JP2021100406A - リボ核酸の無細胞生産 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、35U.S.C.§119(e)のもとで、2015年3月30日に出願された米国仮出願第62/140,407号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示のいくつかの側面は、ヌクレオチドモノマー−ヌクレオチド一リン酸(NMP)およびヌクレオチド二リン酸(NDP)の組合せへの細胞内ポリマーRNAの分解のための方法および組成物を提供する。Escherichia coli(E.coli)細胞は、25重量%までのRNAを含有し得る。このRNAは、tRNA、rRNAおよびmRNAの3つの形態のうちの1つで、オリゴマー状態で、殆ど全てが存在する。このRNAは解重合されて、RNA生合成のための構成単位として働くことができるモノマーリボヌクレオチドを生産することができる
本開示のいくつかの側面は、ポリマーRNAの形成のための「構成単位」として働くNMPおよびNDPのヌクレオチド三リン酸(NTP)への変換のための方法および組成物を提供する。5’−NMPおよび5’−NDPを5’−NTPへ変換するための精製タンパク質または細胞抽出物を含むプロセスは公知である(例えば、米国特許第6,022,713号であり、参照により本明細書に組み込まれる)。本開示にしたがって、5’−NMPを5’−NDPに変換するために使用され得るNMPキナーゼの非限定的な例を表2に列挙する。当業者には理解されるように、任意の酵素または他の所望のキナーゼ活性を有する薬剤を本発明で使用することができる。いくつかの態様において、アデノシン三リン酸(ATP)またはグアノシン三リン酸(GTP)がリン酸供与体である。
いくつかの態様において、酵素の活性は、例えば、2012年3月1日に公開された米国特許公報第2012/0052547A1号、および、2015年2月12日に公開された国際公開第WO2015/021058A2号に記載されているように、例えば標的タンパク質の分解を使用した制御可能な様式で阻害または低減され、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。)標的化酵素の不活性化の他の手段も本明細書において意図される。
本開示のいくつかの態様は、dsRNAを含むRNAを生産するためのNTPの重合のための方法および組成物を提供する。酵素的に誘導された5’−NTPは、RNA転写生産物を生産するRNAポリメラーゼを用いてRNAに重合される。本開示にしたがって使用され得るRNAポリメラーゼの非限定的な例を表5に列挙する。
本開示のいくつかの側面は、二本鎖RNA(dsRNA)の無細胞生産を対象とする。いくつかの態様において、dsRNA分子は、RNAをコードする配列(例えば、RNA転写物)に作動可能に連結されたプロモーターを含むDNAテンプレートによってコードされる。いくつかの態様において、RNAは、ヒンジドメインを介して連結された2つの相補的ドメインを含む。図3に示す例を参照すると、一本鎖RNA(ssRNA)テンプレートの相補的ドメイン(ドメイン1およびドメイン3)が互いに結合すると、ヒンジドメイン(ドメイン2)はループ様構造を形成する。
いくつかの態様において、dsRNA分子は、単一標的ドメイン(例えば、目的の標的核酸に相補的なドメイン)を含むメッセンジャーRNA(mRNA)をコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含むDNAテンプレートによってコードされる。図4に示す例を参照すると、一本鎖RNA(ssRNA)の生産後、目的のdsRNAを合成するためにRNA依存性RNAポリメラーゼ(RdRP)を使用することができる。いくつかの態様において、ファージφ6から単離されたRdRPを用いてdsRNAを合成する。ファージφ6は、シュードモナス属のメンバーに感染する二本鎖RNAウイルスである。ファージφ6は、最もよく研究されているdsRNAウイルスの1つである。このファージは、RNAテンプレートを用いてRNAを合成し、dsRNA分子を生産することができるRdRPをコードする。φ6RdRPはプライマー分子の存在しないRNAを重合することができるため、ポリメラーゼはテンプレートRNAのみを必要とする(Wright, S. et al, 2012. Journal of Virology. Mar;86(5):2837-49; Van Dijk, AA., et al, 2004. Gen Virol. May;85(Pt 5)、参照により本明細書に組み込まれる)。本明細書において他のウイルス性RdRPも意図される。
上記の細胞リボ核酸の溶解および解重合は、典型的には、5’−リボヌクレオチドのプールを生じる。天然RNAポリメラーゼと異種T7RNAポリメラーゼおよび/またはφ6RdRPとの間のこれらのリボヌクレオチドのプールに対する競合は、いくつかの場合において、所望のRNA生産物の収率を低下させる可能性がある。それにもかかわらず、RNAポリメラーゼはインタクトな細胞の生存に必須である。したがって、天然RNAポリメラーゼ機能を破壊するための少なくとも2つの方法がここに提供される。例えば、本明細書の他の箇所に記載されているように、標的化タンパク質分解は、天然RNAポリメラーゼの主要成分の少なくとも1つの活性を破壊し、RNAポリメラーゼ活性の十分な破壊をもたらすために使用され得る。天然RNAポリメラーゼ機能を破壊する別の例として、T7ファージタンパク質Gp2を発現させることができる。Gp2は、T7ファージによるE.coliの感染後に翻訳される第2のT7ファージタンパク質である。このタンパク質は、宿主RNAポリメラーゼ機能を破壊し、したがって、天然のRNAポリメラーゼとファージポリメラーゼとの間の競合を除去する(Bae, B. et al, 2013. Proc Natl Acad Sci U SA. Dec 3;110(49): 19772-7)。
RNAの無細胞生産の一側面(例えば、dsRNA)は、合成中および合成後の生産物分解の阻害/防止である。すべての生きている生物において、RNA分子を切断して処理する能力は、生存に不可欠である。リボヌクレアーゼまたはRNaseと呼ばれる多くの天然のE.coli酵素は、様々な親和性でRNA分子の解重合を触媒する。RNaseDを含むこれらのRNaseのいくつかは、tRNA成熟に関与し、基質特異性が高く、RNaseを含む他のものは、広範囲のRNAポリマーを解重合することができる。RNaseの非限定的な例、ならびにそれらの同族遺伝子、予測された活性および配列の例を表6に示す。
本開示の「操作された細胞」は、少なくとも1つの操作された(例えば、組換えまたは合成)核酸を含むか、または天然に存在する対応物とは構造的および/または機能的に異なるように改変された細胞である。いくつかの態様において、操作された細胞は、少なくとも1個、少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個の操作された核酸を含む。いくつかの態様において、操作された細胞は、2〜5、2〜10、または2〜20個の操作された核酸を含む。いくつかの態様において、操作された細胞は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20の改変された核酸を含む。操作された核酸を含む細胞は、「操作された細胞」と考えられることを理解されたい。
典型的には、操作された細胞は培養される。「培養」とは、典型的にはその天然環境の外で、制御された条件下で細胞を増殖させるプロセスを指す。例えば、操作された細菌細胞などの操作された細胞は、液体の「培養培地」とも指される液体栄養培地中の細胞懸濁液として増殖させることができる。
典型的には、操作された細胞の培養に続いて、細胞を溶解させる。「溶解」は、例えば、ウイルス、酵素、機械または浸透圧機構によって細胞を分解するプロセスを指す。「細胞溶解物」は、例えば、細胞小器官、膜脂質、タンパク質、および核酸を含む、溶解した細胞の内容物(例えば、溶解された操作された細胞)を含む流体を指す。本開示の細胞溶解物は、本明細書で提供されるように、操作された細胞の任意の集団を溶解することによって生産され得る。
本開示の改変された細胞は、RNA解重合に必要なヌクレアーゼ(単数または複数)を発現し(例えば、内因的に発現する)、所望のRNA産物を分解し得る。本明細書で提供される方法によって生産されるRNAの分解を防止または低減するために、ヌクレアーゼが「標的化」および切断され得るように、それらのタンパク質配列中に部位特異的プロテアーゼ認識配列を含むように、内因性ヌクレアーゼおよび/RNA生産中の不活性化のために使用される。(例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる2012年3月1日に公開された米国特許公報第2012/0052547A1号および2015年2月12日に公開された国際公開第2015/021058号A2を参照)。部位特異的プロテアーゼ認識配列を含むヌクレアーゼは、「プロテアーゼ標的化ヌクレアーゼ」と呼ばれる。プロテアーゼ標的化ヌクレアーゼの切断は、細胞溶解物中の同族の部位特異的プロテアーゼとヌクレアーゼとの接触の結果として生じる。したがって、特定の集団の操作された細胞は、プロテアーゼ標的化ヌクレアーゼまたは他のプロテアーゼ標的化リボヌクレアーゼ(単数または複数)をコードする操作された核酸を含み得る。他の酵素のプロテアーゼ標的化も本明細書中で意図される。
いくつかの態様において、操作された細胞のヌクレアーゼ(例えば、リボヌクレアーゼ)または他の酵素(例えば、プロテアーゼ)は、細胞のペリプラズムへのヌクレアーゼまたは他の酵素の隔離に関与するペリプラズム標的化配列を含む。「ペリプラズム標的化配列」は、それが連結されるタンパク質である細胞のペリプラズムを標的とするアミノ酸配列である。ペリプラズム標的化配列に連結されたタンパク質は、タンパク質が発現される細胞のペリプラズムに隔離される。
MKIKTGARILALSALTTMMFSASALA(配列番号1);
MKQSTIALALLPLLFTPVTKA(配列番号2);
MMITLRKLPLAVAVAAGVMSAQAMA(配列番号3);
MNKKVLTLSAVMASMLFGAAAHA(配列番号4);
MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号5);
MKKIWLALAGLVLAFSASA(配列番号6);
MMTKIKLLMLIIFYLIISASAHA(配列番号7);
MKQALRVAFGFLILWASVLHA(配列番号8);
MRVLLFLLLSLFMLPAFS(配列番号9);および
MANNDLFQASRRRFLAQLGGLTVAGMLGPSLLTPRRATA(配列番号10).
第1集団の操作された細胞は、ペリプラズムに局在する表6および表7に列挙されたものを含むが、これに限定されず、プロテアーゼ標的化ヌクレアーゼを発現する。第2集団の操作された細胞は、少なくとも1つのNMPおよび/またはNDPキナーゼ、DNA依存性RNAポリメラーゼおよび/またはRNA依存性RNAポリメラーゼ、ならびにペリプラズムに局在する部位特異的プロテアーゼを発現する。さらに、第2集団の細胞は、目的のdsRNAをコードするDNAテンプレートを含み、DNAテンプレートは、そのDNAテンプレートの転写を制御する遺伝子エレメント(例えば、5’プロモーター、3’ターミネーター)に隣接している。各集団の細胞は、表6および表7に列挙されたものを含むがこれらに限定されず、不活性化またはプロテアーゼ標的化RNase、またはかかるRNaseをコードする遺伝子の染色体欠失を含むように操作される。
特許請求の範囲において、「a」、「an」および「the」などの文章は、文脈から逆のまたはそうでないことが明らかでない限り、1つまたは1つ以上を意味し得る。群の1つまたは1つ以上のメンバー間に「または」を含むクレームまたは説明は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかである場合を除き、群の1つ、1つ以上または全てが、所与の製品またはプロセスに存在し、使用され、または関連する場合に満たされると考えられる。本発明は、グループの完全に1つのメンバーが所与の製品またはプロセスに存在し、使用され、または関連する態様を含む。本発明は、グループメンバーの1つ以上または全てが所与の製品またはプロセスに存在し、使用され、または関連する態様を含む。
Claims (45)
- リボ核酸(RNA)の無細胞生産のための細胞溶解物の生産方法であって、該方法が
(a)所望の細胞密度へ細胞を培養すること、ここで、細胞が、プロテアーゼ認識部位を含み、ペリプラズム標的化配列に連結された、ヌクレアーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸を含み、ここで、少なくとも1つの内因性リボヌクレアーゼが、遺伝的に不活性化または細胞内で標的化タンパク質分解を介して不活性化される、
(b)(a)で生産された細胞を溶解し、それによって第1の細胞溶解物を生産すること、および
(c)RNA解重合を生じる条件下で第1の細胞溶解物をインキュベートし、それによってヌクレオチド5’−一リン酸を含む第1の細胞溶解物を生産すること、
を含む、前記方法。 - ヌクレアーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターが誘導性である、請求項1に記載の方法。
- (d)(i)ヌクレアーゼのプロテアーゼ認識部位を切断する同族のプロテアーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、少なくとも1つの操作された核酸、ここで、同族のプロテアーゼがペリプラズム標的化配列に連結されている、(ii)ヌクレオチドキナーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸、(iii)RNAポリメラーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸、および(iv)RNAをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む操作されたデオキシリボ核酸(DNA)テンプレート、ここで、少なくとも1つの内因性リボヌクレアーゼが遺伝的に不活性化または細胞内で標的化タンパク質分解を介して不活性化される、
を含む細胞を培養すること;および
(e)ステップ(d)で生産された培養細胞を溶解し、第2の細胞溶解物を生産すること、
をさらに含む、請求項1または2に記載の方法。 - (d)(i)、(d)(ii)または(d)(iii)のプロモーターの少なくとも1つが誘導性である、請求項3に記載の方法。
- ヌクレアーゼが、S1ヌクレアーゼ、NucA、PNPase、RNaseII、RNaseIIIおよびRNaseRからなる群から選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が、少なくとも1つのプロテアーゼ標的化内因性リボヌクレアーゼおよび/または内因性リボヌクレアーゼをコードする遺伝子において少なくとも1つの染色体欠失を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの内因性リボヌクレアーゼが、RNaseIII、RNaseI、RNaseR、PNPase、RNaseII、RNaseT、RNaseEおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項6に記載の方法。
- ヌクレオチドキナーゼが、ヌクレオチド一リン酸キナーゼである、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- ヌクレオチド一リン酸キナーゼが、ウリジル酸キナーゼ、シチジル酸キナーゼ、グアニル酸キナーゼ、およびアデニル酸キナーゼからなる群から選択される、請求項8に記載の方法。
- ヌクレオチドキナーゼが、ヌクレオチド二リン酸キナーゼである、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- ヌクレオチド二リン酸キナーゼが、ヌクレオシドリン酸キナーゼ、ピルビン酸キナーゼおよびポリリン酸キナーゼからなる群から選択される、請求項10に記載の方法。
- ポリリン酸を分解する少なくとも1つの内因性酵素が、細胞内で遺伝的に不活性化される、請求項1に記載の方法。
- ポリリン酸を分解する内因性酵素の少なくとも1つが、ヌクレオシドモノホスファターゼ(別名5’−ヌクレオチダーゼ)、ヌクレオシドジホスファターゼ、ヌクレオシドトリホスファターゼ、ヌクレオシド三リン酸ホスホヒドロラーゼ、およびエキソポリホスファターゼからなる群から選択される、請求項12に記載の方法。
- 細胞が、ポリリン酸を分解する少なくとも1つのプロテアーゼ標的化酵素および/またはポリリン酸を分解する酵素をコードする遺伝子において少なくとも1つの染色体欠失を含む、請求項12または13に記載の方法。
- RNAポリメラーゼが、DNA依存性RNAポリメラーゼである、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- DNA依存性RNAポリメラーゼが、T7RNAポリメラーゼである、請求項15に記載の方法。
- 操作されたDNAテンプレートの配列が、ヒンジドメインによって連結された相補的ドメインを含むmRNAをコードする、請求項15または16に記載の方法。
- プロモーターが、T7プロモーターであり、T7転写ターミネーターが、ヒンジドメインによって連結された相補的ドメインを含むmRNAをコードする配列の3’末端に位置する、請求項17に記載の方法。
- ステップ(d)の細胞が、RNAポリメラーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターをそれぞれ含む、少なくとも2つの操作された核酸を含み、操作された核酸の1つがDNA依存性RNAポリメラーゼをコードし、操作された核酸の1つがRNA依存性RNAポリメラーゼをコードする、請求項3〜14のいずれか一項に記載の方法。
- DNA依存性RNAポリメラーゼが、T7RNAポリメラーゼであり、RNA依存性RNAポリメラーゼがΦ6RdRPである、請求項19に記載の方法。
- 操作されたDNAテンプレートの配列が、単一の標的ドメインを含むmRNAをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、請求項20に記載の方法。
- プロモーターが、T7プロモーターであり、T7転写ターミネーターが、単一の標的ドメインを含むmRNAをコードする配列の3’末端に位置する、請求項21に記載の方法。
- 操作されたDNAテンプレートが、エンドヌクレアーゼ切断部位を含む発現ベクター上に位置する、請求項18〜22のいずれか一項に記載の方法。
- エンドヌクレアーゼ切断部位が、I−SceIエンドヌクレアーゼ切断部位である、請求項23に記載の方法。
- ステップ(d)の細胞が、エンドヌクレアーゼ切断部位を切断するエンドヌクレアーゼをコードする核酸をさらに含む、請求項23または24に記載の方法。
- 細胞が、少なくとも1つのプロテアーゼ標的化内因性RNAポリメラーゼおよび/または内因性RNAポリメラーゼをコードする遺伝子において少なくとも1つの染色体欠失を含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(a)および/またはステップ(d)の細胞が、T7ファージGp2タンパク質をコードする配列に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含む操作された核酸をさらに含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(a)および/またはステップ(d)の細胞が、糖の存在下で培養される、請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。
- 糖が、グルコースである、請求項28に記載の方法。
- ステップ(b)で生産された第1の細胞溶解物、ステップ(e)で生産された第2の細胞溶解物、およびポリリン酸を組み合わせ、それにより混合物を生産すること;および
RNAの生産を生じる条件下で混合物をインキュベートすること
をさらに含む、請求項3〜29のいずれか一項に記載の方法。 - RNAが、二本鎖RNA(dsRNA)である、請求項1〜30のいずれか一項に記載の方法。
- リボ核酸(RNA)の無細胞生産のための細胞溶解物の生産の方法であって、該方法が
(a)細胞を所望の細胞密度へ培養すること、ここで、細胞が、(i)プロテアーゼ認識部位を含み、ペリプラズム標的化配列に連結されたヌクレアーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、少なくとも1つの操作された核酸、および(ii)ヌクレオチドキナーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸を含み、ここで、少なくとも1つの内因性リボヌクレアーゼが遺伝的に不活性化または細胞内で標的化タンパク質分解を介して不活性化される、
(b)ステップ(a)で生産された細胞を溶解し、それによって第1の細胞溶解物を生産すること、および
(c)RNA解重合を生じる条件下でポリリン酸の存在下で第1の細胞溶解物をインキュベートし、それによってヌクレオチド5’−三リン酸の混合物を含む第1の細胞溶解物を生産すること
を含む、前記方法。 - (d)(i)ヌクレアーゼのプロテアーゼ認識配列を切断する同族のプロテアーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸、ここで、同族のプロテアーゼが、ペリプラズム標的化配列に連結されている、(ii)RNAポリメラーゼをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む少なくとも1つの操作された核酸、および(iii)ヒンジドメインによって連結された相補的ドメインを含むメッセンジャーRNA(mRNA)をコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む操作されたデオキシリボ核酸(DNA)テンプレート、ここで、少なくとも1つの内因性リボヌクレアーゼが遺伝的に不活性化または細胞内で標的化タンパク質分解を介して不活性化される、を含む細胞を培養すること;および
(e)ステップ(d)で生産された培養細胞を溶解し、第2の細胞溶解物を生産すること
をさらに含む、請求項32に記載の方法。 - ステップ(b)で生産された第1の細胞溶解物、ステップ(e)で生産された第2の細胞溶解物、および任意にポリリン酸を組み合わせ、それにより混合物を生産すること;およびRNAの生産を生じる条件下で混合物をインキュベートすること
をさらに含む、請求項33に記載の方法。 - RNAが二本鎖RNA(dsRNA)である、請求項32〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜35のいずれか一項に記載の方法によって生産される、細胞溶解物。
- プロテアーゼ認識部位を含むヌクレアーゼ;
ヌクレオチドキナーゼ;および
ヌクレオチド5’−一リン酸
を含む、細胞溶解物。 - RNAポリメラーゼ;および
RNAをコードする操作されたDNAテンプレート;
を含む、細胞溶解物。 - 請求項37に記載の細胞溶解物および請求項38に記載の細胞溶解物を含む、組成物。
- 細胞溶解物がヌクレアーゼ活性を有さない、請求項37または38に記載の細胞溶解物。
- リボ核酸(RNA)を生産する無細胞の方法であって、該方法が
(a)第1の細胞溶解物を第2の細胞溶解物と組み合わせ、それによって反応混合物を形成すること、ここで、
第1の細胞溶解物が、(i)プロテアーゼ認識部位を含むヌクレアーゼ、および(ii)ヌクレオチド5’−一リン酸を含み、および
第2の細胞溶解物が、(iii)ヌクレアーゼのプロテアーゼ認識部位を切断する同族のプロテアーゼ、(iv)ヌクレオチドキナーゼ、(v)RNAポリメラーゼ、および(vi)目的のRNAをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む操作されたデオキシリボ核酸(DNA)テンプレートを含む、、および
(b)目的のRNAの生産を生じる条件下で反応混合物をインキュベートすること
を含む、前記方法。 - 目的のRNAが二本鎖RNAである、請求項41に記載の方法。
- リボ核酸(RNA)を生産する無細胞の方法であって、該方法が、
(a)第1の細胞溶解物を第2の細胞溶解物と組み合わせ、それによって反応混合物を形成すること、ここで、
第1の細胞溶解物が、(i)プロテアーゼ認識部位を含むヌクレアーゼ、(ii)ヌクレオチドキナーゼ、および(iii)ヌクレオチド5’−三リン酸含み、および
第2の細胞溶解物が、(iv)ヌクレアーゼのプロテアーゼ認識部位を切断する同族のプロテアーゼ、(v)RNAポリメラーゼ、および(vi)目的のRNAをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む操作されたデオキシリボ核酸(DNA)テンプレートを含む、および
(b)目的のRNAの生産を生じる条件下で反応混合物をインキュベートすること
を含む、前記方法。 - 目的のRNAが二本鎖RNAである、請求項43に記載の方法。
- 第1の細胞溶解物および/または第2の細胞溶解物がヌクレアーゼ活性を有さない、請求項41〜44のいずれか一項に記載の方法。
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GB8704027D0 (en) | 1987-02-20 | 1987-03-25 | Owen Mumford Ltd | Syringe needle combination |
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FR2638359A1 (fr) | 1988-11-03 | 1990-05-04 | Tino Dalto | Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau |
IL92740A0 (en) | 1988-12-22 | 1990-09-17 | Lilly Co Eli | Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode isopenicillin n epimerase(racemase)activity |
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CA2034735A1 (en) | 1990-01-26 | 1991-07-27 | Barbara J. Weigel | Recombinant dna expression and dna compounds that encode isopenicillin n epimerase activity |
DE4004633A1 (de) | 1990-02-15 | 1991-08-22 | Huels Chemische Werke Ag | Verfahren zur herstellung von hefebiomasse |
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GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
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US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
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US5319122A (en) | 1992-11-12 | 1994-06-07 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of benzylformimidate |
ATE242330T1 (de) | 1993-01-15 | 2003-06-15 | Inst Genetics Llc | Klonierung von enterokinase und verfahren zu deren verwendung |
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KR0131166B1 (ko) | 1994-05-04 | 1998-04-11 | 최차용 | 무세포시스템에서 단백질을 제조하는 방법 |
GB9410142D0 (en) | 1994-05-20 | 1994-07-06 | Univ Warwick | Carbapenems |
US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
JPH08196284A (ja) | 1995-01-19 | 1996-08-06 | Canon Inc | 酵素反応素子およびその製造方法、酵素反応器ならびに酵素反応方法 |
US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
AU706445B2 (en) | 1995-07-06 | 1999-06-17 | Brown University Research Foundation | Cell-free synthesis of polyketides |
US6537776B1 (en) | 1999-06-14 | 2003-03-25 | Diversa Corporation | Synthetic ligation reassembly in directed evolution |
US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
KR100205768B1 (en) | 1996-08-24 | 1999-07-01 | Choongwae Pharm Co | Stereo-selective composition of 4-acetoxyazetidinone |
GB9622516D0 (en) | 1996-10-29 | 1997-01-08 | Univ Cambridge Tech | Enzymic cofactor cycling |
WO1998022614A1 (fr) | 1996-11-19 | 1998-05-28 | Yamasa Corporation | Procede pour produire des nucleosides 5'-triphosphates et utilisation desdits nucleosides |
WO1998030713A1 (en) | 1997-01-14 | 1998-07-16 | Bio-Technical Resources | Process for production of n-glucosamine |
US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
US6159693A (en) * | 1998-03-13 | 2000-12-12 | Promega Corporation | Nucleic acid detection |
ATE386102T1 (de) | 1998-03-30 | 2008-03-15 | Metabolix Inc | Mikrobielle stämme und verfahren für die herstellung von biomaterialien |
GB9815666D0 (en) | 1998-07-17 | 1998-09-16 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
AU1685600A (en) | 1998-12-24 | 2000-07-31 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Polypeptides |
US6613552B1 (en) | 1999-01-29 | 2003-09-02 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Biocatalytic synthesis of shikimic acid |
US6994986B2 (en) | 1999-03-17 | 2006-02-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University | In vitro synthesis of polypeptides by optimizing amino acid metabolism |
US6168931B1 (en) | 1999-03-17 | 2001-01-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of biological macromolecules using a novel ATP regeneration system |
WO2000055353A1 (en) | 1999-03-17 | 2000-09-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | In vitro macromolecule biosynthesis methods using exogenous amino acids and a novel atp regeneration system |
RU2169154C2 (ru) | 1999-03-25 | 2001-06-20 | Институт белка РАН | Способ получения полипептидов в бесклеточной системе |
IL129427A0 (en) | 1999-04-13 | 2000-02-17 | Yeda Res & Dev | Preparation of biologically active molecules |
AU784043B2 (en) | 1999-04-15 | 2006-01-19 | Regents Of The University Of California, The | Identification of sortase gene |
US6284483B1 (en) | 1999-10-06 | 2001-09-04 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Modified synthetases to produce penicillins and cephalosporins under the control of bicarbonate |
EP1242586B1 (en) | 1999-12-21 | 2010-10-13 | RNA-Line Oy | Rna polymerases from bacteriophage phi 6-phi 14 and use thereof |
CA2293852A1 (fr) | 1999-12-30 | 2001-06-30 | Purecell Technologies Inc. | Procede de preparation d'extraits de plantes actifs et utiles a la capture de radicaux libres; les extraits, et compositions et dispositifs les comprenant |
WO2001053513A1 (fr) | 2000-01-17 | 2001-07-26 | Satake Corporation | Systemes et procede de reaction de regeneration atp permettant d'examiner le nucleotide d'adenine, procede de detection d'arn et procede d'amplification d'atp |
ES2242733T3 (es) | 2000-03-07 | 2005-11-16 | Biomerieux B.V. | Mutante de arn polimerasa con termoestabilidad mejorada. |
US7041479B2 (en) | 2000-09-06 | 2006-05-09 | The Board Of Trustess Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
US6548276B2 (en) | 2000-09-06 | 2003-04-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
DE60139331D1 (de) | 2000-09-19 | 2009-09-03 | Eiken Chemical | Verfahren zur polynukleotidsynthese |
AU2002314738A1 (en) | 2001-04-04 | 2002-10-21 | Genencor International, Inc. | Methods for the production of products in host cells |
US7112434B2 (en) | 2001-05-02 | 2006-09-26 | University Of South Florida | Vector system for selection of genes encoding secreted proteins and membrane-bound proteins |
EP1279736A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-01-29 | Université de Nantes | Methods of RNA and protein synthesis |
US20060073539A1 (en) | 2001-08-06 | 2006-04-06 | Wikswo John P | Apparatus and methods for using biological material to discriminate an agent |
RU2294370C2 (ru) | 2001-09-06 | 2007-02-27 | Адзиномото Ко., Инк. | Способ получения спирта с использованием микроорганизма |
HU225243B1 (en) | 2001-09-13 | 2006-08-28 | Genentech Inc | Gram-negative bacterium cell containing a gene coding an aminopeptidase |
AU2002363144A1 (en) | 2001-10-30 | 2003-05-12 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro nucleic acid synthesis using nucleoside monophosphates |
CN2563643Y (zh) | 2001-12-28 | 2003-07-30 | 深圳市华美龙防伪网络***有限公司 | 动态变码电子防伪装置 |
US20040038250A1 (en) | 2002-04-04 | 2004-02-26 | Astur-Pharma, S.A. | Gene cluster for thienamycin biosynthesis, genetic manipulation and utility |
DE10219714A1 (de) | 2002-05-02 | 2003-11-27 | Holland Sweetener Co | Verfahren zur mikrobielien Herstellung von aromatischen Aminosäuren und anderen Metaboliten des aromatischen Aminosäurebiosyntheseweges |
ATE437956T1 (de) | 2002-05-08 | 2009-08-15 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | Verfahren zur herstellung von cytidin 5'- diphosphatcholin |
WO2003100056A1 (fr) | 2002-05-29 | 2003-12-04 | Yamasa Corporation | Nouvelle enzyme polyphosphate :amp phosphotransferase |
MXPA04012978A (es) | 2002-07-01 | 2005-09-12 | Arkion Life Sciences Llc D B A | Proceso y material para la produccion de glucosamina y n-acetilglucosamina. |
ATE445699T1 (de) | 2002-08-19 | 2009-10-15 | Univ Leland Stanford Junior | Verbesserte verfahren zur in-vitro- proteinsynthese |
ATE455859T1 (de) | 2003-01-27 | 2010-02-15 | Dsm Ip Assets Bv | Herstellung von 5'-ribonukleotiden |
JP2007502623A (ja) | 2003-05-09 | 2007-02-15 | リサーチ ディベロップメント ファウンデーション | 膜タンパク質におけるフリンプロテアーゼ開裂部位の挿入およびその使用法 |
US20080199915A1 (en) | 2003-06-06 | 2008-08-21 | Rna-Line Oy | Methods and Kits For Mass Production Of Dsrna |
US7341852B2 (en) | 2003-07-18 | 2008-03-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of decoupling reaction scale and protein synthesis yield in batch mode |
US20050054044A1 (en) | 2003-07-18 | 2005-03-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of alleviating nucleotide limitations for in vitro protein synthesis |
WO2005030995A1 (en) | 2003-09-23 | 2005-04-07 | University Of Missouri | Methods of synthesizing polynucleotides using thermostable enzymes |
WO2005030949A1 (en) | 2003-09-24 | 2005-04-07 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Methods and materials for the production of shikimic acid |
ES2532608T3 (es) | 2003-11-20 | 2015-03-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Métodos mejorados de síntesis proteica in vitro |
JP2005160446A (ja) | 2003-12-05 | 2005-06-23 | Toyobo Co Ltd | 改良されたrna合成用反応組成物 |
WO2005059157A2 (en) * | 2003-12-11 | 2005-06-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE IN PREPARING HAIRPIN RNAs |
NZ549523A (en) | 2004-03-25 | 2009-10-30 | Univ Leland Stanford Junior | Protein expression yield enhancement in cell-free protein synthesis systems by addition of antifoam agents |
AU2005238524A1 (en) | 2004-04-27 | 2005-11-10 | Archer-Daniels-Midland Company | Enzymatic decarboxylation of 2-keto-l-gulonic acid to produce xylose |
US8257943B2 (en) | 2004-06-25 | 2012-09-04 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Process for producing dipeptides or dipeptide derivatives |
KR20070085955A (ko) | 2004-12-10 | 2007-08-27 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 단일 세포에서의 β-락탐의 제조 |
WO2006090385A2 (en) | 2005-02-22 | 2006-08-31 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Protease inhibitors and method of screening thereof |
WO2006109751A1 (ja) | 2005-04-08 | 2006-10-19 | Kyoto University | 無細胞タンパク質合成系によるタンパク質の製造方法 |
US7351563B2 (en) | 2005-06-10 | 2008-04-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free extracts and synthesis of active hydrogenase |
US7312049B2 (en) | 2005-06-14 | 2007-12-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Total amino acid stabilization during cell-free protein synthesis |
TW200741005A (en) | 2005-08-10 | 2007-11-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | A purification method of cytidine diphosphate |
CN1329506C (zh) | 2005-09-06 | 2007-08-01 | 清华大学 | 一种具有颗粒状甲烷单加氧酶活性的重组菌及其应用 |
WO2007030772A2 (en) | 2005-09-09 | 2007-03-15 | The Johns Hopkins University | Improved production of clavulanic acid by genetic engineering of streptomyces clavuligerus |
US8183010B2 (en) | 2005-10-31 | 2012-05-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of membrane bound polypeptides |
US7579005B2 (en) | 2005-11-28 | 2009-08-25 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for recombinant expression and purification of antimicrobial peptides using periplasmic targeting signals as precipitable hydrophobic tags |
JP4961544B2 (ja) | 2005-11-28 | 2012-06-27 | 国立大学法人広島大学 | 大腸菌を用いたリン酸化反応方法 |
GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
WO2007137144A2 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-29 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Single protein production in living cells facilitated by a messenger rna interferase |
WO2007143245A2 (en) | 2006-06-01 | 2007-12-13 | Midwest Research Institute | An l-arabinose fermenting yeast |
WO2007140816A1 (en) | 2006-06-09 | 2007-12-13 | Metabolic Explorer | Glycolic acid production by fermentation from renewable resources |
WO2007144018A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Metabolic Explorer | Ethanolamine production by fermentation |
WO2008002663A2 (en) | 2006-06-28 | 2008-01-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Immunogenic protein constructs |
US20100063258A1 (en) | 2006-06-28 | 2010-03-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fusion protein constructs |
WO2008002673A2 (en) | 2006-06-29 | 2008-01-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of virus like particles |
AU2007325952B8 (en) | 2006-06-29 | 2013-06-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of proteins containing unnatural amino acids |
US8293894B2 (en) | 2006-11-20 | 2012-10-23 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited | Process for the preparation of carbapenem antibiotic |
WO2008072920A1 (en) | 2006-12-15 | 2008-06-19 | Biofuelchem Co., Ltd. | Method for preparing butanol through butyryl-coa as an intermediate using bacteria |
KR100832740B1 (ko) | 2007-01-17 | 2008-05-27 | 한국과학기술원 | 분지쇄 아미노산 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를이용한 분지쇄 아미노산의 제조방법 |
WO2008088884A2 (en) | 2007-01-18 | 2008-07-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced cell-free synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
WO2008094546A2 (en) | 2007-01-31 | 2008-08-07 | The Regents Of The University Of California | Genetically modified host cells for increased p450 activity levels and methods of use thereof |
US20090124012A1 (en) | 2007-08-08 | 2009-05-14 | Mazef Biosciences, Llc | Toxin/antitoxin systems and methods for regulating cellular growth, metabolic engineering and production of recombinant proteins |
US20110099670A1 (en) | 2008-02-14 | 2011-04-28 | Andries Jurriaan Koops | Nucleotide sequences coding for cis-aconitic decarboxylase and use thereof |
US7977084B2 (en) | 2008-03-05 | 2011-07-12 | Genomatica, Inc. | Primary alcohol producing organisms |
AU2009242615A1 (en) | 2008-05-01 | 2009-11-05 | Genomatica, Inc. | Microorganisms for the production of methacrylic acid |
DK2313489T3 (da) | 2008-07-28 | 2015-06-22 | Brain Biotechnology Res & Information Network Ag | Fremstillingsmetode |
GB0819563D0 (en) | 2008-10-24 | 2008-12-03 | Isis Innovation | Methods for preparing heterocyclic rings |
BRPI0914521A2 (pt) | 2008-10-27 | 2016-07-26 | Butamax Advanced Biofuels Llc | célula hospedeira microbiana recombinante, método de aumento da produção de isobutanol e método de produção de isobutanol |
BRPI0921734A2 (pt) | 2008-10-31 | 2019-01-08 | California Inst Of Techn | micro-organismos criados geneticamente capazes de produzir compostos-alvo sob condições anaeróbicas |
WO2010077806A1 (en) | 2008-12-15 | 2010-07-08 | Greenlight Biosciences, Inc. | Methods for control of flux in metabolic pathways |
US20110008867A1 (en) | 2008-12-22 | 2011-01-13 | Greenlight Biosciences | Compositions and methods for the production of a compound |
DK2204453T3 (da) | 2008-12-30 | 2013-06-10 | Sued Chemie Ip Gmbh & Co Kg | Fremgangsmåde til celle-fri fremstilling af kemikalier |
US8597923B2 (en) | 2009-05-06 | 2013-12-03 | SyntheZyme, LLC | Oxidation of compounds using genetically modified Candida |
US8272816B2 (en) | 2009-05-12 | 2012-09-25 | TDY Industries, LLC | Composite cemented carbide rotary cutting tools and rotary cutting tool blanks |
US10385367B2 (en) | 2009-06-01 | 2019-08-20 | Ginkgo Bioworks, Inc. | Methods and molecules for yield improvement involving metabolic engineering |
WO2011017560A1 (en) | 2009-08-05 | 2011-02-10 | Genomatica, Inc. | Semi-synthetic terephthalic acid via microorganisms that produce muconic acid |
EP2513112A4 (en) | 2009-12-11 | 2013-05-08 | Univ Johns Hopkins | METHOD FOR THE LATE INTRODUCTION OF THE (8R) -HYDROXYL GROUP IN THE SYNTHESIS OF CARBAPENEMIC ANTIBIOTICS DERIVED FROM BETA-LACTAMES |
WO2011130544A2 (en) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Sutro Biopharma, Inc. | Monitoring a dynamic system by liquid chromatography-mass spectrometry |
US9193959B2 (en) | 2010-04-16 | 2015-11-24 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | T7 RNA polymerase variants with enhanced thermostability |
DK2566953T3 (en) | 2010-05-07 | 2019-04-15 | Greenlight Biosciences Inc | METHODS OF MANAGING THE POWER BY METABOLIC ROADS USING ENZYMOUS LOCATION |
RU2435862C1 (ru) | 2010-06-15 | 2011-12-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" | Способ получения высокополимерной рнк из отработанных пивных дрожжей |
DK3219796T3 (da) | 2010-08-31 | 2020-12-21 | Greenlight Biosciences Inc | Fremgangsmåder til kontrol af strømningen i metaboliske reaktionsveje ved hjælp af proteasemanipulation |
WO2012135902A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-11 | James Cook University | Protease activity assay |
JP5800218B2 (ja) | 2011-07-20 | 2015-10-28 | 国立大学法人広島大学 | Atpの製造方法およびその利用 |
SG2014014377A (en) | 2011-09-09 | 2014-05-29 | Greenlight Biosciences Inc | Cell-free preparation of carbapenems |
EP2935598A1 (en) | 2012-12-21 | 2015-10-28 | Greenlight Biosciences Inc. | Cell-free system for converting methane into fuel, pyruvate or isobutanol |
US9840703B2 (en) | 2013-01-11 | 2017-12-12 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions for the production of siRNAs |
US9580705B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | DHAD variants and methods of screening |
US9814243B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-11-14 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for the improved production and delivery of RNA by efficient transcription termination |
US10128522B2 (en) | 2013-06-05 | 2018-11-13 | Tianjin Institute Of Industrial Biotechnology, Chinese Academy Of Sciences | Complete oxidation of sugars to electricity by using cell-free synthetic enzymatic pathways |
EP3004335A4 (en) | 2013-06-05 | 2017-01-25 | Greenlight Biosciences Inc. | Control of metabolic flux in cell-free biosynthetic systems |
KR20160037194A (ko) | 2013-08-05 | 2016-04-05 | 그린라이트 바이오사이언시스, 아이엔씨. | 프로테아제 분열 위치를 갖는 엔지니어링된 프로테인 |
CL2014003146A1 (es) | 2014-11-20 | 2015-06-12 | Univ Santiago Chile | Método para producir virus arn monocatenario negativo; plásmido recombinante funcional en células animales, que consta de un esqueleto pss-urg; método de obtención de partículas virales; y uso para expresar arn, proteínas autógenas o exógenas al virus. |
WO2016149631A2 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free production of butanol |
SG11201707370WA (en) | 2015-03-30 | 2017-10-30 | Greenlight Biosciences Inc | Cell-free production of ribonucleic acid |
CN105219822A (zh) | 2015-09-24 | 2016-01-06 | 北京化工大学 | 一种体外酶法生产谷胱甘肽的方法 |
JP7011599B2 (ja) | 2016-04-06 | 2022-02-10 | グリーンライト バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド | リボ核酸の無細胞的生産 |
ES2921017T3 (es) | 2016-12-30 | 2022-08-16 | Natures Toolbox Inc | Sistema de expresión libre de células que tiene una nueva regeneración de energía basada en polifosfato inorgánico |
WO2018129275A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free production of sugars |
CN111465701A (zh) | 2017-10-11 | 2020-07-28 | 绿光生物科技股份有限公司 | 用于三磷酸核苷和核糖核酸生成的方法和组合物 |
-
2016
- 2016-03-30 SG SG11201707370WA patent/SG11201707370WA/en unknown
- 2016-03-30 RU RU2017137788A patent/RU2017137788A/ru not_active Application Discontinuation
- 2016-03-30 JP JP2017551594A patent/JP6843065B2/ja active Active
- 2016-03-30 WO PCT/US2016/024937 patent/WO2016160936A1/en active Application Filing
- 2016-03-30 US US15/562,456 patent/US11274284B2/en active Active
- 2016-03-30 CN CN201680019707.4A patent/CN107614682B/zh active Active
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