JP2020137457A - 細胞接着用組成物及び細胞接着用基材 - Google Patents
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Abstract
Description
1.PEG−DNA−BSAの調製
5’末端にカルボキシ基を、3’末端にチオール基を有する20量体のDNA(配列:TCTATCTGCAGGCGCTCTCC)を合成した。このDNAとBSAをpH7.0の10mM MOPS−KOHにそれぞれ溶解し、DNA溶液とBSA溶液を得た。BSA溶液とDNA溶液を1:5のモル比で混合した。この混合液に1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド(EDC)を最終濃度が10mMとなるように混合し、DNAの5’末端のカルボキシ基とBSAのアミノ基を結合させた。スピンカラムを用いて余剰DNAを取り除いた後、PEG−マレイミド(PEGの重量平均分子量:20000)を、BSAとPEGのモル比が1:10となるようにpH7.0の10mM MOPS−KOHとともに加え、混合した。混合液を30分インキュベーションすることでDNA−BSAとPEGを結合させ、DTTを最終濃度1 mMで混合することで反応を停止させた。
BSAとPEG脂質−NHSをpH7.0の10mM MOPS−KOHにそれぞれ溶解し、BSA溶液とPEG脂質溶液を得た。PEG脂質−NHSとしては、オレイル−O−ポリエチレングリコール−スクシニル−N−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル(PEGの重量平均分子量:2000、日油株式会社製「SUNBRIGHT OE−020CS」)を使用した。BSA溶液とPEG脂質溶液を1:10のモル比で混合し、30分室温にてインキュベーションした。pH6.8のTris−HClを加え、反応を停止させた。
PEG−マレイミドのかわりにPEGリン脂質−マレイミドを用いて、PEG−DNA−BSAの調製と同様にしてPEGリン脂質−DNA−BSAを調製した。PEGリン脂質−マレイミドとしては、N−[N’−(3’−マレイミド−1’−オキソプロピル)アミノプロピルポリオキシエチレンオキソカルボニル]−1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(PEGの重量平均分子量:2000、日油株式会社製「SUNBRIGHT DSPE−020MA」)を使用した。
BSA濃度が全体で0.5mg/mLとなるようにPEG−DNA−BSAとPEG脂質−BSAを1:5の割合で混合した。この混合溶液を洗浄済みのカバーガラス(24 mmx36 mm,t0.17mm)に滴下し、表面がPEG−DNA−BSAとPEG脂質−BSAでコーティングされた基板を得た。
BSA濃度が全体で0.5mg/mLとなるようにPEG−DNA−BSAとPEG脂質−BSAを1:5の割合で混合した。この混合溶液を図1に示すようなマイクロ流路デバイスの流路23に導入し、流路23の内側をPEG−DNA−BSAとPEG脂質−BSAでコーティングした。
BSA濃度が0.5mg/mLとなるようにPEGリン脂質−DNA−BSAをバッファーに懸濁した。この懸濁液を洗浄済みのカバーガラス(24 mmx36 mm,t0.17 mm)に滴下し、表面がPEGリン脂質−DNA−BSAでコーティングされた基板を得た。
Claims (13)
- 両親媒性化合物と、DNA及び親水性分子のコンジュゲートと、を含み、
両親媒性化合物は、細胞膜に非共有結合可能な疎水性基と、親水性基と、を有し、
コンジュゲートの親水性分子の重量平均分子量は、両親媒性化合物の親水性基が由来する親水性分子の重量平均分子量よりも大きい、細胞接着用組成物。 - 親水性基が、ポリアルキレングリコール、ポリグリセリン、多糖、ポリ乳酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、及びポリアクリルアミドからなる群より選択される親水性分子の残基であり、
疎水性基が、炭素数7〜22の脂肪族炭化水素基、又は、炭素数7〜22の脂肪族炭化水素基を有するリン脂質の残基である、請求項1に記載の組成物。 - コンジュゲートの親水性分子が、ポリアルキレングリコール、ポリグリセリン、多糖、ポリ乳酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、及びポリアクリルアミドからなる群より選択される親水性分子である、請求項1又は2に記載の組成物。
- 親水性基がポリエチレングリコールの残基であり、疎水性基が炭素数10〜20の脂肪族炭化水素基又は炭素数10〜20の脂肪族炭化水素基を有するリン脂質の残基である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 1分子の両親媒性化合物あたりコンジュゲートを1以上含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
- コンジュゲートの親水性分子の重量平均分子量が、両親媒性化合物の親水性基が由来する親水性分子の重量平均分子量の1倍超である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 基材と、1以上の両親媒性化合物と、1以上の、DNA及び親水性分子のコンジュゲートと、を備え、
各両親媒性化合物は、細胞膜に非共有結合可能な疎水性基と、親水性基と、を有し、
各両親媒性化合物の親水性基と各コンジュゲートのDNAは、基材と結合しており、
コンジュゲートの親水性分子の重量平均分子量は、両親媒性化合物の親水性基が由来する親水性分子の重量平均分子量よりも大きい、細胞接着用基材。 - 1分子の両親媒性化合物あたりコンジュゲートを1以上備える、請求項7に記載の細胞接着用基材。
- 基材と、1以上の、両親媒性化合物及びDNAのコンジュゲートと、を備え、
各両親媒性化合物は、細胞膜に非共有結合可能な疎水性基と、DNAと結合した親水性基と、を有し、
DNAは基材と結合している、細胞接着用基材。 - 光反応性物質であって、光照射により活性酸素を生成する光反応性物質をさらに備える、請求項7〜9のいずれか一項に記載の細胞接着用基材。
- 内部の少なくとも一部が請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞接着用組成物でコーティングされた流路を備える、マイクロ流路デバイス。
- 第一の流路と、
前記第一の流路に隣接する第二の流路と、
前記第一の流路と前記第二の流路とをつなぐ連絡部であって、前記第一の流路側に細胞を捕捉可能な開口部を有する連絡部と、を備え、
前記第一の流路の内部が請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞接着用組成物でコーティングされている、請求項11に記載のマイクロ流路デバイス。 - 基材を請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞接着用組成物でコーティングする工程と、
基材に、光反応性物質であって、光照射により活性酸素を生成する光反応性物質を接触させる工程と、
基材に光を照射して光反応性物質を励起させる工程と、
基材に細胞を接触させる工程と、を備える、細胞を基材上に接着する方法。
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