JP2021050231A - 結晶性ｆｇｆｒ４阻害剤化合物およびその使用 - Google Patents

結晶性ｆｇｆｒ４阻害剤化合物およびその使用 Download PDF

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賢史 吉田
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Abstract

【課題】ＦＧＦＲ４を標的にするのに有用な新規な薬剤であって、物理化学的特性の大きな変化を示さずに長期間にわたって有効に貯蔵されることが可能な化合物及びそれを含有する医薬組成物を提供する。【解決手段】下記式で示される化合物、及びその塩を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年４月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／１４７，３１３号の優先権を主張するものである。その仮特許出願は、参照により本明細書に援用される。
背景
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、様々な生物学的活性を有する２０種を超える構造的に関連するタンパク質のファミリーである。それらの主な受容体である、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３およびＦＧＦＲ４）は、ＦＧＦに結合し、細胞増殖および分化の過程に関与する受容体チロシンキナーゼのファミリーである。ＦＧＦＲシグナル伝達ネットワークの脱制御（deregulation）が、多くの種類のヒト癌を含む多くの病態生理学的状態に関与している。
「線維芽細胞増殖因子受容体４」または「ＦＧＦＲ４」は、増殖および抗アポトーシスを調節することが知られており、多くの癌において発現または高度に発現される。例えば、Dieci et al.2013,Cancer Discovery,0F1-0F16を参照されたい。研究により、ＦＧＦＲ４の発現が、より悪性の表現型の癌の前兆であり、ＦＧＦＲ４の発現のノックダウンまたは低減が、増殖を低減し、アポトーシスを促進するのに役立つことが示された。例えば、Wesche et al.2011,Biochem J 437:199-213を参照されたい。
例えば、ＦＧＦＲ４の発現または過剰発現は、胃癌（Ye et al.2011,Cancer,5304-5313）、前立腺癌（Xu et al.2011,BMC Cancer,11;84）、横紋筋肉腫（Taylor VI et al.2009,J Clin Invest,119(11):3395-3407）などの肉腫、黒色腫（Streit et al.2006,British J Cancer,94:1879-1886）などの皮膚癌、胆管癌（Sia et al.2013,Gastroenterology 144:829-840）および肝細胞癌（French et al.2012,PLoS ONE 7(5):e367313;Miura et al.2012,BMC Cancer 12:56;Chiang et al.2008,Cancer Res 68(16):6779-6788;Sawey et al.2011,Cancer Cell 19:347-358）などの肝臓癌、膵上皮内腫瘍および膵管腺癌（Motoda et al.2011,Int’l J Oncol 38:133-143）などの膵臓癌、非小細胞性肺癌（Fawdar et al.2013,PNAS 110(30):12426-12431）などの肺癌、結腸直腸癌（Pelaez-Garcia et al.2013,PLoS ONE 8(5):e63695;Barderas et al.2012,J Proteomics 75:4647-4655）、および卵巣癌（Zaid et al.2013,Clin Cancer Res 19:809-820）において、癌の悪性度（aggressiveness）と関連付けられる。
いくつかのＦＧＦＲ阻害剤の臨床開発により、抗腫瘍薬としてのそれらの有用性が確認されている。Dieci et al.2013,Cancer Discovery,0F1-0F16。しかしながら、ＦＧＦＲ、特にＦＧＦＲ４を標的にするのに有用な新規な薬剤が必要とされている。
さらに、医薬品の製造の際、化合物は、便利に取り扱いおよび処理することができる形態であるべきである。これに関して、活性化合物の化学的安定性および物理的安定性は、重要な考慮事項である。好ましくは、化合物およびそれを含有する医薬組成物は、物理化学的特性の大きな変化を示さずに長期間にわたって有効に貯蔵されることが可能である。
本発明の実施形態は、結晶形態である以下の化合物：
Figure 2021050231
を提供し得る。
ある実施形態において、例えば、結晶形態は、遊離塩基形態、塩酸塩形態、一塩酸塩形態、二塩酸塩形態、またはエタンスルホン酸塩形態であり得る。
実施形態は、結晶性遊離塩基形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（化合物１０８）：
Figure 2021050231
を提供し得る。
ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態化合物は、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）スペクトルにおいて、２θ°の以下の値範囲：７．８〜８．２；１０．１〜１０．５；１４．６〜１５．０；１６．３〜１６．７；１６．９〜１７．３；および２１．６〜２２．０の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つでピークを示す。例えば、化合物は、８．０、１０．３、１４．８、１６．５、１７．１および２１．８からなる群から選択される２θ°（±０．２°）の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの値を示し得る。ある実施形態において、結晶性遊離塩基化合物は、実質的に、図５に示されるようなＰＸＲＤパターンによって特徴付けられる。ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態の化合物は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも１０．３、８．０および９．５；少なくとも１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、および１７．１；または少なくとも１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、１７．１、１９．３、２１．８、２３．７、および２４．５でピークを示す。
ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態は、図７に示されるのと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線によって特徴付けられる。
ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態化合物は、実質的に、図１０に示されるような１３Ｃ ＮＭＲによって特徴付けられる。
ある実施形態は、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも２６．６、１９．９、および１１．３；少なくとも２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、および２５．４；または少なくとも２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、２５．４、２７．６、２３．０、１８．１、および２９．０でピークを示す。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、実質的に、図１３に示されるようなＰＸＲＤスペクトルによって特徴付けられる。
ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、実質的に、図１１に示されるような１３Ｃ ＮＭＲによって特徴付けられる。
ある実施形態は、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも２６．６、２２．８、および２１．３；少なくとも２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、および１３．５；または少なくとも２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、１３．５、１２．４、１６．１、２８．０、および１８．７でピークを示す。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、実質的に、図１６に示されるようなＰＸＲＤスペクトルによって特徴付けられる。
ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、実質的に、図１４に示されるような１３Ｃ ＮＭＲによって特徴付けられる。
実施形態は、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも１９．２、１５．１、および２３．３；少なくとも１９．２、１５．１、２３．３、２０．３、１１．２、および２１．８；または少なくとも１９．２、１５．１、２３．３、２０．３、１１．２、２１．８、９．４、２２．４、２３．６、および２４．０でピークを示す。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩は、実質的に、図１９に示されるようなＰＸＲＤスペクトルによって特徴付けられる。
ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩は、実質的に、図１７に示されるような１３Ｃ ＮＭＲによって特徴付けられる。
さらなる目的は、本明細書に記載される結晶形態化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物である。ある実施形態において、組成物は、経口投与用または非経口投与用に製剤化されている。
さらなる目的は、結晶性遊離塩基形態である以下の化合物：
Figure 2021050231
を作製する方法である。
このような方法は、ａ）溶媒中に以下の化合物：
Figure 2021050231
（式中、Ｘは（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチルである）
を含む組成物を提供する工程；
ｂ）組成物の温度を≦５０℃（例えば、≦３０、２０、または１５℃）に維持するような速度で、酸を前記組成物に加える工程；
ｃ）工程ｂ）で形成された組成物を、（例えば、室温に）温める工程；次に
ｄ）組成物の温度を≦２５℃に維持するような速度で、組成物を飽和水酸化アンモニウム溶液（例えば、０〜５℃などの低温）に加える工程；次に
ｅ）組成物を、非混和性溶媒の混合物（例えば、ジクロロメタン／メタノール）で抽出して、有機相を形成する工程；および
ｆ）好適な溶媒を有機相に加える工程；
のうちの１つまたは複数を含み得、それによって、前記結晶性遊離塩基形態の化合物を形成する。
さらなる目的は、その必要のある対象における肝細胞癌を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される結晶形態化合物を前記対象に投与することを含む方法である。ある実施形態において、肝細胞癌は、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態（例えば、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加）を有する。
さらなる目的は、その必要のある対象における肝細胞癌を治療する方法であって、前記肝細胞癌の細胞を含有する生物学的試料中の変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態（例えば、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加）を検出すること、および前記肝細胞癌が、前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する場合、本明細書に記載される結晶形態化合物を治療有効量で前記対象に投与することを含む方法である。
さらなる目的は、肝細胞癌の治療の方法における本明細書に記載される結晶形態化合物の使用である。
さらなる目的は、肝細胞癌の治療のための薬剤の調製における本明細書に記載される結晶形態化合物の使用である。
ＨＵＨ７細胞を用いた肝細胞癌モデルにおけるインビボ有効性試験の結果を示す。化合物１０８（２５ｍｇ／ｋｇまたは３７．５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル対照を腹腔内注射によって投与し、腫瘍容積を１５日間にわたって週２回測定した。 ＨＥＰ３Ｂ細胞を用いた肝細胞癌モデルにおけるインビボ有効性試験の結果を示す。化合物１０８（１２．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇまたは３７．５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル対照を腹腔内注射によって投与し、腫瘍容積を１５日間にわたって週２回測定した。 ＪＨＨ７細胞を用いた肝細胞癌モデルにおけるインビボ有効性試験の結果を示す。化合物１０８（１２．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇまたは３７．５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル対照を腹腔内注射によって投与し、腫瘍容積を１５日間にわたって週２回測定した。 ＨＥＰ３Ｂ細胞を用いた肝細胞癌モデルにおける比較インビボ有効性試験の結果を示す。化合物１０８（２５ｍｇ／ｋｇ、３７．５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射によって１日２回投与し、またはBGJ398（３０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ）を１日２回経口投与した。 結晶性遊離塩基形態の化合物１０８から得られるＰＸＲＤスペクトルを示す。 ３つのロットからの結晶性遊離塩基形態の化合物１０８のＰＸＲＤスペクトルの重ね合わせを示す。 結晶性遊離塩基形態の化合物１０８についてのＤＳＣ曲線を示す。 結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の３つのロットについてのＤＳＣ曲線の重ね合わせを示す。 化合物１０８の構造と一致する１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 化合物１０８の構造と一致する１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 化合物１０８の構造と一致する１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 化合物１０８の構造と一致する１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１０において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩（すなわち、結晶性一塩酸塩形態の化合物１０８）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１０において得られるＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１０において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩から得られるＰＸＲＤスペクトルを示す。 本明細書の実施例１３において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩（すなわち、結晶性二塩酸塩形態の化合物１０８）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１３において得られるＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１３において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩から得られるＰＸＲＤスペクトルを示す。 本明細書の実施例１６において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネート（すなわち、結晶性エタンスルホン酸塩形態の化合物１０８）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１６において得られるＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 本明細書の実施例１６において得られる結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートから得られるＰＸＲＤスペクトルを示す。
選択的ＦＧＦＲ４阻害剤として有用である、結晶形態である以下の化合物：
Figure 2021050231
が本明細書において提供される。
ある実施形態において、結晶性化合物は、遊離塩基形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドである。結晶性遊離塩基形態の実施形態は、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）スペクトルにおいて、２θ°の以下の値範囲：７．８〜８．２；１０．１〜１０．５；１４．６〜１５．０；１６．３〜１６．７；１６．９〜１７．３；および２１．６〜２２．０の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上でピークを示す。例えば、結晶性遊離塩基形態化合物は、２θ°（±０．２°）：８．０、１０．３、１４．８、１６．５、１７．１および２１．８からなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの値を示し得る。ある実施形態において、結晶性遊離塩基化合物は、実質的に、図５に示されるようなＰＸＲＤパターンによって特徴付けられる。ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態の化合物は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも１０．３、８．０および９．５；少なくとも１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、および１７．１；または少なくとも１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、１７．１、１９．３、２１．８、２３．７、および２４．５でピークを示す。
ある実施形態において、結晶性遊離塩基形態は、実質的に、図７に示されるものと同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線によって特徴付けられる。
ある実施形態は、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも２６．６、１９．９、および１１．３；少なくとも２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、および２５．４；または少なくとも２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、２５．４、２７．６、２３．０、１８．１、および２９．０でピークを示す。このような実施形態は、図１３に示されるようなＰＸＲＤスペクトルを有し得る。
ある実施形態は、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも２６．６、２２．８、および２１．３；少なくとも２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、および１３．５；または少なくとも２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、１３．５、１２．４、１６．１、２８．０、および１８．７でピークを示す。このような実施形態は、図１６に示されるようなＰＸＲＤスペクトルを有し得る。
実施形態は、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩である化合物を提供し得る。ある実施形態において、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホン酸塩は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ°（±０．２）の以下の範囲：少なくとも１９．２、１５．１、および２３．３；少なくとも１９．２、１５．１、２３．３、２０．３、１１．２、および２１．８；または少なくとも１９．２、１５．１、２３．３、２０．３、１１．２、２１．８、９．４、２２．４、２３．６、および２４．０でピークを示す。このような実施形態は、図１９に示されるようなＰＸＲＤスペクトルを有し得る。
本明細書において使用される際、スペクトルなどのデータに関して「実質的に示されるような（substantially as shown）」、「実質的に同じ」、または「実質的に示されるような（substantially as indicated）」は、当業者が、例えば図６に示されるような、データの同じ収集方法を用いて得られたこのようなスペクトルを比較するとき、スペクトルが、本明細書に教示される同じ結晶性遊離塩基形態の化合物を示すのに十分に類似していると結論付け得ることを意味する。
本明細書に教示される化合物を合成し、結晶化させる方法も提供される。結晶性遊離塩基形態の場合、方法は、ａ）溶媒中に以下の化合物：
Figure 2021050231
（式中、Ｘは（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチルである）を含む組成物を提供する工程；
ｂ）組成物の温度を≦５０℃（例えば、≦３０、２０、または１５℃）に維持するような速度で、酸を前記組成物に加える工程；
ｃ）工程ｂ）で形成された組成物を、（例えば、室温に）温める工程；次に
ｄ）組成物の温度を≦２５℃に維持するような速度で、組成物を飽和水酸化アンモニウム溶液（例えば、０〜５℃などの低温）に加える工程；次に
ｅ）組成物を、非混和性溶媒の混合物（例えば、ジクロロメタン／メタノール）で抽出して、有機相を形成する工程；および
ｆ）好適な溶媒を有機相に加える工程；
のうちの１つまたは複数を含み得、それによって、前記結晶性遊離塩基形態の化合物を形成する。
本明細書において報告される結晶性化合物は、薬学的に許容可能な担体と組み合わされて、その医薬製剤が得られる。担体および製剤の具体的な選択は、組成物が対象とする具体的な投与経路に応じて決まる。ある実施形態において、担体は、投与前に化合物の結晶形態が維持されるように選択される。
本明細書において使用される際の「薬学的に許容可能な担体」は、それが一緒に製剤化される化合物の薬理学的活性を損なわない非毒性の担体、補助剤、またはビヒクルを指す。ある実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、化合物の結晶性遊離塩基形態が維持されるように選択される。薬学的に許容可能な担体、補助剤またはビヒクルとしては、限定はされないが、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、蝋、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。
本発明の組成物は、非経口、経口、吸入噴霧、局所、経直腸、経鼻、口腔、膣内または埋め込み式リザーバ（implanted reservoir）の投与などに好適であり得る。ある実施形
態において、製剤は、天然源または非天然源に由来する成分を含む。ある実施形態において、製剤または担体は、滅菌形態で提供され得る。滅菌担体の非限定的な例としては、エンドトキシンフリーの水またはパイロジェンフリーの水が挙げられる。
本明細書において使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技術を含む。特定の実施形態において、化合物は、静脈内に、経口で、皮下に、または筋肉内に投与される。本発明の組成物の滅菌注射用形態は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、当該技術分野において公知の技術にしたがって製剤化され得る。滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であり得る。用いられ得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌した固定油が、溶媒または懸濁媒体として従来から用いられている。
この目的のために、合成モノ−またはジ−グリセリドを含む任意の無刺激固定油が用いられ得る。脂肪酸およびそれらのグリセリド誘導体が、特にポリオキシエチル化された形態の、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容可能な油であると、注射剤の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または分散剤（カルボキシメチルセルロースなど）、または乳剤および懸濁液を含む薬学的に許容可能な剤形の製剤化に一般的に使用される同様の分散剤も含有し得る。Tweens、Spans、およ
び薬学的に許容可能な固体、液体、または他の剤形の製造に一般的に使用される他の乳化剤などの他の一般的に使用される界面活性剤も、製剤化の目的のために使用され得る。
経口投与の場合、化合物または塩は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含むがこれらに限定されない許容可能な経口剤形で提供され得る。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も添加され得る。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液が経口使用に必要とされる場合、活性成分は、乳化剤および懸濁化剤と組み合わされ得る。必要に応じて、特定の甘味剤、香味剤または着色剤も添加され得る。さらに、保存剤も添加され得る。薬学的に許容可能な保存剤の好適な例としては、限定はされないが、溶媒、例えばエタノール、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、第四級アンモニウム塩、およびパラベン（メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベンなど）などの様々な抗菌剤および抗真菌剤が挙げられる。
対象および使用方法
本明細書に教示される結晶形態の化合物は、肝細胞癌を治療するのに使用され得る。
「治療」、「治療する」、および「治療すること」は、本明細書に記載される疾病または疾患を好転させ、緩和し、その発症を遅らせ、その進行を抑制し、または他の形でそれを改善することを指す。ある実施形態において、治療は、１つまたは複数の症状が発現した後に投与され得る。他の実施形態において、治療は、症状の非存在下で投与され得る。例えば、治療は、症状の発症の前に（例えば、症状の経歴を考慮しておよび／または遺伝的因子もしくは他の易罹患性因子を考慮して）易罹患性の個体に投与され得る。治療はまた、症状が消滅した後、例えばその再発を予防するかまたは遅らせるために継続され得る。
本明細書において使用される「患者」または「対象」は、動物対象、好ましくは哺乳動物対象、特にヒト対象（男性および女性の両方の対象を含み、新生児、乳幼児、児童、青年、成人および高齢の対象を含む）を意味する。対象は、実験目的または獣医学的目的のために、他の哺乳動物対象（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、サル、鳥類など）も含み得る。
ある実施形態において、治療は、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９（線維芽細胞増殖因子１９）の状態を有する肝細胞癌に罹患した対象に提供される。
ある実施形態において、治療は、または前記肝細胞癌の細胞を含有する生物学的試料中のＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を分析すること（例えば、測定または検査すること）、および前記肝細胞癌がＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の変化を示す場合、治療有効量の本明細書に記載される活性薬剤で対象を治療することを含むか、またはそれとともに行われ得る。
ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９に関して本明細書において使用される「変化した状態」は、対応する非癌組織と比較した、その発現の増加（例えば、ｍＲＮＡレベルの増加またはタンパク質レベルの増加）、ゲノム中のコピー数の増加、および／または突然変異の結果としてのコードされたタンパク質の活性の増加などを含む。ある実施形態において、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の変化した状態は、活性の増加をもたらすか、またはより悪性の形態の肝細胞癌に関連する、遺伝子および／またはコードされたタンパク質の突然変異を含む。
ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の「発現」は、それをコードする遺伝子が転写されること、好ましくは翻訳されることを意味する。典型的に、コード領域の発現は、コードされたポリペプチドの産生をもたらす。
ＦＧＦＲ４およびＦＧＦ１９タンパク質は、公知であり、それらの変化した状態および／または発現は、当該技術分野において標準的な技術、例えば、核酸増幅、配列解析、および／またはハイブリダイゼーションに基づく技術などによる、突然変異またはコピー数異常のゲノム解析、ノーザンブロットまたはｑＲＴ−ＰＣＲ、ウエスタンブロットまたは他の免疫ブロットもしくは免疫学的検定、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などのＲＮＡ発現解析を用いて測定され得る。
本明細書に記載される本発明がより十分に理解され得るように、以下の実施例が記載されている。これらの実施例が、例示を目的としたものであるに過ぎず、限定するものと解釈されるべきではないことが理解されるべきである。
実施例
実施例１：以下の化合物の合成のための手順：
Figure 2021050231
一般：
マイクロ波加熱を、Biotage Emrys LiberatorまたはInitiatorマイクロ波を用いて行った。カラムクロマトグラフィーを、Isco Rf200dを用いて行った。溶媒除去を、BuechiロータリーエバポレータまたはGenevac遠心エバポレータのいずれかを用いて行った。分取ＬＣ／ＭＳを、酸性移動相条件下で、Waters自動精製装置および１９×１００ｍｍのXTerra ５ミクロンＭＳ Ｃ１８カラムを用いて行った。ＮＭＲスペクトルを、Varian ４００ＭＨｚ分光計を用いて記録した。分析質量スペクトル（ＭＳ）結果が、シングル四重極型ＭＳ検出器（Waters SQD）を備えたWaters Acquity UPLCを用いて得られた。
精製のための分取ＨＰＬＣ条件
クロマトグラフィー条件：
計器：Waters 2767-SQD Mass trigger Prep System
カラム：Waters Xbridge C18 150mm*19mm*5μm
検出器：VWD SQD
流量：１５ｍＬ／分
Figure 2021050231
代表的な移動相：
１）
移動相：Ａ：水中０．１％のＴＦＡ
移動相：Ｂ：ＡＣＮ
２）
移動相：Ａ：水中０．１％のＮＨ４ＨＣＯ３
移動相：Ｂ：ＡＣＮ
３）
移動相：Ａ：水中０．１％のＮＨ４ＯＡｃ
移動相：Ｂ：ＡＣＮ
４）
移動相：Ａ：水中０．１％のＮＨ４ＯＨ
移動相：Ｂ：ＡＣＮ
定義：以下の略語は、示される意味を有する：
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ｂｏｃ２Ｏ：二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ：２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル
ｔＢｕＯＮａ：ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド
ＣＨ３Ｉ：ヨードメタン
Ｃｓ２ＣＯ３：炭酸セシウム
ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＥ：ジメチルエーテル
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＧＴＡ：エチレングリコール四酢酸
ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化−質量分析法
ＥｔＯＨ：エタノール
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
Ｈ２ＳＯ４：硫酸
ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム
ＫＨＭＤＳ：カリウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＫＯＨ：水酸化カリウム
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析法
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｓＣｌ：塩化メタンスルホニル
ＮａＢＨ３ＣＮ：シアノ水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３：ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド
ＮＨ４Ｃｌ：塩化アンモニウム
ＮＨ４ＨＣＯ３：重炭酸アンモニウム
ＮａＩ：ヨウ化ナトリウム
ＮａＮＯ３：硝酸ナトリウム
ＮａＯＡｃ：酢酸ナトリウム
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｎＢｕＯＨ：ｎ−ブタノール
分取ＨＰＬＣ：分取高速液体クロマトグラフィー
分取ＴＬＣ：分取薄層クロマトグラフィー
ＴＢＡＦ：フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＤＭＳ−ＣＬ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＢＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＢＳＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＥＳＣｌ：クロロトリエチルシラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔｉ（ＯｉＰｒ）４：チタンイソプロポキシド
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＰＰＴＳ：ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム
ＰＥ：石油エーテル
ＰＥＧ：ポリ（エチレングリコール）
ＰｔＯ２：二酸化白金
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム（０）／炭素
Ｐｄ２（ｄｂａ）３：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２：［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
Ｒｕｐｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシビフェニル
キサントホス：４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン
本明細書および特許請求の範囲において使用される際、単数形（「a」、「an」、および「the」）は、文脈上特に示されない限り、複数形の言及を含む。したがって、例えば、「ＨＣｌ塩（an HCl salt）」への言及は、一塩酸塩、二塩酸塩、１．５塩酸塩、ならびに他の化学量論的および非化学量論的な塩酸塩に言及している。
Figure 2021050231
Ｎ−［２−｛６−［３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレイド］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−アクリルアミドメタン
Figure 2021050231
ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２−ニトロフェニルカルバメート
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の、４−ブロモ−２−ニトロアニリン（４ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）と、（Ｂｏｃ）２Ｏ（４．４ｇ、２０．２４ｍｍｏｌ）との混合物を、一晩、還流状態で加熱した。混合物を濃縮し、残渣を、ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１で溶離するシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（５．４ｇ、収率：９３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：３１７、３１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｂ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルカルバメート
トルエン（８５ｍＬ）中の、ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２−ニトロフェニルカルバメート（５．４ｇ、１７ｍｍｏｌ）と、１−エチルピペラジン（２．９１ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２．１ｇ、３．４ｍｍｏｌ）と、キサントホス（３．９２ｇ、６．８ｍｍｏｌ）と、Ｃｓ２ＣＯ３（１１．１ｇ、３４ｍｍｏｌ）との脱気した混合物を、１００℃で４時間加熱した。反応物を濃縮し、残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：５０〜１：２０で溶離するシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（３．３ｇ、収率：５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：３５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｃ．４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルカルバメート（３．３ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＴＦＡ（２０ｍＬ）を加え、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。減圧下で全ての揮発性物質を除去した後、残渣をＤＣＭに再度溶解させ、飽和Ｋ２ＣＯ３水溶液で中和し、ＤＣＭで抽出した。組み合わされた抽出物を濃縮して、表題化合物（２．１ｇ、収率：９０％）を得て、それを次の工程に直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．０２（ｔ，３Ｈ）、２．３６（ｑ，２Ｈ）、２．４７−２．４９（ｍ，４Ｈ）２．９７−３．００（ｍ，４Ｈ）、６．９７（ｄ，１Ｈ）、７．２０（ｓ，２Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｄｄ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：２５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｄ．Ｎ４−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）−Ｎ６−メチルピリミジン−４，６−ジアミン
トルエン（４５ｍＬ）中の、４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン（２．１ｇ、８．４ｍｍｏｌ）と、６−クロロ−Ｎ−メチルピリミジン−４−アミン（手順２Ａ、工程ｅ；１．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１．５４ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）と、キサントホス（１．９４ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）と、Ｃｓ２ＣＯ３（５．４８ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）との脱気した混合物を、１００℃で１時間加熱した。反応物を濃縮し、残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：４０〜１：２０で溶離するシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（８７０ｍｇ、収率：２９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：３５８［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｅ．３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＮ４−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）−Ｎ６−メチルピリミジン−４，６−ジアミン（８７０ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮａＨ（６０％、２００ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＴＨＦ中の２，４−ジクロロ−３−イソシアナト−１，５−ジメトキシ−ベンゼン（手順２Ａ、工程ａ〜ｄ；９０８ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で滴下して加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２ｍＬ）を加えて、反応をクエンチした。混合物を濃縮し、ＤＣＭで抽出した。組み合わされた抽出物を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得て、それをシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（３３０ｍｇ、収率：２１％）を赤色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．４４（ｔ，３Ｈ）、３．０１（ｔ，２Ｈ）、３．２１（ｑ，２Ｈ）、３．４１−３．４９（ｍ，５Ｈ）、３．７３−３．８０（ｍ，４Ｈ）、３．９２（ｓ，６Ｈ）、６．２７（ｓ，１Ｈ）、６．５５（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ）、７．６９（ｓ，１Ｈ）、８．３２（ｄ，１Ｈ）、８．５２（ｓ，１Ｈ）、１０．２８（ｂｒ ｓ，１Ｈ）、１２．０５（ｂｒ ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：６０５［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｆ．１−（６−（２−アミノ−４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル尿素
ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素（３３０ｍｇ、０．５４６ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でラネーＮｉ（水中の懸濁液）を加え、得られた混合物を、水素雰囲気（１気圧）下で３時間撹拌した。反応物をろ過し、濃縮した。残渣をＭｅＯＨで２回洗浄して、表題化合物（２８０ｍｇ、純度：９０％）を得て、それを次の工程に直接使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）：５７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
Figure 2021050231
ｇ．Ｎ−（２−（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イルアミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１−（６−（２−アミノ−４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル尿素（２８０ｍｇ、純度：９０％、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、−１０℃でＴＨＦ中の塩化アクリロイルの溶液（２０ｍｇ／ｍＬ、２ｍＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物をこの温度で１時間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を加えて、反応をクエンチした。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣおよび分取ＴＬＣによって精製して、表題化合物１０８（２０ｍｇ、収率：７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．３１（ｔ，３Ｈ）、２．６５（ｑ，２Ｈ）、２．６２−２．６８（ｍ，４Ｈ）、３．２７（ｓ，３Ｈ）、３．３６−３．３８（ｍ，４Ｈ）、３．９１（ｓ，６Ｈ）、５．７６（ｄ，１Ｈ）、５．９０（ｓ，１Ｈ）、６．２４（ｄｄ，１Ｈ）、６．４１（ｄ，１Ｈ）、６．５２（ｓ，１Ｈ）、６．７４（ｄｄ，１Ｈ）、７．０７（ｂｒ ｓ，１Ｈ）、７．２３（ｄ，１Ｈ）、７．７２（ｂｒ ｓ，１Ｈ）、７．９８（ｂｒ ｓ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、１２．５２（ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：６２９［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例２：生物学的活性のアッセイ
ＦＧＦＲ４への結合のアッセイ。精製された組み換えＦＧＦＲ４を、４℃で一晩、または室温で１時間、１０μＭの化合物でプレインキュベートした。プレインキュベーションの後、ＯＰＴＩ−ＴＲＡＰタンパク質濃縮および脱塩Ｃ４カラム（Optimize Technologies）において、ＦＧＦＲ４を濃縮し、緩衝液を交換した。タンパク質を、０．１％のギ酸を含有するアセトニトリル中で溶離させ、Thermo Scientific Q Exactive（商標）LCMSにおいて直接注入によって処理して、変性されたインタクトＦＧＦＲ４を同定した。
以下の表１中に示される結果により、ペプチド−リガンド付加物の予測質量と実測質量との一致によって、試験化合物とペプチドとの共有結合付加物の形成が確認される。
Figure 2021050231
キナーゼ活性阻害のＩＣ５０プロファイリング。Kinase HotSpot（役務商標）アッセイを用いて、Reaction Biology Corporation（Malvern,Pennsylvania）において、化合物をＦＧＦＲ阻害活性についてプロファイリングした。Anastassiadis et al.,2011,Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinase inhibitor selectivity.Nat Biotechnol 29,1039-1045を参照されたい。
組み換えＦＧＦＲ１（２．５ｎＭ）、ＦＧＦＲ２（１ｎＭ）、ＦＧＦＲ３（５ｎＭ）、またはＦＧＦＲ４（１２ｎＭ）（Invitrogen（商標））を、キナーゼ反応緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％のBrij35、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、０．０２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、２ｍＭのＤＴＴ、および１％のＤＭＳＯ）中の基質ＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ（配列番号１）（２０μＭ、ＦＧＦＲ１基質）；およびポリ［Ｅ，Ｙ］４：１（０．２ｍｇ／ｍｌ、ＦＧＦＲ２、３、４基質）］との混合物として調製した。化合物を、音響技術（Labcyte（登録商標）Echo 550,Sunnyvale,California）（Olechno et al.,2006,Improving IC50 results with acoustic droplet ejection.JALA 11,240-246を参照）を用いて酵素／基質混合物に加え、室温で０、１５、または６０分間プレインキュベートした。化合物のプレインキュベーションの後、ＡＴＰ（Sigma-Aldrich（登録商標））と、３３Ｐ−γ−ＡＴＰ（PerkinElmer）との混合物を、１０μＭの最終濃度になるまで加えて、キナーゼ反応を開始させた。反応物を室温で１２０分間インキュベートし、次に、Whatman（商標）Ｐ８１イオン交換ろ紙上にスポットした。結合されていないホスフェートを、０．７５％のリン酸中でフィルタを十分に洗浄することによって除去した。Anastassiadis et al.,2011,Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinase inhibitor selectivity.Nat Biotechnol 29,1039-1045を参照されたい。
ＦＧＦＲ４およびＦＧＦＲ１についての結果が表２に示される。化合物１０８は、ＦＧＦＲ４の選択的阻害を示し、ＦＧＦＲ１に対してより高いＩＣ５０を有していた。
Figure 2021050231
理論に制約されるのを望むものではないが、ＦＧＦＲ１に対するＩＣ５０活性は、一般に、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、およびＦＧＦＲ３に対する活性を代表する。Dieci et al.,2013,Fibroblast Growth Factor Receptor Inhibitors as a Cancer Treatment:From a Biologic Rationale to Medical Perspectives.Cancer Discovery,F1-F16も参照されたい。
確認するために、化合物を、ＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ３阻害についても試験した。以下の表３中に示されるこれらの結果は、一般に、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、およびＦＧＦＲ３の活性を代表するＦＧＦＲ１のＩＣ５０活性と一致し、このＦＧＦＲ４阻害剤の選択性をさらに実証している。
Figure 2021050231
腫瘍モデルにおけるインビボ有効性。化合物１０８を、３つの異なるヒト肝細胞癌腫瘍細胞株に由来する腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおいて腫瘍増殖を阻害するその能力について評価した。これらの細胞株は、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する癌を代表する。Sawey et al.,Cancer Cell 19(3):347-358(2011)を参照されたい。
動物：６〜８週齢の、体重約１９〜２５ｇのヌードマウスを、Taconic（Taconic,Hudson,New York）から購入した。全ての動物実験を、施設内動物管理使用委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって承認されたプロトコルにしたがって行った。
腫瘍異種移植片および処置：それぞれ総体積１００μｌの、１：１Matrigel（Corning Inc,Corning,NY）中の、７．５×１０６個のＨＵＨ７細胞（ＨＳＲＲＢカタログ番号ＪＣＲＢ０４０３）、５×１０６個のＨｅｐ３Ｂ（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＢ８０６４）、または２．５×１０６個のＪＨＨ７細胞（ＨＳＲＲＢカタログ番号ＪＣＲＢ１０３１）を、右側側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３に達したとき、マウスを、５〜１０匹の動物の処置群に無作為化した。５％のＤＭＳＯ（Alfa Aesar,Ward Hill,MA）、１０％のＰＥＧ３００（Sigma,St.Louis,MO）、８％のTWEEN（登録商標）80（Sigma,St.Louis,MO）、７７％のＵＳＰ生理食塩水のビヒクル中で、所望の濃度で製剤化された化合物１０８を用いて、１５日間にわたって示された投与量で、腹腔内注射によって１日２回投与を行った。腫瘍容積を、容積＝（長さ＊幅２）／２という式を用いて週２回収集した。体重も週２回収集した。全ての動物を、The Guide for Care and Use of Laboratory Animals,8th edition（National Academies Press,Washington D.C.）にしたがって観察および管理した。
統計的方法：実験の最後に、GraphPad Prism 5を用いて、処置群の比較のためにボンフェローニ事後検定を伴う反復測定分散分析（Repeated Measures Anova）を用いて、統計的比較を行った。以下の基準を用いて、病勢進行、病勢安定、部分的退縮、および完全退縮を決定した。病勢進行は、最良の応答から増加したかまたは初期腫瘍容積の＞１２０％の３回連続測定として定義される。病勢安定は、初期腫瘍容積の＜１２０％および＞５０％の３回連続測定である一方、初期腫瘍容積の＜５０％の３回連続測定は、部分的退縮として認められる。完全退縮は、＜３０ｍｍ３の３回連続測定である。処置群間の応答を比較するためにカイ二乗検定を使用した（Microsoft Excel）。
ＨＵＨ７、ＨＥＰ３Ｂ、およびＪＨＨ７癌細胞に由来する腫瘍を有する動物からの結果がそれぞれ図１〜３に示され、表４中にも反映される。
Figure 2021050231
これらのデータは、化合物１０８が全てのモデルにおいて有効であることを実証している。３つのモデルの中で、ＨＥＰ３Ｂが化合物１０８に対して最も感受性が高く、ＪＨＨ７が最も感受性が低く、ＨＵＨ７が中間の感受性を示す。ＪＨＨ７について図３中で用量反応が見られるが、試験される全ての用量レベルで病勢進行があった。
化合物１０８とBGJ398との比較試験。化合物１０８および公知のＦＧＦＲ阻害剤BJG398を用いて比較試験を行った。
ＩＣ５０を得るための生化学的キナーゼアッセイプロトコル：組み換えＦＧＦＲ１（２．５ｎＭ）、またはＦＧＦＲ４（１２ｎＭ）を、キナーゼ反応緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％のBrij35、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、０．０２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、２ｍＭのＤＴＴ、および１％のＤＭＳＯ）中の基質ＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ（配列番号１）（２０μＭ、ＦＧＦＲ１基質）；ポリ［Ｅ，Ｙ］４：１（０．２ｍｇ／ｍｌ、ＦＧＦＲ２、３、４基質）］との混合物として調製した。化合物を、音響技術を用いて酵素／基質混合物に加え、室温で０、１５、または６０分間プレインキュベートした。化合物のプレインキュベーションの後、３３Ｐ−γ−ＡＴＰを、１０μＭの最終濃度になるまで加えて、キナーゼ反応を開始させた。反応物を室温で１２０分間インキュベートした。基質リン酸化を、上記のように、フィルタアッセイによってモニターした。結果が表５に示される。報告される結果は、化合物１０８が、より強力なＦＧＦＲ４阻害剤である一方、BGJ398が、より強力なＦＧＦＲ１阻害剤であることを示す。
Figure 2021050231
ＧＩ５０を得るための細胞生存性アッセイプロトコル：細胞株を、３７℃、５％のＣＯ２および９５％の湿度で培養した。培地を、GIBCO（登録商標）、ＵＳＡから購入した。生存性アッセイでは、２０００個の細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、化合物処理の前に２４時間インキュベートした。化合物の添加の後、プレートを、５％のＣＯ２で、３７℃で７２時間インキュベートし、次に、ＣＴＧアッセイ（CellTiter-Glo（登録商標）Luminescent Cell Viability Assay、カタログ番号：Ｇ７５７２、Promega）によって測定した。結果が表６に示される。この表は、化合物１０８が、ＦＧＦ１９増幅株であるＨｅｐ３Ｂ細胞において、BGJ398より強力であることを示す。他の２つのＦＧＦ１９増幅株であるＨＵＨ７およびＪＨＨ７における効力は、化合物１０８とBGJ398との間で同等である。ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＢ−８０６５）、ＳＮＵ３９８（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ−２２３３）およびＳＮＵ４４９（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ−２２３４）は、対照として使用したＦＧＦ１９非増幅細胞株である。
ＧＩ５０は、１００×（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｔ０）＝５０となる試験薬剤の濃度である。例えば、Monks et al., Feasibility of a High-Flux Anticancer Drug Screen Using a Diverse Panel of Cultured Human Tumor Cell Lines, J Natl Cancer Inst(1991)83(11):757-766;Boyd et al., Data Display and Analysis Strategies for the NCI Disease-oriented In Vitro Antitumor Drug Screen, in Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for DRUG DISCOVERY and Development, Valeriote et al., eds.(1990), pp.11-34を参照されたい。試験薬剤への７２時間の期間の曝露後の試験ウェルの発光がＴであり、時間ゼロにおける発光がＴ０であり、対照の発光がＣである。ＧＩ５０は、試験薬剤の増殖阻害力の尺度である。
Figure 2021050231
インビボ有効性比較：上記のように、ヌードマウスを、これらの実験に使用した。総堆積１００μｌの、１：１Matrigel（Corning Inc,Corning,New York）中の５．０×１０６個のＨｅｐ３Ｂ細胞を、右側側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３に達したとき、マウスを、５〜１０匹の動物の処置群に無作為化した。次に、５％のＤＭＳＯ（Alfa Aesar,Ward Hill,MA）、１０％のＰＥＧ３００（Sigma,St.Louis,MO）、８％のTWEEN（登録商標）80（Sigma,St.Louis,MO）、７７％のＵＳＰ生理食塩水のビヒクル中で、所望の濃度で製剤化された化合物１０８を用いて、処置を開始した。０．５％のメチルセルロース（Sigma）／０．２％のTWEEN（登録商標）80中の懸濁液として製剤化されたBGJ398を、所望の濃度で懸濁させた。両方の薬剤を、１つの処置群を除いて１８日間投与した（以下を参照）。腫瘍容積を、容積＝（長さ＊幅２）／２という式を用いて週２回収集した。体重も週２回収集した。全ての動物を、The Guide for Care and Use of Laboratory Animals,8th edition（National Academies Press,Washington D.C.）にしたがって観察および管理した。この比較インビボ試験の結果が、図４に示される。
データは、化合物１０８が、許容可能な投与量レベルでBGJ398より有効であることを示す。６０ｍｇ／ｋｇのBGJ398は、化合物１０８と同等の有効性を示したが、このBGJ398の６０ｍｇ／ｋｇ群の投与は、動物の健康状態の不良のために１１日目に終了しなければならなかった。毒性のこの差異は、BGJ398を３０ｍｇ／ｋｇで経口投与した動物の群が健康状態の不良を示さなかったため、投与経路によるものではない。
実施例３：化合物１０８の代替的な合成方法および結晶化
ビス（Ｂｏｃ）−４−ブロモ−２−ニトロアニリンの合成
Figure 2021050231
三口５Ｌ丸底フラスコに、４−ブロモ−３−ニトロアニリン（２００ｇ、９２２ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ無水物（４１２ｇ、１８８９ｍｍｏｌ、２．０５当量）、およびＴＨＦ（３Ｌ）を充填した。撹拌された混合物に、ＤＭＡＰ（１１．２６ｇ、９２．２ｍｍｏｌ、０．１０当量）を充填した。混合物を６５℃に加熱し、ＨＰＬＣによって反応が完了したと見なされるまで（≦２％の４−ブロモ−３−ニトロアニリンが残っている、約３．５時間）この温度で撹拌し、次に、室温に冷ました。混合物を１２Ｌの後処理容器に移し、酢酸エチルを加え（３Ｌ）、混合物を、１ＮのＨＣｌ（１Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）、および１０％のＮａＣｌ水溶液（１Ｌ）で連続して洗浄した。有機層を、撹拌可能な最小体積になるまで濃縮し、酢酸エチル（１Ｌ）を加えた。溶液にヘプタン（１．５Ｌ）を２回追加し、混合物を、２回目の追加の後に１．５Ｌの総体積になるように濃縮した。得られたスラリーをろ過し、ヘプタン（３×２００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題化合物（３４５．５ｇ、９０％の収率）をオフホワイトの固体として得た。
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）カルバメート
Figure 2021050231
５Ｌの三口丸底フラスコに、ビス（Ｂｏｃ）−４−ブロモ−２−ニトロアニリン（２５０ｇ、５９９ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２３４ｇ、７１９ｍｍｏｌ、１．２当量）、およびブッフバルトＲｕ−Ｐｈｏｓプレ触媒（ＣＡＳ＃ １３７５３２５−６８−００、２０ｇ、２７．４ｍｍｏｌ、０．０４６当量）を充填した。固体に、予め脱気したトルエン（１Ｌ）およびＮ−エチルピペラジン（１５６ｍＬ、１２２８ｍｍｏｌ、２．０５当量）を充填した。得られた混合物を、３０分間にわたって窒素ガスでスパージし、次に、混合物を９５〜１０５℃に加熱し、ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示されるまで（約６時間）この温度で撹拌した。混合物を室温に冷まし、トルエン（３×６０ｍＬ）でケーキを洗浄しながら、Celite（登録商標）545（１２５ｇ）上でろ過した。得られた溶液を濃縮して、表題化合物（２１０ｇ、１００％の収率）を得て、それを精製せずに持ち越した。
４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン
Figure 2021050231
最小量のトルエン中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルカルバメート（２１０ｇ、５９９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、内部温度を≦４０℃に維持しながら、機械的撹拌しながら、４ＮのＨＣｌ水溶液（２．１Ｌ、１４当量）を充填した。得られたスラリーを、ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示されるまで、残りの有機溶媒を除去するために窒素スイープしながら室温で撹拌した。懸濁液に、ＭＴＢＥ（１Ｌ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、層を分離した。下側の水層を０〜５℃に冷却し、１２ＮのＮａＯＨ水溶液を、ｐＨ９〜１０になるまで加えた（約４８０ｍＬが必要とされる）。得られた固体をろ過し、冷（０〜５℃）水（３×４００ｍＬ）で洗浄した。湿潤ケーキを減圧下および／または３０℃での窒素スイープ下でろ過し、表題化合物（１３６．３ｇ、９１％の収率）を赤色の固体として得た。
ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２−ニトロフェニルカルバメート−代替的な手順
Figure 2021050231
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の、４−ブロモ−２−ニトロアニリン（４ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）と、（Ｂｏｃ）２Ｏ（４．４ｇ、２０．２４ｍｍｏｌ）との混合物を、一晩、還流状態で加熱した。混合物を濃縮し、残渣を、ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１で溶離するシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（５．４ｇ、収率：９３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：３１７、３１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルカルバメート−代替的な手順
Figure 2021050231
トルエン（８５ｍＬ）中の、ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２−ニトロフェニルカルバメート（５．４ｇ、１７ｍｍｏｌ）と、１−エチルピペラジン（２．９１ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２．１ｇ、３．４ｍｍｏｌ）と、キサントホス（３．９２ｇ、６．８ｍｍｏｌ）と、Ｃｓ２ＣＯ３（１１．１ｇ、３４ｍｍｏｌ）との脱気した混合物を、１００℃で４時間加熱した。反応物を濃縮し、残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：５０〜１：２０で溶離するシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（３．３ｇ、収率：５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：３５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
ａ．１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル尿素
Figure 2021050231
３Ｌの三口丸底フラスコに、２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシアニリン（１９９．６５ｇ、８９９ｍｍｏｌ）、トリホスゲン（９３ｇ、３１５ｍｍｏｌ、０．３５当量）、および１，４−ジオキサン（１．９Ｌ）を充填した。混合物を１００℃に加熱し、この温度で３．５時間撹拌した。次に、混合物を２０〜２５℃に冷却し、ろ過した。固体残渣を１，４−ジオキサン（２００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を、撹拌可能な最小体積になるまで濃縮し、ジオキサンを３回（それぞれ７００ｍＬ）追加した。最後の追加の後、溶液を、撹拌可能な最小体積になるまで濃縮し、次に、１，４−ジオキサン（７３０ｍＬ）に再度溶解させた。このスラリーに、６−クロロ−Ｎ−メチルピリミジン−４−アミン（１２９ｇ、８９９ｍｍｏｌ、１当量）を充填した。得られた混合物を８０℃に加熱し、この温度で６０時間撹拌し、その間に、かなりの量の沈殿物が形成された。混合物を２０〜２２℃に冷却し、ろ過した。固体ケーキをジオキサン（２×９０ｍＬ）で洗浄し、窒素スイープしながら室温で、減圧下で乾燥させて、表題化合物（１９１ｇ、５４％の収率）を固体として得た。
ｂ．１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素
Figure 2021050231
５Ｌの三口丸底フラスコに、３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素（１３５ｇ、３４５ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（６．８７ｇ、４１．４ｍｍｏｌ．０．１２当量）およびＤＭＦ（４００ｍＬ）を充填した。混合物を０〜５℃に冷却し、ＮａＨ（鉱油中に分散されて６０％、１７．９ｇ、４４８ｍｍｏｌ、１．３当量）を、内部温度を≦５℃に維持するように少しずつ充填した。混合物を０〜５℃で１時間撹拌させ、その後、内部温度を≦５℃に維持するように、ＳＥＭ−Ｃｌ（７３．２ｍＬ、４１４ｍｍｏｌ、１．２当量）を滴下して加えた。ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示されるまで（約１時間）反応混合物を０〜５℃で撹拌した。バッチを、冷（０〜５℃）水（４Ｌ）を含む第２の５Ｌの三口丸底フラスコに移した。得られたスラリーを１５分間撹拌し、次に、ろ過した。ケーキを水（３×３００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題化合物（１８４ｇ、１０２％）を固体として得た。
ｃ．１−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−３−（６−（（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素
Figure 2021050231
３Ｌの三口丸底フラスコに、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素（１８２ｇ、３４９ｍｍｏｌ）、４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン（８７ｇ、３４９ｍｍｏｌ、１当量）、ＢｒｅｔｔＰｈｏｓプレ触媒（ＣＡＳ＃ １４７０３７２−５９−８、１５．６ｇ、１７．２ｍｍｏｌ、０．０５当量）、および炭酸セシウム（１３６ｇ、４１８ｍｍｏｌ、１．２当量）を充填した。系を窒素でフラッシュし、予め脱気したＤＭＦ（９１０ｍＬ）を加えた。溶液を、３０分間にわたって窒素ガスでスパージし、次に、ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示されるまで（３〜４時間）２２〜２５℃で撹拌した。内部温度を≦３５℃に維持するような速度で水（２．７Ｌ）を含む５Ｌの三口丸底フラスコに混合物を充填した。得られたスラリーを２２〜２５℃に冷却し、次に、ろ過した。ケーキを水（４×１５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題化合物（２５７ｇ、１００％の収率）を固体として得た。
ｄ．１−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−３−（６−（（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素の合成−代替的手順
Figure 2021050231
還流冷却器、マグネチックスターラーおよび窒素パージ設備を備えた３Ｌの四口丸底フラスコに、４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン（５０ｇ、０．１９９ｍｏｌ）、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素（１２５．１ｇ、０．２３９ｍｏｌ、１．２当量）、ＤＭＦ（５００ｍＬ）および炭酸セシウム（１３０．１７ｇ、０．３９９ｍｏｌ、２．０当量）を加えた。得られた混合物を、室温で５〜１０分間にわたって窒素を混合物に通してバブリングすることによってパージした。混合物に、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１８．２９ｇ、０．０１９９ｍｏｌ、０．１０当量）、キサントホス（１１．５５ｇ、０．０１９９ｍｏｌ、０．１０当量）を加え、窒素パージをさらに１０分間続けた。次に、ＴＬＣ分析により反応の完了が示されるまで（約２時間）反応混合物を１００℃に加熱した。混合物をセライト床に通してろ過し、水性後処理（aqueous workup）を行い、所望の生成物をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相を塩水溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、表題化合物を、赤みを帯びた固体（１４２ｇ）として得て、それをそのまま持ち越した。
ｅ．１−（６−（２−アミノ−４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル尿素
Figure 2021050231
ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素（３３０ｍｇ、０．５４６ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でラネーＮｉ（水中の懸濁液）を加え、得られた混合物を、水素雰囲気（１気圧）下で３時間撹拌した。反応物をろ過し、濃縮した。残渣をＭｅＯＨで２回洗浄して、表題化合物（２８０ｍｇ、純度：９０％）を得て、それを次の工程に直接使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）：５７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｆ．Ｎ−（２−（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イルアミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドの調製
Figure 2021050231
 ５Ｌの三口丸底フラスコに、ジクロロメタン（１Ｌ）、アクリル酸（１４．６ｍＬ、２１３ｍｍｏｌ、１．５当量）、およびヒューニッヒ塩基（３９．５ｍＬ、２２７ｍｍｏｌ、１．６当量）を充填した。溶液を０〜５℃に冷却し、内部温度を≦７℃に維持するような速度でクロロギ酸メチル（１５．４ｍＬ、１９８ｍｍｏｌ、１．４当量）で処理した。混合物を２０〜２５℃に温め、この温度で１時間撹拌し、次に、０〜５℃に冷却した。別個の５００ｍＬの丸底フラスコ中で、１−（６−（（２−アミノ−４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）尿素（１００ｇ、１４２ｍｍｏｌ、１当量）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解させた。基質溶液を、混合無水物溶液に移し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）ですすぎ、このすすぎ液も無水物溶液に移した。得られた混合物に、ピリジン（２７．５ｍＬ、３４０ｍｍｏｌ、２．４当量）を加え、得られた混合物を２０〜２５℃に温めた。ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示されるまで（約１時間）反応混合物をこの温度で撹拌した。次に、混合物を０〜５℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）を加えた。バッチを２０分間撹拌し、次に、相を沈降させ、分離させた。下側の有機相に、ＮａＨＣＯ３溶液（６００ｍＬ）で二度目の洗浄をした。次に、下側の有機相を１０％のＮａＣｌ水溶液（６００ｍＬ）で洗浄した。下側の有機相を固体Ｎａ２ＳＯ４（２５０ｇ）で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、表題化合物（１０８ｇ、１００％）を得て、それを精製せずに次の工程に使用した。
ｇ．遊離塩基形態の化合物１０８の合成および結晶化
Figure 2021050231
ジクロロメタン（１０２ｍＬ）中のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチル−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）ウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（１、５１ｇ、６７．１２ｍｏｌ）の撹拌溶液を、０〜５℃に冷却した。この溶液に、内部温度を≦１５℃に維持するような速度でトリフルオロ酢酸（１０２ｍＬ、１５８５ｍｏｌ、２３．６当量）を加えた。添加が完了したら、混合物を室温に温め、３時間撹拌し、その時点でＨＰＬＣ分析により反応の完了が示された。混合物を、内部温度を≦２５℃に維持するような速度で、冷（０〜５℃）飽和水酸化アンモニウム溶液（５５０ｍＬ）を含む第２のフラスコに移した。混合物を５〜１０分間撹拌させ、その時点でＨＰＬＣ分析により反応の完了が示された。混合物を分液漏斗に移し、ジクロロメタン／メタノール（５：１、６００ｍＬ）で２回、およびジクロロメタン／メタノール（５：１、３００ｍＬ）で１回抽出した。組み合わせた有機相を、撹拌可能な最小体積になるまで濃縮し、アセトニトリル（１５０ｍＬ）を加えた。得られた固体を１５分間スラリー化し、次に、ろ過した。固体ケーキをアセトニトリル（４×３０ｍＬ）で洗浄し、窒素スイープしながら減圧下で、フィルタ上で乾燥させて、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（１０８、２９．５６ｇ、７０％の収率）を固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ １．０４（ｔ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ、３Ｈ）；２．３７（ｍ，２Ｈ）；３．１３（ｍ，４Ｈ）；３．２２（ｍ，４Ｈ）；３．３１（ｓ，３Ｈ）；３．９３（ｓ，６Ｈ）；５．７２（ｄｄ，１Ｈ、Ｊ＝１０．２７、１．８３Ｈｚ）；６．２３（ｄｄ，１Ｈ、Ｊ＝１７．０６、１．８３Ｈｚ；ｂｒ ｓ，１Ｈ）；６．４８（ｄｄ，１Ｈ、Ｊ＝１６．８７、１０．２７Ｈｚ）；６．８１（ｄｄ，１Ｈ、Ｊ＝８．９９、２．７５Ｈｚ）；６．８９（ｓ，１Ｈ）；７．２９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．１７Ｈｚ、２Ｈ）；８．３２（ｓ，１Ｈ）；８．７１（ｓ，１Ｈ）；９．５８（ｓ，１Ｈ）（図９Ａ〜９Ｃ）。質量スペクトル（Mass spec）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６２９．２。これは、５００ＭＨｚでVarian Inovaにおいて測定された。
遊離塩基形態の化合物１０８の再結晶化：
Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（１０８、４２ｇ）を、ジクロロメタン／メタノール（４：１、５００ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、アセトニトリル（１５０ｍＬ）を加えた。混合物を、１５０ｍＬの総体積になるまで減圧下で濃縮した。得られた混合物に、さらなるアセトニトリル（１５０ｍＬ）を加え、混合物を、１５０ｍＬの総体積になるまで減圧下で再度濃縮した。得られたスラリーをろ過した。固体ケーキをアセトニトリル（４×３０ｍＬ）で洗浄し、窒素スイープしながら減圧下で、フィルタ上で乾燥させて、再結晶化された遊離塩基形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（１０８、３６ｇ、再結晶化からの８６％の回収率）を固体として得た。
実施例４：粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）による結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の特性評価
この実施例における試料についてのＰＸＲＤデータを、Rigaku MultiFlex Instrument（ターゲット：Ｃｕ；管電圧：４０ｋＶ；管電流：３０ｍＡ、範囲３．０〜４５．０＝４２．０°）において取った。粉末を標準的な円形のアルミニウム試料ホルダーに加えることによって試料を準備し、スライドガラスと同じ高さにした。
結晶性遊離塩基形態の化合物１０８は、図５に示されるＰＸＲＤパターンによって特徴付けられ、３．０〜３５．０＝３２．０°の範囲を示すように切り取られた。結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の３つのロットからのＰＸＲＤスペクトルの重ね合わせ（図６）は、再現性を示す。
表７に要約されるように、結晶性遊離塩基形態の化合物１０８は、６個の特性ピークを有するＰＸＲＤパターンを示す。
Figure 2021050231
実施例５：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による結晶性遊離塩基形態化合物１０８の特性評価
この実施例における試料についてのＤＳＣを、Mettler-Toledo DSC 1/700（運転条件：初期温度３５℃、最終温度３２５℃、加熱速度１０℃／分）において取った。
約４〜８ｍｇの結晶性遊離塩基形態の化合物１０８を、７０μＬのアルミニウムパンに加え、覆い、圧着し、単一の孔を空けた。試料および同じように準備された空の容器を、熱電対表面に加え、計器を初期温度で平衡化した。チャンバを１０℃／分で３２５℃に加熱し、示差サーモグラムを収集した。
結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の示差サーモグラムは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）計器を用いて得られた（図７を参照、約２５４℃の後は切り取られている）。結晶性遊離塩基形態の化合物１０８は、２１３．６℃（±１℃）の開始温度で単一の吸熱ピークを有することによって特徴付けられる。結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の３つの異なるバッチからの開始温度の比較が、表８および図８に示される（約２４６℃の後は切り取られている）。
Figure 2021050231
実施例６：結晶性遊離塩基形態化合物１０８の溶解度
０．１ＮのＨＣｌへの結晶性遊離塩基形態化合物１０８の溶解度は、５．２ｍｇ／ｍＬであった。
実施例７：
この実施例は、上に報告されるデータを生じる材料を上回る、結晶性遊離塩基形態の化合物１０８の別個のバッチから作製されたさらなるデータを報告する。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、固体）δ（ｐｐｍ）：１１．９、３１．１、５２．２、５４．８、５６．５、８８．６、９５．７、１０６．２、１１０．８、１１２．３、１１４．５、１２３．０、１２９．０、１３０．３、１３２．３、１３２．９、１３３．８、１４９．９、１５３．２、１５４．８、１５５．４、１６０．０、１６２．１、１６４．４。これは図１０に示される。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．４６−２．５１（４Ｈ，ｍ）、３．１２（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、３．２１（３Ｈ，ｓ）、３．９２（６Ｈ，ｓ）、５．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３、１．７Ｈｚ）、６．１３−６．２６（１Ｈ，ｍ）、６．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１、１．８Ｈｚ）、６．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１０．３Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９、２．６Ｈｚ）、６．８８（１Ｈ，ｓ）、７．２３−７．３３（１Ｈ，ｍ）、７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）、８．３０（１Ｈ，ｓ）、８．６９（１Ｈ，ｂｒｓ）、９．５７（１Ｈ，ｂｒｓ）、１２．０５（１Ｈ，ｓ）。これは、Avance ６００ＭＨｚ（Bruker）を用いて測定された。これは図９Ｄに示される。
実施例８：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶の調製
１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含有するアセトンの溶液（４ｍＬ）に、塩酸溶液（２．７６μＬ、１当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（２０．２５ｍｇ）に加え、超音波を照射し、室温で７日間撹拌した。得られた結晶をろ過し、アセトンで洗浄して、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶を得た。
実施例９：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶の調製
１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含有するアセトンの溶液（２．５ｍＬ）に、塩酸溶液（７．２５μＬ、１当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（５３．１２ｍｇ）に加え、超音波を照射し、室温で１日撹拌した。実施例８において得られた結晶形態を反応混合物に加え、５日間にわたってさらに撹拌した。得られた結晶をろ過し、エタノール（１ｍＬ）で洗浄して、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶（５０．６０ｍｇ）を得た。
実施例１０：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶の調製
１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含有するアセトンの溶液（２５ｍＬ）に、塩酸溶液（６８．５１μＬ、１当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（５０２．１ｍｇ）に加え、超音波を照射した。実施例９において得られた結晶形態を反応混合物に加え、室温で７日間撹拌した。得られた結晶をろ過し、酢酸エチル（１．５ｍＬ）で洗浄し、３日間にわたって減圧下で乾燥させて、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩結晶（５４３．０ｍｇ）を得た。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、固体）δ（ｐｐｍ）：１０．９、３２．１、３４．１、４５．４、４９．２、５１．９、５３．７、５６．０、９１．３、９５．７、１１２．５、１２１．２、１２４．１、１２８．２、１３０．７、１３４．３、１４４．７、１５３．６、１５４．８、１６０．３、１６６．９。これは図１１に示される。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．２６（３Ｈ，ｍ）、２．９８−３．２１（６Ｈ，ｍ）、３．２３（３Ｈ，ｓ）、３．５５（２Ｈ，ｂｒｓ）、３．７７（２Ｈ，ｂｒｓ）、３．９２（６Ｈ，ｓ）、５．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３、１．３Ｈｚ）、６．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１．６Ｈｚ）、６．２６（１Ｈ，ｂｒｓ）、６．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１０．２）、６．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０、２．０Ｈｚ）、６．８９（１Ｈ，ｓ）、７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．４１（１Ｈ，ｂｒｓ）、８．３２（１Ｈ，ｓ）、８．８８（１Ｈ，ｓ）、９．６７（１Ｈ，ｓ）、１０．１７（１Ｈ，ｂｒｓ）、１２．０２（１Ｈ，ｓ）。これは図１２に示される。
実施例１１：
この実施例における試料についてのＰＸＲＤデータを、Rigaku RINT TTR-III Instrument（ターゲット：Ｃｕ；管電圧：５０ｋＶ；管電流：３００ｍＡ、範囲５．０〜３５．０＝３０°）において取った。
実施例１０において調製された結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、図１３に示されるＰＸＲＤパターンによって特徴付けられる。
表８に要約されるように、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩は、少なくとも１０個の特性ピークを有するＰＸＲＤパターンを示す。
Figure 2021050231
実施例１２：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩結晶の調製
アセトン（３ｍＬ）に、塩酸溶液（１２．３６μＬ、３当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（３０．１９ｍｇ）に加え、超音波を照射し、室温で４日間撹拌した。得られた結晶をろ過して、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩結晶を得た。
実施例１３：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩結晶の調製
１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含有するアセトンの溶液（１０ｍＬ）に、塩酸溶液（１３７．７μＬ、２当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（５０４．４ｍｇ）に加え、超音波を照射した。実施例１２において得られた結晶形態を反応混合物に加え、室温で７日間撹拌した。得られた結晶をろ過し、酢酸エチル（１．５ｍＬ）で洗浄し、３日間にわたって減圧下で乾燥させて、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩結晶（５６５．４ｍｇ）を得た。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、固体）δ（ｐｐｍ）：９．９、３０．４、３５．０、３９．８、４１．５、４５．５、４６．７、５１．３、５３．８、５６．１、５７．６、９３．２、９６．１、１０９．９、１１１．５、１１２．５、１１５．６、１１９．０、１２８．２、１３０．０、１３１．６、１３４．０、１４８．６、１５４．６、１６１．４、１６３．７。これは図１４に示される。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．２７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、３．０３−３．２１（６Ｈ，ｍ）、３．２５（３Ｈ，ｓ）、３．５２−３．５９（２Ｈ，ｍ）、３．７２−３．８３（２Ｈ，ｍ）、３．９２（６Ｈ，ｓ）、５．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３、１．５Ｈｚ）、６．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１、１．６Ｈｚ）、６．３２（１Ｈ，ｂｒｓ）、６．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１０．４）、６．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９、２．５Ｈｚ）、６．８９（１Ｈ，ｓ）、７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．４２（１Ｈ，ｂｒｓ）、８．３４（１Ｈ，ｓ）、９．０３（１Ｈ，ｂｒｓ）、９．７３（１Ｈ，ｓ）、１０．４３（１Ｈ，ｂｒｓ）、１１．８８（１Ｈ，ｂｒｓ）。これは図１５に示される。
実施例１４：
この実施例における試料についてのＰＸＲＤデータを、Rigaku RINT TTR-III Instrument（ターゲット：Ｃｕ；管電圧：５０ｋＶ；管電流：３００ｍＡ、範囲５．０〜３５．０＝３０°）において取った。
実施例１３において調製された結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、図１６に示されるＰＸＲＤパターンによって特徴付けられる。
表９に要約されるように、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩は、少なくとも１０個の特性ピークを有するＰＸＲＤパターンを示す。
Figure 2021050231
実施例１５：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートの調製
アセトン（５ｍＬ）に、エタンスルホン酸溶液（１３．５１μＬ、１当量）を添加し、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（１００．６ｍｇ）に加え、超音波を照射し、室温で７日間撹拌した。得られた結晶をろ過して、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネート結晶（１０３．７ｍｇ）を得た。
実施例１６：Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートの調製
アセトン（２０ｍＬ）に、エタンスルホン酸溶液（６７．２２μＬ、１当量）を添加し、Ｎ−（２（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド（５００．６ｍｇ）に加え、超音波を照射した。実施例１５において得られた結晶形態を反応混合物に加え、室温で３日間撹拌した。得られた結晶をろ過し、酢酸エチル（１．５ｍＬ）で洗浄し、３日間にわたって減圧下で乾燥させて、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネート結晶（５６２．０ｍｇ）を得た。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、固体）δ（ｐｐｍ）：１０．３、３３．４、４４．０、４４．３、４５．０、４５．９、４７．０、５０．０、５３．０、５５．９、８７．６、９５．５、１０７．４、１１１．０、１２４．８、１２９．５、１３１．５、１３４．５、１４４．２、１５４．６、１５９．２、１５９．９、１６４．１。これは図１７に示される。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、１．２５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、２．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．９８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ）、３．１３（２Ｈ，ｍ）、３．２１（２Ｈ，ｍ）、３．２４（３Ｈ，ｓ）、３．５８（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ）、３．８０（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ）、３．９２（６Ｈ，ｓ）、５．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３、１．５Ｈｚ）、６．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１．７Ｈｚ）、６．２５（１Ｈ，ｂｒｓ）、６．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０、１０．３）、６．８４−６．９２（２Ｈ，ｍ）、７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）、７．４１（１Ｈ，ｂｒｓ）、８．３２（１Ｈ，ｓ）、８．８１（１Ｈ，ｓ）、９．３４（１Ｈ，ｂｒｓ）、９．５８（１Ｈ，ｂｒｓ）、１１．９９（１Ｈ，ｓ）。これは図１８に示される。
実施例１７：
この実施例における試料についてのＰＸＲＤデータを、Rigaku RINT TTR-III Instrument（ターゲット：Ｃｕ；管電圧：５０ｋＶ；管電流：３００ｍＡ、範囲５．０〜３５．０＝３０°）において取った。
実施例１６において調製された結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートは、図１９に示されるＰＸＲＤパターンによって特徴付けられる。
表１０に要約されるように、結晶形態のＮ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドエタンスルホネートは、少なくとも１０個の特性ピークを有するＰＸＲＤパターンを示す。
Figure 2021050231
上記は、本発明を例示するものであり、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。本発明は、以下の特許請求の範囲、およびその中に含まれる特許請求の範囲の均等物によって規定される。

Claims (34)

  1. 結晶形態である以下の化合物：
    Figure 2021050231
     。
  2. 前記化合物が、結晶性遊離塩基形態の化合物Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドである、請求項１に記載の結晶性化合物。
  3. 前記結晶性遊離塩基形態化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θo（±０．２）：１０．３、８．０、および９．５を示す、請求項２に記載の結晶性遊離塩基化合物。
  4. 前記結晶性遊離塩基形態化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、および１７．１を示す、請求項３に記載の結晶性遊離塩基化合物。
  5. 前記結晶性遊離塩基形態化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：１０．３、８．０、９．５、１４．８、１６．５、１７．１、１９．３、２１．８、２３．７、および２４．５を示す、請求項４に記載の結晶性遊離塩基化合物。
  6. 前記結晶性遊離塩基形態が、実質的に、図５に示されるような粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンによって特徴付けられる、請求項２に記載の結晶性遊離塩基化合物。
  7. 前記結晶性化合物が、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミドの化学量論的または非化学量論的なＨＣｌ塩である、請求項１に記載の結晶性化合物。
  8. 前記結晶性化合物が、Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド一塩酸塩である、請求項７に記載の結晶性化合物。
  9. 前記結晶性化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、１９．９、および１１．３を示す、請求項８に記載の結晶性化合物。
  10. 前記結晶性化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、および２５．４を示す、請求項９に記載の結晶性化合物。
  11. 前記結晶性化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、１９．９、１１．３、９．０、２３．５、２５．４、２７．６、２３．０、１８．１、および２９．０を示す、請求項１０に記載の結晶性化合物。
  12. 前記結晶性化合物が、実質的に、図１３に示されるような粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンによって特徴付けられる、請求項８に記載の結晶性化合物。
  13. 前記結晶性化合物が、結晶性Ｎ−（２−（（６−（３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−メチルウレイド）ピリミジン−４−イル）アミノ）−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アクリルアミド二塩酸塩である、請求項７に記載の結晶性化合物。
  14. 前記結晶性化合物が、少なくとも以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、２２．８、および２１．３を示す、請求項１３に記載の結晶性化合物。
  15. 前記結晶性化合物が、以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、および１３．５を示す、請求項１４に記載の結晶性化合物。
  16. 前記結晶性化合物が、以下のＸ線粉末回折ピーク、２θ°（±０．２°）：２６．６、２２．８、２１．３、８．０、２６．２、１３．５、１２．４、１６．１、２８．０、および１８．７を示す、請求項１５に記載の結晶性化合物。
  17. 前記結晶性化合物が、実質的に、図１６に示されるような粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンによって特徴付けられる、請求項１３に記載の結晶性化合物。
  18. 請求項１〜１７のいずれか一項に記載の結晶性化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  19. 前記組成物が、経口投与用、静脈内投与用または皮下投与用に製剤化されている、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. 請求項２に記載の結晶性遊離塩基形態化合物を調製するための方法であって、
    ａ）溶媒中に化合物：
    Figure 2021050231
    （式中、Ｘは（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチルである）
    を含む組成物を提供すること；
    ｂ）前記組成物の温度を≦５０℃に維持しながら、酸を前記組成物に加えること；次に
    ｃ）前記組成物に、飽和水酸化アンモニウム溶液を加えること；次に
    ｅ）前記組成物を、非混和性溶媒の混合物で抽出して、有機相を形成すること；および
    ｆ）好適な溶媒を前記有機相に加えること；
    を含み、
    それによって、請求項２に記載の前記結晶性遊離塩基形態化合物を形成する、前記方法。
  21. 工程ｂ）の前記酸が、トリフルオロ酢酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはメタンスルホン酸である、請求項２０に記載の方法。
  22. 工程ｆ）の前記好適な溶媒が、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，２−ジクロロエタン、またはジメチルホルムアミド水溶液である、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
  23. その必要のある対象における肝細胞癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または請求項１８または請求項１９に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  24. 前記肝細胞癌が、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態が、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加を含む、請求項２４に記載の方法。
  26. その必要のある対象における肝細胞癌を治療する方法であって、
    前記肝細胞癌の細胞を含有する生物学的試料中の変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を検出すること、および前記肝細胞癌が、前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する場合、
    請求項１〜１７のいずれか一項に記載の結晶形態の化合物または請求項１８または請求項１９に記載の医薬組成物を治療有効量で前記対象に投与すること、
    を含む、前記方法。
  27. 前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態が、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加を含む、請求項２７に記載の方法。
  28. 肝細胞癌の治療の方法における請求項１〜１８のいずれか一項に記載の結晶形態の化合物または請求項１９または請求項２０に記載の医薬組成物の使用。
  29. 前記肝細胞癌が、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する、請求項２９に記載の使用。
  30. 前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態が、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加を含む、請求項３０に記載の使用。
  31. 薬剤の調製における請求項１〜１８のいずれか一項に記載の結晶形態の化合物の使用。
  32. 前記薬剤が、肝細胞癌の治療のためのものである、請求項３１に記載の使用。
  33. 前記肝細胞癌が、変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態を有する、請求項３２に記載の使用。
  34. 前記変化したＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の状態が、ＦＧＦＲ４および／またはＦＧＦ１９の発現の増加を含む、請求項３３に記載の使用。
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