、または感染に関連する疾患の発症を予防する）免疫応答を指す。免疫応答を測定する方法は、当業者に知られており、例えば、リンパ球（Ｂ細胞またはＴ細胞など）の増殖及び／または活性、サイトカインもしくはケモカインの分泌、炎症、抗体産生などの測定を含む。

免疫刺激性組成物：本明細書で使用される「免疫刺激性組成物」及び「免疫原性組成物」という用語は、対象において免疫応答（または免疫原性応答）を刺激または誘発するのに有用な組成物を意味する。免疫刺激性組成物は、タンパク質抗原、タンパク質抗原を発現するために使用される核酸分子（ベクターなど）、またはそれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、免疫原性応答は、免疫刺激性組成物が指向するウイルスによる感染または疾患の進行に対して対象がよりよく抵抗することを可能にするという点で、防御的である、または防御的免疫を提供する。
免疫化：対象の免疫系の刺激（ワクチン接種など）を通じて、感染症（ＡＳＦＶなど）による感染から対象（哺乳動物、特にブタ類など）を保護すること。
免疫原：動物に注射または吸収される組成物を含む、動物における抗体の産生またはＴ細胞応答などの免疫応答を刺激することができる化合物、組成物、または物質。免疫原の特定の非限定的な例には、配列番号２～２２７３の免疫原性ペプチド、配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３～２３２９の１つ以上のタンパク質）、及び／またはそのようなペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする核酸、ベクター、及び／または宿主細胞。

不活化：本開示の文脈において、「不活化」ウイルスは、宿主または宿主細胞において感染を確立することができない程度に改変されたウイルスである。ウイルスは、例えば、化学物質、熱、ｐＨの変化、及び／または照射（例えば、紫外線またはガンマ線照射）を使用して不活化させることができる。不活化ウイルスは「殺された」とも呼ばれる。「化学的に不活化された」ウイルスは、ベータプロピオラクトン、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、２，２’－ジチオジピリジン、またはバイナリーエチレンイミンによる処理などの化学的方法を使用して不活化されたウイルスである。ウイルスワクチンの不活化方法のレビューについては、Ｄｅｌｒｕｅｅｔａｌ．（ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１１（６）：６９５－７１９，２０１２）を参照のこと。
感染：感染またはチャレンジとは、対象が、病気を引き起こす可能性のある有機体に曝露され、その有機体に曝露されたときに対象が疾患の１つ以上の臨床徴候に苦しむことを意味する。

単離、単離した：「単離された」生物学的成分（核酸など）は、生物学的成分または他の成分（例えば、染色体及び染色体外ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びタンパク質などの、成分が共に天然に存在する生物学的成分）から実質的に分離または精製されている。「単離された」核酸には、標準的な精製方法によって精製された核酸が含まれる。この用語はまた、宿主細胞における組換え発現によって調製され、その後、精製された核酸、ならびに化学的に合成及び精製された核酸分子を包含する。単離物は絶対純度を必要とせず、例えば、所望の材料との元の混合物中の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または、９９．９％の成分が除去された核酸分子が含まれ得る。別の例として、単離された生物学的成分は、細胞内の自然環境または他の生成容器内にある生物学的成分よりも、生物学的成分がより濃縮されたものである。単離された核酸は、溶液（例えば、水または水溶液）中であり得るか、または乾燥されていてもよい。
ペプチド：「ペプチド」は、ペプチド結合によって結合された少なくとも２つのアミノ酸、より一般的にはアミド結合によって一緒に結合された２つ以上のアミノ酸を有するポリマーである。２５以上のアミノ酸を有するペプチドなどの特定のペプチドは、ポリペプチドと呼ばれることがある。アミノ酸がアルファ－アミノ酸の場合、Ｌ－光学異性体、Ｄ－光学異性体、またはそれらの組み合わせを使用することができる。本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、任意のアミノ酸配列を包含することを意図し、糖タンパク質などの修飾配列を含み、天然に存在するアミノ酸配列、ならびに組換えまたは合成的に生成されるものを包含する。「残基」または「アミノ酸残基」という用語は、ペプチドに組み込まれるアミノ酸を指す。本明細書に開示される例示的なペプチドには、配列番号２～２２７３のペプチド、配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び例えば配列番号２３２３～２３２９のＡＳＦＶタンパク質が含まれる。

ポリヌクレオチド、核酸分子：「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」という用語は、特に明記しない限り、少なくとも２塩基長のヌクレオチドのポリマー形態を指す。核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／または混合ポリマー、及び／または上記の合成形態のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含み得る。本明細書で使用される「核酸分子」という用語は、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」と同義である。この用語は、特に明記しない限り、一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡを含む。ポリヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在する及び／または天然に存在しないヌクレオチド結合によって一緒に連結された修飾ヌクレオチドのいずれかまたは両方を含み得る。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、またはいずれかのヌクレオチドの修飾形態であることができる。
組換えポリヌクレオチドは、それが由来する有機体の天然に存在するゲノムにおいて、それがすぐに隣接する両方のコード配列（５’末端に１つ及び３’末端に１つ）とすぐに隣接しないポリヌクレオチドを含む。組換え核酸分子はまた、天然に存在しないもの、または２つの他の分離した配列セグメントの人工的な組み合わせによって作製される配列を有するものであり得る。この人工的な組み合わせは、化学合成によって、または例えば当業者に知られている遺伝子工学技術によってなど、核酸の単離されたセグメントの人工的な操作によって達成される。したがって、この用語には、例えば、ベクターに、自律複製プラスミドもしくはウイルスに、または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに、または他の配列とは独立した別個の分子（例えば、ｃＤＮＡ）として存在するものに、組み込まれる組換えＤＮＡ分子が含まれる。

予防：病気の予防とは、病気の完全な発症を阻害することを指す。
治療：病気または病的状態の徴候または症状が発症し始めた後、それを改善する治療的介入を指す。
改善：病気の１つ以上の徴候または症状の数または重症度の低下を指す。
プロモーター：「プロモーター」は、転写を指示するのに十分な最小限の核酸配列である。プロモーターは、通常、遺伝子の転写開始部位に隣接する（及びその上流の）５’領域に位置し、一般に、遺伝子の発現を指示する機能的なＴＡＴＡボックスを含む。プロモーターは、一般に構造エレメントと機能エレメントの両方を含み、関連する遺伝子の転写を調節するための制御点を提供する。プロモーター依存性遺伝子発現を、細胞型特異的、組織特異的、または外部シグナルもしくは薬剤によって誘導可能にするのに十分なプロモーターエレメントも含まれる；このようなエレメントは、遺伝子の５’または３’領域に位置し得る。構成的プロモーターと誘導性プロモーターの両方が含まれる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１５３：５１６－５４４，１９８７を参照のこと）。例えば、細菌系においてクローニングする場合、誘導性プロモーター、例えば、バクテリオファージラムダのｐＬ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ－ｌａｃハイブリッドプロモーター）などを使用することができる。一実施形態では、哺乳動物細胞系においてクローニングする場合、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（メタロチオネインプロモーターなど）または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（レトロウイルスの長い末端反復、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーターなど）を使用することができる。組換えＤＮＡまたは合成技術によって産生されるプロモーターもまた、核酸配列の転写を提供するために使用され得る。
ポリヌクレオチドは、プロモーター配列を含む発現ベクターに挿入することができ、これは、宿主の挿入された遺伝子配列の効率的な転写を容易にする。発現ベクターは、通常、複製起点、プロモーター、及び形質転換細胞の表現型選択を可能にする特定の核酸配列を含む。

精製された：「精製された」という用語は、絶対純度を必要とせず、むしろ、それは相対的な用語として意図される。したがって、例えば、精製されたタンパク質、ウイルス、核酸、または他の化合物は、関連するタンパク質及び他の汚染物質から全体的または部分的に単離されたものである。特定の実施形態では、「実質的に精製された」という用語は、細胞、細胞培養培地、または他の粗調製物から単離され、タンパク質、細胞破片、及び他の成分などの初期調製物の様々な成分を除去するための精製に供されたタンパク質、ウイルス、核酸、または他の化合物を指す。
組換え：組換え核酸、タンパク質、またはウイルスは、天然に存在しない配列を有する、または２つの他の分離した配列セグメントの人工的な組み合わせによって作製される配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、多くの場合、化学合成によって、またはより一般的には、例えば遺伝子工学技術によって、核酸の単離されたセグメントを操作することによって達成される。組換えという用語は、天然の核酸分子、タンパク質、またはウイルスの一部の追加、置換、または欠失によってのみ改変された核酸、タンパク質、及びウイルスを含む。

試料：「試料」（または「生物学的試料」）とは、特定の実施形態では、ＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）、ＲＮＡ（ｍＲＮＡを含む）、タンパク質、またはそれらの組み合わせを含む有機体から得られる検体を指す。例としては、単離された核酸、細胞、タンパク質、ペプチド、細胞ライセート、染色体調製物、組織、及び体液（例えば、血液、血液の派生物及び画分（血清など））、抽出された胆汁、生検または外科的に除去された組織（例えば、非固定の、凍結された、ホルマリンで固定された、及び／またはパラフィンに埋め込まれた組織を含む）、剖検材料、涙、乳、皮膚の擦傷、表面洗浄液、尿、痰、脳脊髄液、前立腺液、膿、骨髄穿刺液、中耳液、気管支肺胞洗浄液、気管吸引液、鼻咽頭スワブまたは吸引液、口腔咽頭スワブまたは吸引液、鼻洗浄液、または唾液が含まれるが、これらに限定されない。一例では、試料は、例えば、ＡＳＦＶに特異的なウイルスペプチドを含む。特定の例では、試料は、直接使用するか（例えば、採取したてのもの、または凍結）、または使用前に、例えば、抽出（例えば、核酸の）、固定（例えば、ホルマリンを使用して）、及び／またはワックスへの包埋（ホルマリン固定パラフィン包埋組織試料など）によって操作することができる。

配列同一性／類似性：２つ以上の核酸配列間、または２つ以上のアミノ酸配列間の同一性／類似性は、配列間の同一性または類似性で表される。配列同一性は、同一性のパーセントで測定でき；パーセンテージが高いほど、配列はより同一になる。配列類似性は、類似性のパーセントで測定でき（保存的なアミノ酸置換を考慮に入れる）；パーセンテージが高いほど、配列はより類似する。核酸またはアミノ酸配列のホモログまたはオルソログは、標準的な方法を使用して整列させた場合、比較的高度の配列同一性／類似性を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上の開示されたペプチドは、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドのアミノ酸配列（複数可）に対して、少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）を有する１つ以上のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドをコードする１つ以上の開示された核酸分子は、１つ以上のペプチドをコードする配列番号１の１つ以上の対応する核酸配列に対して、少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％）を有する１つ以上の核酸配列を含み得る。

比較、及び配列同一性または類似性を決定するための配列アラインメント方法は、当業者に知られている。様々なプログラム及びアライメントアルゴリズムについては、以下に記載される：Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２，１９８１；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３，１９７０；Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅ，７３：２３７－４４，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ５：１５１－３，１９８９；Ｃｏｒｐｅｔｅｔａｌ．，Ｎｕｃ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１６：１０８８１－９０，１９８８；Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．ＣｏｍｐｕｔｅｒＡｐｐｌｓ．ｉｎｔｈｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ８，１５５－６５，１９９２；及びＰｅａｒｓｏｎｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２４：３０７－３１，１９９４．Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０は、配列アラインメント方法及び相同性計算の詳細な考察を示す。

ＮＣＢＩベーシックローカルアラインメント検索ツール（ＢＬＡＳＴ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０）は、配列分析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ、及びｔｂｌａｓｔｘに関連して使用される、アメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ、ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ３８Ａ，Ｒｏｏｍ８Ｎ８０５，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ２０８９４）、及びインターネット上を含む、いくつかの情報源から入手可能である。追加情報はＮＣＢＩのウェブサイトで見つけることができる。

ＢＬＡＳＴＮは核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。２つの比較された配列が相同性を共有する場合、指定された出力ファイルは、それらの相同性領域をアラインメントされた配列として提示する。２つの比較された配列が相同性を共有しない場合、指定された出力ファイルは、アラインメントされた配列として提示しない。
対象：「対象」とは、ヒト及びヒト以外の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ類、ウマ、ウシ、及びヒト以外の霊長類）の両方を含むカテゴリーである任意の多細胞脊椎生物である。本発明の特定の開示された実施形態は、具体的には有蹄類、さらにより具体的には、Ｓｕｓ属、例えば、Ｓｕｓｓｃｒｏｆａ及びＳｕｓｓｃｒｏｆａｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓを含むＳｕｉｄａｅ科のメンバーに関し、ブタ類は、少なくともＳｕｓ属を含み、具体的な例としてはＳｕｓｓｃｒｏｆａ及びＳｕｓｓｃｒｏｆａｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓである。
形質転換：「形質転換」細胞は、当業者に知られている分子生物学技術を使用して核酸分子が導入された細胞である。この用語は、プラスミドベクターによるトランスフェクション、ウイルスベクターによる形質転換、及びリポフェクション、エレクトロポレーション、及び／またはパーティクルガン加速器による裸のＤＮＡの導入を含む、核酸分子が細胞に導入される可能性のある全ての技術を包含する。
ワクチン：「ワクチン」とは、免疫応答を刺激することができる免疫原性物質、または免疫原性物質を含む組成物を指す。ワクチンは、感染症または他の種類の疾患（複数可）を予防、改善、または治療するために投与することができる。免疫原性物質は、弱毒化または不活化された微生物（細菌またはウイルスなど）、または抗原性タンパク質（ＶＬＰを含む）、ペプチド、またはそれらに由来するもしくはそれらをコードするＤＮＡ、またはそれらの組み合わせを含み得る。弱毒化ワクチンは、毒性の低い形態を生成するように改変された毒性のある有機体であるが、それにもかかわらず、毒性形態に対する抗体及び免疫応答を誘発する能力を保持している。不活化ワクチンは、化学物質または熱で殺された以前は毒性のあった微生物であるが、毒性のある微生物に対する抗体を誘発する。ワクチンは、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）（予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ））及び治療的応答の両方を誘発する可能性がある。投与方法はワクチンによって異なるが、接種、摂取、吸入、または他の投与形態が含まれ得る。ワクチンは、免疫応答を高めるためにアジュバントと共に投与することができる。

ベクター：ベクターは、宿主細胞に複製及び／または組み込まれるベクターの能力を破壊することなく、外来核酸の挿入を可能にする核酸分子である。ベクターは、複製起点などの宿主細胞内での複製を可能にする核酸配列を含むことができる。挿入ベクターは、それ自体を宿主核酸に挿入することができる。ベクターはまた、１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子及び他の遺伝子エレメントを含むことができる。発現ベクターは、挿入された遺伝子（複数可）の転写及び翻訳を可能にする調節配列を含むベクターである。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：ウイルス様粒子は、１つ以上のウイルスタンパク質で構成されているが、ウイルスゲノムを欠く。ＶＬＰはウイルスゲノムを欠いているため、非感染性である。

ＩＩＩ．実施形態の概要
ＡＳＦＶに関連する免疫原性ペプチドが開示されており、特定の実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン（本明細書では実施例３に記載の「ホットスポット」とも呼ばれる）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３～２３２９の１つ以上のタンパク質）、またはペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質のうちの少なくとも１つを含むベクター（複数可）；ペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質のうちの少なくとも１つを含む細胞（複数可）、またはペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質のうちの少なくとも１つをコードする核酸構築物を含む。いくつかの実施形態では、開示された組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバント、追加の治療薬、またはそれらの組み合わせを含み得る。
開示された組成物は、組成物を動物に送達するために通常使用される様々な経路によって、動物、特にブタ類に投与するために処方することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、鼻腔内投与のために処方される。他の実施形態では、組成物は筋肉内投与用に処方される。

本明細書に開示される１つ以上の組成物を含む容器も提供される。容器は、再利用可能または使い捨てであり得る。いくつかの実施形態では、容器はシリンジである。いくつかの例では、シリンジは再利用可能である。他の例では、シリンジは使い捨てである。使い捨てシリンジは、一般に、単回用量の組成物を含む。いくつかの実施形態では、容器は、バイアルまたはボトル、例えば、ガラスまたはプラスチックのバイアルまたはボトルである。いくつかの実施形態では、バイアルは単回用量の組成物を含む。他の実施形態では、バイアルは、２回以上の用量の組成物、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回以上の用量の組成物を含む。バイアルは、組成物を加える前に滅菌することができる。
本明細書に開示される１つ以上の容器を含むキットも提供される。いくつかの実施形態では、キットは、ボトル（例えば、組成物を含むボトル）、シリンジ、針、またはそれらの任意の組み合わせを含む。１つの非限定的な例では、キットは、組成物を含むシリンジを含むことができる。別の非限定的な例では、キットは、空のシリンジを含むことができる。組成物は、溶液または懸濁液、例えばＰＢＳまたは水など、または別の許容可能な担体中にあり得る。本明細書に開示される組成物は、乾燥形態、錠剤形態、及び／または粉末形態、例えば、凍結乾燥であり得る。乾燥形態、粉末形態、及び／または凍結乾燥形態はまた、例えばＰＢＳ、水、有機溶媒、または別の許容可能な担体で再構成することができる。組成物はまた、ゲルまたはシロップ形態であり得る。キット内の１つ以上の容器は、１つ以上の追加の成分、例えば、アジュバント、担体、安定剤、追加の治療薬、もしくはそれらの組み合わせを含むことができ、または追加の１つ以上の成分は、キット内の１つ以上の個別の容器に含まれ得る。いくつかの例では、キットはまた、１つ以上の組成物、または１つ以上の追加の成分、またはそれらの組み合わせの動物への投与を可能にするデバイス（複数可）を含む。そのようなデバイスの例には、例えば、鼻の薬物送達装置、または筋肉内薬物送達デバイスなどのシリンジまたは注射噴霧器が含まれる。キットは、例えば、投与の指示、及び／または組成物内のペプチド、ベクター、細胞、核酸構築物、またはそれらの組み合わせについて説明する情報などの、組成物（複数可）の詳細を含む文書を（例えば、同じ箱にまたは別々に）含むことができる。

１つ以上の開示されたペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質、及び／または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上の核酸、ベクター、宿主細胞、及び／または組成物を動物に投与する方法の実施形態も開示される。動物に、本明細書に開示される治療有効量の１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質、及び／または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む１つ以上の核酸、ベクター、宿主細胞、及び／または組成物を投与することにより、動物において免疫応答を誘発する、及び／またはＡＳＦＶに対して動物を免疫化する方法の実施形態も提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、鼻腔内に投与される。いくつかの実施形態では、動物は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はブタ類である。いくつかの実施形態では、ブタ類はＳｕｓｓｃｒｏｆａｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓである。
開示された組成物は、成体及び／または幼若動物を治療する（ワクチン接種など）ために使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、動物は成体動物である。他の実施形態では、動物は幼若動物である。

Ａ．アフリカ豚熱ウイルス分離株
いくつかの実施形態では、開示された組成物は、１つ以上の免疫原性ＡＳＦＶペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む。特定の実施形態では、開示された組成物は、化学合成、ペプチド単離、及び／または組換え法によって生成される、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを含む。配列番号２～２２７３の天然ペプチドは、ＡＳＦＶ株、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱによって表される。ＡＳＦＶ株Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱゲノムは、参照により本明細書に組み込まれる配列番号１によって提供される。当業者は、本明細書に開示される技術が、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ以外のＡＳＦＶ株に適用可能であることを理解するであろう。配列番号２～２２７３のペプチドなどのＡＳＦＶ免疫原性ペプチドを生成するために使用することができる他の例示的な（非限定的な）ＡＳＦＶ株を表２に示す。１つの非限定的な例では、組成物は、配列番号２～２２７３から選択される、１～１００、または２～１００、または１～５０、または２～５０、または２～２５ペプチド、または５～２５ペプチド、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ペプチドを発現するウイルスベクターを含み、該ペプチドは、ＡＳＦＶ株、例えばＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱＡＳＦＶ株（受託番号ＭＫ１２８９９５．１）によって発現される、またはその中に含まれると予測される免疫原性エピトープである。

１つ以上の配列番号２～２２７３の免疫原性ペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または配列番号２３２３～２３２９の１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む組成物は、１つ以上のＡＳＦＶ株に対して、例えば２、３、４、５、１０、２０、または２５株に対して（例えば、１～４０のＡＳＦＶ株に対して）免疫応答を誘発または刺激し得るか、免疫化をもたらし得る。１つの非限定的な例では、配列番号２～２２７３から選択される１つ以上のペプチドを発現するウイルスベクターを含む組成物は、表２に列挙されているようなＡＳＦＶの１つ以上の株に対して動物を免疫化するために使用することができる。

Ｂ．核酸分子
特定の開示された実施形態は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドのアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または配列番号２３２３～２３２９の１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３３９～２３４５の１つ以上の核酸分子）を含む、または得られたペプチドが依然として免疫応答を誘導するか、感染の徴候または症状を改善するのに適しており、好ましくは、対応する１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質と免疫遺伝学的に同等であるという条件で、１つ以上の核酸分子のヌクレオチドの一部またはいずれかを他のヌクレオチドで置換することから生じるもの、またはそのようなヌクレオチドの１つ以上を挿入または欠失することから生じるものを含む。この情報に基づいて、当業者は、例えば、配列番号３のペプチド、または配列番号２９のペプチド、または配列番号１０９２のペプチドに対応する、ＡＳＦＶゲノム内の核酸配列または他のＡＳＦＶ核酸配列（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡ配列など）を同定することができる。これは、例えば、欧州分子生物学研究所（ＥＭＢＬ－ＥＢＩ）の欧州バイオインフォマティクス研究所が提供するＧｅｎｅＷｉｓｅなどのペアワイズ配列アラインメントツールを使用することによって、例えば、添付の配列番号１で提供される、ＡＳＦＶゲノム、例えば、ＡＳＦＶ株Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱのゲノム、及び１つ以上の開示されたペプチド配列をアラインメントすることによって達成することができる。

いくつかの開示された実施形態は、１つ以上のＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及び／またはＲＮＡ分子などの１つ以上の単離された核酸分子に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号２～２２７３の少なくとも１つのペプチドをコードする１つ以上の核酸分子、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または配列番号２３２３～２３２９の１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３３９～２３４５の１つ以上の核酸分子）を含み得る。１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする本明細書に開示される核酸分子はまた、追加の成分、例えば、１つ以上の複数クローニング部位、１つ以上の発現制御配列（例えば、異種プロモーター）、及び／または１つ以上の選択関連配列、例えば抗生物質耐性による選択を可能にする核酸配列などをコードし得る。１つの非限定的な例では、２つ以上、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または３０の配列番号２～２２７３のペプチドをコードする核酸分子は、細胞及び／またはウイルスベクターもしくは細菌ベクターによって発現される、ペプチド及び追加の成分を含むより大きな核酸分子に組み込まれる。別の非限定的な例では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドをコードする核酸分子は、発現したペプチドの１つ以上に対して免疫応答を刺激または誘発するために動物に投与できるＤＮＡワクチンに組み込まれる。

Ｃ．ペプチド
特定の開示された実施形態は、配列番号２～２２７３から選択される免疫原性ペプチド、配列番号２３１０～２３３０から選択される構築物、配列番号２３３１～２３３５から選択されるドメイン、及び／または配列番号２３２３～２３２９から選択される完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質に関する。いくつかの実施形態は、１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含み、結果として生じるペプチド（複数可）が免疫応答を誘発するか、またはウイルス感染の徴候または症状を改善することができるという条件で、ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸は別の１つ以上のアミノ酸で置換されるか、またはペプチドのアミノ酸は挿入もしくは欠失されるか、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態は、完全タンパク質、または１～２００アミノ酸の１つ以上のペプチドを含み、この範囲内の任意の数のアミノ酸、例えば５～少なくとも５０アミノ酸長、例えば６～４０、７～３０、または８～２０アミノ酸長を有するペプチド、特定の実施形態では８～１１個のアミノ酸を有するペプチドを含む。
特定の実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２～２２７３から選択される１つ以上のペプチドを含む。１つの非限定的な例では、組成物のペプチド（複数可）は合成であり、当業者に周知の技術を使用して化学的に生成される。別の非限定的な例では、組成物のペプチド（複数可）は、当業者に知られている組換え技術を使用して細胞内合成から得られる。他の実施形態では、組成物に含まれる１つ以上のペプチドは、核酸構築物、ベクター（複数可）、細胞（複数可）、またはそれらの組み合わせによって発現されるか、それらの中に含まれるか、またはその両方である。さらに他の実施形態では、ペプチドは、単離されたペプチドであり得る。

開示された免疫原性ペプチド（複数可）は、例えば、ペプチドコンフォメーションの安定化、酵素分解に対するペプチド安定性の改善、ｉｎｖｉｖｏでのペプチド安定性の改善、またはそれらの組み合わせの目的のために改変され得る。そのような修飾には、例えば、グリコシル化、ＰＥＧ化、脂質化、環化、アセチル化、アミド化、コンジュゲーション、Ｄ－アミノ酸取り込み、類似の修飾、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。
ブタにおけるブタ白血球抗原（ＳＬＡ）とも呼ばれるブタ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）は、ウイルス感染及びワクチン接種に対するブタ類の免疫応答に関連している。ＳＬＡクラスＩ糖タンパク質は、全ての有核細胞に存在し、最も一般的には感染細胞の細胞質に由来する内因性抗原を提示する。ＳＬＡクラスＩ遺伝子クラスターには、ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－３の３つの構成的に発現する遺伝子が含まれており、これらは全て高度に多形である。これらの遺伝子の異なる対立遺伝子型は、異なるペプチドクラスに対して結合特異性を持つタンパク質を生成する。感染細胞の表面上のＳＬＡクラスＩ分子によって提示されるペプチドは、通常、８～１１アミノ酸長である。細胞傷害性Ｔ細胞上のＣＤ８共受容体によるＳＬＡクラスＩ糖タンパク質の認識は、感染細胞の破壊につながり、適応免疫応答の細胞媒介性免疫応答成分を開始する。細胞媒介性免疫応答は、体液性応答（すなわち、Ｂリンパ球によるウイルス特異的抗体の合成）と共に、同じまたは密接に関連するウイルスによるその後の感染に対して、より迅速な免疫応答（及び免疫）を可能にする長寿命の「記憶細胞」の産生をもたらす。

高親和性免疫原性ペプチドを予測することを目的とした新世代のアルゴリズムは、結合親和性（例えば、単一事象を表すＭＨＣ分子に対する）のみに焦点を当てていないため、多数の偽陽性を含む膨大なリストの推定ペプチドを得る可能性は低くなっている。本明細書に開示されるペプチドは、例えば、推定免疫原性ペプチドの高密度クラスターを同定することができ、及び／または予測されるＭＨＣ結合親和性に基づいて潜在的に免疫原性ペプチドを同定することができる予測アルゴリズムなどの様々なバイオインフォマティクスアプローチを使用して生成することができ、そして生成された。例えば、Ｚｖｉｅｔａｌ．（ＰＬｏＳＯＮＥ７（５）：ｅ３６４４０，２０１２；参照により本明細書に組み込まれる）は、部分的に、オーバーラップする予測エピトープのクラスターをマッピングし、エピトープの密度に従ってそのような「ホットスポット」領域をランク付けすることにより、Ｔ細胞応答を誘発する細菌Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａｔｕｌａｒｅｎｓｉｓの推定免疫原性エピトープの能力を評価した。この方法は、古典的な結合親和性ベースのアルゴリズムを補完する。同様に、ＮｅｔＭＨＣｐａｎ－４．０アルゴリズムは、ｉｎｓｉｌｉｃｏ由来の結合親和性情報と、質量分析（ＭＳ）由来の溶出リガンドを統合することにより、ペプチドとＭＨＣクラスＩ分子との相互作用を予測する（Ｊｕｒｔｚ，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１９９（９）：３３６０－３３６８，２０１７；参照により本明細書に組み込まれる）。このアプローチは、ＭＨＣクラスＩ提示経路におけるペプチド処理ステップ及び提示ペプチドの長さ分布に関する有用性の高まったＭＳ由来の情報を組み込み、ｉｎｓｉｌｉｃｏ由来の結合親和性情報のみから一般的に生じる偽陽性ヒットの数を減らす。

開示されたペプチドの免疫原性は、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏで免疫応答を測定するための様々な方法を使用して検証することができる。そのような方法は当業者によく知られており、本発明は特定のアッセイを使用することに限定されない。１つの非限定的な例では、関連するペプチドを合成し、次いで、酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイを使用して、末梢血リンパ球または脾臓由来細胞に対してスクリーニングすることができる。別の非限定的な例では、動物は、１つ以上の異なる時間間隔で、様々な濃度の所与の組成物（複数可）を１回または複数回投与され得、処理動物血清対未処理動物血清中の抗ペプチド抗体の存在は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して確立することができる。別の非限定的な例では、動物は、１つ以上の異なる時間間隔で、様々な濃度の所与の組成物（複数可）を１回または複数回投与され、ＡＳＦＶ株でチャレンジされ、ＡＳＦ症状について経時的に観察され得る。

Ｄ．構築物
いくつかの実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン（「ホットスポット」とも呼ばれる、実施例３を参照）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３～２３２９の１つ以上のタンパク質）は、より大きなアミノ酸構築物に組み込まれている。例示的な構築物は、配列番号２３１０～２３３０として提供される。そのような構築物は、例えば、Ｎ末端ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、及び／またはＭＢＰ融合タンパク質をさらに含むことができる。そのような構築物は、Ｎ末端Ｈｉｓタグを含むことができる。例えば、構築物が、ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、及び／またはＭＢＰ融合タンパク質を含む場合、Ｈｉｓタグを融合タンパク質のＮ末端に付加することができる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の構築物に含まれる、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３～２３２９の１つ以上のタンパク質）は、１つ以上のペプチド、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする全てまたは一部（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５）の配列の間に１つ以上のスペーサー配列（例えば、ＧＰＧＰＧ及び／またはＡＡＹ）をさらに含み得る。本明細書に開示される構築物において使用することができる追加のスペーサー配列は当業者に知られており、本開示は本明細書に開示される特定のスペーサー配列に限定されない。

いくつかの実施形態では、構築物は、１つ以上の検出配列をコードする１つ以上のヌクレオチド配列と、任意選択で、リンカー（ＧＳＳＧなど）を含む。リンカー及び検出配列は、例えば、１つ以上のペプチド、ドメイン、完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質、及び／またはスペーサー配列をコードする配列のＣ末端に位置することができ、リンカーが構築物のＣ末端と検出配列のＮ末端の間に配置されるようにする。リンカー及び検出配列、ならびに例えば、宿主細胞、ライセート、上清、対象、及び／または対象から得られた試料中のタンパク質を検出するために発現配列にタグを付ける方法が当業者に知られており、本開示は、１つもしくは任意の特定の検出配列または１つもしくは任意の特定のリンカー配列に限定されない。例示的な検出配列は、例えば、宿主細胞培養物、例えば、１つ以上の核酸分子で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞を含む宿主細胞培養物から収集されたライセート中及び／または上清中などの、１つ以上の核酸分子の発現から生じるタンパク質産物の検出に有用なＨｉＢｉＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ）配列ＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ（または任意選択で例示的なリンカーを有するＧＳＳＧＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ）である。別の例示的な検出配列は、例えば、宿主細胞培養物、例えば、１つ以上の核酸分子で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞を含む宿主細胞培養物から収集されたライセート中及び／または上清中などの、１つ以上の核酸分子の発現から生じるタンパク質産物の検出に有用なヒスチジンタグ（Ｈｉｓ－ｔａｇ）をコードする配列（例えば、アミノ酸配列ＨＨＨＨＨＨをコードするヌクレオチド配列であり、各ＨはＣＡＣまたはＣＡＴコドンによってコードされる）である。

Ｅ．ベクター及び宿主細胞
１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、配列番号２３１０～２３３０の１つ以上の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を含む複数の種類及びバージョンのベクター、核酸分子、及び細胞は、本発明の範囲内にある。ベクター、核酸分子、及び細胞を産生する方法は当業者に知られており、本開示は、１つ以上の特定のベクター、核酸分子、または宿主細胞の産生方法を使用すること、または特定のベクター、核酸分子、または細胞種類に限定されない。一般に、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを含むかまたは産生するベクター及び宿主細胞は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドをコードする１つ以上の核酸分子（例えば、配列番号２２８６～２３０９の１つ以上の核酸分子）を含み、通常、ペプチドを発現するために生成される。例えば、ＤＮＡワクチンにおいて使用するために生成されたプラスミドなどの裸の核酸分子は、核酸分子による細胞形質転換後、通常、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを発現するように生成される。したがって、本明細書に記載の少なくとも１つのベクター、核酸分子、または宿主細胞、またはそれらの組み合わせを含む１つ以上の組成物を動物に投与して、例えば、ＡＳＦＶに対する免疫応答を生成し、及び／またはＡＳＦＶに対して動物を免疫化し、またはＡＳＦに関連する１つ以上の症状を改善もしくは排除することができる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）をコードする１つ以上の核酸分子は、例えば、宿主細胞における１つ以上の核酸分子の発現を測定するために、より大きな核酸構築物に組み込まれる。例示的な構築物は、配列番号２３１０～２３３０として提供される。そのような構築物は、例えば、ｐＨＬＴ、ｐＳｕｍｏ、及び／またはｐＭＢＰプラスミドなどの１つ以上のプラスミドベクターをさらに含み得、例えば、Ｎ末端ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、及び／またはＭＢＰ融合タンパク質を付加することができる。そのような構築物は、Ｎ末端Ｈｉｓタグを含むことができる。例えば、構築物が、ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、及び／またはＭＢＰ融合タンパク質を含む場合、Ｈｉｓタグを融合タンパク質のＮ末端に付加することができる。

いくつかの実施形態では、１つ以上の構築物に含まれる、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３～２３２９の１つ以上のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）をコードする核酸分子は、１つ以上のペプチド、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードする全てまたは一部（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５）のヌクレオチド配列の間に１つ以上のスペーサー配列（例えば、ＧＰＧＰＧ及び／またはＡＡＹ）をさらに含む。本明細書に開示される核酸分子において使用することができる追加のスペーサー配列は当業者に知られており、本開示は本明細書に開示される特定のスペーサー配列に限定されない。
いくつかの実施形態では、構築物は、１つ以上の検出配列をコードする１つ以上のヌクレオチド配列と、任意選択で、リンカー（ＧＳＳＧなど）を含む。リンカー及び検出配列は、例えば、１つ以上のペプチド、ドメイン、完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質、及び／またはスペーサー配列をコードするヌクレオチド配列のＣ末端に位置することができ、リンカーが構築物のＣ末端と検出配列のＮ末端の間に配置されるようにする。リンカー及び検出配列、ならびに例えば、宿主細胞、ライセート、上清、対象、及び／または対象から得られた試料中の核酸分子またはタンパク質を検出するために発現配列にタグを付ける方法が当業者に知られており、本開示は、１つもしくは任意の特定の検出配列または１つもしくは任意の特定のリンカー配列に限定されない。例示的な検出配列は、例えば、宿主細胞培養物、例えば、１つ以上の核酸分子で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞を含む宿主細胞培養物から収集されたライセート中及び／または上清中などの、１つ以上の核酸分子の発現から生じるタンパク質産物の検出に有用なＨｉＢｉＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ）配列ＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ（または任意選択で例示的なリンカーを有するＧＳＳＧＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ）をコードする核酸分子である。別の例示的な検出配列は、例えば、宿主細胞培養物、例えば、１つ以上の核酸分子で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ細胞を含む宿主細胞培養物から収集されたライセート中及び／または上清中などの、１つ以上の核酸分子の発現から生じるタンパク質産物の検出に有用なヒスチジンタグ（Ｈｉｓ－ｔａｇ）をコードする配列（例えば、アミノ酸配列ＨＨＨＨＨＨをコードするヌクレオチド配列であり、各ＨはＣＡＣまたはＣＡＴコドンによってコードされる）である。

いくつかの実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、配列番号２３３１～２３３５の１つ以上のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、配列番号２３２３２～３２２９の１つ以上のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）は、例えば、動物に直接導入するためのプラスミドなど、より大きな核酸構築物に組み込まれる。そのような核酸構築物は、生理食塩水注射、パーティクルガン加速器、対象にＤＮＡもしくはＲＮＡワクチンを投与するための任意の適切な既知のもしくは今後発見される方法、またはそれらの組み合わせなどの任意の適切な技術によって動物に導入することができ、そのような方法は、当業者によって知られているか、または理解されるであろう。１つの非限定的な例では、配列番号２～２２７３の、１つ以上、例えば、１、２、３、４、５、８、１０、１５、または２０などのペプチドをコードする１つ以上の核酸分子はプラスミドに組み込まれ、プラスミドを含む組成物がブタ類に投与される。
いくつかの実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）をコードする核酸分子（複数可）は、ウイルスベクターに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、サーコウイルス、アルファウイルス、オルソポックスウイルス、アブラウイルス、スイポックスウイルス、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。１つの非限定的な例では、ウイルスベクターは、仮性狂犬病ウイルス、ブタサーコウイルス、シンドビスウイルス、ワクシニアウイルス、ニューカッスルウイルス、または豚痘ウイルスである。１つの特定の非限定的な例では、配列番号２～２２７３の、１つ以上、例えば、１、２、３、４、５、８、１０、１５、または２０などのペプチドをコードする核酸分子は、ワクシニアウイルスベクターに組み込まれ、ベクターを含む組成物がブタ類に投与される。

他の実施形態では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）をコードする核酸分子（複数可）は、宿主細胞に組み込まれ得る。１つの非限定的な例では、宿主細胞は、例えば、Ｐｉｃｈｉａ属またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の酵母などの組換え酵母である。特定の非限定的な例では、組換え酵母は、ＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓまたはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである。別の非限定的な例では、宿主細胞は、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、またはＶｉｂｒｉｏ属の細菌などの組換え原核生物である。特定の非限定的な例では、組換え細菌は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ、またはＶｉｂｒｉｏａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍである。核酸分子が細胞に導入され得るいくつかの技術のうちの１つによって、１つ以上の核酸分子を宿主細胞に組み込むことができる。例えば、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドをコードするプラスミドによる形質転換などの技術は、当業者に一般的に知られている。１つの特定の非限定的な例では、１つ以上、例えば、１、２、３、４、５、８、１０、１５、または２０などの、配列番号２～２２７３のペプチドをコードするプラスミドは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ宿主細胞に組み込まれ、形質転換された宿主細胞を含む組成物がブタ類に投与される。別の特定の非限定的な例では、配列番号２～２２７３の、１つ以上、例えば、１、２、３、４、５、８、１０、１５、または２０などのペプチドをコードするプラスミドは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａ宿主細胞に組み込まれ、形質転換された宿主細胞を含む組成物がブタ類に投与される。

ＩＶ．組成物
１つ以上の配列番号２～２２７３の免疫原性ペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を含む、及び／または１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質を含むかまたはコードする１つ以上のベクター及び／または細胞及び／または核酸分子を含む、組成物が本明細書に開示される。開示された組成物は、動物、特にブタ類に投与することができる。１つ以上の組成物を使用して、例えば、ＡＳＦＶに対する免疫応答を誘発し、ＡＳＦＶに対して対象を免疫化し、ＡＳＦに関連する１つ以上の症状を改善及び／または排除し、及び／またはアウトブレイク前のワクチンとして作用することによって将来のアウトブレイクを和らげることができる。
いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を含む。他の実施形態では、組成物は、開示された１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質を含む、例えばウイルスベクターまたは細菌ベクターなどのベクター（複数可）を含む。１つの非限定的な例では、ウイルスベクターは仮性狂犬病ウイルスである。別の非限定的な例では、ウイルスベクターは改変ワクシニアアンカラウイルスである。他の実施形態では、組成物は、１つ以上のペプチド、構築物、ドメイン、及び／または完全長もしくは部分長ＡＳＦＶタンパク質をコードするＤＮＡプラスミド及び／または他の核酸構築物を含む。別の実施形態では、本発明は、核酸構築物及び／または他のコード配列の発現を通じて得られる、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドに関する。別の実施形態では、本発明は、開示されたペプチドをコードする遺伝子構築物を含む細胞及び／またはベクターに関する。１つの非限定的な例では、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の構築物（例えば、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０のアミノ酸配列）、１つ以上のドメイン（実施例３に記載のように、本明細書では「ホットスポット」とも呼ばれる；例えば、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のアミノ酸配列）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）は、細胞内に発現される及び／または１つ以上のベクターによって発現される。したがって、配列番号２～２２７３に従ってペプチドを発現及び／または生成するプロセスは、本発明の追加の態様を構成する。そのようなペプチドはまた、本開示が属する当業者によって一般的に理解されるように、合成的に生成され得る。１つの非限定的な例では、組成物は、当業者に周知の組換え技術を使用して細胞内合成から得られた化学的に合成されたペプチド（複数可）を含む。

開示された免疫原性組成物は、他の薬剤を含み得る。いくつかの実施形態は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を含む治療有効量のＤＮＡもしくはＲＮＡ構築物、または１つ以上のペプチド、ドメイン、及び／またはＡＳＦＶタンパク質を含む治療有効量のベクター、または１つ以上のペプチド、ドメイン、及び／またはＡＳＦＶタンパク質を含む治療有効量の細胞と共に、１つ以上の追加成分を含む医薬組成物に関する。非限定的な例では、追加の成分は、適切な担体、例えばＰＢＳなど、及び適切なアジュバントである。いくつかの実施形態では、ペプチド、核酸構築物、ベクター、及び／または細胞は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、油、エタノール、またはそれらの組み合わせなどの許容可能な担体中に存在する。担体、または担体を含む組成物、またはその両方は、無菌であり得る。組成物はまた、適切な量のｐＨ緩衝剤、または湿潤剤、または乳化剤を含むことができる。組成物はまた、例えば、許容可能な緩衝剤、防腐剤、浸透圧を調整するための塩などの従来の医薬品物質を含むことができる。組成物はまた、アジュバント材料、例えば、油性アジュバント、水中油型アジュバント、油中水型アジュバント、水中油中水型アジュバント、水酸化アルミニウム、水酸化カリウム、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、サポニン、スクアレン、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、多糖類、誘導体化多糖類、オリゴヌクレオチド、サイトカイン、細菌誘導体、ウイルス誘導体、ゲルアジュバント、例えばＥｍｕｌｓｉｇｅｎ－Ｄなど、またはカルボマー系アジュバント、例えばＣａｒｂｉｇｅｎなどを含むことができる。組成物は、例えば、オキシムライゲーション、ネイティブケミカルライゲーション、チオエーテルライゲーション、アルデヒド基とヒドラジン（ＮＨ₂ＮＨ－）基とのヒドラジンライゲーション、マレイミド－チオール基反応、ＣｕＡＡＣ反応などによる化学的コンジュゲーションによって、１つ以上のアジュバントと組み合わされた１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを含むことができる。組成物は、１つ以上の化学的方法、組換え技術、及び／または酵素反応を使用して、重合によって組み合わされた１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを含み得る。開示された組成物はまた、例えば、グリコシル化、ＰＥＧ化、脂質化、環化、アセチル化、アミド化、コンジュゲーション、Ｄ－アミノ酸取り込み、類似の修飾、またはそれらの組み合わせなどの修飾を受けた、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチドを含むことができる。組成物は、溶液または懸濁液、シロップ、エマルジョン、マイクロエマルジョン、エアロゾル、錠剤、ピル、カプセル、ゲル、徐放性製剤、または粉末であり得る。１つの非限定的な例では、組成物は、凍結乾燥された粉末、または液体である。組成物は、従来の結合剤及び担体、例えばトリグリセリドを含む、坐剤として処方することができる。経口製剤は、標準的な担体、例えば、デンプン、マンニトール、サッカリンナトリウム、ラクトース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、またはそれらの組み合わせなどを含むことができる。粘膜製剤は、例えば、キトサンなどの粘膜付着性ポリマーを含むことができる。開示された組成物はまた、例えば、サブユニットワクチン、弱毒生ウイルスワクチン、ＤＮＡワクチン、ＲＮＡｉワクチン、不活化ワクチン、細菌ワクチン、酵母ワクチン、またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない他のワクチンなどの１つ以上の追加の治療薬を含み得る。そのようなワクチンはまた、例えば、ブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルスワクチン、ブタサーコウイルス－２ワクチン、免疫去勢ワクチン、他の特定のワクチン、またはそれらの組み合わせを含み得る。他の治療薬はまた、ＡＳＦの症状を軽減または緩和することを目的とした化合物または組成物、例えば、抗炎症薬、止瀉薬、食欲刺激薬、抗悪心薬、呼吸器作用薬、鉄デキストラン、またはそれらの組み合わせなどを含み得る。

Ｖ．免疫応答を刺激及び測定する方法
開示された発明はまた、開示された組成物を使用する方法の実施形態に関する。例えば、一実施形態は、本明細書に記載の少なくとも１つのペプチド、ベクター、核酸分子、及び／または組成物を提供し、それらの有効量をブタ類などの動物に投与することを含む。本開示の方法の１つの非限定的な例は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）に対して、動物において免疫応答を誘発または刺激することを含む。別の非限定的な例では、本方法は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現するウイルスベクターを含む組成物を使用して、ＡＳＦＶに対して動物をワクチン接種または免疫化することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、筋肉内投与または鼻腔内投与などの任意の適切な投与経路を使用して投与される。開示された組成物の少なくとも１つを投与することができる動物の例には、ＡＳＦＶに感染することができる（または感染している）動物が含まれる。そのような動物の例には、哺乳動物対象、有蹄動物、例えば妊娠中の雌ブタなどのブタ類が含まれるが、これらに限定されない。組成物を投与される動物は、成体または幼体であり得る。

開示された組成物は、動物においてＡＳＦＶに対する免疫応答を刺激または誘発するために使用することができる。いくつかの例では、本方法は、動物においてＡＳＦＶに対する免疫応答を誘発するために、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を含む治療有効量の組成物を、動物、特にブタ類に対して投与することを含む。免疫応答が誘発または刺激されたかどうかを決定する方法は、当業者に知られている。いくつかの例では、病気の減少（症状の減少など）、ウイルス力価の減少、死亡率の低下、またはそれらの組み合わせが観察された場合に免疫応答が達成される。いくつかの例では、開示された方法は、組成物を完全に、または例えば、組成物を投与されていない同等の動物と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、投与された動物においてＡＳＦＶ感染の症状を軽減する。いくつかの例では、開示された組成物または方法、またはその両方が、組成物を投与された動物においてウイルス力価を、例えば、組成物を投与されていない同等の動物と比較して、例えば、少なくとも１０％～少なくとも１００％、２０％～少なくとも１００％、３０％～少なくとも１００％、４０％～少なくとも１００％、５０％～少なくとも１００％、６０％～少なくとも１００％、７０％～少なくとも１００％、８０％～少なくとも１００％、９０％～少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍減少させる。いくつかの例では、開示された方法は、例えば、組成物を投与されていない同等の動物と比較して、組成物を投与された動物におけるその後のウイルスチャレンジ後の生存を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％増加させる。

いくつかの例では、本方法は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現するウイルスベクターを含む治療有効量の組成物を投与し、それによりＡＳＦＶに対して動物を免疫化することを含む。いくつかの例では、病気の減少（症状の減少など）、ウイルス力価の減少、死からの保護、またはそれらの組み合わせが観察された場合に免疫応答が達成される。
いくつかの実施形態では、動物は、治療有効量の約１～約１００μｇの、配列番号２～２２７３のペプチドの少なくとも１つ、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）のそれぞれを、（例えば、筋肉内）投与することができる。いくつかの実施形態では、動物は、治療有効量の約１０³～約１０⁹ＣＣＩＤ⁵⁰、例えば、約１０⁶ＣＣＩＤ⁵⁰の、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現する少なくとも１つのウイルスベクター、例えば、仮性狂犬病ウイルスまたは改変ワクシニアアンカラウイルスのそれぞれを、（例えば、筋肉内）投与することができる。しかしながら、当業者は、動物に投与するための、治療有効量（例えばＡＳＦＶ感染に対して保護を提供する量）の、例えば、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）、または１つ以上のペプチド、ドメイン、及び／またはＡＳＦＶタンパク質を発現するウイルスベクターを決定することができる。

本明細書に開示される組成物が、免疫保護の成功を達成するなど、免疫応答を刺激または誘発できる（または刺激したまたは誘発した）かどうかを決定する方法は当業者に知られており、本開示は、特定のアッセイの使用に限定されない。本明細書で提供される組成物の投与に続いて、１つ以上のアッセイを実施して、結果として生じる免疫応答を評価することができる。１つの非限定的な例では、ベースラインまたは対照を提供するために、組成物の投与の前に１つ以上のアッセイも実施される。血液、血清、及び／または末梢血マクロファージ細胞（ＰＢＭＣ）試料などの試料は、組成物の投与後に動物から収集することができる。いくつかの例では、試料（複数可）は、最初の投与から少なくとも１週間目、少なくとも２週間目、少なくとも３週間目、少なくとも４週間目、少なくとも５週間目、少なくとも８週間目、または少なくとも１０週間目（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週）に収集される。追加の試料も、例えば、同じまたは異なる組成物（複数可）のその後の投与後に得ることができる。

ＶＩ．投与方法
ペプチド、免疫原性組成物、ベクター、細胞、及び／または核酸構築物の実施形態は、医薬組成物（複数可）を動物に導入するために通常使用される任意の経路によって動物に投与することができる。投与方法には、筋肉内、経口、静脈内、皮内、腹腔内、皮下、非経口、粘膜、直腸、膣、吸入、鼻腔内、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。非経口投与、例えば、筋肉内、静脈内、または皮下投与などは、通常、注射によって達成される。投与は、局所的または全身的、またはそれらの組み合わせであり得る。注射剤は、例えば、エマルジョンとして、注射前の液体中の溶液または懸濁液に適した固体形態として、または液体懸濁液または溶液として調製することができる。注射用懸濁液または溶液は、滅菌粉末、錠剤、顆粒、または同様のもの、またはそれらの組み合わせから調製することができる。
動物に投与される組成物（複数可）は、少なくとも１つの許容可能な担体と共に投与され得る。許容される担体は、部分的に、投与される特定の組成物、及び組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定される。したがって、本開示の組成物の多種多様な許容可能な製剤が存在する。

非経口投与用の調製物は、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、及び／またはエマルジョン、例えば水中油型及び／または油中水型エマルジョンなどを含む。非経口投与用の調製物はまた、アジュバント及び／またはポリマー、例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧＯＤＮ）、Ｃａｒｂｉｇｅｎ、Ｐｏｌｙｇｅｎ、ＩＳＡ２０１または２０６（例えば、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ２０１ＶＧ）、Ｑｕｉｌ－Ａ、トレハロース－６，６－ジベヘネート（ＴＢＤ）、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド系アジュバント（例えばＴＬＲ７／８アジュバント、例えばＲ８４８（レシキモド））、環状ジグアニル酸一リン酸（ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ）、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、またはそれらの組み合わせなどを含むことができる。非水性溶液の例は、アルコールまたはグリコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、及び注入可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョン、または懸濁液が挙げられ、生理食塩水及び緩衝媒体を含む。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸化リンガー液、または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体及び栄養補充薬、電解質補充薬（例えば、リンガーデキストロースベースのもの）などが挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、不活性ガスなどの防腐剤及び他の添加剤が存在し得る。

いくつかの例では、開示された実施形態は、経口、鼻腔内、肺、直腸、及び膣などの粘膜ワクチン接種のために製剤化されている。１つの非限定的な例では、これは鼻腔内投与によって達成される。例えば、開示された組成物は、１つ以上の粘膜と相互作用する１つ以上の生分解性ポリマー担体を含むことができる。ポリマー、例えば、ポリラクチド－ｃｏ－グリコリド（ＰＬＧＡ）、キトサン（例えば、Ｎ－トリメチルキトサン（ＴＭＣ）系ナノ粒子などのキトサンナノ粒子の形態で）、アルギン酸塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）、カルボポール、及びカルボポール系ポリマーを含むことができる。組成物は、例えばデンプンと組み合わせて、アルギン酸ナトリウムまたはカルボポールなどの１つ以上の親水性ポリマーを含むことができる。組成物は、経鼻投与に使用される粒子送達システムとして処方することができる。したがって、組成物は、リポソーム、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、及び／またはポリマー粒子、例えばビロソームを含むことができる。組成物はまた、細菌起源の１つ以上のリポペプチド、またはそれらの合成誘導体、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（Ｐａｍ２Ｃｙｓ、単鎖／多鎖型パルミチン酸及びリポアミノ酸（ＬＡＡ））を含み得る。組成物はまた、１つ以上のアジュバント、例えば、１つ以上のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧＯＤＮ）、Ｆｌｔ３リガンド、Ｃａｒｂｉｇｅｎ、ｃ－ジ－ＧＭＰ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、及びモノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）などを含み得る。
本明細書に開示される組成物は、母体由来の抗体（ＭＤＡ）陽性動物に投与することができる。所与のワクチンが体液性免疫反応を刺激する場合、雌ブタはＭＤＡを子ブタに移す可能性があり、これは子ブタにワクチン接種する機会を遅らせる可能性がある。しかしながら、Ｔ細胞エピトープワクチンはＭＤＡによって遅延されない場合がある。

Ａ．投与のタイミング
開示される組成物は、単回用量または複数回用量（例えば、ブースター）として投与され得る。いくつかの例では、第１の投与の後に第２の投与が続く。例えば、第２の投与は、投与された第１の組成物と同じ、または異なる組成物で行うことができる。１つの特定の非限定的な例では、第２の投与は、投与される第１の組成物と同じ組成物で行うことができる。別の特定の非限定的な例では、第２の投与は、投与される第１の組成物と異なる組成物で行うことができる。例えば、第１の組成物が配列番号２～２２７３から選択される１０個のペプチドを含む場合、第２の組成物は、配列番号２～２２７３から選択される２０個の異なるペプチドを含むことができ、３０個全てのペプチドが異なる。いくつかの例では、動物は、１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現するウイルスベクターを含む１つ以上の組成物を投与され、続いて、弱毒化生ＡＳＦＶを含む１つ以上のワクチンが投与される。

いくつかの例では、組成物（複数可）は、複数回用量、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の用量（例えば、２～４回の用量）で投与される。これらの例では、投与間のタイミングは、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも５年、または少なくとも１０年、例えば１～４週間、２～３週間、１～６ヶ月、２～４ヶ月、１～１０年、または２～５年、またはそれらの組合せであり得る。少なくとも３回の投与が行われる１つの非限定的な例では、第１の投与と第２の投与、及び第２の投与と第３の投与間のタイミングは、同じであっても異なっていてもよい。

Ｂ．投薬量
患者に投与される用量は、本発明の文脈において、患者において有益な治療応答を経時的にもたらすか、またはＡＳＦＶ感染を阻害するのに十分であるべきである。用量は、対象の種、年齢、体重、及び全身状態、治療される感染の重症度、用量が感染に対する治療、緩和、または接種に使用されているかどうか、使用される特定の組成物、及び／または投与様式に応じて、対象間で変化し得る。適切な用量は、日常的な実験を使用して当業者によって決定することができる。
いくつかの実施形態では、動物は、約０．１～約１００μｇの、組成物中の所与のペプチド、例えば、約１μｇ～約５μｇ、約１μｇ～約５０μｇ、約１μｇ～約２５μｇ、約５μｇ～約２０μｇ、または約１０μｇ～約１５μｇの、組成物中の少なくとも１つのペプチドのそれぞれを、（例えば、筋肉内）投与される。１つの特定の非限定的な例では、対象は、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、または約３０μｇの、少なくとも２つの異なるペプチドのそれぞれを、（例えば、筋肉内）投与される。１つの非限定的な例では、動物は、第１の投与量で１つの組成物、第２の投与量で第２の組成物、及び第３の投与量で第３の組成物を投与される。さらに、各投与時の組成物（複数可）は、同じであっても異なっていてもよい。

いくつかの実施形態では、動物は、配列番号２～２２７３の少なくとも１つのペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現する約１０²～約１０⁹ＣＣＩＤ⁵⁰の仮性狂犬病ウイルスベクターまたは改変ワクシニアアンカラウイルスベクター、例えば、単回用量内の、約１０³～約１０⁵、１０⁴～約１０⁶、１０⁵～約１０⁷、１０⁶～約１０⁸、または約１０⁷～約１０⁹の、ウイルスベクターを、（例えば、筋肉内）投与される。１つの特定の非限定的な例では、対象は、同じまたは異なる１つ以上の配列番号２～２２７３のペプチド、１つ以上の配列番号２３１０～２３３０の構築物、１つ以上の配列番号２３３１～２３３５のドメイン、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶタンパク質（例えば、１つ以上の配列番号２３２３～２３２９のタンパク質及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸）を発現する約１０⁴、約１０⁵、約１０⁶、約１０⁷ＣＣＩＤ⁵⁰の、少なくとも２つのウイルスベクターのそれぞれを、（例えば、筋肉内）投与される。別の非限定的な例では、動物は、第１の投与量で１つのウイルスベクター、第２の投与量で第２のウイルスベクター、及び第３の投与量で第３のウイルスベクターを投与される。

ＶＩＩ．シナモン抽出物アジュバント
本明細書に開示される組成物のいくつかの実施形態に含まれるアジュバントは、シナモン油などのシナモン由来生成物を含むことができる（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２００６／０２７５５１５号「Ａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍａｎａｔｕｒａｌｃｉｎｎａｍｏｎｅｘｔｒａｃｔ」を参照のこと）。特定のシナモン由来アジュバントは、抽出によって、または抽出組成物を分画することによって生成される組成物に関する。特定の実施形態は、シナモン樹皮（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ種）の水性抽出物に関するが、他の極性溶媒、例えばアルコール及びグリコールなどを使用してもよい。抽出物中または抽出物の画分中の１つ以上の化合物を処理して沈殿物を形成してもよい。例えば、抽出物の活性抗ウイルス画分は、２８０ｎｍで１５～２０ＯＤの吸光度を有する可能性があり、及び／または例えば約１５ＯＤで、１０ｋＤａを超える分子量を有する１つ以上の物質を含み得る。１つの好ましい実施形態では、抗ウイルス活性を有するシナモン樹皮の単離された活性画分は、さらに、以下の化学的性質のうちの１つ以上を有する：
１．ＫＣｌ、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ₂、ＳｒＣｌ₂、ＣｕＣｌ₂、またはＺｎＣｌ₂などの様々な塩化物塩によって沈殿する。
２．２８０ｎｍで１５ＯＤ／ｍｇ．ｃｍの吸光度を示す。
３．０．１ＭＮａＯＨ、または０．１ＭＨＣｌ、または０．１ＭＨ₂ＳＯ₄でのインキュベーション後、ほとんどの活性を維持する。
４．比較的安価で単純な方法で、水溶液、または有機溶液、例えばアルコール溶媒やアセトンに抽出することができる。
５．冷蔵庫内もしくは室温で、安定した粉末として、または溶液中で、長期間（少なくとも２年）維持することができる。
６．熱安定性があるため、少なくとも１３４℃までの温度で滅菌することができる。

有用な抽出組成物は、任意の適切なプロセスによって作製することができる。１つの適切な実施形態は、シナモン樹皮粉末を形成すること、及びシナモン樹皮粉末を含む溶液または懸濁液を形成することを含む。このプロセスは、水性溶媒または有機溶媒のいずれかを使用して適切な溶液を形成することを含み得る。特定の実施形態は水溶液の形成に関するものであり、次いで該溶液を遠心分離し、抗ウイルス活性画分を含む上清を収集することができる。沈殿物はまた、蒸発によって、または沈殿助剤、例えば塩、より具体的には塩化物塩、例えばＫＣｌ、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ₂、ＳｒＣｌ₂、ＣｕＣｌ₂、ＺｎＣｌ₂、またはそれらの組み合わせを加えることによって形成され得る。
沈殿物はさらに分画または精製することができる。そのようなプロセスの１つがクロマトグラフィープロセスである。例えば、沈殿物をｐＨ約７の水に溶解することができる。溶液をセファロースカラムに加え、緩衝剤と糖類で溶出することができる。より具体的なプロセスは、ｐＨ７．０の０．０２Ｍのリン酸緩衝剤を使用して溶液を形成すること、０．１５ＭのＫＣｌまたは０．０８ＭのＭｇＣｌ２を添加することによって沈殿物を形成すること、沈殿物を水またはｐＨ７．０の０．０１Ｍのリン酸緩衝剤に溶解すること、沈殿物溶液をセファロース４Ｂカラムに加えること、ならびにリン酸緩衝液及びガラクトースを使用して段階的に溶出を実行することを含み、活性抗ウイルス物質は０．１５Ｍのガラクトースでカラムから溶出する。

１つの好ましい実施形態では、シナモン抽出物は、以下のプロセスを使用して得られる：
（ｉ）シナモン樹皮を粉末に粉砕し、それを水性緩衝剤中で撹拌して溶液を得ることと、
（ｉｉ）溶液を遠心分離し、上清を分離することと、
（ｉｉｉ）例えば塩化物塩などの塩を導入して沈殿物を得ること。
このプロセスは、以下のステップをさらに含み得る：
（ｉｖ）上記のステップ（ｉｉｉ）で得られた沈殿物を水または本質的に中性のｐＨの緩衝剤に溶解することと、
（ｖ）溶液をセファロースまたはＳｅｐｈａｄｅｘカラムで分離することと、
（ｖｉ）適切な緩衝剤及び様々な濃度の糖類、好ましくはガラクトースで溶液を溶出して、抗ウイルス画分を得ること。

別の好ましい実施形態では、シナモン抽出物は、シナモン樹皮、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ種から、以下の方法を使用して得られる：
（ｉ）樹皮を粉末に粉砕することと、
（ｉｉ）０．０１Ｍまたは０．０２Ｍ、ｐＨ７．０の水性リン酸緩衝剤中で樹皮を攪拌することと、
（ｉｉｉ）遠心分離により上清を分離し、粗中和抽出物として使用することと、
（ｉｖ）０．１５ＭのＫＣｌまたは０．０８ＭのＭｇＣｌ₂を使用して粗抽出物中の有効成分を沈殿させることと、
（ｖ）沈殿物を水またはｐＨ７．０の０．０１Ｍのリン酸緩衝剤に溶解することと、
（ｖｉ）溶液をセファロース４Ｂのカラムにロードした後、リン酸緩衝剤と様々な濃度のガラクトースで段階的に溶出することと、
（ｖｉｉ）０．１５Ｍのガラクトースによってカラムから活性抗ウイルス物質を溶出すること。

栄養補助組成物及び／または医薬組成物は、有効量の抽出液、その分離した画分、沈殿物、該沈殿物を含む組成物、及び／またはそれらの組み合わせのいずれかを使用して、薬学的または栄養学的に許容される担体を添加することによって、形成することができる。そのような組成物はまた、本明細書に開示されるように、ペプチド、核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組成物のうちの１つまたは２つ以上を含むことができる。このような組成物はまた、少なくとも１つの追加の治療または栄養補助成分などの他の成分を含むことができる。
そのように形成された化合物及び／または組成物は、抗ウイルス活性を有する。一般に、ウイルスは、アフリカ豚熱ウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、コロナウイルス、ヘパドナウイルス、ポックスウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、フィロウイルス、ラブドウイルス、及びブニヤウイルスなどのエンベロープウイルスであり得る。したがって、開示された実施形態はまた、それを必要とする対象に、治療有効量のシナモン抽出物組成物、シナモン抽出物沈殿物組成物、または本明細書に開示される１つ以上のＡＳＦＶペプチドと組み合わせた場合のそのような組成物を投与することを含むウイルス感染の治療方法に関する。そのような組成物は、経口、経鼻、非経口、皮下、及び／または筋肉内などの当業者によって理解される任意の適切な方法によって投与することができる。

特定の開示された実施形態は、免疫化のための中和ウイルスを産生するための方法、及び中和ウイルスを使用して産生される中和ウイルスワクチンに関する。そのような一実施形態は、ＡＳＦＶなどの天然ウイルスを、有効量のシナモン抽出物組成物及び／またはシナモン抽出物沈殿物組成物と接触させることを含む。中和されたウイルスを含むワクチン製剤は、上記のように対象に投与することができる。
シナモン樹皮の分離された活性画分は、２８０ｎｍで１５ＯＤ／ｍｇ・ｃｍ³の吸光度を示し得る。活性画分は、０．１ＭのＮａＯＨまたは０．１ＭのＨＣｌなどの酸または塩基中でのインキュベーション後も活性を維持する。そのような活性成分を含む固体の活性画分及び溶液は、室温以下で、数年などのかなりの期間、保管することができる。活性沈殿物画分は熱安定性があり、１００℃を超える温度、場合によっては少なくとも１３４℃までの温度で滅菌できる。

本発明の組成物は、感染した赤血球細胞を、赤血球に事前吸着されたウイルスの活性から保護し得る。したがって、本発明のシナモン抽出物は、ウイルスがすでに事前吸着された細胞の効果的な治療と見なすことができる。さらに、本発明のシナモン抽出物の細胞への事前吸着は、その後のウイルス感染から細胞を保護するのに予防効果を有する可能性がある。加えて、本発明の組成物は、本明細書に開示される１つ以上の組成物のシナモン抽出物及び／または１つ以上の他の成分に事前吸着された（この１つ以上の組成物は次に細胞と接触される）ウイルスの活性から感染赤血球細胞を保護する。
本発明はまた、本発明のシナモン抽出物を薬学的または栄養学的に許容される担体と一緒に含む、栄養補助組成物または医薬組成物であり得る組成物に関する。組成物は、液体、固体、または半固体の状態であり得る。
さらに、本発明は、有効成分として有効量のシナモン抽出物を、医薬組成物または栄養補助組成物に適した担体と一緒に含む、感染症の治療のための医薬組成物または栄養補助組成物に関する。

本発明はさらに、ウイルス感染に苦しむ対象を治療するための方法に関する。この方法は、そのような治療を必要とする対象に、本明細書に開示される有効量の組成物を投与することを含む。ウイルス感染は、好ましくは、エンベロープウイルス感染、より好ましくは、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、コロナウイルス、ヘパドナウイルス、ポックスウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、フィロウイルス、ラブドウイルス、またはブニヤウイルス科のウイルスであり、最も好ましくは、ウイルス感染は、トリインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス（本明細書では「センダイウイルス」とも呼ばれる）、ＮＤＶウイルス（パラミクソウイルス）、ＨＩＶウイルス、ＨＳＶ－１ウイルス、ＨＳＦＶウイルス、ＡＳＦＶ、ＴＩＬＶ（オルトミクソウイルス）、及びＫＨＶ（ヘルペスウイルス）から選択されるウイルスによって引き起こされる。
活性物質は、以下の３つのステップによって単離された：ａ）樹皮を市場で購入し、粉末に粉砕された後、水性リン酸緩衝剤０．０１Ｍ～０．０２Ｍ、ｐＨ７．０中で一晩撹拌した。上清を遠心分離によって分離し、粗中和抽出物として使用した；ｂ）粗抽出物中の活性物質を、ＫＣｌ０．１５Ｍまたは０．０８ＭのＭｇＣｌ₂によって沈殿させ、沈殿物を、水または０．０１Ｍのリン酸緩衝剤、ｐＨ７．０（ＣＥｐｐｔ）に溶解した；ｃ）この溶液をセファロース４Ｂのカラムに入れ、リン酸緩衝剤と様々な濃度のガラクトースで段階的に溶出した。活性抗ウイルス物質は、０．１５Ｍのガラクトースによってカラムから溶出することができる。

赤血球凝集価（ＨＡＵ）は、４％の洗浄したヒト赤血球を使用して測定できる。ウイルス溶血活性は、最初に遊離ウイルスを１ｍｌの４％の洗浄したヒト赤血球に室温で１５分間付着させ、次に感染細胞を３７℃で３時間インキュベートした後、遠心分離することによってｉｎｖｉｔｒｏで試験した。ウイルスの溶血活性は、５４０ｎｍでの上清の吸光度を測定することによって決定される。
特定の実施形態では、シナモン抽出物沈殿物を水または０．０１Ｍのリン酸緩衝剤に溶解し、ｐＨ７．０のリン酸緩衝剤０．０１Ｍで前洗浄した１０ｍｌのセファロース４Ｂカラムに添加することができる。カラムを緩衝剤で洗浄した後、ガラクトース０．１５Ｍ、０．３Ｍ、及び様々な濃度のアセトニトリルで段階的に溶出することができる。活性抗ウイルス物質は、０．１５Ｍのガラクトースまたは分画ＩＩによってカラムから溶出された分画ｂにおいて見出された。

様々な量の粗抽出物をインフルエンザＡＰＲ８ウイルスの２５６ＨＡＵ試料とインキュベートして、ウイルスの溶血活性に対する阻害効果を試験した。ウイルスの溶血活性は、２５０μｇの粗抽出物によって完全に阻害された。
様々な量の粗抽出物をセンダイウイルスの２５６ＨＡＵ試料とインキュベートして、ウイルスの溶血活性に対する阻害効果を試験した。ウイルスのみ、または粗抽出物のみを対照として使用した。ウイルスの溶血活性は、２５０μｇの粗抽出物によって完全に阻害された。
シナモン抽出物画分は水に対して透析される。活性成分は、分子量１０ＫＤａ以上（透析バッグのカットオフ値）であることが確認された。

Ｉｎｖｉｖｏ抗ウイルス活性は、マウスを使用して決定される。マウスに、１２８ＨＡＵのインフルエンザＡウイルスのみ、または２５０μｇの粗抽出物と混合したインフルエンザＡ、または粗抽出物のみ、を含む２５０μｌのＰＢＳを注射した。ウイルスのみに感染したマウスは体重が減り、ほとんどが７～１０日以内に死亡した。ウイルスと粗抽出物の混合物を注射されたマウスは、粗抽出物のみを注射されたマウスと同等の体重増加を続けた。
マウスは、６４ＨＡＵのセンダイウイルスのみ、１２５μｇの粗抽出物と混合したウイルス、または粗抽出物のみ、を含む５０μｌの水を吸入させた。マウスの体重を２～３日間隔で測定した。ウイルスのみに感染したマウスは体重が減り、ほとんどが７～１０日以内に死亡した。ウイルスと粗抽出物の混合物で鼻腔内処理したマウスは回復し、体重が増加した。各群には１０匹のマウスが含まれた。
マウスに、室温で３０分間、２５０μｇのシナモン抽出物阻害剤とプレインキュベートした１２８ＨＡＵのインフルエンザＡＰＲ８を注射した。マウスの体重を２～３日ごとに３週間測定した。阻害剤とプレインキュベートしたウイルスに感染したマウスでは死亡は発生しなかった。
ＨＳＶ１の１００ＰＦＵアリコートを、本発明による５０μｇのシナモン抽出物沈殿物と混合した。ＨＳＶのみを含む細胞を分離し、プレートから洗浄した。５０μｇのシナモン抽出物沈殿物と混合したＨＳＶを含む細胞は影響を受けなかった。これは、本発明の抽出物がＶｅｒｏ細胞をＨＳＶ－１感染から保護することを立証した。

試験はまた、阻害と、本発明によるシナモン抽出物及び／またはシナモン抽出物沈殿物の量の増加との間に直接的な相関関係があることを立証した。
また、マウスは、１２５μｇのシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物と２０分間プレインキュベートされた３２ＨＡＵのセンダイウイルスに感染しているか、またはウイルス感染直後にシナモン抽出物もしくはシナモン抽出物沈殿物で処理される。阻害剤で治療されたマウスは感染後８日で体重が増加し始めたが（Ｐ＝０．０１７）、阻害剤で処理されなかった対照群は体重が減少し続けた。
マウスは、１２５μｇのシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物と混合された３２ＨＡＵのセンダイウイルスで鼻腔内に免疫された。対照群は水のみを与えられた。免疫化の３週間後、両方の群のマウスに６４ＨＡＵのセンダイウイルスのみを感染させた。免疫化されたマウスは、その後のウイルス感染の影響を受けず、体重が増え続けた（Ｐ＝０．０１３）。
マウスは、シナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物と混合されたセンダイウイルスによって経口または皮下のいずれかで免疫された。ウイルスとシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物の３回目の投与の２週間後、対照マウスと同様に、両方の群のマウスに８０ＨＡＵのセンダイウイルスを感染させた。免疫化されたマウスは、その後のウイルス感染の影響を受けず、体重が増え続け、経口投与と皮下投与の間に違いは観察されなかった。

ＨＩＶ－１活性は、細胞培養におけるシンシチウム形成のモデルを使用して、ＭＴ２細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）で試験される。２０～１２０μｌアリコートのシナモン抽出物沈殿物０．５ｍｇ／ｍｌを、室温で最終容量２００μｌのＲＰＭＩ培地で５０μｌウイルスと共に５分間インキュベートした。各混合物９０μｌを２回ずつ細胞に加えた。３日後、シナモン抽出物沈殿物のない対照ウェルの９５～１００％でシンシチウムが観察され、他のウェルと比較して１００％の感染力として機能した。ただし、８～１０μｌでのシナモン抽出物沈殿物８～１０μｇは、ウイルスを完全に中和した。
ＶＮＦによるトリインフルエンザＨ９Ｎ２の阻害は、以前に行われたように、ｉｎｖｉｔｒｏ溶血アッセイによって試験された（ＢｏｒｋｏｗａｎｄＯｖａｄｉａ，１９９４，１９９９）。インフルエンザウイルスの溶血活性（赤血球からのヘモグロビンの放出）をヒト赤血球において調べた。洗浄した希釈赤血球を、ウイルスのみ、またはシナモン抽出物もしくはシナモン抽出物沈殿物と室温で２０分間プレインキュベートしたウイルスと混合した。ＰＢＳで洗浄して過剰なウイルスを除去した後、ｐＨ４．６の０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝剤２００μｌを３分間添加してウイルスを赤血球と融合させた。次に、混合物をＰＢＳで洗浄し、遠心分離し、０．８ｍｌのＰＢＳ中で３７℃で３時間インキュベートした。インタクトな赤血球を遠心分離によって除去し、各試料の上清からの３００μｌのアリコートをＥＬＩＳＡプレートのウェルに入れて、５４０ｎｍでＥＬＩＳＡプレートリーダーにおける吸光度測定を行った。ウイルスの溶血活性は、本発明によるシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物によって用量依存的に中和された。
シナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物も、遊離ウイルスと同様に、感染細胞に付着した後のトリインフルエンザウイルスの溶血活性を阻害した。
ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）の血球凝集活性も試験された。本発明による１０ｍｇのシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物とのウイルス（１０８ＥＩＤ５０）のプレインキュベーションは、血球凝集阻害をもたらした。

シナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物によるＩｎ－ｖｉｖｏ（Ｉｎ－ｏｖａ）トリインフルエンザＨ９Ｎ２の中和もまた試験した。４．５ｍｇの本発明によるシナモン抽出物沈殿物及び１０７ＥＩＤ５０のインフルエンザＨ９Ｎ２を含む１ミリリットルを室温で２０分間インキュベートした後、この混合物からの１０倍希釈液を調製した。各希釈液０．１ｍｌを、１０個の発育ニワトリＳＰＦ卵の各尿膜腔に注入した。ウイルスのみまたはシナモン抽出物沈殿物の希釈液を対照として使用した（各群１０個の卵）。シナモン抽出物沈殿物は、ウイルス感染力を５ｌｏｇ減少させ、同様の割合で胚生存率を増加させた。
シナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物によるＩｎｖｉｖｏニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）の中和もまた試験した。５ｍｇの本発明によるシナモン抽出物沈殿物及び１０８ＥＩＤ⁵⁰のニューカッスル病ウイルスを含む１ｍｌを室温で２０分間インキュベートした後、この混合物からの１０倍希釈液を調製した。各希釈液０．１ｍｌを、１０個のニワトリＳＰＦ卵の各尿膜腔に注入した。ウイルスのみ及びシナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物のみを対照として使用した。シナモン抽出物またはシナモン抽出物沈殿物は、ウイルス感染力を５ｌｏｇ減少させ、同様に胚生存率を増加させた。
シナモン抽出物沈殿物と組み合わせたＮＤＶのワクチン接種後のヒヨコの血清力価を検証した。第１の群のｉｎｏｖｏワクチン接種は、胚発生の１８日目に、１ｍｇのＶＮＦとプレインキュベートした１０５．３ＥＩＤ⁵⁰のＮＤＶを含む０．１ｍｌのＰＢＳをＳＰＦニワトリ卵に注射することによって実施した。第２の群は１～２日後に眼内ワクチン接種を受けた。ワクチン接種されていないヒヨコを対照として使用した。血液試料を定期的に採取し、血清力価を段階希釈した各血清の血球凝集阻害アッセイによって決定した。ｉｎｏｖｏワクチン接種後の血清力価は、眼内ワクチン接種と同じくらい良好であった。

ＶＩＩＩ．実施例
以下の実施例は、本開示のある特定の特徴及び／または実施形態を例証するために提供される。これらの実施例は、本開示を記載された特定の特徴または実施形態に限定するものとして解釈されるべきではない。特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨に含まれるその中の変更及び他の使用は、当業者に生じるであろう。

実施例１
ペプチドの予測及び合成
この例では、ＡＳＦＶに対して免疫原性の推定ペプチドを予測し、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏの両方における有効性研究のためにペプチドを合成する方法について説明する。
ＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＭＫ１２８９９５．１）の完全なゲノムを、ヨークシャー、ランドレース、及びデュロックのブタ類品種系統の既知のＳＬＡクラスＩ対立遺伝子に関連するＣＤ８＋エピトープについてスクリーニングした。候補ペプチドは、４つの基準に従って評価した：（１）ＳＬＡクラスＩ分子に対するペプチドの予測される結合親和性；（２）陽性応答物を濃縮する方法としての推定エピトープの高密度クラスター内の位置；（３）ＳＬＡ対立遺伝子のカバー率及び高頻度に存在する対立遺伝子の優先順位付け；（４）ソースタンパク質の性質（免疫原を優先する）。２１２，３９４の推定ペプチドのうち２，２７２をさらに評価するために選択した（図１）。

最初に、ヨークシャー、ランドレース、及びデュロックの品種系統で見つかった合計４９のＳＬＡ対立遺伝子が特定され、ＭＨＣクラスターツールを使用して２９のスーパータイプに機能的にクラスター化した。機能的オーバーラップの場合、ペプチド結合予測において使用するために、所与のスーパータイプから１つの代表的な対立遺伝子を選択した（代表的な対立遺伝子は表３に太字で示される）。代表的な対立遺伝子の選択は、クラスターマッピング分析によって生成された予測精度値に基づいた。ＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株プロテオーム全体（１７９のオープンリーディングフレーム生成物）を使用して、ＳＬＡクラスＩ分子に結合すると予測されるペプチドを特定するためにコンピュータ分析を実施した。ＮｅｔＭＨＣｐａｎ－４．０アルゴリズムは、ｉｎｓｉｌｉｃｏ由来の結合親和性情報と、ＭＳデータ由来の溶出リガンドを統合することにより、ＭＨＣクラスＩ分子とのペプチド相互作用を予測する（Ｊｕｒｔｚ，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１９９（９）：３３６０－３３６８，２０１７）。したがって、ＮｅｔＭＨＣｐａｎ－４．０アルゴリズムは、ＡＳＦＶに対して免疫原性であると予測されるペプチドを生成する可能性がある。このアルゴリズムは、表３に太字で示されている２９の代表的な対立遺伝子のそれぞれについて、ＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＭＫ１２８９９５．１）の１７９のオープンリーディングフレームに由来する８、９、１０、または１１アミノ酸長のペプチド（合計２１２，３９４ペプチド）の結合親和性を予測するために使用された。２１２，３９４ペプチドのうち、３１，８６８ペプチドが１つ以上のスーパータイプの対立遺伝子をカバーしていた（図１）。

ＳＬＡ－１＊０４０１、ＳＬＡ－２＊０４０２、ＳＬＡ－３＊０４０２、ＳＬＡ－１＊０７０２、及びＳＬＡ－２＊０５０２対立遺伝子は、デュロック、ヨークシャー、及びランドレースの品種系統内を含むブタ類集団において非常に高頻度に見られる。コンピュータによって決定された３１，８６７のペプチドは、これら５つの一般的な対立遺伝子のカバー率について試験され、合計２，５５９のペプチドが、５つの対立遺伝子のうち少なくとも３つをカバーしていた。評価するためのペプチドの数をさらに減らすために、２，５５６のリストから、（ヨークシャー、ランドレース、及びデュロックの品種系統に関連する４９のＳＬＡ対立遺伝子のうち）一般に少なくとも１５の対立遺伝子をカバーするペプチドのみを選択した。この１，１９０のペプチドリストは、サブセットＣ（カバー率によって選択されたペプチド）として示された。
ＳＬＡクラスＩ分子に結合すると予測された３１，８６８のペプチドは、イスラエル生物学研究所で開発されたＨｏｔＳｐｏｔｓプログラムパッケージを使用して実施されたクラスターマッピング分析においてさらに使用された。クラスターは、最小８アミノ酸長（最短の予測ペプチド長）で最大２５アミノ酸長のペプチドとして定義した。クラスターには２つ以上のペプチドが含まれ、各ペプチドは別のペプチドとオーバーラップまたはタンデムになっている。マッピング分析により、３１，８１５の固有ペプチドを含む９，６５４のクラスターが生成された（クラスター領域間のオーバーラップによる重複の除去後）。クラスター密度は単位長あたりのエピトープ数として定義及び計算され、得られた密度は０．１１～１．５６の範囲であった。高密度（１．２１～１．５６）クラスターに位置するペプチドを、さらなる分析のために選択した。５２４の選択されたペプチドはサブセットＨ（ホットスポットから選択されたペプチド）として指定した。

特定のＡＳＦＶタンパク質は既知の免疫原であり、及び／またはブタ類における免疫調節及び／または病原性に関与している。したがって、１７のそのようなＡＳＦＶタンパク質（合計２，６６６のペプチド）に由来する８～１１アミノ酸長のペプチドを、対立遺伝子のカバー率について評価した。ヨークシャー、ランドレース、及びデュロックの品種系統に関連する５つの高頻度の対立遺伝子の少なくとも１つと、４９のＳＬＡ対立遺伝子の少なくとも６つをカバーするペプチドを、さらなる特性評価のために選択した。これらの７５０ペプチドは、サブセットＡ（抗原から選択されたペプチド）として示された。
実験的評価のための推定エピトープの最終リストは、上記の３つのサブセット（サブセットＣ、Ｈ、及びＡ）から集められた。冗長性（２つ以上のサブセットに共通のペプチド、またはサブセット内で冗長なペプチド）を除去した後、最終的なリストは２，２７２の固有のペプチドで構成された（図１）。

ペプチドは、１つ以上の合成化学的方法を使用して合成することができ、及び／または１つ以上の組換え技術を使用する細胞内合成から得ることができる。この例では、ＡＳＦＶに対して免疫原性であると予測されるペプチドは、第１のアミノ酸のＣ末端がポリアクリルアミドなどの活性化された固体支持体に結合する固相法を使用して合成される。入ってくるアミノ酸のカルボキシル基は、成長しているアミノ酸鎖のＮ末端に結合している（Ｃ－Ｎ合成）。段階的合成により、各ペプチド鎖に一度に１つずつアミノ酸が追加される。化学基は、ペプチド合成中の非特異的反応をブロックするために使用される。入ってくるアミノ酸のＣ末端カルボン酸はカルボジイミドを使用して活性化され、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）はアミノ酸カップリング中のラセミ化のリスクを減らすために使用される。所与のペプチドの合成の完了時に、保護基が酸分解を使用して除去される。合成されたペプチドは逆相クロマトグラフィーを使用して精製され、９０％未満の純度が実証される。

実施例２
ペプチド検証
この例では、ＡＳＦＶに対して免疫原性の推定ペプチドをスクリーニングするために有効なｉｎｖｉｔｒｏ法について説明する。この例で説明されているペプチドは、バイオインフォマティクス法を使用して予測され、次いで、実施例１で説明されている化学的合成法を使用して生成される。この例で説明されているｉｎｖｉｔｒｏ選択プロセスを使用すると、潜在的なエピトープの数が減り、最も有望な候補のみの実行可能数をさらに評価することができるようになる。
ＡＳＦＶに対して免疫原性であると予測される合成ペプチドは、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて末梢血リンパ球に対してスクリーニングされ、これにより、ペプチドへの反応において、事前に曝露されたリンパ球（ＡＳＦＶに曝露されたブタ類から収集されたリンパ球）からのインターフェロン分泌物の検出（単一細胞レベルで）が可能になる。末梢血リンパ球は、低用量の弱毒化ＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株で以前にチャレンジされた、または生きたＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱに曝露されたブタ類から収集された。ブタ類にチャレンジするために使用されたＡＳＦＶは、初代ブタ肺胞マクロファージで増殖し、ｑＰＣＲ及び血球吸着アッセイを使用して定量化した。

インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）を検出するためのＥＬＩＳｐｏｔアッセイをマイクロプレートで実施した。すぐに使用できるブタＩＦＮ－γＥＬＩＳｐｏｔアッセイキットは、複数の供給業者から市販されている。ブタＩＦＮ－γに特異的な抗体をＰＶＤＦで裏打ちされたマイクロプレートにプレコートした。所与の合成ペプチドで刺激されたリンパ球（ＡＳＦＶに事前に曝露された）をマイクロプレートのウェルにピペットで移し、刺激された細胞によって分泌されたＩＦＮ－γを各細胞のすぐ近くに固定化された抗体によって捕捉した。洗浄により細胞をウェルから除去し、ＩＦＮ－γに結合した固定化抗体をビオチン化検出抗体、続いてストレプトアビジンにコンジュゲートしたアルカリホスファターゼと共にインキュベートした。固定化された抗体が刺激された細胞によって分泌されたＩＦＮ－γに結合したウェルの各位置に、濃い青から黒色の沈殿物が形成された。得られたスポットは、この目的のために設計された自動プレートリーダーを使用してカウントした。
ＡＳＦＶに対して免疫原性であると予測された各ペプチドのＥＬＩＳｐｏｔアッセイ結果の分析により、この研究で設定された特定のしきい値を超える強力な免疫応答を生成する候補ペプチドの数が大幅に少なくなった。これらの候補は、ブタ類におけるＡＳＦＶに対する免疫応答を刺激する、またはブタ類をＡＳＦＶに対して免疫化するための組成物をさらに開発するための、最も有望なペプチドと考えられている。

この研究では、２つの分析が実施された：生物情報学的に同定された候補ペプチドの２，２７２を全て評価した「フルスクリーン」と、プールあたり８または９のペプチドを含むペプチドのプールを使用して実施した「プールスクリーン」である。フルスクリーンは、９Ｈ（農場Ｈの動物９）及び１４Ｓ（農場Ｓの動物１４）で示される２頭のブタ類から収集されたリンパ球を使用して実施した。陰性対照（ＮＣ）バックグラウンドを使用して、許容しきい値と厳密しきい値を次のように計算した：
許容しきい値（ＰＴ）＝培地の平均＋２＊ＳＴＤＥＶ＿Ｐ
厳密しきい値（ＳＴ）＝培地の平均＋５＊ＳＴＤＥＶ＿Ｐ
式中、「培地の平均」は培地のみのウェル内のスポットの平均数を示し、ブタ類のプレートごとに個別に計算され、「ＳＴＤＥＶ＿Ｐ」は、母集団全体に基づく標準偏差を示す。各ブタ類について計算されたしきい値を表４に示す。「陽性」ペプチド（すなわち、しきい値を超えるスポット数を持つペプチド）は、さらなる開発及び実験分析のための最も有望なペプチドと見なされた。

表５は、動物１４Ｓ及び９Ｈから収集されたリンパ球を使用して、生物情報学的に同定された２，２７２のペプチド全てのフルスクリーンにおいて同定された陽性ペプチドの数を示す。フルスクリーンにおいて同定された陽性ペプチドは、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果（各ペプチドについてカウントされたスポット数）と共に、付録ＩＩ（動物１４Ｓ）及びＩＩＩ（動物９Ｈ）に示される。動物１４Ｓと動物９Ｈに共通する許容しきい値を超えていると同定された陽性ペプチドが１３個である一方、ブタ類９Ｈに固有のものが４６個、ブタ類１４Ｓに固有のものが１９８個であった。厳密しきい値を超える共通の陽性ペプチドはなく、ブタ類１４Ｓに固有のものが１４個、ブタ類９Ｈに固有のものが７個であった。

最初のプールスクリーニングは、２，２７２個のペプチドから選択された８～９個のペプチドのプールを使用して行われ、３Ｈ、５Ｈ、６Ｈ、７Ｈ、８Ｈ、２Ｓ、７Ｓ、１０Ｓ、１４Ｓと表示された９頭のブタ類のリンパ球を使用した。この最初のプールスクリーニングでは、許容しきい値を超える２３８個の「陽性」ペプチドプール（すなわち、しきい値を超えるスポット数を持つペプチドプール）と、厳密しきい値を超える１２８個のペプチドプールが同定された。表６は、各ブタ類において同定された陽性ペプチドプール（それぞれ８または９個のペプチドを含む）の数を示す（しきい値は表４において各ブタ類について示されている）。

表７は、１頭以上の動物において陽性と同定されたプール数を示す。

許容しきい値を超える２３８個の陽性プールのうち３３個を、さらなる分析のために選択した。これらの３３個のプールのうち、２２個が、選択された８頭のブタ（３Ｓ、５Ｓ、１４Ｓ、６Ｈ、７Ｈ、２Ｓ、７Ｓ、及び１０Ｓ）のうち少なくとも５頭で交差反応性を示したために選択され、８個のプールが、スクリーニングされた合計１５頭のブタのうち７頭において交差反応性を示したために選択され、３個のプールが、フルスクリーンにおいてブタ１４Ｓと反応することが示されている少なくとも３個の個々のペプチドがそれぞれ含まれているために選択された。３３個の陽性プールの合計２７６個のペプチドを、陽性対照としてコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を使用して、ＥＬＩＳｐｏｔスクリーニングを介して個別に評価した（図２及び３）。これらの２７６個のペプチドのうち、２０１個は許容しきい値を超えていると同定され（付録ＩＶ）、２０１個のペプチドのうち、１２５個は厳密しきい値を超えていると同定された（図３、付録ＶＩＩＩ）。さらに、厳密しきい値を超えていると同定された７７個のペプチドは、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて２０個以上のスポットを生成した（図１、付録Ｖ）。これらの７７個のペプチドのうち、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて最も多くのスポットを生成した１８個のペプチドを「トップ」ペプチドと指定した（図１、付録ＶＩ）。

実施例３
免疫原性構築物のアセンブリ及び発現
この実施例は、配列番号２～２２７３の１つ以上のペプチド、以下のこの実施例で定義される１つ以上の「ドメイン」、及び／または１つ以上のＡＳＦＶ免疫原性タンパク質をコードする１つ以上の完全長もしくは部分長アミノ酸配列を含むアミノ酸構築物のアセンブリ及び発現について記載している。
実施例２に記載のように、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて厳密しきい値を超えていると同定された７７個のペプチドは、ウェルあたり２０個以上のスポットを生成した（図１、付録Ｖ）。これらの７７個のペプチドは、ＡＳＦＶタンパク質内のそれらの位置にマッピングされた（付録Ｖ－ＶＩ）。７７個のペプチドのうち４４個が、以下のＧｅｎＢａｎｋ受託番号を有する７つのＡＳＦＶタンパク質ＡＹＷ３４０１１．１（Ａ２３８Ｌ，ＩκＢ様アンキリンリピートを含む；図４；配列番号２３６６～２３６７）、ＡＹＷ３４００４．１（Ａ２２４Ｌ，ＩＡＰ様タンパク質ｐ２７；図５；配列番号２３６８～２３６９）、ＡＹＷ３４００１．１（ＭＧＦ＿５０５～７Ｒ；図６；配列番号２３７０～２３７１）、ＡＹＷ３４０１０．１（ＭＧＦ＿３６０～１５Ｒ；図７；配列番号２３７２～２３７３）、ＡＹＷ３４０５２．１（亜鉛フィンガータンパク質Ｂ３８５Ｒ；図８；配列番号２３７４～２３７５）、ＡＹＷ３４００２．１（ＭＧＦ＿５０５－９Ｒ；図９；配列番号２３７６～２３７７）、及びＡＹＷ３３９６３．１（ＭＧＦ＿１１０－３Ｌ；図１０；配列番号２３７８～２３７９）内にクラスター化される（付録ＶＩＩ）。この実施例における「ドメイン」は、７つのＡＳＦＶタンパク質内のペプチドクラスタリングの領域（「ホットスポット」とも呼ばれる）である。

付録ＶＩＩから選択された１つ以上のペプチド、１つ以上のＡＳＦＶドメイン（配列番号２３３１～２３３５に示される「ホットスポット」）、及び／または１つ以上の完全長及び／または部分長ＡＳＦＶ免疫原性タンパク質（配列番号２３２３～２３２９及び／または配列番号２３３９～２３４５の核酸に示される）の様々な組み合わせは、配列番号２３１０～２３３０の発現構築物にアセンブリされた。各構築物は、ウエスタンブロット分析を介して発現を検出するためにＣ末端にヒスチジンタグ（Ｈｉｓ－タグ）、ライセートでの発現検出のためにＮ末端リンカー配列（ＧＳＳＧ）とＨｉＢｉＴ配列（ＧＳＧＷＲＬＦＫＫＬＳ）を含んだ。ペプチドを含む特定の構築物はまた、個々のペプチド配列間のスペーサー配列（ＧＰＧＰＧまたはＡＡＹ）を含む。７つのＡＳＦＶタンパク質（付録ＶＩＩ）内でクラスター化することが見出された４４個のペプチドから選択されたペプチド配列を含む構築物には、発現をサポートするためにＮ末端にＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、またはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）配列も含まれた。例示的なＳｕｍｏ及びＭＢＰ配列は、それぞれ配列番号２３３６（及び２３３７に対応する（参照により本明細書に組み込まれるＮＰ＿４１８４５８．１に対応する））に提供されている。ＭＢＰ融合タンパク質を含む構築物の場合、ｐＭＡＬ－ｃ２ベクターのＭＢＰ配列を使用して、ＭＢＰをツイストベクターに合成的にクローニングした。Ｓｕｍｏ融合タンパク質を含む構築物の場合、ＣｈａｍｐｉｏｎｐＥＴＳＵＭＯベクター（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）のＳｕｍｏ配列を使用して、Ｓｕｍｏをツイストベクターに合成的にクローニングした。ＨＬＴタンパク質は、ＢａｃｉｌｌｕｓＳｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＥ２ｐ（配列番号２３３８）のリポイルドメインに、Ｎ末端Ｈｉｓタグ及び最適化されたタバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位を付加したものである。Ｂ．ＳｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＥ２ｐ（配列番号２３３８）のリポイルドメインに関する追加情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐａｃｋｍａｎｅｔａｌ．，Ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｌｉｐｏｙｌａｎｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｓｕｂｕｎｉｔ－ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｓｉｎｔｈｅｌｉｐｏａｔｅａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｔｈｅｐｙｒｕｖａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｃｏｍｐｌｅｘｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９８８，２５２：７９－８６に見出すことができる。ＨＬＴ融合タンパク質、及び天然変性領域を含むタンパク質の溶解性を高めることができる同様の融合タンパク質に関する追加情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｅｂｅｄｉｋｅｒ＆Ｄａｎｉｅｌｉ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｎｅ－ｔｏ－ａｇｇｒｅｇａｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ，２０１４，５８８（２）：２３６－２４６に見出すことができる。構築物５５及び５６は、仮性狂犬病ウイルスベクターにおいて使用するためのツイストクローニングベクターで購入した。

各構築物は、２２℃及び３７℃でＥ．Ｃｏｌｉにおいて発現させた。各構築物は独立してポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コンピテントＥ．Ｃｏｌｉを熱ショック法を用いて形質転換させた。簡単に説明すると、１００μＬのコンピテント細胞を氷上でチューブに移した。所定の構築物を含むプラスミドをチューブに加え、混合物を氷上で４℃でインキュベートし、続いて４２℃で４５秒、氷上で２分間インキュベートした。室温のＳＯＣ培地（０．９ｍＬ）をチューブに加え、シェーカー内で３７℃で１時間から９０分間インキュベートした。次に、形質転換された細胞をプレーティングした（プレートあたり１００μＬ）。プレートには、使用するベクターに応じて適切な選択した抗生物質を含めることができる。
２２℃での細胞増殖は培養上清から発現産物を収集できるように可溶性発現を促進するが、３７℃での増殖は、細胞ペレットの成分として収集できる封入体における構築物の発現を促進する。各構築物の発現レベルは、培養上清及びペレット化細胞からタンパク質を単離することによって評価した。簡単に説明すると、封入体中のタンパク質は、次のプロトコルを使用して細胞から単離された：細胞ペレットを最初にＴｒｉｔｏｎＸ－１００で、２番目にＴｒｉｔｏｎＸ－１１４で、３番目に１％のＣＨＡＰＳ試薬で、４番目に６モルの尿素で洗浄した。次に、ペレットを凍結し、使用前に－８０℃で保管した。

培養上清及び細胞ペレットから収集されたタンパク質は、クマシーブルー染色及び免疫ブロッティングを使用して評価した。タンパク質を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用して分離した。ゲルをクマシーブルーで染色してイメージングした後、タンパク質をＰＶＤＦメンブレンに転写し、抗Ｈｉｓ抗体を使用したウエスタンブロッティングで検出した。図１１～３４は、２２℃（図１１～２１）または３７℃（図２２～３４）のいずれかでＥ．ｃｏｌｉにおいて発現した５４の構築物のそれぞれについて、ゲル染色及びウエスタンブロッティングの結果を、各構築物の予想される分子量及び特定の１つ以上のタグと共に示す。１～５４と標識された構築物の配列は、配列番号２３１０～２３３０に提供されている。構築物１～５４にはそれぞれ検出目的でＮ末端Ｈｉｓタグが含まれていたが、特定の構築物には、ＨＬＴ、Ｓｕｍｏ、またはＭＢＰなどの構築物配列のＮ末端に直接付加した少なくとも１つの融合タンパク質も含まれていた。融合タンパク質を含む構築物の場合、Ｈｉｓタグは融合タンパク質のＮ末端に付加された。本実施例で試験された構築物には、以下の融合タンパク質が含まれていた：構築物１：ＨＬＴ；２：Ｓｕｍｏ；３：ＨＬＴ；４：Ｓｕｍｏ；５：ＨＬＴ；６：Ｓｕｍｏ；７：ＨＬＴ；８：Ｓｕｍｏ；９：ＨＬＴ；１０：Ｓｕｍｏ；１１：融合タンパク質なし；１２：ＨＬＴ；１３：Ｓｕｍｏ；１４：ＭＢＰ；１５：融合タンパク質なし；１６：ＨＬＴ；１７：Ｓｕｍｏ；１８：ＭＢＰ；１９：融合タンパク質なし；２０：ＨＬＴ；２１：Ｓｕｍｏ；２２：ＭＢＰ；２３：融合タンパク質なし；２４：ＨＬＴ；２５：Ｓｕｍｏ；２６：ＭＢＰ；２７：融合タンパク質なし；２８：ＨＬＴ；２９：Ｓｕｍｏ；３０：ＭＢＰ；３１：融合タンパク質なし；３２：ＨＬＴ；３３：Ｓｕｍｏ；３４：ＭＢＰ；３５：融合タンパク質なし；３６：ＨＬＴ；３７：Ｓｕｍｏ；３８：融合タンパク質なし；３９：ＨＬＴ；４０：Ｓｕｍｏ；４１－４７：ＨＬＴ；４８－５４：Ｓｕｍｏ。
クマシーブルー染色ゲル及び／またはウエスタンブロットを示す図１１～３４のそれぞれにおいて、「Ｍ」はバンド分子量を表すマーカーレーンを示し、「Ｓ」は細胞培養上清から収集されたタンパク質を表し、「Ｐ」は細胞ペレットから収集されたタンパク質を表す。

表８には、評価された５４の構築物のそれぞれの発現所見の要約が提供される。表８の列２は、所与の発現構築物が検出されたところ（細胞ペレット内または培養上清／可溶性画分内）を示している。ウエスタンブロッティングにより、主に細胞ペレット内のＥ．Ｃｏｌｉでの構築物発現に起因するタンパク質生成物が検出された。タンパク質は、構築物４１～４７の培養上清において検出されたが、同じ構築物の細胞ペレットよりも低レベルであった。構築物１、３、６、９、１０、１１、１３、１６、２４、２７、２８、及び３１は強い発現を示し、さらなる最適化のために選択された。これらの構築物を、今回は自己誘導培地（ＡＩ）とＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ（ＴＢ）の２種類の培地において、Ｅ．ｃｏｌｉでの発現について再度評価した。表８の「最適化のための構築物」の列は、評価した各構築物の発現の定性的評価（強い発現または弱い発現）を、その構築物のＥ．ｃｏｌｉでの発現のための最適培地（ＡＩ及び／またはＴＢ）と共に提供する。培地最適化研究における強い発現に基づいて、ｉｎｖｉｖｏ検証研究のために構築物がさらに選択された。特定の構築物はそれらの融合タンパク質（ＭＢＰ、Ｓｕｍｐ、またはＨＬＴ）のみが異なるため、それ以外で配列同一性を共有する所与の構築物の群について、構築物ごとに１つの融合タンパク質のみを検証研究に選択した。

実施例４
組成物投与とｉｎｖｉｖｏでの分析
この実施例は、ブタ類におけるＡＳＦＶに対する免疫応答を誘導し、ＡＳＦＶに対してブタ類を免疫化（ワクチン接種）するための、配列番号２～２２７３の１つ以上のペプチド及び／または配列番号２３１０～２３３０の１つ以上の構築物を発現するウイルスベクターを含む１つ以上の組成物の能力を評価することを目的としたｉｎｖｉｖｏ検証研究について記載している。
選択されたベクター、この実施例では仮性狂犬病ウイルスベクターによって発現されるペプチドは、実施例２に記載のＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用してブタ末梢血リンパ球で測定された特定のしきい値を超える免疫応答を生成するペプチドの能力に基づいて（１）配列番号２～２７３３から選択され、及び／または実施例３に記載されている発現レベルに基づいて（２）配列番号２３１０～２３３０から選択される。

ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果に基づいて、最も有望な１０の候補ペプチドが選択される。各ペプチドを個別に発現する仮性狂犬病ウイルスベクターが生成され、これらのベクターを含むワクチン組成物も生成される。ブタ類での最初の試験では、液相ブロッキングＥＬＩＳＡで測定した場合、１０種類の組成物のいくつかは適切な体液性免疫応答を誘導する。次に、適切な体液性免疫応答を誘導した組成物の各ペプチドを発現する新しい仮性狂犬病ウイルスベクターが生成される。新しいベクターを含む２つの組成物が生成される：１つはアジュバント添加、もう１つはアジュバント添加されていないが、それ以外は同じ成分を含む。
同様に、配列番号２３１０～２３３０の５つの最も有望な候補構築物を、構築物５５及び５６と共に、発現解析に基づいて選択した。各構築物を個別に発現する仮性狂犬病ウイルスベクターが生成され、新しいベクターを含む組成物が生成される：１つはアジュバント添加、もう１つはアジュバント添加されていないが、それ以外は同じ成分を含む。

ブタ類において免疫応答を刺激し、ＡＳＦＶチャレンジに対する保護を提供する組成物の能力が評価される。生成されたウイルスベクターごとに、２つの群のブタ類が筋肉内または鼻腔内にワクチン接種される。第１の群はウイルスベクターを含むアジュバント化されていない組成物を与えられ、第２の群はウイルスベクターを含むアジュバント化された組成物を与えられる。各群のワクチン接種されたブタ類の１つのサブセットは、最初の投薬後、例えば（最初の）ワクチン接種の２８日後（ｄｐｖ）に、ある間隔で同じ組成物の２回目の用量を投与される。ワクチン接種されたブタ類の第２のサブセットは、最初の投薬後、例えば１８０ｄｐｖの、異なる間隔で２回目の用量が投与される。ワクチン接種されたブタ類の第３のサブセットは、２８ｄｐｖで２回目の用量が投与され、１８０ｄｐｖで３回目の用量が投与される。処理されたブタ類の免疫応答を評価するために、ワクチン接種前（０日目）、及び最初の投与の４、７、１４、２８、５６、１８０、２０８、２７０、及び２９８日後に、ブタ類から血清試料を収集する。さらに、母体由来の抗体（ＭＤＡ）力価を研究するために、ワクチン接種された雌ブタから生まれた２１日齢及び４２日齢の子ブタから血清試料を収集する。
各群のワクチン接種されたブタ類のサブセットは、最初のワクチン投与から５０日後に、初代ブタ肺胞マクロファージで増殖したＡＳＦＶＣｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ株を用いてチャレンジされ、ｑＰＣＲ及び血球吸着アッセイを用いて定量化した。血清試料は、チャレンジされていない（ワクチン接種のみ）ブタ類と同じスケジュールでチャレンジされたブタ類から収集される。

この研究の全ての動物の血清試料は、ペプチド特異的抗体の検出のために液相ブロッキングＥＬＩＳＡを使用して分析される。ＩＦＮ－γは４ｄｐｖから血清中で検出可能である。０、２８、及び１８０日目にワクチン接種されたブタ類は、最高のペプチド特異的抗体価２９８ｄｐｖを示すが、ワクチンを１回だけ投与したブタ類（０日目）では、２７０日目までに抗体を検出できない。アジュバントワクチンを投与されたブタ類は、アジュバントを含まないワクチンを投与されたブタ類よりも高いペプチド特異的抗体力価を有する。免疫化された雌ブタから生まれた子ブタは２１日目に高い受動抗体価を示すが、力価は４２日目までに低下し、免疫化された雌ブタから生まれた子ブタは生後約２ヶ月までにブースターを受ける必要があることを示唆している。チャレンジされた動物では、ＡＳＦＶゲノムと感染性ウイルスはチャレンジ後５日目と１０日目に検出可能である。対照（ワクチン未接種）ブタは急性ＡＳＦの症状を呈すが、ワクチンを接種した動物は症状を呈さないか、軽度にとどまる。ＡＳＦＶゲノムは、ワクチン接種されたブタ類でのチャレンジの６０日後に検出可能であるが、レベルは６０日目までに大幅に低下した。感染性ウイルスは、チャレンジ後３５日目までにチャレンジされたブタ類では検出できない。全てのワクチン接種された動物は組成物によく耐え、組成物に起因する負の副作用は観察されない。この研究の結果は、ＡＳＦＶ感染からブタ類を保護するためのワクチンの開発において、１つ以上のＡＳＦＶ特異的ペプチドを発現するウイルスベクターの使用を支持している。

実施例５
組成物投与とｉｎｖｉｖｏでの分析
この実施例は、付録Ｖの１つ以上のペプチドの及び／または付録ＶＩの１つ以上のペプチドを発現するウイルスベクターを含む１つ以上の組成物が、ブタ類においてＡＳＦＶに対する免疫応答を誘導し、ブタ類をＡＳＦＶに対して免疫化する能力を評価するために使用したｉｎｖｉｖｏ検証試験について説明するものである。
ペプチドは、この試験において使用するために化学的に合成された。この試験の主な目的は、異なるアジュバントを含む合成ペプチドを含む組成物を使用して、プライムブーストワクチン接種後の細胞性免疫応答を評価することであった。さらに、動物のＣＤ８応答を評価し、いくつかの承認されたアジュバントを使用した動物の免疫応答を比較した。

１．研究デザイン
１．３頭の妊娠した雌ブタが別々のケージの動物施設に配置した。施設内で約３０頭の新生子ブタを分娩させた。
２．分娩の３日後、子ブタは各子ブタごとに右脚に鉄注射（例えば、Ｆｅｒｒａｊｅｃｔ２００，ＥｕｒｏｖｅｔＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈ）をした。
３．分娩の２週間後、子ブタの体重を測定し、最も体重の多い子ブタを実験用に選択した。子ブタは５つの群に分け、１群３頭で、各群は品種のばらつきを大きくするために各母ブタから１頭ずつとする。
４．分娩の３週間後、ＥＬＩＳｐｏｔ最適化の試験には含まれていなかった３頭の子ブタから血液を採取した。
５．４週齢の１２頭の耳に印を付けたブタに以下のワクチンを接種した。

群１：ブタ３頭ずつに、ＥｍｕｓｉｇｅｎＰ中の付録Ｖの７７個のペプチドを含む組成物を左脚に筋肉内にワクチン接種し、Ｃａｒｂｉｇｅｎ＋ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ中の付録Ｖの７７個のペプチドを含む組成物を鼻腔内にワクチン接種した。
群２：ブタ３頭ずつに、ＥｍｕｓｉｇｅｎＰ中の付録ＶＩの１８個のペプチドを含む組成物を左脚に筋肉内にワクチン接種し、Ｃａｒｂｉｇｅｎ＋ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ中の付録ＶＩの１８個のペプチドを含む組成物を鼻腔内にワクチン接種した。
群３：ブタ３頭ずつに、ＩＳＡ２０１＋Ｑｕｉｌ－Ａ＋Ｒ８４８＋ＴＤＢ中の付録Ｖの７７個のペプチドを含む組成物を左脚に筋肉内にワクチン接種し、Ｃａｒｂｉｇｅｎ＋ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ＋ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）中の付録Ｖの７７個のペプチドを含む組成物を鼻腔内にワクチン接種した。
群４：ブタ３頭ずつに、ＩＳＡ２０１＋Ｑｕｉｌ－Ａ＋Ｒ８４８＋ＴＤＢ中の付録ＶＩの１８個のペプチドを含む組成物を左脚に筋肉内にワクチン接種し、Ｃａｒｂｉｇｅｎ＋ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ＋ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）中の付録ＶＩの１８個のペプチドを含む組成物を鼻腔内にワクチン接種した。
群５（対照ブタ）：２頭のブタをワクチン未接種の対照として使用した。

６．２回目のワクチン接種（ブースト）は、最初のワクチン接種の３週間後に行われた（ブタあたり同じ投与量）。全血試料は、最初のワクチン接種の３４、３５、５５、５６、６２、及び６３日後の試験中に収集された。６２日目と６３日目の収集は任意選択であり、必要に応じて実施した。
７．全ての採血は、チューブあたり８ｍＬの全血でＣＰＴチューブに行われた。群１及び群３用の３つのＣＰＴチューブ。群２、４、及び５用の２つのＣＰＴチューブ。

２．動物の研究－動物の選択と同定
３頭の妊娠した雌ブタが別々のケージの動物施設に配置した。施設内で約３０頭の新生子ブタを出産させた。出産後３日目に、各子ブタの右脚に鉄注射を投与した。表９に示すように、３週齢の１４頭の耳に印を付けたブタにワクチン接種した。

３．材料
３．１アジュバント
ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧ：水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルジョンの製剤用に開発された鉱油ベースのアジュバントである。これは、特定の濃縮された軽質鉱油と、マンニトールと植物由来の精製オレイン酸から得られた高度に精製された乳化剤がベースとなっている。ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧには、動物由来の成分は含まれていない。ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧを含むワクチン製剤は、短期及び長期の免疫を誘導する。従来のダブルエマルジョンと比較して、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧエマルジョンは安定しており、粘度が低く、注射が容易である。
ワクチン調製：
ワンステッププロセスで１００ｇのワクチンを調製するために：
１．ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧ５０ｇ
２．水性抗原培地５０ｇ
大量に調製する場合、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧ密度は２０℃で約０．８３である。
混合する前に、各相を３１℃まで加熱する。安定した調製物は、水性媒体を低せん断攪拌下でＭＯＮＴＡＮＩＤＥＩＳＡ２０１ＶＧに混合することによって得られる（温度を３０℃以上に維持するため）。配合後、エマルジョンを冷却する。

ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標）及びＰＯＬＹＧＥＮ（商標）（Ｃａｒｂｉｇｅｎ）は、ＭＶＰのポリマー型アジュバントである。その粘膜接着特性のために、ＣＡＲＢＩＧＥＮは粘膜（例えば、鼻腔内）に不活化された抗原を提示するために特に適用可能である。不活化された抗原とＣＡＲＢＩＧＥＮを組み込んだ鼻腔内ワクチンは、ウマ、ブタ、及び小動物において成功裏に使用される。また、それはＰＣＶ２抗原のアジュバント添加において並外れた性能を示している。
使用説明：
１．酸に安定な抗原を使用して、１～１０％ｖ／ｖのＣＡＲＢＩＧＥＮを抗原に加え、１～８時間よく混合し、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを約７．０に慎重に上げる。＊さらに１２～２４時間混合する。必要に応じて、ｐＨを６．８～７．２に再調整する。
２．酸に不安定な抗原を使用して、ミキサーを備えた容器に１０％ｖ／ｖのＣＡＲＢＩＧＥＮを添加する。１０ＮのＮａＯＨを使用してＣＡＲＢＩＧＥＮのｐＨを調整し、抗原が損傷することなく耐えることのできるｐＨまで下げる。＊抗原が耐えることのできるｐＨが低いほど、アジュバント特性が向上する。アジュバントが適切なｐＨに調整されたら、総抗原量の約１０％を加え、少なくとも３０分間混合する。ｐＨは下がる場合がある。ｐＨは再調整し、残りの抗原を添加する。最終ｐＨを６．８～７．２の間に調整する。少なくともさらに１２時間（一晩）混合し、必要に応じてｐＨを再調整する。充填する前にｐＨを再確認する。粘度を下げるために、少量のＮａＣｌまたはＰＢＳを抗原またはＣＡＲＢＩＧＥＮに添加してもよい。
＊注意：ｐＨを７．５よりも上げないこと。ＨＣｌまたは他の酸を添加してｐＨを下げると、ＮａＯＨを過剰に添加した場合に、アジュバントの効果が低下する可能性がある。

ＭＶＰ製品であるＥＭＵＬＳＩＧＥＮ（登録商標）は、ブタの筋肉内注射と皮下注射の両方でＵＳＤＡによって承認された水中油型アジュバントを含む最初のワクチンにおいて使用された。１９８２年の承認以来、４５ヶ国で世界的に使用されており、全ての動物種で一貫して安全かつ効果的であるという確かな実績がある。
使用説明：
１．ほとんどの抗原について、ＥＭＵＬＳＩＧＥＮ－Ｐを１０％～２０％（ｖ／ｖ）で使用することが推奨される。
２．ＥＭＵＬＳＩＧＥＮ－Ｐは、抗原に添加する前に、最大２時間穏やかに混合する必要がある。抗原への添加中は、標準的な装置（例えば、ライトニングミキサーまたはマグネチックスターラー）を使用して、２～２４時間穏やかに混合することが推奨される。
３．充填中も穏やかに生成物を混ぜ続け、均一性を確保する。
４．生成物含有ＥＭＵＬＳＩＧＥＮ－Ｐは、多種多様な動物に筋肉内または皮下投与することができる。
５．最終的なワクチンは、保管中に上部にクリーミング層ができるのが普通である。これは、抗原性または免疫原性に悪影響を及ぼさない。全ての成分を再混合するには、注入前にバイアルを単純に反転させるだけで十分である。

Ｑｕｉｌ－Ａ（登録商標）アジュバントは、世界のワクチンアジュバント市場をリードするＢｒｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒがＧＭＰで生産し、一貫性と免疫刺激能を確保する独自のプロセスで精製したサポニンアジュバントである。Ｑｕｉｌ－Ａアジュバントは、多種多様な動物用ワクチンにおいて、ならびにヒト及び動物への応用を目的とした免疫学的研究において使用される。Ｑｕｉｌ－Ａアジュバントは、南米の樹木ＱｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａＭｏｌｉｎａからのサポニンの水抽出可能な画分を含む。
原液の調製（１０ｍｇ／ｍｌ）
１．Ｑｕｉｌ－Ａアジュバント１００ｍｇを量る。清潔な容器に入れる。
２．Ｑｕｉｌ－Ａアジュバント１００ｍｇに蒸留水１０ｍｌを加える。
３．全ての材料が溶解するまで、マグネチックスターラーを使用して混合する。
４．凍結乾燥粉末を溶解した直後に、０．２２ミクロンの滅菌フィルターに通して、クラスＢ環境の層流（クラスＡ）下で滅菌容器に入れる。
５．滅菌ろ過後、Ｑｕｉｌ－Ａアジュバント溶液は使用するまで凍結保存する必要がある。凍結融解サイクルが繰り返されないように、アリコートを準備する。
６．アルカリ加水分解のリスクがあるため、Ｑｕｉｌ－Ａアジュバントを８．５を超えるｐＨにさらさないこと。
ＴＤＢ：トレハロース－６，６－ジベヘネート（ＴＤＢ）は、マイコバクテリアの細胞壁成分であるトレハロース６，６’ジミコレート（ＴＤＭ、コードファクターとしても知られている）の非毒性合成類似体である。

原液懸濁液の調製（１ｍｇ／ｍｌ）
１．１００μＬのＤＭＳＯを１ｍｇのＴＢＤＶａｃｃｉＧｒａｄｅに添加し、６０℃で加熱し（約１５～３０秒）、ボルテックスする。
２．再懸濁したら、すぐに９００μＬの滅菌生理食塩水（提示のもの）またはリン酸緩衝生理食塩水（Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含まないＰＢＳ）を加え、６０℃で１０～１５分間加熱し、３０秒間ボルテックスしてホモジナイズする。
３．４℃で保存するか、またはすぐに使用できるように緩衝剤を使用して希釈液を調製する。再懸濁した生成物は、４℃で６ヶ月間保存できる。各使用の前に、懸濁液を室温に戻し、３０秒間ボルテックスして均質化する。
Ｒ８４８（レシキモド）：低分子量のイミダゾキノリン化合物は、強力な抗ウイルス及び抗腫瘍活性を持つ免疫応答修飾因子である。Ｒ８４８は、ＦＤＡ承認の臨床ワクチン試験でアジュバントとして評価される。

滅菌原液の調製（１ｍｇ／ｍＬ）
１．５ｍｇのＲ８４８ＶａｃｃｉＧｒａｄｅバイアルに５ｍＬのエンドトキシンフリーの生理用水を加えて、１ｍｇ／ｍＬの溶液を得た。
２．上下にピペッティングして溶液を混合する。
ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ：環状ジグアニル酸一リン酸（ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ）は、細菌によって産生される細胞内シグナル伝達分子である。ｃ－ｄｉ－ＧＭＰの投与は、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏで強力な免疫応答を誘発する可能性がある。

滅菌原液の調製（１ｍｇ／ｍＬ）
１．１ｍｇのｃ－ｄｉ－ＧＭＰＶａｃｃｉＧｒａｄｅバイアルに１ｍＬのエンドトキシンフリーの生理用水を加えて、１ｍｇ／ｍＬの溶液を得た。
２．上下にピペッティングして溶液を混合する。
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）ＨＭＷ：ポリイノシン酸－ポリシチジル酸は、ウイルス感染に関連する分子パターンである二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の合成類似体である。天然及び合成の両方のｄｓＲＮＡは、１型インターフェロン（ＩＮＦ）及び他のサイトカイン産生を誘導することが知られている。Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）はＴＬＲ３によって認識される。

滅菌原液の調製（１ｍｇ／ｍＬ）
１．１０ｍｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）バイアルに１０ｍＬのエンドトキシンフリーの生理用水を加えて、１ｍｇ／ｍＬの溶液を得た。
２．上下にピペッティングして溶液を混合する。
３．混合物を６５～７０℃で１０分間加熱する。適切なアニーリングを確保するために、溶液を室温で１時間冷却する。

３．２ペプチド
ＥＬＩＳｐｏｔスクリーニングで同定された７７個のＡＳＦＶ陽性ペプチドは、ＪＰＴ（Ｂｅｒｌｉｎ）によって少なくとも７０％の純度で化学的に合成された。これらの７７個の陽性ペプチド（それぞれがＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて２０個以上のスポットを生成した）のうち、１８個のペプチドがＥＬＩＳｐｏｔスコアに関して「トップ」の陽性として定義された（図１～３）。この試験では、２つのペプチド混合物が試験された。最初の混合物には７７個のペプチド全てが含まれており、２番目の混合物には１８個の「トップ」ペプチドのみが含まれていた。
各ペプチドの原液は、５ｍｇ／ｍＬの濃度で生成された。１００μＬのＤＭＳＯと９００μＬの注射用水に溶解したペプチド５５４を除いて、全てのペプチドを１ｍＬの注射用水に溶解した。２つのストックプレートを調製し、ワクチンが調製されるまで－７０℃で凍結した。作業は無菌状態で行った。

４．ワクチン調製：
研究中、ワクチン接種は、各群ごとのワクチン接種指示に従って、群ごとに２回実施された（ワクチン接種の時点については表１０及び１１を参照）。さらに、ワクチンの調製手順は、各ワクチン接種イベントごとに説明される。

群１－ＥｍｕｌｓｉｇｅｎＰワクチン中の７７個のペプチド
筋肉内ワクチン：１２５μｇの各ペプチドをＥｍｕｌｓｉｇｅｎＰアジュバントと混合して、総量を５ｍＬ（５回分）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量で各ペプチドから２５μｇが含まれていた。１ｍＬのワクチンを各ブタの左脚に注射した。

群２－ＥｍｕｌｓｉｇｅｎＰワクチン中の１８個のペプチド
筋肉内ワクチン：１２５μｇの各ペプチドをＥｍｕｌｓｉｇｅｎＰアジュバントと混合して、総量を５ｍＬ（５回投与）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量で各ペプチドから２５μｇが含まれていた。１ｍＬのワクチンを各ブタの左脚に注射した。

群３－ＩＳＡ２０１とＱｕｉｌ－ＡとＲ８４８とＴＤＢワクチン中の７７個のペプチド
筋肉内ワクチン：１２５μｇの各ペプチドを、ＩＳＡ２０１（５０％，ｗ／ｗ）、１５０μｇのＱｕｉｌ－Ａ、５０μｇのＲ８４８、及び５０μｇのＴＤＢと混合して総量を５ｍＬ（５回投与）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量で各ペプチドから２５μｇが含まれていた。１ｍＬのワクチンを各ブタの左脚に注射した。

群４－ＩＳＡ２０１とＱｕｉｌ－ＡとＲ８４８とＴＤＢワクチン中の１８個のペプチド
筋肉内ワクチン：１２５μｇの各ペプチドを、ＩＳＡ２０１（５０％，ｗ／ｗ）、１５０μｇのＱｕｉｌ－Ａ、５０μｇのＲ８４８、及び５０μｇのＴＤＢと混合して総量を５ｍＬ（５回投与）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量で各ペプチドから２５μｇが含まれていた。１ｍＬのワクチンを各ブタの左脚に注射した。

群１及び３－ＣａｒｂｉｇｅｎとＣ－Ｄｉ－ＧＭＰワクチン中の７７個のペプチド
鼻腔内ワクチン：１２０μｇの各ペプチドを１０％（ｖ／ｖ）のＣａｒｂｉｇｅｎ、５０μｇのｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、及び５０μｇのｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と混合して、総量を８ｍＬ（８回分）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量に１５μｇの各ペプチドが含まれていた。ＭＡＤＮａｓａｌＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＤｅｖｉｃｅ（Ｔｅｌｅｆｌｅｘ）を使用して、０．５ｍＬのワクチンを各ブタの鼻孔に投与した（ブタあたり合計１．０ｍＬ）。

群２及び４－Ｃａｒｂｉｇｅｎとｃ－ｄｉ－ＧＭＰワクチン中の１８個のペプチド
鼻腔内ワクチン：１２０μｇの各ペプチドを１０％（ｖ／ｖ）のＣａｒｂｉｇｅｎ、５０μｇのｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、及び５０μｇのｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と混合して、総量を８ｍＬ（８回分）にした。最終用量には、１ｍＬの注入量に１５μｇの各ペプチドが含まれていた。ＭＡＤＮａｓａｌＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＤｅｖｉｃｅ（Ｔｅｌｅｆｌｅｘ）を使用して、０．５ｍＬのワクチンを各ブタの鼻孔に投与した。

５．採血手順：
表１０に示す採血時点（ワクチン接種後）で、群１～４の動物から全血（８ｍＬ）をＣＰＴチューブに採取した。
１．作業は可能な限り無菌状態で行った。調製：室温でアルコール７０％、ガーゼ、バキュテイナ（２０Ｇ）、ＣＰＴチューブ（容積：８ｍＬ）。
２．スネアで動物を拘束し、壁または角にしっかり閉じ込める；あるいは、ブタ類をスリングに入れたり、小さいブタをＶトラフに保持したり、入れたりしてもよい。
３．必要に応じて清掃し、表面の汚れ及びごみを取り除く。頸動脈の溝の位置を確認し、肩のポイントと胸骨柄のポイントを合わせる。ベベルを上にして、皮膚に対して垂直に針を挿入する。
４．バキュテイナを使用する場合は、針を挿入したら、針を安定させ、バキュテイナチューブをハブに押し込む。静脈に当たっていれば、血液はチューブに自然に流れ込む。充填されたチューブを取り外し、新しいチューブと交換することにより、複数のチューブを充填できる。
５．静脈を見逃した場合は、バキュテイナを付けたまま、血管が貫通するまで慎重に針を刺し直すことができる。血管はかなり深く、針から逃げる可能性がある。通常、動物への苦痛と静脈への潜在的な損傷を最小限に抑えるために、一度に２～３回の試行を行う必要がある。
６．あるいは、針とシリンジを使用することもできる。使用する前に軽く引いて、シリンジのシールを破る。
７．空気を抜き、針をシリンジに取り付けたまま、９０°の角度でしっかりと針を挿入し、シリンジを吸引して挿入を確認し、血液を採取する。
８．採取が完了したら、バキュテイナチューブを取り外す。次に、注射部位に圧力をかけ、針を取り外す。承認されたシャープスコンテナに針を捨てる。
９．ＣＰＴチューブに入れた血液は、室温で保管すること。血液試料は、ＩＩＢＲまたはＰｈｉｂｒｏのメンバーによって１時間以内に収集される。
１０．十分な止血を行うため、３０～６０秒間圧迫すること。

６．包含／除外基準と包含後の削除基準：
包含：病気の徴候のない臨床的及び行動的に健康な動物。動物は最低１週間の順応後に実験を開始した。順応期間中、動物は検査を受け、健康に見え続けた場合にのみ実験を開始した。
除外：実験に関係のない広範囲の負傷及び／または病気を有する動物。ワクチン接種手順による病気（食欲不振など）。
有害事象の報告と記録：ブタは１日２回検査を受けた。有害事象は文書化され、研究責任者に通知された。

７．動物の管理と飼育：
研究で使用された動物の健康状態は、順応期間に入る前、研究の開始点の１週間前に決定された。健康な動物のみが、研究開始前の７日間、実験室条件に順応させた。ブタは群ケージに入れられた（実験群に応じて）。
動物の取り扱いは、国立衛生研究所（ＮＩＨ）及びＩｓｒａｅｌｉＣｏｕｎｃｉｌｆｏｒＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｏｎＡｎｉｍａｌｓのガイドラインに従って実施された。動物は、アクセスが制限された大型動物ユニット（ＢｉｏｔｅｃｈＦａｒｍＳｉｔｅ）内で、コンクリート床の飼育小屋に収容された。飼育小屋は、１日１回、週６日清掃された。
動物には、市販の子ブタ用の飼料、子ブタ用の医療用プレスターター（Ｋｅｆａｒｙｅｏｓｈｕａ’ｆｅｅｄｍｉｌ，Ｋｅｆａｒｙｅｏｓｈｕａ’，Ｉｓｒａｅｌ）を１日２回、１日当たり所定の豚の体重の約２～４％与え、ブタは自動給水弁から供給される飲料水を自由摂取できるようにした。環境条件は、温度を２４±６℃に維持し、相対湿度（ＲＨ）を約３０～７０％、１２時間の明期と１２時間の暗期のサイクルに設定した。ＲＨと温度は毎日記録した。

８．試験担当者の安全性：
この研究で使用された手順は、オペレーターにとってリスクが低いと考えられている。全ての手順は、必要な全ての保護装置を使用して実施した。こぼれたものが浸透するのを防ぐため、フェイスマスクを使用した。
研究生成物の廃棄：Ｂｉｏｔｅｃｈｆａｒｍが承認した手順による。
研究動物の廃棄：Ｂｉｏｔｅｃｈｆａｒｍが承認した手順による。

９．ワクチン接種の評価：
ワクチン接種後のいくつかの時点で、血液をＣＰＴチューブに収集し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を分離して細胞性免疫応答を測定した。細胞（ウェルあたり２．５＊１０⁵、５＊１０⁵、１＊１０⁶）を各ペプチドとインキュベートした。陽性対照はコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）であり、陰性対照は培地のみとした。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイは、ＣＴＬまたはＭａｂＴｅｃｈＩＦＮγ ＥＬＩＳＰＯＴキットを使用して実施した。
開示された発明の原理が適用され得る多くの可能な実施形態を考慮すると、当業者であれば、例示された実施形態は本発明の好ましい例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものと見なすべきではないことを認識することができる。むしろ、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲により定義される。したがって、これらの請求項の範囲及び趣旨に該当する全てのものを本発明者らの発明として主張する。

Claims

配列番号２～２２７３から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド。
前記ペプチドが、
５～５０アミノ酸長、
６～４０アミノ酸長、
８～３０アミノ酸長、
１０～２０アミノ酸長、または
８～１１アミノ酸長である、請求項１に記載のペプチド。
前記ペプチドが、本質的に、配列番号２～２２７３から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチド。
配列番号２３１０～２３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のペプチド。
前記ペプチドが、本質的に、配列番号２３１０～２３３５から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項４に記載のペプチド。
前記ペプチドが、グリコシル化、ＰＥＧ化、脂質化、環化、アセチル化、アミド化、またはコンジュゲートされた、Ｄ－アミノ酸の取り込みを受けた、またはそれらの組み合わせである、請求項１～５に記載のペプチド。
請求項１～６に記載の少なくとも１つのペプチドを含む、免疫原性組成物。
治療有効量のシナモン抽出溶液、前記シナモン抽出溶液の画分、前記シナモン抽出溶液の沈殿物、及び／またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項３に記載の組成物。
アジュバント、担体、少なくとも１つの追加の治療薬、またはそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの追加の成分をさらに含む、請求項７～８に記載の組成物。
前記組成物が、油性アジュバント、水中油型アジュバント、油中水型アジュバント、水中油中水型アジュバント、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、多糖類、誘導体化多糖類、オリゴヌクレオチド、サイトカイン、細菌誘導体、ウイルス誘導体、水酸化アルミニウム、水酸化カリウム、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、サポニン、スクアレン、ゲルアジュバント、またはカルボマー系アジュバントから選択される少なくとも１つの材料を含む、請求項７～９に記載の組成物。
注射、エアロゾル送達、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、またはそれらの組み合わせによる投与のために製剤化された、請求項７～１０のいずれか一項に記載の組成物。
ブタ類への投与のために製剤化された、請求項７～１１に記載の組成物。
２つ以上のペプチドを含む、請求項７～１２に記載の組成物。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号２、３、７、１１、１７、１８、２１、５７、６７、６９、７０、９４、９５、９７、９８、９９、１００、１０２、１０３、１０９、１１０、１１３、１２４、１３８、１３９、１４７、１４９、１５４、１５９、１６１、１６２、１６３、１６９、１７１、１７２、１７９、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９５、１９８、２０１、２０２、２０５、２３１、２３４、２４１、２４７、２５１、２５３、２５７、２６６、２６９、２７０、２７４、２７５、２７８、２７９、２８０、２８３、２８７、２９３、２９４、２９７、３０９、３２１、３２８、３２９、３３０、３３３、３３５、３４３、３４５、３５７、３７０、３７１、３７５、３７９、３８５、３８６、３８９、４２５、４２９、４３５、４３７、４４７、４６２、４６３、４６７、４６９、４７１、４７７、４７８、４８１、５１７、５２７、５５４、５５５、５５７、５５９、５６３、５６９、５７０、５７３、６０８、６０９、６１９、６２１、６２５、６３３、６４６、６４７、６５１、６５５、６６１、６６２、６６５、６７５、６８７、７０１、７０３、７１１、７１３、７２４、７２５、７２６、７３５、７４６、７５０、７５６、７６２、７６９、７７０、７７１、７８４、７８８、７９０、８１０、８１５、８１６、８１８、８１９、８２３、８２５、８２６、８２７、８４２、８４８、８４９、８６０、８６３、８６５、８６９、８７２、８８０、８９６、９０８、９１７、９１８、９２０、９２１、９２３、９２５、９２６、９３１、９３４、９５４、９５５、９６０、９６２、９６３、９７１、９７２、９８６、９９１、１０００、１００６、１００９、１０１０、１０１３、１０２６、１０２８、１０３５、１０４７、１０４８、１０４９、１０６４、１０６５、１０９０、１０９１、１０９２、１０９４、１１０１、１１０２、１１０６、１１０７、１１１８、１１２９、１１３９、１１４１、１１５６、１１８４、１１８７、１１９３、１１９４、１１９６、１２０２、１２０３、１２０４、１２１０、１２２７、１２２８、１２３１、１２３９、１２４８、１２６４、１２６５、１２７６、１２７７、１２７８、１２７９、１２８５、１２８６、１２８７、１２８８、１２９５、１２９６、１３０２、１３１８、１３１９、１３２３、１３２９、１３３８、１３４０、１３４５、１３４７、１３４８、１３６６、１３６８、１３６９、１３７０、１３７２、１３７５、１３７７、１３７８、１３７９、１３８２、１３８５、１３８８、１３８９、１３９０、１３９４、１３９９、１４００、１４１３、１４１５、１４２６、１４３２、１４３６、１４３７、１４３８、１４４１、１４４８、１４５２、１４５４、１４６０、１４６１、１４６８、１４６９、１４７０、１４７１、１４７２、１４８０、１４８２、１４８３、１４８４、１４８５、１４８８、１４９１、１４９２、１４９９、１５００、１５０１、１５０３、１５０７、１５０８、１５０９、１５１０、１５１１、１５１２、１５１４、１５１７、１５１８、１５２３、１５２８、１５３１、１５４１、１５４３、１５４４、１５５６、１５５７、１５６４、１５６６、１５６７、１５７１、１５７３、１５７４、１５７６、１５７７、１５８０、１５９２、１６０１、１６１９、１６２７、１６２８、１６３０、１６３１、１６３３、１６４８、１６４９、１６５１、１６５８、１６６６、１６６８、１６６９、１６８４、１６８５、１６９３、１６９８、１７０１、１７０６、１７１９、１７３６、１７４４、１７４９、１７５０、１７５８、１７５９、１７６０、１７６１、１７７６、１７８５、１８２３、１８２４、１８２８、１８３５、１８３６、１８４０、１８４９、１８５０、１８５２、１８５３、１８６３、１８６４、１８６８、１８７２、１８７３、１８７５、１８７７、１８８０、１８８２、１８９６、１８９７、１９０５、１９０８、１９１１、１９１２、１９１６、１９２３、１９２９、１９４１、１９４２、１９４４、１９４５、１９５３、１９６０、１９６９、１９８２、１９８６、１９８９、１９９１、２０３２、２０３４、２０３６、２０３７、２０３８、２０４４、２０５２、２０５３、２０６１、２０６８、２０７５、２０７６、２０８０、２０８７、２０９２、２０９７、２０９９、２１０３、２１０４、２１１８、２１２５、２１２６、２１２７、２１２８、２１２９、２１３４、２１４４、２１４６、２１５３、２１５９、２１６６、２１７５、２１８３、２１８５、２２０５、２２１１、２２１３、２２１４、２２１８、２２２０、２２２１、２２２２、２２２３、２２２５、２２２８、２２２９、２２３６、２２３９、２２４１、２２４２、２２４５、２２４７、２２５１、２２５２、２２５３、２２５５、２２６２、２２６５、２２６６、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項７～１３のいずれか一項に記載の組成物。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号５６、６４、６６、６９、７０、８４、８５、２４１、２７５、２７８、２７９、２８０、２８３、２８５、２９７、３０９、３２１、３２８、３２９、３３５、３５７、３６９、３８６、４３９、４４７、４４９、４５８、４６７、４６９、４７８、５２３、５３４、５５４、５５７、５６５、５８５、６０７、６０８、６２５、６３３、６３５、６４１、６４７、６５３、７０３、７２４、７２５、７２６、７４３、７４４、７５６、７５７、７６９、７８４、８２７、８３５、８３６、８３９、８４２、８４７、８４８、８４９、８５７、８６０、８６５、８６９、８７２、８８０、８８４、８８８、８８９、８９６、９０６、９０８、９２０、９２１、９２３、９２５、９２６、９３１、９５４、９６０、９６２、９６３、９７１、９７７、１００１、１００６、１０１９、１０２０、１０２４、１０３３、１０４９、１０６５、１０８０、１０９０、１０９１、１１０６、１１０７、１１１１、１１２０、１１２７、１１２９、１１３９、１１４１、１１５０、１１５１、１１５９、１１７２、１１８４、１１８７、１１８８、１１９６、１２０４、１２０５、１２０７、１２１２、１２２７、１２２８、１２６４、１２６５、１２７８、１２７９、１２８７、１２８８、１２９５、１２９６、１３４５、１３４７、１３４８、１３７０、１３７２、１３７５、１３７９、１３８８、１３９０、１３９４、１４００、１４１３、１４３６、１４３７、１４５４、１４５９、１４６１、１４６８、１４７２、１４８３、１４８４、１４８８、１４９１、１４９９、１５０１、１５０３、１５０７、１５０９、１５１０、１５１１、１５１２、１５１４、１５１７、１５１９、１５２３、１５２８、１５３１、１５４３、１５４４、１５５６、１５６６、１５６７、１５７１、１５７３、１５８０、１６１９、１６２７、１６２８、１６３０、１６３１、１６３３、１６４８、１６４９、１６５１、１６５８、１６８５、１６９３、１７０１、１７０６、１７１８、１７３６、１７４９、１７５０、１７５３、１７５９、１７６１、１７６７、１７８３、１８１０、１８１４、１８２３、１８２４、１８２８、１８３０、１８３５、１８３６、１８４０、１８４１、１８５２、１８６４、１８７３、１８７５、１８８０、１９１２、１９２３、１９４１、１９５０、１９５２、１９５５、１９８２、１９８６、１９８９、１９９１、２０３７、２０３８、２０７５、２０９２、２１１８、２１２５、２１２６、２１２７、２１３４、２１３７、２１３９、２１４０、２１４１、２１４２、２１４６、２１５９、２１６６、２１７１、２１７５、２１８１、２１８３、２１８５、２１９３、２１９４、２１９７、２２０５、２２１１、２２１３、２２２２、２２２３、２２２５、２２４１、２２４２、２２５１、２２５２、２２６５、２２６６、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項７～１３のいずれか一項に記載の組成物。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号１、２、３、８、９、１８、２６、３２、３６、３７、６７、６９、７０、８１、８４、８７、８９、９３、９４、９９、１００、１０１、１１８、１２４、１２８、１２９、１５９、１７３、１８０、１８５、１８６、１８７、１９２、１９３、２１０、２２０、２２１、２６５、２６８、２７１、２７２、２７５、２７７、２７８、２７９、２８３、２８４、２８５、２９４、３０２、３０８、３１２、３１３、３４３、３５７、３６０、３６３、３６４、３６５、３６９、３７０、３７１、３７５、３７７、３８６、３９４、４００、４０４、４０５、４３５、４４７、４４９、４５２、４５５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４６７、４６８、４６９、４７８、４８６、４９２、４９６、４９７、５２７、５２９、５４１、５４４、５４７、５４８、５４９、５５３、５５４、５５９、５６１、５７０、５７８、５８４、５８８、５８９、６１９、６２１、６３３、６３６、６３９、６４０、６４５、６４７、６５１、６５２、６５３、６６２、６７０、６８０、６８１、７１１、７１３、７２８、７３１、７３２、７４３、７７３、７９６、８２２、８２８、８８５、８８８、９１４、９２７、９５７、１０１２、１０１９、１０４９、１０６４、１０６９、１０９６、１１０４、１１０６、１１１１、１１４１、１１５６、１１８８、１１９６、１２０３、１２３３、１２４８、１２５３、１２５６、１２８０、１２８２、１２８８、１２９５、１３２５、１３４０、１３４５、１３４８、１３７２、１３７４、１３８０、１４３７、１４４０、１４６４、１４７２、１５１２、１５３１、１５４３、１５５６、１５６０、１５６１、１５８４、１６２３、１６３５、１６５２、１６５３、１６７６、１７１５、１７４０、１７４４、１７４５、１８２３、１８３２、１８３６、１８６０、１８６５、１９１１、１９２４、１９２９、１９５２、１９９１、２０２０、２０２１、２０４４、２０４９、２１１２、２１１３、２１３６、２２０４、２２０５、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項７～１３のいずれか一項に記載の組成物。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号３２、６７、６９、７０、１０１、１２８、１８７、２７８、２７９、３６３、３７７、４００、４０４、４３５、４４７、４４９、４５５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４６７、４６８、４６９、４７８、４８６、４９２、４９６、４９７、５２７、５２９、５４１、５４４、５４７、５４８、５４９、５５３、５５４、５６１、５７８、５８４、５８９、６１９、６２１、６３３、６３６、６３９、６４０、６４５、６５１、６５２、６５３、６６２、６７０、７１１、７１３、７４３、１０４９、１１０６、１１５６、１２４８、１２５３、１２８０、１２８２、１２８８、１４３７、１４４０、１５３１、１５５６、１５６０、１５６１、１５８４、１９９１、２０２１、２１１２、２２０４、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項７～１３のいずれか一項に記載の組成物。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号６７、６９、７０、２７９、４３５、４６１、４６９、４７８、４８６、５４７、５４８、５４９、５６１、５８９、６３９、６５２、６５３、１２５３、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項７～１３のいずれか一項に記載の組成物。
請求項１～９に記載の２～５００ペプチド、
請求項１～９に記載の２～２５０ペプチド、
請求項１～１５に記載の２～１００ペプチド、または
請求項１～１５に記載の８～１５ペプチドを含む、請求項７～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
配列番号２～２２７３から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドをコードする単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号２、３、７、１１、１７、１８、２１、５７、６７、６９、７０、９４、９５、９７、９８、９９、１００、１０２、１０３、１０９、１１０、１１３、１２４、１３８、１３９、１４７、１４９、１５４、１５９、１６１、１６２、１６３、１６９、１７１、１７２、１７９、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９５、１９８、２０１、２０２、２０５、２３１、２３４、２４１、２４７、２５１、２５３、２５７、２６６、２６９、２７０、２７４、２７５、２７８、２７９、２８０、２８３、２８７、２９３、２９４、２９７、３０９、３２１、３２８、３２９、３３０、３３３、３３５、３４３、３４５、３５７、３７０、３７１、３７５、３７９、３８５、３８６、３８９、４２５、４２９、４３５、４３７、４４７、４６２、４６３、４６７、４６９、４７１、４７７、４７８、４８１、５１７、５２７、５５４、５５５、５５７、５５９、５６３、５６９、５７０、５７３、６０８、６０９、６１９、６２１、６２５、６３３、６４６、６４７、６５１、６５５、６６１、６６２、６６５、６７５、６８７、７０１、７０３、７１１、７１３、７２４、７２５、７２６、７３５、７４６、７５０、７５６、７６２、７６９、７７０、７７１、７８４、７８８、７９０、８１０、８１５、８１６、８１８、８１９、８２３、８２５、８２６、８２７、８４２、８４８、８４９、８６０、８６３、８６５、８６９、８７２、８８０、８９６、９０８、９１７、９１８、９２０、９２１、９２３、９２５、９２６、９３１、９３４、９５４、９５５、９６０、９６２、９６３、９７１、９７２、９８６、９９１、１０００、１００６、１００９、１０１０、１０１３、１０２６、１０２８、１０３５、１０４７、１０４８、１０４９、１０６４、１０６５、１０９０、１０９１、１０９２、１０９４、１１０１、１１０２、１１０６、１１０７、１１１８、１１２９、１１３９、１１４１、１１５６、１１８４、１１８７、１１９３、１１９４、１１９６、１２０２、１２０３、１２０４、１２１０、１２２７、１２２８、１２３１、１２３９、１２４８、１２６４、１２６５、１２７６、１２７７、１２７８、１２７９、１２８５、１２８６、１２８７、１２８８、１２９５、１２９６、１３０２、１３１８、１３１９、１３２３、１３２９、１３３８、１３４０、１３４５、１３４７、１３４８、１３６６、１３６８、１３６９、１３７０、１３７２、１３７５、１３７７、１３７８、１３７９、１３８２、１３８５、１３８８、１３８９、１３９０、１３９４、１３９９、１４００、１４１３、１４１５、１４２６、１４３２、１４３６、１４３７、１４３８、１４４１、１４４８、１４５２、１４５４、１４６０、１４６１、１４６８、１４６９、１４７０、１４７１、１４７２、１４８０、１４８２、１４８３、１４８４、１４８５、１４８８、１４９１、１４９２、１４９９、１５００、１５０１、１５０３、１５０７、１５０８、１５０９、１５１０、１５１１、１５１２、１５１４、１５１７、１５１８、１５２３、１５２８、１５３１、１５４１、１５４３、１５４４、１５５６、１５５７、１５６４、１５６６、１５６７、１５７１、１５７３、１５７４、１５７６、１５７７、１５８０、１５９２、１６０１、１６１９、１６２７、１６２８、１６３０、１６３１、１６３３、１６４８、１６４９、１６５１、１６５８、１６６６、１６６８、１６６９、１６８４、１６８５、１６９３、１６９８、１７０１、１７０６、１７１９、１７３６、１７４４、１７４９、１７５０、１７５８、１７５９、１７６０、１７６１、１７７６、１７８５、１８２３、１８２４、１８２８、１８３５、１８３６、１８４０、１８４９、１８５０、１８５２、１８５３、１８６３、１８６４、１８６８、１８７２、１８７３、１８７５、１８７７、１８８０、１８８２、１８９６、１８９７、１９０５、１９０８、１９１１、１９１２、１９１６、１９２３、１９２９、１９４１、１９４２、１９４４、１９４５、１９５３、１９６０、１９６９、１９８２、１９８６、１９８９、１９９１、２０３２、２０３４、２０３６、２０３７、２０３８、２０４４、２０５２、２０５３、２０６１、２０６８、２０７５、２０７６、２０８０、２０８７、２０９２、２０９７、２０９９、２１０３、２１０４、２１１８、２１２５、２１２６、２１２７、２１２８、２１２９、２１３４、２１４４、２１４６、２１５３、２１５９、２１６６、２１７５、２１８３、２１８５、２２０５、２２１１、２２１３、２２１４、２２１８、２２２０、２２２１、２２２２、２２２３、２２２５、２２２８、２２２９、２２３６、２２３９、２２４１、２２４２、２２４５、２２４７、２２５１、２２５２、２２５３、２２５５、２２６２、２２６５、２２６６、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号５６、６４、６６、６９、７０、８４、８５、２４１、２７５、２７８、２７９、２８０、２８３、２８５、２９７、３０９、３２１、３２８、３２９、３３５、３５７、３６９、３８６、４３９、４４７、４４９、４５８、４６７、４６９、４７８、５２３、５３４、５５４、５５７、５６５、５８５、６０７、６０８、６２５、６３３、６３５、６４１、６４７、６５３、７０３、７２４、７２５、７２６、７４３、７４４、７５６、７５７、７６９、７８４、８２７、８３５、８３６、８３９、８４２、８４７、８４８、８４９、８５７、８６０、８６５、８６９、８７２、８８０、８８４、８８８、８８９、８９６、９０６、９０８、９２０、９２１、９２３、９２５、９２６、９３１、９５４、９６０、９６２、９６３、９７１、９７７、１００１、１００６、１０１９、１０２０、１０２４、１０３３、１０４９、１０６５、１０８０、１０９０、１０９１、１１０６、１１０７、１１１１、１１２０、１１２７、１１２９、１１３９、１１４１、１１５０、１１５１、１１５９、１１７２、１１８４、１１８７、１１８８、１１９６、１２０４、１２０５、１２０７、１２１２、１２２７、１２２８、１２６４、１２６５、１２７８、１２７９、１２８７、１２８８、１２９５、１２９６、１３４５、１３４７、１３４８、１３７０、１３７２、１３７５、１３７９、１３８８、１３９０、１３９４、１４００、１４１３、１４３６、１４３７、１４５４、１４５９、１４６１、１４６８、１４７２、１４８３、１４８４、１４８８、１４９１、１４９９、１５０１、１５０３、１５０７、１５０９、１５１０、１５１１、１５１２、１５１４、１５１７、１５１９、１５２３、１５２８、１５３１、１５４３、１５４４、１５５６、１５６６、１５６７、１５７１、１５７３、１５８０、１６１９、１６２７、１６２８、１６３０、１６３１、１６３３、１６４８、１６４９、１６５１、１６５８、１６８５、１６９３、１７０１、１７０６、１７１８、１７３６、１７４９、１７５０、１７５３、１７５９、１７６１、１７６７、１７８３、１８１０、１８１４、１８２３、１８２４、１８２８、１８３０、１８３５、１８３６、１８４０、１８４１、１８５２、１８６４、１８７３、１８７５、１８８０、１９１２、１９２３、１９４１、１９５０、１９５２、１９５５、１９８２、１９８６、１９８９、１９９１、２０３７、２０３８、２０７５、２０９２、２１１８、２１２５、２１２６、２１２７、２１３４、２１３７、２１３９、２１４０、２１４１、２１４２、２１４６、２１５９、２１６６、２１７１、２１７５、２１８１、２１８３、２１８５、２１９３、２１９４、２１９７、２２０５、２２１１、２２１３、２２２２、２２２３、２２２５、２２４１、２２４２、２２５１、２２５２、２２６５、２２６６、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号１、２、３、８、９、１８、２６、３２、３６、３７、６７、６９、７０、８１、８４、８７、８９、９３、９４、９９、１００、１０１、１１８、１２４、１２８、１２９、１５９、１７３、１８０、１８５、１８６、１８７、１９２、１９３、２１０、２２０、２２１、２６５、２６８、２７１、２７２、２７５、２７７、２７８、２７９、２８３、２８４、２８５、２９４、３０２、３０８、３１２、３１３、３４３、３５７、３６０、３６３、３６４、３６５、３６９、３７０、３７１、３７５、３７７、３８６、３９４、４００、４０４、４０５、４３５、４４７、４４９、４５２、４５５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４６７、４６８、４６９、４７８、４８６、４９２、４９６、４９７、５２７、５２９、５４１、５４４、５４７、５４８、５４９、５５３、５５４、５５９、５６１、５７０、５７８、５８４、５８８、５８９、６１９、６２１、６３３、６３６、６３９、６４０、６４５、６４７、６５１、６５２、６５３、６６２、６７０、６８０、６８１、７１１、７１３、７２８、７３１、７３２、７４３、７７３、７９６、８２２、８２８、８８５、８８８、９１４、９２７、９５７、１０１２、１０１９、１０４９、１０６４、１０６９、１０９６、１１０４、１１０６、１１１１、１１４１、１１５６、１１８８、１１９６、１２０３、１２３３、１２４８、１２５３、１２５６、１２８０、１２８２、１２８８、１２９５、１３２５、１３４０、１３４５、１３４８、１３７２、１３７４、１３８０、１４３７、１４４０、１４６４、１４７２、１５１２、１５３１、１５４３、１５５６、１５６０、１５６１、１５８４、１６２３、１６３５、１６５２、１６５３、１６７６、１７１５、１７４０、１７４４、１７４５、１８２３、１８３２、１８３６、１８６０、１８６５、１９１１、１９２４、１９２９、１９５２、１９９１、２０２０、２０２１、２０４４、２０４９、２１１２、２１１３、２１３６、２２０４、２２０５、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号３２、６７、６９、７０、１０１、１２８、１８７、２７８、２７９、３６３、３７７、４００、４０４、４３５、４４７、４４９、４５５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４６７、４６８、４６９、４７８、４８６、４９２、４９６、４９７、５２７、５２９、５４１、５４４、５４７、５４８、５４９、５５３、５５４、５６１、５７８、５８４、５８９、６１９、６２１、６３３、６３６、６３９、６４０、６４５、６５１、６５２、６５３、６６２、６７０、７１１、７１３、７４３、１０４９、１１０６、１１５６、１２４８、１２５３、１２８０、１２８２、１２８８、１４３７、１４４０、１５３１、１５５６、１５６０、１５６１、１５８４、１９９１、２０２１、２１１２、２２０４、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号６７、６９、７０、２７９、４３５、４６１、４６９、４７８、４８６、５４７、５４８、５４９、５６１、５８９、６３９、６５２、６５３、１２５３、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
前記少なくとも１つのペプチドが、配列番号２２７４～２３０９のいずれか１つ以上の核酸配列によってコードされる、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
配列番号２３１０～２３３５から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドをコードする、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
配列番号２～２２７３から選択されるアミノ酸配列を含む、追加の少なくとも１つのペプチドをさらにコードする、請求項２７に記載の単離された核酸分子。
前記核酸がＤＮＡである、前記核酸がＲＮＡである、または前記核酸がＤＮＡ及びＲＮＡの両方を含む、請求項２０～２８に記載の単離された核酸分子。
１つ以上の前記ペプチドの間に位置する１つ以上のスペーサー配列をさらに含み、前記スペーサー配列がＧＰＧＰＧ、ＡＡＹ、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２０～２９に記載の単離された核酸分子。
前記核酸分子が、発現制御配列、選択関連配列、複数のクローニング部位を含む配列、またはそれらの組み合わせに作動可能に連結される、請求項２０～３０に記載の単離された核酸分子。
請求項２０～３１のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
前記ベクターがウイルスベクターであり、前記ウイルスがヘルペスウイルス、アデノウイルス、サーコウイルス、アルファウイルス、オルソポックスウイルス、アブラウイルス、またはポックスウイルスである、請求項３２に記載のベクター。
前記ウイルスが、仮性狂犬病ウイルス、ブタサーコウイルス、シンドビスウイルス、ワクシニアウイルス、ニューカッスルウイルス、またはスイポックスウイルスである、請求項３３に記載のウイルスベクター。
請求項３２～３４に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
前記細胞が、
組換え酵母細胞、
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属もしくはＰｉｃｈｉａ属から選択された組換え酵母細胞、または
ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅもしくはＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓから選択された組換え酵母細胞である、請求項３５に記載の単離された宿主細胞。
前記細胞が、
組換え細菌細胞、
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、もしくはＶｉｂｒｉｏから選択される組換え細菌細胞、または
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ、もしくはＶｉｂｒｉｏａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍから選択される組換え細菌細胞である、請求項３５に記載の単離された宿主細胞。
組成物であって、
請求項２０～３１に記載の単離された核酸分子、請求項３２～３４に記載のベクター、請求項３５～３７に記載の宿主細胞、またはそれらの組み合わせと、
アジュバント、担体、別の治療薬、及びそれらの組み合わせから選択される追加の成分と、を含む、前記組成物。
治療有効量のシナモン抽出溶液、シナモン抽出溶液の分離画分、シナモン抽出溶液からの沈殿物、及び／またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項３８に記載の組成物。
注射、エアロゾル送達、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、またはそれらの組み合わせによる投与のために製剤化された、請求項３８～３９のいずれか一項に記載の組成物。
ブタ類への投与のために製剤化された、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の組成物。
請求項１～４１のいずれかに記載の、有効量の１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせを動物に投与することを含む、方法。
前記動物がブタ類である、請求項４２に記載の方法。
請求項１～４１のいずれか一項に記載の、有効量の１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせの投与の前、同時、または後に、治療薬、弱毒生ＡＳＦＶワクチン、治療有効量のシナモン抽出溶液、シナモン抽出溶液の画分、シナモン抽出溶液の沈殿物、及びそれらの組み合わせを前記動物に投与することをさらに含む、請求項４２～４３に記載の方法。
前記方法が、
前記動物におけるＡＳＦＶによる感染を軽減もしくは予防する、
ＡＳＦに関連する少なくとも１つの症状を軽減もしくは改善する、または
その両方を行う、請求項４２～４４に記載の方法。
注射、エアロゾル送達、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、またはそれらの組み合わせによる、前記１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせの投与を含む、請求項４２～４５に記載の方法。
請求項１～４１に記載の、１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせを含む、容器。
前記容器が、シリンジ、バイアル、チューブ、アンプル、カプセル、またはボトルである、請求項４７に記載の容器。
請求項４７～４８の容器を含むキット。
前記１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせの、その投与に関する指示書、またはその成分の説明書、またはその両方をさらに含む、請求項４９に記載のキット。
前記１つ以上のペプチド、組成物、単離された核酸、ベクター、宿主細胞、またはそれらの組み合わせを、動物に投与するための１つ以上のデバイスをさらに含む、請求項４９～５０に記載のキット。
前記シナモン抽出物の１つ以上の活性抗ウイルス画分が２８０ｎｍで１５～２０ＯＤの吸光度を有する、及び／または分子量が１０ｋＤａより大きい１つ以上の物質を含む、請求項７～１９及び３８～４１に記載の組成物。
ウイルスに感染した対象を治療するための方法であって、
請求項１～６に記載の治療有効量の少なくとも１つのペプチド、
請求項７～１９及び３８～４１のいずれか一項に記載の治療有効量の免疫原性組成物、
請求項３２～３４に記載の治療有効量のベクター、
請求項３５～３７に記載の治療有効量の宿主細胞、またはそれらの組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
シナモン抽出物、前記シナモン抽出物の１つ以上の画分、前記シナモン抽出物の１つ以上の沈殿物、またはそれらの組み合わせを組み合わせて提供することをさらに含む、請求項５３に記載の方法。
提供することが、
前記シナモン抽出物、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の画分、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の沈殿物、またはそれらの組み合わせを形成することと、
（ａ）前記シナモン抽出物、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の画分、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の沈殿物、またはそれらの組み合わせ、ならびに（ｂ）請求項１～６に記載の１つ以上のペプチド、請求項７～１９及び３８～４１に記載の組成物、請求項２０～３１に記載の単離された核酸分子、請求項３２～３４に記載のベクター、請求項３５～３７に記載の宿主細胞、またはそれらの組み合わせ、を含む組成物を形成することと、
（ａ）前記シナモン抽出物、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の画分、前記シナモン抽出物の前記１つ以上の沈殿物、またはそれらの組み合わせ、ならびに（ｂ）請求項１～６に記載の１つ以上のペプチド、請求項７～１９及び３８～４１に記載の組成物、請求項２０～３１に記載の単離された核酸分子、請求項３２～３４に記載のベクター、請求項３５～３７に記載の宿主細胞、またはそれらの組み合わせ、を含む前記組成物を前記対象に提供することと、を含む請求項５４に記載の方法。
ＡＳＦＶウイルス及びシナモン抽出物を含む、中和されたウイルス組成物。
シナモン抽出物で中和されたＡＦＳＶウイルス組成物を提供することと、
前記組成物を対象にワクチン接種することと、を含む方法。
前記対象がブタ類である、請求項５７に記載の方法。