JP2021046406A - Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 - Google Patents
Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021046406A JP2021046406A JP2020189292A JP2020189292A JP2021046406A JP 2021046406 A JP2021046406 A JP 2021046406A JP 2020189292 A JP2020189292 A JP 2020189292A JP 2020189292 A JP2020189292 A JP 2020189292A JP 2021046406 A JP2021046406 A JP 2021046406A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- proteoglycan
- degrading
- polypeptide
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 title claims description 92
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000014511 neuron projection development Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102000011413 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108010023736 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 3
- 101710106625 Chondroitinase-AC Proteins 0.000 claims abstract 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 187
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 185
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 183
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 51
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 claims description 45
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 claims description 45
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 44
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 44
- 102000005598 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 claims description 19
- 108010059480 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Proteins 0.000 claims description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 17
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 claims description 16
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 13
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 13
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 9
- 102100039283 Hyaluronidase-1 Human genes 0.000 claims description 8
- 101710199679 Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100039285 Hyaluronidase-2 Human genes 0.000 claims description 8
- 101710199674 Hyaluronidase-2 Proteins 0.000 claims description 8
- 102000015860 Hyaluronidase-3 Human genes 0.000 claims description 8
- 108050004076 Hyaluronidase-3 Proteins 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- 102100021081 Hyaluronidase-4 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710199677 Hyaluronidase-4 Proteins 0.000 claims description 6
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 102100029831 Reticulon-4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000819 Chondroitin-sulfate-ABC endolyases Proteins 0.000 claims 24
- 102000037716 Chondroitin-sulfate-ABC endolyases Human genes 0.000 claims 24
- 108010048429 chondroitinase B Proteins 0.000 claims 8
- 101710122685 Reticulon-4 Proteins 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 abstract description 5
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 abstract description 5
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 abstract description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 4
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 abstract description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 abstract description 2
- 229940082638 cardiac stimulant phosphodiesterase inhibitors Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 208000001738 Nervous System Trauma Diseases 0.000 abstract 1
- 102000001068 Neural Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 abstract 1
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 abstract 1
- 208000028412 nervous system injury Diseases 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 204
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 201
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 201
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 77
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 description 74
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 59
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 54
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 20
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 19
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 17
- 102000016284 Aggrecans Human genes 0.000 description 16
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 description 16
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 16
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 13
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 12
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 12
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 12
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 12
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 11
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 11
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- -1 fatty acid ester Chemical class 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028600 axonogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 201000009487 Amblyopia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010006074 Brachial plexus injury Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077641 Nogo Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000605114 Pedobacter heparinus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003011 anion exchange membrane Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013096 assay test Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M carbocyanin DBTC Chemical compound [Br-].C1=CC=CC2=C([N+](=C(C=C(C)C=C3N(C4=C5C=CC=CC5=CC=C4S3)CC)S3)CC)C3=CC=C21 MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N cetylpyridinium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004830 cetylpyridinium Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940094517 chondroitin 4-sulfate Drugs 0.000 description 1
- KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N chondroitin sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)O1 KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N 0.000 description 1
- 229940107200 chondroitin sulfates Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 230000009519 contusion Effects 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 1
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000012938 design process Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002367 endolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000007247 enzymatic mechanism Effects 0.000 description 1
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002093 isoelectric focusing polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 230000030363 nerve development Effects 0.000 description 1
- 210000005157 neural retina Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000002804 pyramidal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000036299 sexual function Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/51—Lyases (4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01036—Hyaluronoglucuronidase (3.2.1.36)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/02001—Hyaluronate lyase (4.2.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/02004—Chondroitin ABC lyase (4.2.2.4), i.e. chondroitinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/02005—Chondroitin AC lyase (4.2.2.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】コンドロイチン分解酵素蛋白変異体の調整と欠損、治療成分の組織への拡散を促す方法におけるその使用、中枢神経系の障害または疾患後の神経機能回復に対するその使用を提供する。【解決手段】特定のアミノ酸配列の組換え変異型コンドロイチン分解酵素AC蛋白質と、及び安定剤と、を有する、徐放性組成物。前記徐放性組成物は、神経突起成長阻害剤の作用を遮断する分子、神経突起の伸長を促す分子、神経栄養因子、ニューレグリン、神経細胞接着分子L1、成長因子、ホスホジエステラーゼ阻害剤、診断用分子、治療用分子、またはこれらの組み合わせをさらに有する。【選択図】なし
Description
関連文献の相互参照
本明細書は、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,240号(代理人整理番号127304.01300)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,239号(代理人整理番号127304.01200)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,300号(代理人整理番号127304.01400)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/474,372号(代理人整理番号127304.01700)、及び2004年5月17日に本明細書と同時に提出された表題「CNS治療に対する融合蛋白質」の米国特許出願明細書(米国特許出願番号[未定]、代理人整理番号127304.01201)の利益と優先権を主張するものであり、これらの各引用文献の全体の内容は、この参考によって本明細書に組み込まれるものである。
本明細書は、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,240号(代理人整理番号127304.01300)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,239号(代理人整理番号127304.01200)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/471,300号(代理人整理番号127304.01400)、2003年5月16日に提出された米国仮出願番号第60/474,372号(代理人整理番号127304.01700)、及び2004年5月17日に本明細書と同時に提出された表題「CNS治療に対する融合蛋白質」の米国特許出願明細書(米国特許出願番号[未定]、代理人整理番号127304.01201)の利益と優先権を主張するものであり、これらの各引用文献の全体の内容は、この参考によって本明細書に組み込まれるものである。
コンドロイチン分解酵素は、中枢神経系などの広範な組織の細胞外基質成分であるプロテオグリカンの成分、つまりコンドロイチン硫酸に作用する細菌由来の酵素であり、例えば網膜とヒト眼の硝子体の間の接着を介在することができる。コンドロイチン分解酵素の例は、細菌プロテウス・ブルガリス(P.vulgaris)が産生するコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)、Flavobacterium heparinumが産生するコンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)である。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)とコンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)は、蛋白質−多糖類複合体の多糖類側鎖を分解することで機能し、蛋白質のコア部分は分解しない。
Yarnagataら(J.Biol.Chem.243:1523〜1535,1968)は、P.vulgaris抽出物からABCI(配列ID番号:37)などのコンドロイチン分解酵素を精製する方法について報告している。この酵素は、pH8においてコンドロイチンまたはヒアルロン酸を分解するよりも速い速度で、グルコサミノグリカンコンドロイチン−4−硫酸、デルタマン硫酸、コンドロイチン−6−硫酸(それぞれコンドロイチン硫酸A、B、Cとも呼ばれ、プロテオグリカンの側鎖である)を選択的に分解する。前記分解生成物は、高分子量の不飽和オリゴ糖と不飽和二糖類である。しかし、コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)は、ケラトサルフェート(keratosulfate)、ヘパリン、または硫酸ヘパリチンには作用しない。
コンドロイチン分解酵素の利用では、眼の神経網膜に接着している硝子体を急速に、特異的に非外科的に破壊することで、硝子体の除去を促すことが含まれる。
例えばABCI(配列ID番号:37)などのP.vulgarisコンドロイチン分解酵素は、SDS−PAGEで分離すると、見かけの分子量が約110kDaで移動する。SDS−PAGEの解像度でコンドロイチン分解酵素ABCが二重線に見えることが報告された(Sato et al.,Agric.Biol.Chem.50:4,1057〜1059,1986)。しかし、この二重線は無傷のコンドロイチン分解酵素ABCと90kDaの分解生成物である。市販のコンドロイチン分解酵素ABC蛋白質製剤は、この90kDaの分解生成物を様々な量で含み、さらに18kDaの分解生成物もコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)に由来する。
コンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)もP.vulgarisから単離、精製され、コンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)は990アミノ酸のポリペプチドで、SDS−PAGEによる見かけの分子量が約112kDaである。エレクトロスプレーとレーザー脱離質量分析で決定したその分子量は、約111,772ダルトンである。コンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)の等電点は8.4〜8.45である。その酵素活性は、コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)と異なるが、相補的である。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)は、プロテオグリカンを内側から溶解して(endolytically)開裂し、最終産物の二糖類と、少なくとも他に2つの生成物を産生し、これらの生成物は四糖類のコンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)と考えられ、プロテオグリカンのコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)の消化でこれらの四糖類生成物を少なくとも1つ消化する。
成体哺乳類の中枢神経系(CNS)に障害があると、軸索が再生することができず、永久に麻痺する可能性がある。障害による病変はグリア性瘢痕を生じ、これはコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPGs)などの細胞外基質分子を含む。CSPGはin vitroで神経組織の成長を阻害し、in vivoではCSPGが豊富な領域で神経組織の再生ができない。
多数の分子とその特異的領域は、神経突起伸長とも呼ばれる、神経細胞からの神経突起の発芽を支持できると考えられた。前記神経突起という用語は、軸索と樹状突起構造の両方を指す。この神経突起の発芽プロセスは、特に身体的な障害または疾患が神経細胞を障害した後での、神経の発達と再生に重要である。神経突起は、すべての動物種の中枢および末梢神経系いずれにおいても、発達中は盛んに伸長する。この現象は軸索と樹状突起の両方に関係する。しかし、CNSにおける神経突起伸長は、動物の加齢と共に減弱する。
コンドロイチン分解酵素は、いくつかの脊髄損傷のin vivoモデルで機能的結果を改善する効果が示された。組み換え技術によって作られたコンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)とコンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)のポリペプチドは、アグリカンなど抑制基質関門のバリアを克服し、ラット皮質ニューロンの神経突起を伸長することで、in vitroで効果を示した。
本発明者は、利用できる結晶構造に基づいた欠損解析から、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)を分解することができる変異型ポリペプチドを発見した。これらの変異体すべての開裂活性は、基質としてアグリカンを用いた酵素電気泳動法によりin vitroでスクリーニングされた。アミノ末端とカルボキシ末端それぞれから50アミノ酸、275アミノ酸が欠落し、蛋白質の全長75kDaに対し、分子量38kDaを有する、コンドロイチン分解酵素ACの切断されたポリペプチド(nΔ50−cΔ275)(配列ID番号:11)は、酵素電気泳動法で検査した活性を保持する最小限のサイズであることが分かった。アミノ末端とカルボキシ末端それぞれから120アミノ酸が欠落し、蛋白質の全長52kDに対し、分子量26kDを有する、コンドロイチン分解酵素Bの欠損変異体(nΔ120−cΔ120)(配列ID番号:17)は、酵素電気泳動法で活性を保持することが示された。分子のサイズと複雑性が減少することで、作用部位への拡散を促す可能性があり、長期的に治療に使用すると、免疫原性を低下させる可能性がある。これらのより小さなコンドロイチン分解酵素は、脊髄損傷の潜在的な治療法となる可能性がある。
本開示は、コンドロイチン分解酵素遺伝子の変異体、それに由来するポリペプチドと蛋白質、及び中枢神経系(「CNS」)の障害または疾患後に神経性の機能的回復を促す方法におけるそれらの利用に関するものである。変異型遺伝子、ポリペプチド、及びそれに由来する蛋白質は、好ましくは成熟遺伝子またはポリペプチドの構造単位に欠損、置換、またはその組み合わせを含み、より好ましくは、前記変異型遺伝子またはポリペプチドは、成熟遺伝子またはポリペプチドの欠損変異体である。これらの変異型遺伝子またはポリペプチド、好ましくは生物学的活性は、様々な医薬組成物に利用される可能性がある。
コンドロイチン分解酵素ポリペプチドの変異体、例えばコンドロイチン分解酵素ABCタイプI(配列ID番号:1または37)、コンドロイチン分解酵素ABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)、コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)が、提供される。コンドロイチン分解酵素様の活性を持つ他の哺乳類酵素変異体は、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、ヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)、及び任意にPH−20(配列ID番号:34)などの酵素をそれぞれ独立して含んでもよい。これらの欠損または置換変異体は、治療組成物および混合物として、単独で、またはコンドロイチン分解酵素または欠損または置換変異体と併用して使用されてもよい。さらに、これらの変異体、好ましくは、これだけに限らないが外傷性障害などのCNSの損傷後に哺乳類で神経性の機能的回復を促すコンドロイチン分解酵素の欠損または置換変異体の使用法を提供する。
本発明の1つの実施形態は、プロテオグリカン分解分子の欠損および/または置換変異体であるポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列から成る、及び好ましくはこれを有する単離核酸分子である。独立して、本発明の核酸分子は、コンドロイチン分解酵素の変異型プロテオグリカン分解ポリペプチド、例えばコンドロイチン分解酵素ABCタイプI(配列ID番号:1または37)、コンドロイチン分解酵素ABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)、コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、ヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)、または任意にPH−20(配列ID番号:34)と、その組み合わせをコードするものである。好ましくは、前記核酸は、コンドロイチン分解酵素の欠損および/または置換変異体をコードし、最も好ましくは、前記核酸は、コンドロイチン分解酵素ABCタイプIまたはIIポリペプチドをコードするものである。本発明は、上述した核酸配列に相補的なヌクレオチド配列から成る、及び好ましくはこれを有する核酸分子に関するものでもある。また、上述した核酸分子のいずれかと、少なくとも80%、好ましくは85%または90%、より好ましくは95%、96%、97%、98%、または99%同一である拡散分子も提供される。さらに、厳密な条件下において上述した核酸分子のいずれかにハイブリダイズした核酸分子も提供されるものである。本発明は、これらの核酸分子を有する組換えベクター、及びそのようなベクターで形質転換した宿主細胞も提供するものである。
さらに、プロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損および/または置換変異体のアミノ酸配列から成る、及び好ましくはこれを有する単離ポリペプチドも提供される。独立して、プロテオグリカン分解酵素は、例えばABCタイプI(配列ID番号:1または37)、プロテオグリカン分解酵素ABCタイプII(配列ID番号:27)、プロテオグリカン分解酵素AC(配列ID番号:5)、プロテオグリカン分解酵素B(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、ヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)、また任意にPH−20(配列ID番号:34)などのコンドロイチン分解酵素を含むことができる。好ましくは、前記ポリペプチドは、コンドロイチン分解酵素の欠損変異体である。医薬組成物は、これらのコンドロイチン分解酵素および/またはヒアルロニダーゼなどの変異型プロテオグリカン分解分子から調整することができ、前記組成物は、異なるプロテオグリカン分解ポリペプチドからの欠損および置換変異体を1若しくはそれ以上含むことができる。
本発明の1つの観点において、生物学的に活性なプロテオグリカン分解ポリペプチドが提供され、これは少なくとも1つのアミノ酸の欠損または置換を有するものである。前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドは、本明細書で示された酵素アッセイにより決定されたように、最小のサイズであるが、ある程度の活性を保持するものを含む。好ましいプロテオグリカン分解分子の欠損または置換変異体は、コンドロイチンを分解し、N末端から約1〜約120以上のアミノ酸、および/またはC末端から約1〜約275以上のアミノ酸で、1つ若しくはそれ以上のアミノ酸の欠損を有するものであり、より好ましくは前記欠損は、コンドロイチン分解酵素または置換コンドロイチン分解酵素に存在するものであり、さらに好ましくはコンドロイチン分解酵素ABCI或いはIIまたは置換コンドロイチン分解酵素ABCI或いはIIに存在するものである。
本発明の1つの観点は、神経突起の再生および/またはCNSの可塑性を促す、および/またはプロテオグリカンの分解により組織への治療分子の拡散を促進または阻害する、プロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損および/または置換変異体、好ましくはコンドロイチン分解酵素ポリペプチドの欠損変異体である。
前記変異型分解ポリペプチド、好ましくはコンドロイチン分解酵素の欠損および/または置換変異体は、CNSの神経突起の再生を促し、および/またはプロテオグリカンの分解により組織への治療分子の拡散を促進または阻害してもよく、適切に修飾されたDNA配列の発現を介して得られる可能性がある。従って、本発明は適切な発現ベクターとそれに適合性を有する宿主細胞も提供している。
さらなる別の観点において、本発明は、薬学的に許容可能な担体との組み合わせで、プロテオグリカン分解分子の欠損および/または置換変異体の、および好ましくは前記コンドロイチン分解ポリペプチドの欠損または置換変異体の生物学的に活性なポリペプチドを含む医薬組成物を有する。
本発明のプロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損変異体および/または置換変異体を利用し、神経組織の神経突起の再生を促してもよい。これらの変異体は、他のCNS疾患の治療に有用であると考えられ、可塑性、再生、またはその両方に対して有益である可能性がある。例えば、CNSの障害と疾患には、挫傷、外傷性脳損傷、脳卒中、多発性硬化症、上腕神経叢損傷、弱視(amblioplia)を含むと考えられるが、これだけに限らない。プロテオグリカンを分解する性質のために、通常はこれらを透過しない組織および細胞への治療組成物や診断薬の送達を促すために用いてもよい。或いは、組織に入れるために細胞外基質の一部を利用した、組織への治療組成物、診断薬、または細胞の浸透を抑制するために使用することもできる。完全長の酵素と比べサイズが小さいため、前記欠損および/または置換変異体は作成が容易で、標的細胞と組織への送達が容易である。このようなさらに小さなプロテオグリカン分解酵素の欠損または置換変異体を潜在的な治療薬として用いることができ、CNS損傷の治療では免疫原性が低く、組織浸透能は同等若しくはより高い。
前記欠損変異体は、前記治療開発プロセスにおいて完全長の蛋白質以上に重要な利益をもたらす可能性がある。前記酵素の組織浸透は、著しく前記蛋白質の大きさの影響を受ける。組織浸透における蛋白質サイズの作用は予測が難しいが、サイズと荷電に依存する。浸透率は、組織の組成物、荷電の相互作用、水和効果に依存する。幅広いサイズの活性酵素があることで、最適な組織浸透作用に基づき、酵素の選択が可能と考えられ、おそらく効果的な濃度を最大限とするか、前記酵素への末梢曝露を限定するものである。
細菌蛋白質に対する哺乳類の免疫反応は、治療薬としての蛋白質またはポリペプチドを利用する能力を制限する可能性もあれば、制限しない可能性もある。前記蛋白質に対する抗体の生成は、反復曝露を制限し、蛋白質を治療薬として不活化しその効果がなくなる可能性がある。より小さな変異型プロテオグリカン分解酵素、好ましくは、変異型コンドロイチン分解酵素は、抗原部位を制限し、免疫反応を制限し、または少なくとも免疫原性を低下させる酵素の設計プロセスを簡素化する可能性がある。
しばしば徐放性製剤で使用される基質からの蛋白質放出速度は、サイズと架橋結合に依存する可能性がある。前記基質からプロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損変異体が効果的に放出される速度は、酵素のサイズを操作することを通じて設計される可能性がある。様々なサイズと荷電のコンドロイチン分解酵素のレパートリーを有することは、徐放性製剤の開発に重要な利益を与えるだろう。
本発明の組成物と方法を説明する前に、説明される特定の分子、組成物、方法論、またはプロトコールは様々である可能性があるため、本発明はこれらに限定されないことは理解されるものとする。前記説明に使用される用語は、特定の説明または実施例のみを説明することを目的としたもので、前記添付の請求項のみで限定される、本発明の範囲を限定する意図はないことも理解されることとする。
本文および添付の請求項に用いられるとおり、文脈が明確にそうでないことを示していない限り、単数形の「a」、「an」、「the」は複数の言及も含めることにも注意して頂きたい。従って、例えば、「セル」という言及は1若しくはそれ以上のセルおよび当業者に周知の同等物などを言及している。それ以外に定義されているのではない限り、本文に用いられるすべての技術的、科学的用語は、通常の当業者の1人によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本文に説明したものと同様またはそれに相当するすべての方法および材料は、本発明の実施例を実行または検討するために用いることができるが、前記好適な方法、装置、材料が今回報告される。本文に述べたすべての文献は、参考文献に含められている。本明細書は、本発明が先願発明の長所によってそのような公開を予期する権利がないことを承認するものとして解釈されるものではない。
「任意」または「任意に」は、その後に記載された事象或いは状況が生じる若しくは生じないこと、及びその記載がその事象が起こる或いは物質が存在する場合及びそれが起こらない或いは物質が存在しない場合を含むことを意味している。
本開示の1つの観点は、かなり分子量が少ないが修飾されている、好ましくは野生型酵素と比べ、同等であるか優れたプロテオグリカン分解酵素の活性を有する欠損変異型酵素の作成に用いることができる、コンドロイチン変換酵素遺伝子の一連の欠損および/または置換変異体に関連するものである。前記欠損および/または置換変異体は、ポリメラーゼ連鎖反応により作成することができる。結果生じた変異体は発現され、次に前記変異型ポリペプチドの酵素活性は酵素電気泳動法で確認されうる。
前記プロテオグリカン分解分子の変異型を利用し、哺乳類のCNS損傷、特に外傷または疾患により生じた損傷を治療できる。特に、例えばABCタイプI(配列ID番号:1または37)、ABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)、コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)などのコンドロイチン分解酵素のようなプロテオグリカン分解ポリペプチド分子の欠損変異体、またはヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、ヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)、また任意にPH−20(配列ID番号:34)などのコンドロイチン分解酵素様活性を有する哺乳類酵素、またはこれらのいずれかの混合物を利用し、CNS障害および疾患の治療に提供することができ、これには、これだけに限らないが、外傷性障害、外傷性脳損傷、脳卒中、多発性硬化症、上腕神経叢損傷、amblioplia、脊髄損傷を含むものである。脊髄損傷には、自動車事故、転倒、打撲傷、射創、またその他の損傷によって引き起こされるニューロンの粉砕などの疾患および外傷を含む。本発明の方法の実行により、治療された哺乳類に臨床的利益を与えることができ、被験動物の運動協調性機能及び知覚の少なくとも1つにおいて臨床的に関連性のある改善を提供する。臨床的に関連性のある改善は、検出可能な改善から前記CNSの機能損傷または機能喪失の完全な回復まで幅がある可能性がある。
プロテオグリカン分解酵素変異体、例えばコンドロイチン分解酵素ACの欠損変異体(配列ID番号:5)は、賦形剤を追加するか、凍結乾燥により安定化された酵素活性を有する可能性がある。安定剤には、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸、界面活性剤が含まれると考えられ、当業者に周知である。例としては、スクロース、ラクトース、マンニトール、デキストランなどの炭水化物、アルブミン、プロタミンなどの蛋白質、アルギニン、グリシン、トレオニンなどのアミノ酸、TWEEN(登録商標)、PLURONIC(登録商標)などの界面活性剤、塩化カルシウム、リン酸ナトリウムなどの塩、脂肪酸、リン脂質、胆汁塩などの脂質を含む。1:10〜4:1の比で前記安定剤は前記プロテオグリカン分解ポリペプチド欠損変異体に、1:1000〜1:20の比で炭水化物はポリペプチド、アミノ酸ポリペプチドに、蛋白質安定剤はポリペプチドに、塩はポリペプチドに、また界面活性剤はポリペプチドに、1:20〜4:1で脂質はポリペプチドに追加することができる。ヘパリナーゼ活性を用いた比較研究に基づいて、他の安定剤としては高濃度の硫酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、または硫酸ナトリウムを含む。前記安定剤、好ましくは前記硫酸アンモニウムまたは他の同様の塩が0.1〜4.0mg硫酸アンモニウム/IU酵素の比で前記酵素に追加される。
前記プロテオグリカン分解変異型ポリペプチドは、組成物として製剤化され、被験動物または患者に局所性、局在性、または全身性に投与されてもよい。好ましくは、前記被験動物は、前記コンドロイチン分解酵素の1つなどのプロテオグリカン分解組成物を必要とする哺乳類、またさらに好ましくはヒトである。局所性または局在性投与は、適用をさらにコントロールするために利用される。1若しくはそれ以上のプロテオグリカン分解変異型ポリペプチドは、単独または併用で、投与前に適切な薬学的に許容可能な担体と混合される可能性がある。一般的に利用される薬学的担体および添加物の例は、従来の希釈液、結合剤、潤滑剤、着色料、崩壊剤、緩衝剤、等脹化剤、保存料、麻酔薬などである。利用できる具体的な薬学的担体は、デキストラン、血清アルブミン、ゼラチン、クレアチニン、ポリエチレングリコール、非イオン界面活性剤(ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬質ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシエチレングリコートなど)、およびそれらと同等の化合物である。
プロテオグリカン分解ポリペプチドまたはそれを発現する核酸を有する本発明の組成物には、治療分子、診断薬、及び神経突起の伸長と再生を促す薬物を含んでもよい。診断分子の例には、蛍光プローブ、放射性同位体、色素、磁気造影剤を含んでもよいが、これだけに限らない。可塑性、神経突起伸長、及び再生を促す化合物には、NgR27−311などの可溶性NOGOアンタゴニスト、L1などの神経細胞接着因子、神経栄養因子、成長因子、ホスホジエステラーゼ阻害剤、及びMAGまたはMOGの阻害剤など神経突起の増殖抑制を克服するか、神経成長を促す分子を含んでもよいが、これだけに限らない。さらに、欠損変異体は、ニューレグリン(GGF2)などの再ミエリン化を促す他の化合物および再ミエリン化を促す抗体と組み合わされてもよい。
神経系の可塑性は、すべてのタイプの機能的再構築を指す。この再構築は、発達、学習と記憶、及び脳の修復と共に生じる。可塑性と共に生じる構造変化には、シナプスの形成、シナプスの除去、及び神経突起の発芽を含んでもよく、既存のシナプスの強化または弱化を含むことさえある。再生に特徴的な断裂した路において軸索が広範にわたり成長することにより、再生は一般に可塑性と区別される。
本発明の前記プロテオグリカン分解分子の生物学的活性を利用し、組織におけるプロテオグリカンの分解率を制御することができ、例えば、過敏性組織の分解活性を遅くし、より厚い組織の蛋白質分解率を高くするように選択することができる。前記活性は、前記ポリペプチドまたはそれらを発現するために用いたベクターにおいて、1つ以上のアミノ酸の置換または欠損により制御されてもよく、前記活性は、成分中のプロテオグリカン分解ポリペプチドの濃度または組み合わせにより制御されてもよい。前記プロテオグリカン分解活性は、完全長のポリペプチドよりも高いか低くなるように作られてもよい。例えば、完全長のコンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)よりも低く作ることができ、図2に示す通り、完全長のポリペプチドの活性の半分よりも低く作ることができる。また、さらに図2に示されるとおり、前記プロテオグリカン分解活性は、完全長のコンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)よりも高く作ることができ、1.5以上の因数で完全長のポリペプチドよりも高い活性とすることができ、2.5以上の因数で完全長のポリペプチドよりも高い活性とすることができる。
典型的には、天然または野生型P.vulgaris菌株を利用し、通常の伸長条件でコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1または37)、およびコンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)、及びこれら完全長のポリペプチドの変異体を作ることができる。P.vulgarisの野生型株を導入し、唯一の炭素源としてコンドロイチン硫酸などの導入基質を提供することで、検出可能レベルのコンドロイチン分解酵素ABCIとその変異体を作成することができる。
変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドを発現させるため、変異型核酸を用いることができる。前記発現されたポリペプチドまたは前記変異型核酸を利用し、哺乳類のCNS損傷、特に外傷または疾患により生じた損傷を治療することができる。特に、コンドロイチン分解酵素ABCタイプIなどのプロテオグリカン分解ポリペプチド分子を発現した欠損変異型核酸は、これだけに限らないが、クローン化コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:22または28)、コンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:26)、欠損変異型TATコンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ60(配列ID番号:43)の融合蛋白質を発現した核酸などを含んでもよく、E.coili中のこれらの遺伝子の変異型は、人工誘導因子を用いた不均一発現系を用いて発現させることができる。コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:22または28)、コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:26)、その変異型はF.heparinumからクローニングされ、E.coliに発現される。
コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)などの完全長のプロテオグリカン分解酵素、またプロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損および/または置換は、多数の細菌および哺乳類発現ベクターでクローニングされうる。これらのベクターは制限なく、pET15b、pET14b、pGEX 6P1、pDNA4HisMax、またはpSECTag2bを含む。本発明の前記欠損変異体と置換ポリペプチドは、コンドロイチンCS、DSなどのプロテオグリカンを分解する能力を示し、細胞や組織へ、また膜を貫通して拡散を促すことが予想される成熟酵素ポリペプチドよりもサイズと分子量が小さい。発現ベクターには、発現制御配列と操作可能に連結された変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドを発現した、拡散配列を含むことができる。操作可能に連結されたとは、発現制御配列とコード配列間の結合を指し、前記連結は前記コード配列の発現を発現調節配列によって調節できるようにするものである。
前記プロテオグリカン分解分子の天然型、置換および/または欠損変異型の性質は、前記蛋白質に様々な突然変異を導入することで変化させることができる。そのような変化は変異誘発技術を用いて適切に導入され、例えば、これだけに限らないがPRC変異誘発などがあり、前記変異型ポリペプチド分子は前記発現ベクターを用いて適切に合成される。
本発明の変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドは、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドのアミノ酸の欠損および/または置換を含む。好ましくは、前記欠損または置換は、2つの連続または離れたアミノ酸、NまたはC末端アミノ酸の欠損または置換、ポリペプチド内部のアミノ酸の欠損または置換を含む。前記欠損および/または置換は前記分子のアミノ酸で開始することができ、前記分子に2つの離れた欠損がある可能性がある。前記欠損または置換では変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドが生じ、これは前記変異型酵素よりも小さく、プロテオグリカン分解能力を保持しているものである。変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドは、別のポリペプチドと融合するか連結させることができる。ポリペプチドは、プロテオグリカン分解活性を有するすべての長さの変異型に対するアミノ酸配列を明白に含むように用いられ、翻訳時には最初ポリペプチドの一部であり、宿主の翻訳修飾により開裂されるシグナル配列の不足を含む可塑性を改善する。
本発明の変異型核酸は、成熟プロテオグリカン分解ポリペプチドを発現している遺伝子からのヌクレオチドの欠損および/または置換体を含む。DNAレベルでの欠損と置換の突然変異を利用し、前記コードされた蛋白質にアミノ酸置換および/または欠損を導入する。これらのヌクレオチドの欠損と置換を利用し、前記ポリペプチドの重要な配座または活性領域に欠損および/または置換を導入することができる。核酸断片は成熟プロテオグリカン分解ポリペプチドの全アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列よりも少ないヌクレオチドを有する核酸であるが、好ましくは成熟ポリペプチドをコードし、これは完全な長さの蛋白質の生物活性を一部保持し、例えば前記発現されたポリペプチド断片がプロテオグリカンの分解を誘導し、細胞および組織への治療薬の拡散を促し、または神経突起の再生を促す。他のポリペプチドと連鎖したプロテオグリカン分解ポリペプチドドメインのNまたはC末端変異体をコードする遺伝子は、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドと結合した融合蛋白質を発現させるコンストラクトにも利用されうる。
本発明の欠損および/または置換変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドは、これらのポリペプチドの誘導体を含んでもよく、これは化学的または酵素的に修飾されているが、プロテオグリカンを分解する生物学的活性を保持する。これらの変異型のプロテオグリカン分解活性は、前記ポリペプチドを発現させるために用いたポリペプチドまたは核酸に対する欠損および/または置換によって制御されてもよい。前記成熟プロテオグリカン分解ポリペプチドまたは核酸の変異体、断片、または類似体およびこれらを発現させるために用いたベクターは、欠損、置換、またはその両方の組み合わせの1つ以上だけ、成熟ポリペプチドまたは核酸配列と異なる配列を有する変異型ポリペプチドおよび核酸を含み、前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドが生物学的活性を保持し、プロテオグリカンを分解することができ、好ましくはコンドロイチン硫酸プロテオグリカンを分解する。
遺伝子コードの縮重のため、変異型プロテオグリカン分解分子をコードする核酸配列と少なくとも80%、好ましくは85%または90%、さらに好ましくは95%、96%、97%、98%、或いは99%同一な配列を有する多数の核酸分子は、プロテオグリカン分解活性、および好ましくはコンドロイチン分解活性を有する変異型ポリペプチドをコードすることを、当業者は認識するだろう。さらに、変異体を変性させないそのような核酸分子では、妥当な数がプロテオグリカン分解活性を有する変異型ポリペプチドをコードすることがさらに認識される。これは(例えば、第1の脂肪族アミノ酸と第2の脂肪族アミノ酸を置換するなどの)ポリペプチド活性に有意に影響をもたらす可能性が低いか、その可能性がないアミノ酸置換は、プロテオグリカンを分解し、好ましくはコンドロイチンを分解するためである。
本発明に含まれる変異型には、前記核酸および/またはポリペプチド配列に対する個々の置換、欠損または付加を含む可能性がある。そのような変化により、コードされた配列に1つのアミノ酸または少ない割合のアミノ酸が変化、付加、または欠損する。変異型は「保存的に修飾された変異型」と呼ばれ、前記変化により化学的に類似なアミノ酸を有するアミノ酸置換が生じる。
本発明の欠損および置換変異型ポリペプチドの前記プロテオグリカン分解活性は、完全長のプロテオグリカン分解分子よりも低いか、ほぼ同様か、高いという発見は、別の考えられる利益をもたらすものである。前記プロテオグリカン分解分子を含む医薬組成物は、非経口、静脈内、皮下に投与されうる。前記ポリペプチドを封入し連続的に放出する生物分解性ポリマーから成るハイドロゲルの使用は、ハイドロゲルに封入された前記ポリペプチドの量によって制限される。特異的活性がより高いポリペプチドの欠損変異体を使用することは、モルを基本とし、活性基質の多くが同量で封入され、それによって連続投与の間の時間を長くする、または場合によっては反復投与を回避することを意味する。
発現後に得られたポリペプチドの精製は、使用される宿主細胞と発現コンストラクトに依存する。一般に、プロテオグリカンの欠損または置換変異体の精製は、ヒスタミン標識の利用など、完全長の天然ポリペプチドの精製と同様の方法で行われる可能性がある。
前記欠損または置換変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドと蛋白質は、CSPGsの分解に有効な量で投与される。前記ポリペプチドは、治療および診断組成物の拡散を補助するために利用され、さらに神経機能と神経突起伸長の回復を促すために利用され得る。前記組成物における変異型プロテオグリカン分解蛋白質またはポリペプチドが望みの程度まで精製されると、それらは、SCI投与に対して、或いはアグリカンのような適切な基質におけるin vitroの神経突起伸長を促す組成物のスクリーニングアッセイに対して適切な生理学的担体または賦形剤に懸濁または希釈されてもよい。SCIモデルでは、ラットにおけるコンドロイチン分解酵素の有効なくも膜下腔投与が14日間、隔日で約0.06単位であった。70キログラムのヒトに対する用量は、約17単位と考えられる。約100単位/ミリグラムでは、これが約170マイクログラムに相当する。20単位までの用量はラットなどの哺乳類被験動物で安全であるように見える。組成物にはプロテオグリカン分解変異型ポリペプチド、好ましくは変異型コンドロイチン分解酵素ポリペプチド、さらにより好ましくは欠損変異型コンドロイチンポリペプチドを含んでもよい。これらの組成物には、他のプロテオグリカン分解分子とそれらの欠損および/または置換変異体、神経突起成長阻害剤の作用を遮断する分子、神経突起または軸索の接着、診断、治療、または融合タンパク質の一部として前記プロテオグリカン分解分子変異体を促進する分子を含んでもよい。前記混合物または融合蛋白質は担体または医薬品として認められる賦形剤に追加され、通常は被験動物1μg〜500mg/kgの範囲の濃度で注入されうる。前記薬物の投与はボーラス投与、静脈内投与、連続注入、インプラントからの持続的放出、または徐放性製剤により行うことができる。注入による投与は、筋肉内、腹膜、皮下、静脈内、くも膜下腔内に行うことができる。経口投与には錠剤またはカプセル剤を含んでもよく、好ましくは前記経口投与剤は1日1回または2回投与用の徐放性製剤である。経皮投与は、1日1回とすることができ、好ましくは1日1回未満の投与とする。前記ヒト患者または他の哺乳類被験動物に対する投与は、前記患者で自律神経系または運動神経系機能の測定可能な改善が達成されるまで継続してもよい。
これらを含む前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドまたは融合ポリペプチドは、遺伝的に修飾された細胞により、発現または分泌されてもよい。前記表現された欠損または置換プロテオグリカン分解ポリペプチドま或いは融合ポリペプチドは、治療組成物用に取り出し、精製してもよく、または前記遺伝的に修飾された細胞は、遊離状態またはカプセル剤として、CNS障害またはその付近に、または前記治療分子または診断分子の制御された拡散が望ましい組織で移植される可能性がある。変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドを発現した変異型核酸は、置換コンドロイチン分解酵素ABCIのポリペプチドであり、リーダーアミノ酸配列がないポリペプチドをコードしたコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:22および28)、コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:21)の変異型ポリペプチドNΔ120 CΔ120をコードしたコンドロイチン分解酵素B核酸変異体(配列ID番号:21)、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:11)の変異型ポリペプチドNΔ50 CΔ275をコードしたコンドロイチン分解酵素AC核酸変異型(配列ID番号:19)などの限定のない実例で説明されている。融合核酸の例には、制限なく、TAT欠損変異型コンドロイチン分解酵素ABCI融合DNAコンストラクト(配列ID番号:41)を含む。別の例は、発現されたポリペプチド(配列ID番号:44)のTAT−コンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ60(配列ID番号:43)の核酸であろう。
前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドが、CSPGsと共に細胞または組織に投与された場合、CSPGsの分解は、神経突起伸長を遮断する抑制分子を除去し、患部の神経突起の再生を可能にする。CSPGの除去もCNSの可塑性を促す。例えば、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)、およびコンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)の完全長のポリペプチドは、それぞれCSとDSを分解し、その結果、不飽和硫酸二糖類を生じる。コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)は、CSの多糖類の骨格において、N−アセチルガラクトサミンとグルクロン酸との間にある1,4グリコシド結合でCSを開裂する。開裂は、ランダムで内側から溶解する(endolytic)作用パターンでβ−除去を介して起こる。コンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)は、DSの多糖類の骨格にある1,4ガラクトサミンイズロン酸結合を開裂する。CSおよびDSの開裂は、これらの酵素メカニズムと哺乳類GAG分解酵素を区別するβ−除去プロセスを介して起こる。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)、コンドロイチン分解酵素ABCII(配列ID番号:27)は、CSおよびDSの両方を開裂するエキソ−およびエンド−リアーゼである。グリア性瘢痕からCSとDSを除去すると、損傷部位への神経突起伸長再生が可能となり、可塑性を促す。例えば、図2に示されている前記プロテオグリカン分解分子、コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:5)、様々な変異型コンドロイチン分解酵素AC(配列ID番号:6〜11)は、様々な量でモデルプロテオグリカン基質を分解する。同様の結果が、図6におけるコンドロイチン分解酵素B(配列ID番号:12)と実例となる変異体(配列ID番号:13〜17)でin vitro酵素電気泳動により示されている。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)などのプロテオグリカン分解分子が外傷性脊髄損傷があるラットにおいて機能回復を改善し、脳組織へのモデル化合物の拡散を促すため、前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドおよびそれを含む組成物は、外傷性脊髄損傷があるラットなどの哺乳類被験動物で機能回復を改善させることもでき、脳組織へのモデル化合物の拡散を促すこともできると予想することが妥当である。
神経細胞の再生と患部CNSの可塑性回復により、運動神経系機能と感覚神経系機能を回復させることができる。臨床的に関連性のある改善は、検出可能な改善から神経機能の障害または損失の完全回復まで幅があり、個々の患者と損傷によって異なる。機能的な回復の度合いは、脊柱病変にコンドロイチン分解酵素を投与後、皮質脊髄路伝導の改善、テープ除去の改善、梁の歩行、格子の歩行、脚の置き方が改善することで証明されうる。機能改善の指標として、運動技術の改善、及び自律神経機能、すなわち、腸、膀胱、感覚、性機能も、機能的改善の指標として利用することができ、これは本発明の前記組成物における分子構造と構成成分に関連するものである。
プロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損または置換変異型のコードを含む一連のポリヌクレオチドは、鋳型としてプロテオグリカンの完全長のcDNAを利用して、PCRによって作成され、E.Coliの発現に利用されるNdeIおよびBamHI部位で、pET15bなどの発現ベクターへクローニングすることができる。イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)の遺伝子発現を誘導後、前記細菌は超音波処理により溶解させ、Triton X−114/PBSなどの界面活性剤を用いて変異型ポリペプチドを同時に抽出することができる。組み換え型プロテオグリカン分解ポリペプチドの大部分が細菌細胞溶解物の細胞質分画に認められ、コンドロイチン分解酵素精製プロトコールを利用し、高い収率で高い活性の前記変異型プロテオグリカン分解酵素を得ることができる。このプロトコールは、His−タグ化変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドに選択的に結合する抗His抗体を有するカラムによる精製を含み、捕捉段階として陽イオン交換クロマトグラフィー、及び研磨段階としてゲル濾過を含むことができる。これらの段階の後、例えばIntercept Q、ミリポア(Millipore)に陰イオン交換膜濾過を利用し、エンドトキシンと宿主DNAの除去を行うことができる。濾過後、前記プロテオグリカン分解変異型ポリペプチドをpH 8.0の揮発性緩衝液に透析し、凍結乾燥することができる。前記最終生成物は、長期間保存では−70で安定であると予想される。前記精製した塩基性プロテオグリカン分解変異型ポリペプチドのpIは、粗細胞溶解物からのサンプルIEF−PAGE分析により決定することができる。
様々な分析法は、プロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損または置換変異体の組み換え体の酵素活性を、コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)のような完全長のプロテオグリカン分解分子、または市販されている形の前記酵素などの酵素活性と比較するために利用され得る。さらに、前記方法は、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドの一部を含む、融合蛋白質の活性を評価するように適合され得る。プロテオグリカンの分解により反応生成物が生産されることによる吸光度の変化を測定する、認められた分光光度法を利用し、特異的な活性測定を行ってもよい。サイズ排除クロマトグラフィーを利用し、前記変異型酵素の流体特性を比較することができる。
一種の酵素電気泳動法を利用し、前記成熟プロテオグリカン分解酵素を特徴付けることができ、前記成熟プロテオグリカン分解特性の特徴に適応させてもよい。コンドロイチン分解酵素ABCIなどのプロテオグリカン分解分子の基質であるアグリカン存在下で、ポリアクリルアミドゲルを重合させることができる。前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドの酵素サンプルは、SDSの存在下、電気泳動によりアグリカンを充填したゲル上で分解させてもよい。次に前記ゲルは、前記SDSが抽出でき、前記酵素が再び折り畳むことができる再生段階に適用することができる。前記再び折り畳まれた酵素は、活性を回復し、次に前記ゲル内でアグリカンを消化し、前記ゲルの部分に生じた炭水化物の喪失は炭水化物特異的な染色で可視化することができる。同様の前記ゲル内の炭水化物の喪失は、前記変異型プロテオグリカン分解分子の同等の活性体と濃度で予想されるだろう。遺伝子組み換えコンドロイチン分解酵素ABCIの場合、その活性が酵素電気泳動像で明確なスポットとして可視化される可能性がある。前記酵素電気泳動法は前記分光光度的分析と一致している。
変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドによるCSPG消化の結果、遊離される四硫酸二糖および六硫酸二糖(それぞれΔ4DSおよびΔ6DS)を検出するため、HPLC法を利用してもよい。前記2種類の二糖類は、陰イオン交換クロマトグラフィーで効果的に分離することができる。クロマトグラムからΔ4DSおよびΔ6DSを定量化するHPLCアッセイでは、HPLCに注入される量に比例した直線関係が得られると予想される。CSPG消化によるΔ4DSおよびΔ6DSの産生は、分光光度法で決定されるとおり、コンドロイチン分解酵素特異的な活性の量と直接関連する。このアッセイは、様々な基質の変異型プロテオグリカン分解ポリペプチド消化により放出されたΔ4DSおよびΔ6DSを、独立して定量する高感度の正確な方法として利用することができ、それらを含む変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドと融合蛋白質の活性を定量するためにも利用することができる。
変異型プロテオグリカン分解ポリペプチド活性を特徴付けるために実施することができる別の機能的アッセイでは、後根神経節(DRG)のニューロンがアグリカン、または欠損または置換変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドで処理したアグリカンで培養される。アグリカンで培養されたニューロンは、培養皿および伸展した軸索に接着できなくなることが予想される。対照的に、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドで処理したアグリカンで培養されたニューロンは、組成物または融合ポリペプチドの一部として、前記表面または伸展したニューロンに接着することが予想される。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)で観察される広範な軸索の成長は、軸索の成長に対してより許容状態の基質を作るアグリカンの中心蛋白質で炭水化物が消化されるためと考えられる。
本発明の様々な観点が、以下の限定されない実施例を参照して理解されうる。
この机上の実施例は、組成物にプロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損または置換変異体を用い、細胞および組織への分子の拡散を示している。
成体Sprague Dawleyラットの脳は頭蓋から除去してもよく、半球を緩衝液のみまたは(配列ID番号:9)NΔ50 CΔ200 AC(T74−T500)蛋白質などの変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドを約33U/ml含む緩衝液に2時間37℃で浸してもよい。半球をすすぎ、直ちに70%エタノール中のエオシンY(Sigma)またはコンゴレッド(Sigma)の飽和溶液などの染料につけることができる。一片の組織を切断し、画像をスキャナに取り込んでもよい。変異型プロテオグリカン分解分子のプロテオグリカン分解活性、および同型の組織への治療および診断分子の期待される浸透または拡散の指標として、前記脳組織への染料の浸透を利用してもよい。
この机上の実施例は、例えばプロテオグリカン分解ポリペプチドの欠損および/または置換変異体を含む、コンドロイチン分解酵素ABCIの欠損変異体または融合蛋白質など、変異型プロテオグリカン分解分子の活性を測定するために修飾されうる、コンドロイチン分解酵素ABCIのアッセイプロトコールを示している。
プロテオグリカン分解分子または融合蛋白質の触媒活性による反応生成物の産生は、波長232nmでの前記プロテオグリカン分解生成物の吸光度測定により、決定することができる。典型的な反応混合物は、基質(5μlの50mMコンドロイチンC(MW 521)、コンドロイチン6 SO4、またはデルマタン硫酸)および1.5μlのコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)または(配列ID番号:2)などのコンドロイチン分解酵素の変異体と混合した、120μlの反応混合物(40mM Tris、pH 8.0、40mM酢酸ナトリウム、0.002%カゼイン)から成る。約120μlの反応混合物アリコートは、3分以上30〜37℃で調整することができる。前記生成物の形成は、分光計を用い、232nmの波長での時間の関数として、232nmで吸光度の上昇としてモニターする。前記反応は0.1% SDSを加えて停止させ、その後5分間沸騰させてもよい。前記観察された活性は、前記反応で形成されたC4−C5二重結合のモル吸光計数を利用し、単位(1分当たりに生成した生成物のμmoles)に変換してもよい(3800cm−1min−1)。
前記反応生成物のモル吸光計数を知ることによって、0.002%のカゼインおよび追加されたコンドロイチン基質と共に既知量のコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)または他の変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドを120μlの反応混合物に追加すると、経時的に232nmの読み値で反応生成物の吸光度の変化を測定し、前記変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドの特異的活性をumol/min/mgで決定することができる。これらの約450μmole/min/mgのアッセイ条件で、Seikagakuのコンドロイチン分解酵素ABCIには特異的活性がある。
コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:37)などのプロテオグリカン分解分子はCNS組織に存在する軸索成長抑制コンドロイチンを消化し、外傷性脊髄損傷を有するラットで機能的回復を改善する。プロテオグリカン分解活性を示した(配列ID番号:11)NΔ50 CΔ275 AC(T74−T426)ポリペプチドなどのプロテオグリカン分解分子変異体は、一部神経の再生を示し、可塑性を刺激し、組織への薬物の拡散に有用であると予想することは妥当である。前記投与方法、投与時期、用量を実行し、神経突起伸長と可塑性を促すことにより、前記CNSの障害の機能的回復を高める。(配列ID番号:11) NΔ50 CΔ275 AC(T74−T426)蛋白質などのプロテオグリカン分解分子の欠損または置換変異体を投与すると、CSPGsの分解により組織中の抑制分子を除去することができ、これが薬物の拡散を遮断し、神経突起伸長を遮断し、神経突起の再生または患部への他の治療薬を促すと予想することは妥当である。患部CNSへの前記神経細胞の再生と可塑性により、運動機能と感覚機能を回復させてもよい。臨床的に関連性のある改善は、検出可能な改善から神経機能の障害または損失の完全回復まで幅があり、個々の患者と損傷によって異なる。
この実施例では、コンドロイチン分解酵素の欠損変異体が生物学的に活性であることを示している。
組み換え技術によって作られたコンドロイチン分解酵素ACおよびBは、アグリカンなどの抑制基質の境界関門を克服することでin vitroで効果を示し、ラットの皮質ニューロンの神経突起を拡張する。前記損傷部位への前述の酵素の効果的輸送を促すため、これらのコンドロイチン分解酵素の欠損変異体を調整し、CSPGsを分解することができる最小限のサイズのポリペプチドを決定した。これらの変異体すべての開裂活性は、基質としてアグリカンを用い、酵素電気泳動アッセイによりin vitroでスクリーニングされた。コンドロイチン分解酵素ACの切断されたポリペプチド(nΔ50−cΔ275)(配列ID番号:11)は、アミノ末端およびカルボキシ末端からそれぞれ50および275アミノ酸が欠損しており、完全長の蛋白質75kDaと比べ、分子量38kDaを有し、図4(B)の酵素電気泳動法で検討したとおりの活性を保持する、ほぼ最小限のサイズの変異型コンドロイチン分解酵素ACであることが分かった。さらに、より小さい変異体でも、コンドロイチン分解酵素Bの欠損変異体(nΔ 120−cΔ 120)(配列ID番号:17)は、アミノ末端とカルボキシ末端それぞれから120アミノ酸が欠損しており、完全長の蛋白質52kDaと比べ、分子量26kDaを有し、図6(B)の酵素電気泳動法でも活性を保持していることも示された。これらのさらに小さな欠損変異体は、前記変異型酵素と比べ、免疫原性が低く、同様または高い組織浸透能を有する潜在的治療薬として利用することができ、脊髄損傷の治療に利用することができる。
一連のコンドロイチン分解酵素ACおよびBの欠損変異体は、鋳型としてコンドロイチン分解酵素ACおよびBの完全な長さのcDNAを利用してPCRで生成され、NdeIおよびBamHI部位で、前記pETl5b発現ベクターへクローニングされた。検出および精製を簡単にするヒスチジン−タグにより、完全長の欠損変異体が作成された。これらのcDNAのそれぞれは、イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)で誘導され、抗His抗体(Novagen)を用いたウエスタンブロット法により、前記発現が確認された。図3(A)は、様々な非制限欠損変異体を概略的に示し、図3(B)は、抗ヒスチジン−タグのウエスタンブロット法によりこれらのコンドロイチン分解酵素AC変異型ポリペプチドの発現の確認法を示している。図5および6は、コンドロイチン分解酵素Bの欠損で同じ所見を示している。ウエスタンブロットは、予想されるサイズの蛋白質を示している。欠損変異体の酵素電気泳動PAGEは、基質消化の強いバンド(左)を示し、炭水化物染色は陰性である。
酵素電気泳動法:SDS−ポリアクリルアミドゲルを注ぎ、アグリカン(85μg/ml)をその中に重合させた。コンドロイチン分解酵素ACおよびBの欠損変異体の粗抽出物を37℃で一晩反応、再生させた。分離後、前記ゲルを0.2%セチルピリジニウムで90分間、室温でインキュベートした。前記コンドロイチン分解酵素による前記プロテオグリカンの消化は、0.2%Toludene Blueのエタノール−H2O−酢酸(50:49:1 v/v/v)溶液を用いたゲルで30分染色することで可視化し、エタノール−H2O−酢酸(50:49:1 v/v/v)で脱染した。脱染後、前記ゲルを暗所で一晩50μg/ml Stains−allの50%エタノール溶液でインキュベートし、H2Oで脱染している。前記ゲルに明確なバンドがあることは、前記CSPGのコンドロイチン分解酵素による炭水化物が消化され、中心蛋白質が未染色のまま残っていることを示している(図4および図6)。
この実施例では、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドに対するHisタグの連結について説明する。
前記変異体でN末端から特定数のアミノ酸が欠損し、プロテオグリカン分解活性を維持した、コンドロイチン分解酵素ABCI酵素の欠損変異体が作成されうる(配列ID番号:2〜4)。これらのN末端の欠損は、N末端に接着したヒスチジンタグを保存しているが、同様にタグ化した完全長のコンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)は、発現後、前記ヒスチジンタグを保存していなかった。
例えば、コンドロイチン分解酵素ABCIの触媒的に活性な欠損変異体は、図7で示した成熟ABCI蛋白質のN末端から、それぞれ20および60アミノ酸を欠損するように調整されうるが、これだけに限らない。コンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ60−CΔ80(配列ID番号:4)などのN末端およびC末端の欠損両方を持つ変異型ポリペプチドも作ることができる。
N末端融合キメラ蛋白質の作成に、これらのコンドロイチン分解酵素の欠損変異体および他のプロテオグリカン分解分子の変異体を利用してもよい。アッセイではコンドロイチンを分解するこれらの融合ポリペプチドにより検査し、これを利用して、前記基質特異性、基質の結合、組織浸透について、組成物と融合蛋白質中の成熟ABCIと様々な欠損変異体の効果を決定することができる。変異型プロテオグリカンポリペプチドまたは融合ポリペプチドの活性を特徴付けるために実施することができる機能的アッセイには、これらを含む。この機能的アッセイでは、後根神経節(DRG)ニューロンが、アグリカンまたは変異型プロテオグリカンポリペプチドまたは前記変異体を含む融合ポリペプチドで培養されうる。アグリカンで培養されたニューロンは、培養皿および伸展した軸索に接着できなくなることが予想される。対照的に、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドまたは前記変異体を含む融合ポリペプチドで処理したアグリカンで培養されたニューロンは、組成物または融合ポリペプチドの一部として、前記表面または伸展したニューロンに接着することが予想される。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1または37)などのコンドロイチン分解酵素で観察される広範な軸索の伸長は、軸索の成長に対してより許容状態の基質を作るアグリカンの中心蛋白質で炭水化物が消化されるためと考えられる。
この机上の実施例では、未変性の蛋白質構造を有するが、プロテオグリカン分解触媒活性がないコンドロイチン分解酵素ABCIの変異型について示している。
この変異型は、バイオアッセイおよびSCI試験のヌル(空値)またはネガティブコントロールとして調整されてもよい。コンドロイチン分解酵素ABCIの結晶構造に基づき、推定上の活性部位で触媒活性をノックアウトする、H501aおよびY508a(配列ID番号:36)に指定される部位特異的変異体を調整することができる。そのような変異体は、触媒活性とSECの不活化を検討され、野生型酵素と比較することができる。ヌル活性変体型を利用し、バイオアッセイおよび最終的にはSCI動物研究で利用するための様々なプロテオグリカン分解融合蛋白質のネガティブコントロールを提供することもできる。
この実施例では、本発明のポリペプチドからの置換および欠損の両方を含む、変異型プロテオグリカン分解ポリペプチドの例を示している。
コンドロイチン分解酵素ABCI配列(配列ID番号:37)は、開示された成熟コンドロイチン分解酵素ABCIペプチドの配列であり、リーダー配列を含む。コンドロイチン分解酵素ABCI配列(配列ID番号:37)は(配列ID番号:1または29)と類似であるが、(配列ID番号:1)は(配列ID番号:37)の最初の25アミノ酸を有しておらず、(配列ID番号:37)の154および195位のアミノ酸は、(配列ID番号:1)および(配列ID番号:37)が一列になっている場合に同様の位置に見られるこれら(の置換)とは異なる。
(配列ID番号:38〜40)は、(配列ID番号:37)ポリペプチドのNまたはC末端と(配列ID番号:1)に対する置換による欠損体を示している。これらの変異型ポリペプチドは、NΔ20(配列ID番号:38)、NΔ60(配列ID番号:39)、およびNΔ60 CΔ80 (配列ID番号:40)である。
この実施例は、これだけに限らないが、HIV TAT蛋白質のポリペプチド部分などに対する膜の形質導入ポリペプチドと融合する本発明の変異型ポリペプチドの、限定されない実例を示している。前記融合ポリペプチドの完全な配列リストは、本明細書に含まれる配列リストで提供されている。
TAT−コンドロイチン分解酵素ABCI−nΔ20のヌクレオチド配列(配列ID番号:41)の一部が以下に示されており、コンドロイチン分解酵素ヌクレオチドと結合した部分に下線を引いてハイライトし、TAT配列ヌクレオチドを示している。
前記核酸配列のこの部分の下線を引いたヌクレオチドは、コンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ20核酸の5'に結合したTAT配列(配列ID番号:47)を示している。
TAT−コンドロイチン分解酵素ABCI−nΔ20(配列ID番号:42)のアミノ酸配列の一部が以下に示され、コンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ20(配列ID番号:2)のN末端に下線を引いてハイライトし、TAT配列のアミノ酸を示している。
TAT−ABCI−NΔ60(配列ID番号:43)のヌクレオチド配列の一部が以下に示され、下線を引いてハイライトしたN−末端TAT(配列ID番号:49)ヌクレオチドを示している。
TAT−ABCI−nΔ60(配列ID番号:44)のアミノ酸配列の一部を以下に示し、コンドロイチン分解酵素ABCI−NΔ60(配列ID番号:3)のN末端で下線を引いてハイライトしたTAT配列(配列ID番号:50)を示している。
ABCI−TAT−C (配列ID番号:45)のヌクレオチド配列の一部が以下に示され、下線を引いてハイライトしたC−末端TAT配列ヌクレオチドを示している。コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:28)のストップコドンをTAT配列と置き換え、TAT配列の3'末端で置き換えた。
ABCI−TAT−C (配列ID番号:46)のアミノ酸配列の一部を以下に示し、成熟コンドロイチン分解酵素ABCI(配列ID番号:1)のC末端でコンドロイチン分解酵素ポリペプチドと結合したTAT配列を下線を引き、ハイライトして示している。
この実施例は、コンドロイチン分解酵素の核酸とポリペプチドの配列を示しており、本発明の変異型で欠損または置換に用いてもよい。これらの配列では、ヌクレオチドレベルおよびアミノ酸レベルの両方で、発表された配列との不一致が太字でハイライトされている。これらは本発明の置換の実例である。
前記ヌクレオチドレベルの不一致である太字部分は、前記アミノ酸レベルで98.3%同一であり、前記置換された残りは以下に太字でマークされている。
前記アミノ酸レベルでの配列同一性が以下に示されている。
本発明は、特定の好ましい実施形態を参照することによって、考えられる詳細を記載したが、他のバージョンも可能である。従って、添付された請求項の要旨と範囲は、この記載によって限定されるべきではなく、好ましいバージョンが本明細書に含まれるべきである。
Claims (42)
- プロテオグリカン分解ポリペプチドの変異体をコードする配列を有する単離された核酸を有する組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、またはヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)の変異体である、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)の変異体である、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)の変異体である、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)の変異体である、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸の配列は、プロテオグリカン分解ポリペプチドの変異体をコードする核酸配列と少なくとも80%同一である、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、中枢神経系の組織でプロテオグリカンを分解するポリペプチドをコードするものである、組成物。
- 請求項1記載の組成物において、前記核酸は、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンを分解するポリペプチドをコードするものである、組成物。
- 発現調節配列と操作可能に連結した請求項1記載の核酸を有する発現ベクター。
- 請求項1記載の組成物において、さらに細胞を含むものである、組成物。
- 生物学的に活性なプロテオグリカン分解ポリペプチドの変異体をコードする配列から成る単離核酸を有する組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、またはヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)の変異体である、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)の変異体である、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)の変異体である、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、プロテオグリカン分解ポリペプチドをコードするものであり、これはコンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)の変異体である、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、中枢神経系の組織でプロテオグリカンを分解するポリペプチドをコードするものである、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、前記核酸は、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンを分解するポリペプチドをコードするものである、組成物。
- 請求項11記載の組成物において、さらに細胞を含むものである、組成物。
- 生物学的に活性なプロテオグリカン分解ポリペプチドの変異体のアミノ酸配列を有するポリペプチドを有する組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、またはヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)の変異体である、組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)の変異体である、組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)の変異体である、組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:27)の変異体である、組成物。
- (配列ID番号:2)、(配列ID番号:3)、または(配列ID番号:4)である請求項19記載のプロテオグリカン分解ポリペプチドの組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記ポリペプチドは、前記中枢神経系の組織でプロテオグリカンを分解するものである、組成物。
- 請求項19記載の組成物において、前記ポリペプチドは、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンを分解するものである、組成物。
- 請求項19記載の組成物において、さらに細胞を含むものである、組成物。
- 請求項19記載の組成物および薬学的に許容可能な賦形剤。
- 請求項19記載の組成物であって、さらに、神経突起伸長阻害剤の作用を遮断する分子、神経突起の接着を促す分子、診断用分子またはこれらの組み合わせを含む、組成物。
- 組織を治療する方法であって、前記組織にプロテオグリカン分解ポリペプチドの変異体組成物を投与する工程を有し、前記組織はプロテオグリカン分子を含み、前記組成物は組織におけるプロテオグリカンの少なくとも一部を分解する、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記組織は、CNSからのものである、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記プロテオグリカンの分解は、組織への分子の拡散を促すものである、方法。
- 請求項30記載の方法であって、さらに、外傷性脊髄損傷の組織を同定する行為を有する、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記組成物は、神経突起の再生を促すものである、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記組成物はさらに、神経突起成長阻害剤の作用を遮断する分子、神経突起の接着を促す分子、診断用分子またはこれらの組み合わせを含むものである、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記神経系の可塑性は改善されるものである、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)、ヒアルロニダーゼ1(配列ID番号:30)、ヒアルロニダーゼ2(配列ID番号:31)、ヒアルロニダーゼ3(配列ID番号:32)、またはヒアルロニダーゼ4(配列ID番号:33)の変異体である、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)、コンドロイチナーゼABCタイプII(配列ID番号:27)、コンドロイチナーゼAC(配列ID番号:5)、コンドロイチナーゼB(配列ID番号:12)の変異体である、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:1)の変異体である、方法。
- 請求項30記載の方法において、前記プロテオグリカン分解ポリペプチドは、コンドロイチナーゼABCタイプI(配列ID番号:27)の変異体である、方法。
- (配列ID番号:2)、(配列ID番号:3)、または(配列ID番号:4)である請求項30記載のプロテオグリカン分解ポリペプチド。
- プロテオグリカンを分解する精製コンドロイチナーゼ変異型ポリペプチド。
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US47124003P | 2003-05-16 | 2003-05-16 | |
US47130003P | 2003-05-16 | 2003-05-16 | |
US47123903P | 2003-05-16 | 2003-05-16 | |
US60/471,239 | 2003-05-16 | ||
US60/471,240 | 2003-05-16 | ||
US60/471,300 | 2003-05-16 | ||
US47437203P | 2003-05-29 | 2003-05-29 | |
US60/474,372 | 2003-05-29 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018152282A Division JP2019030295A (ja) | 2003-05-16 | 2018-08-13 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021046406A true JP2021046406A (ja) | 2021-03-25 |
Family
ID=33556641
Family Applications (9)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006533213A Pending JP2007532094A (ja) | 2003-05-16 | 2004-05-17 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2010075727A Expired - Fee Related JP5341808B2 (ja) | 2003-05-16 | 2010-03-29 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2010288234A Expired - Fee Related JP5452820B2 (ja) | 2003-05-16 | 2010-12-24 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2013122076A Expired - Fee Related JP5705921B2 (ja) | 2003-05-16 | 2013-06-10 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2013233425A Expired - Fee Related JP6100142B2 (ja) | 2003-05-16 | 2013-11-11 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2014120609A Expired - Fee Related JP6505379B2 (ja) | 2003-05-16 | 2014-06-11 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2017000133A Expired - Lifetime JP6867167B2 (ja) | 2003-05-16 | 2017-01-04 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2018152282A Pending JP2019030295A (ja) | 2003-05-16 | 2018-08-13 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2020189292A Pending JP2021046406A (ja) | 2003-05-16 | 2020-11-13 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
Family Applications Before (8)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006533213A Pending JP2007532094A (ja) | 2003-05-16 | 2004-05-17 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2010075727A Expired - Fee Related JP5341808B2 (ja) | 2003-05-16 | 2010-03-29 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2010288234A Expired - Fee Related JP5452820B2 (ja) | 2003-05-16 | 2010-12-24 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2013122076A Expired - Fee Related JP5705921B2 (ja) | 2003-05-16 | 2013-06-10 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2013233425A Expired - Fee Related JP6100142B2 (ja) | 2003-05-16 | 2013-11-11 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2014120609A Expired - Fee Related JP6505379B2 (ja) | 2003-05-16 | 2014-06-11 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2017000133A Expired - Lifetime JP6867167B2 (ja) | 2003-05-16 | 2017-01-04 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
JP2018152282A Pending JP2019030295A (ja) | 2003-05-16 | 2018-08-13 | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US8906363B2 (ja) |
EP (4) | EP2460881B1 (ja) |
JP (9) | JP2007532094A (ja) |
AU (2) | AU2004247026B2 (ja) |
CA (1) | CA2525784C (ja) |
ES (4) | ES2636653T3 (ja) |
MX (2) | MX348062B (ja) |
WO (1) | WO2004110360A2 (ja) |
Families Citing this family (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030226656A1 (en) | 2001-06-01 | 2003-12-11 | Junji Harada | Total heat exchanging element-use paper |
AU2003304173A1 (en) | 2002-05-04 | 2005-01-04 | Acorda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for promoting neuronal outgrowth |
EP1532241B1 (en) | 2002-06-03 | 2010-09-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed polysaccharide lyases derived from chondroitinase b |
US20060153827A1 (en) * | 2002-08-15 | 2006-07-13 | Gruskin Elliott A | Chimeric protein |
DK2405015T3 (en) | 2003-03-05 | 2016-03-21 | Halozyme Inc | Soluble hyaluronidaseglycoprotein (sHASEGP), process for preparing the same and uses thereof comprising pharmaceutical compositions and |
US7959914B2 (en) | 2003-05-16 | 2011-06-14 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods of reducing extravasation of inflammatory cells |
MX348062B (es) | 2003-05-16 | 2017-05-26 | Acorda Therapeutics Inc | Mutantes que degradan proteoglicanos para tratamiento del snc. |
MXPA05012305A (es) * | 2003-05-16 | 2006-04-18 | Acorda Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para el tratamiento de lesiones del snc. |
CA2558984A1 (en) | 2004-03-10 | 2005-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Recombinant chondroitinase abc i and uses thereof |
ES2411504T3 (es) * | 2004-05-18 | 2013-07-05 | Acorda Therapeutics, Inc. | Métodos de purificación de condroitinasa y formulaciones estables de la misma |
JP5189985B2 (ja) | 2005-09-26 | 2013-04-24 | アコーダ セラピューティクス、インク. | コンドロイチナーゼabci変異体を用いた組成物およびその使用方法 |
EP2042190A4 (en) | 2006-05-19 | 2012-05-30 | Aichi Prefecture | MEDIUM TO REDUCE BRAIN DAMAGE |
JP5391069B2 (ja) * | 2006-10-10 | 2014-01-15 | アコーダ セラピューティクス、インク. | コンドロイチナーゼabci変異体を使用する組成物及び方法 |
EP2583687B1 (en) * | 2007-02-15 | 2014-08-27 | Allergan, Inc. | Use of botulinum toxin for treating hyperhydrosis |
EP2174661B1 (en) | 2007-06-29 | 2012-12-19 | National University Corporation Nagoya University | Agent for improving neuropathic pain |
US20090286289A1 (en) * | 2008-03-10 | 2009-11-19 | Pang Danny Z | Production of Hyaluronate Unsaturated Disaccharides and its Application |
EP2153844A1 (en) * | 2008-08-14 | 2010-02-17 | HAUBECK, Hans-Dieter | Human hyaluronidases for axonal regrowth |
WO2010100247A1 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Novel therapy for anxiety |
US20110142949A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-06-16 | The Research Foundation Of State University Of New York | Chondroitinase treatment method for demyelination-related conditions and diseases |
WO2011133862A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Oregon Health And Science University | Methods and compositions for promoting myelination |
AU2011289218A1 (en) * | 2010-08-13 | 2013-03-14 | Georgetown University | GGF2 and methods of use |
WO2012034049A2 (en) | 2010-09-10 | 2012-03-15 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Implantable medical devices having double walled microspheres |
WO2012136768A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-11 | Hans-Dieter Haubeck | Use of mutants of human hyaluronidase ph-20 with increased chondroitinase activity for axonal regrowth |
EA030252B9 (ru) * | 2011-12-30 | 2021-09-08 | Галозим, Инк. | Варианты полипептидов ph20, композиции на их основе и их применение |
US20160244740A1 (en) * | 2013-09-27 | 2016-08-25 | Ohio State Innovation Foundation | Mutant chondroitinase abc i compositions and methods of their use |
WO2018067660A1 (en) | 2016-10-04 | 2018-04-12 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Targeted effector proteins and uses thereof |
EP3645557A4 (en) * | 2017-06-28 | 2021-07-14 | The Cleveland Clinic Foundation | TREATMENT OF LESIONS OF THE NERVOUS SYSTEM AND NEURODEGENERATIVE DISEASES AND RELATED CONDITIONS |
US11407797B2 (en) | 2017-10-11 | 2022-08-09 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Modified gal-1 proteins and uses thereof |
WO2019162942A1 (en) * | 2018-02-20 | 2019-08-29 | Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. | Compositions and methods for delivery and expression of small inhibitory peptides and use thereof |
JP2020028277A (ja) * | 2018-08-24 | 2020-02-27 | 国立大学法人弘前大学 | グリコサミノグリカン分解酵素又はその阻害物質の検出方法 |
US20220106580A1 (en) * | 2018-10-26 | 2022-04-07 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Targeted chondroitinase abc fusion proteins and complexes thereof |
EP4093387A4 (en) * | 2020-01-24 | 2024-04-24 | Dompé farmaceutici S.p.A. | GROWTH FACTOR FORMULATION FOR A CONDITION ASSOCIATED WITH AN OTIC EVENT |
CN111593040B (zh) * | 2020-06-20 | 2022-08-30 | 山东大学 | 硫酸皮肤素裂解酶及其应用 |
Family Cites Families (151)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5338157B1 (en) * | 1992-09-09 | 1999-11-02 | Sims Deltec Inc | Systems and methods for communicating with ambulat |
US5083710A (en) * | 1988-09-06 | 1992-01-28 | Oxy-Dry Corporation | Powder sprayer with automatic powder supply system |
US5153827A (en) * | 1989-01-30 | 1992-10-06 | Omni-Flow, Inc. | An infusion management and pumping system having an alarm handling system |
US5320725A (en) * | 1989-08-02 | 1994-06-14 | E. Heller & Company | Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide |
US5270194A (en) | 1989-08-31 | 1993-12-14 | Instrumentation Laboratory Spa | Stabilized glucose oxidase from Aspergillus Niger |
EP0493533A4 (en) | 1989-10-27 | 1992-10-28 | Case Western Reserve University | Inhibition of cell growth by keratan sulfate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate and other glycans |
US5670617A (en) | 1989-12-21 | 1997-09-23 | Biogen Inc | Nucleic acid conjugates of tat-derived transport polypeptides |
US5804604A (en) | 1989-12-21 | 1998-09-08 | Biogen, Inc. | Tat-derived transport polypeptides and fusion proteins |
US5108819A (en) * | 1990-02-14 | 1992-04-28 | Eli Lilly And Company | Thin film electrical component |
US5679650A (en) | 1993-11-24 | 1997-10-21 | Fukunaga; Atsuo F. | Pharmaceutical compositions including mixtures of an adenosine compound and a catecholamine |
US5593852A (en) * | 1993-12-02 | 1997-01-14 | Heller; Adam | Subcutaneous glucose electrode |
US5322063A (en) * | 1991-10-04 | 1994-06-21 | Eli Lilly And Company | Hydrophilic polyurethane membranes for electrochemical glucose sensors |
US5262522A (en) | 1991-11-22 | 1993-11-16 | Immunex Corporation | Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor |
US5284140A (en) * | 1992-02-11 | 1994-02-08 | Eli Lilly And Company | Acrylic copolymer membranes for biosensors |
US6087323A (en) * | 1992-04-03 | 2000-07-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Use of neuregulins as modulators of cellular communication |
US5496718A (en) * | 1992-06-26 | 1996-03-05 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Chondroitinase ABC isolated from proteus vulgaris ATCC 6896 |
JP3980657B2 (ja) | 1992-06-26 | 2007-09-26 | 生化学工業株式会社 | コンドロイチナーゼabc、その製造法及び医薬組成物 |
US7008783B1 (en) * | 1992-09-22 | 2006-03-07 | Maruha Corporation | Gene encoding chondroitinase ABC and uses therefor |
US5832448A (en) * | 1996-10-16 | 1998-11-03 | Health Hero Network | Multiple patient monitoring system for proactive health management |
US5897493A (en) * | 1997-03-28 | 1999-04-27 | Health Hero Network, Inc. | Monitoring system for remotely querying individuals |
US5307263A (en) * | 1992-11-17 | 1994-04-26 | Raya Systems, Inc. | Modular microprocessor-based health monitoring system |
US5879163A (en) * | 1996-06-24 | 1999-03-09 | Health Hero Network, Inc. | On-line health education and feedback system using motivational driver profile coding and automated content fulfillment |
US5899855A (en) * | 1992-11-17 | 1999-05-04 | Health Hero Network, Inc. | Modular microprocessor-based health monitoring system |
US5913310A (en) * | 1994-05-23 | 1999-06-22 | Health Hero Network, Inc. | Method for diagnosis and treatment of psychological and emotional disorders using a microprocessor-based video game |
ZA938555B (en) * | 1992-11-23 | 1994-08-02 | Lilly Co Eli | Technique to improve the performance of electrochemical sensors |
US5299571A (en) * | 1993-01-22 | 1994-04-05 | Eli Lilly And Company | Apparatus and method for implantation of sensors |
CA2161125A1 (en) * | 1993-04-23 | 1994-11-10 | Michael Joseph Ryan | Cloning and expression of the chondroitinase i and ii genes from p. vulgaris |
US5578480A (en) | 1993-04-23 | 1996-11-26 | American Cyanamid Company | Methods for the isolation and purification of the recombinantly expressed chondroitinase I and II enzymes from P. vulgaris |
US6248562B1 (en) * | 1993-11-01 | 2001-06-19 | Research Foundation State University Of New York | Chimeric proteins comprising borrelia polypeptides and uses therefor |
AU1176595A (en) | 1993-11-12 | 1995-05-29 | International Technology Management Associates, Ltd. | Methods of repairing connective tissues |
US5497772A (en) * | 1993-11-19 | 1996-03-12 | Alfred E. Mann Foundation For Scientific Research | Glucose monitoring system |
US5660176A (en) * | 1993-12-29 | 1997-08-26 | First Opinion Corporation | Computerized medical diagnostic and treatment advice system |
US5594638A (en) * | 1993-12-29 | 1997-01-14 | First Opinion Corporation | Computerized medical diagnostic system including re-enter function and sensitivity factors |
FR2716286A1 (fr) * | 1994-02-16 | 1995-08-18 | Debiotech Sa | Installation de surveillance à distance d'équipements commandables. |
US5630710A (en) * | 1994-03-09 | 1997-05-20 | Baxter International Inc. | Ambulatory infusion pump |
US5536249A (en) * | 1994-03-09 | 1996-07-16 | Visionary Medical Products, Inc. | Pen-type injector with a microprocessor and blood characteristic monitor |
US5391250A (en) * | 1994-03-15 | 1995-02-21 | Minimed Inc. | Method of fabricating thin film sensors |
US5390671A (en) * | 1994-03-15 | 1995-02-21 | Minimed Inc. | Transcutaneous sensor insertion set |
US5498536A (en) * | 1994-04-22 | 1996-03-12 | American Cyanamid Company | Chondroitinase II from Proteus vulgaris |
US5482473A (en) * | 1994-05-09 | 1996-01-09 | Minimed Inc. | Flex circuit connector |
US5704366A (en) * | 1994-05-23 | 1998-01-06 | Enact Health Management Systems | System for monitoring and reporting medical measurements |
CA2712304C (en) | 1994-06-10 | 2011-10-25 | United States Surgical Corporation | Recombinant chimeric proteins and methods of use thereof |
US5997863A (en) | 1994-07-08 | 1999-12-07 | Ibex Technologies R And D, Inc. | Attenuation of wound healing processes |
US6093563A (en) | 1994-07-08 | 2000-07-25 | Ibex Technologies R And D, Inc. | Chondroitin lyase enzymes |
US5505709A (en) * | 1994-09-15 | 1996-04-09 | Minimed, Inc., A Delaware Corporation | Mated infusion pump and syringe |
US5573506A (en) * | 1994-11-25 | 1996-11-12 | Block Medical, Inc. | Remotely programmable infusion system |
US6326166B1 (en) | 1995-12-29 | 2001-12-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Chimeric DNA-binding proteins |
CA2212006A1 (en) | 1995-02-03 | 1996-08-08 | G.D. Searle & Co. | Novel c-mpl ligands |
US5792743A (en) | 1995-04-19 | 1998-08-11 | Acorda Therapeutics | Method for promoting neural growth comprising administering a soluble neural cell adhesion molecule |
US5609060A (en) * | 1995-04-28 | 1997-03-11 | Dentsleeve Pty Limited | Multiple channel perfused manometry apparatus and a method of operation of such a device |
US5772635A (en) * | 1995-05-15 | 1998-06-30 | Alaris Medical Systems, Inc. | Automated infusion system with dose rate calculator |
US6313265B1 (en) | 1995-07-24 | 2001-11-06 | The Scripps Research Institute | Neurite outgrowth-promoting polypeptides containing fibronectin type III repeats and methods of use |
US5750926A (en) * | 1995-08-16 | 1998-05-12 | Alfred E. Mann Foundation For Scientific Research | Hermetically sealed electrical feedthrough for use with implantable electronic devices |
US5754111A (en) * | 1995-09-20 | 1998-05-19 | Garcia; Alfredo | Medical alerting system |
US6689265B2 (en) * | 1995-10-11 | 2004-02-10 | Therasense, Inc. | Electrochemical analyte sensors using thermostable soybean peroxidase |
US5869301A (en) * | 1995-11-02 | 1999-02-09 | Lockhead Martin Energy Research Corporation | Method for the production of dicarboxylic acids |
US5861018A (en) * | 1996-05-28 | 1999-01-19 | Telecom Medical Inc. | Ultrasound transdermal communication system and method |
US5885245A (en) * | 1996-08-02 | 1999-03-23 | Sabratek Corporation | Medical apparatus with remote virtual input device |
JP3702450B2 (ja) | 1996-12-18 | 2005-10-05 | ニプロ株式会社 | 乳酸脱水素酵素測定用試薬 |
US6043437A (en) * | 1996-12-20 | 2000-03-28 | Alfred E. Mann Foundation | Alumina insulation for coating implantable components and other microminiature devices |
US6032119A (en) * | 1997-01-16 | 2000-02-29 | Health Hero Network, Inc. | Personalized display of health information |
US5960085A (en) * | 1997-04-14 | 1999-09-28 | De La Huerga; Carlos | Security badge for automated access control and secure data gathering |
AU6897198A (en) * | 1997-04-11 | 1998-11-11 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Use of chondroitinase in the manufacture of a medicament in the treatment and prevention of mucoid secretions |
JP4172842B2 (ja) | 1997-05-02 | 2008-10-29 | 生化学工業株式会社 | コンドロイチナーゼ組成物 |
DE69829605T2 (de) | 1997-05-02 | 2006-02-09 | Seikagaku Corp. | Chondroitinase enthaltende Zusammensetzungen |
US6558351B1 (en) * | 1999-06-03 | 2003-05-06 | Medtronic Minimed, Inc. | Closed loop system for controlling insulin infusion |
US6063378A (en) | 1997-08-22 | 2000-05-16 | Seikagaku Corporation | Therapeutic agent for herniated intervertebral disc |
US6153187A (en) | 1997-09-02 | 2000-11-28 | Insight Strategy & Marketing Ltd. | Use of glycosaminoglycans degrading enzymes for management of airway associated diseases |
US20010006630A1 (en) | 1997-09-02 | 2001-07-05 | Oron Yacoby-Zeevi | Introducing a biological material into a patient |
US5917346A (en) * | 1997-09-12 | 1999-06-29 | Alfred E. Mann Foundation | Low power current to frequency converter circuit for use in implantable sensors |
US6071391A (en) * | 1997-09-12 | 2000-06-06 | Nok Corporation | Enzyme electrode structure |
DE69836495T3 (de) * | 1997-10-02 | 2015-08-06 | Micromed Technology, Inc. | Steuermodul für implantierbares Pumpsystem |
DK1025227T3 (da) | 1997-10-17 | 2006-05-01 | Genentech Inc | Humane TOLL-homologer |
US6081736A (en) * | 1997-10-20 | 2000-06-27 | Alfred E. Mann Foundation | Implantable enzyme-based monitoring systems adapted for long term use |
US6579690B1 (en) * | 1997-12-05 | 2003-06-17 | Therasense, Inc. | Blood analyte monitoring through subcutaneous measurement |
US6134461A (en) * | 1998-03-04 | 2000-10-17 | E. Heller & Company | Electrochemical analyte |
KR20010034576A (ko) | 1998-03-13 | 2001-04-25 | 벤슨 로버트 에이치. | 혈관 내피 성장 인자 2 |
WO1999046368A2 (en) | 1998-03-13 | 1999-09-16 | Biomarin Pharmaceuticals | Carbohydrate-modifying enzymes for burn and wound debridement and methods for treatment |
WO1999047190A1 (en) * | 1998-03-16 | 1999-09-23 | Medtronic, Inc. | Hemostatic system and components for extracorporeal circuit |
US5904708A (en) * | 1998-03-19 | 1999-05-18 | Medtronic, Inc. | System and method for deriving relative physiologic signals |
US6171575B1 (en) * | 1998-04-06 | 2001-01-09 | Shinichi Okuyama | Method of radioisotopic assessment of the integrity and function of the nose-brain barrier |
US6175752B1 (en) * | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US6558320B1 (en) * | 2000-01-20 | 2003-05-06 | Medtronic Minimed, Inc. | Handheld personal data assistant (PDA) with a medical device and method of using the same |
US6554798B1 (en) * | 1998-08-18 | 2003-04-29 | Medtronic Minimed, Inc. | External infusion device with remote programming, bolus estimator and/or vibration alarm capabilities |
WO2000012726A2 (en) | 1998-08-27 | 2000-03-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed heparinases derived from heparinase i and ii |
WO2000020021A1 (en) * | 1998-10-06 | 2000-04-13 | Stryker Corporation | Repair of larynx, trachea, and other fibrocartilaginous tissues |
US6560741B1 (en) * | 1999-02-24 | 2003-05-06 | Datastrip (Iom) Limited | Two-dimensional printed code for storing biometric information and integrated off-line apparatus for reading same |
US6360888B1 (en) * | 1999-02-25 | 2002-03-26 | Minimed Inc. | Glucose sensor package system |
AU7497000A (en) | 1999-02-28 | 2000-11-14 | Washington University | Novel transduction molecules and methods for using same |
JP2003500016A (ja) | 1999-04-02 | 2003-01-07 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | hOB−BP2h組成物、方法およびその使用 |
SE9901428D0 (sv) | 1999-04-21 | 1999-04-21 | Karolinska Innovations Ab | Amphibodies |
AU5459100A (en) * | 1999-06-02 | 2000-12-18 | Composite Materials, L.L.C. | An article shielded against emi and rfi |
CZ303656B6 (cs) | 1999-06-08 | 2013-01-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Lécivo pro lécení ocního onemocnení |
JP4801301B2 (ja) * | 1999-06-18 | 2011-10-26 | アボット ダイアベティス ケア インコーポレイテッド | 物質移動が制限された生体内分析物センサー |
US6804558B2 (en) * | 1999-07-07 | 2004-10-12 | Medtronic, Inc. | System and method of communicating between an implantable medical device and a remote computer system or health care provider |
US6553263B1 (en) * | 1999-07-30 | 2003-04-22 | Advanced Bionics Corporation | Implantable pulse generators using rechargeable zero-volt technology lithium-ion batteries |
US6610820B1 (en) * | 1999-10-12 | 2003-08-26 | University Of Lausanne | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway |
CA2387680A1 (en) * | 1999-10-22 | 2001-05-03 | Wyeth | Pablo, a polypeptide that interacts with bcl-xl, and uses related thereto |
WO2001039795A2 (en) | 1999-12-02 | 2001-06-07 | Ibex Technologies, Inc. | Attenuation of fibroblast proliferation |
WO2001048014A1 (fr) * | 1999-12-27 | 2001-07-05 | Shionogi & Co., Ltd | Polypeptides bh4-fusionnes |
AU784349C (en) * | 2000-01-12 | 2006-09-28 | Yale University | Nogo receptor-mediated blockade of axonal growth |
US20030060765A1 (en) * | 2000-02-16 | 2003-03-27 | Arthur Campbell | Infusion device menu structure and method of using the same |
US6895263B2 (en) * | 2000-02-23 | 2005-05-17 | Medtronic Minimed, Inc. | Real time self-adjusting calibration algorithm |
ATE502567T1 (de) * | 2000-05-19 | 2011-04-15 | Welch Allyn Protocol Inc | Vorrichtung zur überwachung von patienten |
WO2002076503A1 (en) * | 2000-06-20 | 2002-10-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate |
ES2444710T3 (es) * | 2000-06-22 | 2014-02-26 | Amgen, Inc. | Uso de un anticuerpo específico para un polipéptido similar a IL-17 |
US20020055857A1 (en) * | 2000-10-31 | 2002-05-09 | Mault James R. | Method of assisting individuals in lifestyle control programs conducive to good health |
JP2004532809A (ja) * | 2000-11-02 | 2004-10-28 | リサーチ ファウンデーション オブ シティ ユニバーシティ オブ ニューヨーク | ホスホジエステラーゼ4型を阻害することによって、神経系の再生および修復を刺激するための方法 |
AU2002256545A1 (en) * | 2000-12-12 | 2002-06-24 | Enkam Pharmaceuticals A/S | Survical promoting ncam binding and ncam ligand biding compounds |
US20020142299A1 (en) | 2001-01-09 | 2002-10-03 | Davidson Beverly L. | PTD-modified proteins |
GB0103174D0 (en) * | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Plc | Novel method of treatment |
ATE382704T1 (de) * | 2001-02-15 | 2008-01-15 | Univ Chicago | Verfahren zum nachweis in hefe für mittels die proteinfaltung beeinflussen |
JP2004531250A (ja) * | 2001-04-06 | 2004-10-14 | ビオ・ビジョン・アーゲー | 慢性痴呆疾患の検出方法、関連ペプチドおよび検出試薬 |
CA2367636C (en) | 2001-04-12 | 2010-05-04 | Lisa Mckerracher | Fusion proteins |
US6748250B1 (en) * | 2001-04-27 | 2004-06-08 | Medoptix, Inc. | Method and system of monitoring a patient |
US6676816B2 (en) * | 2001-05-11 | 2004-01-13 | Therasense, Inc. | Transition metal complexes with (pyridyl)imidazole ligands and sensors using said complexes |
WO2003000901A2 (en) | 2001-06-26 | 2003-01-03 | Decode Genetics Ehf. | Nucleic acids encoding protein kinases |
US7851447B2 (en) * | 2001-08-13 | 2010-12-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods for nerve repair |
US7025760B2 (en) * | 2001-09-07 | 2006-04-11 | Medtronic Minimed, Inc. | Method and system for non-vascular sensor implantation |
US20030049258A1 (en) | 2001-09-11 | 2003-03-13 | Martin Ungerer | Method of increasing the contractility of a heart, a heart muscle or cells of a heart muscle |
AU2002340119A1 (en) | 2001-10-09 | 2003-04-22 | Immunex Corporation | Mammalian c-type lectins |
US6728576B2 (en) * | 2001-10-31 | 2004-04-27 | Medtronic, Inc. | Non-contact EKG |
GB0205022D0 (en) | 2002-03-04 | 2002-04-17 | Univ Cambridge Tech | Materials and methods for the treatment of cns damage |
CA2482859C (en) * | 2002-04-16 | 2010-02-09 | Carematix, Inc. | Method and apparatus for remotely monitoring the condition of a patient |
AU2003304173A1 (en) | 2002-05-04 | 2005-01-04 | Acorda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for promoting neuronal outgrowth |
EP1521523A4 (en) | 2002-05-20 | 2006-04-19 | Univ Texas | METHODS AND COMPOSITIONS FOR DELIVERING NUCLEIC ACID ENZYMES AND MOLECULES IN BRAIN, BONE, AND OTHER FABRICS |
EP1532241B1 (en) | 2002-06-03 | 2010-09-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed polysaccharide lyases derived from chondroitinase b |
US7163545B2 (en) * | 2002-07-29 | 2007-01-16 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Spinal cord surgical implant |
US7074581B2 (en) | 2002-08-09 | 2006-07-11 | Sysmex Corporation | Reagent for assaying lipid |
JP4527950B2 (ja) | 2002-08-09 | 2010-08-18 | シスメックス株式会社 | 脂質測定試薬 |
AU2003264033A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-25 | Biogen Idec Ma Inc. | Nogo receptor antagonists |
US20060153827A1 (en) * | 2002-08-15 | 2006-07-13 | Gruskin Elliott A | Chimeric protein |
US7138330B2 (en) * | 2002-09-27 | 2006-11-21 | Medtronic Minimed, Inc. | High reliability multilayer circuit substrates and methods for their formation |
US7736309B2 (en) * | 2002-09-27 | 2010-06-15 | Medtronic Minimed, Inc. | Implantable sensor method and system |
US20040061232A1 (en) * | 2002-09-27 | 2004-04-01 | Medtronic Minimed, Inc. | Multilayer substrate |
US7162289B2 (en) * | 2002-09-27 | 2007-01-09 | Medtronic Minimed, Inc. | Method and apparatus for enhancing the integrity of an implantable sensor device |
JP2004113166A (ja) | 2002-09-27 | 2004-04-15 | Mitsui Chemicals Inc | ハロペルオキシダ−ゼ活性の安定化方法 |
US20040074785A1 (en) * | 2002-10-18 | 2004-04-22 | Holker James D. | Analyte sensors and methods for making them |
US20050038680A1 (en) * | 2002-12-19 | 2005-02-17 | Mcmahon Kevin Lee | System and method for glucose monitoring |
EP1614040A4 (en) * | 2003-04-08 | 2009-03-11 | Medic4All Ag | PORTABLE WIRELESS GATEWAY FOR MEDICAL REMOTE EXAMINATIONS |
MXPA05012305A (es) | 2003-05-16 | 2006-04-18 | Acorda Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para el tratamiento de lesiones del snc. |
MX351062B (es) | 2003-05-16 | 2017-09-29 | Acorda Therapeutics Inc | Proteinas de fusion para el tratamiento del snc. |
MX348062B (es) | 2003-05-16 | 2017-05-26 | Acorda Therapeutics Inc | Mutantes que degradan proteoglicanos para tratamiento del snc. |
US7959914B2 (en) | 2003-05-16 | 2011-06-14 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods of reducing extravasation of inflammatory cells |
US20050038331A1 (en) * | 2003-08-14 | 2005-02-17 | Grayson Silaski | Insertable sensor assembly having a coupled inductor communicative system |
CA2558984A1 (en) * | 2004-03-10 | 2005-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Recombinant chondroitinase abc i and uses thereof |
ES2411504T3 (es) | 2004-05-18 | 2013-07-05 | Acorda Therapeutics, Inc. | Métodos de purificación de condroitinasa y formulaciones estables de la misma |
CN101073083B (zh) * | 2004-11-12 | 2012-04-25 | 皇家飞利浦电子股份有限公司 | 用于无线医疗设备可靠通信的消息完整性 |
JP2008522459A (ja) * | 2004-11-16 | 2008-06-26 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 医療装置及びセンサの無線アドホックネットワークにおける時間同期 |
JP5189985B2 (ja) | 2005-09-26 | 2013-04-24 | アコーダ セラピューティクス、インク. | コンドロイチナーゼabci変異体を用いた組成物およびその使用方法 |
JP5391069B2 (ja) | 2006-10-10 | 2014-01-15 | アコーダ セラピューティクス、インク. | コンドロイチナーゼabci変異体を使用する組成物及び方法 |
-
2004
- 2004-05-17 MX MX2011000991A patent/MX348062B/es unknown
- 2004-05-17 EP EP12152969.7A patent/EP2460881B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 EP EP04776039.2A patent/EP1631237B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 MX MXPA05012307A patent/MXPA05012307A/es active IP Right Grant
- 2004-05-17 CA CA2525784A patent/CA2525784C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-05-17 US US10/848,564 patent/US8906363B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-05-17 EP EP17164947.8A patent/EP3211084B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 ES ES12152969.7T patent/ES2636653T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 ES ES19156540T patent/ES2887949T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 EP EP19156540.7A patent/EP3514238B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 ES ES04776039.2T patent/ES2616749T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 WO PCT/US2004/015662 patent/WO2004110360A2/en active Application Filing
- 2004-05-17 US US10/848,561 patent/US7429375B2/en active Active
- 2004-05-17 JP JP2006533213A patent/JP2007532094A/ja active Pending
- 2004-05-17 ES ES17164947T patent/ES2727480T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-17 AU AU2004247026A patent/AU2004247026B2/en not_active Ceased
-
2008
- 2008-07-03 US US12/167,573 patent/US7968089B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-12-23 AU AU2009251124A patent/AU2009251124B2/en not_active Ceased
-
2010
- 2010-03-29 JP JP2010075727A patent/JP5341808B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-12-24 JP JP2010288234A patent/JP5452820B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-05-20 US US13/112,985 patent/US20110250631A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-06-10 JP JP2013122076A patent/JP5705921B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-11-11 JP JP2013233425A patent/JP6100142B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-02-24 US US14/188,679 patent/US9528102B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2014-06-11 JP JP2014120609A patent/JP6505379B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-11-06 US US14/535,113 patent/US20180073007A9/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-11-18 US US15/355,663 patent/US20170137799A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-01-04 JP JP2017000133A patent/JP6867167B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2018
- 2018-08-13 JP JP2018152282A patent/JP2019030295A/ja active Pending
-
2020
- 2020-11-13 JP JP2020189292A patent/JP2021046406A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6867167B2 (ja) | Cns治療用のプロテオグリカン分解変異体 | |
EP2354155A2 (en) | Fusion Proteins for Treatment of CNS | |
AU2016204464B2 (en) | Proteoglycan degrading mutants for treatment of cns | |
AU2013201097B2 (en) | Proteoglycan degrading mutants for treatment of cns | |
CA3025063A1 (en) | Proteoglycan degrading mutants for treatment of cns | |
AU2014265113A1 (en) | Fusion proteins for the treatment of cns |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201124 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211130 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220621 |